Методы диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Бруцеллез (лат., англ. — Brucellosis; синоним: мальтийская лихорадка). Бруцеллез — инфекционная хроническая болезнь многих видов домашних и диких животных и человека, характеризующаяся абортами, задержанием последа, эндометритами, расстройством воспроизводительной способности животных, бурситами, гигромами и артритами.

Впервые бруцеллез описан в 1861 г. Мэрстоном при заболевании солдат английского гарнизона на о. Мальта. Возбудителя обнаружил и выделил чистую культуру Д. Брюс в 1887 г. Возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота был выделен в 1896 г. датчанином и В. Стрибольтом. Венгерский ученый Ф. Гутира в 1909 г.

Болезнь распространена во многих странах Азии, Африки, I Центральной и Южной Америки. Болезнь регистрируется в некоторых (гранах СНГ. В Республике Беларусь бруцеллез не регистрируется.

Экономический ущерб большой, складывается из недополучения приплода, вынужденного убоя и больших затрат на проведение оздоровительных мероприятий.

Возбудители бруцеллеза относятся к семейству Brucellaceae роду Brucella, который включает 6 видов: Br. abortus — возбудитель бруцелеза крупного рогатого скота; В. melitensis — овец и коз; B. suis — свиней; В. ranis — собак; В. neotomae — кустарниковых крыс; В. ovis — инфекционного эпидидимита баранов. Некоторые виды бруцелл подразделяются на Гни варианты: В. abortus — 9, В. melitensis — 3 и В. suis — 5. Бруцеллы видов мглитензис и абортус могут мигрировать на животных других видов. Морфологически бруцеллы представляют мелкие (0,3-0,6 х 0,6-1,5 мкм) (к истерии палочковидной, овоидной или шаровидной форм. Бруцеллы грамо отрицательные, спор не образуют, некоторые штаммы образуют капсулу, (многие аэробы. Для дифференциации бруцелл применяются специальные методы окраски: по Козловскому, Шуляку-Шину, Ганзену или Стемпу. Для культивирования бруцелл применяют печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар, сывороточно-глюкозный и картофельный агары, среды с генцианфиолетом или малахитовой зеленью, среду Кроля. На ЖИД — mix средах бруцеллы вызывают равномерное помутнение и пристеночное кольцо. На плотных средах образуются округлые, гладкие, прозрачные или серовато-белые с голубоватым оттенком колонии. Из лабораторных животных к возбудителю восприимчивы морские мишки, в меньшей степени — белые мыши. Бруцеллы относительно устойчивы к действию различных физических и химических факторов. Прямые солнечные лучи убивают их за 4,5 ч, в йоде бруцеллы сохраняются более 5 месяцев, в навозе — до 120 дней, и моче — до 4 дней, в почве — 5 месяцев, в плодных оболочках — 120 дней, и охлажденном молоке — 6-8 дней, в кислом молоке — 1-4 дня, в масле — 30 дней, в сырах — 42 дня, в замороженном мясе — 320 дней, в засоленных ш курах — 2 месяца, в шерсти — 3-4 месяца. При температуре + 60°С бруцеллы погибают через 30 мин, при +80. +85°С — через 5 мин, при +100°С — мгновенно. Такие дезинфицирующие средства, как хлорная известь, хлорамин, гидроксид натрия в концентрации 2-3 %, убивают бруцелл в течение 5 мин; 0,5% -й раствор глютарового альдегида и 5% -й раствор фенолята натрия обезвреживают возбудителя в течение одного часа.

К бруцеллезу восприимчивы крупный рогатый скот, овцы, козы, свиньи, олени, маралы, яки, буйволы, лошади, верблюды, собаки, кошки, зайцы, сайгаки, лисицы, грызуны, дикие кабаны. Наиболее восприимчивы к бруцеллезу крупный и мелкий рогатый скот, буйволы, свиньи. Взрослые половозрелые животные более восприимчивы, чем молодые. Источником возбудителя инфекции являются больные бруцеллезом животные, особенно в период клинического проявления болезни. Из организма больного животного бруцеллы выделяются с околоплодными вода-ми, плодными оболочками, абортированными плодами, выделениями из половых органов. Также возбудитель может выделяться с молоком, мочой, калом, спермой. У коров бруцеллы могут сохраняться в вымени до 7-9 лет, у овец — до 2-3 лет, у самцов в семенниках — до 9 лет. Факторами передачи служат корма, вода, кормушки, предметы ухода, одежда обслуживающего персонала, контаминированные возбудителем. Заражение животных происходит главным образом алиментарным путем, а также половым и контактным путями. От больных бруцеллезом животных могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз. У крупного и мелкого рогатого скота бруцеллез может протекать в виде эпизоотии, у других видов животных — спорадических случаев. В благополучные хозяйства возбудитель заносится чаще всего с латентно больными животными, если не выполняются ветеринарно-санитарные правила при продаже животных для племенных и пользовательских целей. Сезонность для бруцеллеза не характерна, однако количество больных животных увеличивается в стойловый период. Возникновению бруцеллеза способствуют неудовлетворительные ветеринарно-санитарные условия содержания и кормления животных, приводящие к снижению резистентности организма животных, несвоевременное удаление и утилизация последов, абортированных плодов, навоза, не своевременная и некачественная дезинфекция. Заболеваемость при первичной вспышке болезни может достигать 60 %, а летальность 1-2 %.

Развитие болезни во многом зависит от вирулентности и количества попавшего в организм возбудителя, иммунной реактивности животного и условий, в которых находится больное животное. К развитии инфекционного процесса при бруцеллезе различают три: регионарной инфекции, генерализации и вторичной латенции. Бруцеллы вначале размножаются в воротах инфекции, а затем по лимфатическим путям OHPI проникают в регионарные лимфатические узлы и паренхиматозные органы, в которых развиваются воспалительные процессы, образуются гранулемы, в организме развивается иммунологическая тройка. Клинические признаки в стадию регионарной инфекции не проявляются. Если заражающая доза возбудителя невелика, а устойчивость организма высокая, инфекционный процесс не развивается и организм освобождается от возбудителя. При недостаточной сопротивляемости организма животного, у беременных животных развивается генерализация инфекционного процесса. Бруцеллы, размножившись в лимфатических узлах, проникают в кровь, вызывая бактериемию, которая длится 10-30 дней после заражения.

Затем бруцеллы локализуются в матке, вымени, лимфоузлах, селезенке, печени и других органах. Наиболее благоприятные условия для размножения бруцелл имеются в беременной матке, так как плодные оболочки многих животных содержат эритриол — фактор роста для бруцелл. Размножение бруцелл приводит к воспалительно-некротическим изменениям плодных оболочек. Нарушается трофика плода, наступает его гибель и, а к следствие, аборт, рождение нежизнеспособного, слабого приплода, задержание последа. У небеременных маток бруцеллы длительно сохраняются в вымени, надвыменных лимфоузлах, а также в лимфоузлах тазовой полости. При очередной беременности (или снижении резистентности организма) местная инфекция может обостриться и перейти в генерализованную. У самцов бруцеллы наиболее длительно локализуются в семенниках и их придатках. Воспалительный процесс с явлением некроза может разминаться в различных тканях и органах и клинически проявляться в виде орхитов, бурситов, абсцессов под кожей. Вторичная латенция характеризуется отсутствием клинических примы ков и аллергической перестройкой организма.

Течение и симптомы болезни

Инкубационный период длится 2-4 недели и более. При отсутствии среди восприимчивого поголовья беременных животных заболевание чаще протекает бессимптомно. У таких животныx болезнь выявляют серологическими или аллергическими методами. У беременных животных всех видов бруцеллез проявляется абортами во второй половине беременности. Коровы абортируют чаще на 8-м меся — 1н овцы и козы — на 3-5-м, свиноматки могут абортировать как в первой, так и во второй половине супоросности, собаки на 40-50-й день. У крупного рогатого скота и овец повторные аборты наблюдаются редко, у свиней они могут быть многократными. За 1-2 дня до аборта у самки набухает вымя, припухают наружные половые органы, отмечается незначительное выделение из влагалища буровато-красной слизистой жидкости. Аборты, как правило, сопровождаются задержанием последа и развитием гнойного эндометрита. В процесс могут вовлекаться яичники и фаллопиевы трубы, что приводит к нарушению полового цикла и к временному или стойкому бесплодию. Кроме абортов бруцеллез у животных может сопровождаться серозными бурситами, гигромами, артритами, тендовагинитами, а у мужских особей — орхитами и эпидидимитами со значительным увеличением семенников и опуханием мошонки.

У свиноматок, больных бруцеллезом, аборты наблюдаются как в первой, так и во второй половине супоросности, преимущественно на 60-90-й день беременности. После аборта у некоторых свиноматок наблюдаются задержание последа, эндометрит и мастит. Кроме абортов у больных свиней может наблюдаться мумификация плодов, появляются абсцессы в под-кожной клетчатке и паренхиматозных органах, паралич мышц таза и конечностей. У лошадей характерными для бруцеллеза являются бурситы в области затылка и холки, которые сопровождаются некрозом хрящей, остистых отростков, образованием свищей. Также могут обнаруживаться бурситы и гигромы. Характерным клиническим признаком бруцеллеза у северных оленей и маралов считают бурситы конечностей. Течение болезни у пушных зверей зависит в основном от времени их заражения. При заражении животных в период гона и беременности наблюдается бесплодие самок и повышенный падеж новорожденных щенков. В другое же время болезнь протекает латентно. Больные бруцеллезом звери остаются холостыми, наблюдаются аборты и рождение нежизнеспособного потомства. У собак и кошек болезнь протекает бессимптомно и выявляется только серологическим методом. Птицы устойчивы к бруцеллезу даже при экспериментальном заражении.

