Питательные среды для культивирования бруцеллеза

В 1886 г. Д. Брюс в селезенке больного, погибшего от мальтийской лихорадки, обнаружил маленькую коккобактерию, которую выделил в чистой культуре и назвал Micrococcus.

В 1896 г. Б. Банг из околоплодной жидкости при аборте коров также выделил коккобактерии. В 1914 г. Ж. Траум выделил подобную палочку от больных свиней. А в 1916 г. Ивенс, изучив все выделенные микроорганизмы, определила их схожесть и в честь Брюса они были названы бруцеллами. В дальнейшем (1953, 1957, 1966) были открыты и другие виды бруцелл. Все они объединены в род Brucella.

В настоящее время бруцеллы подразделяют на виды по признаку их основного хозяина: В. melitensis — болеет мелкий рогатый скот (овцы, козы); В. abortus — болеет крупный рогатый скот; В. suis — болеют свиньи и т. д.

Каждый вид бруцелл подразделяют на биовары: В. melitensis включает 3 биовара; В. abortus — 9 биоваров; В. suis — 5 биоваров. Наиболее патогенным для человека является В. melitensis. B. abortus редко вызывают клиническое проявление заболевания у человека.

Морфология. Возбудители бруцеллеза мелкие 0,6-0,8 × 0,3-0,5 мкм бактерии палочковидной или овоидной формы. Неподвижны. Спор не имеют. Образуют нежную капсулу. Грамотрицательны. В мазке располагаются беспорядочно.

Культивирование. Бруцеллы — аэробы. Прихотливы к питательным средам. Характеризуются замедленным ростом (2-3 нед). Выращивают их на специальных питательных средах: сывороточно-декстрозном агаре, на агаре из картофельного настоя с сывороткой и кровяным агаром (5% овечьей крови), среде «Д», печеночном агаре МПА и МПБ. Растут они при температуре 37° С и рН 6,8-7,2. Некоторые штаммы требуют для роста 5-10% СО₂, особенно при первоначальном выделении. На плотных питательных средах вырастают нежные, мелкие, бесцветные, выпуклые с перламутровым блеском колонии в S-форме. Под влиянием некоторых факторов они могут диссоциировать в R-форму. Под действием антибиотиков у них возникают L-формы. В жидких питательных средах бруцеллы дают равномерную муть. Бруцеллы можно культивировать в желточном мешке куриного эмбриона.

Дифференцируют виды бруцелл на основании их способности образовывать сероводород и расти на средах с красителями — основным фуксином и тионином (табл. 44).

Таблица 44. Биологические свойства бруцелл

Ферментативные свойства. Бруцеллы расщепляют D-рибозу, D-галактозу, аланин, аспарагин. Некоторые штаммы гидролизуют аминокислоты с образованием аммиака.

Бруцеллы образуют гиалуронидазу, каталазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и др. Бруцеллы обладают выраженными инвазивными и агрессивными свойствами.

Токсинообразование. Патогенное действие бруцелл определяется, по-видимому, наличием эндотоксина. Кроме того, они обладают аллергенными свойствами.

Антигенная структура. Бруцеллы содержат два соматических антигена А и М. Эти антигены являются видоспецифичными. Они всегда входят в состав микробной клетки, но в разных соотношениях. У В. melitensis преобладает антиген М, у В. abortus и В. suis — антиген А. Кроме того, у них выявлен термолабильный Vi-антиген.

Устойчивость к факторам окружающей среды. При 100° С бруцеллы погибают мгновенно. При температуре 80-85° С — через 5 мин, при 60° С — через 30 мин. К низким температурам они очень устойчивы. Прямые солнечные лучи действуют на них губительно. Во влажной среде бруцеллы сохраняются длительно — 3-4 мес. В молочных продуктах — до 40-45 дней, замороженном мясе — до 5 мес, почве и воде — до 3-5 мес.

Восприимчивость животных. Бруцеллезом болеют в основном сельскохозяйственные животные: мелкий и крупный рогатый скот, свиньи, олени и др. Каждый вид бруцелл поражает определенный вид животного. Но бруцеллы могут мигрировать, т. е. переходить от одного вида животного другому. Например, В. abortus могут поражать мелкий рогатый скот.

Основными признаками заболевания являются: у самок — аборты, у самцов — орхиты. Кроме того, у них бывает поражение суставов, похудание, выпадение шерсти и т. д. Но бруцеллез у животных может протекать в скрытой форме, что способствует распространению инфекции.

Из экспериментальных животных к бруцеллам чувствительны белые мыши и морские свинки. После заражения они абортируют, резко худеют, у них выпадает шерсть. У мышей иногда развивается септицемия.

Источники инфекции. Основным источником заболевания бруцеллезом людей являются мелкий и крупный рогатый скот. Роль человека в передаче бруцеллезной инфекции эпидемиологического значения не имеет.

Пути передачи. Пищевой, контактно-бытовой, воздушно-капельный.

Контактный путь — при работе с животными: в процессе ухода за животными, на предприятиях, перерабатывающих сырье и продукты животного происхождения; при соприкосновении с выделениями больных животных, плодом, в процессе убоя, разделки туши и т. д.

Аэрогенным путем бруцеллы проникают в кожу и неповрежденные слизистые оболочки.

Пищевой путь — употребление зараженных пищевых продуктов. Наиболее опасны молочные продукты — молоко, брынза и т. д.

Патогенез. Попав в организм, бруцеллы по лимфатическим путям проникают в лимфатические узлы, кровь, костный мозг, паренхиматозные органы и локализуются внутри клеток. При обострении процесса бруцеллы из клеток вновь попадают в кровь и возникает рецидив. Заболевание характеризуется воспалением суставов, невралгией и естественными абортами.

Иммунитет — обусловливается клеточными (фагоцитоз) и гуморальными факторами — агглютининами, комплементсвязывающими антителами и др. Иммунитет сочетается с состоянием аллергии. В опытах на морских свинках было показано, что устойчивость к повторному заражению у них сочеталась с положительной реакцией к бруцеллину.

Профилактика. Плановые обследования в животноводческих хозяйствах, на пастбищах, в убойных пунктах, на мясных и молочных комбинатах.

Специфическая профилактика. Вакцинация живой вакциной В. abortus (штамм 19-ВА). Прививки проводят накожным методом однократно, ревакцинируют через 8-12 мес.

Лечение. Антибиотики: левомицетин, эритромицин. Для предупреждения рецидивов используют также бруцеллезный иммуноглобулин.

1. Какие Вы знаете виды бруцелл и какой из них патогенен для человека?

2. На каких средах культивируют бруцеллы и чем характеризуется их рост на средах?

3. С чем связано патогенное действие бруцелл?

Цель исследования: выявление возбудителя бруцеллеза.

Работу с бруцеллами проводят в строго режимных условиях.

2. Спинномозговая жидкость.

Способы сбора материала

Ход исследования

Ход исследования

1. В каких условиях проводят работу с материалом, полученным от больного бруцеллезом?

2. Какой материал служит для диагностического исследования?

3. Перечислите основные методы исследования.

4. На каких животных ставят биологическую пробу?

Сывороточно-декстрозный агар. Основой этой среды является питательный агар, который готовят следующим образом: к 835 мл дистиллированной воды добавляют 15 г агар-агара, 10 г пептона, 5 г х. ч. хлорида натрия и 165 мл мясной воды. Все ингредиенты вводят в сосуд и подвергают обработке текучим паром в течение часа. Устанавливают рН 7,8. Затем сосуд ставят в автоклав, при 2 атм, температуре 120° С выпадают фосфаты. Среду фильтрют через бумажные фильтры, устанавливают рН 7,4, разливают в мерную посуду и стерилизуют при температуре 116° С в течение 15 мин. Заготовленный таким образом агар по мере надобности расплавляют на водяной бане и охлаждают до 50° С. Затем к нему добавляют нормальную инактивированную (при 56° С 30 мин) лошадиную или бычью сыворотку и раствор декстрозы, простерилизованный путем фильтрации через фильтр Зейтца. Окончательная концентрация сыворотки должна быть 5% и декстразы — 1%.

Среда «Д»: а) бульон «Д» — к 100 мл холодной дистиллированной воды добавляют 2,5 г порошка стандартного бульона «Д», прогревают и тщательно размешивают до полного его растворения; затем бульон фильтруют, разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин (рН среды 7,1-7,2); б) агар «Д» — к 100 мл холодной дистиллированной воды добавляют 20 г порошка стандартного агара «Д», прогревают при помешивании до полного растворения порошка, не допуская его подгорания, затем фильтруют, разливают в необходимую посуду и стерилизуют при 120° С в течение 20 мин (рН среды 7,2). Среды готовит Институт эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалея АМН СССР.

источник

Питательный агар для культивирования и выделения возбудителя бруцеллеза, сухой. Набор реагентов для бактериологических исследований.

ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для бактериологических исследований «Питательный агар для культивирования и выделения возбудителя бруцеллёза сухой» Бруцеллагар Оболенск

Набор реагентов для бактериологических исследований «Питательный агар для культивирования и выделения возбудителя бруцеллёза сухой (Бруцеллагар)» предназначен для культивирования бруцелл и выделения их из клинического материала при бактериологическом исследовании.

Набор реагентов состоит из одной банки с Бруцеллагаром и 12 флаконов с селективными добавками (СД 1 и СД 2).

Бруцеллагар представляет собой смесь сухих компонентов в виде мелкодисперсного гигроскопичного порошка светло-коричневого цвета.

СД 1: 6 флаконов с полимиксином В сульфат – мелкодисперсный порошок белого цвета.

СД 2: 6 флаконов с афотерицином В – пористая масса желтого цвета.

Бруцеллагар выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г, СД 1 и СД 2 во флаконах по 0,005 г и 0,01 г соответственно.

Совокупность компонентов, входящих в состав среды, обеспечивает питательные потребности для роста бруцелл и др. высокотребовательных микроорганизмов.

Бруцеллагар представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

Бруцеллагар Оболенск обеспечивает рост бруцелл не позднее 72 ч инкубации при температуре (37±1)°С и подавляет рост эшерихий и грибов.

При анализе исследуемого материала – соблюдение СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

Объекты исследований в клинической микробиологии.

7.1 Приготовление Бруцеллагара для культивирования бруцелл.

Препарат в количестве, указанном на этикетке, тщательно размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 3 мин до полного расплавления агара и стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

7.2 Приготовление Бруцеллагара с селективными добавками для выделения бруцелл.

Для приготовления 1 л среды с селективными добавками во флаконы с СД 1 и СД 2 наливают по 5 мл дистиллированной воды, вносят в стерильный, охлажденный до температуры 50-55 °С Бруцеллагар (п. 7.1), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Готовая питательная среда непрозрачная коричневого цвета с темно-коричневыми вкраплениями.

Готовую среду можно использовать в течение 7 сут после её приготовления при условии хранения при температуре 2-8 °С.

7.3. Взятие, посев исследуемого материала проводят в соответствии с
МУК 3.3.2.2124-06 «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза», МУ 3.1.7.1189-03 «Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей» и других нормативных документов.

7.4. Исследуемый материал вносят соответственно на две чашки Петри с Бруцеллагаром с СД и равномерно распределяют микробную взвесь покачиванием чашек по всей поверхности. Инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 72 ч.

Учет результатов проводят не позднее 72 ч инкубации визуально учитывая наличие и характер роста бруцелл — выпуклые, гладкие, бесцветные, мутноватые, круглые колонии диаметром 1,0-1,5 мм.

Отмечают отсутствие роста тест-штаммов E.coli и C. albicans на чашках Петри со средой Бруцеллагар и наличие роста на контрольных средах.

Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее чем в трех повторностях.

Набор реагентов необходимо хранить в герметично закрытой упаковке при температуре от 2 до 30 С. СД хранят при температуре 2-8 °С.

Срок годности набора реагентов: Бруцеллагара – 2 года, СД 1 и СД 2 – не менее срока годности среды. Среда с истекшим сроком годности использованию не подлежит. После вскрытия банки с Бруцеллагаром гарантируется соответствие требуемым параметрам при соблюдении условий хранения (влажность, температура, герметичность) до окончания срока годности.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

По вопросам, касающимся качества набора реагентов «Питательный агар для культивирования и выделения возбудителя бруцеллёза сухой (бруцеллагар)» в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел./факс (4967) 36-01-16.

источник

Окраска бруцелл по Шуляку-Шин. Мазок фиксируют на пламени, окрашивают 2 минуты карболовым фук­сином Циля, разведенным водой 1:5, промывают водой, окрашивают 5 минут 2%-ным водным раствором метиленового синего, промывают водой. Микроскопическая картина: бруцеллы — красные, другие бактерии име­ют синий цвет.

Окраска бруцелл по Кюстеру. Препарат фиксируют на пламени, окрашивают 60 секунд щелочным ра­створом сафранина, промывают водой, обрабатывают 15 секунд 0,05%-ным раствором серной кислоты, тщательно промывают водой, окрашивают 15-20 секунд 3%-ным водным раствором метиленового синего. Микроскопичес­кая картина: бруцеллы — красные, другие бактерии синего цвета.

Микроскопическое исследование исходного материала

Из поступившего материала готовят мазки, окрашивают их по Граму и одним из специальных методов (по Козловскому, Стампу и т.д.), а также бруцеллезными люминесцирующими сыворотками.

В препаратах, окрашенных по методу Грама, бруцеллы имеют форму мел­ких, коротких, коккоподобных или палочковидных грамотрицательных бак­терий, размером 0,5-0,7х0,6-1,5 мкм, истинной капсулы не образуют, рас­положены одиночно, реже — парами, короткими цепочками или небольши­ми группами.

Для бруцелл характерно более медленное окрашивание и отдача краси­теля при промывании водой или обработке слабыми растворами кислот по сравнению с другими видами бактерий, что позволило ряду авторов предло­жить дифференциальные методы окраски клеток возбудителя.

Окраска бруцелл по Е.В. Козловскому. Мазок фиксируют на пламени, окрашивают 2%-ным водным раствором сафранина 2 минуты с подогреванием до появления пузырьков, затем про­мывают водой и докрашивают 0,75-1%-ным водным раствором брилли­антовой или малахитовой зелени (или метиленового синего) в течение 1-2 минут, споласкивают водой. Микроскопическая картина: бруцеллы — ярко-красные, другие бактерии — зеленого или синего цвета.

Окраска бруцелл по Стампу (модифицированный метод Циля- Нильсена). Мазок фиксируют на пламени, окрашивают фуксином Пфейффера в те­чение 10 минут, промывают водой, обрабатывают
30 секунд 0,5%-ным вод­ным раствором уксусной кислоты, промывают водой, окрашивают 20-30 секунд 1%-ным водным раствором метиленового синего, промывают во­дой. Микроскопическая картина: бруцеллы — красные, прочие бактерии имеют синий цвет.

Приготовление щелочного раствора сафранина (ex tempore). Смешивают 5 капель 3%-ного водного раствора сафранина и 1,5 мл нормального раствора КОН (5,6 г на 100 мл воды).

Иммунолюминесцентное выявление бруцелл проводят прямым или не­прямым способом.

Культивирование.Обычно исследуемый материал засевают в пробирку с жидкой и в не­сколько пробирок (5-10) — с агаровой питательной средой (мясо-пептонный печеночный бульон, мясо-пептонный-печеночно-глюкозный-глицериновый бульон, альбими-бульон, аналогичные агаровые среды, сывороточнокартофельный агар, сывороточно-декстрозный агар). Бруцеллы хоро­шо растут на кровяном агаре (5-10%). Загрязненный материал высевают на сывороточно-декстрозный агар с ингибиторами (рекомендация Объеди­ненного комитета экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу): генцианвиолет 1:200 тыс. или кристаллический фиолетовый 1:100 тыс., уксуснокислый натрий (0,25 мг/мл) или паранитрофенилглицерин (0,005-0,007%).

Бруцеллы — аэробы или микроаэрофилы. Температурный оптимум 37°С, диапазон — 20-40°С, оптимум рН 6,6-7,4. Микроаэрофильные свойства проявляют В. abortus и В. ovis. Поскольку не известно, какой вид бруцелл присут­ствует в исследуемом материале от крупного рогатого скота, то половину пробирок с посевами инкубируют в условиях обычной атмосферы, вторую — в атмосфере с повышенным содержанием СО₂ (10-12%). Посевы при исследовании на наличие В. ovis инкубируют только в атмос­фере СО₂. В первой генерации бруцеллы обладают замедленным ростом, по­этому посевы культивируют, периодически просматривая, до 30 дней. Подготовка и исследование различных материалов имеют некоторые особенности.

При исследовании абортированного плода производят посев тканевого гомогената или пастеровскими пипетками непосредственно из органов. Посевы делают из экссудата грудной и брюшной полостей, содержимого желудка, крови сердца, печени, селезенки, легких. При посеве из паренхи­матозных органов выбирают участки с фокусами некрозов, кровоизлияни­ями.

Для изготовления тканевого гомогената кусочки паренхиматозных ор­ганов обжигают, растирают в ступке со стерильным кварцевым песком и физиологическим раствором (1:10), гомогенат высевают на среды. Анало­гичным образом подготавливают для посева материал, взятый при диагно­стическом убое животных.

При осмотре плаценты отбирают участки с утолщенными ворсинками и стенками, с наличием гнойного экссудата. Поверхность плаценты обраба­тывают тампонами с дезинфектантами, просушивают стерильными тампо­нами, прижигают выбранный участок, вырезают необходимые фрагменты, измельчают, как было описано выше, и высевают на среды с ингибитора­ми.

Порции молока из каждой четверти вымени центрифугируют при 1000-3000 об/мин в течение 10-20 минут. Посев производят из осадка и слоя сливок на селективные среды. Рекомендуется исследовать пробы молока, взятые от животного несколько раз с интервалом 5-10 суток.

Мочу (75-100 мл) перед посевом на питательные среды центрифугиру­ют при 3000 об/мин в течение 10 минут и осадок высевают на селективные среды. Возможна концентрация бруцелл путем добавления к моче бруцеллез­ной агглютинирующей сыворотки (1-2%) с титром не менее 1:800. После непродолжительного инкубирования мочу центрифугируют и осадок высе­вают на питательные среды.

Эффективен посев в жировые куриные яйца при исследовании крови, мочи и других материалов, содержащих малое количество возбудителя. Исполь­зуют свежие куриные яйца (3-5 дней). На каждый материал берут 3-5 яиц. Исследуемый материал в количестве 0,2 мл вводят в желточный мешок, ин­кубируют при 37° С в течение пяти суток, вскрывают, набирают пастеровс­кими пипетками белок и желток и высевают на плотные и жидкие питатель­ные среды (методика Одесского ИМ имени И.И. Мечникова).

Кровь высевают сразу после взятия в жидкие питательные среды с антикоагулянтом (2%-ный цитрат натрия). В 100 мл среды засевают около 20 мл крови. В качестве питательной среды используют бульон Альбими, триптозный бульон, среду Первушина, МПБ с 1% глюкозы и 2-3% глицерина. Хо­рошие результаты получаются при посеве на комбинированные среды (ме­тод Кастанеда). Например, в колбе (пробирке) скашивают агар (ППГГА), добавляют какую-либо жидкую питательную среду, чтобы она покрывала половину поверхности агара, и в нее засевают кровь (П.А. Триленко 1976). Через 4-6 дней культивирования поверхность агара увлажняют жидкой средой и в последующем периодически просматривают с целью обнаружения колоний бруцелл.

