Микробиологическая диагностика вирусных гепатитов

40 минут при комнатной температуре для нейтрализации вируса

0,25

4. Обнаружение противовирусных антигенов с помощью реакции преципитации. Реакция преципитации в агаре широко используется для диагностики вирусных заболеваний (полиомиелита, Коксаки и др.) Реакция может быть поставлена в чашках Петри, на предметных стеклах и в капиллярах.

Постановка реакций преципитации на предметных стеклах для выявления антигена вируса полиомиелита.

На обычные предметные стекла наносят 2 мл расплавленного и охлажденного до 60 º агара (I % — ый агар на физиологическом растворе с 1:20000 мертиолята). Толщина слоя агара на стекле составляет около I мм. После застывания агара в нем вырезают лунки диаметром 3-4мм с расстоянием между центрами луночек 5-6 мм. Количество луночек и их расположение на стекле могуть быть различными в зависимости от условий опыта. Объем используемых ингредиентов 0,02 мл. Реакция ставится с несколькими контролями. Для определения антигена вируса вырезают 4 лунки (см. схему) и каждую из них наливают соответственно следующие ингредиенты: специфическая сыворотка, специфический антиген, нормальная сыворотка, искомый антиген. Если искомый интиген соответствует сыворотке, то между соответствующими луночками должна появиться линия преципитации. Линия преципитации должна также появиться между лунками со специфической сывороткой и специфическим антигеном.

Преципитация наблюдается через 4-5 часов инкубации в термостате во влажной камере.

Схема постановки реакции преципитации в агаре для выявления вирусного антигена (рис. 7).

Сс — сыворотка специфическая; Сн — сыворотка нормальная;

Ас — антиген специфический; Аи — антиген искомый.

Рис.№7. Реакция преципитации для обнаружения противовирусных антигенов

Препараты для специфической профилактики полиомиелита

Примечание: курсивом выделен более используемый препарат.

Вопросы для самоконтроля:

1. Какие вирусы относятся к энтеровирусам? Дайте общую характеристику рода энтеровирусов?
2. Принципы антигенной классификации энтеровирусов.
3. Дайте характеристику вируса полиомиелита. Сколько существует серотипов полиовируса?
4. Какие вирусологические методы применяют для диагностики полиомиелита и других энтеровирусных заболеваний?
5. Какие серологические методы диагностики могут быть использованы при заболевании полиомиелитом?
6. Можно ли провести серодиагностику полиомиелита, располагая лишь одной сывороткой, полученной от больного в остром периоде заболевания?
7. Укажите препараты, применяемые для специфической профилактики полиомиелита.
8. Какие вирусы относятся к пикорновирусам?
9. Перечислите заболевания, вызаемые вирусами Коксаки и ECHO.
10. Методы диагностики вирусной инфекции Коксаки и ECHO.

Занятие 22
ТЕМА: МИКРОБИЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ. МИКРОБИЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВИЧ- ИНФЕКЦИИ (ВИРУС ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА).

Цель: иметь представление о биологических особенностях возбудителей вирусных гепатитов. Изучить методы микробиологической диагностики вирусных гепатитов. Иметь представление о биологических особенностях возбудителя вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Изучить методы микробиологической диагностики ВИЧ.
Возбудители вирусных гепатитов . Вирусные гепатиты являются важнейшей проблемой инфекционной патологии. Это системные инфекционные заболевания с преимущественным поражением клеток печени. В зависимости от основных путей заражения вирусные гепатиты делятся на энтеральные, к которым относятся вирусы гепатитов А и Е, и парентеральные, к которым относятся вирусы гепатитов B, C, D, G и др.

Вирусный гепатит А — антропонозное острое инфекционное заболевание, вызывается РНК содержащим вирусом гепатита А и характеризуется лихорадкой, поражением печени, интоксикацией.

Вирус гепатита А — обозначается HAV (Hepatis A Virus) и относится к семейству Picornaviridae, к роду Enterovirus. Открыт Фейнстоном в 1973 году в фекалиях методом ИЭМ. Вирион гепатита А представляет однонитевую + РНК, окруженную белковой оболочкой. Как и другие представители семейства пикорнавирусов, имеет мелкие размеры 27 — 32 нм. Капсид состоит из 60 капсомеров, суперкапсидной оболочки не имеет. Вирус гепатита А не размножается в куриных эмбрионах и организме лабораторных животных. В отличие от других энтеровирусов плохо размножается в культурах тканей. Вирус устойчив к действию температуры (60 0 С в течение 12 часов), инактивируется при 100 0 в течение 5 минут. Быстро погибает при действии дезинфицирующих веществ.

Источником инфекции являются больные с явной клинической картиной и со скрытой инфекцией. Вирус выделяется с фекалиями в течение последней недели инкубационного периода и в поджелтушном периоде. Хроническое носительство при гепатите А не установлено. Механизм передачи фекально — оральный. Пути передачи: через воду, пищу, предметы обихода. Нередко отмечаются водные вспышки заболевания в связи с фекальным загрязнением открытых водоемов. Распространен повсеместно, чаще в странах с дефицитом воды, с низкой санитарной культурой населения. Наиболее восприимчивы дети от 4 до 15 лет (60% заболевших — это дети до 14 лет). Исход благоприятный 90% полного выздоровления, после перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет.

Вирусный гепатит Е антропонозная инфекция с фекально- оральным механизмом передачи и преимущественным поражением печени, вызывается вирусом гепатита E (HEV). HЕV — РНК содержащий вирус, выделен в отдельный род Hepevirus. Вирион безоболочечный, сферический, диаметром 27 — 34 нм. Геном – однонитевая плюс — РНК. Источник инфекции- больной человек. Механизм передачи фекально-оральный. Пути передачи — через пищу, воду. Инкубационный период 2 — 6 недель. Заболевание сопровождается умеренным поражением печени, интоксикацией, реже желтухой. Прогноз благоприятный. Заболевание тяжело протекает у беременных, летальность у них достигает 20%. Иммунитет после перенесенного заболевания стойкий.

Возбудители парентеральных гепатитов. Гепатит В — антропонозная инфекция, вызываемая ДНК содержащим вирусом с преимущественным парентеральным механизмом заражения и поражением печени в виде острого и хронического гепатита с переходом в цирроз или первичный рак печени.

Возбудитель гепатита В (HВV) относится к семейству Hepadnaviridae. В 1970 году Дейн впервые обнаружил частицы сферической формы в сыворотке крови больных гепатитом методом электронной микроскопии.