Наиболее характерные изменения встречаются в матке беременных животных. Первичный патологический процесс проявляется в форме воспалительно-некротических изменений в матке и плодных оболочках. Плодные оболочки набухшие, покрыты хлопьями фибрина и гноя. У абортированных плодов находят отеки подкожной клетчатки и пупочного канатика, скопление жидкости буро-красного цвета с хлопьями фибрина в грудной и брюшной полостях, кровоизлияния на серозных и слизистых оболочках, катаральное воспаление слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, легких; некротические участки и печени.

Диагноз на бруцеллез у животных основывается на анамнезе и эпизоотологических данных, клинических признаков, результатов аллергического и бактериологического исследований. Основным методом прижизненной диагностики бруцеллеза у животных является серологический. Серологические исследования на бруцеллез крупного рогатого скота приводит путем постановки реакции агглютинации (РА), реакции связывания комплемента (РСК), роз бенгал пробы (РПБ), кольцевой реакции (КР); овец, коз, лошадей — РА, РСК, РПБ; свиней — РСК, РПБ. Повторно животных исследуют на бруцеллез серологическим методом через 15-30 дней, а аллергическим — через 25-30 дней. Аллергический метод применяется для исследования собак и животных других видов. Коров (нетелей) исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок — через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов — с 4-месячного возраста.

Бактериологическому исследованию (включая постановку биопробы) подвергают биоматериал от животных в случае наличия у них признаков, вызывающих подозрение на заболевание бруцеллезом. Абортированные плоды, поступающие в ветеринарную лабораторию для исследования на фихомоноз, кампилобактериоз, сальмонеллез, лептоспироз, хламидиоз, подлежат также обязательному исследованию на бруцеллез. В лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками и желудок плода с содержимым, кусочки печени, селезенки, семенники с придатками, измененные участки рогов матки и лимфоузлы, содержимое бурс, пробы молока. Одновременно в лабораторию направляют I р (ни, или сыворотку абортировавшего животного. Бактериологическое исследование на бруцеллез включает микроскопию мазков, окрашенных по Граму и одному из следующих специальных мг к >дон: по Стемпу, Козловскому или Шуляку-Шину; выделение культуры бруцелл путем посевов материала на мясо-пептонный печеночный бульон (МПБ), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон, печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар и др. Выделение культуры идентифицируют по морфологическим, культуральным « пометам и в реакции агглютинации на стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой. Биопробу ставят на морских свинках (не менее двух) массой 400 г. Диагноз на бруцеллез считается установленным в одном из следующих случаев:

при выделении культуры бруцелл из биоматериала или положительной биопробе, а также при положительных результатах серологических исследований не вакцинированных животных при следующих показателях: для крупного рогатого скота и лошадей — РА с наличием антител 200 МЕ/мл и выше; для овец и коз — РА 100 МЕ/мл и выше; для собак — РА 50 МЕ/мл и выше; для всех видов животных РСК в разведении сыворотки 1: 5 и выше;

при выявлении в стадах крупного рогатого скота положительно реагирующих животных только в РА не выше 200 МЕ/мл и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1: 10 проводят повторное исследование через 15-30 дней в РА, РСК. При повышении титров в РА или РСК заболевание считается установленным.

При постановке диагноза исключают кампилобактериоз, хламидиоз, инфекционный эпидидимит, лептоспироз, листериоз, сальмонеллез, незаразные болезни с симптомами аборта. Дифференциальная диагностика основана на проведении бактериологических, вирусологических и серологических исследований.

Больные животные подлежат убою.

Иммунитет и специфическая профилактика.

В ряде стран для специфической профилактики бруцеллеза используют живые вакцины из штаммов № 19, №82, PEV-1 и др. В Республике Беларусь специфическая профилактика бруцеллеза у животных не проводится.

Мероприятия по профилактике и ликвидации.

Общие профилактические меры заключаются в соблюдение владельцами животных ветеринарно — санитарных правил содержания и эксплуатации животных. Специальные профилактические меры предусматривают серологические исследования коров и нетелей на бруцеллез один раз в три года, быков — производителей один раз в два года. При установлении диагноза на бруцеллез, согласно Ветеринарному уставу Республики Беларусь, в неблагополучном хозяйстве вводится карантин. По условиям карантина запрещается: ввоз на неблагополучные фермы, вывоз из них восприимчивых к бруцеллезу животных; перегруппировка животных внутри хозяйства без разрешения главного ветеринарного врача; заготовка на неблагополучных территориях племенных и пользовательных животных, грубых кормов для вывоза их в другие хозяйства и районы, а также проведение ярмарок, базаров и выставок животных; использование больных (положительно реагирующих) бруцеллезом животных и полученного от них приплода для воспроизводства стада; вывоз необеззараженного молока, полученного от коров неблагополучной фермы, на молокоперерабатывающее предприятие. Молоко от коров, положительно реагирующих на бруцеллез, обеззараживают кипячением или переработкой на масло топленое — сырец. Аналогично поступают с молоком коров, положительно реагирующих на бруцеллез, в благополучных хозяйствах до установления (исключения) диагноза на эту болезнь. Молоко от не реагирующих коров неблагополучного стада обеззараживают при температуре +70°С в течение 30 мин или при температуре I90°С в течение 20 с или кипячением.

Оздоровление крупного рогатого скота от бруцеллеза осуществляется путем полной ликвидации поголовья неблагополучного хозяйства (фермы) и проведения санации помещений. Животных, положительно реагирующих при исследовании на бруцеллез, абортировавших или имеющих другие клинические признаки болезни, немедленно изолируют от другого поголовья и в течение 15 дней сдают на убой без откорма и нагула, независимо от их племенной и производственной ценности, весовых кондиций, возраста, состояния беременности. Хозяйство признается оздоровленным от бруцеллеза крупного рогатого o нота и с него снимается карантин после убоя неблагополучного поголовья, санации животноводческих помещений, территории ферм и получения двух отрицательных результатов серологических исследований на (бруцеллез с интервалом 30 дней животных, имевших контакт с животными неблагополучного стада, включая скот, принадлежащий гражданам, проживающим в данном населенном пункте. На неблагополучных фермах проводят дезинфекцию, дезинсекцию, дератизацию, санитарный ремонт животноводческих помещений и другие ветеринарно-санитарные мероприятия.

Для дезинфекции в хозяйствах применяют 20% -ю взвесь свежегашеной и жести, взвесь или осветленный раствор хлорной извести, содержащей активного хлора, препарат ДП — 2,2% -й горячий раствор гидроксида па грим, 3% -й горячий раствор каустифицированной содопогашенной смеси, и раствор формальдегида, 5% -й горячий раствор кальцинированной годы, 0,5% -й раствор глутарового альдегида, 5% -й раствор технического натрия, растворы нейтрального гипохлорита кальция, тексанита, содержащие 3 % активного хлора. При установлении диагноза у овец (коз) в благополучных районах, все неблагополучное поголовье овец (коз) хозяйства, независимо от форм собственности, вместе с приплодом подвергают немедленному убою.

Остальное поголовье овец (коз), бывшее в контакте с неблагополучной тарой, подвергается двукратному серологическому исследованию с интервалом в 30 дней. При получении отрицательного результата исследований, убоя неблагополучной отары, проведении санации территории ферм, животноводческих помещений карантин снимается. На фермах и комплексах с поголовьем до 12 тыс. животных, на которых установлено заболевание свиней бруцеллезом, все поголовье, в том числе молодняк, сдают на убой. Супоросных маток сдают на убой после окончании опороса и отъема поросят. Ликвидацию очага бруцеллеза осуществляют в срок не более 6 месяцев. На неблагополучной ферме осеменение свиноматок запрещается. На комплексах по выращиванию свиней, имеющих более 12 тыс. голов, при установлении бруцеллеза убою подвергается все поголовье неблагополучных технологических групп, секторов (блоков) или свинарников. При установлении заболевания крупного рогатого скота в отдельных хозяйствах граждан все поголовье животных, содержащихся в этих хозяйствах, подвергается исследованиям серологическим методом до получения двукратных отрицательных результатов.

источник

Бруцеллез — инфекционная хроническая болезнь домашних и диких животных и человека. Клинические признаки и последствия заболевания, дифференциальная диагностика. Эпизоотологические данные, патогенез, течение болезни и патологоанатомические изменения.

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru

Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь

УО «Витебская ордена « Знак Почета»

Государственная академия ветеринарной медицины

Кафедра эпизоотологии и инфекционных болезней животных

бруцеллез инфекционная болезнь эпизоотологический

На тему: БРУЦЕЛЛЕЗ: ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ У ЖИВОТНЫХ

Определение болезни

Историческая справка
Распространение
Экономический ущерб
Этиология
Эпизоотологические данные
Патогенез
Течение и симптомы болезни
Патологоанатомические изменения
Диагностика
Дифференциальная диагностика
Лечение

Бактериологическому исследованию (включая постановку биопробы) подвергают биоматериал от животных в случае наличия у них признаков, вызывающих подозрение на заболевание бруцеллезом. Абортированные плоды, поступающие в ветеринарную лабораторию для исследования на фихомоноз, кампилобактериоз, сальмонеллез, лептоспироз, хламидиоз, подлежат также обязательному исследованию на бруцеллез. В лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками и желудок плода с содержимым, кусочки печени, селезенки, семенники с придатками, измененные участки рогов матки и лимфоузлы, содержимое бурс, пробы молока. Одновременно в лабораторию направляют I р (ни, или сыворотку абортировавшего животного. Бактериологическое исследование на бруцеллез включает микроскопию мазков, окрашенных по Граму и одному из следующих специальных мг к >дон: по Стемпу, Козловскому или Шуляку-Шину; выделение культуры бруцелл путем посевов материала на мясо-пептонный печеночный бульон (МПБ), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон, печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар и др. Выделение культуры идентифицируют по морфологическим, культуральным « пометам и в реакции агглютинации на стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой. Биопробу ставят на морских свинках (не менее двух) массой 400 г. Диагноз на бруцеллез считается установленным в одном из следующих случаев:

при выделении культуры бруцелл из биоматериала или положительной биопробе, а также при положительных результатах серологических исследований не вакцинированных животных при следующих показателях: для крупного рогатого скота и лошадей — РА с наличием антител 200 МЕ/мл и выше; для овец и коз — РА 100 МЕ/мл и выше; для собак — РА 50 МЕ/мл и выше; для всех видов животных РСК в разведении сыворотки 1: 5 и выше;

при выявлении в стадах крупного рогатого скота положительно реагирующих животных только в РА не выше 200 МЕ/мл и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1: 10 проводят повторное исследование через 15-30 дней в РА, РСК. При повышении титров в РА или РСК заболевание считается установленным.

Оздоровление крупного рогатого скота от бруцеллеза осуществляется путем полной ликвидации поголовья неблагополучного хозяйства (фермы) и проведения санации помещений. Животных, положительно реагирующих при исследовании на бруцеллез, абортировавших или имеющих другие клинические признаки болезни, немедленно изолируют от другого поголовья и в течение 15 дней сдают на убой без откорма и нагула, независимо от их племенной и производственной ценности, весовых кондиций, возраста, состояния беременности. Хозяйство признается оздоровленным от бруцеллеза крупного рогатого o нота и с него снимается карантин после убоя неблагополучного поголовья, санации животноводческих помещений, территории ферм и получения двух отрицательных результатов серологических исследований на (бруцеллез с интервалом 30 дней животных, имевших контакт с животными неблагополучного стада, включая скот, принадлежащий гражданам, проживающим в данном населенном пункте. На неблагополучных фермах проводят дезинфекцию, дезинсекцию, дератизацию, санитарный ремонт животноводческих помещений и другие ветеринарно-санитарные мероприятия. Для дезинфекции в хозяйствах применяют 20% -ю взвесь свежегашеной и жести, взвесь или осветленный раствор хлорной извести, содержащей активного хлора, препарат ДП — 2,2% -й горячий раствор гидроксида па грим, 3% -й горячий раствор каустифицированной содопогашенной смеси, и раствор формальдегида, 5% -й горячий раствор кальцинированной годы, 0,5% -й раствор глутарового альдегида, 5% -й раствор технического натрия, растворы нейтрального гипохлорита кальция, тексанита, содержащие 3 % активного хлора. При установлении диагноза у овец (коз) в благополучных районах, все неблагополучное поголовье овец (коз) хозяйства, независимо от форм собственности, вместе с приплодом подвергают немедленному убою. Остальное поголовье овец (коз), бывшее в контакте с неблагополучной тарой, подвергается двукратному серологическому исследованию с интервалом в 30 дней. При получении отрицательного результата исследований, убоя неблагополучной отары, проведении санации территории ферм, животноводческих помещений карантин снимается. На фермах и комплексах с поголовьем до 12 тыс. животных, на которых установлено заболевание свиней бруцеллезом, все поголовье, в том числе молодняк, сдают на убой. Супоросных маток сдают на убой после окончании опороса и отъема поросят. Ликвидацию очага бруцеллеза осуществляют в срок не более 6 месяцев. На неблагополучной ферме осеменение свиноматок запрещается. На комплексах по выращиванию свиней, имеющих более 12 тыс. голов, при установлении бруцеллеза убою подвергается все поголовье неблагополучных технологических групп, секторов (блоков) или свинарников. При установлении заболевания крупного рогатого скота в отдельных хозяйствах граждан все поголовье животных, содержащихся в этих хозяйствах, подвергается исследованиям серологическим методом до получения двукратных отрицательных результатов.

Распространение бруцеллеза животных, степень опасности и ущерб. Возбудитель болезни. Возникновение, патогенез, течение и клиническое проявление. Патологоанатомические признаки. Диагностика и лечение. Иммунитет, специфическая профилактика заболевания.

курсовая работа [3,3 M], добавлен 06.11.2014

Ознакомление с патогенезом, клиническими признаками, течением и основными симптомами бешенства у домашних и диких теплокровных животных. Изучение патологоанатомических изменений организма. Дифференциальная диагностика, лечение и профилактика заболевания.

реферат [24,2 K], добавлен 07.12.2011

Хламидиоз — зооантропонозная, инфекционная болезнь животных, причины и условия ее возникновения, экономический ущерб от нее. Развитие, течение и симптомы заболевания, патологоанатомические изменения. Диагностика, профилактика и лечение хламидиоза.

реферат [19,4 K], добавлен 06.02.2012

Характеристика станции по борьбе с болезнями животных. Бруцеллез — хроническая инфекционная болезнь млекопитающих, возбудитель заболевания. План мероприятий против бруцеллеза, особенности его составления. Течение, симптомы, меры борьбы и профилактика.

курсовая работа [86,7 K], добавлен 12.04.2012

Распространение инвазионных болезней среди домашних и диких млекопитающих животных. Биология развития ценуроза овец, вызываемого личиночной стадией ленточного гельминта. Эпизоотологические данные, патогенез и иммунитет, диагностика и лечение заболевания.

курсовая работа [1,2 M], добавлен 01.04.2012

Понятие и история исследований бруцеллеза у животных, его проявления и степень опасности, оценка ущерба для хозяйства. Возбудитель заболевания и характер его воздействия на организм животного. Дифференциальная диагностика и меры профилактики заболевания.

реферат [20,7 K], добавлен 21.09.2009

Возбудитель ньюкаслской болезни птиц. Эпизоотологические данные, патогенез, клинические признаки и патологоанатомические изменения. Диагностика, методы лечения ньюкаслской болезни и инфекционного бронхита кур. Иммунитет и специфическая профилактика.

курсовая работа [62,3 K], добавлен 24.05.2012

Группа инфекционных болезней, общих для животных и человека. Бруцеллез — инфекционная, хронически протекающая болезнь. Описание симптомов бруцеллеза у Гиппократа. Источник возбудителя инфекции — больные бруцеллезом животные, характеристика возбудителя.

курсовая работа [86,4 K], добавлен 13.12.2010

Инфекционная болезнь сельскохозяйственных и диких животных. Определение и распространение сибирской язвы. Течение и симптомы болезни, патологоанатомические изменения. Иммунитет и специфическая профилактика. Мероприятия по профилактике и ликвидации.

реферат [37,5 K], добавлен 21.01.2012

Биология возбудителя пироплазмоза у собак. Эпизоотологические характеристики данного заболевания. Его симптомы и клинические признаки. Воздействие токсинов piroplasma canis на организм. Диагностика и лечение болезни. Патологоанатомические изменения.

реферат [247,4 K], добавлен 19.06.2014

источник

5.1. Метод аллергического исследования основан на выявлении у больных бруцеллезом

животных повышенной чувствительности замедленного типа к специфическому аллергену.

5.2. Аллергический метод применяют для исследования на бруцеллез крупного рогатого скота,

буйволов, овец, коз, свиней и северных оленей, не подвергавшихся прививке вакцинами против

бруцеллеза, в случаях, предусмотренных инструкцией о мероприятиях по профилактике и

ликвидации бруцеллеза животных.

Аллергическое исследование на бруцеллез животных разрешается проводить только

ветеринарным врачам или фельдшерам со средним специальным образованием под наблюдением

5.3. Для аллергической диагностики бруцеллеза у животных применяют бруцеллин ВИЭВ.

Бруцеллин — стерильный биологический препарат, представляет собой прозрачную жидкость

коричневато-желтого цвета без опалесценции, содержащую продукты жизнедеятельности и

специфические вещества, извлеченные из бруцелл.

Флаконы с бруцеллином должны быть плотно закрыты пробками и закатаны алюминиевыми

колпачками. При встряхивании и переворачивании флакона препарат не должен просачиваться через

пробку. На каждом флаконе должна быть этикетка (или надпись) с обозначением наименования

биопредприятия, изготовившего бруцеллин, наименования препарата и его количества, номера

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

серии, даты выпуска, срока годности, номера госконтроля, условий хранения, стандарта (ГОСТ) и

5.4. Бруцеллин используют только в день вскрытия флакона. Он пригоден для применения в

течение 18 месяцев со дня изготовления при условии хранения в темном сухом помещении при

5.5. Каждый флакон с бруцеллином перед применением просматривают. При обнаружении в

препарате каких-либо примесей, плесени, хлопьев, при нарушении целостности стекла или укупорки,

отсутствии надписи на флаконе, а также бруцеллин, подвергавшийся замораживанию и давший

осадок или помутнение, к применению не допускается.

5.6. Для введения животным бруцеллина используют короткие инъекционные иглы (N 0420 —

0813) или иглы для внутрикожных инъекций с двумя трубками (N 0706, ТУ 46-22-607-80) и шприцы,

снабженные бегунком, вместимостью 2 или 5 мл. При исследовании свиней можно применять

Шприцы и иглы перед и после их использования стерилизуют кипячением в течение 30 минут в

дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих средств. Безыгольные

инъекторы стерилизуют в соответствии с инструкцией по их использованию.

Во время исследования животных инъекционные иглы меняют перед каждым наполнением

шприца бруцеллином, а в промежутках между инъекциями препарата иглу держат в ватном тампоне,

5.7. Непосредственно перед применением бруцеллина алюминиевый колпачок флакона с

препаратом приоткрывают, резиновую пробку обрабатывают спиртом, прокалывают инъекционной

иглой и шприцем через нее набирают необходимое количество аллергена.

Бруцеллин вводят животным под кожу нижнего века на 1 см ниже края века со стороны

наружного угла глаза (пальпебральная проба): овцам, козам и оленям в дозе 0,5 мл, крупному

рогатому скоту и буйволам в дозе 1,0 мл.

Вводить бруцеллин под кожу века, имеющую травматические повреждения, уплотнения,

абсцессы и другие поражения, не разрешается. Животных с заболеванием глаз или с густым

шерстным покровом в области век метят и вводят им бруцеллин внутрикожно в центре одной из

подхвостовых складок в дозах: овцам и козам — 0,2 мл и крупному рогатому скоту и буйволам — 0,3 мл

Свиньям бруцеллин вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины, ближе к

основанию уха в дозе 0,2 мл. Правильность внутрикожной инъекции препарата контролируют по

образованию бугорка размером с горошину.

При инъекции препарата животным обязательно соблюдение правил асептики. Участок кожи

перед уколом протирают ватой, смоченной в спирте или 3-процентном растворе борной кислоты.

5.8. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина наступает

воспалительная реакция в виде плотной или тестоватой припухлости, обычно хорошо видимой при

осмотре; у свиней, кроме того, может развиваться гиперемия, иногда кровоизлияние в виде темно-

красного пятна в центре отека. У здоровых животных местная реакция не возникает.

5.9. Реакцию на бруцеллин у овец, коз, оленей, крупного рогатого скота и буйволов учитывают

один раз через 48 часов, у свиней — два раза, через 24 и 48 часов после введения препарата, путем

осмотра, а при неясно выраженной реакции — пальпацией места инъекции.

При обнаружении на месте введения препарата припухлости реакцию оценивают как

В случае неясно выраженной реакции пальпируют место введения препарата и сравнивают с

кожей века другого глаза (или подхвостовой складки), а у свиней — с кожей основания другого уха.

Если обнаруживают хотя бы небольшую разницу, реакцию считают положительной. При отсутствии

указанных признаков реакции результат исследования считают отрицательным.

Реагирующих на бруцеллин животных метят и выделяют из отары (стада).

5.10. С животными, признанными при исследовании бруцеллина реагирующими

положительно, поступают согласно Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации

5.11. После применения бруцеллина у животных можно в любые сроки брать кровь для

исследования на бруцеллез серологическими методами.

5.12. Проведение аллергического исследования на бруцеллез животных оформляют актом с

приложением к нему описи реагировавших животных (указывают инвентарный номер, пол и возраст

животных, характер реакции на бруцеллин). Один экземпляр акта направляют главному ветврачу

района, другой хранят в хозяйстве.

С выходом настоящих Методических указаний утрачивают силу:

«Наставление по лабораторной диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных» от 17

«Наставление по диагностике бруцеллеза у коров методом кольцевой реакции (КР) с молоком»

«Наставление по применению бруцеллина ВИЭВ для аллергической диагностики бруцеллеза у

мелкого рогатого скота и свиней» от 24 декабря 1969 г.;

«Временное наставление по клинической и лабораторной диагностике инфекционного

заболевания овец, вызываемого бруцеллой овис (инфекционный эпидидимит баранов)» (приложение

к циркулярному письму Главного управления ветеринарии МСХ СССР от 10 марта 1970 г. N 116-9);

«Наставление по постановке и учету реакции агглютинации при диагностике бруцеллеза

сельскохозяйственных животных» от 19 мая 1964 г. с изменениями и дополнениями, внесенными 11

«Наставление по постановке и учету реакции связывания комплемента (РСК) и реакции

длительного связывания комплемента (РДСК) при диагностике бруцеллеза у животных» от 27 мая

«Наставление по постановке и учету пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал

антигеном (роз бенгал проба или РБП) при диагностике бруцеллеза у животных» от 12 декабря 1978 г.

Указания по диагностике бруцеллеза животных разработаны Всесоюзным Ордена Ленина

научно-исследовательским институтом экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко

(проф. П.С. Уласевич, кандидаты вет. наук А.Н. Касьянов и В.А. Ромахов), Всесоюзным

государственным ордена Трудового Красного Знамени научно-контрольным институтом

ветеринарных препаратов МСХ СССР (канд. вет. наук К.В. Шумилов), Главным управлением

ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР (Э.С. Плотников) и Центральной

ветеринарной лабораторией (Б.И. Антонов, Т.А. Сысоева, В.В. Борисова).

источник

Купить ГОСТ 25385-91 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль».

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
Курьерская доставка (7 дней)
Самовывоз из московского офиса
Почта РФ

Распространяется на методы диагностики бруцеллеза животных.

Дата введения:	01.01.1993
Добавлен в базу:	01.09.2013
Заверение срока действия:	01.07.2018
Актуализация:	01.01.2019

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА

КОМИТЕТ СТАНДАРТИЗАЦИИ И МЕТРОЛОГИИ СССР Москва

УДК 636.9.001.4:006.354 Группа С7в

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ стандарт СОЮЗА ССР

Методы диагностики бруцеллеза ГОСТ

Agricultural animals. Methods of diagnostics 25385_91

Настоящий стандарт распространяется на методы диагностики бруцеллеза животных.

1.1. Для бактериологического исследования берут абортированные плоды (от свиноматки не менее трех плодов) или их части (перевязанный желудок с содержимым, печень, селезенка), околоплодную жидкость, плодовые оболочки, молоко, содержимое гигром (бурситов), абсцессов, а от животных, убитых с диагностической целью — паренхиматозные и половые органы и лимфатические узлы.

Жидкий материал берут в стерильную посуду (пробирки, банки).

Для исследования на инфекционный эпидидимит в лабораторию направляют: от баранов — семенники с придатками; от овцематок — абортированные плоды с плодовыми оболочками.

Отобранные для бактериологических исследований пробы упаковывают в полиэтилен, целлофан или пергаментную бумагу, помещают в общую тару (ящик, пакет) и в тот же день отправляют в лабораторию.

Одновременно с материалом в лабораторию направляют кровь животного для серологического исследования и акт с анамнестическими данными.

1.2. Для серологического исследования берут кровь из яремной вены (у свиней из ушной или хвостовой) в стерильные про-

(С) Издательство стандартов, 1992

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен без разрешения Госстандарта СССР

бирки по 5—10 см 5 от каждого животного или используют кровь, полученную при убое.

Пробирки маркируют, составляют опись проб и направляют в лабораторию.

2.1. Метод бактериологического исследования Сущность метода заключается в выявлении бруцелл в исследуемом материале путем определения характера роста выделенных культур микробов на питательных средах, их морфологии, тинкто-риальных, антигенных и патогенных свойств для морских свинок.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы Гомогенизатор электрический бактериологический.

Микроскоп иммерсионный с контрастным приспособлением или стереоскопический.

Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5, 10 и 100 см 3 по ГОСТ 20292.

Чашки бактериологические по ГОСТ 25336.

Пробирки бактериологические по ГОСТ 25336.

Масло иммерсионное для микроскопии.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206 или агар пищевой по ГОСТ 16280.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.

Генциан фиолетовый (генцианвиолет).

Йод металлический (кристаллический).

Кислота карболовая кристаллическая.

Сыворотка крови бычья или лошадиная (нормальная).

Набор компонентов для серологической дифференциации куль тур бруцелл.

Свинки морские массой 300—400 г.

2.1.2 Подготовка к исследованию

2.1.2.1. Для приготовления карболового кристаллического фиолетового или генциан фиолетового для окраски по Граму берут 1 г кристалл- или генцианфиолетового, растирают в ступке с 2 г кристаллической карболовой кислоты. Во время растирания небольшими порциями прибавляют 10 см 3 96%-ного этилового спирта. После того как краска полностью растворится, прибавляют при постоянном помешивании 100 см 3 дистиллированной воды. Раствор краски фильтруют через бумажный фильтр.

2.1.2.2. Для приготовления раствора Люголя в 10 см 3 дистиллированной воды растворяют 2 г йодистого калия. Затем прибавляют 1 г кристаллического йода. Раствор выдерживают от 5 до 6 ч до полного растворения йода, после чего прибавляют 290 см 3 дистиллированной воды. Хранят раствор в склянке из темного стекла.

2.1.2.3. Для приготовления карболового фуксина Циля берут 1 г основного кристаллического фуксина, растирают в ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и 0,5 см 3 глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавляют 10 см 3 этилового 96%-ного спирта. После того как краска полностью разотрется, прибавляют при постоянном помешивании 100 см 3 дистиллированной воды. Раствор краски фильтруют через бумажный фильтр. Фуксин Циля стойкий и его хранят во флаконах из темного стекла с притертой пробкой.

Перед работой к одной части карболового фуксина Циля прибавляют девять частей дистиллированной воды.

2.1.2.4. Для проведения исследований используют также готовые стандартные растворы генциана фиолетового, Люголя, фуксина Циля, зелени малахитовой.

2.1.2.5. Для приготовления сывороточно-декстрозного и кровяного агара на мясном экстракте вначале готовят питательный агар. К 1000 см 3 дистиллированной воды прибавляют 15 г агара, 10 г пептона, 5 г хлористого натрия, 5 г мясного экстракта. Все ингредиенты помещают в сосуд и подвергают обработке текучим паром в течение 1 ч. Устанавливают pH 6,8. Затем автоклавируют при 127°С для выпадения фосфатов. Среду фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают pH 7,4 и стерилизуют при 115°С в течение 15 мин.

Для приготовления сыворочно-декстрозной среды питательный агар охлаждают до 50°С и добавляют 5% нормальной инактивированной лошадиной или бычьей сыворотки и 1% раствора декстрозы.

Для приготовления кровяной среды питательный агар охлаждают до 50°С и добавляют от 10 до 20% дефибринированной крови нормальных телят, лошадей или овец. Смешивают и разливают в стерильные пробирки или бактериологические чашку.

2.1.2.6. Для исследования на Brucella ovis приготовляют сы-вороточно-глицериново-декстрозный агар.

Расплавленный питательный агар охлаждают до 50°С и добавляют к нему глицерина 2%, декстрозы 1% и сыворотки инактивированной 10—20%. Смешивают и разливают в стерильные пробирки или бактериологические чашки.

2.1.2.7. Для приготовления печеночного настоя свежую говяжью печень освобождают от жира и пленок и пропускают через мясорубку. Фарш заливают водопроводной водой (на 1 кг фарша — 1 дм 3 воды) и настаивают при 25—30°С в течение 3 ч или при 4—10°С в течение 6—10 ч. Затем смесь подвергают обработке текучим паром в течение 20 мин или варят в котле 2 ч, постоянно помешивая и снимая накипь. После варки настой фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают по бутылям и стерилизуют 30 мин при 112—115°С.

2.1.2.8. Для приготовления печеночного бульона к 500 см 3 печеночного настоя, приготовленного по п. 2.1.2.7, добавляют 500 см 3 водопроводной воды, 10 г сухого пептона и 5 г хлористого натрия. Смесь кипятят, устанавливают pH 7,4 и фильтруют через фильтровальную бумагу, затем разливают в необходимую по емкости посуду и стерилизуют 20 мин при 115—120°С. После стерилизации pH бульона должен быть 7,1—7,2.

2.1.2.9. Для приготовления печеночного агара к 500 см 3 печеночного настоя, приготовленного по п. 2.1.2.7, добавляют 500 см 3 водопроводной воды, 10 г сухого пептона, 5 г хлористого натрия

и 25 г агара. Устанавливают pH 7,4 и варят до растворения агара. Затем автоклавируют при 115°С в течение 20 мин, отстаивают и фильтруют через ватно-марлевый фильтр (предварительно смоченный теплой водой). Устанавливают pH 7,1—7,2. Разливают в необходимую по емкости посуду и стерилизуют при 115°С в течение 20 мин.

2.1.2.10. Для приготовления мазков из патологического материала требуются чистые обезжиренные предметные стекла. Абортированный плод вскрывают, поверхность паренхиматозных органов стерилизуют, прикладывая раскаленный шпатель или обжигая тампоном, смоченным в спирте. Затем вырезают стерильными ножницами кусочки размером 1,5×1,0X1,5 см 3 и прикладывают поверхностями срезов к предметному стеклу по три отпечатка на двух предметных стеклах. В таком же порядке готовят мазки нз котиледонов последа, лимфатических узлов и другого материала. Содержимое желудка плода и другой жидкий материал набирают пастеровской пипеткой и также готовят мазки. Препараты высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки. Один мазок из каждого объекта окрашивают по Козловскому или Stamp, другой — по Граму. Мазки микроскопируют.

2.1.2.11. Для окраски мазков по Граму на фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги и наливают карболовый генциан фиолетовый на 2 мин, после чего снимают бумажку, сливают краску и промывают водой, наливают на мазок раствор Люголя (мазок чернеет). Через 1—2 мин раствор сливают, наливают этиловый спирт на 0,5—1 мин. Затем мазок промывают водой и дополнительно окрашивают разведенным 1:10 фуксином Циля в течение 1—2 мин. Краску сливают, промывают водой и просушивают мазок фильтровальной бумагой.

2.1.2.12. Для окраски мазков по Козловскому фиксированный мазок окрашивают 2%-ным водным раствором сафранина с подогреванием до появления пузырьков. Затем мазок промывают водой и дополнительно окрашивают 0,75—1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 0,5—1 мин. Краску сливают, промывают водой, просушивают мазок фильтровальной бумагой.

2.1.2.13. Для окраски мазков по Stamp фиксированный мазок скрашивают в течение 10 мин раствором карболового фуксина Циля в разведении 1:10. Затем мазок промывают водой и дифференцируют 0,5%-ным раствором уксусной кислоты в течение 30 с. Вновь тщательно промывают и докрашивают 1%-ным раствором метиленового синего в течение 20—30 с. Краску сливают, промывают водой, подсушивают мазок фильтровальной бумагой.

2.1.2.14. Для проведения посева из патологического материала кожу абортированного плода обжигают с поверхности по белой линии тампонами, смоченными спиртом, стерильными ножницами вскрывают брюшину и грудную клетку и пипеткой Пастера высе-

вают жидкое содержимое грудной, брюшной полостей и желудка плода, а также вырезают кусочки печени и селезенки размером не менее 2,0Х1,5Х2,5 см. Каждую пробу погружают в спирт и обжигают с поверхности, а затем помещают в стерильный стакан (колбу) гомогенизатора для приготовления взвеси. Для этого в стакан добавляют стерильный физиологический раствор в количестве, равном массе жидкой пробы, и гомогенизируют пробы в электрическом гомогенизаторе. Взвесь пипеткой Пастера по 0,1—0,2 см 3 втирают в поверхность предварительно подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается предварительный высев материала в жидкие питательные среды (в пробирках).

При отсутствии гомогенизатора допускается посев кусочка пробы путем внесения отпечатков разными сторонами пробы на поверхность питательной среды в чашках.

Из плодовой оболочки, плаценты вырезают кусочки менее загрязненный и без некротических участков, обрабатывают стерильным физиологическим раствором, подсушивают стерильным тампоном, обжигают на пламени и готовят из этого материала суспензию в электрическом гомогенизаторе. Суспензию засевают на чашки Петри со средой, содержащей препараты, задерживающие рост посторонней микрофлоры: генцианвиолет 1 :2000 000 или кристаллический фиолетовый 1 : 100 000, уксуснокислый натрий из расчета 0,125 мг на 1 см 3 или паранитрофенилглицерин (0,005— 0,007%).

2.1.2.15. Для выращивания посевы помещают в термостат при температуре 37—38°С. При исследовании материала от крупного рогатого скота и баранов половину засеянных пробирок и чашек помещают в эксикатор с содержанием 10—20% С0₂ и выдерживают их в термостате при 37—38°С. Через каждые 3—4 сут пробирки с посевами просматривают визуально, при необходимости через лупу или под малым увеличением микроскопа в отношении роста бруцелл. При отсутствии роста бруцелл все посевы выдерживают в термостате до 20 сут.

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3.1. Бруцелл обнаруживают тремя методами исследований: бактериоскопией мазков из патологического материала; получением культуры бруцелл на питательных средах и постановкой биологической пробы на морских свинках.

2.1.3.2. При бактериоскопии мазков из патологического материала, приготовленных по п. 2.1.2.10, обращают внимание на форму, размеры и расположение отдельных микробов и способность к элективным окраскам. Характерный вид бруцелл — мелких грамотрицательных, отдельно расположенных, не образующих спор кокко-бактсрий, окрашивающихся по Козловскому или Stamp в красный цвет, дает основание к предварительному заключению об обнаружении возбудителя бруцеллеза или инфекционного эпи-

дидимита, которое требует подтверждение выделением чистой культуры или положительной биопробой.

2.1.3.3. При осмотре посевов, проведенных по п. 2.1.2.14, обращают внимание на характер роста микробов. В бульоне бруцеллы образуют равномерное помутнение, а в дальнейшем пристеночное кольцо, возвышающееся над уровнем бульона. В отраженном свете пристеночное кольцо имеет голубоватый оттенок.

Из бульонной культуры делают посев в пробирку с плотной средой и готовят мазки. При микроскопировании препарата обнаруживают характерные для бруцелл кокко-бактерии.

На поверхности плотных питательных сред бруцеллы образуют прозрачные, блестящие, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью колонии, имеющие в отраженном свете голубоватый оттенок. С возрастом колонии приобретают более темную окраску, что связано с появлением пигмента.

Подозрительные колонии пересевают на скошенный агар в пробирках и двухсуточные культуры идентифицируют путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму, Козловскому или Stamp, агглютинации на предметном стекле с помощью набора компонентов для серологической дифференциации культур бруцелл. В набор компонентов входят: R—сыворотка агглютинирующая бруцеллезная; S—сыворотка агглютинирующая бруцеллезная; R—антиген бруцеллезный цветной; антиген бруцеллезный для роз бенгал пробы (РБП).

Для проведения пластинчатой реакции агглютинации на стекле с использованием набора компонентов для серологической дифференциации культур бруцелл R и S—сыворотки бруцеллезные агглютинирующие разводят 0,5%-ным карболизированным физиологическим раствором до рабочего разведения, указанного на этикетке. Разведенные сыворотки можно использовать в течение месяца. R—антиген бруцеллезный цветной и антиген бруцеллезный для РБП в пластинчатой РА применяют неразведенными.

На предметное стекло раздельно наносят по одной капле R и S—сывороток бруцеллезных агглютинирующих и физиологического раствора. Испытуемую культуру эмульгируют в каплях R и S— сывороток и в капле физиологического раствора. Параллельно в каждом опыте ставят контроль: R—сыворотки в рабочем разведении с антигенами цветными и для роз бенгал пробы;

S—сыворотки в рабочем разведении с цветным бруцеллезным антигеном и с антигеном для РБП.

При положительной РА в течение 1—3 мин в капле сыворотки образуется четко выраженный агглютинат в виде хлопьев или комочков, а сама жидкость просветляется, что особенно заметно при покачивании стекла. В физиологическом растворе (контрольном) наблюдается гомогенная взвесь без признаков просветления жидкости.

Следует учитывать, что реакция с R—сывороткой бруцеллезной проходит замедленно, агглютинат, как правило, мелкозернистый. Результаты дифференциации испытуемых культур считают достоверными, если в контролях R и S—бруцеллезных сывороток с гомологичными антигенами наблюдается четко выраженная агглютинация и отсутствует с гетерологичными. Реакцию с испытуемой культурой считают положительной при наличии 50—100%-ной агглютинации.

При отрицательной реакции агглютинации с культурой из одной колонии дополнительно исследуют еще не менее трех-четырех подозрительных колоний.

Культура возбудителя инфекционного эпидидимита баранов постоянно агглютинируется только R—бруцеллезной сывороткой.

Культуры, обладающие типичными для бруцелл морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами, а также дающие положительную реакцию агглютинации с S или R—бруцеллезными сыворотками одновременно или с одной из них в отдельности при отсутствии самоагглютинации в физиологическом растворе относят к бруцеллам.

2.1.3.4. Для постановки биологической пробы используют тот же материал, что и для бактериологического исследования.

Заражение морских свинок (не менее двух), предварительно проверенных на бруцеллез исследованием сыворотки их крови в реакции агглютинации, проводят подкожно в области паха в дозе 1 см 3 .

Через 15—30 сут у свинок берут кровь и сыворотку, исследуют на бруцеллез в реакции агглютинации в разведениях 1 : 10—1 :80.

При положительной РА морских свинок убивают, отмечают па-тологоанатомические изменения в селезенке, печени и лимфатических узлах и при необходимости исследуют их бактериологочес-ки. При отрицательной РА свинку выдерживают до 60 сут, а затем исслстуют серологически и бактериологически.

2.1.4.1. Заболевание бруцеллезом или инфекционным эпидиди-митом считают установленным при выделении культуры возбудителя из исследуемого материала или от морской свинки (биопроба), а также при получении у свинки положительной РА 1:10 и выше.

2.1.4.2. При положительных результатах бактериоскопии и отрицательных результатах биологического исследования и биопробы материал считают подозрительным в заражении бруцеллами и проводят серологическое и аллергическое исследования животных данной группы.

2.2. Метод серологического исследования

Сущность метода заключается в выявлении в сыворотке крови

животного специфических антител к бруцеллезному или овисно-му антигенам.

роз бенгал проба (РБП) rose Bengal test, реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК) или реакция длительного связывания комплемента (РДСК).

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Баня водяная с терморегулятором.

Комплект инструментов и приспособлений для проведения серологических исследований на бруцеллез крови животных (КИ).

Пластины с лунками полистироловые.

Фильтр Зейтца, пластины стерилизующие.

Стекла предметные чистые по ГОСТ 9284.

Пробирки серологические по ГОСТ 25336.

Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см 3 по ГОСТ 20292.

Кислота карболовая кристаллическая.

Антиген бруцеллезный единый для РА, РСК, РДСК.

Антиген бруцеллезный цветной для роз бенгал пробы (РБП).

Набор специфических компонентов для диагностики болезни овец, вызываемой бруцеллой овис (антиген овисный для РДСК, позитивная овисная и негативные сыворотки).

Сыворотка бруцеллезная позитивная.

Сыворотка овисная позитивная .

Гемолизин (гемолитическая сыворотка) по ГОСТ 16445.

Комплемент сухой, консервированный или нативный по ГОСТ 16446.

Бруцеллезные антигены для реакции агглютинации (РА), роз бенгал пробы (РБП), реакции связывания комплемента (РСК) или реакции длительного связывания комплемента (РДСК) готовят из штаммов Brucella abortus. Антиген овисный для РДСК из штаммов Brucella ovis.

источник

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА

КОМИТЕТ СТАНДАРТИЗАЦИИ И МЕТРОЛОГИИ СССР

УДК 636.9.001.4:006.354 Группа С79

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

Методы диагностики бруцеллеза

Agricultural animals. Methods of diagnostics of brucellosis

Настоящий стандарт распространяется на методы диагностики бруцеллеза животных.

Жидкий материал берут в стерильную посуду (пробирки, банки).

(Б) Издательство стандартов, 1992

бирки по 5—10 см 3 от каждого животного или используют кровь, полученную при убое.

Пробирки маркируют, составляют опись проб и направляют в лабораторию.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы Гомогенизатор электрический бактериологический.

Микроскоп иммерсионный с контрастным приспособлением или стереоскопический.

Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5, 10 и 100 см 3 по ГОСТ 20292.

Чашки бактериологические по ГОСТ 25336.

Пробирки бактериологические по ГОСТ 25336.

Пипетки пастеровские по ГОСТ 20292.

Стекла предметные по ГОСТ 9284.

Масло иммерсионное для микроскопии.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206 или агар пищевой по ГОСТ 16280.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805.

Спирт этиловый 96%-ный по ГОСТ 5962.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Генциан фиолетовый (генцианвиолет).

Йод металлический (кристаллический).

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328.

Калия гидроокись по ГОСТ 24363.

Кислота карболовая кристаллическая.

Кислота лимонная по ГОСТ 908.

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Кислота уксусная по ГОСТ 61.

Кислота серная по ГОСТ 4204.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233.

Натрий уксуснокислый по ГОСТ 2080.

Натрий лимоннокислый по ГОСТ 22280.

Сыворотка крови бычья или лошадиная (нормальная).

Набор компонентов для серологической дифференциации куль тур бруцелл.

Свинки морские массой 300—400 г.

2.1.2 Подготовка к исследованию

Перед работой к одной части карболового фуксина Циля прибавляют девять частей дистиллированной воды.

2.1.2.6. Для исследования на Brucella ovis приготовляют сы-вороточно-глицериново-декстрозный агар.

2.1.2.10. Для приготовления мазков из патологического материала требуются чистые обезжиренные предметные стекла. Абортированный плод вскрывают, поверхность паренхиматозных органов стерилизуют, прикладывая раскаленный шпатель или обжигая тампоном, смоченным в спирте. Затем вырезают стерильными ножницами кусочки размером 1,5х 1,0Х 1,5 см 3 и прикладывают поверхностями срезов к предметному стеклу по три отпечатка на двух предметных стеклах. В таком же порядке готовят мазки из котиледонов последа, лимфатических узлов и другого материала. Содержимое желудка плода и другой жидкий материал набирают пастеровской пипеткой и также готовят мазки. Препараты высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки. Один мазок из каждого объекта окрашивают по Козловскому или Stamp, другой — по Граму. Мазки микроскопируют.

2.1.2.13. Для окраски мазков по Stamp фиксированный мазок скрашивают в течение 10 мин раствором карболового фуксина Циля в разведении 1 : 10. Затем мазок промывают водой и дифференцируют 0,5%-ным раствором уксусной кислоты в течение 30 с. Вновь тщательно промывают и докрашивают 1%-ным раствором метиленового синего в течение 20—30 с. Краску сливают, промывают водой, подсушивают мазок фильтровальной бумагой.

вают жидкое содержимое грудной, брюшной полостей и желудка плода, а также вырезают кусочки печени и селезенки размером не менее 2,ОХ 1,5X2,5 см. Каждую пробу погружают в спирт и обжи» гают с поверхности, а затем помещают в стерильный стакан (кол» бу) гомогенизатора для приготовления взвеси. Для этого в стакан добавляют стерильный физиологический раствор в количестве, рав» ном массе жидкой пробы, и гомогенизируют пробы в электричес» ком гомогенизаторе. Взвесь пипеткой Пастера по 0,1—0,2 см 3 вти» рают в поверхность предварительно подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается предварительный высев материала в жидкие питательные среды (в пробирках).

При отсутствии гомогенизатора допускается посев кусочка про» бы путем снесения отпечатков разными сторонами -пробы на поверхность питательной среды в чашках.

Из плодовой оболочки, плаценты вырезают кусочки менее заг» рязненный и без некротических участков, обрабатывают стерильным физиологическим раствором, подсушивают стерильным тампоном, обжигают на пламени и готовят из этого материала суспензию в электрическом гомогенизаторе. Суспензию засевают на чашки Петри со средой, содержащей препараты, задерживающие рост посторонней микрофлоры: генцианвиолет 1 :2000 000 или кристаллический фиолетовый 1 : 100 000, уксуснокислый натрий из расчета 0,125 мг на 1 см 3 или паранитрофенилглицерин (0,005—* 0,007%).

2.1.3. Проведение исследования

2.1.3.2. При бактериоскопии мазков из патологического материала, приготовленных по п. 2.1.2.10, обращают внимание на форму, размеры и расположение отдельных микробов и способность к элективным окраскам. Характерный вид бруцелл — мелких грамотрицательных, отдельно расположенных, не образующих спор кокко-бактерий, окрашивающихся по Козловскому или Stamp в красный цвет, дает основание к предварительному заключению об обнаружении возбудителя бруцеллеза или инфекционного эпи-

дидимита, которое требует подтверждение выделением чистой культуры или положительной биопробой.

Для проведения пластинчатой реакции агглютинации на стекле с использованием набора компонентов для серологической дифференциации культур бруцелл R и S—сыворотки бруцеллезные агглютинирующие разводят 0,5%-ным карболизированным физиологическим раствором до рабочего разведения, указанного на этикетке. Разведенные сыворотки можно использовать в течение месяца, R—антиген бруцеллезный цветной и антиген бруцеллезный для РБП в пластинчатой РА применяют неразведенными.

На предметное стекло раздельно наносят по одной капле R и S—сывороток бруцеллезных агглютинирующих и физиологического раствора. Испытуемую культуру эмульгируют в каплях R и S — сывороток и в капле физиологического раствора. Параллельно в каждом опыте ставят контроль: R—сыворотки в рабочем разведении с антигенами цветными и для роз бенгал пробы;

S—сыворотки в рабочем разведении с цветным бруцеллезным антигеном и с антигеном для РБП.

При положительной РА морских свинок убивают, отмечают патологоанатомические изменения в селезенке, печени и лимфатических узлах и при необходимости исследуют их бактериологочес-ки. При отрицательной РА свинку выдерживают до 60 сут, а затем исследуют серологически и бактериологически.

2.1.4Л. Заболевание бруцеллезом или инфекционным эпидиди-митом считают установленным при выделении культуры возбудителя из исследуемого материала или от морской свинки (биопроба), а также при получении у свинки положительной РА 1 : 10 и выше.

2.2. Метод серологического исследования

Сущность метода заключается в выявлении в сыворотке крови

животного специфических антител к бруцеллезному или овисно-му антигенам.

роз бенгал проба (РБГ1) rose Bengal test, реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК) или реакция длительного связывания комплемента (РДСК).

2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Баня водяная с терморегулятором.

Пластины с лунками полистироловые.

Фильтр Зейтца, пластины стерилизующие.

Стекла предметные чистые по ГОСТ 9284.

Пробирки серологические по ГОСТ 25336.

Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см 3 по ГОСТ 20292.

Кислота карболовая кристаллическая.

Антиген бруцеллезный единый для РА, РСК, РДСК.

Антиген бруцеллезный цветной для роз бенгал пробы (РБП).

Сыворотка бруцеллезная позитивная.

Сыворотка овисная позитивная .

Гемолизин (гемолитическая сыворотка) по ГОСТ 16445.

Комплемент сухой, консервированный или нативный по ГОСТ 16446.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Антигены для диагностики бруцеллеза стандартизуют по международной сыворотке анти-BraceIla abortus, антиген овнсный—по полиглобулину.

2.2.2. Подготовка к исследованию

2.2.2.1. Для приготовления карболизированного физиологического раствора для постановки РА в 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 8,5 г хлористого натрия и 5 г карболовой кислоты. Раствор доводят до кипения, охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр.

2.2.2.2. Для приготовления карболизированного 5%-ного раствора хлористого натрия для постановки РА в 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 50 г хлористого натрия и 5 г карболовой кислоты. Раствор доводят до кипения, охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр.

2.2.2.3. Для приготовления разбавителя для постановки РСК и РДСК вначале готовят основные растворы солей магния и каль-дия следующим образом: 1 г хлористого магния растворяют в 11,8 см 3 и 1 г хлористого кальция в 54,4 см 3 дистиллированной воды. Основные растворы этих солей хранят в холодильнике.

Для изготовления 1 дм 3 разбавителя берут: 8,5 г хлористого натрия, 1,2 см 3 хлористого магния (основного раствора), 1,2 см 3 хлористого кальция (основного раствора) и растворяют в 1 дм 3 дис-тиллированой воды. Смесь кипятят, охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр и доводят pH до 7,3—7,4 прибавлением раствора гидроокиси натрия или соляной кислоты.

2.2.2.4. Для приготовления раствора Алсивера для консервирования эритроцитов в 1000 см 3 дистиллированной воды растворяют 18,7 г глюкозы, 4,2 г хлористого натрия, 8,0 г лимоннокислого натрия, 0,5 г лимонной кислоты. Раствор доводят до кипения, охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы или флаконы и стерилизуют в автоклаве при температуре 102— 105°С в течение 30 мин или фильтруют через стерилизующие пластины фильтра Зейтца.

2.2.2.5. Для приготовления эритроцитов барана для постановки РСК и РДСК кровь берут из яремной вены барана (овцы) с соблюдением правил асептики в сосуд, содержащий стеклянные или фарфоровые бусы (для дефибринирования), или сосуд, содержащий раствор Алсивера в количестве, равном объему взятой крови (для консервирования).

Для приготовления эритроцитов используют свежедефибрини-рованную кровь барана или через 6—14 сут после ее консервирования в растворе Алсивера и 2—4 раза (по 15 мин) отмывают на центрифуге при 2000—2500 мин -1 в разбавителе до полного обесцвечивания надосадочной жидкости. Для постановки РСК используют 2—5%-ную, а для РДСК — 3—’4%-ную взвесь эритроцитов (от осадка) в разбавителе.

2.2.2.6. Для РСК применяют гемолитическую сыворотку в удвоенном, а для РДСК — учетверенном титре, указанном предприятием, ее изготовившем. Для изготовления гемолитической системы смешивают равные объемы рабочих растворов гемолизина и эритроцитов и тщательно перемешивают, после чего оставляют на 15—30 мин для сенсибилизации.

2.2.2.7. Сыворотку получают методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают от 30 до 60 мин при температуре от 20 до 30°С, а затем при температуре от 4 до 10°С. Через 20—24 ч сыворотку исследуют в течение б сут со дня взятия крови или консервируют 5-%-ным раствором карболовой кислоты (1—2 капли на 1 см 3 сыворотки) или сухой борной кислоты (2% кислоты к объему сыворотки). Сыворотка крови должна быть прозрачной без признаков гемолиза. Сыворотки, консервированные карболовой кислотой, пригодны для исследования в течение 15 сут, а борной кислотой—30 сут со дня их консервирования.

2.2,3. Проведение исследования

2.2.3.1. РБП проводят при температуре 18—30°С на чистом стекле или сухой эмалированной диагностической пластине с лунками при помощи комплекта инструментов и приспособлений для проведения серологических исследований на бруцеллез крови животных. Цельную (неразведенную) исследуемую сыворотку крови в дозе 0,03 см 3 микропипеткой или шприцем-полуавтоматом вносят на край дна лунки. При исследовании крови крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей в каждую лунку рядом с сывороткой вносят 0,03 см 3 антигена, а при исследовании сыворотки крови овец, коз, свиней и северных оленей — 0,015 см 3 антигена при помощи калиброванной пипетки-капельницы (две или одну каплю). Затем антиген смешивают с сывороткой полиэтиленовой или стеклянной палочкой или ручным смесителем на 25 лунок, распределяя ее при этом по всей поверхности лунки, и покачивают пластинку осторожным вращательным движением вручную или на аппарате для покачивания диагностических пластин в течение 4 мин.

При проведении реакции контролем служит постановка роз-бенгал пробы с негативной и позитивной агглютинирующей сыворотками в тех же дозах, а также контроль антигена на спонтанную агглютинацию (к 0,03 см 3 антиген добавляют 0,03 см 3 физиологического раствора).

Все компоненты реакции (исследуемая сыворотка и антиген) должны иметь температуру не ниже 18°С.

2.2.3.2. Реакцию агглютинации (РА) проводят в пробирках в объеме 1 см 3 или полистироловых пластинах с лунками. В начале в объеме 0,5 см 3 готовят разведение испытуемой сыворотки, например, для исследования крупного рогатого скота, верблюдов и ло*

шадей — 1:25, 1 : 50, 1 : 100 и 1 :200; овец, коз и северных оленей — 1 : 12,5, 1 : 25, 1:50 и 1 : 100.

Сыворотки разводят карболизированным физиологическим раствором при исследовании крупного рогатого скота и лошадей; карболизированным 5%-ным раствором хлористого натрия при исследовании сывороток крови овец и коз. Затем в каждую пробирку или лунку добавляют по 0,5 см 3 рабочего раствора антигена (1:10 в соответствующем разбавителе), при этом конечное разведение испытуемых сывороток удваивается.

Одновременно с постановкой реакции проводят контроль: с негативной сывороткой в тех же разведениях, как и испытуемые, и с позитивной сывороткой до ее титра.

После добавления к испытуемым и контрольным сывороткам антигена пробирки тщательно встряхивают н ставят в термостат при 37—38°С на 16—20 ч, а затем выдерживают 1 ч при комнатной температуре.

2.2.3.3. Реакцию связывания комплемента (РСК) проводят в пробирках в объеме 1 см 3 (по 0,2 см 3 каждого компонента: сыворотки, антигена, комплемента, гемолизина, эритроцитов барана) или полистироловых пластинках с лунками. Все компоненты реакции разводят в разбавителе, приготовленном в соответствии с п. 2.2,2.3.

Испытуемые сыворотки исследуют в разведениях 1:5 и выше с антигеном и 1:5 без антигена (контроль). Инактивацию разведенных сывороток крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей и других животных проводят при 58—60°С в течение 30 мин; свиней— при 60°С в течение 50 мин; ослов и мулов — при 64—65°С и буйволов — при 62—65°С в течение 30 мин. Антигены берут в рабочем (удвоенном) титре, эритроциты барана — 2,5% от осадка.

Реакцию связывания комплемента проводят в водяной бане при 37—38°С. Время связывания комплемента — 20 мин, время реакции после добавления гемолитической системы — 20 мин. Для контроля реакции служат: негативная и позитивная бруцеллезные сыворотки в разведении 1:5 и выше с антигеном и 1 :5 без антигена, антиген в двойной дозе без сыворотки.

Для контроля гемолитической системы (приготовленной в соответствии с п. 2.2.2.3) служат 0,6 см 3 разбавителя и 0,4 см 3 гемолитической системы.

Для постановки основного опыта проводят титрование комплемента (сыворотка крови морской свинки). Титром комплемента считают его наибольшее разведение, давшее полный гемолиз 0,4 см 3 гемолитической системы в присутствии негативной сыворотки и антигена в течение 20 мин в водяной бане при температуре 37—38°С. Это разведение принимают за единицу (дозу комплемента). Для постановки основного опыта берут 1,2 дозы комплемента.

Титр каждой серии антигена и гемолизина устанавливают предприятия-изготовители.

2.2.3.4. Реакцию длительного связывания комплемента на холоде (РДСК) проводят в пробирках или полистироловых пластинках с лунками в объеме 1 см 3 (по 0,2 см 3 каждого компонента: сыворотки, антигена, комплемента, гемолизина, эритроцитов барана).

Все компоненты реакции разводят в разбавителе, приготовленном по п. 2.2.2.3.

Испытуемые сыворотки исследуют в разведениях 1 :5 и выше с антигеном и 1 :5 без антигена (контроль).

Контроль реакции: негативная, позитивная бруцеллезная и овисная сыворотки в разведениях 1:5 и выше с антигеном и 1 :5 без антигена, антиген в двойной дозе без сыворотки.

Перед разливом гемолитической системы в пробирки (пластины с лунками) проводят титрование гемолитической системы в присутствии негативной сыворотки, антигена и комплемента. Титром гемолитической системы считают наибольшее ее количество, которое в присутствии сыворотки и антигена полностью лизируется комплементом, взятым в реакцию. Это количество принимают за единицу (дозу) гемолитической системы. Для постановки основного опыта берут 0,8 дозы гемолитической системы.

2.2.4.1. Роз-бенгал пробу считают положительной при наличии выраженной агглютинации антигена в виде мелких или крупных хлопьев розового цвета, наступающей в течение 4 мин. Реакцию агглютинации, появляющуюся позже 4 мин, не учитывают.

Все сыворотки, с которыми получена положительная РБП, в в тот же или на другой день исследуют в РА и РСК (РДСК) для установления титра агглютининов и наличия комплемент связывающих антител.

Животных с положительной РА или РСК (РДСК) считают больными бруцеллезом. Животных, с сыворотками которых получена положительная РБП при отрицательных показаниях РА или РСК (РДСК), подвергают повторному исследованию через 15— 30 сут.

При получении положительных или вновь сомнительных пока* заний реакций результат исследования оценивают положительно.

2.2.4.2. Результаты реакции агглютинации учитывают через 1 ч визуально и оценивают в крестах по следующей схеме:

+ + + + — полное просветление жидкости, бруцеллы осели на дно пробирки в виде «зонтика» (100% агглютинации);

Ч—|—Ь — неполное просветление жидкости и хорошо выра

женный «зонтик» (75% агглютинации);

+ 4- — просветление жидкости и «зонтик» умеренно вы

+ — едва заметное просветление, «зонтик» выражен

очень слабо (25% агглютинации);

— — просветление жидкости и образование «зонтика»

не наступило, на дне пробирки виден «пунктик» осевшего антигена, при легком встряхивании образуется равномерная взвесь микробов.

За титр антител принимают наибольшее разведение сыворотки, в котором произошла 50%-ная агглютинация (2 креста), что соответствует количеству международных единиц антител в 1 см 3 сыворотки (МЕ/см 3 ).

Реакцию агглютинации считают положительной:

у овец, коз и северных оленей — при получении 50 МЕ/см 3 н больше;

у крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей — при получении 100 МЕ/см 3 и больше.

За сомнительный результат считают:

у овец, коз и северных оленей ■— 25 МЕ/см 3 ;

у крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей—50 МЕ/см 3 .

Животные, с сыворотками крови которых получена сомнительная РА, подлежат повторному исследованию на бруцеллез через 15—30 сут.

На неблагополучных по бруцеллезу фермах положительно реагирующими считают животных, при исследовании которых получена дважды сомнительная РА.

2.2.4.3. Результаты РСК и РДСК учитывают визуально через 4—6 ч после окончания постановки или на следующий день при условии хранения штативов с реакцией при температуре 4—8°С. Реакцию оценивают в крестах по следующей схеме:

+ + + + — отсутствие гемолиза, надосадочная жидкость прозрачна и бесцветна;

— полный лизис, осадка эритроцитов не видно, жидкость интенсивно окрашена гемоглобином.

Реакцию связывания комплемента и реакцию длительного связывания комплемента считают положительной при задержке гемолиза на 2—4 креста в одном или нескольких разведениях сыворотки (1:5 и выше) и полном гемолизе эритроцитов в контроле (без антигена).

Задержку гемолиза в один крест считают за сомнительный результат и животных через 15—30 сут исследуют повторно. При этом животных, с сывороткой крови которых получена дважды сомнительная РСК (РДСК), считают реагирующими положительно.

2.3. Метод аллергического исследования

Сущность метода заключается в выявлении у животных, больных бруцеллезом и инфекционным эпидидимитом, повышенной чувствительности замедленного типа к специфическому антигену (аллергену) .

Аллергический метод применяют для исследования на бруцеллез крупного рогатого скота, свиней и северных оленей, не подвергавшихся иммунизации вакцинами против бруцеллеза, а при инфекционном эпидидимите баранов — через 12 мес после вакцинации.

2.3.1. Аппаратура, реактивы и материалы

Инъектор безыгольный для внутрикожного введения.

Иглы инъекционные по ГОСТ 25377.

Шприцы вместимостью 2 и 5 см 3 по ГОСТ 22967.

Спирт этиловый, 96%-ный по ГОСТ 5962.

Аллерген бруцеллезный — бруцеллин ВИЭВ, стандартизованный по референтному аллергену.

Аллерген для диагностики инфекционного эпидидимита баранов — бруцелловин.

2.3.2. Проведение исследований

Аллергены вводят животным с соблюдением правил асептики подкожно несколько ниже края века со стороны наружного угла глаза (пальцебральная проба), овцам и козам по 0,5 см 3 , а крупному рогатому скоту 1 см 3 или внутрикожно в середину подхвостовой складки по 0,2—0,3 см 3 (внутрикожная проба).

Свиньям бруцеллезный аллерген вводят с наружной стороны ушной раковины, ближе к основанию уха внутрикожно по 0,2 см л . Правильность внутрикожной инъекции препарата контролируют по образованию бугорка размером с горошину.

При внутрикожном введении аллергена целесообразно использовать безыгольный инъектор для внутрикожного введения.

Аллергическую пробу у овец, коз и крупного рогатого скота учитывают один раз через 48 ч после введения аллергена. У свиней реакцию учитывают два раза — через 24 и 48 ч после введения аллергена.

Аллергическую пробу считают положительной, если на месте инъекции аллергена возникает воспалительный (плотный или тес-товатый) отек, видимый при осмотре или определяемый при пальпации места введения препарата.

У здоровых и невакцинированных против бруцеллеза животных при учете реакции на аллерген в указанные сроки на месте его введения никаких изменений не отмечается.

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Главным управлением ветеринарии при Госкомиссии Совмина СССР по продовольствию и закупкам

К. В. Шумилов, У. Э. Ниязов, А. И. Климанов

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 27.12.91 J* 2240

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

источник