Реакция видаля на брюшной тиф результат

Определение нормальных антител к брюшнотифозному антигену в реакции агглютинации

Для определения нормальных антител берут у здорового человека шприцем кровь из локтевой вены в количестве 2-3 мл и дают ей свернуться. Образовавшийся сгусток отделяют, а сыворотку отсасывают в чистую пробирку и готовят ряд разведений от 1:10 до 1:160 следующим образом: во все пробирки разливают по 1 мл (20 капель) физиологического раствора, затем в 1-ю пробирку этой же пипеткой наливают 1 мл сыворотки, разведённой 1:5, перемешивают с физиологическим раствором, получают разведение 1:20. Также получают разведения 1:40, 1:30 и 1:160.

В отдельную контрольную пробирку и наливают 1 мл физиологического раствора без сыворотки (контроль антигена). Во все пробирки закапывают по 2 капли брюшнотифозного ди-агностикума. Штатив ставят в термостат на 2 часа при 37 °С, а затем оставляют на сутки при комнатной температуре.

При учёте реакции сначала просматривают контрольную пробирку. В ней при лёгком встряхивании наблюдается равномерное помутнение, хлопьев не должно быть. Опытные пробирки просматривают одновременно с контрольной, держа в одной руке и встряхивая. При положительной реакции обнаруживаются хлопья из склеенных бактерий. Учитывают максимальное разведение сыворотки, при котором произошла отчетливая агглютинация (титр сыворотки).

Реакция агглютинации видаля для серодиагностики брюшного тифа

Специфические антитела (агглютинины) обнаруживаются в крови больного со 2-ой недели болезни. Для постановки реакции Видаля берут шприцем кровь из локтевой вены в количестве 2-3 мл и дают ей свернуться. Образовавшийся сгусток отделяют, а сыворотку отсасывают в чистую пробирку и готовят из неё 3 ряда разведений сыворотки больного от 1:100 до 1:800 следующим образом: во все пробирки разливают по 1 мл (20 капель) физиологического раствора; затем этой же пипеткой наливают 1 мл сыворотки, разведенной 1:50 в первую пробирку, перемешивают с физиологическим раствором, таким образом получают разведение 1:100, Из этой пробирки переносят 1 мл сыворотки в следующую пробирку, перемешивают с физиологическим раствором, получают разведение 1:200 также получают разведения 1:400 и 1:800 в каждом из трёх рядов. Реакция агглютинации Видзля ведётся в объеме 1 мл жидкости, поэтому из последней пробирки после смешения жидкости удаляют 1 мл. В отдельную контрольную пробирку наливают 1 мл физиологического раствора без сыворотки. Этот контроль ставится для проверки возможности спонтанной агглютинации антигена (диагностикума) а каждом ряду

В сыворотках больных могут быть как специфические, так и групповые антитела, которые различаются по высоте титра. Специфическая реакция агглютинации идёт обычно до более высокого титра. Реакция считается положительной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1:200. Обычно она наступает в больших разведениях. Если наблюдается групповая агглютинация с двумя или тремя антигенами, то возбудителем болезни считают того микроба, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.

1. реакция положительна, начиная со 2-ой недели заболевания;

2. реакция положительна в 3-х случаях: у больных (инфекционная реакция), у переболевших (анамнестическая) и у вакцинированных (прививочная).

Для дифференциации реакций прибегают к повторной постановке ее через 5-6 дней. У больных отличается резкое нарастание титра антител При прививочной и анамнестической реакциях титр антител не изменится.

Реакцию Видаля можно поставить одновременно с Н- и О-антигенами бактерий брюшного тифа, что помогает дифференцировать инфекционную реакцию от прививочной, так как у привитых обнаруживаются только Н-антитела, О-агглютинин в высоком титре отмечается только в разгар болезни.

Дата добавления: 2016-07-29 ; просмотров: 1044 | Нарушение авторских прав

источник

ВИДАЛЯ РЕАКЦИЯ (F. Widal, франц. инфекционист и интернист, 1862—1929) — диагностическая реакция агглютинации при брюшном тифе и других сальмонеллезах. Предложена в 1896 г. Ф. Видалем. Первоначальная методика В. р. была несложной: один объем испытуемой сыворотки смешивали с девятью объемами бульонной культуры брюшнотифозных бактерий. Результаты учитывали через 2 и 24 часа. При положительной реакции в пробирке с испытуемой сывороткой образовывался осадок и бульон просветлялся. В контрольных пробирках (с сывороткой здорового человека и без сыворотки) бульон оставался равномерно мутным. В дальнейшем методика В. р. была усовершенствована, что дало возможность определять количество агглютининов (титр) в испытуемой сыворотке (титр — максимальное раз-ведение, при к-ром происходит реакция агглютинации). Полученную из крови больного сыворотку можно использовать тотчас или сохранять в рефрижераторе. Постановка реакции заключается в следующем: сыворотку разводят изотоническим раствором хлорида натрия в геометрической прогрессии (1 : 20; 1 : 40; 1 : 80 и т. д. или 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200 и т. д.). В качестве антигенов употребляют стандартные тифо-паратифозные диагностикумы (см.), которые дают более однородные результаты, чем живые культуры. Соответственно антигенной структуре возбудителя брюшного тифа в сыворотке больного могут присутствовать О-, Н-, Vi-агглютинины. Vi-агглютинины появляются в сыворотке больного нерегулярно и в невысоких титрах, в связи с чем В. р. с Vi-антигеном для диагностики не используют. Диагностическое значение имеют О- и Н-агглютинины. Для их обнаружения пользуются соответствующими диагностикумами (Н-диагностикум — культура, убитая формалином, О-диагностикум — культура, убитая спиртом или кипячением). Результаты Н-агглютинации учитывают после 2-часового пребывания в термостате; О-агглютинация учитывается после 2-часового пребывания в термостате и 18—20 часов при комнатной температуре.