Возбудитель гепатита В — ДНК- содержащий вирус, имеющий суперкапсид сферической формы, диаметром 42 нм. Сердцевина вируса Нвс, окружена оболочкой, содержащей поверхностный Нвs аг (австралийский аг). Таким образом при вирусном гепатите B обнаруживаются Нвs, Нвс, Нве, и иногда обнаруживается Нвx аг.

Нвs – аг (австралийский аг) представляет собой гликопротеин с липидным компонентом, который содержится во внешней оболочке вируса.

Нвс – является нуклеопротеином. Содержится в сердцевине вирионов, находится в ядрах гематоцитов, но не постоянно в крови.

Нве – аг – отщепляетя от Нвс аг при прохождении через мембрану гепацитов, вследствие чего обнаруживается в крови.

Вирусы чувствительны к эфиру, детергентам. Необычным свойством вируса является устойчивость к высокой температуре. Они выдерживают нагревание до 100 о с 1 – 2 мин., устойчивость повышается при нахождении в сыворотке крови.

Источником инфекции являются больные с острой и хронической формами гепатита, а также вирусоносители. Основной путь заражения — парентеральный. Механизм передачи — при переливании крови, ее препаратов, массовые прививки, хирургические вмешательства, зубоврачебные манипуляции и пр). Заражение возможно при близком бытовом контакте, половым путем. Возможна передача вируса от матери плоду трансплацентарно, а также после родов через молоко, слюну и т.д. , т.е. почти все биологические жидкости больных гепатитом В содержат вирус. Вирус проникает в кровь парентерально, с кровью переносится в печень и размножается в гепатоцитах.

Вирус гепатита D. был открыт в 1977 году Ризетто. Вирус гепатита D неклассифицирован.

Было установлено, что ВГD является сателлитом вируса гепатита В, дефектным вирусом. Дефектом его является отсутствие собственной оболочки, поэтому для проявления патогенного действия он должен использовать оболочку вируса гепатита В. Вирион имеет сферическую форму, диаметр-36 нм, однонитчатую РНК, сердцевинный дельта антиген (НДс-антиген).

Резервуаром вируса гепатита D являются носители ВГВ. Передается парентерально, также как и вирус В, но распространен реже. Вирус гепатита D может вызвать поражение печени лишь у людей, уже инфицированных вирусом гепатита В (супер-инфекция). Инфицирование вирусом гепатита больных с хроническим гепатитом В вызывает тяжелые формы заболевания с развитием печеночной недостаточности и цирроза печени. Одновременное заражение вирусом гепатита В и ГD (коинфекция) обычно приводит к развитию умеренной формы болезни.

Диагностика заключается в выявлении антител к ВГD с помощью иммуноферментного метода. Разработана также полимеразная цепная реакция (ПЦР). Вакцина против гепатита В защищает и от гепатита D.

Гепатит С. (иначе его называли гепатит ни А ни В). Вирус гепатита С относится к семейству Flaviviridae род Нерасivirus. Это РНКсодержащий вирус диаметром — 55 — 60 нм. вирион сферической формы. Вирус имеет сложную структуру. Имеет поверхностные гликопротеидные антигены, сердцевинный антиген (НСс-антиген). Источником инфекции являются больные и носители гепатита С.Пути передачи такие же, как для вируса ГВ. Наиболее часто заболевают лица после повторных переливаний крови.

Антитела к вирусу гепатита С обнаружены у 0,5 — 1% доноров. Заболевание протекает легче, чем вызванное вирусом ГВ, лишь в четверти случаев сопровождается желтухой.

Гепатит G. Вирус гепатита G предположительно относится к семейству к Feaviviridae к роду Hepacivirus. известно 5 генотипов вируса – GB-A, GB-B, GB-C и др.

Микробиологическая диагностика вирусных гепатитов.

Гепатит А Для лабораторной диагностики гепатита А применяются методы: ИЭМ (иммунной электронной микроскопии). Принцип метода ИЭМ основан на формировании комплексов антиген- антитело (при смешивании исследуемого антигена и заведомо известный специфической антисыворотки или заведомо известного антигена и исследуемой сыворотки). Образующиеся специфические комплексы выявляются в электронно- микроскопических препаратах.

Основной метод диагностики серологический. Серологическая диагностика основана на использовании РИМ и ИФА обнаружении Ig M. Выявление в сыворотке больного анти- HAV Ig M дает основание установить диагноз гепатита А, т.к. антитела этого класса появляются еще в инкубационном периоде и сохраняются на протяжении 1,5- 6 мес. Ig G, обнаруживаемые в периоде реконвалесценции имеет анамнестическое значение.

— серологический метод, с помощью ИФА в сыворотке крови определяют анти- HЕV антитела- Ig M и Ig G.

— молекулярно- генетический метод, который заключается в определении РНК вируса с помощью ПЦР в кале и сыворотке крови больных в острой фазе инфекции.

Гепатит B Диагностика основана на обнаружении специфических антигенов и антител с использованием ИФА (РИМ, РНГА): Нвs – аг, анти Нвs, Нве – аг, анти Нве, Нвс– аг, анти Нвс.

Определяющим является обнаружение Нвs – аг, который выявляется в сыворотке больных через 3-5 недель от момента инфицирования и сохраняется в течение всей болезни.

Наибольшее количество Нвs – аг в разгар заболевания продолжает оставаться на высоком уровне 2-3 месяца, исчезает через 6-8 месяцев.

Обнаружение Нвs – аг через год свидетельствует о развитии хронического гепатита или бессимптомного носительства. Показателем острой инфекции является одновременное обнаружение Нвs – аг и Нве – аг.

Присутствие в крови анти- Нвс – аг класса Ig M достоверно свидетельствует об остром гепатите В.

Гепатиты C,D. Диагностируют серологическим методом в парных сыворотках путем постановки ИФА, и путем обнаружения вируса в крови с помощью ПЦР.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) относится к семейству ретровирусов. Имеется два типа ВИЧ- ВИЧ-1 и ВИЧ-2, вызывающие ВИЧ-инфекцию. ВИЧ-1 является основным возбудителем и вызывает до 90% ВИЧ-инфекции. ВИЧ-2 выделяют, в основном, в Западной Африке.

Впервые ВИЧ-инфекция в своей финальной стадии описана в 1981 году в Калифорнии (США). Возбудитель был обнаружен французскими учеными под руководством Л. Монтанье в 1983 году, а затем независимо от него американскими исследователями под руководством Р. Галлов 1984 году.

