Серология вирусного гепатита в

Вирус гепатита В (hepatitis B virus, HBV) относится к семейству Hepadnoviridae. Геном вируса представлен частично сдвоенной кольцевой молекулой ДНК размером 3200 п.н. При электронной микроскопии HBV выглядит сферической частицей диаметром 42 нм (частица Дейна), состоящей из ядра — нуклеотида, имеющего форму икосаэдра диаметром 28 нм, внутри которого находится двуцепочечная ДНК, концевой белок и фермент ДНК-полимераза. В состав нуклеоидного белка входят HBcAg и HBeAg. Внешняя оболочка (толщиной 7 нм) образована поверхностным антигеном HBV — HBsAg. Вирус гепатита В является псевдоретровирусом, т. е. его ДНК может частично встраиваться в геном гепатоцитов.

Основой лабораторной диагностики инфекции HBV является определение серологических маркеров инфицирования вирусом: HBsAg, HВeAg, анти-НВс класса IgM и IgG, анти-НВе и анти-HBs, HBV ДНК и активности вирусной ДНК — полимеразы. В зависимости от течения вирусного гепатита В спектр изменения серологических маркеров выглядит по-разному.

HBeAg вируса гепатита В характеризует высокую инфекционность крови, являясь показателем активной репликации HBV. HBeAg циркулирует в крови больного только в присутствии HBsAg. В первую неделю желтушного периода он выявляется у 85-95 % больных. Выявление HBeAg в течение двух и более месяцев служит прогностическим признаком развития хронического гепатита. У большинства больных хроническим гепатитом с высокой активностью процесса HBeAg сохраняется на длительный срок (до нескольких лет).

Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В класса M (анти-НВc IgM) — маркер активной репликации НВV и острой инфекции. Выявляются через 1-2 недели после обнаружения HBsAg и сохраняются на протяжении 2-18 месяцев. У 4-20 % больных острым гепатитом В анти-HBc IgM являются единственным маркером инфекции. При ХГ В анти-НВс IgM могут быть выявлены у некоторых больных в меньших титрах, чем при острой инфекции, причем титр антител отражает тяжесть гепатита.

Антитела к HBcAg класса G (анти-НВс IgG) появляются практически одновременно с анти-НВс IgM. Как првило, они остаются у всех лиц, переболевших гепатитом В, пожизненно. У 95 % носителей HBsAg наряду с HBsAg циркулируют и анти-НВс IgG.

Антитела к HBsAg (анти-НВs) свидетельствуют о ранее перенесенной инфекции или о наличии поствакцинального иммунитета (защитный уровень — 10 МЕ/мл). Они появляются в период выздоровления, через 4 недели после исчезновения HBsAg, достигая максимальной концентрации через 1-2 года, с последующим постепенным снижением уровня, недоступного выявлению современными методами диагностики. В некоторых случаях анти-HВs могут циркулировать пожизненно. Появление анти-HBs на фоне клинического улучшения у больного гепатитом В является хорошим прогностическим признаком. Важно отметить, что в динамике острой инфекции HBV имеется “окно”, когда HBsAg уже не определяется, а ан-ти-HBs еще не появились. При этом выявляются анти-HBc IgM и IgG. Из этого следует вывод о необходимости обследования больных ОВГ на анти-HBc IgM даже при отрицательных результатах исследования HBsAg и анти-НВs.

Антитела к HBeAg (анти-НВе) появляются в крови после элиминации HBeAg и завершения репликации вируса. К концу 9-й недели острого периода гепатита В более 90 % больных имеют анти-НВе. В период выздоровления анти-НВе могут исчезать. Однако, наличие анти-НВе не является показателем отсутствия инфекционности конкретной сыворотки крови. Показано, что у ряда больных в ходе развития гепатита В (около 10%) под влиянием “иммунного давления” на вирус возникают мутантные формы, которые “избегают” иммунного надзора и не элиминируются. У носителей анти-HBe был выделен мутант, неспособный продуцировать HBeAg из-за дефектов в области precore и получивший обозначение HBeAg-отрицательного. Появление HBeAg-отрицательного мутанта приводит к прогрессированию поражения печени при продолжающейся репликации вируса (наличие ДНК HBV в сыворотке крови). При первичном инфицировании HBeAg-отрицательным мутантом существенно возрастает риск развития фульминантного гепатита.

Описанные маркеры гепатита В исследуются методом ИФА. Спектр антител (анти-НВе, анти-НВs, анти-НВc IgM, анти-НВc IgG) и антигенов (HBsAg, HBeAg) позволяет установить диагноз гепатита В и определить стадию заболевания (таблица 5). Недостатком данного метода является невозможность его использования при заражении мутантными формами вируса, при иммуносупрессии (больные онкологическими заболеваниями, наркоманы и т.д.) и для количественной оценки присутствующего в организме возбудителя. Решение этих задач стало возможным в результате внедрения молекулярно-биологических методов в практику клинико-диагностических лабораторий.

Таблица 5. Различные сочетания серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В и их интерпретация

источник

Многие годы безуспешно боретесь с БОЛЯМИ в ПЕЧЕНИ?

Глава Института заболеваний печени: «Вы будете поражены, насколько просто можно вылечить печень просто принимая каждый день.

Диагностика вирусного гепатита B основывается на характерном анамнезе заболевания, клинических данных (желтуха, гепатомегалия) и лабораторных (серологических) данных (выявление в крови специфических антител к вирусу, антигенов вируса). Кроме того, для выявления генетического вирусного материала можно использовать метод ПЦР (молекулярно-генетический анализ на гепатит B).

При сборе анамнеза у пациентов с вирусным гепатитом B принимаются во внимание следующие данные: были ли за несколько месяцев до манифестации болезни переливания крови, любые другие медицинские манипуляции, введение наркотиков (особенно совместное, нестерильным инструментом), незащищенные половые акты (особенно с новыми партнерами), другие контакты с носителями вируса гепатита B.

Кроме анализов на гепатит B большое значение в его диагностике имеет специфическая клиническая картина: постепенное начало болезни, выраженность периода, предшествующего появлению желтухи, наличие периода выраженной диспепсии, наличие артралгий (боли в суставах) и характерная сыпь на коже.

Достоверно верифицируется вирусный гепатит B только путем выявления специфических антигенов вируса в крови методом ИФА или РИА. Это — HBsAg, HBeAg, HBcAg. Кроме того, достоверным маркером гепатита B является обнаружение иммуноглобулина анти-HBc, анти-HBs, анти-HBe (IgM, IgG). Так, HBsAg обнаруживается в крови в инкубационном периоде заболевания, буквально через 2–4 недели после инфицирования у приблизительно 80% пациентов. При адекватном лечении через 3–4 месяца антиген HBs в крови исчезает, и к этому моменту концентрация антител (иммуноглобулин M) к антигену HBs (анти-HBs) в крови становится максимальной.

Концентрация антигенов (HBsAg) тем ниже, чем тяжелее течение болезни. Так, при молниеносном течении вследствие массовой гибели вирусов HBsAg выявляется только самыми чувствительными методами, в то время как антитела (анти-HBs) к частицам вируса обнаруживаются раньше. Таким образом, факт выявления в крови пациента антигенов вируса и антител к ним необходимо увязывать с клинической симптоматикой, чтобы не прийти к ложным выводам относительно стадии болезни и тяжести ее течения.

