Меню Рубрики

Днк вируса гепатита количественно вирусная нагрузка

Исследование для выявления возбудителя гепатита B (HBV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (ДНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

ДНК HBV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HBV, определяемых тест-системой, составляет 75,0 — 1,0*10^8 МЕ/мл.

Вирус гепатита В (ВГВ), количественное определение ДНК.

Hepatitis B Virus DNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood; HBV Viral Load; Hepatitis B Virus DNA Quant.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

МЕ/мл (международная единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит В (ВГВ) – инфекционное заболевание печени, вызванное ДНК-содержащим вирусом гепатита В (HBV). Среди всех причин развития острого гепатита и хронической вирусной инфекции вирус гепатита В считается одной из самых распространенных в мире. Действительное количество инфицированных неизвестно, так как у многих людей инфекция протекает без специфических симптомов и за медицинской помощью они не обращаются. Нередко вирус обнаруживают при проведении профилактических лабораторных исследований. По приблизительным подсчетам, в мире около 350 миллионов человек поражено вирусом гепатита В и ежегодно от его последствий умирает 620 тысяч. В России количество носителей HBV превышает 5 миллионов человек.

Источник инфекции – больной ВГВ или бессимптомный вирусоноситель. HBV передается с кровью и другими биологическими жидкостями. Заразиться можно при незащищенном половом контакте, использовании нестерильных шприцев, переливании крови и пересадке донорских органов, ребенка может заразить мать во время или после родов (через трещины в сосках). В группу риска входят: медицинские работники, у которых возможен контакт с кровью пациента, пациенты, получающие гемодиализ, инъекционные наркоманы, люди, ведущие беспорядочную половую жизнь, дети, рождённые от матерей с ВГВ.

Инкубационный период заболевания – от 4 недель до 6 месяцев. Вирусный гепатит В может протекать как в виде легких форм, длящихся несколько недель, так и в виде многолетней хронической инфекции. Основные признаки гепатита: желтушность кожных покровов, лихорадка, тошнота, утомляемость, в лабораторных анализах – нарушения функции печени и специфические антигены вируса гепатита В. Острое заболевание может быстро приводить к летальному исходу, переходить в хроническую инфекцию или заканчиваться полным выздоровлением. Считается, что после перенесенного ВГВ формируется стойкий иммунитет. Хронический вирусный гепатит В связан с развитием цирроза и рака печени.

Есть несколько специфических тестов для выявления существующего или перенесенного вирусного гепатита В. Для подтверждения наличия инфекции и уточнения периода заболевания используют определение антигенов вируса, антител к ним и ДНК вируса.

Полимеразная цепная реакция отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки позволяет оценить интенсивность развития болезни, эффективность проводимой терапии или развитие устойчивости к противовирусным препаратам.

Существует зависимость между концентрацией вируса в крови и исходом острого вирусного гепатита В. При низком уровне виремии вероятность перехода инфекции в хроническую форму близка к нулю, а инфицированный человек неопасен для окружающих. При высокой вирусной нагрузке ( 5 копий/мл) хронизация возникает часто и больной является потенциальным источником инфекции. Доказана связь между количеством ДНК вируса в сыворотке крови, присутствием HBeAg, повышенной АЛТ и развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы (рака печени).

Эффективность противовирусной терапии оценивается по уменьшению количества ДНК вируса в крови. Через 3-6 месяцев после начала лечения вирусная нагрузка при адекватном терапевтическом ответе должна уменьшиться на 1-2 порядка. Отсутствие уменьшения количества вируса или его увеличение на фоне проводимого лечения требует пересмотра и изменения терапии.

Количественное определение ДНК вируса гепатита В совместно с клинической картиной заболевания и биохимическими показателями, маркерами инфекции, а также результатом пункционной биопсии печени позволяет дать прогноз заболевания и оценить необходимость противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

  • Для прогнозирования течения вирусного гепатита В.
  • Для подтверждения хронической формы вирусного гепатита В.
  • Для выявления носителей вирусного гепатита В и мониторинга активности размножения вируса.
  • Для выявления скрытых и мутантных штаммов вируса гепатита В.
  • Для оценки эффективности противовирусной терапии гепатита В и принятия решения о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

  • При качественном обнаружении ДНК вируса гепатита В.
  • При остром и хроническом вирусном гепатите В.
  • При микст-гепатитах.
  • До и во время противовирусной терапии.

Референсные значения: не обнаружено

  • «Не обнаружено» – ДНК вируса гепатита В не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (50 МЕ/мл);
  • 1*10^8 МЕ/мл – ДНК вируса гепатита В обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций ДНК вируса гепатита В, определяемых тест-системой, составляет 75,0 — 1,0*10^8 МЕ/мл.

  • Количественное определение ДНК вируса гепатита В является обязательным исследованием до назначения противовирусной терапии. Во время курса лечения анализ необходимо повторить через 3-6 месяцев.
  • Вирусный гепатит В нередко сочетается с вирусным гепатитом D.

Кто назначает исследование?

  1. Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000 – Т.1.: 601-654.
  2. Chan Henry Lik-Yuen, Wong May Ling, and others. Use of Hepatitis B Virus DNA Quantitation To Predict Hepatitis Be Antigen Reversion in Cases of Chronic Hepatitis B. J Clin Microbiol. 2003 October; 41(10): 4793–4795. PMCID: PMC294957
  3. Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  4. Management of Hepatitis B. An NIH Consensus Development Conference. Program and Abstracts. October 20–22, 2008.

источник

Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.

ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:

  • при возникновении признаков гепатита В у пациента;
  • во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
  • для уточнения эффективности терапии.

Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.

Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.

Непривычная утомляемость

  • нарастающая усталость при небольших нагрузках;
  • непривычная утомляемость;
  • тяжесть в области правого подреберья;
  • пониженный аппетит, тошнота;
  • желтушность кожных покровов, склер глаз;
  • светлый кал;
  • тёмная моча;
  • болезненные ощущения в суставах.

Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.

Показаниями к ПЦР являются:

  • положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
  • острый и хронический гепатит;
  • микст-гепатиты;
  • количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
  • разработка тактики эффективной терапии.

Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.

Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:

  • полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
  • воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
  • 15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
  • прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
  • детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.

В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.

Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.

Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.

Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:

  • Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
  • Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
  • Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
  • Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.

Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»

Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.

В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.

Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.

Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.

Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:

  • конкретную вирусную нагрузку на печень;
  • интенсивность прогрессирования заболевания;
  • устойчивость к препаратам противовирусной группы;
  • результативность лечения.

Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.

Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.

Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса

Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.

Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:

  • количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
  • сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
  • маркеров вирусной инфекции;
  • результатов биопсии печени.

Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:

  • обнаружить носители вируса;
  • прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
  • убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
  • мониторить активность вируса на всех фазах развития;
  • выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
  • оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.
Читайте также:  Узи при хроническом вирусном гепатите в

В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:

Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью

  1. Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
  2. Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
  3. Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
  4. Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
  5. Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
  6. Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.

Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.

Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.

источник

При подтверждении HCV-инфекции, задача врача состоит в первую очередь в оценке состояния здоровья пациента. Но новейшие технологии лабораторной диагностики позволяют предположить, насколько высок риск осложнений, установить активность патологического процесса. Поэтому одним из основных диагностических параметров является вирусная нагрузка при гепатите С (Ц). Для этого показателя в медицинской литературе также применяют термин «виремия».

Ключевую роль в определении схемы терапии играет генотип HCV. Как показывает практика, наиболее распространена первая разновидность, остальные встречаются несколько реже. Но именно 1 генотип крайне тяжело поддается лечению, и высокая виремия служит одним из предикторов неблагоприятного течения патологии. На основании количественного лабораторного теста специалист может назначить более эффективное лекарство нового поколения вместо часто применяемых комбинированных схем с софосбувиром.

Показатели вирусной нагрузки необходимы и для контроля проводимой противовирусной терапии. Виремию в обязательном порядке определяют до начала приема медикаментов, а затем исследование повторяют еще дважды в течение курса лечения. Устойчивая тенденция к снижению говорит в пользу хорошего «ответа» на препараты и наоборот, сохранение вирусной нагрузки на одном уровне либо увеличение цифр (по сравнению с первым анализом) требует быстрого изменения схемы терапии либо отмены приема медикаментов до выяснения причины резистентности.

При подозрении на гепатит С пациенту приходится сдавать множество анализов, названия которых понятны далеко не всегда. Попробуем разобраться в специальных медицинских терминах и обозначениях тестов, назначаемых врачом. Для обследования больного проводят анализы по двум основным методикам.

  1. Серологическое исследование. В лабораторном бланке часто обозначается как anti-HCV. Тест предназначен для выявления антител (иммуноглобулинов) к возбудителю гепатита С, которые достигают определяемого уровня на 4–6 неделе после заражения. Но по титру АТ к HCV можно только приблизительно определить тяжесть заражения.
  2. Молекулярные исследования. Включают несколько тестов. Обозначается как ПЦР (полимеразная цепная реакция). Анализ достаточно сложен в исполнении и позволяет установить РНК вируса в кровотоке. Самый простой тест – качественный, когда определяют только присутствие HCVв сыворотке. Количественный позволяет выяснить точное количество копий РНК в 1 мл крови. При помощи генотипирования устанавливают структуру вириона и точную разновидность HCV (I–VI).

Количественную ПЦР проводят не сразу. Максимально возможной чувствительностью характеризуются тест-системы, используемые для постановки качественного исследования. Но высокая стоимость анализа ограничивает его повсеместное применение. Для рутинной диагностики применяют более простой в проведении ИФА.

Дальнейшее обследование проводят при позитивном ИФА. Ранее качественная ПЦР считалась более чувствительной, чем количественная. Но современные тест-системы позволяют определить количество вируса гепатита С в крови при показателях 5 МЕ/мл и выше.

Лаборатории могут использовать разные наборы для постановки количественного анализа. Поэтому все исследования лучше проводить в одном месте, чтобы не допустить погрешности в показаниях тестов.

Какая вирусная нагрузка бывает при гепатите С? Для ответа на этот вопрос используют не только числовые показатели.

Для удобства диагностики и прогнозирования исхода заболевания виремию делят на группы:

В некоторых медицинских источниках дополнительно используют термины «умеренная» и «очень высокая». На многих форумах пациенты нередко жалуются на погрешности при проведении количественной ПЦР. Дело в том, что разные тест-системы могут отличаться по интерпретации результатов. Если ранее виремию обозначали в копиях РНК/мл, сейчас все современные лаборатории указывают показатель в Международных Единицах ( МЕ/мл).

Как определить вирусную нагрузку? Чтобы посчитать данный параметр, используют различные лабораторные методики. Их названия и краткое описание приведено в таблице.

Наименование теста Описание
ПЦР Отличается высокой чувствительностью, распространенностью и универсальностью
Метод разветвленной ДНК Исследование просто в проведении и обычно применяется для тестирования большого количества образцов. На практике тест используется крайне редко из-за низкой чувствительности
Транскрипционная амплификация Методика основана на амплификации генетических образцов вируса в крови. Способ отличается быстротой проведения, а чувствительность сопоставима с ПЦР. Но многие лаборатории только начинают переход на новые тест-системы

Как правило, исследование выполняют методом ПЦР. Но перед проведением теста необходимо обязательно поинтересоваться, какой методикой он проводится. Это нужно для правильной интерпретации результатов. Анализ рекомендуют выполнять по максимально чувствительным способам. Только таким образом можно определить ответную реакцию пациента на проводимую терапию и вовремя обратить внимание на признаки возможных осложнений.

Чувствительность проводимого теста – это минимальное количество копий вируса, которое можно обнаружить при помощи данного исследования. При обследовании перед назначением терапии доктора не акцентируют внимание на особенностях методики выполнения анализа. Однако в последующем, когда речь идет об оценке эффективности лечения, важно выполнять тесты максимально чувствительным методом.

Характеристики применяемых на сегодняшний день способов определения виремии указаны в таблице.

Наименование исследования Чувствительность теста
ПЦР От 5–10 МЕ/мл
Методика разветвленной ДНК От 600 МЕ/мл
Способ транскрипционной амплификации От 5 МЕ/мл

При этом доктора обращают внимание пациентов, что в лабораториях для обозначения вирусной нагрузки градацию показателей проводят с использованием степеней (102, 104, 106 и т.д.). Поэтому расшифровку результатов анализа лучше доверить врачу, а все бланки дублировать и обязательно вклеивать в карту пациента.

Проблемой, как узнать уровень виремии, доктора занимаются уже после подтверждения диагноза HCV – инфекции. Тем более, современные тест-наборы, предназначенные для постановки качественной ПЦР, более чувствительны, чем системы для проведения количественного анализа. Нередко, лаборатории предлагают пакет, включающий анализ на вирусную нагрузку и генотипирование. Такой комплекс исследований обходится дешевле, чем выполнение тестов по отдельности.

Показания к установлению уровня виремии приведены в таблице.

Такие результаты свидетельствуют об иммунодефиците. Его причину выясняют до начала лечения. Состояние мешает адекватной иммунной реакции (выработке антител) на возбудителя вируса.

Количественный тест ПЦР служит дополнительным подтверждением диагноза и также влияет на последующую терапию

Современные противовирусные препараты принимают на протяжении 12 или 24 недель.

При 12-недельном курсе терапии определены следующие сроки выполнения количественного теста:

  • 21–28 день,
  • 77–84 день (последняя неделя приема).

При 24-недельном курсе лечения анализ на виремию сдают:

  • на 4 неделе,
  • на 12 неделе,
  • на 24 неделе.

Дополнительно пациент может сдать кровь на уровень виремии в любое время самостоятельно в частной лаборатории без направления от врача.

При 48-недельном лечебном курсе (обычно проводится с применением интерферона и рибавирина):

  • в течение 4 недели,
  • в промежуток с 12 по 16 неделю,
  • на 23–24 неделе,
  • на последней неделе лечения.
Показания к сдаче анализа Описание
Позитивный Anti-HCV и положительный качественный тест ПЦР Подтверждают диагноз гепатита С, уровень вирусологической нагрузки устанавливается для определения дальнейшей тактики противовирусной терапии
Негативный Anti-HCV и позитивная качественная ПЦР
После окончания терапии Количественный анализ повторяют в течение 1–2 лет с момента окончания приема медикаментов с интервалом в 3 месяца. Если сохраняется негативный результат, в карточке делают пометку, что пациент выздоровел

Если по истечении двух лет после окончания терапии количественный тест вновь показал виремию (вне зависимости от уровня), говорят о повторном инфицировании. В таком случае все исследования проводят сначала. Определяют степень поражения печени при помощи эластографии, УЗИ и биопсии (инвазивная процедура, проводится по строгим показаниям).

Количественный анализ крови демонстрирует только уровень виремии (в цифровом значении). В ходе исследования не устанавливают разновидность вируса гепатита С. Для этого показано генотипирование.

На этапе количественной оценки виремии пациент уже находится под наблюдением врача. Если результат первичного анализа (anti-HCV) вызывает сомнения, терапевт направляет больного к узкому специалисту. Это либо инфекционист, либо гепатолог.

Если определяется вирусная нагрузка при гепатите С, расшифровка должна проводиться только врачом. Но общепринятые варианты трактовки представлены в таблице ниже.

Результаты исследований Описание
8×105 МЕ/мл и более Высокая виремия
7,9×105 МЕ/мл и менее Низкая виремия
Некоторые зарубежные специалисты считают, что критическая граница между высокой и низкой вирусологической нагрузкой составляет 4×105 МЕ/мл
Виремия не определяется РНК возбудителя либо отсутствует, либо его количества недостаточно для лабораторного определения

Отсутствие генетического материала HCV в крови является вариантом нормы.

При первичном обследовании, когда подтвержден диагноз гепатита С, о норме при количественном определении вируса речь не идет. РНК патогена будет обнаружено в крови в любом случае. Но во время лечения нормой считается отсутствие возбудителя HCV в плазме уже к середине курса терапии.

Необнаруживаемый уровень HCV на 4–6 неделе приема медикаментов служит предиктором успешного лечения. При этом анализ следует выполнять максимально чувствительными методами, которые смогут определить содержание патогена в количестве 5 МЕ/мл и выше. Нормой считают отсутствие вируса после окончания медикаментозной терапии.

Высокой является виремия от 8×104 МЕ/мл и более (некоторые авторы называют число в два раза ниже – 4×104 МЕ/мл). Подобные показатели – один из неблагоприятных факторов течения патологии, говорят в пользу очень активной репликации вируса, быстром распространении HCV. Чем больше параметры виремии, тем выше вероятность развития осложнений – цирроза, фиброза, асцита, внепеченочных проявлений гепатита.

В таких случаях нужно особое внимание уделить состоянию печени. Обычно врач проводит все возможные лабораторные и инструментальные исследования, чтобы получить максимально полную картину и исключить скрытые патологии. Также слишком большие показатели виремии (особенно при невысоких титрах либо отсутствии антител) могут быть следствием проблем с иммунитетом (ВИЧ, иммунодепрессивные состояния и т.д.).