ВИЧ представляет собой сложный вирус сферической формы 100-120 нм в диаметре. Характерной особенностью вируса является наличие фермента обратной транскриптазы. В наружной двухслойной липидной оболочке имеются гликопротеиновые шипы, каждый из которых состоит из двух субъединиц – gp 41 и gp 120. Из них gp 120 находится на поверхности суперкапсида, а gp 41 погружен в оболочку. Под суперкапсидом находится сердцевина вируса, которая имеет форму усеченного конуса, в состав которого входят белки р 24 и р25. Промежуток между суперкапсидом и сердцевиной вируса заполнен матриксным белком, состоящим из р 17 и р18.

Геном вируса — это две однонитчатые молекулы РНК со знаком +. Кроме генома в сердцевине находятся ферменты — обратная транскриптаза (ревертаза), интеграза и протеазы. Геном вируса имеет 9 генов, из которых 3 кодируют синтез белков вирусных частиц, а 6- являются регуляторными генами, обеспечивающими осуществление процессов репродукции и участие вируса в инфекционном процессе.

Антигенными свойствами обладают белки сердцевины и оболочечные гликопротеины. Они характеризуются высокой изменчивостью, что объясняется высокой скоростью замен нуклеотидов.

ВИЧ характеризуется невысокой устойчивостью к действию физических и химических факторов. Температура выше 56 С быстро и полностью инактивирует вирус. При комнатной температуре в жидкой и сухой среде сохраняется до недели. ВИЧ устойчив к высушиванию, в высохшей крови сохраняется до 7 суток. Мало чувствителен к действию УФ излучения. Вирус погибает быстро (в течение нескольких секунд) под действием 70% спирта, О,5% раствора формальдегида, 3% раствора перекиси водорода, О,5% раствора лизола, О, 2 % раствора гипохлорита натрия.

Источником инфекции является инфицированный человек. Факторами передачи являются кровь, сперма, влагалищные и цервикальные выделения, грудное молоко. Слюна, моча, слезная жидкость также содержат ВИЧ, однако, количество вирусов недостаточно для заражения.

Пути заражения: половой, парентеральный (через нестерильные инструменты, шприцы, при переливании инфицированной крови, кровезаменителей) и вертикальный — от зараженной матери к плоду. В мире 85-90 % случаев заболевания возникает при половых контактах, причем в 70% при гетеросексуальных контактах. Передача вируса от зараженной матери трансплацентарно, во время родов, при кормлении грудью происходит в 25-30 % случаев.

Вирус иммунодефицита не проникает через неповрежденные кожные покровы. Нет опасности заразиться, купаясь в бане или бассейне. Заражение не происходит бытовым путем, вирус не передается при рукопожатии, соприкосновениях, при кашле, чихании, через продукты питания. Нет риска заразиться при пользовании общей посудой, ванной, общественным туалетом. Не доказана возможность передачи вируса через комаров.

К вирусу иммунодефицита человека восприимчивы как женщины, так и мужчины независимо от возраста. Наиболее высокие показатели зараженности приходятся на возрастную группу от 20 до 39 лет.

Вирус обладает иммунотропностью. Взаимодействие вируса с клеткой организма начинается со связывания gp 120 ВИЧ с рецептором CD4. ВИЧ избирательно поражает клетки, имеющие рецептор CD4 – Т хелперы, моноциты, макрофаги, клетки микроглии, т.е. иммунокомпетентные клетки. После проникновения вируса внутрь клетки и депротеинизации на +РНК вируса с помощью фермента обратной траскриптазы достраивается комплементарная нить ДНК. Затем под действием другого фермента рибонуклеазы у этой гибридной молекулы происходит расщепление исходной РНК. На оставшейся нити ДНК обратная транскриптаза синтезирует вторую цепь ДНК, используя первую как матрицу. Генетическая информация вируса уже в форме двухцепочечной ДНК проникает в клеточное ядро и с помощью фермента интегразы происходит « встраивание» (интеграция) геном а вируса в геном клетки. Эта вирусная ДНК, интегрированная в геном клетки называется «провирус».

В таком состоянии вирус сохраняется годами в клетке, передаваясь при делении клетки их следующим поколениям. При этом у зараженных пациентов на протяжении 10-15 лет могут отсутствовать симптомы заболевания. Это интегративная, перманентная форма инфекции.

В случае продуктивной инфекции в клетках под влиянием ферментов происходит синтез вирусных частиц и белковой оболочки, затем их сборка. При активной репродукции ВИЧ происходят множественные повреждения мембраны и клетка-хозяин погибает.

ВИЧ-инфекция протекает в несколько стадий. Инкубационный период, составляющий от одной недели до трех месяцев, в среднем 2-4 недели. Стадия первичных проявлений — клинически эта стадия напоминает любую острую инфекцию. Длится эта стадия 2- недели и завершается бессимптомной инфекцией. Латентный период связан с тем, что вирус замедляет свою репликацию и переходит в состояние персистенции. Эта стадия может длиться 5-10 лет и более. Стадия вторичных заболеваний протекает с поражением дыхательной, нервной системы, желудочно-кишечного тракта. Терминальная стадия характеризуется кахексией, упорной диареей, адинамией, анемией, деменцией, снижением всех иммунных показателей с летальным исходом.

Микробиологическая диагностика:

1. Вирусологический метод применяется редко т.к. вирус размножается только в культуре Т-лимфоцитов на сложных средах с добавлением иммуномодулятора – интерлейкина-2.
2. В практическом здравоохранении чаще применяются серологические методы. ИФА – основной скрининговый метод, который позволяет выявить вирусные антигены и антитела. ВИЧ антитела появляются через 2-4 недели, у некоторых и позже.
3. Как подтверждающий диагноз тест используют иммуноблоттинг.
4. Для диагностики ВИЧ инфекции применяют и ПЦР, способную выявлять вирусный генный материал в инкубационном и раннем клиническом периоде, однако ее чувствительность ниже, чем ИФА.

Самостоятельная работа

1. Схематически изобразить классификацию энтеральных и парентеральных гепатитов.
2. Зарисовать в тетради схему вириона гепатита В.
3. Разобрать структуру и химический состав ВИЧ. Зарисовать в тетрадь.
4. Изучить схему микробиологичекой диагностики ВИЧ- инфекции.
5. Разобрать методы постановки ИФА, и иммуноблоттинга.