Характер роста бруцелл на питательных средах.Колонии бруцелл появляются на поверхности плотных питательных сред на 5-10-е, реже — на 20-25-е сутки. В первичных посевах формируются, как правило, колонии S-формы: бесцветные, круглые, выпуклые, с ровными краями, гладкой маслянистой поверхностью, полупрозрачные, диаметр коло­ний в зависимости от типа питательной среды от 0,1-0,7 до 2,0-2,5 мм и более. По мере старения колонии теряют прозрачность, мутнеют и темнеют за с 1ст появления пигмента. На ППГГА в проходящем свете колонии имеют ян-гарный оттенок.

При изучении колоний в косопроходящем пучке света они имеют зеленовато-серо-голубой цвет с неболь­шим красновато-желтым центром.

При исследовании материала от животных с хроническим течением бру­целлеза могут быть выделены бруцеллы в R-форме, отличающиеся не толь­ко по форме, но особенно по характеру свечения колоний.

В жидких питательных средах бруцеллы растут с равномерным помут­нением среды, медленным появлением небольшого, голубоватого в прохо­дящем свете пристеночного кольца или кольца и поверхностной пленки. На дне пробирки постепенно образуется рыхлый осадок.

Морфология и тинкториальные свойства клеток бруцелл в культуре.Из подозрительных колоний делают мазки, окрашивают по Граму, Коз­ловскому. Клетки бруцелл в культуре не отличаются по морфологии от кле­ток возбудителя в исходном материале (см. выше), жгутиков не имеют.

Идентификация бруцелл на уровне рода.Принимают во внимание время появления макроскопически видимого роста, на питательных средах — потребность в СО₂.Согласно действующему в РФ «Наставлению по диагностике бруцел­леза животных» (2000), при обнаружении в посевах бактерий, типичных по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам для бру­целл, проводят их серологическую идентификацию. Для целей серологи­ческой идентификации используют двухсуточные агаровые культуры ис­следуемых бактерий и диагностические агглютинирующие R- и S-сыворотки. На предметном стекле в каплях S- и R-сывороток, физиологического раствора суспензируют бактериологической петлей испытуемую культу­ру. Для контроля R-сыворотки проверяют в разведении, указанном био­фабрикой с роз-бенгал и цветным антигенами; S-сыворотки — в титре, ука­занном на коробке с цветным бруцеллезным антигеном и в неразведенном виде с роз-бенгал антигеном.

Если испытуемая культура дает положительную РА (два креста и более) с обеими или любой одной диагностической сывороткой и отрицательный ре­зультат с физиологическим раствором, то ее относят к бруцеллам.

Оценка результатов РА проводится при условии, что R- и S-сыворотки дают в контролях с гомологичными антигенами агглютинацию интенсив ностью минимум на три креста, при отсутствии реакции с гетерологичными антигенами. Агглютинация с R-сывороткой происходит замедленно, с ней всегда реагируют культуры В. ovis и В. canis.

Для идентификации выделенной культуры на уровне рода также иссле­дуют оксидазную, каталазную активность, наличие жгутиков, образова­ние индола, уреазы, способность редуцировать нитраты, агглютинировать в бруцеллезной позитивной сыворотке, а также патогенность для лабора­торных животных (см. «Биопробу»).

Бруцеллы не обладают подвижностью, образуют каталазу, обычно ок-сидазу (кроме В. ovis и В. neotomae) и уреазу (кроме В. ovis и некоторых штаммов В. melitensis), редуцируют нитраты, не образуют индол.

Наставлением по диагностике бруцеллеза животных (2000) в РФ пре­дусмотрено использование полимеразной цепной реакции.

Идентификация бруцелл на уровне вида и биовара.Критерии дифференциации видов и биоваров бруцелл представлены в таблицах.

Определение вида и биовара выделенной культуры бруцелл дает воз­можность более детально проводить эпизоотологический и эпидемиологи­ческий анализ.

Разработанные методы дифференциации видов бруцелл предполагают работу с бруцеллами в S-форме (кроме В.ovis и В. canis), поэтому перед проведением таких исследований проверяют популяцию на диссоциацию методом окраски колоний кристаллвиолетом по Уайту-Вильсону. Для этого готовят взвесь 48-часовой изучаемой агаровой культуры в стериль­ном физиологическом растворе концентрацией 0,5-1 млрд. микробных клеток в 1 мл по бруцеллезному стандарту мутности. Одну каплю взвеси засевают последовательно шпателем на поверхность агаровой среды в трех чашках Петри.

Посевы инкубируют 5 суток при 37-38°С. При таком методе посева на плотной среде вырастает достаточно большое количество изолирован­ных колоний бруцелл. В чашки Петри с колониями осторожно пасте­ровской пипеткой наливают рабочий раствор кристаллвиолета 1 тонким слоем. Через пять минут краситель осторожно отсасывают пипеткой и сливают в емкость с дезраствором. Затем колонии изучают при помощи стереоскопического микроскопа.

Диссоциированные колонии имеют цвет от темно-фиолетового до свет­ло-синего, S-колонии окрашиваются в светло-желтый, реже — в светло-зеленый цвет. Для изучения отвивают несколько колоний в
S-форме.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Изобретение относится к биотехнологии, в частности касается способа получения питательных сред, обеспечивающих оптимальные условия для жизнедеятельности бруцеллезного микроба, и может быть использовано в медицинской микробиологии. Питательная среда (жидкая) для культивирования бруцеллезного микроба содержит в качестве питательной основы гидролизат говяжьего мяса, в качестве стимулирующей рост добавки липоевую кислоту, хлористый натрий, глюкозу, цитрат натрия, глицерин, дистиллированную воду. Изобретение позволяет повысить ростовые свойства питательной среды. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к питательным средам, которые создают оптимальные условия для жизнедеятельности и транспортировки бруцеллезного микроба. Изобретение целесообразно использовать для диагностики бруцеллеза у людей.

Известна питательная среда, основой которой является бульон Мартена, который готовят следующим образом, г/л: мясная вода 0,5 л; пептон Мартена 0,5 л; хлористый натрий 3,0; 20%-ная гидроокись натрия 3,0; рН 7,6±0,1 (Микробиология Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. — М.: Медицина, 1987).

Недостатком данной среды является получение недостаточного количества колоний бруцеллезного микроба, посеянных с бульона Мартена на пластинках агара.

Наиболее близким к предлагаемой питательной среде является заменитель среды Альбими, содержащий 20 г пептона Дифко, 20 см 3 дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы, 0,1 г натрия бисульфита, дистиллированную воду 1 л (Сидоров М.А., Скородумова Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. — М.: Колос, 1995, с.183).

Недостатком данной среды является то, что при пересеве с заменителя среды Альбими на пластинки агара вырастает меньшее количество колоний бруцеллезных бактерий.

Целью изобретения является получение питательной среды (жидкой) для культивирования бруцелл.

Сущность изобретения заключается в том, что питательная основа содержит гидролизат говяжьего мяса, его основные характеристики: рН среды 7,2, общий азот 902 мг%, аминный азот 600 мг%, процент расщепления 74, % натрия хлорида 0,086, % пептона 1,2, Са 4,2 мг%, Mg 5,16 мг%, фосфор общий 96,8 мг%, фосфор неорганический 56,4 мг%, сухой остаток 10,0±1,5%, редуцирующие вещества 364 мг%, и стимулирующую добавку, причем в качестве стимулирующей добавки используют липоевую кислоту при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Гидролизат говяжьего мяса 160,0-180,0

Дистиллированная вода Остальное

В отличие от заменителя среды Альбими питательная среда для культивирования бруцелл значительно увеличивает количество высеваемых микробов бруцеллеза. По ростовым свойствам предлагаемая среда превосходит аналог.

Использование липоевой кислоты является отличительным признаком предлагаемой питательной среды и позволяет активизировать наличие основного структурного элемента клеток оксидоредуктаз. Повышенное содержание их в мембранах способствует активации процесса переноса водорода Н и молекул различных веществ, являясь дополнительным источником энергии, причем в экономичной форме, в которой организм запасает эту энергию. Липоевая кислота выступает в качестве кофермента систем, осуществляющих окислительное декарбоксилирование а-кетокислот, устраняет токсические продукты обмена или проникающих извне ядов путем окисления. Кислород окисляет липоевую кислоту до сульфоксида, который лучше усваивается.

В новом качестве липоевая кислота проявляет свое действие, находясь в питательной среде для культивирования микробов бруцеллеза, влияя на дыхательную активность клеток бруцеллезного микроба, что приводит к утилизации питательной основы и в целом обеспечивает активацию роста.

Питательную среду готовят следующим образом.

Среду нагревают при непрерывном помешивании до полного растворения ее компонентов, фильтруют через тканевый фильтр, затем устанавливают рН 7,3±0,1 гидроокисью натрия 20% и разливают в стерильные пенициллиновые флаконы по 5 мл, закупоривают стерильными резиновыми пробками, накрывают алюминиевыми колпачками, вальцуют. Стерилизуют при 0,3 атм 20 мин. Готовую среду используют для выращивания бруцелл. Испытуемые культуры — Вr.melitensis 16 M, Br.abortus 544, выращенные на пластинках плотного агара рН 7,2±0,1 при температуре 37°С в течение 24 ч. Из суточных культур готовили 1 млрд взвесь м.т. тест-штаммов, равной 10 ед. по оптическому стандарту мутности по ОСО ГИСК им Л.А.Тарасовича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 100; 500; 1000 м. к. Из данных разведений взвеси культур высевали по 0,1 мл по 3 флакона. Посевы инкубировали в условиях термостата при 37°С. Учет проводили через 48 ч.

Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 160,0; натрий хлористый 4,0; глицерин 15,0; глюкоза 5,0; цитрат натрия 4,0; липоевая кислота 0,4; дистиллированная вода остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара для двух видов бруцелл, высеянных из флаконов, составило соответственно при посевной дозе 10; 50; 100 м.к. — данные представлены в таблице.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 170,0; натрий хлористый 5,0; глицерин 20,0; глюкоза 10,0; цитрат натрия 5,0; липоевая кислота 0,5; дистиллированная вода остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара для двух видов бруцелл, высеянных из флаконов, составило соответственно при посевной дозе 10; 50; 100 м.к. — данные представлены в таблице.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 180,0; натрий хлористый 6,0; глицерин 25,0; глюкоза 15,0; цитрат натрия 6,0; липоевая кислота 0,6; дистиллированная вода остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара для двух видов бруцелл, высеянных из флаконов, составило соответственно при посевной дозе 10; 50; 100 м.к. — данные представлены в таблице.

Таким образом, вариант питательной среды № 2 является оптимальным по количеству подобранных ингредиентов, они в совокупности с липоевой кислотой обеспечивают рост культур Br. melitensis М 16 и Вr. abortus 544 и позволяют получить конечную концентрацию бактерий, значительно превышающую их посевную дозу.

Питательная среда (жидкая) для культивирования бруцелл, содержащая питательную основу, хлористый натрий, глюкозу, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит цитрат натрия, глицерин, в качестве стимулирующей добавки — липоевую кислоту, а в качестве питательной основы — гидролизат говяжьего мяса при следующем содержании ингредиентов, г/л:

Гидролизат говяжьего мяса 160,0-180,0

Дистиллированная вода Остальное

MM4A — Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 25.03.2006

Извещение опубликовано: 20.02.2007 БИ: 05/2007

источник

Качество питательных сред и условия культивирования для получения бруцелл в первой генерации имеют очень важное значение не только для количества результативных исследований, но и для выделения возбудителя болезни с наименьшими признаками диссоциации.

Стабильность последующих генераций также зависит от условий культивирования и состава питательных сред. Поэтому хотя изготовление питательных сред производится строго по рецептам, все же необходимо в диагностических лабораториях отрабатывать методику приготовления и контроля питательных сред. Требуется испытывать их качество на референтных штаммах бруцелл. Это особенно важно при использовании нестандартных ингредиентов среды.

В 5-м докладе Комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ предлагается испытать основные питательные среды (в которые не добавляются ингибиторы) на рост клеток 2-го биотипа Br. abortus при незначительном их содержании (5 -10 клеток) о засеваемом материале.

Наиболее популярной средой, рекомендованной указанным Комитетом, является селективный сывороточно-декстрозный агар, на котором Br. abortus, Br. melitensis и Br. suis и их биотипы растут лучше, чем на других средах. Эта среда содержит 5% сыворотки крови и следующие антибиотики: бацитроцин, полимиксин В и циклогексимид. Кроме того, амфотериксин может заменить циклогексимид или может быть добавлен к нему.

Считается, что добавление красок может частично препятствовать росту биотипов основных видов бруцелл, но краски все же рекомендуются.

Ниже приводится методика изготовления питательных сред, использующихся в нашей стране.

Плотный печеночно-глюкозно-глицериновый агар (ППГГА). Эту среду применяют для исследования и культивирования Br. abortus, Br. melitensis и Br. suis.

Берут 400 г свежей говяжьей печени, освобождают ее от жора и пленок, измельчают на куски по 5—8 г, добавляют 0,5 л водопроводной воды и кипятят в течение 1 ч (при большом объеме мечет, загружают в кипящую воду). Затем фильтруют через нейлоновый или ватный фильтр.

Этот печеночный отвар разводят пополам водопроводной водой, добавляют 1% пептона, 0,5% химически чистого хлорида натрия, 2,5% агара и 17 мл на 1 л 10%-ного раствора гидрокарбоната натрия.

Затем среду автоклавируют при 115° С в течение 20 мин, отстаивают в автоклаве 3—4 ч до осаждения грубых частиц и фильтруют в горячем виде через ватный или нейлоновый фильтр, устанавливают pH 7—7,2. В этот печеночный агар добавляют 1 % виноградного сахара и 2—3% глицерина. Среду разливают в пробирки или посевные колбы и стерилизуют однократно при температуре 110° С в течение 20— 25 мин.

На этой свежей (до 3-суточной давности) среде без ингибиторов при первичном посеве хорошо растут бруцеллы из свежих или замороженных абортированных плодов и отдельных органов животных, убиваемых с диагностической целью, содержимого полостей, абсцессов. Длительные пересевы музейных штаммов не вызывают большой их изменчивости. Эту же среду применяют при бактериостатическом методе дифференциации бруцелл.

Полужидкий сывороточный агар. Данную среду готовят по следующей прописи. Берут печеночного отвара (см. выше) и мясного настоя по 25%, водопроводной воды — 50%, добавляют пептона 1%, хлорида натрия — 0,5%, агара — 0,15—0,2%, устанавливают pH 7—7,2. Смесь разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 115° С в течение 20—25 мин. Хранят среду при 0—4° С. Перед употреблением к среде добавляют 10% стерильной овечьей или бычьей сыворотки и разливают в пробирки,

Сывороточно-декстрозный агар. К 835 мл дистиллированной воды добавляют 15 г агара, 10 г пептона, 5 г химически чистого хлорида натрия и 165 мл мясной воды. После смешивания содержимое колбы обрабатывают текущим паром в течение 1 ч. Устанавливают pH 7,8. Затем среду автоклавируют в течение 30 мин при 127° С (0,2 М/Па) для осаждения фосфора. После автоклавирования среду фильтруют через бумажный фильтр, регулируют pH до 7,4, разливают смесь в мерную посуду, стерилизуют при 116 С в течение 15 мин. Перед употреблением среду расплавляют, остуживают до 50 С, после чего к ней добавляют нормальную лошадиную или бычью сыворотку и раствор декстрозы. Эту смесь предварительно фильтруют через фильтр Зейтца. Окончательная концентрация сыворотки в среде должна быть 5%, декстрозы— 1%.

Печеночный агар Хеддлесона. Вначале готовят печеночный отвар. К 500 г свежего фарша из говяжей печени (без жира и пленок) добавляют 500 мл воды, затем кипятят в течение 1 ч при помешивании, фильтруют через ватно-марлевый или нейлоновый фильтр и стерилизуют в автоклаве.

Для изготовления агаровой среды берут 500 мл воды, 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 20 г агара и автоклавируют в течение 30 мин, затем добавляют к среде 500 мл печеночного отвара, охлаждают до 60° С, устанавливают pH 7. К 1 л среды добавляют один яичный белок, автоклавируют в течение 30 мин при 120° С, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH 7, разливают и стерилизуют в автоклаве при 115° С в течение 30 мин.

Среда Первушина для выделения гемокультур. Мясо-пептонный бульон (МПБ), содержащий 1% глюкозы и 4% глицерина, разливают в колбы по 100 мл. Затем вводят в них по 0,5 г гигроскопической стерильной ваты. Стерилизуют и используют для посева крови.

Полужидкий агар (ПЖА) и МПБ с добавлением 1 % глюкозы и 2—3% глицерина без введения в колбы комков ваты могут быть использованы для выращивания бруцелл из крови животных и других материалов, пробы которых в стерильном состоянии.

Картофельный агар Корнеевой. Берут хорошо очищенный картофель в количестве 500 г, нарезают ломтиками, варят в 1 л водопроводной воды. Затем отвар фильтруют через слой гигроскопической ваты и доливают водой до 1 л. На 1 л фильтрата добавляют следующие ингредиенты: хлорида натрия — 5 г, пептона — 10 г, глицерина — 30 г, глюкозы—10 г, ангара — 20 г для пробирок и 30 г для колб. Смесь варят до расплавления агара, затем ее отстаивают в теплом месте. В остывшем агаре нижний слой с осадком срезают, а прозрачную часть агара режут кусочками и расплавляют. Расплавленный агар фильтруют через ватный фильтр, устанавливают pH 7. Стерилизуют при 115° С в течение 20—30 мин и устанавливают pH 6,8.

Среда Кроля. Указанную среду применяют при выделении культур бруцелл из молока. К печеночному агару Хеддлесона добавляют насыщенный раствор генцианвиолета в соотношении 1 : 100000. Выращивают первые 15 ч в обычных условиях, а затем при наличии в сосуде 10% СO₂.

Среда Moore и др. Эту среду применяют для выделения культуры Br. canis из крови собак. В колбе вместимостью 100 мл готовят скошенный триптозный агар (коммерческий). Затем в эту же колбу вводят 15 мл бульона, приготовленного из мозга и мышцы сердца крупного рогатого скота. Затем берут по 2 мл крови в асептических условиях из яремной вены собак и тут же добавляют ее в среду, тщательно смешивают и инкубируют 3 нед, придав колбам наклонное положение, чтобы часть плотной среды была открыта.

Наиболее целесообразными являются посевы на плотные среды свежевзятого материала. На плотных средах растут изолированные колонии, что обеспечивает меньшую их диссоциацию по сравнению с жидкими средами. Отсев на плотную среду с жидких сред следует производить через 2—3-е сут. При выращивании культуры бруцелл на жидкой среде, в которой находились одновременно посторонние микроорганизмы, чаще обнаруживаются измененные варианты.