Выявление специфического маркера гепатита B (анти-HBc, который относится к иммуноглобулинам группы M) считается наиболее достоверным признаком заболевания и практически с полной вероятностью подтверждает диагноз. IgM сохраняется в крови на протяжении всей болезни вплоть до полного выздоровления. Иммуноглобулин группы M является маркером острой фазы заболевания. Затем его концентрация в крови идет на спад, и через 2–3 месяца после выздоровления выявляются уже иммуноглобулины группы G (анти-HBc), обеспечивающие длительный иммунитет (практически пожизненный) у более чем 80% пациентов.

Кроме HBsAg в период инкубации в крови может обнаруживаться HBeAg, однако он не стоек и быстро разрушается при воздействии факторов иммунитета (уже в среднем через неделю после появления). К концу данного периода нарастает концентрация антител к HBe. Но если уровень антител нарастает медленно, а антигены HBe выявляются на протяжении месяца и более, это свидетельствует о переходе болезни в хроническую фазу.

Для диагностики гепатита B используется метод ПЦР. С его помощью можно достоверно обнаружить генетический материал (ДНК) вируса в клетках организма: в крови, в гепатоцитах, в лимфоцитах — во всех местах, где происходит процесс репликации вирусных частиц. Метод ПЦР очень точный. При диагностике вирусного гепатита, вызванного мутантными штаммами вируса, которые зачастую не определяются стандартными серологическими методами, ПЦР считается крайне эффективным способом диагностики.

В таблице представлены различные варианты и комбинации антигенов и антител (полученные методом ИФА, РИА) и ДНК вируса (ПЦР), характерные для определенных периодов болезни.

Используя метод ПЦР в совокупности с методами серологической диагностики гепатита B, можно не только достоверно констатировать наличие генетического вирусного материала в организме, но и отличить острый период заболевания от хронического, определить момент выздоровления, судить о сформировавшемся иммунитете, об эффективности лечения, давать прогнозы.

Многие люди, у которых диагностируют этот вирус, находятся в полной растерянности от этого известия. Ведь очень часто многие виды гепатитов проходят без малейших симптомов. К таким видам относится и вирусный гепатит В. На сегодняшний день численность заболевания им возрастает. Это связано с распространенной наркоманией, проституцией, алкоголизмом. Поэтому для излечения данного вируса необходимо вовремя его диагностировать и понять основные причины его возникновения и степень сложности ее течения.

Поставить точный диагноз можно только при клинических исследованиях или с помощью экспресс-тестов. С помощью диагностики можно увидеть разные стадии заболевания: инфицирование вирусом, выздоровление или прогрессирование заболевания.

Раньше обнаружение инфекции было большой проблемой, но сегодня, благодаря качественной диагностике, его возможно обнаружить в самых начальных стадиях.

Можно выделить следующие антигены вирусного гепатита:

HBsAg представлена в виде вирусной белковой молекулы. Ее белок необходим для того, чтобы определять клетки печени, к которым он будет прикрепляться. В основном он выявляется по прошествии нескольких недель. Его можно выявить с помощью лабораторных исследований посредством проведения серологических анализов на маркеры гепатита. Если выявляется этот антиген, в таком случае он может свидетельствовать о:

Острой форме заболевания, которая будет сочетаться с HBsAg,HBeAg, Anti-HBc суммарных.
Хронической форме, если идет сочетание с положительным HBeAg, Anti-HBc суммарных.
Неопасное инфицирование, при взаимодействии Anti-HBc суммарных.

HBeAg под ней понимается вирусный белок. Если выявят этот маркер, значит вирус достаточно активный. Этот антиген инфицируется в основном кровью. При положительном диагнозе этого вируса, можно говорить, о том, что началась активная фаза обострения гепатита или большая возможность заражения.
HbcoreАg, — это ядерный белок, его можно диагностировать во время обследования печени, по маркерам крови его выявить невозможно. Однако если проводить анализ крови, можно выявить антитела к этому белку. После заражения организма, он начинает активную выработку антигенов, в то время как иммунитет выделяет антитела, для борьбы с ними. Антигены и антитела, полностью соответствуют друг другу, а наличие их в крови определяется положительным результатом.

Также, кроме антигенов, существуют антитела при гепатите В, они бывают следующие:

Анти-HBs – это антитела к белку поверхностному гепатита В. Во время контакта иммунитета и белка, начинаются всевозможные помехи в виде образования антител, которые затрудняют ему внедриться в клетки организма. Благодаря антителам, клетки иммунитета смогут быстро обнаружить проникший в организм вирус и быстро его уничтожить.
анти-НВс представлен антителами к белку ядерному вируса. Если в анализах находят маркер этих антител, это расшифровывается так, что у организма есть иммунитет к этому вирусу либо после вакцинации, либо самостоятельного излечения. Если его находят при исследованиях, это не означает, что человек инфицирован, просто организм сталкивался с ним и выработал к нему иммунитет. А об инфицировании можно судить, только после результатов других маркеров.
IgM анти-НВс, в основном они проявляются на начальных этапах заболевания. Обнаружение положительного диагноза может означать присутствие острой и активной формы болезни при неправильном его лечении и высокой вероятности его заражения.
анти-НВe, помогает препятствовать распространению ядерного белка вируса. Благодаря им иммунитет может активно бороться с вирусом, останавливая его распространение на начальных этапах.

При выявлении определенного антигена, обозначается форма болезни, его активность и дальнейшее его лечение.

Проведение расшифровки заболевания проводится по обнаруженным антигенам:

так называемый австралийский антиген (HBsAg) можно обнаружить в период обострения. Положительный результат может обозначиться через месяц после попадания вируса в организм. А проявление активности антител свидетельствуют о том, что больной выздоровел и сформировал иммунитет к этой болезни. Его диагностика проводится с помощью иммуноферментного анализа, по-другому ИФА
антиген HBcAg нельзя определить по крови, а только после обследования печени. А антитела появляются во время начала обострения и находятся все время в крови;
антиген НВеAg свидетельствует о высокой активности вируса, а антитела появляются сразу после снижения активности антигена.

Сейчас существует множество клинических исследований, которые позволяют на ранней стадии определить антиген вируса и состояние активности вируса в крови. Это позволяет назначить правильную схему лечения, которая поможет справиться с вирусом.

Можно выделить основные причины заражения:

Употребляя наркотики в виде инъекций.
Во время половых актов.
В стоматологии и тату-салонах, если приборы плохо дезинфицируются.
После переливания крови и хирургических операциях.

В основном им болеют родственники инфицированного человека, наркоманы, люди, которые занимаются секс услугами, медработники, заключенные, дети, которые родились от больной матери. Существует специальная таблица, которая в полной мере раскрывает суть всех вирусов гепатита, определяет пути передачи и их симптоматику.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

HBsAg — наружный компонент вируса гепатита В, появляется в крови больных острым гепатитом в продромальном периоде болезни, сохраняется около 1-4 мес, исчезает при выздоровлении. Определение HBsAg в крови — признак персистенции вируса гепатита В. Это наблюдается у Уз больных хроническими заболеваниями печени. Могут быть случаи «здорового носительства» HBsAg.

