Проблема диагностики вирусных гепатитов

Главная »» Научные учреждения, школы »» Академическая школа-семинар им. А. М. Уголева «Современные проблемы физиологии и патологии пищеварения» »» Научные публикации

опубликовано 09.04.2005 (Московское время 14:48) —>

версия для печати

М.И.Михайлов
Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва
Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН, Москва

Проблема вирусных гепатитов, по-прежнему, остается одной из центральных для здравоохранения всего мира и России. Значительный объем новой информации определяет необходимость их обобщения и соотношения с уже известными и ранее сформулированными положениями вирусных гепатитов.

Несомненно, небольшой объем данной публикации не позволяет рассмотреть большинство проблем, стоящих перед научными сотрудниками и специалистами практического здравоохранения. Исходя из этого, мы не ставим перед собой такую задачу. Тем не менее, нам кажется важным уделить внимание некоторым новым данным, что, несомненно, позволяет расширить представление о ситуации, складывающейся в изучении и профилактике вирусных гепатитов.

Прежде всего, возникает вопрос – почему проблема вирусных гепатитов столь актуальна? Причинами, определяющими это положение, могут быть:

– высокая заболеваемость и летальность, связанная с вирусными гепатитами. На XI– конгрессе по вирусным гепатитам и заболеваниям печени, который состоялся в Австралии (г. Сидней), были представлены новые данные о широте распространения гепатита В и С. По мнению Ф. Андре (2003 г.) сейчас в мире: около 4 миллиардов человек имели контакт с вирусом гепатита В (ВГВ); 400 миллионов являются бессимптомными носителями ВГВ, что почти в два раза превосходит их число, зарегистрированное в 1984 году (216 миллионов); число вновь регистрируемых случаев – 4-5 миллионов; количество смертей, связанных с инфицированием ВГВ, ежегодно составляет 1-2 миллиона. Столь же широкое распространение имеет и гепатит С (J.F. Perz et al., 2003). От 120 до 180 миллионов человек инфицировано вирусом гепатита С (ВГС).

– частое развитие после перенесенного острого заболевания хронического гепатита, цирроза печени и первичного рака печени. Особенно высокий уровень хронизации связан с инфицированием ВГС – до 70 %. Первичный рак печени и цирроз печени является одной из центральных проблем многих стран мира. Так в странах Западной части Тихоокеанского региона, в 4 – 76 % случаев эти заболевания этиологически связаны с ВГВ и ВГС.

– значительные социальные проблемы, связанные с вирусными гепатитами. Помимо прямых экономических потерь, возникающих с необходимостью выделения гигантских средств на лечение и профилактику этих инфекций, у больных вирусными гепатитами может возникать психологическая дезадаптация. Она во многом определена агрессивной рекламной компанией производителей лекарственных препаратов, направленной на получение максимальной прибыли.
Современный период борьбы с вирусными гепатитами характеризуется:

– Этиологической расшифровкой большинства случаев острого и хронического гепатита. Идентифицированы 8 гепатотропных вирусов гепатитов: A, B, C, D, E, G, TTV и SENV.

– Использованием высокочувствительных и специфичных методов выявления антигенов, антител и нуклеиновых кислот вирусов, ответственных за развитие гепатитов;

– Накоплением новых данных по эпидемиологии гепатитов и их молекулярной эпидемиологии.

– Внедрением вакцин против гепатита В в национальные календари прививок, вакцинация новорожденных.

– Получением новой информации о репликации гепатотропных вирусов и патогенезе заболеваний, вызываемых ими; разработкой новых лекарственных препаратов и схем лечения;

Традиционно вирусные гепатиты делят на 3 группы:

1. Вирусные гепатиты с фекально-оральным механизмом передачи возбудителя: гепатит А и Е.
2. Вирусные гепатиты с парентеральной передачей — гепатиты В; C, D, G, TT и SEN. Причем, вопрос о причастности вирусов TT и SEN к возникновению гепатита остается открытым.
3. Вирусные гепатиты – гепатиты «Ни А, Ни G», которые невозможно связать с известными вирусами. Считается, что, как минимум, два неизвестных вируса могут отвечать за развитие этих гепатитов.

ГЕПАТИТЫ С ФЕКАЛЬНО-ОРАЛЬНЫМ МЕХАНИЗМОМ ПЕРЕДАЧИ ВОЗБУДИТЕЛЯ:

ГЕПАТИТ А . Эта инфекция имеет повсеместное, но неравномерное распространение. В странах, расположенных в гиперэндемичных по гепатиту А регионах мира (страны жаркого климата), большинство населения в раннем детстве встречается с вирусом гепатита А, обеспечивая, тем самым, себе защиту в будущем. В отличие от них в экономически развитых странах мира, расположенных в Северных регионах, низкий уровень заболеваемости гепатитом А обеспечивается высокими санитарно-гигиеническими стандартами жизни.

В отличие от этих стран, в государствах, расположенных на территориях с промежуточной заболеваемостью, где при значительной неиммунной прослойкой населения происходит интенсивная циркуляция вируса – проблема гепатита А является актуальной. Россия относится именно к таким странам. По данным А.И. Юровских и С.Л. Мукомолова, частота выявления анти-ВГА среди жителей Свердловской области, в возрастной группе 15-19 лет — 32,2% , а среди лиц старше 40 лет достигает 91,4% . Заболеваемость гепатитом А в 2002 году по России составила – 46,68 на 100 тыс. населения.
В настоящее время система лабораторной диагностики гепатита А хорошо разработана.

Наличие «золотого» стандарта лабораторной диагностики гепатита А (IgM анти-ВГА) и методов выявления IgG анти-ВГА обеспечивает весть комплекс решения диагностических проблем. Разработка методов выявления РНК ВГА при помощи ПЦР анализа позволило, в очередной раз, поставить вопрос о существовании случаев длительной (несколько месяцев) циркуляции ВГА в крови пациента. По данным Bower WA et al., (2000 г.) удалось зарегистрировать наличие РНК ВГА на протяжении более 400 дней от начала заболевания.

Наличие вакцины против гепатита А позволяет проводить профилактику этой инфекции в полном объеме. Тестирование сывороток крови лиц, вакцинированных против гепатита А в первые дни после введения вакцины, установило увеличение процента лиц с наличием анти-ВГА от 30% (на 13 день) до 100% (на 16 день). Столь быстрое увеличение числа лиц, иммунных по анти-ВГА, позволяет применять вакцину против гепатита А во время возникновения вспышки заболевания. Хорошо известно, что для гепатита А характерны вспышки заболевания, в которые могут быть вовлечены значительное количество лиц. Наводнения, землетрясения, войны могут сопровождаться вспышками гепатита А. Проведение экстренной вакцинопрофилактики гепатита А позволило купировать крупные вспышки этой инфекции, возникшие в США, Словакии, Италии, России.

Вакцинация лиц, составляющих группы риска (военнослужащие, туристы, работники коммунальной службы и питания) по гепатиту А, не вызывает сомнения. В отличие от этого, на вопросы, связанные с необходимостью массовой вакцинацией населения и тактикой её проведения, необходимо дать четкий ответ. В 2000 году М.С. Балаян предложил стратегию проведения вакцинопрофилактики гепатита А, включающую три последовательных этапа вакцинации:

– 1-й этап: выборочно организованные детские коллективы (дошкольные и школьные)
– 2-й этап: все организованные детские коллективы (дошкольные и школьные); неорганизованные дошкольники; призывники в армию; работники предприятий общественного питания.
– 3-й этап: все дети до 15 лет; серонегативные по анти-ВГА взрослые

Возможность реального снижения заболеваемости гепатитом А на популяционном уровне доказана американскими исследователями (Afferhoff F.A., Shapiro C.N, Bell B.P. et al. 2000) при осуществлении плановой вакцинации населения одного из районов Калифорнии.

ГЕПАТИТ Е. До недавнего времени считалось, что гепатит Е имеет распространение только в регионах тропического и субтропического климата. Однако, неожиданно частое (1,5% — 3 %) выявление анти-ВГЕ в сыворотках крови лиц, проживающих в неэндемичных по этой инфекции регионах, обнаружило определенный парадокс, который заключается в следующем: при отсутствии регистрируемой заболеваемости в регионе часть населения встречается с вирусом гепатита Е. По мнению М.С. Балаяна с соавторами (2000), возможно три объяснения частого обнаружения анти-ВГЕ среди жителей неэндемичного региона:

– неадекватность методов, используемых для определения анти-ВГЕ;
– возникновение ситуаций, когда один и тот же вирус вызывает определенное состояние в одной климатической зоне и совершенно другое заболевание в другой климатической зоне;
– перекрестная реакция нераспознанного возбудителя с антигенами, используемыми для определения анти-ВГЕ.

До сих пор не ясно, какое или какие объяснения правильны. Возможно, анти-ВГЕ вырабатываются в результате контакта с вирусом гепатита Е свиней, который был идентифицирован у этих животных различных стран (США, Испания, Голландия, Китай, Япония и др.). Обнаружение вирусов, подобных вирусу гепатита Е человека у животных (свиней, крыс, цыплят) поставило вопрос о возможности рассмотрения гепатита Е как зоонозного заболевания.

В пользу этого свидетельствуют следующие факты:

– повышенная частота обнаружения анти-ВГЕ у лиц, имеющих контакт со свиньями по своей профессиональной деятельности. Так, по данным Ж.А. Дробенюка с соавторами (2001), частота выявления анти-ВГЕ среди работников свиноферм достоверно выше, чем у группы сравнения и увеличивается с увеличением стажа работы. Эти результаты были подтверждены исследованиями Meng X.L. et al. (2002), установившими более чем 5-кратную разницу выявления анти-ВГЕ среди работников ветеринарной службы по сравнению с группой сравнения.

– Неожиданные результаты были получены при изучении нескольких спорадических случаев гепатита Е среди жителей Северных префектур Японии, т.е. региона, неэндемичного по этой инфекции. (Nishizawa T., Takahashi M., Ohnishi S., 2003). Зарегистрированы случаи фульминантного гепатита Е у лиц, не имевших контакт с больными гепатитом Е и не выезжавших в регионы, эндемичные по этой инфекции (Ohnishi S., 2003).

Полное секвенирование РНК ВГЕ, выделенного у больных гепатитом Е, установило высокую степень гомологии (95,4%) с вирусом гепатита Е свиней (Tokita H. et al., 2003).
Несомненным достижением современной вирусологии является разработка вакцины против гепатита Е. Robert H. Purcell с соавторами (2003) удалось изготовить рекомбинантную вакцину, обладающую высокой иммуногенностью и протективной активностью, испытанной при экспериментальном заражении обезьян гепатитом Е. Начавшиеся испытания в Непале позволят ответить на вопрос об уровне защиты людей при помощи этого вакцинного препарата.

ГЕПАТИТЫ С ПАРЕНТЕРАЛЬНОЙ ПЕРЕДАЧЕЙ ВОЗБУДИТЕЛЯ:

ГЕПАТИТ В. Начало современного периода изучения гепатита В связано с обнаружением поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) – основного маркера вирусного гепатита В. За это открытие американский исследователь Б.Бламберг был награжден Нобелевской премией (1977 год). Обнаружение вируса гепатита В (частицы «Дейна») и его дальнейшее исследование позволило получить принципиально новую информацию об этом заболевании.

Первоначально казалось, что ВГВ уникален. Однако далее удалось идентифицировать подобные вирусы у различных животных: североамериканских сурков, земляных белок, пекинских уток. Все эти вирусы были объединены в семейство Hepadnaviridae, основными характеристиками которых являются:

– Наличие двуцепочечной ДНК, наименьшей из всех известных вирусов;
– Преимущественный гепатотропизм;
– Возникновение персистирующей инфекции;
– Размер частицы -40-45 нм.;
– Наличие нуклеокапсида вируса, покрытого оболочечными белками;
– Наличие в структуре вируса ДНК-полимеразы;
– Система репликации, включающая этап обратной транскрипции;
– Возникновение вирус-ассоциированного первичного рака печени.

Расшифровка структуры ДНК ВГВ установила существование четырех генов, кодирующих HBsAg (S-ген); HBсAg (С-ген); ДНК-полимеразу (Р-ген) и HBхAg (Х-ген). Применение современных молекулярных методов позволило установить: наличие 6-ти генотипов вируса; существование мутантных форм вируса, в некоторых случаях отвечающих за необычные проявления заболевания; создать рекомбинантную вакцину против гепатита В.

Для России проблема гепатита В приобрела чрезвычайный характер. Начало «массовой» наркотизации страны, приход «сексуальной революции» с распространением проституции, обнищание основной части населения – привело к росту заболеваемости, достигшему в 1999 и 2000 году – 43,3 и 42,2 на 100000 населения. Причем, среди жителей некоторых городов этот показатель превышал 150 на 100 тысяч. (Екатеринбург, Иркутск, Тольятти, Самара и др.). Столь массовое распространение гепатита В выдвинуло на первый план проблему защиты населения от этой инфекции.

Очевидно, что наиболее эффективной системой защиты от гепатита В является проведение вакцинации. Наличие безопасных и эффективных рекомбинантных вакцин против гепатита В делает возможным добиться снижения заболеваемости острыми и хроническими формами гепатита В, включая и первичный рак печени. Результаты, полученные при проведении массовой вакцинации в Италии, Китае, Тайване и других странах, убедительно подтверждают данное положение.
В качестве стратегии вакцинопрофилактики гепатита В избрана стратегия, обозначаемая как «универсальная». Она охватывает несколько групп населения:

– Всех новорожденных детей;
– Подростков 14-16 лет, т.е. возраста наибольшего риска инфицирования гепатитом В, так как именно в это время появляется первый сексуальный опыт и часто первый прием наркотических препаратов;
– Групп повышенного риска инфицирования (особенно медицинских работников).

Реализация этой стратегии в некоторых регионах и городах России позволила добиться ощутимого снижения заболеваемости. Так, например, в Екатеринбурге, городе с населением более 1 млн. человек, заболеваемость гепатитом В снизилась с показателя 193,4 на 100 тысяч. в 1999 году до показателя 20,1 в 2002 году.

Необходимость полномасштабного проведения универсальной стратегии вакцинации против гепатита В не вызывает сомнений. Вместе с тем, именно здесь приходится сталкиваться часто с неразрешимой проблемой – отсутствием необходимого количества финансовых средств.
Несмотря на накопленные знания о гепатите В , многие научные проблемы изучения гепатита В остаются не решенными. К ним могут быть отнесены:

– Обнаружение и изучение мутантных форм вируса гепатита В. В настоящее время обнаружено более 150 мутантных форм вируса. Эти мутации затрагивают различные гены ВГВ. Динамическое наблюдение на популяционном уровне установило, что происходит постепенное вытеснение «дикого» штамма вируса гепатита В штаммом вируса, обозначенным – мутантным вирусом по «Pre-Core ДНК ВГВ». Нет четкого представления о возможности появления мутантных форм вируса, которые будут «ускользать» от антител, полученных в результате вакцинации сегодняшними вакцинами против гепатита В. Обнаружение в некоторых случаях мутантных штаммов ВГВ у больных с фульминантным гепатитом В оставляют открытым вопрос о их роли в возникновении этих случаев гепатита В, которые в большинстве случаев заканчиваются смертью больного. Наиболее ясно ситуация обозначена в названии обзора G.Francois с соавторами, опубликованного в 2001 году в журнале «Vaccine» – «Мутантные вирусы гепатита В: предмет исключительно академического интереса или проблема с далеко идущими последствиями?»

– Наличие случаев реактивизации гепатита В у лиц, переболевших ранее гепатитом В с выработкой анти-HBs с последующей ситуацией развития иммунодефицитного состояния (например, онкологического заболевания), привлекло внимание к данной проблеме. Установлено, что у части лиц, выздоровевших от гепатита В, в гепатоцитах сохраняется интегрированная ДНК ВГВ.

– Чрезвычайно интересным и во многом нерешенным остается вопрос о «НВsAg-негативном гепатите В». Известно, что у некоторых пациентов гепатит В протекает без наличия НВsAg, что затрудняет диагностику этого заболевания.

ГЕПАТИТ D . Этиологический агент, вызывающий этот гепатит – РНК содержащий вирус (ВГD), репликация которого невозможна без наличия ВГВ-инфекции. Именно это определяет существование двух форм гепатита D — коинфекции (одновременное инфицирование ВГВ и ВГD) и суперинфекции (инфицирование ВГD носителя ВГВ). Клинически гепатит D протекает тяжелее чем гепатит В, именно он определяет всю летальность гепатита В.

В настоящее время интерес к дельта гепатиту D несколько снизился, что определяется уменьшением числа регистрируемых случаев этого гепатита, а также накоплением обширных знаний об этой инфекции. Вместе с тем, некоторые принципиально важные вопросы по его изучению не нашли окончательного решения. К этим вопросам можно отнести:

– Создание вакцины против гепатита D защищающую носителей вируса гепатита В от суперинфицирования. Проблема защиты от коинфицирования решается при помощи вакцины против гепатита В. Поствакцинальные анти-НВs направлены против HBsAg составляющего наружную оболочку ВГВ и ВГD, что не позволяет этим вирусам адсорбироваться на поверхности гепатоцита;

– До сих пор не ясна роль ВГD в развитии первичного рака печени. Ранее предполагалось, что лица, инфицированные ВГD, не успевают дожить до развития первичного рака печени. Выявление случаев дельта гепатита протекающего без клинически выраженных проявлений, делает необходимым пересмотреть наше представление об этой инфекции.

ГЕПАТИТ С. Можно без преувеличения сказать, что гепатит С является центральной проблемой вирусных гепатитов. Массовое распространение этой инфекции; чрезвычайно высокая способность вызывать развитие хронической инфекции (70-80% случаев острого гепатита С заканчиваются развитием хронического гепатита); высокая изменчивость вируса; отсутствие доступной модели для изучение гепатита С; пока непреодолимые трудности создания вакцины против гепатита С — определяют интерес к этой инфекции.

Вирус гепатита С представляет собой сферическую частицу, размером 50 нм. включающую в себя однонитевую, линейную молекулу РНК, протяженностью около 9600 нуклеотидов. Вирус гепатита С классифицирован, как представитель семейства Flaviviridae.

Активизация основных путей парентеральной передачи вируса гепатита С, произошедшая в России в последние годы, привела и к быстрому распространению этой инфекции. Начиная с 1994 г. (начало официальной регистрации гепатита С) по 2000 год заболеваемость возросла с -3,2 до 20,7 на 100 тысяч человек. В 2001 и 2002 годах этот показатель снизился и соответственно составил 16,5 и 7,6. По нашему мнению, это снижение во многом определилось уменьшением числа лиц, принимающих наркотические препараты и не инфицированных ранее ВГС. Установлено, что частота обнаружения анти-ВГС среди данной группы населения составляет 70-80%.

Характерная особенность гепатита С – длительный период (5-10 лет) между острым гепатитом, который в большинстве случаев протекает бессимптомно, и развитием клинически выраженного хронического гепатита С. Именно это положение позволяет прогнозировать через 5-10 лет резкий подъем регистрируемого хронического гепатита С. Анализ динамики заболеваемости гепатитом С, сделанный ученными США и Европы, позволил предположить резкое возрастание числа лиц обращающихся за помощью к врачу. Вероятно, эта ситуация только в большем объёме, ожидает Россию.
Несомненно, в последние годы достигнут ощутимый прогресс в изучении и профилактике гепатита С. Тем не менее, многие проблемы изучения гепатита С еще не разрешены. К важнейшим из них можно отнести:

– Создание вакцины против гепатита С. При этом необходимо решить следующие основные задачи:
o определение стратегии конструирования вакцины против гепатита С;
o выбор белков, кодированных различными зонами РНК ВГС, в качестве
o основы вакцины;
o конструирование генно-инженерных конструкций при создании
o вакцины
o создание адекватной лабораторной модели гепатита С.
В выступлениях, прозвучавших на XI конгрессе по вирусным гепатитам и заболеваниям печени (Сидней, 2003), был отмечен прогресс, достигнутый на пути создания вакцинных препаратов, однако общее заключение отразило ситуацию, сложившуюся при решении этой проблемы – необходимо получение новых фундаментальных знаний о биологии вируса гепатита С.

– Чрезвычайно важной проблемой изучения гепатита С – изучение эпидемиологии этой инфекции с привлечением новых методов исследования.
Основным положением в эпидемиологии гепатита С является факт возможной реализации всех факторов парентеральной передачи возбудителя. В отличие от гепатита В для заражения гепатитом С необходима более высокая инфицирующая доза ВГС. Именно этим объясняется более редкое инфицирование при реализации «вертикального» и «полового» пути передачи гепатита С. Общепризнанным остается факт ведущей доли случаев заражения при приеме наркотических препаратов и, прежде всего, вводимых внутривенно. Представляет интерес факт повышенной заболеваемости гепатитом С среди, лиц применяющих наркотики непарентерально.

– Важные данные о распространении гепатита С получены при изучении молекулярной эпидемиологии этой инфекции. Существование 6 основных генотипов ВГС, более 100 субтипов позволяет использовать их для: изучения внутрисемейной передачи гепатита С; определения региональных особенностей распространения отдельных генотипов вируса; решения прикладных и научных задач.

ГЕПАТИТ G . Вирус гепатита G был идентифицирован в начале 90-х годов ХХ века благодаря появлению новых молекулярных медов поиска неизвестных возбудителей. Исследование сывороток крови обезьян, зараженных материалом, полученным от больных гепатитом «НИ А,НИ В», позволил выявить три вируса, обозначенных GB-A; GB-B и GB-C агенты. В дальнейшем, американскими исследователями был обнаружен вирус, обозначенный как вирус гепатита G, РНК которого была на 90% подобна РНК агента GB-C.

Изучение вируса гепатита G позволило получить следующую информацию:
– геном вируса представлен одноцепочечной молекулой РНК с позитивной полярностью. По своей организации он подобен РНК HCV, т.е. структурные гены расположены у 5’ области генома, а неструктурные – у 3’ конца.
– вирус гепатита G, так же, как GBV-A , GBV-B и GBV-C и HCV, относят к семейству Flaviviridae
– в отличие от РНК HCV в Е1 и Е2 регионе отсутствует гипервариабельная область.
– все известные изоляты HGV удалось разделить на пять филогенетических групп, обозначенных арабскими цифрами.

Несмотря на пристальный интерес к проблеме гепатита G, работ, посвященных изучению клинических проявлений этой инфекции, не много. Вероятнее всего, это можно объяснить редким выявлением случаев моноинфекции гепатита G.

В настоящее время общепринятого мнения о роли вируса гепатита G в патологии человека остается открытым. Однако сохраняется повышенный интерес к этой инфекции. Этот интерес определяется:

– Полученными данными о возможной взаимосвязи выявления РНК HGV и показателями выживаемости больных ВИЧ-инфекцией. По данным Tillmann H.L. и Xiang J. с соавторами, показатель выживаемости у этих пациентов достоверно выше, чем в группе сравнения. Эти исследования позволили предположить, что вирус гепатита G оказывает супрессивное воздействие на репликацию ВИЧ или же является маркером ещё неизвестного фактора. Вместе с тем, результаты строго контролируемого изучения данного явления, доложенные на конгрессе в Сиднее (Widell A., 2003), продемонстрировали отсутствие данной зависимости.

– Близостью свойств HGV и ВГС, что открывает возможность использования вируса гепатита G как модель изучения гепатита С. В отличие от гепатита С гепатит G можно моделировать на нечеловекообразных обезьянах, что значительно удешевляет проведение этих работ, прежде всего, при разработке вакцины против гепатита С.

ВИРУСЫ ТТ и SEN. Главная проблема изучения этих вирусов – определение их способности вызывать гепатит и выяснение их роли в патологии человека.

ТТ-ВИРУС — представляет собой частицу размером 30 –50 нм. Геном вируса представлен ДНК, имеющей кольцевую структуру протяженностью около 3800 нуклеотидов. ТТV можно назвать первым членом нового семейства вирусов, которое могло быть обозначено Circinoviridae (от латинского “circinatio” – «описывающий круг»).