Из загрязненного посторонней микрофлорой материала, например, несвоевременно доставленные абортированные плоды (направленные в незамороженном и неохлажденном виде через сутки после выкидыша), куски плаценты, отдельные органы животных или плодов, моча, содержимое полостей трупов и др., лучше производить параллельно биопробу на морских свинках или белых мышах.

Посевы следует делать на ППГГА с содержанием в нем генцианвиолета или кристаллвиолета, которые в виде насыщенного, водного раствора вводят в среду в соотношении 1 : 200000.

При посевах крови в комбинированных условиях (косяк ППГГА + жидкая среда) СO₂ может быть введен в колбу через резиновую нетолстую пробку, под давлением, через иглу со шлангом, соединенным с источником СO₂.

Посевы на куриные эмбрионы и жировые (неоплодотворенные) яйца кур лучше производить только материалом, взятым в стерильных условиях.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

источник

Для выделения и поддержания культур бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон, печеночно-глюкозо-глицериновый бульон, картофельный агар, мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар, печеночно-глюкозо-глицериновый агар, сывороточно-декстрозный агар, эритрит-агар, агар Альбими и другие среды. При выделе­нии бруцелл из загрязненного материала в среды добавляют генцианвиолет 1:100-250 тыс., малахитовый зеленый — 1:500 тыс., кристаллвиолет — 1:100 тыс.

Мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ). К 610 мл мясной воды добавляют 305 мл печеночного настоя, 10 г пептона, 5 г натрия хлорида. Кипятят 60 минут, водой доводят объем до первоначального. Фильтруют, разливают в пробирки (колбы), стерилизуют при 110°С 30 минут.

Печеночно-глюкозо-глицериновый агар. К 900 мл печеночного настоя добавляют 9 г пептона, 5 г натрия хлорида, 25 г агар-агара. Ва­рят в автоклаве 60 минут при 100-110°С. Фильтруют, устанавливают рН 7-7,2. Добавляют 20 г глюкозы и 25 мл глицерина. Разливают в пробирки, стерилизуют при 110°С 30 минут.

Печеночно-глюкозо-глицериновый бульон готовят так же, как и предыдущую среду, но агар не добавляют.

Печеночно-сывороточный и печеночно-аминопептидный агар. К 1 л печеночного настоя добавляют 10 г пептона, 5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара, 17 мл 10%-ного раствора натрия двууглекислого. Автоклавируют при 115°С 20 минут. Фильтруют, устанавливают рН 7-7,2. Добавляют 10 г глюкозы и 20 мл глицерина. Разливают по сосудам, стерилизуют при 110°С 20 минут. Перед использованием в расплавлен­ную и охлажденную до 45°С среду вносят 10-20% стерильной сыво­ротки крови крупного рогатого скота или 10-15% аминопептида Среду разливают в пробирки или бактериологические чашки.

Полужидкий печеночно-сывороточный и печеночно-амино­пептид­ный агар. К 500 мл мясной воды добавляют 500 мл печеночного настоя, 10 г пептона, 5 г натрия хлорида и 2 г агар-агара. Кипятят до расплавления агара. Устанавливают рН 7-7,2. Разливают по сосудам и стери­лизуют при 115°С 30 минут. Перед использованием в подогретый до 45°С агар добавляют 10% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота или барана или аминопептида.

Сывороточно-декстрозный агар. К 835 мл дистиллированной воды добавляют 20 г агар-агара, 10 г пептона, 5 г натрия хлорида, 165 мл мясной воды. Кипятят до расплавления агара. Фильтруют, устанавли­вают рН 7,4. Разливают в колбы и стерилизуют 15 минут при 115°С. Перед использованием в расплавленный и охлажденный до 45°С агар вносят 10% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота или лошади, 1% декстрозы.

Картофельный агар. В 1 л дистиллированной воды 15 минут варят 500 г очищенного и мелко нарезанного картофеля. Отвар фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем водой до 1 л. Добавляют 10 г пептона, 5 г натрия хлорида, 25 г агар-агара, кипятят до расплав­ления агара. Устанавливают рН 7,2. Агар оставляют для застывания; прозрачную верхнюю часть отрезают, расплавляют, фильтруют через ватный фильтр. Корректируют рН до 7,2. Добавляют 10 г глюкозы и 30 мл глицерина. Разливают по колбам или пробиркам. Стерили­зуют при 115°С 20 минут. Готовая смесь должна иметь рН 6,8.

Среда Альбими. В 1 л дистиллированной воды растворяют 2 г пепто­на, 1 г декстрозы, 5 г натрия хлорида, 0,1 г натрия бисульфата. Добав­ляют 2 мл дрожжевого аутолизата. При изготовлении плотной среды добавляют 2-2,5% промытого агар-агара. Стерилизуют при 115°С 30 минут.

Заменитель среды Альбими. К 1 л дистиллированной воды добавля­ют 20 г пептона Дифко, 20 мл дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 20 г промытого агар-агара или агара Дифко. Устанавливают рН 7,3, Нагре­вают до расплавления агара, фильтруют через ватный фильтр. В горя­чую среду добавляют 1 г глюкозы и 0,1 г натрия бисульфата. Корректи­руют рН до 7,2—7,3. Разливают в колбы или пробирки, стерилизуют 20 минут при 110°С.

Для приготовления дрожжевой воды в 1 л дистиллированной воды суспендируют 1 кг пекарских (хлебных) дрожжей, кипятят 5-10 минут, фильтруют через плотный фильтр. Хранят в темном месте под хлоро­формом не более 2 недель.

Селективные среды для выделения бруцелл из молока и других материалов (рецепты фирмы Oxoid). К расплавленным и охлажденным до 55-60°С агаровым средам (сывороточно-декстрозный или кровя­ной агары с 5% лошадиной сыворотки и 1% декстрозы) добавляют следующие антибиотики (из расчета на 1 л среды): полимиксин В — 500 ИЕ, бацитрацин – 25 000 ИЕ, циклогексимид — 100 мг, налидиксовая кислота — 5 мг, нистатин — 100 000 ИЕ и ванкомицин — 20 мг. Антибиотики суспендируют в 10 мл метанола. Вносят суспензию в среду и тщательно перемешивают.

Среда с красителями для дифференциации видов бруцелл. В пред­варительном опыте с использованием эталонных культур бруцелл разных видов определяют необходимую концентрацию красителей в среде, позволяющую дифференцировать виды.

В 20 мл этанола растирают 0,1 г тионина и отдельно — основного фуксина. Доводят объем красок до 100 мл дистиллированной водой. Полученные разведения красителей 1:10 000 добавляют в расплавлен­ный и охлажденный до 45-60°С сывороточно-декстрозный агар, пере­мешивают и разливают в чашки Петри. Готовят суспензию из 48-часовой агаровой культуры исследуемо­го штамма бруцелл на 0,8%-ном растворе натрия хлорида концентра­цией 10 10 бактериальных клеток в 1 мл. Одну каплю суспензии засе­вают штрихом на агар с красителем (отдельно с тионином и фукси­ном). Одновременно эту суспензию засевают на агар без красителя. Инкубируют до появления роста культуры на агаре без красителей. Учитывают результат по наличию роста на агаре с красителями.

Дифференциация S- и R-колоний бруцелл по Уайту-Вильсону. На подсушенный в течение 24 ч агар Альбими в чашке Петри засевают исследуемую культуру бруцелл и инкубируют при 37°С до появле­ния колоний. Затем на колонии наливают водный раствор кристаллвиолета и выдерживают 15 с. Раствор краски сливают в чашку с дезин­фицирующим раствором, а колонии рассматривают под лупой (или при малом увеличении микроскопа). Колонии S-формы светлого, а R-формы — фиолетового цвета.

Печеночный настой. К 1л водопроводной воды добавля­ют 500 г фарша из свежей печени крупного рогатого скота. Настаива­ют 3 ч при 25-30°С или 6-10 ч при 4°С. Кипятят, помешивая, 1-2 ч, доливают водой до первоначального объема. Осевший фарш удаля­ют. Настой фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в кол­бы и стерилизуют при 115°С 20 минут.

Мясная вода. К 1л водопроводной воды добавляют 500 г фарша из свежего мяса крупного рогатого скота. Настаивают при 4°С 15-18 ч. Фарш удаляют. Настой кипятят 30-40 минут, доливают водой до первоначального объема. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в колбы. Стерилизуют при 120°С 20 минут.

источник

Бруцеллез (синонимы: мальтийская лихорадка, болезнь Банги) — инфекционно-аллергическое заболевание зоонозной природы, обусловленное различными видами бруцелл, протекает в острой, подострой и хронических формах, клинически проявляется лихорадкой, характеризуется поражением различных органов и систем: нервная, сосудистая, опорно-двигательная, половая и другие.

Бруцеллез. Этиология.

Бруцеллез человека может быть обусловлен 4 видами бруцелл.

— Brucella melitensis в последние годы является наиболее частой причиной болезни, подразделяется на 3 биотипа, основными хозяевами являются овцы и козы.
— Brucella abortus встречается несколько реже, подразделяется на 9 биотипов; основной хозяин — крупный рогатый скот.

— Brucella suis, она подразделяется на 4 биотипа, основным хозяином типов 1, 2 и 3 являются свиньи (типа 2, кроме того, и зайцы), хозяином 4 биотипа являются северные олени. Вызывает форму, которая протекает легче, часто дает развитие хронических форм.
— Brucella canis основным хозяином являются собаки, для человека непатогенна
— Brucella ovis основным хозяином являются овцы, для человека непатогенна
— Brucella neotomae основным хозяином являются кустарниковые крысы, для человека непатогенна

Бруцеллы отличаются выраженным полиморфизмом, они могут быть шаровидной, овальной и палочковидной формы. Размер их равен 0,3—0,6 мкм для кокковых форм и 0,6—2,5 мкм для палочковидных форм. Они неподвижны, спор не образуют, жгутиков не имеют. Грамотрицательны, хорошо красятся анилиновыми красками. Растут медленно, на питательных средах рост бруцелл регистрируется через 1—3 нед. Отличаются значительной изменчивостью и переходят из S-формы в R- и L-формы.

Бруцеллы устойчивы во внешней среде. В воде они сохраняются свыше 2 мес, в молоке — 40 дней, в брынзе —2 мес, в сыром мясе — 3 мес, в засоленном — до 30 дней, в шерсти — до 4 мес. Бруцеллы погибают при нагревании и под воздействием многих дезинфицирующих веществ. Чувствительны к антибиотикам тетрациклиновой группы, стрептомицину, рифампицину, эритромицину.

Бруцеллез. Культивирование.

Облигатные аэробы. B.аbortus лучше растет в присутствии 5- 10% СО₂. Растут при температуре от 6 до 45грС, оптимальная температура – 37грС. Оптим pH 6,8-7,2 Бруцеллы адаптировались к внутриклеточному существованию, поэтому для их культивирования необходимы сложные питательные среды. Добавление в питательную среду 5% глицерина или сыворотки стимулирует рост бруцелл. Оптимальная среда для культивирования – печеночный агар и печеночный бульон. В первых генерациях, при выделении из зараженного организма, бруцеллы растут медленно – колонии формируются через 1-3 недели после посева. Лабораторные штаммы, адаптированные к питательным средам, вырастают через 24-48 часов.

Колонии бруцелл бесцветные, с перламутровым блеском, гладкие, выпуклые. Размеры колоний варьируют от очень мелких (0,01-0,5 мм) до крупных (3-4 мм). На жидких средах вызывают помутнение. Хорошо растут в неоплодотворенных куриных яйцах, желточном мешке куриного эмбриона.

Бруцеллез. Эпидемиология.

Бруцеллез является зоонозом. От больного человека здоровому бруцеллы не передаются. Хотя к бруцеллезу чувствительны некоторые дикие животные (зайцы, северные олени), природных очагов инфекции не наблюдается. Резервуаром и источником инфекции являются домашние животные (овцы, козы, коровы, свиньи, реже собаки). Бруцеллез широко распространен во многих странах мира, особенно в тех, где развито животноводство. В СССР наибольшая заболеваемость наблюдалась в Казахстане и республиках Средней Азии. В России бруцеллез встречается в Краснодарском и Ставропольском краях, на Южном Урале и в других областях.

Заражение человека от больных животных происходит контактным, алиментарным и аэрогенным путями. Заражение контактным путем особенно часто происходит при попадании на кожу околоплодной жидкости (помощь при отелах, ягнении, при уходе за новорожденными телятами, ягнятами). Часто заражаются ветеринарные работники, телятницы, чабаны и др. Заражение может наступить и при контакте с мясом инфицированных животных, с навозом. Бруцеллы проникают через малейшие повреждения кожи.

Апиментарное заражение часто происходит через сырое молоко, а также при употреблении молочных продуктов (брынза, сыр, масло). Аэрогенное заражение может наступить при попадании в дыхательные пути пыли, содержащей бруцеллы (в местах выпаса и в загонах для содержания овец), а также в лабораториях при нарушении техники безопасности. Этот путь инфицирования наблюдается относительно редко. Чаще заболевают лица трудоспособного возраста (18

50 лет). В большинстве случаев это профессиональные заболевание.

Бруцеллез. Ферментативная активность.

Сравнительно невысокая. Характеризуются слабой биохимической активностью, не обладают гемолитическими свойствами. Для определения вида бруцелл используют их чувствительность к бактериостатическому действию красителей – основного фуксина и тионина, а также способность продуцировать сероводород.

Бруцеллез. Антигенная структура.

Содержат в разных соотношениях А и М-антигены, а также поверхностный L-антиген, сходный с Vi-антигеном сальмонелл. Разные виды бруцелл отличаются друг от друга лишь количественным содержанием этих антигенов, поэтому серологическая дифференциация бруцелл возможна только путем использования монорецепторных адсорбированных сывороток.

Бруцеллез. Факторы патогенности.

Бруцеллы не образуют экзотоксин. Одним из основных факторов вирулентности является эндотоксин, представляющий собой липополисахарид клеточной стенки. Продуцируют гиалуронидазу, каталазу, уреазу. Показано, что бруцеллы выделяют низкомолекулярные продукты, ингибирующие слияние фаго- и лизосом. Адгезивные свойства связаны с белками наружной мембраны.

Бруцеллез. Резистентность.

Относительно устойчивы в окружающей среде. Во внешней среде (на траве) бруцеллы сохраняется до 3-4 месяцев, также летом сохраняется на шерсти животных, на молочных продуктах до 40 дней (брынза), в мясе животных (сырое и соленое) до 1 мес. Сохраняются во влажной почве и воде от 2-3 до 4,5 месяцев; в непроточных водоемах – до 3 месяцев; в молоке – до 273 дней; в масле – до142 дней; в сыре – до 1 года; в брынзе – до 72 дней; в кефире – до 11 дней. Чувствительны к действию высокой температуры: при 55грС погибают в течение 1 часа, при 70грС – 10 минут, при кипячении – через несколько секунд. Также погибают при действии дезсредств, но довольно устойчивы к низким t. Прямые солнечные лучи вызывают гибель бруцелл только через 2-3 дня.

Чувствительна к антибиотикам: тетрациклин, эритромицин, левомицетин, стрептомицин, бисептол. L- формы к этим антибиотиками не чувствительны. Дезинфектанты также губительно действуют на бруцеллы — хлорамин 0.1%, хлорная известь 0.2% ( вызывает гибель через несколько минут).

Бруцеллез. Патогенез.

Определяется многими факторами: видом Brucella, их вирулентностью (Brucella miletensis — обладает максимальной вирулентностью), входными воротами, дозой, состоянием организма. По сути является инфекционно-аллергическим заболеванием, напоминает по клинике ревматизм. Инфицирующая доза составляет всего от 10 до 100 микробных тел. Воротами инфекции являются микротравмы кожи, слизистые оболочки органов пищеварения и респираторного тракта. На месте ворот инфекции каких-либо изменений не развивается. По лимфатическим путям бруцеллы достигают регионарных лимфатических узлов, но и здесь выраженные изменения отсутствуют.

Лимфаденопатия при бруцеллезе является генерализованной, что свидетельствует о гематогенной диссеминации микробов. Размножение и накопление микробов при бруцеллезе происходит преимущественно в лимфатических узлах, из которых бруцеллы периодически поступают в кровь.

Для бруцеллеза характерна выраженная аллергическая перестройка организма, резко выражена гиперчувствительность замедленного типа, которая сохраняется длительное время даже после очищения организма от возбудителя. Аллергия играет большую роль в формировании вторичных очагов инфекции. Бруцеллез отличается склонностью к хроническому течению, что связано с длительным персистированием бруцелл в организме.

До введения в лечебную практику антибиотиков бруцеллы сохранялись в организме до двух лет (более длительное течение болезни было связано с реинфекцией). Под влиянием антибиотиков часть бруцелл может переходить в L-формы и длительно сохраняться внутриклеточно.

У людей, перенесещих бруцеллез формируется иммунитет, но он не очень длительный и через 3-5 лет возможна реинфекция. Не каждое инфицирование приводит к развитию болезни. Ответная реакция зависит, вероятно, от состояния иммунной системы. У некоторых лиц инфекция протекает без каких-либо клинических симптомов (первично-латентная), у других развивается острый инфекционный процесс или с самого начала протекает как хронический.

У лиц с очень слабым иммунитетом даже живая бруцеллезная вакцина может вызвать реакцию, напоминающую заболевание бруцеллез. На проявления болезни существенно влияет и вид бруцелл, вызвавший заболевание. Наиболее тяжелое течение бруцеллеза связано с Br. melitensis, тогда как остальные бруцеллы вызывают более легкие заболевания.

Бруцеллез. Симптомы и течение.

Инкубационный период при остром начале бруцеллеза может продолжаться около 3 нед, однако если бруцеллез начинается как первично-латентный, который затем переходит в клинически выраженную форму, то инкубация может длиться несколько месяцев. Многообразие клинических проявлений болезни обусловило необходимость разработки классификации клинических форм. Наиболее обоснованной и получившей наибольшее распространение является классификация клинических форм бруцеллеза, предложенная Н. И. Рагозой (1952). В ней был использован клинико-патогенетический принцип. Н. И. Рагоза показал фазность динамики бруцеллезного процесса.

Он выделил 4 фазы:
— компенсированной инфекции (первично-латентная);
— острого сепсиса без местных поражений (декомпенсация);
— подострого или хронического рецидивирующего заболевания с образованием местных поражений (декомпенсация или субкомпенсация);
— восстановления компенсации с остаточными явлениями или без них.

Бруцеллез имеет 5 клинических форм (они тесно связаны с фазами бруцеллезного процесса):
1) форма первично-латентная;
2) форма остросептическая;
3) форма первично-хроническая метастатическая;
4) форма вторично-хроническая метастатическая;
5) форма вторично-латентная.

В качестве отдельного варианта выделена септико-метастатическая форма, к которой относятся те случаи, когда на фоне остросептической формы появляются отдельные очаговые изменения (метастазы). В классификации показана динамика дальнейшего развития каждой выделенной формы.

Первично-латентная форма бруцеллеза характеризуется состоянием практического здоровья. Включение ее в классификацию клинических форм обусловлено тем, что при ослаблении защитных сил организма она может перейти или в остросептическую, или в первично-хроническую метастатическую форму. При тщательном обследовании лиц с этой формой бруцеллезной инфекции иногда можно обнаружить микросимптомы в виде небольшого увеличения периферических лимфатических узлов, нередко повышается температура тела до субфебрильной, отмечается повышенная потливость при физическом напряжении. Однако эти лица считают себя здоровыми и полностью сохраняют работоспособность.

Остросептическая форма бруцеллеза характеризуется высокой лихорадкой (39—40°С и выше), температурная кривая имеет в ряде случаев тенденцию к волнообразному течению, нередко неправильного (септического) типа с большими суточными размахами, повторными ознобами и потами. Несмотря на высокую и очень высокую температуру тела, самочувствие больного остается хорошим (при температуре 39°С и выше больной может читать книги, играть в шахматы, смотреть телевизор и т. д.). Отсутствуют и другие признаки обшей интоксикации. Эта форма не угрожает жизни больного, даже без этиотропного лечения она заканчивается выздоровлением. В связи с этим остросептическую форму бруцеллеза нельзя считать сепсисом, а нужно рассматривать как один из вариантов бруцеллеза.

Из других клинических проявлений остросептической формы бруцеллеза следует указать на генерализованную лимфаденопатию. Все группы лимфатических узлов умеренно увеличены, некоторые из них чувствительны при пальпации. К концу первой недели болезни отмечается увеличение печени и селезенки. При исследовании периферической крови отмечается лейкопения, СОЭ не повышена. Главным отличием этой формы является отсутствие очаговых изменений (метастазов). Без антибиотикотерапии длительность лихорадки может достигать 3—4 нед и более.

Хронические формы бруцеллеза в одних случаях развиваются сразу, минуя острую фазу, в других случаях признаки хронического бруцеллеза появляются спустя какое-то время после остросептической формы бруцеллеза. По клиническим проявлениям первично-хроническая метастатическая и вторично-хроническая метастатическая формы бруцеллеза ничем не различаются. Единственное отличие — наличие или отсутствие остросептической формы в анамнезе. Клинически хронические формы характеризуются синдромом общей интоксикации, на фоне которых выявляется ряд органных поражений.

К общим симптомам можно отнести длительную субфебрильную температуру, слабость, повышенную раздражительность, плохой сон, нарушение аппетита, снижение работоспособности. Почти у всех больных отмечается генерализованная лимфаденопатия, причем наряду с относительно недавно появившимися увеличенными узлами (мягкие, чувствительные или болезненные при пальпации) отмечаются мелкие очень плотные безболезненные склерозированные лимфатические узлы (0,5-0,7 см в диаметре).

Часто выявляется увеличение печени и селезенки. На этом фоне выявляются органные поражения, наиболее часто со стороны опорно-двигательного аппарата, затем идут нервная и половая системы. При бруцеллезе могут быть и другие органные поражения (пневмонии, миокардиты, поражения глаз и др.), но они наблюдаются реже.

Поражение опорно-двигательного аппарата является наиболее частым проявлением хронического бруцеллеза. Больные жалуются на боли в мышцах и суставах, преимущественно в крупных. Для бруцеллеза характерен полиартрит, при каждом новом обострении появляются другие по локализации метастазы, это касается не только суставов, но и других органных поражений. Чаще поражаются коленный, локтевой, плечевой, тазобедренный суставы, редко — мелкие суставы кисти и стоп.

Характерен периартрит, параартрит, бурситы, экзостозы, не отмечается остеопорозов. Суставы опухают, подвижность в них ограничена, кожа над ними, как правило, нормальной окраски. Нарушение подвижности и деформация суставов обусловлены разрастанием костной ткани. Поражается позвоночник, чаще в поясничном отделе. Типичными для бруцеллеза являются сакроилеиты, диагностическое значение их очень велико, так как другие этиологические агенты вызывают их очень редко. В связи с этим важное значение имеет выявление сакроилеитов. Для этого существует ряд диагностических приемов.

Информативным является симптом Эриксена (иногда его ошибочно называют симптомом Б. П. Кушелевского, который высоко оценивал диагностическую ценность этого симптома, но не является его автором). Суть симптома заключается в том, что больного укладывают на перевязочный стол на спину или на бок и производят давление на гребень верхней подвздошной кости при положении на боку или сдавливают обеими руками передние верхние гребни подвздошных костей в положении на спине. При одностороннем сакроилеите возникают боли на пораженной стороне, при двухстороннем — отмечаются боли в крестце с двух сторон. Выявляют также симптом Нахпаса, при этом больного укладывают на стол лицом вниз и сгибают ноги в коленных суставах.

При подъеме конечности появляется боль в пораженном крестиово-подвздошном сочленении. Для выявления симптома Ларрея больного укладывают на стол в положение на спине, врач берется обеими руками за выступы крыльев подвздошных костей и растягивает их в стороны, при этом появляется боль в пораженной стороне (при одностороннем сакроилеите). Симптом Джона-Бера выявляется так: больной находится в положении на спине, при давлении на лонное сочленение перпендикулярно вниз появляется боль в крестцово-подвздошном сочленении. Существуют и другие диагностические приемы (симптомы Ганслена, Фергансона), но их используют реже.

При хронических формах бруцеллеза часто поражаются не только суставы, но и мышцы. Миозиты проявляются болями в пораженных мышцах. Боли тупые, продолжительные, интенсивность их нередко связана с изменениями погоды. При пальпации чаще в мышцах конечностей и поясницы определяют более болезненные участки, а в толще мышц прощупывают болезненные уплотнения различной формы и размеров. Чаще они пальпируются в виде тяжей, валиков, реже имеют округлую или овальную форму.

Со временем в одном участке изменения мышц проходят, но появляются воспалительные очаги в других мышечных группах, и так продолжается до тех пор, пока хроническая форма бруцеллеза не перейдет во вторично-латентную. После введения специфического антигена (например, при постановке пробы Бюрне) болевые ощущения в области пораженных мышц заметно усиливаются, а иногда можно определить и увеличение размеров воспалительного инфильтрата.

Помимо миозитов у больных бруцеллезом часто (до 50-60%) выявляются фиброзиты (целлюлиты). Они локализуются в подкожной клетчатке на голенях, предплечьях и особенно часто на спине и пояснице. Размеры их колеблются от 5-10 мм до 3-4 см. Вначале они прощупываются в виде мягких овальных образований, болезненных или чувствительных при пальпации (иногда больные сами обращают внимание на их появление). В дальнейшем они уменьшаются в размерах, могут полностью рассосаться или склерозируются и остаются на длительное время в виде небольших плотных образований, безболезненных при пальпации. При обострениях возможно появление новых фиброзитов.

Поражение нервной системы при хроническом бруцеллезе проявляется чаще всего невритами, полиневритами, радикулитами. Поражение центральной нервной системы (миелиты, менингиты, энцефалиты, менингоэнцефалиты) наблюдаются редко, но протекают длительно и довольно тяжело.

Изменения половой системы при бруцеллезе у мужчин проявляются в орхитах, эпидидимитах, снижении половой функции. У женщин наблюдаются сальпингиты, метриты, эндометриты. Возникает аменорея, может развиться бесплодие. У беременных женщин часто происходят аборты, мертворождения, преждевременные роды, врожденный бруцеллез у детей.

Иногда наблюдаются изменения глаз (ириты, хориоретиниты, увеиты, кератиты, атрофия зрительного нерва и др.). При аэрогенном заражении часто развиваются вяло текущие бруцеллезные пневмонии, которые безуспешно лечатся антибиотиками. Могут быть миокардиты, эндокардиты, аортиты и другие поражения сердечно-сосудистой системы.

Вторично-хроническая форма протекает точно так же, как и первично-хроническая. Обе формы заканчиваются переходом во вторично-латентную форму, они могут неоднократно рецидивировать, но при рецидивах сохраняют свое наименование (т.е. первично-хроническая метастатическая форма никогда не может превратиться во вторично-хроническую метастатическую). Вторично-латентная форма отличается от первично-латентной тем, что она значительно чаще переходит в манифестные формы (рецидивирует), кроме того, на фоне вторичной латенции возможно развитие различных резидуальных явлений после хронических форм (ограничение подвижности суставов, бесплодие, нарушение зрения и т.д.).

Течение бруцеллеза зависит от вида возбудителя. При овечьем бруцеллезе (Br. melitensis) болезнь чаще начинается с остросептической формы и протекает более тяжело. При заражении от коров (Br. abortus) болезнь часто начинается как первично-хроническая метастатическая форма или даже как первично-латентная. Однако нужно учитывать, что при совместном содержании скота (овец и коров) отмечается иногда инфицирование коров от овец, что приводит к тому, что человек заражается от коров Br. melitensis.

Бруцеллез. Диагностика и дифференциальная диагностика. При распознавании учитывают эпидемиологические предпосылки. Во многих районах средней полосы и юго-запада бруцеллез давно уже ликвидирован (у животных), следовательно, условия для заражения людей отсутствуют. В этих регионах бруцеллез является завозной инфекцией. Необходимо уточнить пребывание в местах, где бруцеллез еще встречается. Но иногда заражение происходит от продуктов, инфицированных бруцеллами (брынза домашнего изготовления и др.).

Диагностика и дифференциальная диагностика существенно различаются при разных формах бруцеллеза. Остросептическую форму бруцеллеза приходится дифференцировать от многих заболеваний, сопровождающихся высокой лихорадкой. Основное отличие бруцеллеза — хорошее самочувствие больных при температуре 39—40°С, хотя при некоторых болезнях (лимфогранулематоз, туберкулез) самочувствие также может оставаться удовлетворительным при высокой температуре.

При этих болезнях имеются характерные органные поражения — значительное увеличение какой-либо группы лимфатических узлов, изменения легких. Далее, при остросептической форме бруцеллеза нет очаговых органных поражений (метастазов), может быть лишь увеличение печени и селезенки, отсутствуют изменения крови.

Бруцеллез имеет хронические формы, которые труднее дифференцировать. Основным при этих формах является поражение суставов, в связи с чем их приходится дифференцировать от многих болезней, которые характеризуются появлением артритов. Острые артриты могут появляться при многих острых инфекционных болезнях (псевдотуберкулез, иерсиниоз, паротит эпидемический, краснуха, скарлатина и др.).

В этих случаях диагностика облегчается наличием симптоматики, характерной для того или иного инфекционного заболевания. Более тяжелое гнойное поражение суставов наблюдается при сепсисе и генерализованных формах ряда болезней (сап, мелиоидоз, листериоз). Отличие — тяжелое состояние больных, тогда как больные бруцеллезом чувствуют себя удовлетворительно или хорошо. Моноартриты крупных суставов могут быть следствием гонореи или хламидиоза (сочетание с уретритом и другими проявлениями этих болезней).

Бруцеллез является единственным инфекционным заболеванием, при котором развивается хронический полиартрит, поэтому дифференцировать нужно от полиартритов другой этиологии. Это ревматоидный артрит, системная красная волчанка, склеродермия системная, псориатические артриты, саркоидозные. Отличить их от бруцеллеза можно по комплексу клинических признаков, которые не являются характерными для бруцеллеза. Проводят также комплекс соответствующих лабораторных и инструментальных исследований для исключения этих заболеваний.

Иногда приходится дифференцировать вторично-латентные формы бруцеллеза с резидуальными явлениями от хронических форм бруцеллеза. Для хронических форм бруцеллеза характерно наличие небольшого повышения температуры тела, признаков интоксикации и появление новых метастазов. Это может быть поражение ранее не измененного сустава, появление новых фиброзитов и др. Характерна также динамика изменений со стороны суставов и других проявлений. Тогда как при вторично-латентной форме бруцеллеза повышение температуры тела отсутствует и нет заметной динамики в измененных органах (суставы, остаточные рубцовые изменения после хориоретинитов и другие).

Лабораторное подтверждение бруцеллеза существенно ограничено тем, что бруцеллы относятся к опасным возбудителям, выделение которых может проводиться только в специальных лабораториях, оборудованных в соответствии с требованиями профилактики. При серологических и аллергологических исследованиях нужно учитывать, что у привитых против бруцеллеза (прививаются группы риска, профессионально контактирующие с животными) могут быть и довольно длительное время положительные результаты как серологических реакций, так и особенно аллергических проб.

Из серологических реакций наиболее информативной является реакция агглютинации (реакция Райта). Агглютинация на стекле (реакция Хеддльсона) для диагностики не используется, она предложена для выявления лиц, подлежащих обследованию на бруцеллез, при массовых обследованиях по эпидемиологическим показаниям. Реакция Хеддльсона часто дает ложноположителъные результаты.

В какой-то степени это связано с перекрестными реакциями с рядом антигенов (мерсинии, возбудитель туляремии, противохолерная вакцинация и др.). Следует учитывать, что Br. melitensis и Br. abortus имеют перекрестные реакции между собой, но не с Br. canis, так что для выявления антител к этой бруцелле необходим специальный диагностикум, который пока еще не выпускается. Возможно, это одна из причин редкого выявления данной разновидности бруцеллеза.

При остросептической форме бруцеллеза антитела начинают выявляться на 2-й неделе болезни и в дальнейшем титр их нарастает. Аллергическая проба становится положительной в конце 1-й и на 2-й неделе. При хронических формах нарастания титра антител часто выявить не удается. Следует учитывать, что постановка аллергической пробы (проба Бюрне) может приводить к появлению антител или к нарастанию титра. Другие серологические реакции (РСК, РПГА, ОФР) менее информативны по сравнению с реакцией Райта и не имеют существенного значения. Отрицательные результаты пробы Бюрне позволяют исключить бруцеллез (за исключением ВИЧ-инфицированных, у которых исчезают все реакции ГЗТ).

Лечение. Принципы и методы терапии зависят от клинической формы бруцеллеза. При первично-латентных формах бруцеллеза лечение не проводят. Иногда инфицированные лица нуждаются в организации режима трудовой деятельности для предупреждения активизации бруцеллезной инфекции. Антибиотикотерапия может дать эффект только при остросептической (острой) форме бруцеллеза, при хронических формах назначение антибиотиков играет подсобную роль, основное значение имеет вакцинотерапия.

При остросептической (острой) форме бруцеллеза необходимо назначать антибиотики в довольно больших суточных и курсовых дозах. Недостаточные дозы и преждевременная отмена препаратов обусловливают развитие в дальнейшем вторично-хронической метастатической формы бруцеллеза. Не оправдала себя прерывисто-курсовая схема этиотропной терапии. Антибиотики необходимо давать непрерывно. Длительное время общепринятым во многих странах методом аитибиотикотерапии было назначение тетрациклина со стрептомицином.

Тетрациклин назначали по 0,5 г через 6 ч в течение 3—6 нед, в течение первых 2 нед, кроме того, использовали стрептомицин (внутримышечно) в дозе 1 г через 12 ч. Замена тетрациклина доксициклином и стрептомицина гентамицином не имела преимуществ. Тетрациклин противопоказан беременным женщинам и детям до 8 лет. При невозможности использовать приведенную выше схему можно назначать бисептол (Co-trimoxazole) по 6 таблеток в сутки в течение 4 нед. Комбинация бисептол рифампицин (по 900 мг в сутки) дает лучшие результаты. При проведении полного курса рецидивы наблюдаются редко. Назначаются витамины, патогенетические и симптоматические методы терапии.

Лечение больных с первично- и вторично-хроническими формами проводится одинаково. Антибиотики при этих формах оказались неэффективными. Они могут назначаться лишь некоторым больным с выраженной лихорадкой, однако эти формы обычно протекают при нормальной или субфебрильной температуре тела. В этих случаях антибиотики (и химиопрепараты) противопоказаны, так как на первый план выступает аллергизация и снижение защитных сил организма. Основную роль при этих формах играет назначение препаратов, обладающих неспецифическим и специфическим десенсибилизирующим действием. При хронических формах наиболее эффективна вакцинотерапия, которая является не только десенсибилизирующим мероприятием, но и стимулирует иммуногенез.

Больным назначают комплекс витаминов, неспецифические стимуляторы кроветворения (пентоксил, нуклеиновокислый натрий, метацил). В зимнее время необходимо обязательно проводить общее ультрафиолетовое облучение субэритемными дозами (по 1/4—3/4 биодозы). Применяют антигистаминные препараты (димедрол, пипольфен, супрастин и др.). При выраженных воспалительных изменениях (орхит, невриты и др.) назначают кортикостероидные препараты (по 40—50 мг преднизолона в течение 2—3 нед или эквивалентные дозы других кортикостероидов), которые снимают воспалительные явления, улучшают общее самочувствие, оказывают противоаллергическое действие, но не улучшают отдаленных результатов лечения.

Для специфической десенсибилизации и повышения иммунитета применяют вакцинотерапию. При резко выраженной аллергической перестройке для десенсибилизации иногда используют бруцеллин, однако чаще всего специальную (убитую) лечебную вакцину. Живую вакцину назначают только с профилактическими целями. Предложены разные методы введения вакцины: внутривенный, внутримышечный, подкожный и внутрикожный. Необходимо помнить, что неточная дозировка вакцины может привести к декомпенсациии и обострению болезни (при передозировке) или к отсутствию выраженного эффекта (при недостаточной дозе).

В связи с этим выбор метода введения и расчет индивидуальной дозы играет большую роль.
Наибольшее распространение получило подкожное и внутрикожное введение вакцины. Подкожно вакцину назначают при декомпенсации процесса и при выраженной клинической симптоматике. Важным принципом вакцинотерапии является индивидуальный подбор дозы препарата. В какой-то мере о выраженности реакции судят по интенсивности пробы Бюрне.

Подкожное введение чаще начинают с 10—50 млн микробных клеток. Если местная и общая реакция отсутствуют, то вакцину в увеличенной дозе вводят уже на следующий день. Для лечения подбирают такую дозу, которая вызывает умеренную реакцию. Следующую инъекцию вакцины делают лишь после того, как исчезнет реакция на предыдущее введение вакцины. Однократно вводимую дозу в конце курса доводят до 1—5 млрд микробных клеток. Внутрикожная вакцинотерапия является более щадящей. Этот метод используют в стадии компенсации, а также при переходе заболевания в латентную форму.

По выраженности кожной реакции подбирают рабочее разведение вакцины (оно должно вызвать местную реакцию в виде гиперемии кожи диаметром от 5 до 10 мм). Вакцину вводят внутрикожно в ладонную поверхность предплечья в первый день по 0,1 мл в 3 места, затем каждый день прибавляют по 1 инъекции и доводят на 8-й день до 10 инъекций. Если реакция на вакцину уменьшается, то берут более концентрированное разведение.

Следует учитывать, что даже при полном исчезновении всех клинических проявлений, у 20—30% в дальнейшем может наступить обострение болезни.

Прогноз для жизни благоприятный.

Бруцеллез. Профилактика и мероприятия в очаге. Борьба с бруцеллезом сельскохозяйственных животных. Соблюдение мер профилактики при уходе за животными. Вакцинация и ревакцинация живой противобруцеллезной вакциной лиц, входящих в группу риска по бруцеллезу.

источник