HBeAg — определяется в крови больных с положительным HbsAg, выявляется на ранних стадиях острого вирусного гепатита В вскоре после появления HBsAg и исчезает к периоду развернутой клинической картины.

При хронизации воспалительного процесса в печени HBeAg сохраняется вместе с HBsAg в крови в течение длительного срока.

Наличие HBeAg отражает фазу репликации вируса гепатита В и коррелирует с высокой активностью воспалительного процесса в печени и контагиозностью больного.

HBcAg — в крови не обнаруживается, располагается в ядрах гепатоцитов. В последние годы с помощью иммуноэлекгронной микроскопии HBcAg обнаружен также и в цитоплазме гепатоцитов больных.

После заражения вирусом гепатита В в процессе иммунного ответа в крови появляются антитела к антигенам вируса.

Первыми появляются антитела к HbcAg — HBcAb (НbсАgAbо-dy), уже через 2-4 недели после появления HBsAg. Большая часть антител в это время представлена классом IgM (HBcAblgM), которые сохраняются в сыворотке крови больных 6-9 мес. Наличие HBcAblgM свидетельствует об остром или хроническом гепатите с продолжающейся репликацией вируса гепатита В. Несколько позже в крови появляются НВсАb класса IgG, которые могут определяться в течение многих лет. Выявление HBcAblgG может указывать как на перенесенный и полностью разрешившийся острый вирусный гепатит В, так и на персистенцию вируса гепатита В.

Антитела к HbeAg — НВеАb — появляются приблизительно через 2 недели от начала острого вирусного гепатита В и по мере уменьшения концентрации HBeAg остаются в крови от 1 до 5 лет и более. Появление НВеАb свидетельствует о выздоровлении больного или о переходе острого вирусного гепатита в хронический, при этом репликация вируса гепатита В прекращается или значительно снижается, происходит интеграция генома вируса гепатита В в геном гепатоцита, что сопровождается снижением активности воспалительного процесса.

Антитела к HBsAg — HBsAb — обнаруживаются через 3-5 месяцев после начала острого гепатита В. Они могут определяться в крови больного в течение 5-10 и более лет. Появление этих антител говорит об иммунном разрешении инфекции, но при этом не исключается наличие вируса гепатита В в гепатоцитах.

Некоторые доктора считают, что только эти антитела обладают защитными свойствами, обеспечивают иммунитет к вирусу гепатита В.

Непосредственным цитопатическим действием сам вирус гепатита В не обладает (т.е. сам вирус гепатоциты не разрушает), поражение печени объясняется выраженным иммунным ответом организма на внедрение в гепатоцит вируса.

В жизнедеятельности вируса гепатита В различают две фазы: фазу репликации и фазу интеграции.

В фазу репликации происходит воспроизведение (размножение) вируса. Гепатотропность вируса гепатита В, способность его проникать в гепатоцит определяется белками внешней оболочки области pre-S. На мембранах гепатоцитов имеются зоны полимеризированного альбумина, соответствующие рецепторам pre-S 1.

Благодаря взаимодействию белков pre-S с рецепторами к ним на поверхности гепатоцита вирус прикрепляется к гепатоциту. В фазе репликации ДНК вируса проникает в ядро гепатоцита и на ней, как на матрице, с помощью ДНК-полимеразы, синтезируется нуклеокапсид вируса, содержащий ДНК вируса, антигены HBcAg, HBeAg, HBxAg. Антигены HBcAg и HBeAg являются основной мишенью иммунной системы. Затем нуклеокапсид мигрирует из ядра в цитоплазму, где реплицируются белки внешней оболочки (HBsAg) и таким образом, происходит сборка полного вириона. При этом избыток HBsAg, не использованный для сборки вируса, через межклеточное пространство попадает в кровь. Полная сборка (репликация) вируса заканчивается презентацией его растворимого нуклеокапсидного антигена — HBeAg на мембране гепатоцита, где происходит его «узнавание» иммуноцитами. В защите вируса от воздействия иммунной системы огромную роль играет секреция HBeAg в кровь. Установлено, что циркулирующий HBeAg подавляет оба звена иммунитета. Клеточный иммунитет ингибируется путем снижения синтеза у-интерферона (именно он играет важнейшую роль в процессе распознавания антигенов вируса гепатита В Т-лимфоцитами), гуморальный — благодаря подавлению образования антител В-лимфоцитами. Таким образом HBeAg способен вызывать состояние иммунотолерантности и это замедляет его удаление из инфицированных гепатоцитов.

В настоящее время установлена способность вируса гепатита В к мутациям. Мутации с разной частотой могут возникать практически во всех генах вируса гепатита В, но наиболее часто — в области гена, кодирующего синтез HBeAg. В результате мутации вирус теряет способность синтезировать HBeAg и это позволяет вирусу избавиться от надзора иммунной системы и избежать элиминации. Таким образом, можно считать, что мутация вируса может рассматриваться как способ защиты от иммунной системы и выживания (сохранения) вируса в организме человека. Bonino (1994) определяет мутировавший вирус гепатита В как «HBVминус HBeAg». Он нередко выявляется при наиболее тяжело протекающих заболеваниях печени, вызванных вирусом гепатита В, в частности, при HbeAg-негативном варианте хронического гепатита, который имеет следующие особенности:

отсутствие в крови HBeAg при наличии маркеров репликации HBV;
обнаружение ДНК HBV в сыворотке крови и HBcAg в гепатоцитах;
наличие в инфицированных гепатоцитах как цитоплазматических, так и ядерных антигенов нуклеокапсида HBV;
более тяжелое клиническое течение заболевания;
менее выраженный ответ на лечение интерфероном по сравнению с HBeAg-позитивным вариантом хронического гепатита В.

Следовательно, вирус типа «HBV минус HBeAg» более патогенен, чем немутировавший тип HBV, возможно, это обусловлено более высокой цитопатогенностью или большей эффективностью цитоксических Т-лимфоцитов.

В настоящее время более обоснована точка зрения, согласно которой «HBV минус HBeAg» обычно обнаруживают при отсутствии толерантности к вирусу, а популяции немутировавшего («дикого») вируса преобладают при наличии толерантности к нему. Неузнаваемость мутантных HBV обусловливает неполноценность иммунного ответа, что меняет течение и исход вирусного гепатита В.

Маркерами фазы репликации вируса гепатита В являются:

выявление в крови HBeAg, HBcAblgM (коэффициент HBcAbG/HBcAbM 200 нг/л (определяется с помощью полимеразной цепной реакции), ДНК-полимеразы и антигенов pre-S (характеризующих функциональную активность альбуминчувствительности рецепторов);
выявление в гепатоцитах HBeAg и HBV-ДНК.

У 7-12% больных хроническим вирусным гепатитом В возможен спонтанный переход фазы репликации в нерепликативную фазу (при этом из крови исчезает HBeAg и появляются НВеАb). Именно фаза репликации обусловливает тяжесть поражения печени и контагиозность больного.