При отсутствии цирроза и коинфекций прописывают стандартную схему терапии (комбинации с софосбувиром). Если виремия снижается недостаточно быстро либо остается на прежнем уровне, принимают решение о смене тактики лечения.

Высокая виремия в сочетании с фиброзом и циррозом, требует серьезного подхода. Назначают длительный курс терапии, иногда показана трансплантация органа. В таком случае (если до пересадки остается полгода и менее) лечение не начинают, а проводят уже после хирургического вмешательства.

Если виремия составляет ниже 8×105 МЕ/мл, говорят о низкой вирусной нагрузке. Что означает такой показатель? Цифры служат предиктором выздоровления. При минимальном содержании патогена возможно носительство, когда HCV не прогрессирует, но это не означает пожизненного латентного течения болезни. Часто активизация процесса происходит спонтанно и незаметно для пациента.

К причинам сниженной виремии относят:

  • хорошую работу иммунной системы;
  • правильное питание с ограничением (в идеале, исключением) тяжелой для печени пищи;
  • строгое ограничение алкоголя;
  • отсутствие лекарственного гепатотоксического воздействия;
  • отсутствие коинфекций.

Иногда невысокое число виремии отмечают на фоне недавнего заражения. В таком случае доктора оценивают состояние пациента. При благоприятном прогнозе лечение не начинают, предоставляя иммунитету «возможность» самостоятельно побороть инфекцию.

При хроническом течении патологии на фоне низкой ВН лечение начинают незамедлительно. Однако отсутствие яркой активности HCV предполагает 100% положительный результат терапии практически у всех пациентов. Но минимальная виремия уже после проведенного курса приема противовирусных средств служит признаков возможного рецидива либо повторного заражения.

Читайте также:  Токсичный и вирусный гепатит

Когда проведен анализ на количественное определение HCV и выполнена расшифровка результатов теста, доктора принимают решение о тактике проводимой терапии.

Лечение заключается в назначении следующих препаратов:

  1. Противовирусные препараты прямого действия (Мавирет, софосбувир, даклатасвир, Викейра Пак, велпатасвир, ледипасвир и т.д.). Отличаются высокой эффективностью (85–95% благоприятных исходов), безопасностью, коротким перечнем противопоказаний.
  2. Комбинация интерферона с рибавирином. В настоящее время применяет редко из-за низкой эффективности (по сравнению с препаратами последнего поколения) и высокого риска противопоказаний. Но назначают при непереносимости противовирусных средств либо наличии других ограничений.
  3. Гепатопротекторы (Эссенциале Форте, Гепа-Мерц, Карсил, Легалон и др.) Назначают всем пациентам уже при первом посещении врача по поводу жалоб на состояние печени. Принимают на протяжении длительного периода, как правило, до полного (или максимально возможного для данного пациента) восстановления печени.
  4. Поливитаминные комплексы. Также принимают длительными курсами. В составе препаратов обязательно содержание витаминов группы В, антиоксидантов (витаминов А и Е, аскорбиновой кислоты), основных макро- и микроэлементов, незаменимых аминокислот.

Одним из немногих способов снизить вирусную нагрузку является правильно подобранное комплексное лечение.

Также для быстрого снижения виремии необходимо придерживаться строгой диеты. Во время консультации доктор подробно разъясняет особенности питания в соответствии со столом №5, при тяжелом состоянии пациента – №5а. Категорически противопоказан алкоголь (вне зависимости от крепости и количества). Рекомендуют отказаться от вредных привычек, особенно наркотической и никотиновой зависимостей.

В настоящее время лечение гепатита С мало зависит от параметров виремии. Ключевую роль играет разновидность HCV. Если выявлен I генотип патогена и показатели виремии слишком высоки, предпочтение отдают препаратам последнего поколения. К примеру, вместо софосбувира с даклатасвиром или другими лекарствами прямого действия, прописывают Викейру Пак.

Темпы снижения виремии характеризуются термином «вирусологический ответ» (или сокращенно ВО).

В зависимости от сроков уменьшения концентрации HCV в крови различают:

  • ранний ВО – снижение виремии до неопределяемых концентраций на 12 неделе терапии;
  • очень ранний ВО – отсутствие показателей на 4 неделе терапии;
  • устойчивый ВО – сохранение негативного результата на протяжении полугода после окончания лечения;
  • возврат вирусной инфекции – повышение виремии после кратковременного снижения;
  • рецидив HCV – повторное появление вируса после успешного лечения.

Задача врача – добиться устойчивого вирусологического ответа, предикторами которого служит отсутствие виремии на 4 или 12 неделе лечения.

В целом, при нормальном состоянии печени (без цирроза) благоприятный прогноз вероятен и при высоком содержании HCV. Хотя гепатит С часто протекает без каких-либо клинических признаков, вполне реально вовремя диагностировать патологию. Для этого рекомендовано ежегодное проведение anti-HCV, а после перенесенного заболевания – качественное определение вируса методом ПЦР.

источник

Гепатит В — одно из самых опасных заболеваний современности.

Его вызывает вирус, проникающий в организм при контакте крови с инфицированным биологическим материалом, в том числе, остающимся на маникюрных принадлежностях, медицинских инструментах, машинках для нанесения татуировок, которые не были нужным образом продезинфицированы. Вирус может передаваться и при половом контакте.

Для диагностики болезни проводится анализ на гепатит В путем забора крови пациента.

Заражение происходит половым и бытовым путем, тип распространения — гематогенный (через кровь). При инфицировании вирус проникает в гепатоциты (клетки печени), в которых продуцируется в дальнейшем. Посредством кровотока болезнь стремительно распространяется по организму. Вирус В (HBV) характеризуется высокой устойчивостью к воздействиям температуры и кислоты, способен сохранять поражающие свойства в течение полугода.

Если гепатит В проявил первые симптомы, прежде чем начать терапию и лечение, необходимо сдать анализы. Исследование крови является достоверным способом установки заражения гепатитом. Проводится в лабораторных условиях. Материал для анализа на гепатит В сдается натощак: с последнего приема пищи должно пройти минимум 8 часов.

Для выявления в крови вируса гепатита В применяются анализы трех типов, характеризующих присутствие вируса в крови:

  • анализ на наличие в материале ДНК HBV путем исследования полимеразной цепной реакции;
  • качественное исследование присутствия белка Anti-HBc IgG и антигена HBsAg (встречаются у здоровых, инфицированных и переболевших);
  • анализ на выявления белков HBeAg и Anti-HBc IgM (характеризуют обострение болезни).

Для полноты картины рекомендуется одновременно провести исследования по нескольким маркерам.

Наиболее распространенными анализами на гепатит В является иммунологические. Их суть — выявить в крови антитела, выработанные организмом или печенью. Пробы носят качественный и количественный характер. Анализы на гепатит В и их расшифровка, как правило, содержат информацию о нескольких характерных белках. При проведении пробы исследуются следующие антитела:

Встречается на ранних сроках заражения до проявления клинических признаков.

Положительный маркер говорит о присутствии вируса, но встречается и у абсолютно здоровых людей. Если в крови присутствует менее 0,05 МЕ/мл, то результат считается отрицательным. Если значение концентрации антитела выше, анализ признается положительным.

Обнаруживается практически у каждого инфицированного пациента. Сохранения показателей на высоком уровне может говорить о переходе болезни в хроническую форму течения. Положительный маркер говорит о нахождении болезни в периоде обострения, затяжном выздоровлении. HBeAg является крайне плохим признаком. Больной очень заразен. В норме — белок в крови не обнаруживается.

Существует два типа антител Anti-НВс: IgG и IgM. Присутствие в крови IgM является признаком течения острой формы, высокой заразности больного и возможности перерохода заболевания в хроническую форму. В норме присутствие IgM не допускается. IgG — благоприятный показатель. Маркер указывает на сформировавший иммунитет организма против гепатита В.

При выявлении в крови маркера можно делать вывод о благоприятном течении заболевания и формировании защитного иммунитета у больного.

Маркер сигнализирует о выздоровлении и формировании иммунитета.

Для лабораторного обследования и выявления наличия диагноза гепатита В в крови применяют метод ПЦР. Способ рассмотрения полимеразной цепной реакции является самым современным в области выявления заболевания.

Итоговая расшифровка показывает, имеются ли следы генного присутствия возбудителя в клетках печени.

Если при проведении исследования соблюдаются все принципы, то результат обладает абсолютной точностью. Метод используется для постановки диагноза, применяется в процессе лечения и при противовирусной терапии.

  1. Качественное ПЦР по итогу имеет всего два значения: «обнаружено» и «не обнаружено». Процедура проводится каждому пациенту с подозрением на гепатит. При средней чувствительности теста на ПЦР в диапазоне от 10 до 500 МЕ/мл, при низких содержаниях ДНК вируса в крови, генный материал обнаружен не будет.
  2. Количественное ПЦР. В отличие от качественного, указывает не только на гепатит В. Количественный анализ указывает насколько норма здорового человека далека от показателей больного в числовом выражении. Метод позволяет оценить стадию заболевания и назначить лечение. Чувствительность теста ПЦР при количественном следовании выше, чем при качественном методе. В основе лежит подсчет выявленной ДНК, который выражается в копиях на миллилитр или МЕ/мл.

Кроме того, количественное ПЦР дает понимание воздействия лечения и корректности подобранной терапии. В зависимости от количества генного материала вируса может быть принято решение о сокращении срока лечения или, наоборот, о его продлении и усилении.

Метод биохимического анализа является обязательным для получения полной клинической картины течения заболевания. Этот диагностический метод дает понимание о работе внутренних органов (печени, почек, желчного пузыря, щитовидной железы и других). Расшифровка дает понимание о скорости обмена веществ в организме, возможных патологиях метаболизма. Развернутые показатели укажут на недостаток витаминов, макроэлементов и минералов, необходимых для здоровья и жизни человека.

Сдать анализ на гепатит можно в любом другом диагностическом центре (Инвитро, Гемотест и др). Биохимический анализ крови при выявлении гепатита В включает следующие компоненты.

Этот фермент наиболее часто встречается в повышенных концентрациях при остром и хроническом гепатите. Вещество содержится в печеночных клетках, а при поражениях органа посредством кровотока попадает в сосуды.

Количество и концентрация в крови при вирусном заболевании постоянно меняется, поэтому исследования проводятся не реже, чем раз в квартал. АЛТ отражает не только активность вируса гепатита, но и степень вызванных им нарушений в печени. Уровень АЛТ возрастает при повышении количества токсических веществ печеночного происхождения и в присутствие вируса.

Белок является составляющей важнейших органов человека: печени, нервной ткани, ткани почек, скелета и мышц. Фермент участвует и в построении самой главной мышцы — сердца. Высокие показатели АСТ у больного с гепатитом В может сигнализировать о фиброзе печени. Аналогичная ситуация возникает при алкогольном, медикаментозном или любом другом токсическом поражении клеток печени.

Зашкаливающие показатели являются признаком разрушения печени на клеточном уровне. Необходимо учитывать при постановке диагноза соотношение АСТ и АЛТ (коэффициент де Ритиса). Одновременное повышение концентрации обоих ферментов — признак некроза печени.

Вещество образуется в селезенке и печени, как результат распада гемоглобина в их тканях. Этот компонент входит в состав желчи. Выделяют две фракции белка: прямой билирубин (связанный) и непрямой билирубин (свободный). При возрастании в крови связанного билирубина имеет смысл подозревать гепатит или другие поражения печени. Это непосредственно связано с цитолизом печеночных клеток.

Если возрастает количество непрямого билирубина, то, скорее всего, присутствует поражение паренхимотозной ткани либо синдром Жильбера. Высокий уровень билирубина по результатам анализа может стать следствием непроходимости желчных протоков. При уровне билирубина свыше 30 микромоль на литр у больного проявляется желтушный оттенок кожи, моча становится темной, а белки глаз изменяют свой цвет.

Синтез этого белка происходит в печени. Если его количество снижено, то это свидетельствует об уменьшении синтеза ферментов в органе вследствие возникновения тяжелых поражений печеночных клеток.

Если количество общего белка становится существенно ниже, чем принятая норма, то это говорит о замедлении функционирования печени.

Фермент, используемый при обнаружении механической желтухи и холециститов. Возрастание уровня ГГТ является сигналом токсического поражения печени. Может провоцироваться хронических алкоголизмом и бесконтрольным употреблением медикаментов. Белок особо чувствителен к токсинам и алкоголю, под их влиянием его активность растет стремительно. Сохранение высокой концентрации ГГТ в крови в течение длительного времени говорит о тяжелых поражениях печени.

Является продуктом белкового обмена, происходящего в печени. Резкое снижение уровня — сигнал замедления работы органа.

Снижение уровня белковых фракций является признаком патологии печени.

Диагностирование гепатита В представляет собой совокупное исследование показателей. Только их комплексный анализ позволяет сделать выводы об инфицировании пациента. Рассмотрим расшифровку анализа на гепатит В. Для сравнения приведена норма веществ в крови.

Наличие современных препаратов против гепатита B (HBV) с четкими показаниями для их назначения требует точной и быстрой верификации диагноза. Однако ввиду скудных клинических данных на первых неделях болезни и ограниченности иммуноферментных методов анализа, скорость постановки диагноза снижается.

Присутствие маркеров анти-HBc IgM, HBsAg, анти-HBc, HBeAg, анти-HBe позволяют подтвердить HBV или установить факт перенесенной болезни. Но определить присутствие активных вирусных частиц в крови и посчитать их число на момент проведения исследования можно посредством ПЦР — количественного real-time теста по выявлению гепатита B. Метод, в сравнении с иммуноферментными способами диагностики, решает диагностические проблемы и позволяет прогнозировать течение болезни на фоне приема противовирусных препаратов.

Диагностика гепатита B основывается на оценке клинических проявлений, иммуноферментных и инструментальных методов исследований. Заболевание протекает в острой фазе после инкубационного периода и, в зависимости от дозы инфекции и эффективности лечения, переходит в хроническую стадию. Главной целью лечения остается предотвращение хронизации, то есть элиминация всех вирусных частиц из крови. Клиническая норма течения болезни — излечение без последующей виремии.

Факт устранения инфекции необходимо доказать количественным методом исследования.

Поскольку любой качественный иммуноферментный анализ позволяет диагностировать HBV косвенно, то есть не показывают наличие возбудителя во внутренней среде организма, а характеризует иммунный ответ на инфекцию, то контроль эффективности терапии и факт излечения становится труднодоказуемыми. Потому пациенту с гепатитом B или с наличием диагностических критериев в его пользу должна проводиться полимеразная цепная реакция с целью количественного определения числа вирусных частиц в крови. Диагностическая норма — это отсутствие копий ДНК инфекта.

Высокочувствительный метод ПЦР-диагностики гепатита В относится к категории генно-инженерных молекулярно-биологических исследований. Посредством него определяется количество вирусной ДНК в биологическом материале пациента и допустимая норма. По полученным результатам устанавливается число вирусных частиц в единице объема. Материалом для диагностического теста является венозная кровь пациента. Забор желателен натощак из-за возможного влияния хилезной сыворотки на результат исследования.

Полученные результаты необходимо предоставить врачу для интерпретации и определения дальнейшей тактики. Самостоятельная расшифровка не представляет диагностической ценности.

Значимость результата числа вирусных частиц, полученного метода ПЦР, превышает значение иммуноферментных исследований. Поскольку анализ в режиме real-time показывает присутствие возбудителя заболевания в крови, его информативность выше прочих. Если ИФА свидетельствуют только о наличии антител, что наблюдается с 4-х недель инкубационного периода и сохраняется более 8 недель после элиминации вируса из крови, то полимеразная цепная реакция однозначно подтверждает активное течение заболевания или его излечение, характеризует динамику назначенной терапии.

Читайте также:  Клиническая классификация вирусных гепатитов

Полимеразная цепная реакция с количественным определением частиц возбудителя решает диагностические вопросы в пользу прекращения лечения в связи с выздоровлением или продолжения терапии из-за ее недостаточной эффективности. Метод максимально специфичен в отношении вируса HBV и отличается приемлемой погрешностью.

Количественный анализ гепатита B является наиболее достоверным и позволяет подтвердить данные, полученные иммуноферментными методами. Он назначается при:

  1. получении положительного диагностического результата ИФА;
  2. лечении пациента с установленным диагнозом вирусного поражения печени;
  3. при диагностике гепатитов смешанной этиологии;
  4. при необходимости определения вирусной нагрузки у пациента.

Поскольку более широко в практике инфекциониста применяется метод иммуноферментного анализа, то часть пациентов с легким течением болезни можно лечить и не прибегая к необходимости подсчета вирусной нагрузки. Но ПЦР общепринято считается «золотым стандартом» диагностики в гепатологии, так как из-за однозначности своего результата снимает ряд организационных вопросов. Поэтому направление пациента на количественный анализ преследует следующие цели:

  • получение данных о числе вирусных частиц в крови пациента;
  • подтверждение острого течения гепатита и своевременной верификации хронизации заболевания;
  • постоянное выявление латентных вирусоносителей с положительными ИФА-тестами, мониторинг их виремии;
  • принятие решения о назначении антивирусного лечения, его комбинирования и прекращения.

Наиболее значимой целью применения количественного ПЦР-теста на выявление HBV является определение возможных комбинаций лечения. В случаях с высокой вирусной нагрузкой результат анализа дает специалисту возможность приступить к комбинированию препаратов. В ходе терапии на основании результата ПЦР легко определить эффективность назначенного фармакологического лечения. Руководствуясь только данными иммуноферментных методов, нельзя своевременно определить факт излечения и его текущую эффективность. Поэтому количественный real-time тест — необходимый анализ перед началом лечения острого гепатита, латентного вирусоносительства с высокой виремией и хронического HBV.

Расшифровка результатов количественного ПЦР-теста должна проводиться лечащим врачом пациента. Необходимо дать оценку диагностического показателя и определить терапевтическую тактику.

Стандартный анализатор способен выдавать количественный показатель, который отражает число копий вирусной ДНК, присутствующих в исследуемой венозной крови. Единицы измерения — копии/мл, МЕ/мл (копии на миллилитр, международные единицы на миллилитр). Расшифровка результатов приведена в таблице с указанием разных единиц измерения.

ВГВ является сложноорганизованным ДНК-содержащим вирусом и относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus.

Гепатит В — антропонозная инфекция, преимущественно с парентеральным механизмом заражения, которая может протекать в форме вирусного носительства, острой и хронической форм и характеризуется поражением печени с возможным развитием острой печеночной недостаточности, хронического гепатита, цирроза печени и первичного рака печени (гепатоцеллюлярной карциномы).

Инфицирование организма человека происходит при непосредственном проникновении HBV в кровь (при каких либо инвазивных вмешательствах и при переливании крови и ее препаратов), или через слизистые и кожные покровы во время родов, при половых и тесных бытовых контактах. Попав в печень, HBV проникает в гепатоцит, где начинает интенсивно размножаться.

Развитие инфекционного процесса может происходить двумя путями: репликативным и интегративным. Репликативная форма инфекции ведет к развитию острого или хронического гепатита и циррозу печени, тогда как интегративная — к развитию «здорового» вирусоносительства, неактивного хронического гепатита, циррозу печени и первичной гепатокарциномы.

Серологическая диагностика и прогноз HBV-инфекции основан на выявлении антигенов вируса и антител к нему. Но, как оказалось, в популяции вируса гепатита В встречается достаточно мутантных штаммов (HBеAg-негативных), которые не улавливаются обычными серологическими тестами. Поэтому метод ПЦР для диагностики HBV-инфекции является крайне важным.

Количественное определение ДНК вируса гепатита В методом ПЦР.

Аналитические показатели: выявление ДНК вируса гепатита В (hepatitis В virus) ме­тодом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и определение вирусной нагрузки в плазме крови.

Определяемый фрагмент — уникальная последовательность ДНК гена структур­ного белка вируса гепатита В. Специфичность определения — 98%. Чувствительность определения — от 2х105 МЕ/мл 5х103 копий/мл вирусных частиц в сыворотке крови.

Количественная характеристика содержания ДНК вируса гепатита важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для опре­деления хронизации гепатита В: при исходно низком уровне виремии (ДНК HBV менее 2х105 копий/мл (2х105 МЕ/мл)) процент хронизации острого гепатита В близок к нулю. При концентрации HBV ДНК от 2х105 копий/мл (2х105 МЕ/мл) до 2х10° копий/мл (8х105 МЕ/мл) хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне ви­ремии у пациента (более 2х10° копий/мл (8х105 МЕ/мл)) острый гепатит В чаще всего пе­реходит в хронический. Снижение концентрации ДНК вируса гепатита В к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии.

источник

Определение ДНК вируса гепатита В необходимо преимущественно в диагностике хронической формы болезни. Проводится качественный и количественный анализ ДНК гепатита для установления активности репликации возбудителя (вирусная нагрузка) и принятия решения о необходимости начала специфической противовирусной терапии.

В процессе лечения хронического гепатита В и после завершения полного курса эти анализы проводятся повторно для оценки эффективности проведенной терапии.

HBV DNA – это главная составляющая возбудителя гепатита В, в которой хранится генетическая информация о вирусе. В клинической практике определение ДНК HBV вместе с HBsAg и другими маркерами вирусного гепатита используется в диагностике хронической формы болезни, реже – острой.

Если в крови пациента не обнаружено следов ДНК HBV (качественный анализ отрицательный), то это позволяет полностью исключить диагноз острого и хронического гепатита В. Именно этот анализ помогает в сложных диагностических случаях, когда серологические маркеры вирусного гепатита В вызывают сомнения у лечащего врача.

Если позволяют технические возможности, то в крови пациента выявляют только ДНК HBV методом ПЦР без определения серологических маркеров вирусного гепатита В. Этот метод может быть использован в качестве скринингового как самый надежный, но не всегда доступный из-за своей высокой стоимости.

В отечественной клинической практике традиционно принято не начинать обследование пациента с ДНК HBV, а стартовать с более доступных с финансовой и технической точек зрения серологических маркеров вирусного гепатита Б.

Необходимость выявить наличие ДНК HBV (или подтвердить ее отсутствие) целесообразно в таких ситуациях:

  • длительное течение острой формы гепатита В (затяжной вариант с высокой вероятностью хронизации);
  • при получении сомнительных результатов серологических маркеров (например, отрицательный HBsAg и положительный HBeAg);
  • перед началом противовирусной терапии пациенту с хроническим гепатитом В для оценки концентрации вирусных частиц в крови (вирусная нагрузка);
  • через месяц от момента старта противовирусной терапии для оценки эффективности назначенных противовирусных средств (вирусная нагрузка должна снижаться);
  • после завершения курса специфического лечения для оценки его эффективности (качественный и количественный анализ ДНК HBV должны стать отрицательными).

Семейный доктор также может назначить анализ на ДНК HBV в процессе проведения дифференциальной диагностики, если у пациента заподозрено заболевание печени или диагностирован синдром желтухи неустановленной этиологии.

Кратность проведения анализов на ДНК HBV, какой именно вариант необходим (качественный или количественный) – решает лечащий доктор. Пациенту лучше не заниматься самодиагностикой, так как ПЦР-диагностика на ДНК HBV достаточно дорогая.

Полимеразная цепная реакция не требует специальной подготовки. Правила подготовки такие же, как и к другим традиционным лабораторным исследованиям. Если у пациента возникают вопросы, то их необходимо задать лечащему доктору или сотруднику лабораторного комплекса. Перед определением ДНК HBV пациенту необходимо:

  • на протяжении 3 дней отказаться от приема лекарственных препаратов;
  • исключить жирную пищу;
  • выдержать период голодания в течение 8-10 часов до момента взятия крови;
  • запланировать визит в лабораторный комплекс на первую половину дня;
  • приходить натощак, но обязательно выпить 1-2 стакана обычной питьевой воды или некрепкого чая.

Допускается взятие крови пациента в одном подразделении и последующая доставка контейнера с биологическим материалом в лабораторный комплекс. Венозная кровь наливается в емкость с веществом, препятствующим свертыванию крови.

Биологический материал в обязательном порядке транспортируется в лабораторный комплекс в условиях переносного холодильника (температура от 2 до 8 градусов). Информативный результат может быть получен только при условии доставки крови в течение 24 часов.

ДНК HBV обнаруживают методом полимеразной цепной реакции. Это значит, что с помощью амплификации в биологической жидкости обследуемого пациента участки ДНК вируса гепатита В синтезируются – их концентрация увеличивается в несколько раз. Каждый макро- и микроорганизм обладает уникальной неповторимой последовательностью нуклеотидов.

Разработаны праймеры – так называемые эталоны, в сравнении с которыми устанавливается порядок нуклеотидов и идентифицируется микробный агент. Это значит, что практически исключена диагностическая ошибка.

Ложноположительный и ложноотрицательный результаты встречаются крайне редко. Компания-производитель на упаковке с диагностической тест-системой всегда указывает значение (концентрацию вируса), которое расценивается как положительный результат.

ПЦР-диагностика – быстрый метод диагностики. Результат известен через 2-3 часа от момента начала работы с биологической жидкостью пациента. Лаборатория выдает ответ на бланке, где указан не только сам результат (положительный или отрицательный, или же концентрация вирусных частиц), но и название тест-системы, а также ее чувствительность.

Качественное исследование ДНК вируса гепатита В предполагает только выявление этого микробного агента. Этот анализ назначается чаще, чем количественный, так как его диагностическая ценность несколько выше.

Это исследование позволяет отличить норму от патологии, то есть получить однозначный ответ на вопрос, есть ли в крови обследуемого пациента возбудитель вирусного гепатита В или его нет. Чаще всего качественный анализ на ДНК вируса гепатита В необходим для диагностики хронической формы гепатита, когда клинические признаки этого варианта поражения печени минимальны.

В диагностике острого вирусного гепатита В качественный анализ на ДНК необходим только в сложных диагностических случаях. Например, если в крови пациента уже не обнаруживается ни поверхностный антиген HBsAg, ни антитела anti-HBs. В такой ситуации вероятно затяжное течение болезни или трансформация острой формы в хроническую.

Возникает необходимость назначения специфической мощной противовирусной терапии, поэтому необходимо оценить уровень репликации возбудителя гепатита В. Если это так называемое «серонегативное окно», то есть краткий период, когда отсутствует и антиген, и антитела, то противовирусная терапия не нужна. Если репликация вируса установлена, то это означает необходимость контроля за состоянием пациента и назначением противовирусной терапии.

Анализ концентрации ДНК вируса гепатита В необходим преимущественно в диагностике хронической формы болезни. В клинической практике количественный анализ называется чаще вирусной нагрузкой, так как исследуется количество вирионов вируса гепатита В в 1 мкл крови пациента.

Обнаруженный уровень вирусной нагрузки до начала лечения является своеобразным эталоном. С изначальной цифрой сравнивается последующий результат, который назначается через месяц от начала специфической терапии и после завершения полного курса противовирусного лечения.

Нужно не просто найти вирус гепатита В в биологическом материале пациента, но и знать, как трактовать полученные результаты. Пациенту следует понимать, что анализировать сделанные самостоятельно выводы – далеко не всегда правильно. Оценивать весь комплекс анализов на основании клинического осмотра больного может только лечащий доктор.

Предварительно расшифровать полученный ответ можно с помощью таблицы:

Анализ Результат
Качественный отрицательный – пациент не инфицирован вирусом гепатита В, дальнейшая диагностика этого вирусного заболевания нецелесообразна
положительный – пациент инфицирован вирусом гепатита В, необходим качественный анализ для оценки уровня репликации микробного агента и принятия решения о необходимости старта противовирусной терапии
Количественный более 2000 ME/мл или 10 000 копий/мл – вирусная нагрузка высокая, репликация возбудителя интенсивная, необходима специфическая терапия при отсутствии противопоказаний к ней
менее 2000 ME/мл или 10 000 копий/мл – вирусная нагрузка низкая, решение о старте противовирусного лечения принимается после комплексной оценки других результатов обследования (биохимические и серологические тесты)

Бланки ПЦР-анализа на ДНК вируса гепатита В не являются диагнозом и основанием для назначения терапии противовирусными лекарственными средствами. Все выводы и необходимые дальнейшие рекомендации делает лечащий доктор.

источник