Рис. 8. Схема строения вириона ВИЧ
Указания к самостоятельной работе

1. Для определения ВИЧ антител разработано множество тест-систем, которые позволяют выявить до 99,9% всех положительных проб. Поставить диагноз на основании только одного ИФА нельзя т.к. хотя и тест специфичный и высокочувствительный, но возможны как ложноположительные так и ложноотрицательные результаты. В зависимости от используемых тест-систем средняя частота ложноотрицательных результатов 1:1000, а ложноположительных – 1:10000. Для подтверждения диагноза необходимо использовать иммуноблот (Вестернблот), который заключается в разделении белков ВИЧ с помощью иммуноэлектрофореза с последующим определением антител к белкам gp 41, gp 120, p 24.
2. ИФА иммуноферментный метод, выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сыворотко в смесь добавляют субстрат/ хромоген. Субстрат расщепляется ферментом, и изменяется цвет прдукта реакция- интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

Твердофазный ИФА – наиболее распространенный вариант иммунологического теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антиела) сорбирован на твердом носителе, например в лунках планшеток из полистерола. При определении антител в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстратом, и субстрат (хромоген) для фермента. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем тщательного промывания. При положительном результате изменяется цвет раствора хромогена. Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителами. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, а затем субстрата для фермента.

1. Метод иммуноблоттинга (ИБ)- высокочувствительный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА.

Антиген выделяют с помощью электрофореза с полиакриламидном геле, затем переносят его (блоттинг — от англ. blot. пятно) из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоска с «блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем после инкубации отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченую ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс антиген+ антитело больного+ антитело против Ig человека выявляют довалением субстрата хромогена, изменяющего окраску под действием фермента. ИБ используют как дагностический метод при ВИЧ – инфекции и др.

Препараты для специфической профилактики гепатитов

Вопросы для самоконтроля.

1. Дайте характеристику вируса гепатита A.
2. Методы микробилогической диагностики вирусных гепатитов A и E.
3. Дайте характеристику вирусов гепатита B,C и D.
4. Методы микробилогической диагностики вирусных гепатитов B и C.
5. К какому семейству и подсемейству относится ВИЧ?
6. Какие клетки организма являются «мишенью» для ВИЧ?
7. Что такое иммунорегуляторный индекс (ИРИ) и чему он равняется у больных ВИЧ-инфекцией?
8. Механизм действия фермента обратной траскриптазы или ревертазы.
9. В каких случаях употребляют термины ВИЧ, СПИД?
10. Основные пути передачи ВИЧ.
11. Контингенты риска при ВИЧ — инфекции.
12. Перечислить первичный комплекс симптомов, позволяющих заподозрить заболевание.
13. Почему до сих пор не решен вопрос изготовления вакцины при ВИЧ-инфекции?
14. Разработана ли специфическая прфилактика ВИЧ- инфекции?

Занятие 23

источник

В настоящее время известны несколько типов вирусных гепатитов: гепатит А (гА) (синоним: инфекционный гепатит, эпидемический гепатит, болезнь Боткина); гепатит В (гВ) (синоним: сывороточный гепатит); гепатит ни А ни В (синоним гепатит С); гепатит дельта (синоним гепатит Д); гепатит Е.

I. Гепатит А (гА). Лабораторная диагностика гА основывается либо на выявлении самого возбудителя (метод иммунной электронной микроскопии — ИЭМ), его антигенов (радиоиммунный, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный метод — РИА, ИФА, ИФ), или антител к вирусу гА (РИА, ИФА).

Для ранней диагностики заболевания, а также выявления источников инфекции, используется определение антигена вируса гА в фекалиях больных, где он появляется за 7-10 дней до клинических симптомов и в первые дни заболевания.

Из определяемых в настоящее время специфических маркеров гА важнейшими являются антитела класса Ig M к вирусу гА, которые появляются в сыворотке крови и слюне уже в начале заболевания и сохраняются в течение 3-6 месяцев. Обнаружение антител класса Ig M к вирусу гА однозначно свидетельствует о гепатите А и используется для диагностики заболевания, в том числе и бессимптомных случаев инфекции и выявления источников инфекции в очагах.

Антитела к вирусу гА класса Ig G выявляются с 3-4-й недели заболевания и сохраняются длительно, что позволяет оценить состояние иммунитета населения, динамику специфического гуморального иммунитета. Вирус гепатита А в материале от больного можно выявить методом иммунной электронной микроскопии. В основе метода лежит смешивание суспензии вируса с антисывороткой, отделение иммунных комплексов и исследование их в электронном микроскопе.

II. Гепатит В (гВ). В организме людей, зараженных вирусом гВ, с разной частотой и на разных этапах могут выявляться серологические маркеры: поверхностный HBs Ag и сердцевинный НВс Ад и НВе Ад, а также антитела к ним (anti-HBc, anti-HBe, anti-HBs). Динамика их появления представлена на рис. 1.

Рис. 1. Динамика появления серологических маркеров гВ

Все антигены и соответствующие им антитела могут служить индикаторами инфекционного процесса.

Наличие HBs Ag, НВс Ag и anti-HBc класса Ig M свидетельствует об остром периоде инфекции. В период реконвалесценции — это НВс-антитела класса Ig G и выявляются они совместно с Hbs-антителами. Длительное присутствие НВе Ад и HBs Ад в крови — неблагоприятный признак, свидетельствующий о формировании хронического процесса. При формировании длительного носительства постоянно определяется HBs Ag. Для обнаружения антигенов и антител используют РПГА, РИА и ИФА. Для обнаружения Hbs Ag широко используется РОПГА — реакция обратной пассивной гемагглютинации с обязательным положительным контролем на HBs Ag.

III. Гепатит С (гС). Вызывается РНК-содержащим вирусом, который относится к Flaviviridae. Диаметр вирионов 30-60 нм, чувствительны к обработке хлороформом. Позитивная одноцепочечная РНК кодирует синтез трех структурных и пяти неструктурных белков. Гепатит С по клинико-биохимическим признакам сходен с гепатитом В. У 50% инфицированных лиц заболевание переходит в хроническую форму, а у 20% хронических больных развивается цирроз печени. Механизм передачи вируса гепатита С в основном парентеральный. Лабораторная диагностика гС основана на определении антител к вирусу гС методами ИФА или РИА.

VI. Возбудитель гепатита дельта (гепатит Д). РНК-содержащий, дефектный вирус, способный реплицироваться в организме хозяина лишь при обязательном участии вируса-помощника, роль которого выполняет вирус гВ. Оболочку вируса-дельта формирует HBs Ag. Присоединение дельта-инфекции к гВ ведет к развитию тяжелых злокачественных форм болезни, хронических форм заболевания с ранним формированием цирроза печени. Лабораторная диагностика гепатита Д проводится путем обнаружения маркеров вируса гВ и дельта-вирусной инфекции, HBs Ag, anti-HBc (Ig M) и дельта Ag. Последние тестируются при помощи ИФА и РИА. Наибольшее диагностическое значение имеют антидельта IgM, которые обнаруживаются в течение всего заболевания.

V. Гепатит Е. Широко распространен в тропических и субтропических странах, распространение заболевания проходит водным путем. Вирион диаметром 27-32 нм содержит однонитчатую РНК, по физико-химическим свойствам схож с вирусами семейства Caliciviridae. Лабораторная диагностика основана на определении AT в сыворотке крови ИФА.

Дата добавления: 2015-07-02 ; Просмотров: 840 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

91. Вирусы гепатитов: гепаднавирусы (семейство Hepadnaviridae). HBV – возбудитель гепатита В. Структура вириона, Антигены: HBs, HBc, HBe, HBх и их характеристика. Особенности патогенеза заболевания, механизм и пути передачи возбудителя. Персистенция. Иммунитет. Лабораторная диагностика. Проблемы вакцинопрофилактики, лечения и неспецифической профилактики гепатита В. Возбудители гепатитов С, G. Свойства. Роль в патологии человека. Лабораторная диагностика. Вирус гепатита А.

Вирус гепатита А открыт в 1973 г. С. Фейнстоном.

Таксономия, морфология и антигенная структура. Вирус гепатита А относится к семейству Picornaviridae родуHepatovirus. Типовой вид — вирус гепатита А — имеет один серотип. Это РНКсодержащий вирус, просто организованный, имеет диаметр 27-28 нм и один вирусоспецифический антиген. Установлено 6 генотипов вируса гепатита А. Вирус, подобный вирусу гепатита А, обнаружен у обезьян семейства игрункообразных. Этот вирус генотипически отличается от вируса гепатита А человека.

Культивирование. Вирус выращивают в культурах клеток. Цикл репродукции более длителен, чем у энтеровирусов, цитопатический эффект не выражен.

Резистентность. Вирус гепатита А отличается большей, чем у энтеровирусов, устойчивостью к нагреванию; он сохраняется при 60 ?С в течение 12 ч, инактивируется при кипячении в течение 5 мин. Относительно устойчив во внешней среде (воде, выделениях больных). При pH 1,0 вирус сохраняет жизнеспособность, в то время как другие пикорнавирусы инактивируются. Эти свойства вируса основные в эпидемиологии гепатита.

Восприимчивость животных. Экспериментальную инфекцию можно воспроизвести на обезьянах мармозетах и шимпанзе.

Эпидемиология. Источником инфекции являются больные как с выраженными, так и с бессимптомными формами инфекции. Механизм заражения фекально-оральный. Вирусы выделяются с фекалиями, начиная со второй половины инкубационного периода и в начале клинических проявлений; в это время они наиболее опасны для окружающих. С появлением желтухи интенсивность выделения вирусов снижается. Вирусы гепатита А передаются через воду, пищевые продукты, предметы обихода, грязные руки, в детских коллективах — через игрушки, горшки. Вирусы способны вызывать водные и пищевые эпидемические вспышки.

Гепатит А распространен повсеместно, но особенно в местах с дефицитом воды, плохими системами канализации и водоснаб- жения и низким уровнем гигиены населения. Болеют преимущественно дети в возрасте от 4 до 15 лет. Подъем заболеваемости наблюдается в летние и осенние месяцы.

Патогенез. Первичным местом размножения вируса является эндотелий тонкой кишки. Оттуда он попадает в портальный кровоток и печень, так как обладает гепатотропизмом. Повреждение гепатоцитов возникает не за счет прямого цитотоксического действия, а в результате иммунопатологических механизмов.

Клиническая картина. Инкубационный период составляет от 15 до 50 дней, чаще около 1 мес. Начинается остро с повышения температуры и явлений со стороны ЖКТ (тошноты, рвоты и др.). Возможно появление желтухи на 5-7-й день. Клиническое течение заболевания, как правило, легкое, без особых осложнений, у детей до 5 лет обычно бессимптомное. Продолжительность заболевания 2-3 нед. Хронические формы не развиваются.

Иммунитет. После инфекции формируется стойкий пожизненный иммунитет, связанный с IgG. В начале заболевания в крови появляются IgM, которые сохраняются в организме 4-6 мес и имеют диагностическое значение. У детей первого года жизни обнаруживают антитела, полученные от матери через плаценту. Помимо гуморального, развивается местный иммунитет в кишечнике.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат сыворотка и испражнения. Диагностика основана главным образом на определении в крови IgM с помощью ИФА, РИА и иммунной электронной микроскопии. Этими же методами можно обнаружить вирусный антиген в фекалиях. Вирусологическое исследование не проводят из-за отсутствия методов, доступных для практических лабораторий.

Профилактика. Неспецифическая профилактика должна быть направлена на повышение санитарной культуры населения, улучшение водоснабжения и условий приготовления пищи. Для специфической пассивной профилактики используют иммуноглобулин по эпидемиологическим показаниям. Иммунитет сохраняется около 3 мес. Для специфической активной профилактики разработана и применяется инактивированная культуральная концентрированная вакцина. Разработана также рекомбинантная генноинженерная вакцина.

Вирус гепатита Е (HEV) вызывает гепатит Е — инфекцию с фекально-оральным механизмом передачи. Вирус был открыт в 1983 г. советским ученым акад. М.С. Балаяном в опытах самозаражения экстрактами фекалий 9 больных гепатитом ни А, ни В. Вирус принадлежит к отдельному роду Hepevirus. Заболевание особенно распространено в странах Средней Азии.

Структура. Вирус не имеет липидной оболочки. Нуклеокапсид сферической формы размером 27-34 нм. Геном вируса представлен однонитевой плюс-РНК, которая кодирует РНК-зависимую РНК-полимеразу, папаиноподобную протеазу и трансмембранный белок, обеспечивающий проникновение вируса в клетку.

Эпидемиология и клиническая картина. Источник инфекции — больные люди. Главный путь передачи инфекции водный. Инкубационный период от 2 до 6 нед. Заболевание сопровождается умеренным поражением печени, интоксикацией и желтухой. Про- гноз, как правило, благоприятный, за исключением беременных, у которых смертность от гепатита Е составляет 16-20%. В последнее время вирус гепатита Е был выделен у некоторых животных (свиней, оленей, крупного рогатого скота, птиц и др.), что предполагает возможность передачи вируса от животных человеку.

Иммунитет. После перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет.

Микробиологическая диагностика. Применяют серологический метод. В сыворотке и плазме крови определяют IgG- и IgM- антитела к вирусу. Кроме того, методом ПЦР определяют вирусную РНК в сыворотке крови во время острой фазы инфекции.

Лечение и профилактика. Лечение симптоматическое. Беременным вводят специфический иммуноглобулин. Неспецифическая профилактика направлена на улучшение санитарно-гигиенических условий и снабжение качественной питьевой водой. Создана неживая цельновирионная вакцина. Испытываются живая и генно- инженерная вакцины.

Гепаднавирусы (семейство Hepadnaviridae)

Вирус гепатита В (ВГВ) относится к семейству Hepadnaviridae, роду Orthohepadnavirus. Впервые был обнаружен под электронным микро- скопом в 1970 г. Дейном, получив название «частица Дейна».

Морфология. ВГВ — сложноорганизованный, ДНК-содержащий вирус сферической формы, диаметром 42-47 нм. Он состоит из сердцевины (core), построенной по кубическому типу симметрии, состоящей из 180 белковых частиц, составляющих сердцевинный НВс-антиген, диаметром 28 нм, и липидной оболочки, содержащей поверхностныйHBs-антиген. Внутри сердцевины находятся ДНК-полимераза, обладающая ревертазной активностью, протеинкиназа и концевой белок НВе-антигена. ДНК-полимераза является полифункциональным ферментом, она вовлекается во многие функции жизненного цикла вируса: способна синтезировать новые цепи ДНК, на матрице как ДНК, так и РНК, обладая как полимеразной, так и ревертазной активностью. Нуклеазная активность деградирует РНК-цепь в гибриде РНК-ДНК.

Антигенная структура. ВГВ обладает сложной антигенной структурой. В оболочке вируса находится HBs-антиген, который локализован в гидрофильном слое на поверхности вириона. В формировании HBs-антигена участвуют 3 полипептида в гликозированной форме: preS1- большой полипептид (L — large), preS2 — средний полипептид (M —middle), S — малый мажорный (S — small).

Классическим антигеном, обладающим специфичностью, является S — малый мажорный полипептид, который входит во все 3 оболочечных белка, которые различаются протяженностью N-терминального пептидного конца(preS). Так, L-белок содержит preS1, preS2 и S-полипептиды. M-полипептид состоит из preS2 и S-полипептидов. Впервые HBs-антиген был обнаружен и описан Б. Блумбергом в 1963 г., в крови австралийских аборигенов, поэтому получил название австралийского антигена. HBs-антиген обна- руживается в крови не только в составе вириона, но и в виде самостоятельных фрагментов. Помимо полноценных вирионов, частиц Дейна, в крови обнаруживаются пустые неинфекционные частицы диаметром 22 нм, сферической или филаментозной формы, состоящие из HBs-антигена как результат его избыточной продукции. Сферические и филаментозные пустые частицы неинфекционны, но высокоиммуногенны и индуцируют анти-HBs-нейтрализующие антитела. Присутствие HBs-антигена в крови свидетельствует об инфицированности организма вирусом. HBs-антиген обладает гетерогенностью, подразделяясь на 4 антигенных подтипа, имея общую антигенную детерминанту, обозначаемую как а, и две пары взаимно исключающих детерминант: d и y, w и r, образующих

4 главных подтипа: adw, ayw, adr и ayr, которые распространены в различных географических зонах. Связи между клиническим течением и подтипом не наблюдается. Защита против одного подтипа обеспечивает защиту и против других за счет наличия общей детерминанты. Сердцевинный НВс-антиген никогда не присутствует в свободной форме в крови, являясь внутренним компонентом вирусной частицы. Его можно обнаружить в зараженных вирусом гепатоцитах.

НВе-антиген также является сердцевинным антигеном, производным НВс-антигена, его также называют растворимым анти- геном. Появление НВе-антигена в крови связано с репликацией вируса.

НВх-антиген — трансактиватор, является еще одним антигеном ВГВ, накопление которого в крови связывают с развитием первич- ного рака печени.

Геном представлен двухнитевой ДНК кольцевой формы с молекулярной массой 1,6×10 6 Д, у которой плюс-цепь укорочена на 1/3 длины. Вирусный геном записан на минус-цепи и состоит из 4 открытых частично перекрывающихся рамок считывания: Р, С, S и X. Рамка считывания Р кодирует вирусную полимеразу и терминальный белок, найденный на минус-цепи ДНК. Рамка считывания С кодирует структурные белки нуклеокапсида и НВе-антиген. Рамка считывания S кодирует вирусные поверхностные гликопро- теины. Продукт гена Х усиливает транскрипцию гомологичных и гетерологичных клеточных генов, участвуя в процессе развития гепатоцеллюлярной карциномы.

Полноценная минус-цепь ковалентно связана с ДНК-полимеразой, которая достраивает плюс-цепь до полноценной структуры.

Экспрессия генома осуществляется с 4 промоторов: геномного, экспрессирующего полимеразу, рreC и C-белки; осуществляющего экспрессию L-белка; экспрессирующего M- и S-белки, экспресси- рующего Х-белок.

Культуральные свойства. ВГВ не культивируется на куриных эмбрионах, не обладает гемолитической и гемагглютинирующей активностью. Культивируется только в культуре клеток, полученной из ткани первичного рака печени в виде персистирующей инфекции, без оказания цитопатического и цитолитического действий и с малым накоплением вирионов. К вирусу чувствительны приматы: гориллы, шимпанзе, африканские зеленые мартышки.

Репликативный цикл. ВГВ связывается с рецептором на поверхности гепатоцита, возможно, при посредничестве сывороточного альбумина, рецепторы к которому обнаружены как на preS2- антигене, так и на гепатоците и с помощью эндоцитоза проникает в гепатоцит. Проникнув в клетку, вирусный нуклеокапсид достигает ядра, где вирусный геном освобождается. В ядре ДНК-полимераза достраивает брешь плюс-цепи ДНК, в результате формируется двунитевая, суперспирализованная циркулярная молекула ДНК, после чего возможно развитие двух типов инфекции: продуктивной и интегративной.

Интегративная инфекция характеризуется амплификацией генома вируса с помощью ковалентносвязанной с ним ДНКполимеразы вируса, в результате образуется внутриядерный вирусный геномный пул, который интегрирует в геном клетки с образованием провируса. При этом наблюдается синтез HBs-антигена. Клинически это проявляется вирусоносительством, показателем которого является обнаружение в крови HBs-антигена.

В процессе продуктивной инфекции происходит формирование новых вирусных частиц. Минус-цепь вирусной ДНК служит матрицей для транскрипции 4 вирусных РНК длиной 3,5, 2,4, 2,1 и 0,7 килобаз (тысяч пар оснований). Транскрипты длиной 2,2, 2,1 и 0,7 килобаз являются субгеномными РНК, выполняющими функцию иРНК. Они транспортируются в цитоплазму, где транс- лируются с образованием также оболочечных большого (L), среднего (M) и малого (S) белков и продукта гена Х. Белки оболочки внедряются как интегральные белки в липидную мембрану эндоплазматического ретикулума. 3,5-килобазная РНК представляет полный геном и обозначается как прегеномная РНК. Она обладает бифункциональной активностью, выполняя, с одной стороны, функции иРНК для трансляции белков сердцевины (pre core): preHBc-аг, HBc-аг и полимеразы. Кроме того, она служит матрицей для синтеза полноценной минус-цепи ДНК. Она упаковывается совместно с ДНК-полимеразой и протеинкиназой в сердцевину, где и выполняет роль матрицы для синтеза негативной нити ДНК с помощью ревертазной активности ДНК-полимеразы. Этот процесс протекает внутри формирующейся сердцевины. РНКцепь в гибриде РНК-ДНК деградируется с помощью нуклеазной активности ДНК-полимеразы. Сформировавшийся нуклеокапсид

достигает эндоплазматического ретикулума, где связывается с поверхностными белками и почкуется в тоннель эндоплазматическо- го ретикулума, по которому секретируется через аппарат Гольджи из клетки. Precoreполипептид также транспортируется в канал эндоплазматического ретикулума, где происходит отделение карбокситерминального конца, который секретируется из клетки в виде НВе-антигена. Маркером репликации вируса является появление в крови НВе-антигена. Клинически продуктивная инфекция проявляется активным инфекционным процессом в виде острого или хронического гепатита, маркером острого и хронического гепатита является появление антител к НВс-антигену (рис. 17.7).

Особенностью продуктивной вирусной инфекции при ВГВ является то, что ВГВ сам не обладает цитолитическим эффектом и не разрушает гепатоциты. Повреждение опосредуется цитотоксическими CD8 Т-лимфоцитами, которые узнают инфицированные клетки по накопившимся на поверхности гепатоцита принадлежащим НВс-антигену вирусным олигопептидам, локализованным совместно с молекулами 1-го класса главного комплекса гистосовместимости, и удаляют их. Удаление клеток провоцирует клеточное воспаление и вызывает острый гепатит. Когда инфекция сама раз-

Рис. 17.7. Диагностические маркеры при гепатите В

решается, формируется иммунитет. Если вирус не элиминируется, тонкий баланс между вирусной репликацией и иммунной защитой нарушается, что приводит к развитию хронического гепатита и цирроза. В хронически инфицированных клетках вирусная ДНК может интегрировать в ДНК клетки-хозяина. Результатом этой интеграции может быть развитие гепатоцеллюлярной карциномы.

Иммунитет. Гуморальный иммунитет представлен антителами к НВs-антигену, которые защищают гепатоциты от вируса, элиминируя его из крови. Помимо полноценных вирионов, в формировании гуморального иммунитета принимают участие «пустые» неинфекционные частицы, состоящие из НВs-антигена. В осво- бождении гепатоцитов от ВГВ основная роль принадлежит клеточному иммунному ответу, опосредованному CDS-лимфоцитами, в активации которого ведущая роль принадлежит НВс-антигену. У больных с острой формой этого заболевания отмечается сильный Th1- и CD8-клеточный иммунный ответ против НВс-антигена. Переход острой формы в хроническую обеспечивается нарушениями Т-клеточного иммунитета, а также дефектами образования интерлейкина-1 и α-интерферона. Сероконверсия, характеризующаяся исчезновением из крови НВе-антигена и появлением к нему антител, имеет положительное прогностическое значение, так как коррелирует с активацией Т-клеточного иммунного ответа. При хронической форме заболевания продукция γ-интерферона, цитокина Th1-лимфоцитов, и CD8-ответ слабые или отсутствуют совсем.

Диагностика. Диагноз подтверждается обнаружением в сыворотке антигенов и антител, а также вирусной ДНК. В течение инфекции происходит изменение серологических маркеров в зависимости от того, является ли инфекция острой или хронической (см. рис. 17.7) Три системы антиген-антитело имеют значение при постановке диагноза:HBs-aг/анти-HBs; IgM-анти-НВс и IgG-анти- НВс; НВе-аг/анти-НВе.

HBs-аг определяется в сыворотке за несколько дней до начала появления симптомов и присутствует в течение острой инфекции. Его присутствие при хронической инфекции показывает, что пациент инфекционен. НВе-аг и ВГВДНК определяются позже. Присутствие НВе-аг связано с высокой инфекционностью крови. Анти-НВс-антитела появляются первыми. Они не обладают про-

тективными свойствами. Их присутствие свидетельствует о наличии гепатита в данный момент или ранее. IgM-анти-НВс присутствуют в высоком титре в течение острой инфекции и исчезают через 6 мес. IgG-анти-НВс определяются в течение всей жизни после перенесенного заболевания.

Анти-НВе появляются после анти-НВс, и их появление является благоприятным фактором, свидетельствующим о выздоров- лении.

Анти-HBs заменяют HBs-аг при разрешении острой инфекции. Они персистируют в течение жизни, обеспечивая протективный иммунитет.

Если у больного с острой формой гепатита В HBs-аг персистирует более 8 нед после исчезновения симптомов, то он становится, вероятно, носителем и имеется риск развития хронической инфекции.

У HBs-аг/НВе-аг-положительных пациентов в сыворотке обнаруживают ВГВДНК (HBVDNA). У пациентов, которые излечились от острого гепатита, ДНК в сыворотке не определяется.

Профилактика. С 1986 г. в практику мирового здравоохранения для профилактики гепатита В введена рекомбинантная вакцина. Она состоит из HBs-антигена ВГВ, главным образом S-белка, синтезированного генно-инженерным путем в дрожжевых клетках, который после очистки сорбируется на гидроокиси алюминия или фосфате алюминия в качестве адъювантов. Иммунизация против гепатита В стала частью расширенной программы ВОЗ по иммунизации.

Согласно рекомендациям ВОЗ, вакцинации в первую очередь должны подвергаться новорожденные, особенно родившиеся у HBs-положительных матерей, а также дети и лица из группы риска заражения ВГБ, в первую очередь работники здравоохранения. Предложенная схема иммунизации состоит из 3 инъекций с интервалом между первым и вторым введением 1 мес; а между вторым и третьим введением 4-6 мес (т.е. 0-1-4-6). Третья инъекция является очень существенной, так как она вызывает возрастание титра антител от 10 до 100 раз. Продолжительность иммунитета составляет 5-7 лет.

Примерно у 10-15% здоровых лиц отмечена толерантность на введение вакцины.

17.3. Возбудители парентеральных вирусных гепатитов D, C, G

Вирус гепатита D (ВГО) впервые был обнаружен в 1977 г. Ризетто. ВГD не классифицирован. ВГD является сателлитом ВГВ и представляет дефектный вирус, не имеющий собственной оболочки. Вирион (ВГD) имеет сферическую форму, диаметр 36 нм, состоит из однонитевой минус-цепи РНК кольцевой формы и нуклеокапсидного HD-антигена (δ-антигена). В качестве внешней оболочки для защиты генома ВГD использует HBs-антиген внешней оболочки ВГВ. δ-Антиген представлен в нуклеокапсиде в виде 60 копий и является единственным белком, синтез которого кодируется вирусной РНК. Он построен из двух белков, имеющих полипептидные цепи разной длины (24 и 27 кД). Эти белки регулируют синтез генома вируса: один белок стимулирует синтез генома, а другой тормозит его. Репликация вирусного генома выполняется клеточной РНК-полимеразой-II без помощи вируса гепатита В. Различают 3 генотипа вируса. В России преобладает генотип 1. Все генотипы относятся к одному серотипу.

Культивирование. Вирус не культивируется на известных клеточных линиях. Экспериментальной моделью являются шимпанзе и лесные сурки, которые заражаются ВГD совместно с ВГВ и вирусом гепатита лесных сурков соответственно.

Эпидемиология. Резервуаром ВГD в природе являются носители ВГВ. Заражение ВГD аналогично инфицированию ВГВ. Одновременное инфицирование ВГВ и ВГD (коинфекция) приводит к развитию умеренной формы болезни. Инфицирование ВГD больных с хронической формой гепатита В утяжеляет течение инфекции, приводя к развитию острой печеночной недостаточности и цирроза печени.

Диагностика осуществляется серологическим методом путем определения антител к ВГD методом ИФА. В биоптатах печени методом ПЦР можно обнаружить в гепатоцитах РНК вируса.

Профилактика и лечение. Для профилактики гепатита D проводят все те мероприятия, которые используют для профилактики гепатита В. Для лечения применяют препараты интерферона. Вакцина против гепатита В защищает и от гепатита D.

Вирус гепатита С (ВГС) относится к семейству Flaviviridae, роду Hepacivirus.

Морфология. ВГС является сложноорганизованным РНКсодержащим вирусом сферической формы, диаметром 55-65 нм.

Капсид построен по кубическому типу симметрии, содержит структурный белок сердцевины (core), НСс-антиген и неструктурные белки: NS2, NS3, NS4, NS5, которые являются ферментами, необходимыми для репродукции вируса. Белки NS2-NS4 участвуют в процессинге NS-района, синтезированного в результате трансляции вирусной РНК полипептида. Белок NS3 является бифункциональным белком, обладающим протеолитической и хеликазной активностью. NS5-белок является РНК-зависимой РНКполимеразой.

Капсид окружен липопротеиновой оболочкой с гликопротеиновыми шипами gp Е1 и gp E2/NS1.

Антигенная структура. Антигенами вируса являются НСсантиген (core-антиген); неструктурные белки NS2-NS5; гликопротеины оболочки gp Е1 и gp E2/NS1.

Геном представлен плюс-цепью РНК. Геном высокоизменчив. Особой гипермутабельностью обладает район, детерминирующий синтез гликопротеинов Е1 и Е2, которые обладают В-эпитом и на которые вырабатываются вируснейтрализующие антитела. Замена аминокислот в гликопротеинах изменяет антигенные свойства вируса, позволяя ему избегать нейтрализующего действия антител. Известно около 14 генотипов вируса. Наибольшее распространение имеют генотипы 1-3, наиболее вирулентным является генотип 1b.

Культуральные свойства. ВГС не культивируется на куриных эмбрионах, не обладает гемолитической и гемагглютинирующей активностью. Экспериментальной моделью является шимпанзе. Трудно адаптируется к культивированию в культуре клеток.

Резистентность. Относительно нестабилен при хранении при комнатной температуре. ВГС чувствителен к эфиру, детергентам, формальдегиду, УФ-лучам; нагревание при 60 ?С инактивирует вирус в течение 10 ч, при 100 ?С в течение 2 мин.

Эпидемиология. Заражение ВГС аналогично заражению ВГВ. Однако для заражения ВГС требуется большая заражающая доза, чем при гепатите. Наиболее часто ВГС передается при перелива-

ниях крови (2/3 случаев), половым путем, при использовании загрязненных инструментов. Трансплацентарная передача возможна только в случае высокой вирусемии. Вирус широко распространен. В мире более 1/3 населения инфицировано ВГС.

Клиническая картина. Инкубационный период 6-8 нед. Клиническое течение острого гепатита С более легкое, чем гепатита В. Часто встречаются безжелтушные формы, выявить заболевание при которых можно по повышению активности аланинаминотрансаминазы в крови. Однако в 60% случаев процесс переходит в хроническое состояние с развитием цирроза и первичного рака печени. Переход в хроническое состояние в 50% случаев связан, с одной стороны, с отсутствием выраженного CD4-клеточного иммунного ответа, а также возможностью вируса избегать нейтрализующего действия антител вследствие большой изменчивости генома. Предполагается, что ВГС представляет собой персистирующую вирусную инфекцию, при которой вирус персистирует в лимфатических узлах. При ослаблении CD4-иммунного ответа происходит реактивация вируса. Выраженный CD4-иммунньIЙ ответ, направленный против эпитопа на NS3-белке, обусловливает выздоровление.

Диагностика. Используются ПЦР и серологическое исследование. Материалом для исследования является кровь. Обнаружение в крови ВГС (РНК) возможно уже через несколько дней после заражения вирусом. Антитела к ВГС появляются только через 12 нед после заражения, создавая окно серонегативности и потенциальной инфекционности. Поэтому ПЦР является методом выбора для ранней диагностики гепатита С. Серологическое исследование проводят методом парных сывороток.

Профилактика и лечение. Для неспецифической профилактики проводят те же мероприятия, что и при гепатите В. Для лечения применяют интерферон и рибовирин. Специфическая профилактика не разработана.

Малоизученный вирус, предположительно относящийся к семейству Flaviviridae, роду Hepacivirus. Для его репликации требуется ВГС. Считается, что вирус гепатита G обладает лимфотропностью, вызывает персистирующие формы инфекции.

источник