Установлено, что репликация вируса гепатита В происходит не только в печени — в гемопоэтических клетках-предшественниках (в костном мозге); эндотелии; моноцитах, макрофагах лимфатических узлов и селезенки, эндотелии сосудов почек; железистом эпителии и фибробластах стромы желудка и кишечника; в стромальных фибробластах яичек; нейроцитах и стромальных фибробластах периферических, нервных ганглиев; фибробластах дермы. В 1995-1996 г. была показана репликация вируса гепатита В в тканях сердца, легких, головного мозга, половых желез, надпочечников, щитовидной и поджелудочной желез.

Внепеченочная репликация вируса гепатита В может быть причиной развития разнообразных внепеченочных (системных) проявлений заболевания — хронической генерализованной инфекции.

В фазу интеграции происходит интегрирование (встраивание) фрагмента вируса гепатита В, несущего ген HBsAg, в геном (ДНК) гепатоцита с последующим образованием преимущественно HBsAg. При этом репликация вируса прекращается, однако генетический аппарат гепатоцита продолжает синтезировать HBsAg в большом количестве.

Вирусная ДНК может быть интегрирована не только в гепатоцитах, но и в клетки поджелудочной железы, слюнных желез, лейкоциты, сперматозоиды, клетки почек.

Фаза интеграции сопровождается становлением клинико-морфологической ремиссии. В этой фазе в большинстве случаев формируется состояние иммунологической толерантности к вирусу, что приводит к купированию активности процесса и носительству HBsAg. Интеграция делает вирус недосягаемым для иммунного контроля.

Серологические маркеры фазы интеграции:

наличие в крови только HBsAg или в сочетании с HBcAblgG;
отсутствие в крови вирусной ДНК-полимеразы и ДНК-вируса;
сероконверсия HBeAg в НВеАb (т.е. исчезновение из крови HBeAg и появление НВеАb).

В последние годы установлено, что при гепатите В интеграция генома вируса с геномом гепатоцита не облигатна, а факультативна. У подавляющего большинства больных острым гепатитом В она не развивается. В редких случаях хронизация HBV-инфекции может протекать без интеграции с геномом инфицированных гепатоцитов. У таких больных регистрируется продолжающаяся активная репликация HBV.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16]

источник

Лабораторные методики являются важным диагностическим способом в клинике инфекционных болезней. Серодиагностика гепатита C, B и A происходит по идентичным принципам. Метод определяет наличие у пациента конкретного вида возбудителя путем поиска специфических антигенов или комплексов антиген-антитело. Результаты этой диагностики помогают подобрать схему лечения.

Метод заключается путем поиска в крови характерных для вирусных гепатитов антигенов. Последние являются микрочастицами, имеющими индивидуальную конфигурацию и присущими каждому возбудителю. Реже выполняют определение в плазме крови антител к определенным антигенам. Реакция называется связыванием комплемента. Антитела выступают в качестве факторов иммунитета. Их продуцируют клетки лимфоциты. Для определения антител к тому или иному вирусу гепатита используются стандартные антигены.

Методика показана пациентам с такой клинической симптоматикой:

Пожелтение кожных покровов. Появляется при накоплении в дерме пигмента билирубина. Его высокая концентрация наблюдается при воспалении печеночной ткани.
Болезненные ощущения и тяжесть в правом подреберье. Увеличенная печень растягивает капсулу, провоцируя возникновение характерных признаков.
Повышение температуры до субфебрильных цифр, в сочетании с симптомами.
Мелкоточечная сыпь на кожных покровах. Она наблюдается при дефиците факторов свертывания крови вследствие печеночной недостаточности.
Слабость, недомогание, вялость и расстройство мышления.

Вернуться к оглавлению

Серологический способ диагностики выявляет антигены того или иного вида вируса гепатита. Происходит это с помощью стандартных антител. Банки этих молекул хранятся в лабораториях. Антитела получают из иммунных клеток — B-лимфоцитов, а точнее, их фракции — плазмоцитов. Другой способ — выявление в крови комплексов антиген-антитело путем реакции связывания комплемента. Результат бывает ложноположительным по причине наличия у пациента ревматоидного фактора. Этот патологический белок повышается при системной красной волчанке, ювенильном артрите, анкилозирующем спондилоартрите и подагре. Больным с перечисленными сопутствующими недугами следует делать повторную сверку для достоверного результата анализа.

Серология на вирус гепатита A проводятся с помощью ИЭМ — иммуноэлектронной микроскопии. Реже применяют РСК — реакцию связывания комплемента. Как альтернативный метод, используется РИА с мечеными Anti и Ag. Новинкой лабораторной диагностики является РЭМА — реакция энзим-антител. Серологическая диагностика на гепатит В включает реакции РИА, РЭМА и РПГ, при которой происходит преципитация в геле. Реже используется РИГА с непрямой гемагглютинацией. При ней с диагностической целью применяют эритроциты, нагруженные HBsAg.

Только для серологической диагностики гепатита C выполняют иммуноферментный анализ (ИФА).

Итогом серологических исследований при различных подтипах вируса является поиск маркеров. Присутствие иммуноглобулина M (IgM) всегда дает сведения о наличии острой фазы заболевания у пациента, а IgG — о хроническом течении патологии, или о перенесении ее в стертой форме. Ниже представлены показатели при различных видах гепатитной инфекции:

источник

Комплексное исследование при подтвержденном вирусном гепатите В (HBV). Анализ маркеров инфекции позволяет установить клиническую стадию заболевания, иммунологический статус обследуемого, а также оценить эффективность лечения. Включает в себя определение белков вируса (антигенов), основных классов специфических антител, а также обнаружение ДНК вируса в крови.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
Не курить за 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит B (HBV) – инфекционное заболевание, которое является причиной серьёзных поражений печени. Зачастую гепатит B переходит в хроническую форму, его течение становится затяжным и провоцирует возникновение цирроза и рака печени.

Вирус гепатита B (Hepadnaviridae) содержит двухцепочечную ДНК, окруженную нуклеокапсидом размером 27 нм, в состав которого входит антиген HBcAg, и внешней оболочкой, содержащей антиген HBsAg. Этот антиген обнаруживается в крови за 6 недель до появления симптомов заболевания и может выявляться длительное время как при их наличии, так и в при их отсутствии (при хроническом гепатите и носительстве). На ранних стадиях заболевания присутствует у 90-95 % больных.

Особенностью вируса гепатита B является то, что он поступает непосредственно в кровь и циркулирует в ней на протяжении всего периода заболевания. У некоторых пациентов вирус в крови сохраняется всю жизнь. По этой причине источником заражения могут стать не только те, кто болен гепатитом в его острой форме, но также те, кто уже перенес данное заболевание, а также люди, у которых заболевание не проявляется, однако они являются носителями вируса.

Полное выздоровление регистрируется у 92-95 % больных острым гепатитом В, и лишь у 5-8 % из них отмечается переход заболевания в хроническую форму.

Гепатит B лечится исключительно в условиях стационара. Это заболевание в случае длительного течения является фактором риска развития первичной гепатоцеллюлярной карциномы (рак печени).

В жизнедеятельности вируса гепатита В различают две фазы: фазу репликации и фазу интеграции. В фазе репликации происходит воспроизведение (размножение) вируса. ДНК вируса проникает в ядро гепатоцита, где с помощью ДНК-полимеразы синтезируется нуклеокапсид, содержащий ДНК вируса, антигены HBcAg, HBeAg, которые являются основной мишенью иммунной системы. Затем нуклеокапсид мигрирует из ядра в цитоплазму, где реплицируются белки внешней оболочки (HBsAg), и, таким образом, происходит сборка полного вириона. При этом избыток HBsAg, не использованный для сборки вируса, через межклеточное пространство попадает в кровь. Полная сборка (репликация) вируса заканчивается презентацией его растворимого нуклеокапсидного антигена – HBeAg на мембране гепатоцита, где происходит его «узнавание» иммуноцитами. Антиген HBcAg серологическими методами не определяется, потому что отсутствует в крови в свободном виде. Определяется наличие в крови антител (anti-HBc) к этому антигену, вырабатывающихся вследствие его высокой иммуногенности.

Маркерами фазы репликации вируса гепатита В являются:

выявление в крови антигенов HBeAg и anti-HBc (Ig M).

У 7-12 % больных хроническим вирусным гепатитом В возможен спонтанный переход фазы репликации в нерепликативную фазу (при этом из крови исчезает HBeAg и появляются anti-HBe). Именно фаза репликации обусловливает тяжесть поражения печени и контагиозность больного.

В фазе интеграции происходит интегрирование (встраивание) фрагмента вируса гепатита В, несущего ген HBsAg, в геном (ДНК) гепатоцита с последующим образованием преимущественно HBsAg. При этом репликация вируса прекращается, однако генетический аппарат гепатоцита продолжает синтезировать HBsAg в большом количестве.

Вирусная ДНК может быть интегрирована не только в гепатоциты, но и в клетки поджелудочной железы, слюнных желез, лейкоциты, сперматозоиды, клетки почек.

Серологические маркеры фазы интеграции:

наличие в крови только HBsAg или в сочетании с anti-HBc (IgG);
отсутствие в крови ДНК-вируса;
сероконверсия HBeAg в anti-HBe (т.е. исчезновение из крови HBeAg и появление anti-HBe).

Пациенты, перенесшие инфекцию и имеющие антитела к вирусу, не могут повторно заразиться гепатитом B. В некоторых случаях полное выздоровление не наступает и человек становится хроническим вирусоносителем. Вирусоносительство может протекать бессимптомно, но в некоторых случаях развивается хронический активный гепатит B. Ключевым фактором риска активного вирусоносительства является возраст, когда человек был заражен: для грудных детей уровень риска превышает 50 %, в то время как для взрослых остается на уровне 5-10 %. Исследования показывают, что мужчины чаще становятся носителями, чем женщины.

HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В

Поверхностный антиген вируса гепатита В (HВsAg) является белком, который присутствует на поверхности вируса. Обнаруживается в крови при остром и хроническом гепатите В. Самый ранний маркер. Достигает максимума к 4-6-й неделе заболевания. Сохраняется до 6 месяцев при остром гепатите, свыше 6 месяцев – при переходе заболевания в хроническую форму.

HBeAg – ядерный ‘е’-антиген вируса гепатита В

Антиген, находящийся в ядре вируса. Появляется в крови одновременно с HBsAg и сохраняется в течение 3-6 недель. HBeAg появляется в крови больного острым гепатитом В одновременно с HBsAg или вслед за ним и сохраняется в крови 3-6 недель. Указывает на активное размножение и высокий риск передачи вируса при половом контакте, а также перинатально. Инфекционность HBeAg-положительной сыворотки в 3-5 раз выше, чем HBsAg-положительной. Выявление HBeAg в крови более 8-10 недель свидетельствует о переходе заболевания в хроническую форму. При отсутствии репликативной активности вируса во время хронической инфекции HBeAg не выявляется. Его появление же свидетельствует о реактивации вируса, что чаще происходит на фоне иммуносупрессии.

При лечении вирусного гепатита В исчезновение HBeAg и появление антител к HBe-антигену свидетельствует об эффективности терапии.

anti-HBc (Ig M) – специфические антитела класса IgМ к ядерному ‘core‘ антигену вируса

Начинают вырабатываться еще до клинических проявлений, указывают на активную репликацию вируса.

Появляются в крови через 3-5 недель, сохраняются в течение 2-5 месяцев и исчезают в период выздоровления.

anti-HBc – суммарные антитела (IgM+IgG) к ядерному ‘core’ антигену вируса гепатита В

Важный диагностический маркер, особенно при отрицательном значении HBsAg. Антитела класса IgM вырабатываются через 3-5 недель. Антитела класса IgG начинают вырабатываться с 4-6-го месяца и могут сохраняться пожизненно. Подтверждают контакт организма с вирусом.

anti-HBs – суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В

Появляются медленно, достигая максимума через 6-12 месяцев. Указывают на перенесенную инфекцию или наличие поствакцинальных антител. Выявление этих антител свидетельствует о выздоровлении и развитии иммунитета. Обнаружение антител в высоком титре в первые недели заболевания может быть связано с развитием гипериммунного варианта фульминантного гепатита В.

anti-HBe – антитела к ‘е’-антигену вируса гепатита В

Появляются на 8-16-й неделе после инфицирования у 90 % больных. Свидетельствуют о завершении острого периода болезни и начале периода реконвалесценции. Могут сохраняться до 5 лет после перенесенного заболевания.

HBV (ДНК) – ДНК вируса гепатита В

Маркер наличия и репликации вируса. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Это особенно важно в сложных диагностических случаях. При инфицировании мутантными штаммами вируса результаты теста на специфические антигены HBsAg и HBeAg могут быть отрицательными, но при этом риск распространения вируса и развития заболевания у зараженного человека сохраняется.

Качественное определение ДНК вируса играет важную роль в раннем выявлении гепатита В у людей с высоким риском инфицирования. Генетический материал вируса обнаруживается в крови на несколько недель раньше, чем HBsAg. Положительный результат ПЦР за период более 6 месяцев указывает на хроническую инфекцию. Определение вирусной нагрузки (количество ДНК вируса в крови) позволяет оценить вероятность перехода заболевания в хроническую форму.

Повышенные уровни печеночных трансаминаз при положительном результате ПЦР являются показателями необходимости проведения терапии. Во время лечения вирусного гепатита В исчезновение ДНК вируса свидетельствует об эффективности лечения.

Для чего используется исследование?

Для оценки серологического профиля;
для выяснения стадии заболевания и степени контагиозности;
для подтверждения заболевания и уточнения его формы (острая, хроническая, носительство);
для наблюдения за течением хронического гепатита В;
для оценки эффективности противовирусной терапии.

Когда назначается исследование?

При выявлении у пациента поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg);
при подозрении на инфицирование вирусом гепатита В и сомнительных результатах серологических тестов;
при микст-гепатитах (сочетанные вирусные гепатиты В и С);
при динамическом наблюдении за больным гепатитом В (определение стадии процесса при совместном исследовании на другие специфические маркеры инфекции).

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

Острый гепатит В. Выделяют «дикий» штамм (естественный) и «мутантный» штамм (вид) вируса. Определение штамма вируса имеет определенное значение при выборе противовирусного лечения. Мутантные штаммы вируса несколько хуже поддаются лечению в сравнении с «диким».

Хронический гепатит В (ХВГВ). Выделяют три серологических варианта:

ХВГВ с минимальной активностью (ранее использовали термин «носительство HBsAg»);
НВе-негативный ХВГВ;
НВе-позитивный ХВГВ.

Интерпретация сочетаний серологических маркеров гепатита В

источник

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

По дисциплине « Инфекционные болезни»

МАРКЕРНАЯ ДИАГНОСТИКА ОСТРЫХ И ХРОНИЧЕСКИХ ГЕПАТИТОВ В И С.

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

Выявление серологических маркеров вирусных гепатитов …. 3 стр

Серодиагностика вирусного гепатита В…………………………. 4 стр

Серодиагностика вирусного гепатита С………………………….10 стр

Список использованной литературы. ………………………….. 19 стр

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

Выявление серологических маркеров вирусных гепатитов

Установить вирусную природу гепатита и получить информацию об его этиологии возможно только путем выявления серологических маркеров вирусов гепатита. К таким маркерам относят вирусные белки (антигены), специфичные антитела, вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию, и нуклеиновые кислоты вируса (ДНК или РНК), представляющие его геном. Совокупность методов, позволяющих выявлять в биологических тканях и жидкостях специфические вирусные или бактериальные белки (антигены) или антитела, вырабатываемые в организме хозяина в присутствии того или иного возбудителя, относят к иммунологическим методам лабораторного анализа. За последние несколько десятилетий иммунологические методы исследования получили повсеместное распространение. Причиной этого явилось тесное слияние иммунологии и биотехнологии, которое позволило разработать и внедрить в практику широкий спектр тест-систем, основанных на взаимодействии антиген — антитело. Применительно к вирусным гепатитам, иммуноферментный анализ относится к непрямым методам обнаружения возбудителя, позволяющим установить этиологию болезни. Сравнительно недавно в практику клинико-диагностических лабораторий вошли методы генодиагностики, позволяющие обнаруживать и характеризовать гены или несмысловые последовательности ДНК и/или РНК. Своим развитием эти методы обязаны разработкой в 1983 г принципа полимеразной цепной реакции (ПЦР). Первые сообщения по практическому применению ПЦР появились в 1985 г и с тех пор количество публикаций, где ПЦР используется в качестве одного из методов исследования, занимает одно из первых мест в мировой научной литературе. Эти подходы приложимы для обнаружения и исследования геномов инфекционных

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

агентов, обнаружения маркеров онкологических заболеваний, выявления генетических изменений в геноме человека, связанных с теми или иными функциональными нарушениями. В отличие от ИФА, ПЦР-анализ относится к прямым методам обнаружения возбудителя в клиническом материале, что позволяет оценить активность вирусного процесса и проследить процессы распространения возбудителя в различных органах и тканях.

Серодиагностика вирусного гепатита В.

Вирус гепатита В (hepatitis B virus, HBV) относится к семейству Hepadnoviridae. Геном вируса представлен частично сдвоенной кольцевой молекулой ДНК размером 3200 п.н. При световой микроскопии HBV выглядит сферической частицей диаметром 42 нм (частица Дейна), состоящей из ядра — нуклеоида, имеющего форму икосаэдра диаметром 28 нм, внутри которого находится двуцепочечная ДНК, концевой белок и фермент ДНК-полимераза. В состав нуклеоидного белка входят HBcAg и HBeAg. Внешняя оболочка (толщиной 7 нм) образована поверхностным антигеном HBV — HBsAg . Вирус гепатита В является псевдоретровирусом, т. е. его ДНК может частично встраиваться в геном гепатоцитов.

При ОВГ и обострении ХГ вирусные частицы можно обнаружить в гепатоцитах и сыворотке крови больного. При интегративной форме ХГ В и в стадии ремиссии HBV в сыворотке крови не выявляется. Основой лабораторной диагностики инфекции HBV является определение серологических маркеров инфицирования вирусом: HBsAg, HВeAg, анти-НВс класса IgM и IgG, анти-НВе и анти-HBs, HBV ДНК и активности вирусной ДНК — полимеразы. В зависимости от течения вирусного гепатита В спектр изменения серологических маркеров выглядит по-разному.

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

HBsAg — основной маркер инфицирования HBV. При остром вирусном В в большинстве случаев (90-80 %) HBsAg удается выявить в инкубационном периоде, начиная с 3-5-й недели заражения. Средняя продолжительность циркуляции антигена — 70-80 дней. Быстрое исчезновение HBsAg (в первые дни желтухи) с появлением антиНВs — плохой прогностический признак. При хроническом гепатите В HBsAg может циркулировать в крови больного на протяжении многих лет. Следует отметить, что применяющиеся в настоящее время методы определения HBsAg, в том числе ИФА, имеют порог чувствительности. Поэтому при наличии клинических признаков гепатита и отсутствиии HBsAg в сыворотке крови необходимо исследовать другие маркеры инфекции HBV. Наличие HBsAg в крови свидетельствует о присутствии вируса в печени и с большой долей вероятности в крови. Не всякая сыворотка, содержащая HВsAg, содержит вирус гепатита В. В ряде случаев ДНК вируса встраивается в ДНК гепатоцита не полностью, а частично, только тем участком, который кодирует синтез HBsAg. В этих случаях синтезируются HBsAg без других компонентов вириона, (то есть без других антигенов). Считают, что такая ситуация возникает при «здоровом» носительстве HBsAg. HBeAg вируса гепатита В характеризует высокую инфекционность крови, являясь показателем активной репликации HBV. HBeAg циркулирует в крови больного только в присутствии HBsAg. В первую неделю желтушного периода он выявляется у 85-95 % больных. Выявление HBeAg в течение двух и более месяцев служит прогностическим признаком развития хронического гепатита. У большинства больных хроническим гепатитом с высокой активностью процесса HBeAg сохраняется на длительный срок (до нескольких лет). Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В класса M (анти-НВc IgM) — маркер активной репликации НВV и острой инфекции. Выявляются через 1-2 недели после обнаружения HBsAg и сохраняются на протяжении 2-18 месяцев. У 4-20 % больных острым гепатитом В анти-HBc IgM являются единственным маркером инфекции. При

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

ХГ В анти-НВс IgM могут быть выявлены у некоторых больных в меньших титрах, чем при острой инфекции, причем титр антител отражает тяжесть гепатита. Антитела к HBcAg класса G (анти-НВс IgG) появляются практически одновременно с анти-НВс IgM. Как првило, они остаются у всех лиц, переболевших гепатитом В, пожизненно. У 95 % носителей HBsAg наряду с HBsAg циркулируют и анти-НВс IgG. Антитела к HBsAg (анти-НВs) свидетельствуют о ранее перенесенной инфекции или о наличии поствакцинального иммунитета (защитный уровень — 10 МЕ/мл). Они появляются в период выздоровления, через 4 недели после исчезновения HBsAg, достигая максимальной концентрации через 1-2 года, с последующим постепенным снижением уровня, недоступного выявлению современными методами диагностики. В некоторых случаях анти-HВs могут циркулировать пожизненно. Появление анти-HBs на фоне клинического улучшения у больного гепатитом В является хорошим прогностическим признаком. Важно отметить, что в динамике острой инфекции HBV имеется «окно», когда HBsAg уже не определяется, а анти-HBs еще не появились. При этом выявляются анти-HBc IgM и IgG. Из этого следует вывод о необходимости обследования больных ОВГ на анти-HBc IgM даже при отрицательных результатах исследования HBsAg и анти-НВs. Антитела к HBeAg (анти-НВе) появляются в крови после элиминации HBeAg и завершения репликации вируса. К концу 9-й недели острого периода гепатита В более 90 % больных имеют анти-НВе. В период выздоровления анти-НВе могут исчезать. Однако, наличие анти-НВе не является показателем отсутствия инфекционности конкретной сыворотки крови. Показано, что у ряда больных в ходе развития гепатита В (около 10%) под влиянием «иммунного давления» на вирус возникают мутантные формы, которые «избегают» иммунного надзора и не элиминируются. У носителей анти-HBe был выделен мутант, неспособный продуцировать HBeAg из-за дефектов в области precore и получивший обозначение HBeAg-отрицательного. Появление HBeAg-отрицательного мутанта приводит к прогрессированию поражения печени при

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

продолжающейся репликации вируса (наличие ДНК HBV в сыворотке крови). При первичном инфицировании HBeAg-отрицательным мутантом существенно возрастает риск развития фульминантного гепатита. Описанные маркеры гепатита В исследуются методом ИФА. Спектр антител (анти-НВе, анти-НВs, анти-НВc IgM, анти-НВc IgG) и антигенов (HBsAg, HBeAg) позволяет установить диагноз гепатита В и определить стадию заболевания (таблица 3). Недостатком данного метода является невозможность его использования при заражении мутантными формами вируса, при иммуносупрессии (больные онкологическими заболеваниями, наркоманы и т.д.) и для количественной оценки присутствующего в организме возбудителя. Решение этих задач стало возможным в результате внедрения молекулярно-биологических методов в практику клинико-диагностических лабораторий.

Таблица 3. Различные сочетания серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В и их интерпретация

источник

Методика показана пациентам с такой клинической симптоматикой:

Пожелтение кожных покровов. Появляется при накоплении в дерме пигмента билирубина. Его высокая концентрация наблюдается при воспалении печеночной ткани.
Болезненные ощущения и тяжесть в правом подреберье. Увеличенная печень растягивает капсулу, провоцируя возникновение характерных признаков.
Повышение температуры до субфебрильных цифр, в сочетании с симптомами.
Мелкоточечная сыпь на кожных покровах. Она наблюдается при дефиците факторов свертывания крови вследствие печеночной недостаточности.
Слабость, недомогание, вялость и расстройство мышления.

Вернуться к оглавлению

Только для серологической диагностики гепатита C выполняют иммуноферментный анализ (ИФА).

источник

Основой лабораторной диагностики вирусных гепатитов служат:

— знания об их возбудителях и репликации

— информация о появлении и исчезновении маркеров инфицирования

— современные иммунохимические и молекулярно- биологические методы детекции антигенов, антител и нуклеиновых кислот/

Лабораторная диагностика гепатита В (ГВ)

Лабораторная диагностика ГВ — основана на выявлении специфических для ГВ антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот, основными из которых являются:

анти-НВс класса Ig М и IgG

Наиболее широко в диагностике ГВ используется определение НВsAg. Данный антиген выявляется как при остром, так и при хроническом заболевании (однако острая инфекция обычно подтверждается наличием высоких титров анти-НВс IgМ). При остром ГВ поверхностный антиген вируса обнаруживается через 3-5 недель от момента инфицирования, то есть задолго до появления клинических признаков болезни и в этих случаях является единственным серологическим маркером. НВsAg постоянно выявляется в преджелтушном и желтушном периодах болезни. Персистирование НВsAg в течение 6 месяцев и более указывает на затяжное или хроническое течение болезни, и позволяет предположить хроническое носительство вируса. Элиминация НВsAg и появление антител к нему является непременным условием выздоровления. Серологическими маркерами репликации ВГВ являются — анти-НВс класса IgМ, НВеAg, ДНК и ДНК-полимераза, которые обнаруживаются при остром ГВ с первых дней клинических проявлений и могут обнаруживаться при обострении хронического ГВ. Серологические маркеры репликации ВГВ определяют как в целях общей диагностики, так и для оценки эффективности применяемой терапии. НВсAg выявляется в ткани печени и не определяется в сыворотке крови. Опосредовано его присутствие в организме отражают циркулирующие антитела – анти-НВс класса IgМ и IgG. В острый период ГВ наличие анти-НВс класса IgМ является дополнительным маркером этого заболевания. Однако необходимо учитывать, что около 50% больных хроническим ГВ также могут иметь эти антитела в периоде обострения, но чаще в низких концентрациях. Наличие в сыворотке крови только анти-НВс класса IgG наблюдается в период между исчезновением НВsAg и образованием анти-НВs. Сочетанное выявление анти-НВс класса IgG в низком титре с анти-НВs указывает на перенесенную ГВ-инфекцию и наличие иммунитета. Все применяемые методы исследования для определения специфических маркеров ГВ можно разделить на 2 группы – иммунохимический и молекулярно-биологические. Иммунохимические – основное место принадлежит иммуноферментному анализу (ИФА) с его высокой чувствительностью и специфичностью, простотой проведения и стабильностью реактивов. Молекулярно-биологические – точечная и жидкостная гибридизация, а также цепная полимеразная реакция (ПЦР) – позволяет выявлять наличие ДНК-ВГВ непосредственно, либо с помощью определения вирусоспецифического фермента – ДНК- полимеразы..

Лабораторная диагностика гепатита Д (ГД) Вирус гепатита Д (ВГД) – это дефектный вирус, содержащий одно-спиральную РНК, которому для репликации необходимо помощь вируса ГВ для синтеза оболочечных белков, состоящих из HBsAg, который используется для инкапсуляции генома ВГД. Маркером активной репликации ВГД также является анти-ВГД класса IgМ. Серологические маркеры инфекции ГД зависят от того, как был приобретен вирус – в виде коинфекции с ВГВ (у большинства больных заболевание имеет острое течение и заканчивается выздоровлением) или суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией (протекает тяжелее, чем коинфекция — в 10% развивается фульминантный гепатит). При коинфекции в большинстве случаев антитела — анти-ВГД класса IgМ и IgG — обнаруживаются в течение заболевания. Титр анти-ВГД обычно снижается до практически неопределяемых уровней после выздоровления, и не сохраняется никаких серологических маркеров того, что человек был когда-либо инфицирован ВГД. Антиген ВГД определяется только у 25% больных и обычно исчезает вместе с исчезновением HВsAg. При суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией серологическая картина имеет следующие характерные особенности: – титр HBsAg снижается к моменту появления антигена ВГД в сыворотке; — антиген ВГД и РНК-ВГД продолжают определяться в сыворотке, так как обычно у большинства пациентов с суперинфекцией ГД (70-80%) развивается хроническая инфекция, в отличие от случаев коинфекции; — определяются высокие титры антител (анти-ВГД) как класса IgМ, так и IgG, которые сохраняются неопределенное время. Серологические маркеры вируса ГД определяют методом иммуноферментного и радиоиммунного анализа, а РНК-ВГД — методом полимеразной цепной реакции.

Лабораторная диагностика гепатита С (ГС) Открытие Геном вируса ГС (ВГС) представлен однонитчатой позитивной РНК, состоящих из 10 000 нуклеотидных оснований, образующих регионы, которые кодируют три структурных белка (С, Е1, Е2) и пять неструктурных (NS2, NS3, NS4, NS5). Лабораторная диагностика ГС основывается на обнаружении серологических маркерв ВГС: антител к вирусу ГС (анти-ВГС, анти-ВГС класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК-ВГС методом ПЦР. К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем для выявления анти-ВГС в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. РНК-ВГС является показателем активной репликации ВГС и самым ранним маркером инфекции, и может быть обнаружена методом полимеразной цепной реакции уже через 1- 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз. Анти-ВГС обнаруживаются к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц методом иммуноферментного анализа. При определении анти-ВГС в некоторых случаях регистрируется ложноположительная реакция. Для разграничения ложноположительных образцов от образцов действительно содержащих антитела к ВГС, разработаны дополнительные тесты – рекомбинантный иммуноблотинг, определение спектра белков анти-ВГС. Иммуноблотинговые диагностикумы позволяют исключить неспецифический результат, полученный методом ИФА, однако визуальная оценка иммуноблотинговых полос может быть неоднозначной в разных диагностических центрах. Диагноз хронического ГС у лиц с наличием анти-ВГС обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев.

Лабораторная диагностика гепатита А (ГА) Вирус ГА — это РНК- содержащий вирус, размером 27 нм, классифицированный как пикорнавирус. Лабораторная диагностика ГА основана на выявлении маркеров вируса ГА – антигена ВГА, антител (анти-ВГА класса IgМ и IgG ), а также РНК ВГА. Окончательным доказательством о текущей или недавней инфекции служит наличие в сыворотке крови (даже в одной пробе сыворотки) антител к ВГА класса IgM (анти-ВГА IgM) и наличие ВГА в фекалиях. На перенесенную инфекцию ГА, а также на длительный иммунитет, указывает наличие антител к ВГА класса IgG (анти-ВГА IgG). Диагноз острого ГА подтверждается в острой или ранней стадии выздоровления при наличии анти-ВГА класса IgM, которые появляются в последние 5-10 дней инкубационного периода и продолжают выявляться на протяжении 6-7 месяцев от начала заболевания. Кроме того, эти антитела могут быть выявлены в первые месяцы у лиц (20-30%), вакцинированных инактивированной вакциной против ГА. Их образование связано с первичным иммунным ответом на введение антигена, а не на инфекцию, вызванную вакциной. РНК ВГА может быть выявлена за несколько дней до повышения активности АлАТ и в течение 5 — 59 дней заболевания при типичном течении ГА; при затяжных случаях — РНК ВГА в среднем может определяться до 95 дней. Антиген вируса ГА (ВГА-Ag) обнаруживается в фекалиях больных за 7-10 дней до проявления клинических симптомов и в первые дни заболевания, что используется также для ранней диагностики и выявления источников возбудителя инфекции. Концентрация ВГА в фекалиях является наивысшей на протяжении 2-х нед. перед появлением желтухи. У взрослых выделение вируса с фекалиями продолжается обычно менее одной недели после появления желтухи. Вирус, однако, был обнаружен также через 2 мес. от начало заболевания (во время обострения). Дети могут выделять вирус более длительно, чем взрослые, возможно в течение нескольких недель после клинического проявления заболевания. Хроническое выделения ВГА из фекалий не отмечается. Определение антигена ВГА нашло также применение в санитарной вирусологии при исследовании воды на наличие вируса. Анти-ВГА класса IgG также появляются рано в начале заболевания (с 3-4 недели), сохраняются на протяжении всей жизни и обеспечивают пожизненную защиту от этого заболевания. Определение анти-ВГА IgG используется для изучения иммуноструктуры населения, динамики специфического гуморального иммунитета. Определение анти-ВГА класса IgG важно также для пред- и поствакцинального скрининга (минимальная протективная концентрация анти-ВГА соответствует 20 МЕ/л).

Для диагностики гепатита А прежде всего проводится расспрос больного, во время которого врач выясняет, не было ли у пациента за 7-50 дней до начала заболевания контакта с больными желтухой, не употреблял ли он сырую воду из случайных источников, немытые овощи и фрукты.Во время осмотра пациента учитываются такие симптомы гепатита А: острое начало болезни с резким повышением температуры и расстройством пищеварения, присоединение через несколько дней желтухи и улучшение на этом фоне самочувствия, увеличение печени и селезенки. Наконец, в обязательном порядке проводятся анализы крови на гепатит А, которые указывают на недавнюю инфекцию или на наличие уже выработанного в результате предыдущего инфицирования иммунитета к вирусу гепатитаА.Анализы на гепатит А могут показать повышение в крови больного билирубинаи печёночных ферментов; существуют анализы на антитела (иммуноглобулины) к вирусу гепатита А класса М (анти-НАV IgМ или анти-ВГА IgМ), которые выявляются с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) в сыворотке крови с первых дней болезни и далее в течение 3-6 месяцев. Анти-ВГА IgМ вырабатываются у всех больных гепатитом А, их обнаружение — ранний надёжный тест, позволяющий выявить любые варианты гепатита А и поставить диагноз до наступления желтухи. В диагностике гепатита В большое внимание уделяется опросу пациента и выявлению факторов риска гепатита В: факты внутривенного введения наркотических средств, случаи переливания крови, оперативные вмешательства и другие манипуляции, связанные с нарушением целостности кожных покровов или слизистых, случайные половые связи, тесный контакт с носителями вируса гепатита В или с больными хроническими заболеваниями печени в сроки от 6 недель до 6 месяцев до начала заболевания. Для диагностики гепатита В очень важны результаты анализов на антигены. Вирус гепатита В содержит 3 основных антигена: поверхностный НВsАg, внутренний НВcАg (который можно определить только в клетках печени) и связанный с ним НВеАg. Ко всем этим антигенам в ходе инфекционного процесса образуются антитела. Для их определения используется иммуноферментный анализ(ИФА). Кроме анализов на антитела, важную роль в диагностике гепатита В играет анализ на ДНК вируса гепатита В, который осуществляется методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Исходя из результатов анализов крови на гепатит В можно определить стадию заболевания, наличие хронического гепатитаВ, а также наличие иммунитета к заболеванию гепатитом В. При положительных анализах на гепатит В проводится обследование методом ИФА на наличие в крови больного маркеров дельта-вирусной инфекции, то есть гепатита D. Для постановки диагноза вирусного гепатита С, как правило, используется несколько лабораторных тестов. Среди них биохимический анализ крови и анализ крови на антитела к вирусу гепатита С (анти-HCV). Положительные результаты анализов на вирус гепатита С могут означать развитие хронической инфекции или инфекцию, перенесенную в прошлом.При первом анализе крови у некоторых больных может определяться положительный результат, который не подтверждается при более углублённом обследовании. Такая реакция может быть связана с другими причинами, а не с вирусом гепатита С. Для более точного диагноза определяется ДНК вируса гепатита С с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). При необходимости, врач назначает УЗИили биопсию печени.

Дата добавления: 2018-05-09 ; просмотров: 107 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник