Возбудитель дифтерии относится к роду Corynebacterium (от лат. coryna — булава, diphthera — пленка). Бактерии имеют булавовидные утолщения на концах. К этому роду относятся патогенные для человека дифтерийные палочки и непатогенные виды — ложнодифтерийные палочки и дифтероиды, обнаруживаемые на слизистых оболочках и кожных покровах.
Возбудители дифтерии — Corynebacterium diphtheriae — были обнаружены Т. Клебсом (1883) и выделены в чистом виде Ф. Леффлером (1884).
Морфология. Возбудители дифтерии слегка изогнутые, тонкие палочки, размером 3-6 × 0,3-0,5 мкм, на концах которых имеются утолщения. В этих утолщениях имеются зерна волютина (зерна Бабеша — Эрнста). Бактерии дифтерии неподвижны, не имеют спор и капсул. Грамположительны. Они хорошо окрашиваются основными анилиновыми красителями, при этом волютиновые зерна окрашиваются интенсивнее. Для окраски обычно применяют щелочной метиленовый синий или кристаллический фиолетовый. Особенностью коринебактерий дифтерии является их полиморфность; в одной кулатуре встречаются различные по форме и размерам палочки: изогнутые, прямые, длинные, короткие, толстые, иногда коккобактерии. Характерно расположение бактерий в мазках — они обычно располагаются попарно под острым или тупым углом, в виде растопыренных пальцев и т. д. Расположение в мазках и наличие зерен волютина является дифференциально-диагностическим признаком при микроскопическом исследовании. Непатогенные представители рода коринебактерий — ложнодифтерийные палочки и дифтериоды чаще располагаются в виде частокола, зерна волютина у них могут отсутствовать либо быть на одном конце (см. рис. 4).
Культивирование. Коринебактерий дифтерии — факультативные анаэробы. Растут при температуре 35-37° С, рН среды 7,4-7,8. Они не размножаются на обычных питательных средах. Культивируют их на средах, содержащих кровь или сыворотку.
В конце XIX века французский ученый Э. Ру для культивирования бактерий дифтерии предложил использовать свернутую бычью или лошадиную сыворотку, а Ф. Леффлер рекомендовал добавлять к ней бульон (25%) и 1% глюкозу. На этих средах коринебактерий растут быстро, в течение 14-18 ч образуют несливающиеся выпуклые колонии кремового цвета (рост на скошенной среде напоминает шагреневую кожу). Однако отдифференцировать на этих средах дифтерийные палочки от ложнодифтерийных невозможно.
В настоящее время основными средами для выращивания являются среда Клауберга (содержащая сыворотку крови и теллурит калия), хинозольная среда Бунина, среда Тинсдаля и др. На основании культуральных и ферментативных свойств коринебактерий дифтерии делят на три биовара: гравис (gravis), ми тис (mitis), интермедиус (intermedins). Биовар гравис обычно находится в R-форме. На среде Клауберга бактерии этого биовара растут в виде крупных колоний 2-3 мм, серовато-черного цвета (так как восстанавливают теллурит в теллур), имеют изрезанные края, что придает им вид розетки. При прикосновении к колонии петлей она как бы рассыпается. На бульоне бактерии этого биовара образуют крошащуюся пленку и зернистый осадок.
Коринебактерии биовара митис (mitis) на среде Клауберга растут в виде небольших, гладких колоний (S-форма) черного цвета. На бульоне они дают равномерное помутнение.
Коринебактерии биовара интермедиус (intermedins) являются промежуточными. На среде Клауберга бактерии этого биовара чаще растут в виде блестящих, мелких, черных колоний (этот биовар встречается редко).
Ферментативные свойства. Все три биовара дифтерийных бактерий обладают ферментом цистиназой, расщепляющим цистин с образованием сероводорода. Эти свойства используются для дифференциации возбудителей дифтерии от непатогенных представителей этого рода (табл. 49).
Таблица 49. Свойства возбудителей дифтерии и близких к ним коринебактерий
Примечание. + положительная реакция (расщепляет); — отрицательная реакция (не расщепляет).
Возбудители всех трех биоваров расщепляют глюкозу и мальтозу до образования кислоты. С. gravis расщепляют крахмал. Это свойство отличает его от двух других биоваров. Коринебактерий дифтерии восстанавливают нитраты в нитриты, не образуют индол, не разлагают мочевину.
Коринебактерии дифтерии образуют нейраминидазу, гиалуронидазу и другие ферменты патогенности.
Токсинообразование. Вирулентные штаммы возбудителей дифтерии продуцируют экзотоксин. Химически он представляет собой термолабильный белок, состоящий из Двух фракций. Фракция В фиксирует токсин на чувствительных к нему тканях организма. Фракция А ответственна за токсическое действие. Силу токсина дифтерийных культур можно устанавливать «in vivo» на чувствительных к этому токсину морских свинках. Dim дифтерийного экзотоксина — минимальная смертельная доза, это минимальное количество яда, убивающее морскую свинку массой 250 г на 4-й день.
Наличие экзотоксина можно обнаружить также «in vitro» — на плотной питательной среде. Этот метод широко используется в практической работе. Дифтерийный экзотоксин малоустойчив. Он быстро разрушается под влиянием температуры, света и кислорода воздуха. После добавления к токсину формалина (0,3-0,4%) и выдерживания его при температуре 37-38° С в течение нескольких недель он переходит в анатоксин, который теряет ядовитость, но сохраняет антигенные свойства токсина. Токсины, образуемые различными штаммами, не различаются между собой и могут быть нейтрализованы дифтерийным антитоксином * .
* ( В настоящее время установлено, что все биовары коринебактерий могут быть токсигенными и нетоксигенными.)
Антигенная структура. У бактерий дифтерии имеется поверхностный термолабильный белковый антиген и типоспецифический полисахаридный О-антиген. Кроме этого, среди коринебактерий различают 19 фаговаров, которые учитываются при идентификации культур. С помощью фаговаров выявляют источник заболевания.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Возбудители дифтериии сравнительно устойчивы. Температура 60° С убивает их через 10-15 мин, 100° С — через минуту. В пленке они выдерживают нагревание до 90° С. На свернутой сыворотке при комнатной температуре сохраняются до 2 мес, на детских игрушках — несколько суток. Низкие температуры коринебактерий переносят хорошо. К высушиванию возбудители дифтерии довольно устойчивы. Дезинфицирующие вещества (3% раствор фенола, 1% раствор сулемы, 10% раствор перекиси водорода) убивают эти бактерии в течение нескольких минут.
Восприимчивость животных. В естественных условиях животные дифтерией не болеют. Из экспериментальных животных наиболее восприимчивы морские свинки и кролики. При внутрикожном или подкожном заражении у них развивается картина токсикоинфекции с образованием на месте введения воспаления, отека, некроза. В надпочечниках наблюдаются кровоизлияния.
Источники заболевания. Больные люди и бактерионосители.
Пути передачи. Воздушно-капельный путь, контактно-бытовой (через посуду, игрушки, книги, полотенца и т. д.).
Заболевание у человека: 1) дифтерия зева; 2) дифтерия носа.
Реже возникает дифтерия трахеи, бронхов, глаз, уха, влагалища и дифтерия поврежденной кожи.
Патогенез. Входными воротами являются слизистые оболочки дыхательных путей и поврежденная кожа. Попав на слизистую оболочку, возбудители дифтерии размножаются в месте внедрения и вызывают некроз ткани. Образуется пленка, тесно связанная с подлежащими тканями. На поверхности слизистой появляются грязно-серые или желтоватые налеты, состоящие из разрушенного эпителия, фибрина, лейкоцитов и коринебактерий дифтерии. При снятии пленки ватным тампоном или шпателем поверхность слизистой может кровоточить.
В процессе размножения коринебактерий дифтерии в некротических участках накапливается экзотоксин, который может привести к отеку слизистой оболочки и клетчатки. Со слизистой оболочки отек может распространяться на гортань, бронхи и вызвать явления асфиксии. Токсин, циркулирующий в крови, избирательно поражает сердечную мышцу, надпочечники и клетки нервной ткани.
Дифтерия — это токсикоинфекция. Тяжесть процесса зависит от степени токсигенности штамма и от защитных сил организма.
Иммунитет. Невосприимчивость обусловливается антитоксическим и антибактериальным иммунитетом. Грудные дети не болеют, так как у них имеется пассивный иммунитет, переданный от матери.
О наличии антитоксического иммунитета судят по реакции Шика. Для постановки реакции 1 /40 Dlm (летальной дозы токсина для морской свинки), содержащегося в 0,2 мл изотонического раствора натрия хлорида, вводят внутрикожно в области предплечья. При отсутствии в крови антитоксина в месте введения через 24-48 ч появляется краснота и припухлость (до 2 см в диаметре). При наличии антитоксина припухлости и красноты нет (имеющийся в крови антитоксин нейтрализовал введенный токсин).
Перенесенное заболевание оставляет иммунитет. Однако в 6-7% случаев наблюдаются повторные заболевания.
Профилактика. Ранняя диагностика. Изоляция. Дезинфекция. Выявление носителей токсигенной дифтерийной палочки.
Специфическая профилактика осуществляется введением анатоксина. В СССР проводят обязательную вакцинацию детей вакциной АКДС — это комплексная вакцина, в которую входят дифтерийный и столбнячный анатоксин и взвесь убитых коклюшных палочек. Вакцинируют детей с 5-6 месяцев с последующей ревакцинацией. Для ревакцинации вводят вакцину без коклюшных палочек.
Специфическое лечение. Применяют противодифтерийную антитоксическую сыворотку. Доза и кратность определяется лечащим врачом, вводят также антимикробные препараты.
1. Какова морфология коринебактерий дифтерии и какие имеются биовары?
2. На каких средах выращивают бактерии дифтерии и каков характер роста?
3. Отношение к какому углеводу позволяет отличить биовар gravis от других биоваров дифтерии?
4. Каков путь передачи и где чаще локализуется возбудитель дифтерии у больного?
5. Каковы специфическая профилактика и специфическое лечение дифтерии?
Цель исследования: выделение возбудителя для постановки диагноза. Выявление бактерионосителей дифтерии по эпидемиологическим показаниям. Выявление экзотоксина у выделенной культуры.
1. Отделяемое слизистой оболочки зева.
2. Отделяемое слизистой оболочки носа.
3. Отделяемое слизистой оболочки глаза.
5. Отделяемое слизистой оболочки влагалища.
Материал для исследования зависит от локализации процесса.
Способы сбора материала
При любой локализации процесса обязательно исследует слизистую зева и носа. Материал собирают ватным тампоном, для чего используют металлическую проволоку, желательно алюминиевую, на один конец которой плотно накручивают вату, затем тампон монтируют в корковую пробку, помещают в пробирку и стерилизуют в печи Пастера при температуре 160° С 1 тампон течение часа или в автоклаве при температуре 112° С.
Примечания. 1. Материал собирают натощак либо не раньше чем через 2 ч после еды и не ранее чем через 4 дня после лечения антибиотиками или другими антибактериальными средствами. 2. Если материал берут из зева и носа, то пробирки с обоими тампонами надписывают и связывают вместе. Посевы делают раздельно и исследование материала из каждого тампона ведут как самостоятельную работу. 3 Материал, собранный сухим тампоном, должен быть посеян не позднее чем через 2-3 ч после забора. При необходимости транспортировки собранного материала тампон предварительно смачивают 5% раствором глицерина в изотоническом растворе натрия хлорида.
Первый день исследования
Чашки вынимают из термостата и просматривают. Рост бактерий на среде Клауберга может быть замедлен из-за наличия ингибиторов в среде. В этом случае чашки ставят в термостат еще на 24 ч.
Чашки вынимают из термостата, просматривают их с помощью лупы или стереоскопического микроскопа. При наличии подозрительных колоний часть их под контролем стереоскопического микроскопа выделяют на агар с 25% сывороткой и на столбик со средой Пизу для определения фермента цистиназы. Из другой части колоний ставят пробу на токсигенность.
При микроскопическом исследовании колоний, снятых со среды Клауберга, коринебактерии дифтерии теряют свою специфичность: отсутствует зернистость, изменяется величина, расположение сохраняется. При посеве их на среды с сывороткой морфологическая специфичность возбудителей дифтерии восстанавливается.
Проба на наличие фермента цистиназы и определение токсигенности являются обязательными при идентификации возбудителей дифтерии. Если результат этих опытов, проведенных с частью колоний со среды Клауберга, недостаточно четкий или отрицательный, то опыт повторяют, используя выделенную чистую культуру.
Проба на цистиназу. Проводят посев исследуемой культуры уколом в центр столбика среды Пизу. При положительной реакции через 18-24 ч по ходу укола наблюдается почернение, а вокруг черного стержня образуется темное облачко; почернение происходит в результате того, что фермент цистиназа расщепляет цистин, входящий в состав среды Пизу, и освободившаяся сера вступает в реакцию с ацетатом свинца — образуется сульфит свинца черного цвета. Дифтероиды и ложнодифтерийные палочки не содержат фермент цистиназу, поэтому при росте их на среде Пизу цвет среды не изменяется.
Определение экзотоксина. Проводят методом диффузной преципитации в геле. Метод основан на взаимодействии токсина с антитоксином. В тех участках агара, где эти компоненты взаимодействуют, образуется преципитат в виде закругленных линий.
Методика определения: в чашки Петри разливают растопленный и охлажденный до 50° С агар Мартена рН 7,8 (на агаре Мартена лучше продуцируется экзотоксин). Количество агара в чашке должно быть не более 12-15 мл, чтобы сохранить прозрачность, — в толстом слое линии преципитации плохо видны. После застывания агара накладывают полоску стерильной фильтровальной бумаги, смоченной противодифтерийной антитоксической сывороткой.
Испытуемую культуру засевают «бляшками». Посев производят петлей. Диаметр бляшек 0,8-1,0 см. Расстояние бляшек от края полосок бумаги 0,5-0,7 см, между двумя бляшками испытуемой культуры засевают бляшки заведомо токсигенного штамма. Испытуемую культуру считают токсигенной, если линии преципитации четки и сливаются с линиями преципитации контрольного (токсигенного) штамма. Если линии преципитации перекрещиваются с линиями контрольного штамма или отсутствуют, выделенную культуру считают нетоксигенной (рис. 50).
Рис. 50. Выявление экзотоксина C.Diphtheriae методом диффузной преципитации в агаре. 1 — бляшки нетоксигенного штамма (линии преципитации перекрещиваются); 2 — бляшки токсигенного штамма (линии преципитации соединяются)
Приготовление полосок бумаги. Из фильтровальной бумаги нарезают полоски размером 1,5×8 см, заворачивают по несколько штук в бумагу и стерилизуют в автоклаве при температуре 120° С в течение 30 мин. Перед постановкой опыта стерильным пинцетом вынимают одну полоску, укладывают ее в стерильную чашку Петри и смачивают противодифтерийной антитоксической сывороткой. Предварительно сыворотку разводят так, чтобы в 1 мл содержалось 500 АЕ (антитоксических единиц). Бумажку смачивают 0,25 мл сыворотки (125 АЕ) и помещают на поверхность среды. Затем делают посевы указанным выше способом. Все посевы ставят в термостат. Учет результатов производят через 18-24 и 48 ч.
Вынимают посевы из термостата, учитывают результат. Делают мазки из культуры, выросшей на среде с сывороткой, и окрашивают их синим Леффлера.
Наличие в мазках характерных по морфологии палочек, черного с облачком стержня в среде Пизу и линий преципитации в агаре позволяет дать предварительный ответ: «Обнаружены коринебактерии дифтерии». Исследование продолжают. При отсутствии линий преципитации в агаре или их недостаточной четкости исследование на токсигенность обязательно повторяют с выделенной чистой культурой.
Для окончательной идентификации выделенной культуры и определения биовара возбудителя производят посев на глюкозу, сахарозу, крахмал и бульон с мочевиной (для выявления фермента уреазы). Посев на среды делают обычным способом.
Проба на уреазу. Выделенную культуру засевают на бульон с мочевиной и индикатором (крезоловый красный) и ставят в термостат. Уже через 30-40 мин можно учитывать результат: при посеве истинных возбудителей дифтерии цвет среды не изменяется, так как они не содержат уреазу. Псевдодифтерийные палочки расщепляют мочевину и изменяют индикатор — среда приобретает малиново-красный цвет.
Производят учет результатов (табл. 50).
Таблица 50. Ферментативные свойства выделенных возбудителей
1. Какой материал исследуют для выявления возбудителя дифтерии?
2. Как собирают материал для исследования на дифтерию из зева и носа?
3. Что нужно сделать с тампоном, если собранный материал необходимо транспортировать?
4. При помощи какого прибора изучают колонии на среде Клауберга?
5. Какие исследования проводят для окончательной идентификации выделенной культуры?
6. Какими методами определяют токсигенность коринебактерий дифтерии?
1. Возьмите у преподавателя проволоку и вату и приготовьте 10 тампонов, вмонтируйте их в корковую пробку, вставьте в пробирку и простерилизуйте.
Внимание! Перед стерилизацией проверьте, достаточно ли плотно накручен тампон.
2. Возьмите у преподавателя стерильные тампоны и произведите забор материала друг у друга из зева и носа (разными тампонами).
3. Изучите по табл. 49 свойства возбудителей дифтерии и близких к ним коринебактерий.
4. Поставьте пробу на токсигенность. Бляшки сделайте петлей без культуры.
5. Зарисуйте ход исследования и положительный и отрицательный результат пробы на токсигенность.
Теллуровая среда Клауберга: первая смесь — предварительно за 1,5 мес готовят смесь из 20 мл бараньей или лошадиной крови и 10 мл глицерина. В день приготовления среды готовят две другие смеси; вторая смесь — 50 мл МПА рН 7,5 растапливают и охлаждают до температуры 50° С, после чего прибавляют 2,5 мл первой смеси; третья смесь — смешивают 17 мл бараньей крови и 33 мл дистиллированной воды (смесь приготавливают стерильно), подогревают на водяной бане до температуры 50° С. Соединяют вторую и третью смеси, прибавляют 4 мл 1% раствора теллурита калия К2ТеО3, быстро все перемешивают и разливают в чашки. Среда прозрачная, имеет цвет красного вина.
Среда Пизу. К 90 мл расплавленного 2% МПА (рН 7,6) добавляют 2 мл раствора цистина (1% раствор цистина в 0,1 н. растворе гидроксида натрия), тщательно перемешивают и добавляют такой же объем 0,1 н. раствора серной кислоты. Среду стерилизуют 30 мин при температуре 112° С. К расплавленной и охлажденной до 50° С среде добавляют 1 мл 10% раствора ацетата свинца, стерилизованного двукратно текучим паром, перемешивают и добавляют 9 мл нормальной лошадиной сыворотки. Среду стерильно разливают в маленькие пробирки по 2 мл. Посев производят уколом.
Среда Бунина. Сухую хинозольную среду добавляют к 100 мл холодной воды (рН 7,6-7,8), размешивают и нагревают на слабом огне до расплавления агара (по прописи на этикетке). Затем среду кипятят 2-3 мин до образования пены, после чего среду остужают до 50° С и добавляют 5-10 мл стерильной дефибринированной крови. Среду перемешивают и разливают в чашки Петри. Готовую среду можно сохранять 3-4 дня при температуре 4-10°.
Среда Тинсдаля. К 100 мл 2% питательного агара, расплавленного и охлажденного до 50° С, добавляют: 1) 12 мл 1% раствора цистина на 0,1 н. растворе серной кислоты; 2) 12 мл 1% раствора гидроксида натрия; 3) 1,8 мл 2% раствора теллурита калия; 4) 1,8 мл 2,5% раствора гипосульфита натрия, 20 мл нормальной лошадиной или бычьей сыворотки. После добавления каждого ингредиента среду тщательно перемешивают. Чашки со средой хранят 3-4 дня при 10° С.
источник
Дифтерия — острая инфекционная болезнь, вызываемая токсигенными коринебактериями дифтерии. Передается воздушно-капельным путем, характеризуется местным фиброзным воспалением преимущественно слизистых оболочек рта и носоглотки, явлениями общей интоксикации и поражением сердечно-сосудистой, нервной и выделительной систем. Повреждающее действие на органы и ткани обусловлено токсином, выделяемым возбудителем в месте его локализации.
Возбудитель дифтерии относится к виду Согуnebacterium diphtheriae рода Согуnebacterium, семейству Actinomyceae.
Морфология. Отличительной особенностью С. diphtheriae является полиморфизм, проявляющийся в многообразии форм клеток. В культуре одного и того же штамма наряду с типичными длинными изогнутыми палочками можно обнаружить короткие, толстые, со вздутиями на концах, придающими им сходство с булавой. Размеры варьируют от 1 до 6 мкм по длине и от 0,3 до 0,8 мкм в диаметре. Для дифтерийных бактерий характерно неравномерное окрашивание клеток благодаря наличию в них зерен волютина, которые воспринимают любой анилиновый краситель интенсивнее, чем протоплазма, вследствие чего при окраске по Леффлеру или Нейссеру выявляются в виде гранул соответственно темно-синего или сине-черного цвета. Эти гранулы располагаются чаще всего в булавовидных утолщениях на обеих концах коринебактерий.
Возбудители дифтерии в мазках часто располагаются попарно, под острым углом один к другому, что объясняется своеобразным типом деления клеток путем излома («щелкающий тип» деления), в отличие от непатогенных коринебактерий, для которых характерно параллельное расположение в мазке.
Не образуют спор, капсул, жгутиков.
Культуральные свойства. Возбудитель дифтерии — аэроб или факультативный анаэроб, оптимальная температура роста — 37 0 С;
гетеротроф, то есть относится к группе бактерий, требующих для своего роста органические вещества. Используемые для выращивания среды должны содержать в качестве источника углерода и азота аминокислоты — аланин, цистин, метионин и др. В связи с этим селективными средами для культивирования являются те, которые содержат животный белок: кровь, сыворотку, асцитическую жидкость. На основании этого и была создана классическая среда Леффлера, а затем среды Клауберга и Тиндаля.
По культуральным и биологическим свойствам коринебактерий дифтерии подразделяются на три биовара: gravis, mitis, intermedius, которые отличаются рядом признаков. Наиболее четко дифференциацию типов можно провести по форме колоний при выращивании культуры на кровяном агаре с добавлением теллурита.
Колонии типа gravis через 48—72 часа достигают в диаметре 1—2 мм, имеют волнистые края, радиальную исчерченность и плоский центр (R-форма) черного или серого цвета. При росте на бульоне культуры типа gravis образуют на поверхности крошащуюся пленку. На средах Гисса с добавлением сыворотки они расщепляют полисахариды — крахмал, декстрин, гликоген с образованием кислоты. Токсигенные штаммы коринебактерий дифтерии относятся к этому биовару.
Культуры типа mitis на кровяном агаре с теллуритом вырастают в крупные, слегка выпуклые, с ровным краем, черные матовые колонии (S-форма). При росте на бульоне дают равномерную муть и осадок. Крахмал, декстрин и гликоген не расщепляют. Культуры этого типа, как правило, менее токсигенны и инвазионны, чем коринебактерий биовара gravis.
Коринебактерий биовара intermedius занимают промежуточное положение. Колонии, выращенные на теллуритовом агаре, мелкие (RS-форма), черного цвета, не ферментируют крахмал и гликоген, в бульоне растут с появлением мути и зернистого осадка.
Антигенная структура. Коринебактерий дифтерии характеризуются сложной антигенной структурой и многообразием серологических свойств. В реакции агглютинации выявляются белковые термолабильные R-антигены токсиноспецифической природы, локализованные в поверхностном слое клеточной стенки, O-антиген — типоспецифический.
Среди коринебактерий дифтерии имеется 19 фаготипов, с помощью которых выявляют источники инфекции; учитываются они и при идентификации выделенных культур.
Серологические свойства лучше всего изучены у штаммов варианта gravis. Его токсигенные штаммы подразделены на пять — девять сероваров. Распределение последних на различных территориях не является одинаковым, на одной и той же территории может циркулировать несколько сероваров, но среди них преобладает какой-нибудь один.
Факторы патогенности. Дифтерийные коринебактерий продуцируют в бульонных культурах сильные экзотоксины (гистотоксин, дермонекротоксин, гемолизин). Токсиногенез коринебактерий дифтерии детерминируется геном, содержащимся в профаге, следовательно, основное средство агрессии — токсинообразование, не связано с хромосомой бактерий. Особенность токсинообразования дифтерийной палочки определяется наличием ее в ДНК специфического профага, содержащего структурный ген токсичности, который обозначается как ТОХ*. Таким образом, не инфицированная специфическим фагом дифтерийная палочка не способна к токсинообразованию. При ее инфицировании профагом происходит присоединение ТОX + к ДНК микробной клетки. В связи с тем, что дифтерийная палочка способна контролировать профаг, эффект лизогении реализуется лишь при физиологическом старении или ингибиции основных процессов жизнедеятельности микробной клетки, когда профаг выходит из-под контроля и обеспечивает выраженную фаговую репродукцию.
В основе токсического действия дифтерийного токсина лежит способность подавлять биосинтез клеточного белка, что рассматривается как основная причина гибели клеток и смерти организма от дифтерийной инфекции. Дифтерийный токсин относится к сильнодействующим бактериальным токсинам и уступает только ботулиническому и столбнячному. Молекула токсина состоит из двух фрагментов, один из которых термостабилен и обладает ферментативной активностью, второй — термолабилен и выполняет протективную функцию. После добавления к токсину 0,3—0,4 %-ного раствора формалина и последующего выдерживания при 38°С в течение трех-четырех недель происходит превращение его в анатоксин, используемый для приготовления профилактического препарата.
В процессе жизнедеятельности дифтерийные бактерии продуцируют, кроме токсина, нейраминидазу, гиалуронидазу, некро-тизирующий и диффузионный факторы.
Резистентность. Дифтерийные бактерии обладают значительной устойчивостью к воздействию факторов окружающей среды В дифтерийной пленке, капельках среды, прилипших к стенке стакана, на ручках дверей, детских игрушках они могут сохрa-
няться до 15 дней, в воде и молоке — до 20. Выживаемость на предметах окружающей среды в осенне-весенний период достигает 5,5 месяца и не сопровождается утратой или ослаблением их патогенных свойств. К числу неблагоприятных факторов относятся прямые солнечные лучи, высокая температура, химические агенты. При кипячении и в алкоголе дифтерийные бактерии погибают в течение 1 минуты, в 10 %-ном растворе перекиси водорода — через три.
Эпидемиология. Источником дифтерии является человек, у которого она проявляется в разных клинических формах — от тяжелых токсических до стертых форм и здорового бактерионосительства.
Эпидемиологическое значение и роль источника инфекции в реализации механизма заражения определяется главным образом интенсивностью передачи инфекционного начала (возбудителя). Естественно, чем больше обсемененность слизистых оболочек верхних дыхательных путей, тем вероятнее возможность выброса возбудителя в массовых дозах в окружающую среду при разговоре, кашле, чихании. Наиболее опасны в этом отношении больные дифтерией и бактерионосители. Плотность заселения слизистых оболочек коринебактериями дифтерии резко возрастает у людей с воспалительными заболеваниями верхних дыхательных путей, ангинами, туберкулезом. Распространенность бактерионосительства коринебактерий дифтерии варьирует от 0 до 60 %, что свидетельствует о влиянии состояния организма на процесс носительства.
Патогенез. Наибольшую заболеваемость дифтерией отмечают осенью, что объясняется увеличением скученности населения в это время года и снижением сопротивляемости организма под влиянием охлаждения.
Восприимчивость к дифтерийной инфекции, развитие болезни обусловлены рядом факторов, основными из которых надо считать иммунологическое состояние организма, возраст, резистентность тканей в месте внедрения возбудителя, состояние нервной системы и общей реактивности.
Реакция организма на внедрение бактерий бывает местной и общей, степень и характер ее зависят в основном от защитных сил организма. Местная реакция проявляется в точке внедрения микроба. Прежде чем начинает действовать токсин, возбудитель должен пройти стадию приживления и размножения на слизистой оболочке рото- и носоглотки или коже. Попав на благоприятную почву, возбудитель размножается, вырабатывает экзотоксин, который фиксируется на клеточных мембранах, а затем проникает в глубь тканей и оказывает воздействие на нервные окончания, заложенные в стенках сосудов, что приводит к застойной гиперемии и формированию экссудата.
На месте внедрения возбудителя дифтерии (зев, нос, трахея, конъюнктива глаза, кожа, вульва влагалища, раневая поверхность) образуются пленки с большим количеством дифтерийных коринебактерий и других микробов. Продуцируемый экзотоксин вызывает некроз и воспаление слизистых оболочек и кожи. Всасываясь, он поражает нервные клетки, сердечную мышцу, паренхиматозные органы, обусловливает явления общей тяжелой интоксикации. Глубокие изменения происходят в сердечной мышце, сосудах, надпочечниках, а также в центральной и периферической нервной системе.
Клиника. Инкубационный период при дифтерии продолжается два—десять дней, заболевание развивается остро. По локализации процесса наиболее часто наблюдается дифтерия зева, дыхательных путей (дифтерийный круп), носа. Сравнительно редко встречается дифтерия глаз, ушей, половых органов, кожи. На дифтерию зева приходится более 90 % всех заболеваний, второе место занимает дифтерия носа.
Заболевание начинается повышением температуры с симптомами общего недомогания. Сразу же появляется кашель — вначале сухой, грубый «лающий», он затем теряет звучность, становится хриплым. На гортани появляются дифтерийные пленки, она отекает, сужается.
Затем развивается стенотическая стадия: шум при дыхании свистящего характера, напоминает звук пилы в сыром дереве; он настолько сильный, что слышен в соседней комнате. Дыхание сопровождается втягиванием уступчивых мест грудной клетки, напряжением вспомогательной дыхательной мускулатуры.
Третья стадия — асфиксическая — длится от нескольких минут до десятков часов и характеризуется такими симптомами как выраженное беспокойство, изменение цвета кожи. Она покрывается потом, губы, лицо, конечности синеют. Появляется парадоксальный пульс, возникают судороги, наступает смерть.
Иммунитет при дифтерии носит антитоксический и антибактериальный характер, при этом антитоксический иммунитет играет определяющую роль в противоинфекционной защите.
Лабораторная диагностика. Бактериологический метод основан на выделении чистой культуры и идентификации возбудителей по культурально-морфологическим, биохимическим и токсическим свойствам. Объектом для исследования служит отделяемое зева, носа, глаз, кожи и прочее, которое берут ватным тампоном и высевают на среду Клауберга или кровяной теллуритовый агар. Перечисленные среды содержат 0,04 % теллурита калия, который подавляет рост сопутствующей микрофлоры (стафилококки, стрептококки). Через 24—48 часов культивирования производят микроскопию мазков и дают предварительный ответ.
Дифтерийные коринебактерии не всегда бывают морфологически типичными, в ряде случаев возбудитель принимает форму коротких палочек, расположенных не под углом, а беспорядочно, со слабовыраженной зернистостью. Кроме того, образование гранул волютина происходит не всегда и, следовательно, этот признак не является абсолютным. Наиболее достоверный метод — токсинообразование. Дифференциацию токсигенных и нетоксигенных штаммов производят по методу Оухтерлони (метод двойной иммунодиффузии в чашках Петри или метод преципитации в агаре). Он основан на способности дифтерийного экзотоксина вступать в соединение с антитоксином и образовывать преципитаты в виде стрел — усиков.
Серологические реакции применяют для изучения коллективного иммунитета. Они включают: РПГА, отличающуюся высокой чувствительностью, проводимую с антительным диагностикумом;
реакцию Шика, проводимую для определения индивидуальной невосприимчивости к дифтерийному токсину; реакцию нейтрализации цитотоксического действия дифтерийного токсина в культуре ткани; РИА; иммуноферментный анализ (ИФА).
Лечение. Главным в лечении всех форм дифтерии является нейтрализация дифтерийного токсина антитоксической противодифтерийной сывороткой «Диаферм». При средней тяжести заболевания вводится 5000—15 000 МЕ, при тяжелых формах — 30 000—50 000 МЕ. Для лечения носителей назначают антибиотики.
Профилактика включает раннюю диагностику, немедленную госпитализацию, полноценную дезинфекцию помещения и предметов, выявление носителей.
Специфическая профилактика против дифтерии заключается в активной иммунизации детей с пятимесячного возраста методом первичной двукратной вакцинации и отдаленной однократной ревакцинации коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной (АКДС).
Взрослому населению рекомендуется проводить однократные прививки адсорбированным дифтерийным анатоксином (АД-анатоксин).
Дата добавления: 2015-05-07 ; просмотров: 2513 | Нарушение авторских прав
источник
Б) больные при невозможности надлежащего ухода на дому
В) больные из семей, где есть лица, работающие в детских больницах
37. Для лечения скарлатины применяют:
А) пенициллин
Б) эритромицин
38. Инкубационный период при менингите составляет:
39. Инкубационный период при скарлатине составляет:
40. При менингококковом назофарингите для лабораторной диагностики производится забор следующего материала:
а)мазок из носоглотки;
41. При менингококковом сепсисе для лабораторной диагностики производится забор следующего материала:
42. При менингококковом менингите для лабораторной диагностики производится забор следующего материала:
а)мазок из носоглотки;
43. При менингококковом бакрерионосительстве для лабораторной диагностики производится забор следующего материала:
а)мазок из носоглотки;
44. Причиной мелкоточечной сыпи
и скарлатине являются:
а) пептидогликан клеточной стенки;
б) эритрогенный токсин;
г) протеины наружной мембраны
45. Для дифференциации S. pneumonia от S. pyogenes применяют следующие тесты:
а) чувствительность к оптохину;
б) образование инулина;
в) способность образовывать
полисахарид на агаре с 5 %
раствором сахарозы;
Г) чувствительность к желчи.
46. Для S. pyogenes характерны
следующие признаки:
а) отрицательная окраска
по Граму;
б) отсутствие подвижности;
в) имеют шаровидную форму;
г) образование протеиназы;
Е) образование гиалуронидазы
47. Скарлатина представляет собой:
а) острое инфекционное заболевание, характеризующееся ангиной, общей интоксикацией, появлением мелкоточечных высыпаний.
б) острое инфекционное заболевание, характеризующееся ангиной, общей интоксикацией, появлением везикулярных высыпаний
в) острое инфекционное заболевание, характеризующееся поражением ЖКТ, общей интоксикацией, появлением мелкоточечных высыпаний
48.Скарлатина относится к:
А) антропонозным инфекциям
5. Для возбудителя дифтерии характерно:
в) взаиморасположение клеток под углом друг к другу;
Г) наличие зерен валютина.
6. Микроорганизмы рода
Corynebacterium являются:
а) грамположительными
палочками;
б) грамотрицательными
палочками;
в) грамположительными
кокками;
г) грамотрицательными кокками.
7. Основным фактором
патогенности Corynebacterium diphteriae является:
а) экзотоксин;
8. Возбудитель дифтерии
обладает:
б) токсикогенными свойствами;
в) цистиназной активностью;
г) гемолитической активностью;
Д) способностью восстанавливать нитраты в нитриты.
9. При лабораторной
диагностике дифтерии:
а) материал перед исследованием обрабатывают кислотой, для устранения сопутствующей флоры;
б) материал отбирают до начала антибактериальной терапии;
в) материал до посева следует транспортировать и хранить
при температуре 37 °С;
г) материал предварительно
центрифугируют.
10. Для первичного посева
коринебактерий дифтерии
используют:
б) среду Клауберга;
в) среду Левенштейна-
Йенсена;
г) сывороточный агар
с ристомицином;
11. В состав среды Клауберга входят следующие
компоненты:
б) теллурит калия;
13. Для выявления возбудителя дифтерии в мазке можно
использовать окраску:
б) по Нейссеру;
14. Для специфической терапии дифтерии используют:
а) противодифтерийную антитоксическую сыворотку;
б) дифтерийный анатоксин;
15. Для заблаговременной
специфической профилактики дифтерии применяют:
а) вакцину АКДС;
16. Для идентификации C.diphtheria используются
признаки:
Д) верно 2, 3, 5.
17. Токсигенность дифтерии определяют с помощью:
а) реакции преципитации в агаре;
б) реакции нейтрализации антител;
18. Для дифтерийного токсина характерно:
а) его образование кодирует tox + ;
б) токсин состоит из двух
компонентов;
в) оказывает блокирующее
действие на синтез белка;
19. В состав среды Левенштейна-Йенсена входят следующие компоненты:
в) суспензия свежих яиц;
23. Основным методом
лабораторной диагностики
коклюша является:
б) бактериологический;
24. Для Вordetella pertussis характерны следующие признаки:
Д) наличие каталазы.
25. Для Вordetella parapertussis характерны следующие
признаки:
б) рост на простом агаре;
в) образование пигмента;
г) расщепление мочевины;
Д) наличие каталазы.
26. Для Вordetella bronchiseptica характерны следующие
признаки:
а) подвижность;
б) рост на простом агаре;
г) расщепление мочевины;
Д) наличие каталазы.
27. После перенесенного
коклюша формируется:
а) стойкий напряженный
антимикробный иммунитет;
б) непродолжительный
антимикробный иммунитет;
в) стойкий напряженный
антитоксический иммунитет;
г) непродолжительный
антитоксический иммунитет.
28. Специфическими (видовыми) антигенами Вordetella parapertussis являются:
Г) фактор 14.
29. Специфическими (видовыми) антигенами являются Вordetella pertussis:
а) факторы 1-6;
30. Взятие исследуемого материала (слизи из верхних дыхательных путей) при подозрении на коклюш проводится:
а) заднеглоточным тампоном;
б) носоглоточным тампоном;
в) по методу «кашлевых пластинок»;
31. Специфическими (видовыми) антигенами Вordetella bronchiseptica являются:
в) фактор 12;
32. Общими антигенами для всех представителей рода Вordetella являются:
33. В какой из клинических стадий коклюш наиболее заразен:
а) катаральная стадия;
34. Для выделения Вordetella pertussis используют
питательные среды:
а) среду Борде-Жангу;
в) среду Левенштейна-Йенсена;
г) сывороточный агар
с ристомицином;
35. Для заблаговременной
специфической профилактики коклюша применяют:
А) вакцину АКДС;
47. Для заблаговременной
специфической профилактики туберкулеза применяют:
б) вакцину БСЖ;
48. Микобактерии не могут
вызывать у человека:
в) актиномикоз;
49. Для выделения чистой культуры возбудителя
туберкулеза необходимо:
В) 30–45 дней.
50. Основным методом
лабораторной диагностики
туберкулеза является:
б) бактериологический;
51. Туберкулез у человека могут вызывать:
а) М. tuberculosis;
Г) M. africanum.
52. Для представителей рода Mycobacterium характерны
следующие признаки:
а) являются
грамположительными
микроорганизмами;
б) являются
грамотрицательными
микроорганизмами;
в) являются кислотоустойчивыми микроорганизмами;
53. Диагноз туберкулеза можно поставить:
а) на основании выделения
чистой культуры;
б) с помощью серологических
методов;
в) при микроскопии
патологического материала.
54. Микобактерии растут:
а) быстро на любых питательных средах;
б) медленно на любых
питательных средах;
в) быстро на специальных средах для микобактерий;
г) медленно на специальных
средах для микобактерий.
55. Из перечисленных ниже микроорганизмов наименьшей устойчивостью во внешней
среде обладают:
в) менингококки;
Г) гонококки.
56. При лабораторной
диагностике туберкулеза
выполняют следующие
требования:
а) обработка материала перед исследованием кислотой, для устранения сопутствующей флоры;
б) прогревание материала
для устранения сопутствующей флоры;
в) материал до посева следует транспортировать и хранить
при температуре 37 °С;
г) материал предварительно
центрифугируют.
57. Проба Манту используется для:
а) диагностики туберкулеза;
в) отбора лиц, подлежащих
вакцинации вакциной БЦЖ;
г) отбора лиц, подлежащих
вакцинации вакциной АКДС.
58. Для лечения туберкулеза используются:
а) антибиотики
и химиопрепараты;
59. В клинической практике для диагностики проказы
используют:
а) бактериологический метод;
б) бактериоскопический метод;
60. Для выявления возбудителя туберкулеза в мазке мокроты
с помощью светового
микроскопа можно
использовать окраску:
а) по Цилю-Нильсену;
61. Для дифференциации
Mycobacterium tuberculosis
от других микобактерий
применяют:
в) метод микрокультур Прайса;
г) образование ниацина;
д) окраска по Цилю-Нильсену.
62. Укажите верные положения применительно к туберкулиновой пробе:
а) пробу считают положительной при появлении папулы,
превышающей 10 мм;
б) наибольшее распространение нашло внутрикожное введение туберкулина (реакция Манту);
в) повторное введение туберкулина способно вызвать
конверсию отрицательной
пробы в положительную;
г) отрицательный ответ не следует рассматривать как факт,
указывающий на отсутствие
туберкулезного процесса;
источник
1. Лабораторная диагностика дифтерии производится с иелью:
постановки диагноза острого заболевания;
определения вирулентности (токсичности) дифтерийных палочек.
Материал для исследования (чаще всего мазок из носа) берут стерильным ватным тампоном. Не следует брать материал после приема пищи или полоскания дезинфицирующими растворами.
Посев необходимо произвести сразу после взятия материала (не позже 5—6 ч) в пробирку со свернутой кровяной сывороткой и сывороткой Леффлера, а затем поставить в термостат при 37 °С.
Через 18—20 ч роста в положительных случаях на поверхности среды видны многочисленные бисерные, близко расположенные друг к другу колонии. Предварительный диагноз можно дать уже через 8 ч. Материал с тампона можно засеять на чашку с кровяным теллуровым агаром или на среду КлаубергаII.
Колонии, выросшие на чашках через 24—48 ч, изучают микроскопически и отсевают начашки Петри со специальной средойдля определения токсичности. На следующие сутки учитывают результаты посева культур на средах для определения токсичности и биохимических свойств и микроскопируют чистую культуру со свернутой сыворотки. Если выделена разлагающая углеводы нетоксичная культура, необходимо поставить дополнительные пробы на цистиназу и реакцию агглютинации с политиповой дифтерийной сывороткой. Реакцию агглютинации ставят на стекле с помощью монотиповых дифтерийных сывороток.
3. Для идентификации чистой культуры дифтерийной палочки и дифференцировки ее от псевдодифтерийной палочки Гормана
исследуют биохимические свойства выделенной чистой культуры. Исследование проводится насредах Гисса или на водно-сывороточной среде (20%-ной лошадиной сыворотке).
Дифтерийная палочка расщепляет только глюкозу — имееттолько столбик, дифтероиды ферментируют глюкозу и сахарозу — синий цвет будет у всей среды, ложнодифтерийная палочка не расщепляет Сахаров, но разлагает мочевину — вся среда приобретает оранжевый цвет.
На основании реакций ферментации углеводов можно также установить 2 основных биологических типа дифтерийной палочки: гравис имитис.
Формулировка окончательного ответа при положительном анализе: «Выделены токсичные (нетоксичные) дифтерийные палочки», в случае изучения культурально-биохимических признаков указывается принадлежность к типу гравис или митис, а при серотипировании культуры указывается серологический тип.
Лекция №4. Коринебактерии. Бордетеллы.
Возбудитель дифтерии — Corynebacteriumdiphtheriaeи большая группа близких по морфологическим и биохимическим свойствам микроорганизмов рода коринебактерий называюткоринеформными бактериями или дифтероидами.Они представлены грамположительными неподвижными палочками, чаще с утолщениями на концах, напоминающими булаву (coryne- булава). Дифтероиды широко распространены в почве, воздухе, пищевых продуктах (молоке). Среди них можно выделить три экологические группы:
— патогены человека и животных;
Многие виды дифтероидов являются нормальными обитателями кожи, слизистых зева, носоглотки, глаз, дыхательных путей, уретры и половых органов.
Дифтерия — острое инфекционное заболевание преимущественно детского возраста, которое характеризуется интоксикациейорганизмадифтерийным токсиноми характернымфибринозным (дифтеритическим) воспалениемв месте локализации возбудителя (phther- пленка).
Морфологические и тинкториальные свойства.C.diphtheriae- тонкие полиморфные палочки с булавовидными концами, часто содержащие волютиновые включения, выявляемые окраской метиленовым синим или по Нейссеру. При последнем палочки окрашены в желто — соломенный цвет, зерна волютина (полиметафосфата) — в темно — коричневый цвет. В культурах палочки находятся под углом друг к другу (особенности деления) , образуя различные фигуры — растопыренных пальцев,V,Y,Lи т.д. Имеют микрокапсулу, а также фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистых оболочек.
Культуральные свойства.На простых средах коренебактерии дифтерии не растут. Они требуют сред с кровью или сывороткой крови (среды Леффлера, Ру), на которых рост отмечается уже через 10-12 часов, за это время сопутствующая (контаминирующая пробы) микрофлора полностью развиться не успевает.
Наиболее оптимальны теллуритовая среда и теллурит — шоколадный агар Маклеода. Высокие концентрации теллурита калия в этих средах подавляют рост посторонней флоры. Коринебактерии дифтерии восстанавливают теллурит до металлического теллура, что придает их колониям темно — серый или черный цвет.
У этого возбудителя выделяют биотипы — gravis, mitis, intermedius, отличающиеся по морфологии, антигенным и биохимическим свойствам, тяжести заболеваний у человека. Типgravisчаще вызывает вспышки и более тяжелое течение, для него характерны крупные с неровными краями и радиальной исчерченностью колонии в виде маргаритки (R- формы). Типmitisвызывает преимущественно легкие спорадические заболевания, образует на плотных средах мелкие гладкие колонии с ровными краями (S- формы). Типintermediusзанимает промежуточное положение, образует на плотных средах переходные по характеристикамRS- формы, однако еще более мелкие. На жидких средах вызывают помутнение сред, образуют крошковидный осадок.
Биохимические свойства.Коринебактерии дифтерии ферментируют глюкозу, мальтозу. Отсутствие активности в отношениисахарозы и мочевины —важный дифференциальный признак среди дифтероидов. Обладаютцистеназнойактивностью (расщепляют цистеин) — проба Пизу.
Антигенная структура.Выделяют О- и К- антигены. Полисахаридные компоненты О- антигенов клеточной стенки обладают межродовыми свойствами, обусловливая неспецифические перекрестные реакции с микобактериями, актиномицетами (нокардиями).
Поверхностные К- антигены — капсульные белки, обладают видовой специфичностью и иммуногенностью. Выделяют 11 серотипов. Серотипы 1-5 и 7 относятся к биовару gravis. Серотипирование культур проводят в РА с диагностическими сыворотками к соответствующим сероварам и полигрупповой агглютинирующей сывороткой.
В серологической диагностике у людей чаще применяют РПГА, более чувствительную, чем РА. В настоящее время применяют также ИФА. Многие штаммы коринебактерий дифтерии (особенно нетоксигенные) обладают спонтанной агглютинабельностью и полиагглютинабельностью.
Факторы патогенности.Токсигенные штаммы возбудителя дифтерии продуцируют сильныйэкзотоксин(термолабильный высокотоксичный иммуногенный белок). Нетоксигенные штаммы не вызывают заболевания.
Токсин вызывает необратимое блокирование удлинения полипептидной цепи, т.е. любого белкового синтеза. Поражаются в основном определенные системы: симпатико — адреналовая, сердце и кровеносные сосуды, периферические нервы. Отмечаются структурные и функциональные нарушения миокарда, демиелинизация нервных волокон, приводящая к параличам и парезам.
Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы, инфицированные бактериофагом (бета — фагом), несущим ген tox, который кодирует структуру токсина (т.е. несущие гены умеренного профага в своей хромосоме). Фаготипирование применяют для дифференциации штаммов коринебактерий дифтерии.
Эпидемиология.Резервуар — человек (больной, реконвалесцент, бактерионоситель). Основной путь передачи — воздушно — капельный, сезонность — осенне — зимняя. Возбудитель хорошо сохраняется при низких температурах, высушенном состоянии (слюна, слизь, пыль).
Клинико — патогенетические особенности.Возбудитель в месте внедрения вызывает фибринозное воспаление с образованием плотно спаянной с тканями фибринозной пленки. Существенное значение в вызываемой патологии имеет действие экзотоксина (описано в разделе “факторы патогенности” ). По локализации выделяют дифтерию ротоглотки (наиболее часто), дыхательных путей, носа и редкой локализации (глаза, наружные половые органы, кожа, раневая поверхность). Дифтерия зева может быть причиной крупа и асфиксии.
Лабораторная диагностика.Основной метод диагностики — бактериологический. Применяют для выявления больных, бактерионосителей, контактных. Стерильными тампонами берут материал для микроскопии и посевов — слизь из зева и носа, пленки с миндалин и других мест, подозрительных на наличие дифтеритических поражений.
Возбудитель выделяют посевом на элективные теллуритовые среды и кровяной агар. На слизистой оболочке глаза часто выявляют C.xerosis(возможная причина хронических конъюнктивитов), в носоглотке -C.pseudodiphtheriticum(палочка Хофманна), выявляют и другие дифтероиды.
Для дифференциации возбудителя дифтерии от дифтероидов используют такие показатели, как способность восстанавливать теллурит и образовывать темные колонии, пробу Пизу, ферментацию углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза) и мочевины, способность расти в анаэробных условиях (характерно для возбудителя дифтерии).
Обязательным этапом является определение токсигенности культуры. Наиболее распространенные методы — биопробы на морских свинках, реакция преципитации в агаре. Используют также ИФА с антитоксином, генетические зонды и ПЦР для выявления фрагмента А гена tox.
Лечение.Используют антитоксическую противодифтерийную сыворотку, антибиотики и сульфаниламидные препараты.
Постинфекционный иммунитет— стойкий, преимущественно антитоксический. Для количественного определения уровня антитоксического иммунитета ранее применялась проба Шика (внутрикожное введение токсина), сейчас — РПГА с эритроцитарным диагностикумом, получаемым сенсибилизацией эритроцитов дифтерийным анатоксином.
Профилактика.В основе — массовая иммунизация населения. Используют различные препараты, содержащие дифтерийный анатоксин — АКДС, АДС, АДС- М, АД и АД- М.
Лекция №4. Коринебактерии. Бордетеллы.
Возбудитель дифтерии — Corynebacterium diphtheriae и большая группа близких по морфологическим и биохимическим свойствам микроорганизмов рода коринебактерий называют коринеформными бактериями или дифтероидами.Они представлены грамположительными неподвижными палочками, чаще с утолщениями на концах, напоминающими булаву (coryne — булава). Дифтероиды широко распространены в почве, воздухе, пищевых продуктах (молоке). Среди них можно выделить три экологические группы:
— патогены человека и животных;
Многие виды дифтероидов являются нормальными обитателями кожи, слизистых зева, носоглотки, глаз, дыхательных путей, уретры и половых органов.
Дифтерия — острое инфекционное заболевание преимущественно детского возраста, которое характеризуется интоксикациейорганизмадифтерийным токсиноми характернымфибринозным (дифтеритическим) воспалениемв месте локализации возбудителя (phther — пленка).
Морфологические и тинкториальные свойства.C.diphtheriae — тонкие полиморфные палочки с булавовидными концами, часто содержащие волютиновые включения, выявляемые окраской метиленовым синим или по Нейссеру. При последнем палочки окрашены в желто — соломенный цвет, зерна волютина (полиметафосфата) — в темно — коричневый цвет. В культурах палочки находятся под углом друг к другу (особенности деления) , образуя различные фигуры — растопыренных пальцев, V, Y, L и т.д. Имеют микрокапсулу, а также фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистых оболочек.
Культуральные свойства.На простых средах коренебактерии дифтерии не растут. Они требуют сред с кровью или сывороткой крови (среды Леффлера, Ру), на которых рост отмечается уже через 10-12 часов, за это время сопутствующая (контаминирующая пробы) микрофлора полностью развиться не успевает.
Наиболее оптимальны теллуритовая среда и теллурит — шоколадный агар Маклеода. Высокие концентрации теллурита калия в этих средах подавляют рост посторонней флоры. Коринебактерии дифтерии восстанавливают теллурит до металлического теллура, что придает их колониям темно — серый или черный цвет.
У этого возбудителя выделяют биотипы — gravis, mitis, intermedius, отличающиеся по морфологии, антигенным и биохимическим свойствам, тяжести заболеваний у человека. Тип gravis чаще вызывает вспышки и более тяжелое течение, для него характерны крупные с неровными краями и радиальной исчерченностью колонии в виде маргаритки (R- формы). Тип mitis вызывает преимущественно легкие спорадические заболевания, образует на плотных средах мелкие гладкие колонии с ровными краями (S- формы). Тип intermedius занимает промежуточное положение, образует на плотных средах переходные по характеристикам RS- формы, однако еще более мелкие. На жидких средах вызывают помутнение сред, образуют крошковидный осадок.
Биохимические свойства.Коринебактерии дифтерии ферментируют глюкозу, мальтозу. Отсутствие активности в отношениисахарозы и мочевины —важный дифференциальный признак среди дифтероидов. Обладаютцистеназнойактивностью (расщепляют цистеин) — проба Пизу.
Антигенная структура.Выделяют О- и К- антигены. Полисахаридные компоненты О- антигенов клеточной стенки обладают межродовыми свойствами, обусловливая неспецифические перекрестные реакции с микобактериями, актиномицетами (нокардиями).
Поверхностные К- антигены — капсульные белки, обладают видовой специфичностью и иммуногенностью. Выделяют 11 серотипов. Серотипы 1-5 и 7 относятся к биовару gravis. Серотипирование культур проводят в РА с диагностическими сыворотками к соответствующим сероварам и полигрупповой агглютинирующей сывороткой.
В серологической диагностике у людей чаще применяют РПГА, более чувствительную, чем РА. В настоящее время применяют также ИФА. Многие штаммы коринебактерий дифтерии (особенно нетоксигенные) обладают спонтанной агглютинабельностью и полиагглютинабельностью.
Факторы патогенности.Токсигенные штаммы возбудителя дифтерии продуцируют сильныйэкзотоксин(термолабильный высокотоксичный иммуногенный белок). Нетоксигенные штаммы не вызывают заболевания.
Токсин вызывает необратимое блокирование удлинения полипептидной цепи, т.е. любого белкового синтеза. Поражаются в основном определенные системы: симпатико — адреналовая, сердце и кровеносные сосуды, периферические нервы. Отмечаются структурные и функциональные нарушения миокарда, демиелинизация нервных волокон, приводящая к параличам и парезам.
Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы, инфицированные бактериофагом (бета — фагом), несущим ген tox, который кодирует структуру токсина (т.е. несущие гены умеренного профага в своей хромосоме). Фаготипирование применяют для дифференциации штаммов коринебактерий дифтерии.
Эпидемиология.Резервуар — человек (больной, реконвалесцент, бактерионоситель). Основной путь передачи — воздушно — капельный, сезонность — осенне — зимняя. Возбудитель хорошо сохраняется при низких температурах, высушенном состоянии (слюна, слизь, пыль).
Клинико — патогенетические особенности.Возбудитель в месте внедрения вызывает фибринозное воспаление с образованием плотно спаянной с тканями фибринозной пленки. Существенное значение в вызываемой патологии имеет действие экзотоксина (описано в разделе “факторы патогенности” ). По локализации выделяют дифтерию ротоглотки (наиболее часто), дыхательных путей, носа и редкой локализации (глаза, наружные половые органы, кожа, раневая поверхность). Дифтерия зева может быть причиной крупа и асфиксии.
Лабораторная диагностика.Основной метод диагностики — бактериологический. Применяют для выявления больных, бактерионосителей, контактных. Стерильными тампонами берут материал для микроскопии и посевов — слизь из зева и носа, пленки с миндалин и других мест, подозрительных на наличие дифтеритических поражений.
Возбудитель выделяют посевом на элективные теллуритовые среды и кровяной агар. На слизистой оболочке глаза часто выявляют C.xerosis (возможная причина хронических конъюнктивитов), в носоглотке — C.pseudodiphtheriticum (палочка Хофманна), выявляют и другие дифтероиды.
Для дифференциации возбудителя дифтерии от дифтероидов используют такие показатели, как способность восстанавливать теллурит и образовывать темные колонии, пробу Пизу, ферментацию углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза) и мочевины, способность расти в анаэробных условиях (характерно для возбудителя дифтерии).
Обязательным этапом является определение токсигенности культуры. Наиболее распространенные методы — биопробы на морских свинках, реакция преципитации в агаре. Используют также ИФА с антитоксином, генетические зонды и ПЦР для выявления фрагмента А гена tox.
Лечение.Используют антитоксическую противодифтерийную сыворотку, антибиотики и сульфаниламидные препараты.
Постинфекционный иммунитет— стойкий, преимущественно антитоксический. Для количественного определения уровня антитоксического иммунитета ранее применялась проба Шика (внутрикожное введение токсина), сейчас — РПГА с эритроцитарным диагностикумом, получаемым сенсибилизацией эритроцитов дифтерийным анатоксином.
Профилактика.В основе — массовая иммунизация населения. Используют различные препараты, содержащие дифтерийный анатоксин — АКДС, АДС, АДС- М, АД и АД- М.
источник