Сравнение штаммов ТТ-вируса позволило выявить более 20 генотипов вируса. Кроме того, были дополнительно идентифицированы вирусы близкие к этому вирусу и имеющие общую систему организации генома. Выявлены изоляты вируса, обозначенные YONBAN и SANBAN, отличающиеся по последовательностям ДНК от прототипных штаммов ТТV более, чем на 50% Значительно большие различия зарегистрированы в изоляте вируса, обозначенном – малый TT-вирус.
Тестирование сывороток крови на наличие ДНК ТТV при помощи тест-систем 4-го поколения продемонстрировало чрезвычайно высокую частоту (более 90 %) распространения вируса в человеческой популяции. Кроме того, ТТ- вирус обнаружен у различных животных: коров, кур, свиней, собак и др.

SEN-ВИРУС . 20 июля 1999 года в газете «Нью-Йорк Таймс» было опубликовано интервью с сотрудником итальянской фирмы «DiaSorin» доктором Даниилом Пери, в котором он впервые сообщил о своих исследованиях, в результате которых был идентифицирован ранее неизвестный вирус. В сыворотке крови больного СПИД во время подъема активности сывороточных трансаминаз при помощи одного из вариантов ПЦР обнаружены последовательности ДНК, которые ранее у него не выявляли. Отсутствие в крови маркеров известных вирусов, способных вызвать гепатит, позволило расценить подъем активности ферментов как случай гепатита «ниА, ниG» и предположить, что выявленный агент представляет собой до сих пор неизвестный вирус, ответственный за развитие гепатита «ниА,ниG». По сложившейся традиции по инициалам первого больного, у которого был идентифицирован этот агент, вирусу присвоено обозначение S.E.N.

Молекулярно-вирусологические исследования SENV установили, что это небольшой безоболочечный вирус, содержащий одноцепочечную кольцевую ДНК (приблизительно 3800 нуклеотидов). По физико-химическим и структурным характеристикам этот вирус близок к ТТV и может быть классифицирован как член семейства Сircovviridae. Исследования изолятов SEN-вируса продемонстрировали существование, как минимум, восьми генотипов: A; B; C; D; E; F; G и Н. Несмотря на накопление информации о SEN-вирусе и широте его распространения, главный вопрос о его этиологической роли в возникновении гепатита остается открытым. Повышенная частота выявления ДНК SENV среди больных острым гепатитом «ниА, ни G» может косвенно свидетельствовать о роли этого вируса в развитии гепатита. Однако большинство исследователей считает, что имеющихся данных недостаточно для такого заключения.

Заключение

Ограниченный объем данной лекции не позволяет остановиться на всех проблемах изучения вирусных гепатитов. Мы осознанно обошли проблемы клиники и лечения вирусных гепатитов. Даже перечень проблем, стоящих перед исследователями вирусных гепатитов, указывает на масштабность. К ним могут быть отнесены:

– получение углубленной информации о: всех этапах репликации вирусов; мутантных формах вирусов гепатитов и их роли в развитии тяжелых и фульминантных форм заболевания; иммунопатологических процессах, прежде всего, происходящих при гепатите С; механизмах канцерогенеза при развитии первичного рака печени, обусловленного вирусами гепатита В и С;
– накопление данных по молекулярной эпидемиологии вирусных гепатитов, что, вероятно, позволит разработать новое представление о происхождении и распространении вирусов гепатита среди населения Земли;
– дальнейшая стандартизация методов индикации маркеров инфицирования вирусами гепатитов;
– разработка и внедрение современной стратегии вакцинопрофилактики гепатита А;
– разработка лечебных вакцин против гепатита В, а также вакцины против гепатита С, что является приоритетной задачей на ближайшие годы;
– понимание особенностей распространения гепатита Е в эндемичных и неэндемичных регионах мира; ответ на вопрос – является ли гепатит Е зоонозом?
– разработка эффективных программ по борьбе с гепатитом С;
– выяснение роли вирусов гепатитов G, TTV и SENV в развитии патологии человека.
– поиск новых вирусов, отвечающих за развитие гепатитов, обозначаемых как «Гепатиты ни А, ни G»

Несомненно, и они не исчерпывают всего перечня проблем изучения этих инфекций. Вероятно, именно это делает привлекательным вирусные гепатиты для исследователей различных специальностей.

источник

Лабораторная диагностика вирусных гепатитов.

Лабораторная диагностика этиологического агента исключительно важна для определения прогноза заболевания, и в особенности (при количественном определении вирусных нуклеиновых кислот) для оценки эффективности противовирусной терапии.

Вызывается гепадновирусом сферической формы, окружен липидной оболочкой с включенными в нее молекулами поверхностного антигена

(HBS Ag). Геном представлен кольцевой молекулой ДНК, включающей участки как однонитевой так и двунитевой структуры. Вирусная ДНК состоит их 3200 нуклеотидов и объдиняет 4 гена (P, C, S, X ). Нуклеокапсид содержит сердцевинный антиген ( HBc Ag ) .

1. ДНК вируса ( HBV DNA ) содержится в сыворотке (в плазме ).

Ее выявление означает вирусемическую стадию процесса , свидетельствует о высокой репликации вируса .

При остром ВГВ содержание HBV DNA в крови быстро возрастает в течение инкубационного периода и становится максимальным в начале периода разгара.

Циркуляция ДНК вируса более 5-6 месяцев — неблагоприятный прогностический признак.

2. Поверхностный антиген HBS Ag в зрелых вирионах существует в трех различных молекулярных формах : сферические частицы диаметром 22нм ; филаментозные формы длиной 20-200нм ; полноценный вирион (частица Дейна). С точки зрения иммуногенности выделяют различные серотипы

HBS Ag образующиеся путем сочетания основной антигенной детерминанты а с двумя субдетерминантами , попарно исключающими друг друга ( d/y и w/r ): adw , adr , ayw , ayr . Антиген а обеспечивает формирование общего перекрестного иммунитета ко всем субтипам вируса . HBS Ag является наиболее ранним маркером вирусного гепатита В появляется в крови еще в инкубационном периоде ( на 3-5 неделе от момента инфицирования) и циркулирует в крови при остром течении заболевания до 5-6 месяцев . Обнаружение HBS Ag в крови после 6 месяцев может указывать на начало хронизации процесса .

Отрицательный HBS Ag указывает на отсутствие ВГВ, но может быть а )- серонегативная стадия инкубационного периода (до 6 мес. после заражения

Обнаружение HBs Ag проводится с целью:

диагностики острого и хронического гепатита В.

дифференциальной диагностики вирусных гепатитов.

контроля донорской крови и ее препаратов для предотвращения посттрансфузионного гепатита В.

определение групп риска ( медперсонал, контактные в очагах инфекции )

предотвращение передачи инфекции от беременных к плоду.

3. Анти HBs. ( антитела к HBs Ag ). Являются показателем иммунитета к ВГВ или иммунного ответа на вакцинацию против гепатита В.

При остром ВГВ выявляются в сыворотке крови обычно спустя длительное время ( от 3-4 недель до 1 года ) после исчезновения HBs Ag . Их появление служит критерием развития постинфекционного протективного иммунитета и выздоровления после острого ВГВ.

При хроническом ВГВ анти — HBs либо отсутствуют, либо обнаруживаются в низких титрах при продолжающейся HBs -антигенемии.

Обнаружение анти — HBs антител проводится с целью:

-оценки специфической реактивности иммунной системы пациентов после инфицирования или вакцинации против гепатита В.

контроля за выздоровлением больных гепатитом В.

Сердцевидный антиген HBc Ag — ядерный антиген, входит в состав нуклеокапсида вируса. В свободной форме локализуется в ядрах гепатоцитов. В сыворотке крови находится в составе частицы Дейна, и обычными методами не выявляется. Является сильным иммуногеном , вызывает образование антител .

Анти HBc IgM -антитела к НBc Ag выявляются в сыворотке больного в острой фазе ГВ еще в инкубационном периоде до пика повышения АЛТ и до появления желтухи .через 1-4 недели после. При ОВГВ присутствуют в сыворотке от 2-3 месяцев до1,5 лет. Пик концентрации — начало реконвалесценции . Анти HBc Ig M могут быть единственным серологическим маркером ОВГВ в фазу «окна» по HBS Ag/ анти HBS.

Анти HBc IgМ обнаруживаются и у больных хроническим ВГВ в период обострения .

Анти — HBc Ig M являются основным серологическим маркером острого вирусного гепатита В.

Исчезновение анти — HBс Ig M рассматривается, как окончание острого инфекционного процесса.

Анти HBc Ig G — определяются в максимальном титре в период реконвалесценции и циркулируют в более низких тирах пожизненно и служат надежным доказательством постинфекции ВГВ.

Hbe —антиген ( антиген инфекционности ) антиген е локализован в сердцевине вириона , не только присутствует в составе вириона , но и циркулирует в крови . При остром вирусном гепатите В обнаруживается в крови уже в инкубационном периоде одновременно или спустя неделю после появления HBS Ag на ранних этапах инфекционного процесса уже при первых клинических проявлениях болезни. Выявление Hbe Ag указывает на высокую репликативную активность вируса ГВ и во много раз увеличивает опасность заражения при попадании инфицированной сыворотки в кровь здорового человека. Следовательно индикация HВe —антигена имеет не только диагностическое, но и важное эпидемиологическое значение. Индикация Hbe Ag имеет значение для диагностики различных форм ВГ. Хронический ГВ репликативного типа протекает при стабильной циркуляции Нв е- антигена и отсутствии анти -HВe-антител. При хроническом ГВ интегративного типа,наоборот, анти НВе антитела в крови присутствуют , а HBe -антиген не обнаруживается.

Обнаружение HBe — антигена производится в сыворотке крови с целью :

диагностики острой формы гепатита В

дифференциации типов хронического гепатита В

контроля за выздоровлением больных гепатитом В.

8. Антитела к HВe антигену ( анти HBe )появляются при остром вирусном гепатите В уже на 2-3 неделе желтушного периода . Циркулируют анти НВе в крови на протяжении 2 -5 лет , реже нескольких месяцев. Наличие их в сыворотки крови свидетельствует о завершении репликации вируса и начале стадии реконвалесценции.

Анти -НВе антитела являются важным серологическим маркером ранней реконвалесценции или хронического персистирующего гепатита В.

Определение анти -Нве антител производится в сыворотке крови с целью :

определения хроничекого персистирующего гепатита В.

диагностики начальной фазы реконвалесценции гепатита В.

Вирусный гепатит В — одна из самых распространенных на земном шаре инфекций. Ежегодно в мире по данным ВОЗ первично заражается ГВ более 50 млн. человек. У 5-10 % из них формируется хроническая инфекция, которая может завершиться циррозом печени или гепатоклеточной карциномой. Ежегодно в мире количество летальных исходов от ГВ достигает 2 млн. человек. За 15-20 лет гибнет больше людей, чем за всю ВОВ.

Инкубационный период при ГВ варьируется в широких пределах от 45 до 160 дней и чаще составляет 3-4 месяца. Источник заражения является только больной человек. Заражение происходит парентеральным путем ( концентрация вируса ГВ в крови макс. 10 в 8 степени в 1 мл крови достигает). Для заражения 1 человека достаточно 10 частиц. Из 1 мл зараженной крови можно заразить 10млн. человек, из 1 капли крови -500 тыс. человек. Вирус ВГВ обнаруживается в различных секретах и экскретах : в слюне, слезной жидкости, сперме. Т.о. заражение происходит не только парентеральным путем, но и половым и вертикальным ( от матери к плоду) Распространению способствует большое количество вирусоносителей, которые по данным ВОЗ составляют от 0,1 до

20 % населения страны или региона. Страны Северной, Центральной Европы ,Австралия гипоэндемичны -0,5%т вирусоносителей, Восточная , Южная Европа.,Средний Восток, Азия , Япония — средне эндемичны — 1-7% вирусоносителей. Страны тропической Африки,Южной Америки -гиперэндемичны -от 8 до 20% вирусоносителей.

Геном представлен двунитевой кольцевой ДНК ( одна нить на одну треть недостроена). Ген S — кодирует HBS A, ген С — кодирует HBc Ag и HbeAg,

ген Р — кодирует фермент ДНК-полимеразу, ген X — обладает функциями ТАТ -гена( трансактиватор транскрипций), т.е. кодирует белок , который активирует размножение вируса.

Вирус ВГВ гематогенным путем заносится непосредственно в печень. В патогенезе важную роль играют аутоиммунные гуморальные и клеточные реакции. Предполагают, что поражение гепатоцитов связано не только с непосредственным действием самого вируса , но и с иммунологическими реакциями хозяина, возникающими в связи с модификацией клеточной мембраны вирусными белками, которые индуцируют появление аутоантител к клеткам печени.

Клиническое течение разнообразно: болезнь может протекать в латентной форме, выявляемой лишь лабораторными методами, в типичной желтушной форме, в злокачественной форме, заканчивающейся летально. Продожительность преджелтушной стадии составляет от одного дня до нескольких недель. Желтушный период, как правило, длительный и характеризуется хорошо выраженными симптомами (желтуха, гипербилирубинемия, потемнение мочи, желтушность склер).

Постинфекционный иммунитет длительный , пожизненный, обусловлен вируснейтрализующими антителами (анти HBS ) при отсутствии в крови его поверхностного антигена .

Одним из частых исходов хронического гепатита В является цирроз и рак печени.

Специфическая профилактика: вакцинация. Стратегия ВОЗ — поголовная вакцинация новорожденных, групп риска в странах, где 2% вирусоносителей.

Лечение — препараты интерферона (роферон, виферон, лейкиферон) — 3месяца по 6 млн. ед. 3 раза в неделю, и еще 3 месяца по 3 млн. ед. 3 раза в неделю.

HDV — дефектный вирус, вирус гепатита Дельта не может размножаться без вируса гепатита В (вируса- помощника). Вирион имеет сферическую форму, его диаметр 35-37 нм. Суперкапсид Дельта-вируса состоит из поверхностного антигена ВГВ -HBS Ag . Геном представлен кольцевидной РНК.

5% носителей ВГВ инфицированы ВГ Дельта. Заражение аналогично ВГВ.

Смешанные инфекции ВГВ и ВГД встречаются в виде ко — инфекции и супер-инфекции.

Ко — инфекция — характеризуется одновременным заражением двумя вирусами.

Следовательноно: имеется острый ВГВ + острый ВГД.

Супер-инфекция характеризуется тем, что больной хроническим ВГВ заболевает ВГД . Это часто приводит к тяжелому течению болезни , летальность до 70%, циррозу печени.

Определение антител к ВГД — анти -ВГД Ig G антитела являются основным серологическим маркером инфицированности крови вирусом гепатита Дельта.

Они обнаруживаются практически у всех лиц с острым ВГД, а также у 95% больных с фульминантной формой гепатита В.

Семейство Флавивирусы ( Fiaviviridae). Род Hepacevirus.

Вирион сферической формы, имеет суперкапсид. Геном ВГС представлен однонитевой нефрагментированной позитивной РНК.

Источник инфекции только человек. Вирус определяется в крови, в сперме, слюне, моче. Распространение вируса происходит трансфузионно при переливании крови и ее препаратов, или инструментальным путем, а также трансплацентарно от матери к плоду. Восприимчивость очень высокая.

В структуре заболеваемости острыми вирусными гепатитами острый гепатит С в среднем по России составляет 9,4% (1997 год). Официальная регистрация этого гепатита начата в1994 году. За это время показатели заболеваемости ( на 100 тысяч) возросли с 3,2 до 9,04%. О широте распространения гепатита С свидетельствует и частота выявления антител к вирусу гепатита С ( анти-ВГС) среди населения различных стран мира. Частота выявления анти — ВГС в странах Западной Европы 0,1- 1,6%, в США — 0,5 — 1,5%, в странах Восточной Европы и Азии — 1,5 — 4%, в странах Африканского континента — 4 — 10% и выше,

Группы риска: медработники — 6%., наркоманы -100 % , больные на гемодиализе — 12%, при переливании крови -50%.

Инкубационный период — 6-8 недель. Заболевание часто протекает бессимптомно, клиническое течение более легкое, чем при ВГВ, только в 25% отмечается желтуха. Но не зря о нем говорят «ласковый убийца» — в 50 % отмечается хронизация заболевания с последующим развитием в 20% и более цирроза и рака печени. Течение, исход, эффективность лечения интерфероном зависит от генотипа вируса. Существуют генотипы 1А, 2А, 3 А , 1В. Наиболее опасным является генотип 1В. В России доминирует генотип 1В ( 60 — 90 % случаев ).

Лечение — интерферонотерапия. ( лучше альфа-интерферон) — при остром ВГС инъекции по 3 МЕ 3 раза в неделю в течение 3 месяцев, при хроническом ВГС — 3 МЕ 3раза в неделю на протяжении года.

Рекомендовано комплексное применение интерферона и рибаверина (per os ).

Эффективность лечения при ВГС генотипа 2ф , 3ф выше, чем1В .

Определение антител класса IgG является основным маркером вирусного гепатита С. Обнаружение антител класса М свидетельствует о продолжающейся репликации вируса, что характерно для острой фазы ВГС — инфекции. В латентной фазе заболевания анти — ВГС — М практически не обнаруживаются и вновь появляются во время обострений, большей частью в сочетании с повышением АLT.

Выявление РНК ВГС методом полимеразно — цепной реакции в качественном и количественном варианте является «золотым стандартом» в диагностике вирусного гепатита С и подтверждением позитивных результатов выявления анти -ВГС.

источник

Диагностика острых и хронических гепатитов обязательно должна носить комплексный характер.

Прежде всего она направлена на определение возбудителя данного заболевания. Также врач обязательно должен оценить степень нарушения работы печени и выявить сопутствующие осложнения. Начальной стадией диагностики является изучения анамнеза и осмотр пациента. После этого специалист назначает другие методы диагностики вирусных гепатитов – лабораторные и инструментальные.

В процессе ПЦР-диагностики заболевания определяют маркеры острых и хронических гепатитов. К ним относят следующее:

1. Маркеры гепатита А. Анти-НАV IgM появляются в крови к окончанию инкубационного периода. В этот момент у человека возникают первые симптомы гепатита. Антитела присутствуют в сыворотке около полугода. Благодаря выявлению данных веществ методом ПЦР можно говорить о текущей или недавно возникшей инфекции.
   Анти-НАV-total возникают в сыворотке позже. Они говорят о присутствии HAV-инфекции и последующем формировании иммунитета. Данный показатель, полученный в процессе исследований методом ПЦР, может использоваться для определения эффективности профилактики с помощью вакцин.
2. Маркеры гепатита В. В эту категорию входит НВsAg, который является поверхностным антигеном гепатита В и появляется в завершающей стадии инкубационного периода. Его не удается выявить в 10 % острых случаев заболевания и большинстве хронических.
   Антитела анти-НВs возникают спустя 3-12 месяцев после начала развития патологии. Они присутствуют в организме примерно 5 лет. Ангиген НbcorA не удается определить в сыворотке крови. Его удается выявить лишь в гепатоцитах.
   Анти-Нвcor IgM представляет собой антитела к ядерному антигену, которые характерны для завершения инкубационного периода и начала развития болезни. Определение данных веществ является значимым критерием при проведении ПЦР-диагностики.
   Анти-Нвcor IgG характерны для парентеральных гепатитов во время развернутой клинической картины. Они сохраняются на всю жизнь и свидетельствуют о том, что человек перенес инфекцию. В завершение инкубационного периода можно обнаружить НвeAg. Он сохраняется в течение 10-12 недель и говорит о репликации парентеральных вирусов.
   Анти-Нве представляют собой антитела к HbeAg и возникают во время развернутых проявлений. Данные вещества сохраняются на 5 лет после заболевания. При хронических парентеральных гепатитах их выявляют и по истечении указанного времени.

Помимо ПЦР-диагностики, очень важно оценить количество ферментов печени. Поражение тканей органа сопровождается попаданием в кровь ферментов, что влечет их увеличение в составе плазмы. В нормальном состоянии количество АСАТ составляет 5-35 Ед./л, а АЛАТ – 5-40 Ед./л.
Лабораторная диагностика вирусных гепатитов должна включать определение плазматической активности щелочной фосфатазы. В случае развития гепатита она увеличивается. В норме данный показатель составляет 30-115 Ед./л.
Немаловажное значение имеет оценка фракций билирубина – свободного и связанного. Его повышение обусловлено неспособностью клеток печени выводить из организма данный пигмент. В норме концентрация связанного билирубина составляет 0,1-0,3 мг/дл, а свободного – 0,2-0,7 мг/дл.

Наши постоянная читательница

Наша постоянная читательница справилась с ГЕПАТИТОМ С действенными медикаментами — Софосбувир и Даклатасвир. По отзывам пациентов — результат 97% — полное избавление от вируса. Мы решили посоветовать ДЕЙСТВЕННУЮ терапию Вам. Результат почти 100%. ДЕЙСТВЕННЫЙ МЕТОД.

Чтобы обследовать органы брюшной полости, обычно применяют ультразвуковое исследование. Это достаточно простой метод, который помогает визуализировать увеличение печени и других органов, а также оценить происходящие в них изменения. Также с помощью УЗИ оценивается состояние сосудов. Если же врач планирует сделать пункционную биопсию, данный метод поможет выбрать оптимальное место для прокола.
С помощью данного аппарата удается увидеть на мониторе определенные сечения внутренних органов. В результате можно визуализировать локальные изменения в них – камни, опухолевые образования и т.д.
Неправильные результаты можно получить исключительно в том случае, если работа органа нарушается на клеточном уровне. Вследствие этого весь орган поражен. К примеру, при изменении клеток печени удастся обнаружить нарушение оттенка тканей. Однако информацию относительно характера и тяжести болезни получить не удастся.
В такой ситуации проводится пункционная биопсия. Это наиболее точная методика, которая позволяет получить максимальное количество информации. С помощью данного способа оценивается структура тканей печени, что позволяет наиболее точно диагностировать гепатит.

Гепатит у беременных – очень опасная патология, поскольку она практически всегда провоцирует нарушения в развитии плода. При поражении вирусом типа В практически всегда заражается и ребенок. Наличие гепатита С у беременных провоцирует несколько иную картину. Тем не менее, нельзя сказать, развитие данного заболевания у беременных спровоцирует инфицирование малыша.
Чтобы провести правильную диагностику, прежде всего нужно сдать анализ крови и провести ПЦР-диагностику. При гепатите В у беременных имеет значение наличие HBsAg и НВеАg. Если они присутствуют, риск заражения ребенка повышается. В такой ситуации также уменьшается эффективность вакцины для беременных.
Если же будущая мама заболевает гепатитом С, инфицирование ребенка происходишь лишь в 5 % случаев. При этом данный вид заболевания передается от беременных к плоду лишь при условии активного протекания недуга. В большинстве случае ребенок заражается от матери при родах.
При выявлении вирусного гепатита у беременных обязательно требуется стационарная терапия. Если у женщин развивается цирроз печени, нужно принимать все меры, чтобы беременность и вовсе не наступила. Дополнительные нагрузки на организм, которые возникают у беременных, спровоцируют сильное обострение болезни.
При хронизации процесса беременность не оказывает влияния на клиническую картину патологии. Иногда у беременных женщин воспаления в печени и вовсе прекращаются. Однако нужно быть готовой к тому, что после родов гепатит резко обострится. Потому так важно держать данный процесс под контролем.

Дифференциальная диагностика проводится для того, чтобы отличить вирусный гепатит от острых поражений печени, связанных с воздействием химических веществ. Особенно важно провести диф диагностику алкогольной формы заболевания. На начальном этапе развития этого недуга часто ставят ошибочный диагноз, принимая его за вирусный гепатит. Это происходит в 50 % случаев.
Чтобы провести диф диагностику этих процессов, нужно учитывать, что алкогольный гепатит развивается исключительно на фоне постоянного употребления большого количества спиртного. Важными критериями диф диагностики в данном случае является следующее:

источник