В связи с антигенной близостью различных представителей рода сальмонелл нередко могут возникать групповые реакции. Для выявления в сыворотке больного специфических агглютининов к различным видам сальмонелл рекомендуют использовать для постановки В. р. более широкий набор диагностикумов [О-диагностикумы из сальмонелл, принадлежащих к следующим группам: группа А — S. paratyphi А; группа В — S. paratyphi В; группа С — S. potsdam; группа D — S, typhi, S. enteritidis (jena); Н-диагностикумы из следующих культур: b — S. paratyphi В; С — S. paratyphi С; d — S. typhi, i — S. typhimurium; g, m — S. enteritidis (jena); 1,5—S. choleraesuis, var. kunzendorf].

Простота постановки B. р. обусловила широкое использование этой реакции для диагностики тифо-паратифозных заболеваний. Однако с течением времени были накоплены наблюдения, показавшие, что диагностическая ценность этой реакции относительна. Положительная В. р. может быть следствием ранее перенесенного заболевания (анамнестическая В. р.) или профилактической вакцинации (прививочная В. р.). При инфекционных заболеваниях различной этиологии (грипп, малярия, туберкулез и пр.) у ранее переболевших или привитых могут появляться агглютинины к бактериям тифо-паратифозной группы, но их титры не достигают высокого уровня, и они быстро исчезают. Положительная В. р. у лиц неболевших и непрививавшихся может быть обусловлена так наз. нормальными антителами. Однако их титр обычно невысок (ниже 1 : 50), но может быть несколько выше в местностях, эндемичных по тифо-паратифозным заболеваниям.

Агглютинины в крови больных обнаруживают с конца первой недели заболевания. Первыми появляются О-, а затем Н-агглютинины. Титр антител постепенно повышается до конца заболевания и даже в первое время реконвалесценции. Затем наступает постепенное снижение содержания агглютининов, которые исчезают через 4—6 мес. после выздоровления, но в отдельных случаях могут быть обнаружены и через 12 мес.

Основное диагностическое значение имеет В. р. с О-антигеном. Диагностическим титром этой реакции считают разведение 1 : 200. Агглютинация только с H-антигеном наблюдается при анамнестической или прививочной В. р. Диагностическое значение придается не столько высоте титра реакции, сколько нарастанию титра в процессе заболевания. Поэтому даже высокие титры при однократной постановке не дают права на окончательный диагноз. Решающим является наблюдение за динамикой В. р., т. е. повторное исследование сывороток, взятых через 5—7 дней. Результаты повторной реакции дают также возможность исключить анамнестическую и прививочную реакции, при которых не наблюдается повышения титра агглютининов. При тифо-паратифозных заболеваниях титры В. р. могут колебаться в весьма широких пределах.

В связи с доступностью и простотой постановки В. р. стала одним из наиболее широко применяемых методов серологической диагностики. Однако при оценке этой реакции, помимо сказанного выше, следует учитывать, что В. р. не является методом ранней диагностики, т. к. она может быть использована лишь с конца первой недели заболевания, но она полностью сохраняет значение диагностического метода там ,где исключена возможность использования ранних методов диагностики (посев крови); бесспорно значение В. р. для ретроспективного диагноза, что имеет большую эпидемиол, ценность.

Модификации В. р., ранее предлагавшиеся с целью упрощения методики ее постановки, более раннего выявления антител и пр. (метод Нобля, постановка реакции с растворами поваренной соли различной концентрации и пр.) потеряли свое значение.

Наряду с обычным методом постановки В. р. для серологического диагноза тифо-паратифозных заболеваний широко пользуются PHГА — реакцией непрямой гемагглютинации (см.). Для ее постановки применяют стабильный эритроцитарный диагностикум, изготовляемый производственными ин-тами. Эти диаг-ностикумы представляют собой специально обработанные эритроциты человека 0-группы, сенсибилизированные очищенными О- и Vi-ан-тигенами из культур тифо-паратифозных бактерий. PHГА зарекомендовала себя как более чувствительный и специфичный метод, позволяющий обнаруживать антитела в более ранние сроки заболевания. Преимуществом этой реакции является также простота ее постановки и возможность более быстрого получения результатов. Диагностическое значение имеет PHГА с О-антигеном. Ее диагностический титр равен разведению 1 : 640, но нередко она дает очень высокие титры. PHГА с Vi-антигеном не имеет диагностического значения при брюшном тифе, т. к. титры Vi-антител, как правило, невысоки.

PHГА с Vi-антигеном нашла применение при обследовании на бактерионосительство. После полного выздоровления Vi-агглютинины быстро исчезают, но у хрон, брюшнотифозных носителей они присутствуют постоянно и легко выявляются при помощи PH ГА с Vi-антигеном. У лиц, содержащих Vi-антитела, бактерионосительство должно быть подтверждено бактериол, методом, т. е. выделением культуры. В весьма редких случаях Vi-антитела у бактерионосителей отсутствуют, что, по-видимому, может быть связано с особенностями антигенной структуры брюшнотифозных бактерий или особенностями иммунологической реактивности носителя.

Библиография: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, М., 1973; Kohler W. u. М о с h m a n n H. Grundriss der medizinischen Mikrobiologie, Jena, 1968; W i d a 1 F. Serodiagnostic de la fievre typhoide, Bull. Soc. m6d. Hop. Paris, t. 13, p. 561, 1896; W i 1 d-f ii h r G. Medizinische Mikrobiologie, Im-munologie und Epidemiologie, T. 1—2, Lpz., 1959 —1961, Bibliogr.

источник

Диагностика брюшного тифа основывается на характерных особенностях клинической картины (особенно начала болезни), данных анамнеза (особенно эпидемиологического – контакты с больными, посещение инфекционно опасных регионов, где много бактерионосителей), результатах, полученных в ходе лабораторных исследователей.

Конечно при диагностике брюшного тифа применяется микробиологическая диагностика, при которой из крови и естественных выделений человека выделяется возбудитель. Именно методы микробиологической диагностики позволяют выявить болезнь на раннем этапе.

Используется также серологическая диагностика. Однако ее методы могут показать заболевание только начиная с 5-го – 8-го дня с начала болезни. Причем максимум возможностей достигает на 2-ой – 3-ей неделях болезни. То есть очевидно запаздывание с выставлением диагноза.

Отметим, что в практике серологической диагностики брюшного тифа широко применяется реакция Видаля, а также РПГА (реакция пассивной гемагглютинации). Эти варианты диагностики используются также для дифференциальной диагностики с целью отстройки от болезней со схожими симптомами (паратифы, сальмонеллез).

Брюшной тиф относится к типичным антропонозным кишечным инфекциям. Источником заболевания может являться только больной человек или здоровый носитель бактерий. Инфицирование происходит фекально-оральным (при употреблении загрязненной воды, термически необработанного молока, мяса и т.д.) и контактно-бытовым путем (как правило, это более характерно для детей).

Инкубационный период болезни составляет 3-14 дней (иногда он может удлиняться до 21-го дня). При пищевом пути заражения период инкубации значительно короче, чем при водном или контактно-бытовом заражении. Чем короче период инкубации инфекции, тем тяжелее течение брюшного тифа и острее начало заболевания.

Комплексная диагностика брюшного тифа основывается на анализе клинической симптоматики, данных эпидемического анамнеза и анализов. Важную роль в диагностике играет наличие в анамнезе:

контакта с больным брюшным тифом или лихорадящими пациентами;
поездок в эндемичные по брюшному тифу районов;
употребления сырого молока, термически необработанного мяса и фарша, немытых фруктов или овощей;
употребления молочных или мясных продуктов, приготовленных частными лицами в антисанитарных условиях (шаурма, чебуреки и т.д., приобретенные на стихийных рынках и в ларьках);
приема пищи в общепитах или кафе с низким уровнем санитарного контроля и т.д.

При обследовании больного, в первую очередь обращают на себя внимание:

его заторможенность, сонливость и адинамичность;
наличие лихорадки 39-40 градусов;
снижение артериального давления;
брадиаритмия, появление негрубого систолического шума;
вздутый, болезненный при пальпации живот с увеличенными мезентериальными лимфоузлами. Отмечается симптом Падалки – при пальпации и перкуссии правой подвздошной области выявляется сильное урчание и укорочение перкуторного звука.
жалобы на бессонницу, головные боли, сильную слабость, запоры;
желтизна кожи на стопах и подошвах;
трещины и язвы на губах, а также тифозный или «поджаренный» язык (сероватый налет в центре с ярко красным ободком по краям);
увеличение печени и селезенки с четвертого дня;
розеолезная сыпь с 8-х суток;
появление у пациента бреда, маний, психоза и галлюцинаций.

Первые два-три дня болезни в общем анализе крови отмечают умеренное увеличение лейкоцитов или незначительную лейкопению (снижение числа лейкоцитарных клеток). С четвертого-пятого дня болезни в анализах появляется ускорение скорости оседания эритроцитов и выраженная лейкопения.

Возможно развитие анэозинофилии, относительного лимфоцитоза, нейтропении (характерен палочкоядерный сдвиг). Также характерно снижение количества тромбоцитов (риск тяжелого кровотечения прямо пропорционален уровню тромбоцитопении).

Поражение почек проявляется развитием олигурии (уменьшение объема мочи) или анурии (отсутствие мочи). В анализах мочи отмечается появление:

протеинурии (белок в моче);
микрогематурии (эритроциты в моче);
цилиндрурии (цилиндры в моче).

При развитии кишечного кровотечения отмечается сильная тахикардия, резкая бледность кожи, падение артериального давления, снижение температуры тела, появление мелены (дегтеобразного стула с резким запахом).

Выделение гемокультуры брюшнотифозных сальмонелл возможно на протяжении всего лихорадочного периода, однако наиболее информативным анализ является на первой неделе заболевания.

В качестве дополнительного метода диагностики с десятого дня болезни проводится микробиологическая диагностика брюшного тифа с исследованием естественных выделений.

Анализ испражнений и мочи проводят со второй недели заболевания. Однако данные исследования обладают малой чувствительностью и позволяют выделить возбудителя только у 30-40 процентов больных.

По показаниям могут проводиться посевы на возбудителя соскобов (скарификата) с розеолезных высыпаний, спинномозговой жидкости и мокроты.

Для определения специфических антител с четвертого-пятого дня болезни может проводиться реакция Видаля с О- и Н- антигенами. О положительном результате свидетельствует титр 1:200, а также увеличение титра в динамике, при проведении повторного исследования.

На данный момент, реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) практически вытеснила классическую реакцию Видаля. Это объясняется тем, что РНГА с О-, Н- и Vi- антигенами отличается больше чувствительностью и специфичностью (реакция Видаля может дать неспецифическую реакцию с другими бактериями, входящими в семейство энтеробактерий).

Серологическая диагностика посредством РНГА проводится на четвертый-пятый день болезни и в динамике – через десять – четырнадцать дней, с момента первого анализа. При этом, для острой инфекции показательны положительные титры с О-антигенами. Высокие титры Н-антигенов характерны для пациентов с иммунитетом против брюшного тифа, сформировавшимся в результате перенесенного заболевания или после проведения вакцинации.

Vi-антигены обнаруживают у хронических носителей сальмонелл.

В качестве дополнительных методов диагностики (контроль состояния больного и раннее выявление осложнений) проводят:

ультразвуковое исследование органов брюшной полости;
ЭКГ и Эхо-КГ;
рентгенографию ОГК (органы грудной клетки);
анализ кала на скрытую кровь;
контроль гематокрита;
биохимическое исследование крови, коагулограмму, электролиты крови и т.д.

При подозрении на перфорацию кишечника и кровотечение показана консультация хирурга.

Лечение брюшного тифа проводится в инфекционном стационаре. Длительность лечения составляет от 25 до 45 и более дней и зависит от тяжести инфекции. В течение всего периода лихорадки и на протяжении пяти-семи дней после снижения лихорадки, больному показан строжайший постельный режим. Далее, больному постепенно разрешают садиться в кровати. Ходить можно не ранее 22-го дня от начала заболевания.

Назначается диета №4А и №4. Из рациона больного полностью исключаются все продукты с большим содержанием грубой клетчатки, а также способствующие усилению кишечной моторики и газообразованию. Из рациона исключают черный хлеб, квашеную капусту, жирные молочные продукты, картофель, бобовые, цитрусы и т.д.

С пятого-шестого дня стабилизации температуры возможно расширение диеты. При кишечных кровотечениях назначают голод на сутки (через 12-ть часов после кровотечения можно поить прохладным чаем).

Медикаментозная терапия брюшного тифа проводится комплексно и включает в себя назначение противомикробных, дезинтоксикационных и антигистаминных препаратов.

Дополнительно проводится симптоматическое лечение, направленное на облегчение состояния больного, а также профилактику и лечение осложнений.

Противомикробная терапия назначается в виде длительного непрерывного курса. Антибиотики назначаются с учетом возраста, тяжести состояния больного и наличия осложнений.

Назначение азитромицина целесообразно при легком неосложненном течении болезни. При среднетяжелом и тяжелом брюшном тифе рекомендовано использовать:

цефалоспорины (препараты цефиксима, цефтриаксона, цефотаксима);
фторхинолоновые средства (препараты ципрофлоксацина, офлоксацина, пефлоксацина).

На фоне длительной антибактериальной терапии целесообразно применение флуконазола, с целью профилактики грибковых осложнений.

По показаниям может применяться брюшнотифозная вакцина. При наличии иммунодефицитных состояний, высокого риска осложнений, а также при тяжелом течении показана иммунотерапия. Рекомендовано использование пентоксила, тимогена, метацила.

Для нормализации температуры тела больного назначают нестероидные противовоспалительные средства (парацетамол, нимесулид).

Десенсибилизация пациента проводится препаратами хлоропирамина (Супрастин), мебгибролина (Диазолин) и т.д.

Дезинтоксикация проводится при помощи инфузии растворов натрия хлорида, глюкозы, реополиглюкина, Рингера и т.д.

При развитии судорожного синдрома назначают диазепам.

Дополнительно проводится антиоксидантнаяи витаминная терапия. Назначают рибоксин, аскорбиновую кислоту, витамины А и Е, витамины групп В, препараты цитохрома С, и т.д.

Из стационара больные выписываются не ранее двадцать первого дня от момента стабилизации температуры, а также при отрицательных бак.анализах кала и мочи (требуются 2-х кратные отрицательные тесты) и желчи (однократно).

Каждый месяц проводится исследование кала и мочи. В конце третьего месяца – желчи.

В дальнейшем они состоят на учете у санэпиднадзора еще два года. Хронические носители (положительная Vi- гемагглютинация) состоят на учете пожизненно.

источник

Реакция Видаля – анализ, материалом для которого является кровь. Как уже было отмечено, происходит склеивание антител и некоторых микроорганизмов. В результате происходит образование гранул и хлопьев. Их можно рассмотреть даже невооруженным глазом.

В прошлом осуществление исследования происходило очень просто. Реакция Видаля на брюшной тиф производилась следующим образом:
1. Брали 1 часть сыворотки крови человека.
2. Смешивали ее с 9 частями бульонной культуры вредоносных организмов.
3. Нагревали смесь до температуры 37 градусов по Цельсию и ждали 2 часа или же не нагревали смесь, но результатов приходилось ждать 24 часа. Если заболевание имело место, то в пробирке образовывался сильный осадок.

Сейчас анализ крови «реакция Видаля» осуществляется несколько иначе:
• используется не одна, а несколько пробирок;
• смесь изготавливается в разных пропорциях: 1 к 50, 1 к 100, 1 к 200 и т.д.;
• добавляются разные антигены.

Бульонную культуру тоже уже не используют. Вместо нее – смыв с питательных сред. Таким образом, в современных условиях реакция Видаля на тиф позволяет определить различных «модификаций». Очень важно выявить опасные кишечные заболевания на ранних стадиях, и реакция Видаля сильно помогает в этом.

На основе реакции Видаля постановка анализа не всегда бывает точной. Если раньше медики возвышали и восхваляли данный анализ, то современные специалисты склоняются к такому мнению, что всегда необходимо проводить дополнительные исследования. Почему так?

Типичные примеры:
1. У некоторых тяжело больных при взятии крови на реакцию Видаля анализ показывает отрицательный результат. Связано это с тем, что организм не вырабатывает необходимых антител. Это, кстати говоря, влияет и на то, что болезнь протекает тяжело. Организм не в состоянии бороться.
2. Отрицательный результат реакции можно получить, если антибиотики начали применять на начальных стадиях болезни, причем в больших количествах.
3. Положительная реакция случается, если анализ сдает здоровый человек, переболевший тифом ранее. Агглютинины в такой ситуации могут вырабатываться и при других инфекциях. Их число не будет существенным. Повторная диагностика даст понять, что результат анализа – ложноположительный.
4. Если человеку делали прививку от тифа, то антитела могут находиться в крови. Реакция, естественно, будет положительной, но не будет наблюдаться динамики роста количества антител, что даст возможность прийти к выводу: заболевание не наблюдается.

Вывод: для получения достоверных результатов, анализ нужно проводить не один раз, наблюдая за динамикой роста числа антител.

Если по какой-то причине вы не желаете сдавать анализы, но справка об их сдаче необходима, то можно купить анализы.

Лучший вариант – обратиться в компанию «Документы РФ», которая долгие годы успешно продает справки в Москве.

Наши преимущества заключаются в следующем:
1. Купить анализы в Москве можно в нашей компании, получив гарантию, что документ не посчитают подделкой и не отвергнут. Мы изготавливаем все справки на специальном оборудовании, максимально учитывая форму и особенности оригинала.
2. Приобрести анализы в Москве в «Документы РФ» возможно в самые короткие сроки. Мы знаем, что справки о сдаче анализов бывает нужно получить за очень короткое время. И мы готовы оперативно помочь в этом вопросе!
3. Купить справки в Москве у нас можно по низким ценам. Адекватная ценовая политика в сфере реализации документов – наше кредо.

Таким образом, обращение в «Документы РФ» – это правильный шаг. Сотрудничество с нами – это всегда выгодно и надежно.

источник

Наибольшую достоверность реакция Видаля приобретает при постановке ее раздельно с Н- и 0-антигенами. Положительный результат с Н-антигеном свидетельствует о неспецифичности реакции (прививочная, анамнестическая).

Положительная реакция только с 0-антигеном указывает на тифозно-паратифозный характер заболевания без уточнения возбудителя. Наличие положительной агглютинации одновременно с Н- и 0-антигенами уточняет заболевание, вызванное брюшнотифозным возбудителем .

Реакция Видаля ставится не только с культурами брюшного тифа и паратифов А и В, но и с культурой паратифа N₂, которая во многих случаях брюшного тифа дает положительную реакцию с первых дней болезни, когда бактерии брюшного тифа не подвергаются еще агглютинации (М. Н. Фишер, М. Р. Давыдов), и служит диагностическим признаком брюшного тифа.

Н. А. Минкевич с соавторами (1935) предложили ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с гемолизированной кровью больных. Она проста по технике применения непосредственно у постели больного. Результаты реакции читаются через 2 минуты.

При постановке этой реакции результаты, по данным автора, оказались строго специфичными: у здоровых и нетифозных больных реакция агглютинации отрицательна, за исключением единичных случаев слабо положительной реакции у лиц, ранее перенесших тиф или иммунизированных; резко положительная реакция агглютинации наблюдается, в разгаре болезни и в периоде реконвалесценции.

О. М. Княжанский и соавторы (1936) рекомендовали в качестве ориентировочной реакции агглютинации при брюшном тифе реакцию по методу Нобль-Фишера, которая представляет собой упрощенную модификацию реакции Видаля с небольшими количествами (0,2 мл) более концентрированных разведений сыворотки и более густой взвесью микробов (до 5 — 6 млрд. особей в 1 мл).

В пробирках готовят различные разведения сыворотки с физиологическим раствором или с концентрированным раствором поваренной соли 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 и т. д. Преимущества этой модификации заключаются в том, что не нужен термостат, результат агглютинации читается через 15 — 20 минут. Постановка такой реакции удобна в походной обстановке и в условиях сельской местности (Б. М. Берман, С. И. Игнатов).

«Брюшной тиф у детей», Н.В.Дмитриева

Как известно, брюшной тиф сопровождается наиболее интенсивной бактериемией в первые дни болезни и на высоте заболевания. Бактериемия становится менее напряженной в поздние периоды болезни, но во время рецидивов она вновь усиливается. Для распознавания брюшного тифа наряду с клиническим и эпидемиологическим обследованием используется посев крови — гемокультура. В 1903 г. 3. Ф. Орловский предложил для бактериологической…

Высеваемость брюшнотифозного возбудителя из крови больных детей, по данным ряда авторов, различна. Булль указывает на сравнительно низкий процент высеваемости брюшнотифозной палочки в гемокультурах при брюшном тифе у детей: из 69 посевов крови только 22 были положительными на тиф. Аналогичные результаты были получены Р. Д. Мартинец и Бамбах. Авторы не отмечают у детей постоянства высеваемости брюшнотифозной…

Серологическая реакция агглютинации при инфекционных заболеваниях рассматривается как реакция иммунитета. Сущность ее заключается в обнаружении в сыворотке крови больного специфических агглютининов — антител. Агглютинины появляются и нарастают по мере воздействия на организм тех или иных возбудителей инфекционных болезней. И. И. Мечников был первым исследователем, широко поставившим вопрос о филогенезе явлений иммунитета. Он установил, что способность…

Механизм выработки антител до сих пор не изучен. Научными исследованиями доказано, что это физиологический процесс, который подчинен тем же закономерностям, каким подчинены другие физиологические процессы, и зависит от регуляции нервной системы. Превращение нормальных глобулинов в иммунные катализируется, по мнению А. Д. Адо, непосредственным действием антигена на эффекторы — клетки, вырабатывающее антитела. Опыты, проведенные учеными в…

О влиянии возраста на продукцию антител нет единого мнения. Некоторые авторы полностью отрицают эту способность в детском возрасте, другие признают, что она имеется, но резко заторможена. Б. М. Берман и его сотрудники (Соколова, Колегова) экспериментальным путем доказали отсутствие нормальных антител у новорожденных и в младших возрастных группах животных. Однако после первичного иммунизаторного раздражения продукция антител…

источник

С 8-го дня заболевания в крови у больных брюшным тифом можно обнаружить агглютинины. Для постановки реакции агглютинации необходимо иметь сыворотку больного и диагностикумы – взвеси убитых бактерий брюшного тифа, паратифы А и В (реакция Видаля). У больного из вены берут в пробирку 1-2 мл крови. Для ускорения свертывания крови пробирку ставят на 30 минут в термостат. Затем свернувшуюся кровь некоторое время дают отстояться на холоде, далее осторожно отделяют сгусток обожженной петлей от стенок пробирки, после чего сыворотку отсасывают. Кровь для» получения сыворотки можно взять и посредством укола мякоти безымянного пальца. Из сыворотки с помощью физиологического раствора готовят три ряда разведений: 1:100, 1:200, 1:400, 1:600 каждое в объеме 1 мл. Затем в пробирки с разведенной сывороткой добавляют по 1-2 капле диагностикумов тифа и паратифа А и В. Для контроля реакции в конце каждого ряда помещают пробирку, в которой смешивают по 1 мл физиологического раствора и по 1-2 капле соответствующих диагностикумов. Пробирки ставят на 2 часа в термостат, после чего учитывают предварительный результат реакции. Окончательный результат отмечают на второй день после стояния пробирок в условиях комнатной температуры. Реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки не менее чем 1:200.

Реакция Видаля может дать положительный результат не только у больных, но и у лиц, до того перенесших брюшной тиф («анамнестический Видаль»). Кроме того, положительная реакция иногда является результатом проведенных ранее прививок («прививочный Видаль»). «Анамнестический» и «прививочный Видаль» отличают от инфекционного следующим образом. Реакцию Видаля ставят повторно на протяжении болезни. В случае заболевания брюшным тифом с каждым днем происходит нарастание титра антител, то есть положительная реакция отмечается все в больших разведениях сыворотки. Этого не наблюдается при «анамнестическом» или «прививочном Видале».

Для этиотропного лечения используют антибиотики или другие химиотерапевтические препараты.

Специфическая профилактика тифо-паратифозного заболевания проводится убитыми и химическими вакцинами по эпидемическим показаниям, контактным лицам — экстренная фагопрофилактика сальмонеллезными поливалентными бактериофагами.

Вопросы для обсуждения

1. Классификация и общая характеристика семейства энтеробактерий.

2. Патогенез брюшного тифа и паратифа А и В.

3. Методы лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифа А и В в

различные сроки заболевания.

4. Бактериологический метод исследования брюшного тифа и

паратифа А и В в разные стадии патогенеза заболевания.

5. Выявление бактерионосительства при брюшном тифе.

6. Серологический метод диагностики брюшного тифа и паратифа А и В.

7. Лечение и профилактика брюшного тифа и паратифа А и В.

Самостоятельная работа

Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного на гемокультуру:

1. Произвести посев исследуемого материала на среду Рапопорт.

2. Изучить изменение цвета среды (помутнение; наличие пузырьков газа в поплавке).

3. Пересеять на среду Эндо.

4. Занести полученные данные в протокол.

5. Изучить различия колоний на среде Эндо. Отобрать подозрительные колонии и произвести посев для накопления чистой культуры. Описать культуральные свойства.

6. Исследовать чистую культуру по морфологическим, тинкториальным, биохимическим, антигенным свойствам. Полученные данные занести в протокол.

7. Идентифицировать чистую культуру возбудителя.

Серологическая диагностика брюшного тифа

1. Учесть результаты реакции Видаля.

2. Полученные данные занести в протокол.

Протокол бактериологического исследования

Материал для исследования:

Этапы исследования

Ход исследования

Результаты исследования с предварительными выводами

Дата добавления: 2015-10-19 ; просмотров: 4354 . Нарушение авторских прав

источник

• Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: исходя из особенностей патогенеза брюшного тифа, на 1-й неделе заболевания, в период бактериемии, возбудителей выделяют из крови (получение гемокультуры), со 2-й недели заболевания — из испражнений (получение копрокультуры), мочи или желчи.

Бактериологическое исследование(схема 13.2.1).

Получение гемокультуры. В 1-й день из локтевой вены больного берут 5—10 мл крови и засевают в колбу с 50—100 мл селективной среды Раппопорт, содержащей желчный бульон (для подавления роста других бактерий), глюкозу, индикатор Андреде и поплавок для обнаружения газа. Указанные соотношения крови и среды необходимы для подавления бактерицидного действия белков крови. Посевы инкубируют при 37 «С в течение 18—20 ч. На 2-й день при росте сальмонелл наблюдается помутнение и изменение цвета среды. При росте паратифозных бактерий (биовары paratyphi А, Си schottmuelleri) наряду с указанными изменениями появляются пузырьки газа в поплавке. Для ускорения ответа из среды Раппопорт делают мазки и препараты «висячая» капля. При наличии чистой культуры грамотрицательных подвижных палочек и изменении цвета среды (или наличии газа) дают первый предварительный ответ. Затем культуру из среды Раппопорт пересевают в пробирку со средой Ресселя, полагая при этом, что из крови выделена чистая культура и можно сразу приступить к ее идентификации. Одновременно со среды Раппопорт делают посевы на среду Эндо для получения изолированных колоний с целью проверки чистоты выделенной культуры.

На 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Ресселя и ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. На основании полученных данных дают второй предварительный ответ. Для дальнейшего исследования отбирают несколько бесцветных колоний со среды Эндо и пересевают их в среду Ресселя или скошенный питательный агар (для контроля полученных результатов). Чистую культуру пересевают на среды «пестрого» ряда и серотипируют в реакции агглютинации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с

адсорбированными монорецепторными О- и Н-сальмонеллез-ными сыворотками. Окончательный диагноз устанавливают на основании биохимических (табл. 13.2.1) и антигенных свойств.

Таблица 13.2.1. Биохимические свойства сальмонелл — возбудителей брюшного тифа и паратифов

Биовар S.enterica	Ферментация	Образование
лактозы	глюкозы	мальтозы	сахарозы	ман-нита	H₂S	NH₃	индола

Paratyphi А — КГ КГ — КГ — —
Schottmuelleri — КГ КГ — КГ + +

Условные обозначения: К — образование кислоты; КГ — образование кислоты и газа; (+) — обнаружение признака; (—) — отсутствие признака.

Биохимические признаки (развернутый «пестрый» ряд) позволяют дифференцировать сальмонеллы от схожих сними энтеробактерий: Citrobacter, Hafnia (табл. 13.2.2).

Таблица 13.2.2. Дифференциация сальмонелл и других энтеробакте рий по биохимическим признакам

Род	Лизин- декар- бокси- лаза	Ферментация углеводов	р- Галак-този-даза
дуль-цита	сорбита	ксилозы	рам-нозы	салицина	4% лактозы

Citrobacter — К(-) К К К К(±) К(±) К
Hafnia + — — К К К(+) — К

Условные обозначения: (+) — положительная реакция; (—) — отрицательная реакция; ± — вариабельная реакция; К — образование кислоты; К(—) — образование кислоты (редко); К(±) — образование кислоты (вариабельно).

Выделенную чистую культуру бактерий используют для определения чувствительности к антимикробным препаратам.

Фаготипирование. С помощью набора стандартных Vi-фагов определяют до 78 фаготипов S.enterica биовара typhi. При этом необходимым условием является наличие в культуре FZ-антигена. Культуры S.enterica биовара paratyphi В (schottmuelleri) дифференцируются на11 фаготипов и подтипов.

Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо или Левина) или элективные среды обогащения (Мюллера, селени-

товая или висмут-сульфит агар). Для посева петлю фекалий вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию. После оседания крупных комочков суспензию петлей наносят на поверхность агаровой среды — на одну половину чашки. Материал тщательно растирают шпателем по одной, а затем по другой половине чашки для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18—20 ч. На 2-й день изучают характер колоний, выросших на чашках (рис. 13.2.1; на вклейке), пересевают 2—3 бесцветные колонии (со среды Эндо или Левина) или колонии черного цвета (висмут-сульфит агар) на среду Ресселя и в пробирки со скошенным питательным агаром. При отсутствии подозрительных колоний на чашках делают высевы из среды Мюллера или селенитовой среды на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Для ускорения ответа ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с материалом, взятым из бесцветной колонии. Далее поступают так же, как и при идентификации гемокультуры.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Влабораторной практике широко применяют развернутую реакцию агглютинации Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей антител — агглютининов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Реакцию ставят одновременно с четырьмя антигенами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяют для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела появляются на 1-й неделе, накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются в разгар заболевания, накапливаются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. У людей, вакцинированных против брюшного тифа и парати-фов, также наблюдается положительная реакция Видаля, причем в довольно высоком титре, поэтому «инфекционный Ви-даль» удается отличить от «прививочного» только по нарастанию титра агглютининов у больных в процессе заболевания. Реакцию Видаля ставят в четырех рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные. Для контроля каждого диагностикума в пробирки вносят по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в который добавляют 2 капли диагностикума. В контрольной пробирке с

1 мл сыворотки (без диагностикума) не должно быть хлопьев. При спонтанной агглютинации реакция не учитывается. Диагностический титр реакции Видаля равен 1:200. Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию непрямой И-гемаг-глютинации, с помощью которой в сыворотке крови людей определяют присутствие антител к К/-антигену. В качестве антигена используют эритроцитарный Р?-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека 1(0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Fz’-антиге-ном S.enterica биовара typhi. Готовят разведения испытуемой сыворотки от 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубренными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательной реакции, так же как и в контроле, эритроциты осаждаются на дно пробирки и имеют виддиска с ровными краями («пуговки»). Диагностическое значение имеет титр пассивной Й-гемагглютинации, начиная с 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови у которых дает положительный результат в РНГА с эритроцитарным F/f-диагностикумом, рассматривают как подозрительных на носительство S.enterica биовара typhi и подвергают многократному бактериологическому обследованию.

• Микробиологическая диагностика сальмонеллезов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ: микробиологическая диагностика сальмонеллезов принципиально не отличается от диагностики брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика не применяется по причине большого числа сероваров возбудителей.

• Микробиологическая диагностика кишечного иерсиниоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь, моча, спинномозговая жидкость.

МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование.Посев материала на дифференциально-диагностические (среда Эндо, Мак-Конки, СБТС-агар с желчью и бромтимоловым синим) и селективные (CIN-arap с антибиотиками цефсулодином и новобиоцином) плотные среды или жидкие среды обогащения (буферно-казе-иново-дрожжевой бульон, 1 %, пептонная вода с рН 7,6—7,8). Посевы инкубируют при 25 «С в течение 24—48 ч. Идентификация чистой культуры осуществляется на основании морфологии, подвижности, тинкториальных свойств (грамотрица-

тельные палочки с закругленными концами и характерным биполярным окрашиванием, неспорообразующие, перитрихи), культуральных, биохимических признаков.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Диагностическое значение имеет обнаружение антител к поверхностным антигенам возбудителей наиболее распространенных серотипов (03, 04, 05, 06, 08, 09) в РА. Положительной считается РА в титре не менее 1:160. Разработаны также ИФА-тесты.

• Микробиологическая диагностика кишечного дисбактериоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.Имеет ориентировочное значение. При резко выраженном дисбактериозе в мазках преобладают микроорганизмы определенных видов (например, дрожжеподобные грибы, стафилококки и др.) на фоне существенного уменьшения грамотрицательной микрофлоры.

Бактериологическое исследование.Проводится количественное исследование состава микрофлоры кишечника. Для этого из исследуемого материала готовят разведения Ю -2 , 10 -4 , Ю -6 и т.д. Первичные посевы по 0,1 мл каждого разведения производят параллельно на несколько питательных сред (Эндо, кровяной агар, ЖСА, агар Сабуро и др.) и инкубируют при 37 °С. Подсчитывают число выросших колоний и определяют число КОЕ в 1 г материала. Проводят отсев 2—3 колоний каждого вида для выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов.

Дляобнаружения анаэробных Bifidobacterium spp. делают мерные посевы материала в разведениях 10″ 7 и выше в пробирки с 13—15 мл модифицированной среды Блаурокка, в состав которой входит печеночный бульон, пептон — 1 %, лактоза — 1 %, хлорид натрия — 0,5 %, цистин — 0,01 %, агар-агар — 0,75%, твин-80 — 0,1 %. При росте Bifidobacterium spp. через 24—48 ч происходит помутнение всей среды с образованием тяжей или отдельных колоний. Готовят мазки и окрашивают по методу Грама. Выделение чистых культур Bifidobacterium spp. является весьма трудоемким и практически необязательным. При необходимости идентификацию представителей рода осуществляют по биохимическим свойствам.

Для оценки результатов бактериологического исследования

сопоставляют полученные данные с количественным содержанием микроорганизмов в норме. Ориентировочные критерии нормальной микрофлоры толстой кишки представлены в табл. 13.2.3.

Таблица 13.2.3. Критерии нормы кишечной флоры

Патогенные микробы сем. Enterobacteriaceae О

Общее количество E.coli, млн/г 300—400

E.coli со слабовыраженными ферментативными
свойствами, % До 10

E.coli с гемолитическими свойствами, % Нет

Энтеробактерии (лактозоотрицательные и лактозополо
жительные): Hafnia, Aerobacter, Citrobacter, Klebsiella,
Serratia, % До 5

Гемолитический стафилококк по отношению ко
всем кокковым формам, % Нет

Bifidobacterium spp. (рост при посеве разведения) 10 и выше

Бактерии рода Proteus Нет

При кишечном дисбактериозе происходит значительное снижение облигатной анаэробной микрофлоры, и в первую очередь Bifidobacterium spp., а также увеличение аэробных видов, в частности E.coli, содержание которых может превышать 10 11 микробных клеток в 1 г испражнений. Увеличивается частота обнаружения штаммов E.coli со слабой ферментацией лактозы и имеющих гемолитические свойства (до 30—40 %), гемолитических и негемолитических стафилококков, бактерий рода Proteus, грибов рода Candida (до 15—16 %). У лиц с дис-бактериозами более часто обнаруживают лактозоотрицательные и лактозоположительные энтеробактерии, относящиеся к родам Hafnia, Aerobacter, Citrobacter. Для микроорганизмов, в норме отсутствующих в испражнениях или имеющихся в небольшом количестве, показателем дисбактериоза будет содержание их 10 5 —10 6 и выше КОЕ в 1 г материала (Proteus spp., Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida spp.). Для окончательного заключения о кишечном дисбактериозе важное значение имеет повторное его выявление в динамике обследования больного.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Только сон приблежает студента к концу лекции. А чужой храп его отдаляет. 8609 — | 7412 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник