Вирусный гепатит типа В – это серьёзный воспалительный процесс в печёночной ткани, который при его игнорировании и отсутствии правильного лечения, может привести к серьезным последствиям – раку и циррозу. При отсутствии лечения перерастает в хроническую стадию, которая развивается у подавляющего числа пациентов (70–80%). Гепатит В считается одним из самых распространённых заболеваний печени на территории всех стран мира, которое передаётся половым путём, при использовании нестерильных шприцов, а также от матери к плоду.
Только при своевременном обнаружении заболевания и назначении необходимой терапии можно сохранить здоровую печень. Примечательно, что выявить заболевание можно даже в инкубационный период, что значительно повышает шансы на выздоровление. Диагностика вирусного гепатита B включает в себя ряд мероприятий.
При подозрении наличия в организме данного заболевания взрослым пациентам необходимо обратиться к участковому терапевту, а детей записать на приём к педиатру. Если же человек был в контакте с больным гепатитом (незащищённый половой акт) или находился в другой ситуации, которая могла спровоцировать заражение (тату, пирсинг, стоматологическое лечение, внутривенное введение наркотиков, переливание крови, а также другие манипуляции), и существует большая вероятность присутствия вируса в организме, нужно немедленно обратиться к инфекционисту.
Чаще всего пациент получает направление на приём к гепатологу. Это врач, специализирующийся на выявлении и последующей терапии заболеваний печени. Есть также детская гепатология, которая стала отдельным разделом данной области относительно недавно и находится сейчас в стадии усиленного развития. Маленьких пациентов направляют к докторам именно узкого профиля, потому что юный организм имеет ряд своих особенностей, которые необходимо учитывать при диагностике, а впоследствии и лечении.
Однако далеко не во всех больницах можно записаться на консультацию к гепатологу ввиду их отсутствия. В этом случае нужно обратиться к гастроэнтерологу, который сможет дать компетентную консультацию и оказать квалифицированную помощь. По возможности следует посещать специалистов в других населённых пунктах.
Гепатит группы B передаётся половым путём или через контакт с кровью инфицированного. Протекать болезнь может в острой, либо хронической форме. Носителями инфекции на данный момент являются приблизительно 300 миллионов людей по всей планете.
Первой ступенью диагностики заболевания становится поход к терапевту. Врач назначит необходимое первичное обследование. Врач должен знать информацию об операциях, проведенных в течение последних 6 месяцев, а также о ситуациях, которые могли спровоцировать заражение. Специалист оценит общее состояние, наличие тех или иных признаков заболевания. В случае, если при первичном обследовании в клинике подозрения на наличие в организме вирусного гепатита B показались врачу небезосновательными, пациенту предстоит пройти ряд обследований, которые осуществляются по инструкциям Европейской ассоциации по изучению печени. Они способны подтвердить или опровергнуть этот диагноз.
Ключевое место занимают лабораторные методы для выявления вируса гепатита B в человеческом организме. В их число входят анализы на различные маркеры, а также биопсия печени. С их помощью в первую очередь выявляется наличие данной инфекции у пациента.
Для оценки степени тяжести вируса и определения признаков развития осложнений применяются аппаратные методы диагностики: ультразвуковое исследование органов брюшной полости с допплерографией, гастроскопия (ФГДС), фибросканирование печени (эластография, фибротест).
Сравнительно недавно в практику вошли методы генодиагностики, которые обеспечивают обнаружение и возможность осуществления характеристики генов или не смысловых последовательностей ДНК и РНК. В их число входит анализ полимеразной цепной реакции. Он является прямым методом выявления возбудителя в исследуемом материале.
Пациентам старше сорока лет доктора назначают обследование органов сердечно-сосудистой и дыхательной систем.
Чтобы иметь целостную картину состояния больного нужно прибегать к комплексу различных способов диагностирования наличия в организме гепатита и степени его тяжести, а также появления первых признаков осложнения для оказания оперативной и квалифицированной помощи на ранних стадиях.
Быстрое реагирование и принятые меры помогут определить индивидуальный план лечения и сохранить здоровый орган на долгие годы. Иногда даже небольшое промедление может стоить пациенту жизни.
Каждый человек должен регулярно сдавать кровь на гепатит. Возбудителем заболевания является вирус Hepadnaviridae. Особенно рекомендуется проводить исследования лицам с желтушностью кожных покровов и белков глаз, изменённым цветом кала, отсутствием аппетита, а также слабостью и тошнотой. Пристальное внимание этому вопросу следует уделять беременным женщинам, донорам крови и людям, которым в ближайшем времени предстоит операция.
При отсутствии описанных симптомов тревожным сигналом можно считать повышенные показатели концентрации внутриклеточных ферментов (АсАт, АлАт) в крови пациента и холестаз (сокращение желчных выделений в двенадцатиперстную кишку).
Чтобы диагностировать вирусный гепатит B, необходимо сдать качественный или количественный анализ крови на маркеры поверхностного антигена HBsAg (он выявляется и при остром, и при хроническом течениях болезни уже после 3–5 недель, прошедших с момента инфицирования), внутреннего HBcAg (он определяется исключительно в клетках печени) и связанного с ним HBeAg. Проверяют также наличие антител anti-HBs, anti-HBc, anti-HBe. Они есть как у больных, так и у здоровых носителей. В отдельных случаях сохраняются в организме у излечившихся людей на протяжении всей оставшейся жизни.
Чаще всего отсутствие антигена HBsAg указывает на то, что у пациента нет вирусного гепатита B. Средняя продолжительность его циркуляции составляет 70–80 дней. Несмотря на то, что инкубационный период при гепатите длится 2–6 месяцев, анализ становится положительным уже спустя 1–9 недель с момента заражения.
Для исключения наличия суперинфекции назначают анализы на HCV и HDV. Кроме того, потребуются следующие исследования:
на онкомаркеры. Это позволяет узнать о присутствии в организме человека серьёзных раковых патологий, что может значительно усложнить процесс будущего лечения, а потому нужно определить факт их наличия на ранних стадиях;
на гормоны щитовидной железы. Исследование необходимо для составления плана противовирусного лечения, не наносящего дополнительного вреда здоровью пациента;
общие биохимические анализы крови и мочи. Это позволит определить противопоказания к терапии, уровень аланинаминотрансфераза, изменения в работе и состоянии поражённого органа;
фибротест, состоящий из двух расчётных алгоритмов. Он направлен на диагностику: степени тяжести фиброза печени (по стадиям F0, F1, F2, F3, F4), активности некровоспалительного процесса в печени (по степеням А0, А1, А2, А3) согласно международной общепринятой системе METAVIR, которая позволяет проводить точную и быструю интерпретацию результатов врачами по всему миру;
коагулограмма – исследование белкового состава крови. Указывает на функциональность печени и помогает предотвратить дальнейшее развитие осложнений;
определение ДНК вируса HBV посредством качественной полимеразной цепной реакции (ПЦР). Количественный анализ позволяет определить вирусную нагрузку, т.е. число копий ДНК в 1 миллиметре крови пациента. Этот способ помогает найти возбудитель, установить нахождение HBV в ткани и клетках, создать описательную характеристику мутантных форм вируса, выявить степень виремии, в том числе и на фоне противовирусного лечения;
тест на ВИЧ. В отдельных ситуациях врачи дают направление на прохождение этого анализа.
Все биоматериалы сдаются только натощак. В течение 24 часов перед посещением лаборатории нужно воздержаться от употребления алкогольной продукции и жирной пищи. Это является обязательными условиями проведения безошибочного исследования.
Чаще всего качественный анализ занимает не более четырёх часов, а количественный – максимум один день.
Таким образом, диагностика вирусного гепатита B – это целый комплекс мероприятий, который состоит не только из сдачи ряда анализов крови и мочи, но и прохождения обследований многих органов: брюшной полости, сердца, сосудов и дыхательной системы. Первым шагом при подозрении наличия этого заболевания должен стать визит к семейному врачу (терапевту), который сделает первичные заключения и определит план дальнейших действий. Более подробную консультацию даст инфекционист или гепатолог. Маленьких пациентов стоит вести к детским врачам, которые при определении присутствия болезни будут опираться на особенности юного организма. Важно помнить, что своевременное выявление гепатита и грамотно составленное лечение могут не только продлить годы жизни пациента, но и предотвратить заражение других людей.
Обезопасить себя от появления столь серьёзной проблемы можно путём соблюдения несложных правил:
Не вести беспорядочную половую жизнь.
Делать пирсинг, татуировки только в проверенных салонах.
Ограничить использование чужих средств личной гигиены (бритвы, зубные щётки, маникюрные ножницы и так далее).
Выбирать клиники по оказанию качественных стоматологических услуг.
Воздержаться от употребления наркотиков.
Регулярно выполнять профилактику заболевания.
Систематически сдавать анализы на антигены гепатита.
Следить за состоянием печени.
Гепатит – заболевание, требующее систематической профилактики и пристального внимания к собственному организму. Только в этом случае удастся снизить уровень опасного воздействия его вирусов на печень и сохранить крепкое здоровье на долгие годы.
источник
Своевременная диагностика гепатита С минимизирует риски развития тяжелых последствий болезни. Вирус, размножаясь в организме, приводит к уничтожению гепатоцитов и развитию стойкого аутоиммунного воспаления. Основные методы диагностики помогают выявить вирус на ранних стадиях инфицирования. Если заболевание обнаружено, необходимо более полное обследование. Для этого проводятся инструментальные виды проверки течения болезни.
Если болезнь протекает в безжелтушной смазанной форме, то практически невозможно понять, что у тебя гепатит С. В 80% случаев заболевание остается незамеченным, а возбудитель вируса постепенно разрушает печеночные клетки и весь организм.
Для верификации диагноза и осложнений заболевания у взрослых и у детей обязательно используют аппаратные и лабораторные методы диагностики. Аппаратные процедуры позволяют визуализировать страдающий орган, определить степень разрушения гепатоцитов, отсутствие или наличие тяжелых осложнений (опухоли, фиброза, жирового гепатоза и т. д). Лабораторные анализы – часть дифференциальной диагностики. По анализу крови можно выявить самого возбудителя или наличие антител к нему.
Как определить гепатит С в домашних условиях? Для этого существуют новейшие экспресс-тесты (подробнее о них можно почитать в данной статье). Они помогают с высокой точностью обнаружить заболевание после самостоятельно проведенного анализа дома. Для проверки необходима капля крови или слюны. Однако окончательный диагноз ставится только после проведения лабораторных исследований в медицинском учреждении.
В настоящее время лабораторная диагностика HCV позволяет не только с точностью определить наличие вируса в организме человека, но и установить, сколько приблизительно времени прошло с момента заражения, насколько активно происходит развитие заболевания.
Первичные диагностические исследования проходят в несколько этапов и позволяют получить ответы на ряд вопросов, необходимых для определения дальнейшей тактики терапии:
насколько эффективно иммунная система отреагировала на контакт с вирусом;
как давно HCV находится в организме человека;
какова фаза инфекции (острая или хроническая в стадии обострения);
насколько тяжело протекает заболевание (чем выше вирусная нагрузка, тем активнее патологический процесс);
генотип и подтип вируса (имеет решающее значение для назначения конкретных препаратов).
Но перечисленные исследования целесообразно проводить только после окончательного подтверждения диагноза. Для этого сдают несколько лабораторных анализов.
После попадания в организм начинается активная репликация вируса. Однако до достижения определенного уровня, HCV в крови не обнаруживается. Самые современные высокочувствительные тест-системы ПЦР способны выявить болезнь спустя 3–4 недели. Но при подозрении на возможность заражения и отрицательном результате исследования рекомендуют провести повторный тест.
Анализ на гепатит Ц путем проведения иммуноферментного исследования (ИФА) информативен на сроке 10–16 недель после заражения. За это время антитела к вирусу вырабатываются в достаточном для определения количестве.
Но при этом необходимо учитывать возможность как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов ИФА. Такая вероятность существует при:
беременности (вне зависимости от срока);
иммунодефицитных состояниях;
аутоиммунных заболеваниях;
онкологии, затрагивающей систему кроветворения.
Кроме того нельзя исключать и человеческий фактор, то есть лабораторную ошибку, допущенную при выполнении анализа. Поэтому при положительном результате доктора рекомендуют сделать исследование повторно. Аналогичной тактики придерживаются и в том случае, если специфические симптомы прогрессируют на фоне отрицательных ИФА и/или ПЦР.
Диагностическое обследование пациента с возможной HCV-инфекцией регламентировано международными медицинскими протоколами.
В соответствии с рекомендациями ВОЗ, анализы проводят в таком порядке:
печеночные пробы (на начальной стадии заболевания или латентном течении гепатита С показатели могут укладываться в физиологические границы нормы);
ИФА (на первом этапе рекомендуют сделать суммарный ИФА, определяющий совокупность иммуноглобулинов типа G и M, при положительном результате выполняют отдельно анализы на IgG и IgM к HCV);
полимеразная цепная реакция (ПЦР), делится на качественный (определяет только наличие патогенной РНК в крови), количественный (оценивает уровень РНК) и генотипирование (выявляет точную разновидность HCV – генотип и подтип).
В дополнение врач назначает и стандартный перечень анализов. Он включает исследование на ВИЧ и другие виды вирусного и инфекционного гепатита, ОАК и ОАМ, оценку липидного и белкового профиля крови, иммунограмму и др. При подозрении на наличие фиброза, цирроза или гепатоцеллюлярной карциномы показана биопсия печени.
Исследования, проводимые методом ПЦР, считаются наиболее достоверными способами диагностики гепатита C. Проведение полимеразной цепной реакции позволяет выявить специфические вирусные РНК в крови человека, оценить их количество и структуру нуклеотидной цепи.
ПЦР диагностика может проводиться несколькими методами (каждый отличается по технологии проведения и стоимости для пациента):
Разновидность ПЦР
Описание анализа
Качественный
Направлен только на выявление РНК вируса гепатита C
Количественный
Проводится для оценки вирусной нагрузки (расшифровку проводит только врач)
Генотипирование
Необходимо для определения разновидности инфекции
ПЦР рекомендуют проводить после исследования анти HCV методом ИФА, который позволяет определить специфические антитела к гепатиту С. Наличие IgM свидетельствует об остром течении инфекции, IgG – о хроническом или латентном. По титру антител можно предположить активность патологического процесса, однако точную вирусную нагрузку определяют только методом ПЦР.
Качественный анализ является своего рода проверкой, есть ли РНК HCV в крови человека. В отличие от результатов ИФА, которые зависят от определенных факторов (например, наличия беременности или состояния иммунной системы) данные ПЦР однозначны. Но при помощи этого исследования можно выявить, есть ли РНК гепатита С или нет.
Для полной клинической картины необходимы другие тесты. Поэтому в бланке лаборатории указано только наименование анализа и полученный результат. Средняя стоимость качественного ПЦР в частных клинических кабинетах составляет порядка 1000 рублей.
Проводится для определения уровня вирусной нагрузки, то есть количество копий вируса гепатита С в определенном объеме плазмы крови. Единицы измерения МЕ/мл. Высокие показатели указывают на острое течение заболевания и часто свидетельствуют о риске серьезных поражений печени.
Данные для расшифровки результатов анализа приведены в таблице, но интерпретировать исследования и ставить окончательный диагноз должен только инфекционист-гепатолог.
Полученный результат
Расшифровка
Отрицательный
Человек не заражен HCV или количество РНК в крови слишком низко для определения при помощи лабораторных тест-систем (возможно в течение 1–4 недель после инфицирования)
1,5 МЕ/мл
Низкая вирусная нагрузка, прогноз благоприятен
4ˑ106 –2ˑ108МЕ/мл
Средняя вирусная нагрузка, служит показанием к немедленному началу терапии
Выше 2ˑ108МЕ/мл
Высокая вирусная нагрузка, прогноз неблагоприятен. Необходима противовирусная терапия после всесторонней оценки состояния печени
В лабораториях могут отличаться марки тест-систем и, соответственно, используемые единицы измерения и нормы. Поэтому при расшифровке рекомендуют ориентироваться на референсные значения.
Стоимость исследования в платной лаборатории достигает 2500 рублей.
Генотипирование один из основных анализов на этапе подготовки пациента к началу курса противовирусной терапии. Исследование основано на отличиях в структуре известных 6 разновидностей (и около 100 подтипов) HCV. В бланке с результатами указывают выявленный генотип и субтип, например, 1b или 3a и т.д. Полученные данные позволяют врачу определить перечень назначаемых препаратов и продолжительность лечения, объяснить пациенту возможные исходы терапии.
Цена проведения генотипирования в частной клинике колеблется в пределах 1000 рублей.
Экспресс-тест на вирусный гепатит С рассчитан на выявление антител, которые вырабатывает иммунная система после попадания вируса в организм.
Тест-полоски бывают:
Для диагностики по крови. В коробке содержится набор всех необходимых инструментов, сразу после вскрытия система готова к работе. Прилагается инструкция, описывающая пошаговый алгоритм действия, начиная с забора крови, заканчивая оценкой полученного результата.
Диагностика по слюне. Специальным одноразовым аппаратом собирают небольшое количество слюны или десневой жидкости. Результат оценивают через 20 минут.
Cito-тесты можно купить в аптеке без рецепта. Их достоверность выше 96%. Все зависит от правильности забора биоматериала, соблюдения правил проведения тестирования, фирмы-изготовителя, способа хранения и т. д. Цены на изделия разнятся от 300 до 1600 рублей.
Для выработки антител в организме требуется как минимум 2–3 недели. В некоторых случаях это процесс удлиняется до полугода.
Общий анализ крови сдают в любое время, по истечении часа от приема пищи. Анализ крови на биохимические показатели строго натощак утром, с 9 до 11 часов. Причина в биологическом ритме организма. Ночной голод должен быть не менее 10 часов.
При использовании тест-полосок дома, важно чтобы гематокрит (текучесть крови) был в пределах нормы. Густая кровь искажает полученные результаты.
Вирусологический анализ на гепатит (определение антигенов и антител) делают из венозной крови, она обладает большей диагностической ценностью. Между забором биоматериала и последним приемом пищи должно пройти 4–6 часов. Накануне лучше отказаться от слишком жирной пищи, алкоголя, переедания.
Если недавно проходили Rg-графию, ректальный осмотр прямой кишки, физиопроцедуры, присутствовал прием сильнодействующих препаратов и антибиотиков, то необходимо сказать об этом своему доктору или лаборанту.
Покажет ли общий анализ крови гепатит С? Нет, в нем отсутствуют показатели для дифференциальной диагностики вируса. Но опытного врача-гепатолога должен насторожить лейкоцитоз и резкое увеличение показателей СОЭ (скорость оседания эритроцитов). Развернутый анализ на биохимию, выявит характерные для болезни изменения в работе печение, появление грозных осложнений хронического и острого гепатита С.
Приведем типичные лабораторные тесты и их диагностическую ценность:
Исследуемый показатель
Диагностическая ценность
Аспартатаминотрансфераза (АсАт)
Если фермента больше нормы, то говорят о гибели гепатоцитов или миоцитов. Исключение – беременные женщины, где допускается незначительное превышение нормы
Аланинаминотрансфераза (АлАт)
При гепатитах норма фермента превышена в несколько раз
Щелочная фосфатаза (ЩФ)
>нормы при костных патологиях, туб- или онкопроцессах в печени, циррозе, любых гепатитах вирусного генеза
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ)
> нормы при разрушении печеночной ткани
Глутаматдегидрогеназа (ГДГ)
Отклонения от нормы наблюдают при тяжелых расстройствах работы печени, желчевыводящих путей, острых токсических воздействий
Сорбитолдегидрогеназа (СДГ)
В норме практически отсутствует. Появление фермента укажет на вирусный или невирусный гепатит, цирроз
Гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ)
>нормы при гепатитах на фоне систематических алкогольных интоксикациях
Фруктозо-монофосфат-альдолаза (ФМФА)
В норме содержится только в следовых количествах. Активное присутствие фермента наблюдают при острых формах гепатитов, особенно сопряженных с профессиональной вредностью
Общий белок
>нормы при неправильной работе печеночной ткани
Альбумин
нормы при серьезных погрешностях питания, циррозе, но особенно на фоне алкоголизма
Триглицериды
>нормы при циррозах и вирусных гепатитах
Аппаратные исследования имеют высокую диагностическую ценность, особенно для выявления хронического гепатита С. Это важно для скорейшего начала терапии и в борьбе с недопущением печеночной недостаточности.
Исследование предусматривает забор биоптата для дальнейшего гистологического анализа полученной печеночной ткани. Биопсия печени – один из самых точных анализов дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита С, позволяющих проверить наличие вируса в тканях, возможные злокачественные процессы, степень фиброза и т. д.
Чаще всего прибегают к трем видам биопсии:
Чрескожная. Прокалывают переднюю брюшную полость, далее под контролем УЗИ или вслепую достигают печени, где и производят забор биоптата. Манипуляция не требует общего обезболивания, малотравматичная с минимальным периодом нахождения в стационаре.
Лапароскопическая. Выполняют под общим наркозом, посредством лапароскопа – аппарата с видеотехникой. Операция инвазивная, но доктор будет видеть состояние органа на экране, а биоптат возьмут из самых пораженных участков печеночной ткани.
Трансъюгулярная. Подходит для пациентов с повышенным риском кровотечения. Прокол делают в области крупных кровеносных сосудов, исследование проводят под ЭКГ-контролем.
Противопоказания:
тяжелые нарушения в системе свертывания крови;
наличие единичных или множественных эхинококковых кист;
сосудистые опухоли печеночной ткани;
присутствие гноя или гнойное расплавление желчевыводящих путей;
эмпиема плевры справа, поддиафрагмальный абсцесс;
синдром хилаидити;
запущенная форма эмфиземы легких;
желтуха, как результат формирования участка обструкции в области дренирования желчного протока;
нежелание пациента давать письменное разрешение на проведение процедуры.
Большинство осложнений возникают в первые 24 часа после биопсии. Поэтому пациента оставляют в клинике до следующего утра. Ведется мониторинг артериального давления и частоты сердечных сокращений.
Это поможет своевременно диагностировать кровотечение из пункционного канала. Рекомендуют постельный режим 6–8 часов. О подготовке к биопсии подробно расскажет доктор, все его рекомендации следует строго выполнять.
УЗИ – распространенная доступная по цене аппаратная диагностическая процедура для исследования органов брюшной полости. Ультразвук, дополненный портальной системой Doppler, и с контрастным усилением являются основными методами оценки состояния паренхимы печени, портальной венозной гипертензии и других изменений, характерных для течения гепатита С.
Подготовка к УЗИ несложная, но требующая тщательного выполнения всех рекомендаций. На исследование приходят строго натощак, с периодом голода не меньше 10 часов. За несколько дней отказываются от всех продуктов, вызывающих метеоризм.
Если кишечник остается вздутым, показано ветрогонное средство. Накануне разрешено сделать высокую очистительную клизму.
Фибросканирование – неинвазивная диагностическая процедура для обнаружения участков ремоделирования соединительной ткани печени. Измерение проводится с помощью специального датчика, размещенного на уровне печени между двумя ребрами. Во время измерения пациент ощущает только легкие, безвредные, безболезненные вибрации на коже.
Под аппаратом больной находится всего несколько минут, манипуляцию повторяют при первой необходимости. Приблизительно за 2–3 часа до осмотра пациенту запрещают принимать пищу. Эластометрия противопоказана при тяжелых формах ожирения, асцита и дыхательной недостаточности.
Если УЗИ дало неопределенный результат, то назначают КТ (компьютерную томографию) или МРТ (магнитно-резонансная томография) печени.
Эти исследования имеют общие предосторожности и противопоказания:
обязательно скажите своему врачу о случаях аллергии, длительно применяемых медикаментах, фобиях закрытого пространства;
психические расстройства, неадекватное поведение пациента;
некоторые заболевания, такие как миелома и почечная недостаточность, требуют коррекции плана Rg-облучения;
ношение брекет-систем.
КТ не назначают при беременности, если в кишечнике имеется бариевая смесь или последний прием пищи был раньше, чем за 4 часа до процедуры. МРТ не делают, если на место исследования наложен гипс, имеется металлический протез или водитель сердечного ритма.
Компьютерную томографию делают, используя Rg-лучи, МРТ – магнитные волны. Полученные послойные снимки помогают визуализировать структурные изменение (фиброз, цирроз, жировой гепатоз) и размер органа. Если используют контрастное вещество, то на снимках становятся видны очаговые изменения, диаметром >1 см.
Ранняя диагностика болезни особенно полезна при беременности. Гепатит С способен серьезно осложнять течение беременности, увеличивает риск развития внутриутробных патологий, может привести к нарушениям функций печени. Золотым стандартом является обследование за полгода до планирования малыша. Если присутствие инфекции будет обнаружено, то нужно пройти курс терапии до беременности.
Если беременная не была обследована до зачатия, то от специфических анализов нельзя отказываться ни в коем случае. Первый раз исследование на гепатит С проводят в женской консультации при постановке на учет, второй раз – во втором триместре, третий – в третьем. При наличии жалоб, позволяющих заподозрить заболевание, назначают внеплановое лабораторное тестирование.
Как показывает практика, у врачей в арсенале есть все необходимые диагностические возможности для своевременного обнаружения инфекции. Потому, как только человек заподозрит или поймет, что он инфицирован, следует незамедлительно отправляться на прием к инфекционисту, терапевту или гепатологу.
Только своевременное начало правильно подобранной схемы терапии приведет к полному излечению или длительной ремиссии.
источник
Диагностика острых и хронических гепатитов обязательно должна носить комплексный характер.
Прежде всего она направлена на определение возбудителя данного заболевания. Также врач обязательно должен оценить степень нарушения работы печени и выявить сопутствующие осложнения. Начальной стадией диагностики является изучения анамнеза и осмотр пациента. После этого специалист назначает другие методы диагностики вирусных гепатитов – лабораторные и инструментальные.
В процессе ПЦР-диагностики заболевания определяют маркеры острых и хронических гепатитов. К ним относят следующее:
Маркеры гепатита А. Анти-НАV IgM появляются в крови к окончанию инкубационного периода. В этот момент у человека возникают первые симптомы гепатита. Антитела присутствуют в сыворотке около полугода. Благодаря выявлению данных веществ методом ПЦР можно говорить о текущей или недавно возникшей инфекции. Анти-НАV-total возникают в сыворотке позже. Они говорят о присутствии HAV-инфекции и последующем формировании иммунитета. Данный показатель, полученный в процессе исследований методом ПЦР, может использоваться для определения эффективности профилактики с помощью вакцин.
Маркеры гепатита В. В эту категорию входит НВsAg, который является поверхностным антигеном гепатита В и появляется в завершающей стадии инкубационного периода. Его не удается выявить в 10 % острых случаев заболевания и большинстве хронических. Антитела анти-НВs возникают спустя 3-12 месяцев после начала развития патологии. Они присутствуют в организме примерно 5 лет. Ангиген НbcorA не удается определить в сыворотке крови. Его удается выявить лишь в гепатоцитах. Анти-Нвcor IgM представляет собой антитела к ядерному антигену, которые характерны для завершения инкубационного периода и начала развития болезни. Определение данных веществ является значимым критерием при проведении ПЦР-диагностики. Анти-Нвcor IgG характерны для парентеральных гепатитов во время развернутой клинической картины. Они сохраняются на всю жизнь и свидетельствуют о том, что человек перенес инфекцию. В завершение инкубационного периода можно обнаружить НвeAg. Он сохраняется в течение 10-12 недель и говорит о репликации парентеральных вирусов. Анти-Нве представляют собой антитела к HbeAg и возникают во время развернутых проявлений. Данные вещества сохраняются на 5 лет после заболевания. При хронических парентеральных гепатитах их выявляют и по истечении указанного времени.
Помимо ПЦР-диагностики, очень важно оценить количество ферментов печени. Поражение тканей органа сопровождается попаданием в кровь ферментов, что влечет их увеличение в составе плазмы. В нормальном состоянии количество АСАТ составляет 5-35 Ед./л, а АЛАТ – 5-40 Ед./л. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов должна включать определение плазматической активности щелочной фосфатазы. В случае развития гепатита она увеличивается. В норме данный показатель составляет 30-115 Ед./л. Немаловажное значение имеет оценка фракций билирубина – свободного и связанного. Его повышение обусловлено неспособностью клеток печени выводить из организма данный пигмент. В норме концентрация связанного билирубина составляет 0,1-0,3 мг/дл, а свободного – 0,2-0,7 мг/дл.
Наши постоянная читательница
Наша постоянная читательница справилась с ГЕПАТИТОМ С действенными медикаментами — Софосбувир и Даклатасвир. По отзывам пациентов — результат 97% — полное избавление от вируса. Мы решили посоветовать ДЕЙСТВЕННУЮ терапию Вам. Результат почти 100%. ДЕЙСТВЕННЫЙ МЕТОД.
Чтобы обследовать органы брюшной полости, обычно применяют ультразвуковое исследование. Это достаточно простой метод, который помогает визуализировать увеличение печени и других органов, а также оценить происходящие в них изменения. Также с помощью УЗИ оценивается состояние сосудов. Если же врач планирует сделать пункционную биопсию, данный метод поможет выбрать оптимальное место для прокола. С помощью данного аппарата удается увидеть на мониторе определенные сечения внутренних органов. В результате можно визуализировать локальные изменения в них – камни, опухолевые образования и т.д. Неправильные результаты можно получить исключительно в том случае, если работа органа нарушается на клеточном уровне. Вследствие этого весь орган поражен. К примеру, при изменении клеток печени удастся обнаружить нарушение оттенка тканей. Однако информацию относительно характера и тяжести болезни получить не удастся. В такой ситуации проводится пункционная биопсия. Это наиболее точная методика, которая позволяет получить максимальное количество информации. С помощью данного способа оценивается структура тканей печени, что позволяет наиболее точно диагностировать гепатит.
Гепатит у беременных – очень опасная патология, поскольку она практически всегда провоцирует нарушения в развитии плода. При поражении вирусом типа В практически всегда заражается и ребенок. Наличие гепатита С у беременных провоцирует несколько иную картину. Тем не менее, нельзя сказать, развитие данного заболевания у беременных спровоцирует инфицирование малыша. Чтобы провести правильную диагностику, прежде всего нужно сдать анализ крови и провести ПЦР-диагностику. При гепатите В у беременных имеет значение наличие HBsAg и НВеАg. Если они присутствуют, риск заражения ребенка повышается. В такой ситуации также уменьшается эффективность вакцины для беременных. Если же будущая мама заболевает гепатитом С, инфицирование ребенка происходишь лишь в 5 % случаев. При этом данный вид заболевания передается от беременных к плоду лишь при условии активного протекания недуга. В большинстве случае ребенок заражается от матери при родах. При выявлении вирусного гепатита у беременных обязательно требуется стационарная терапия. Если у женщин развивается цирроз печени, нужно принимать все меры, чтобы беременность и вовсе не наступила. Дополнительные нагрузки на организм, которые возникают у беременных, спровоцируют сильное обострение болезни. При хронизации процесса беременность не оказывает влияния на клиническую картину патологии. Иногда у беременных женщин воспаления в печени и вовсе прекращаются. Однако нужно быть готовой к тому, что после родов гепатит резко обострится. Потому так важно держать данный процесс под контролем.
Дифференциальная диагностика проводится для того, чтобы отличить вирусный гепатит от острых поражений печени, связанных с воздействием химических веществ. Особенно важно провести диф диагностику алкогольной формы заболевания. На начальном этапе развития этого недуга часто ставят ошибочный диагноз, принимая его за вирусный гепатит. Это происходит в 50 % случаев. Чтобы провести диф диагностику этих процессов, нужно учитывать, что алкогольный гепатит развивается исключительно на фоне постоянного употребления большого количества спиртного. Важными критериями диф диагностики в данном случае является следующее:
источник
Воспалительное заболевание паренхимы печени зачастую имеет вирусную природу возникновения. С учетом разновидностей возбудителей были выделены гепатиты А, В, С, Д и Е, которые различаются тяжестью клинической картины и воздействием на печень. Если их не дифференцировать, неправильно подобранное лечение может привести к смерти пациента.
Науке известно 11 генотипов этой патологии, но более 70% случаев заболеваемости приходятся на гепатит А, доля детей дошкольного и младшекольного возраста составляет 80%. С ним бороться легче, чем с остальными разновидностями, но и их опасность существенно выше. Сравнительная таблица самых распространенных вирусных гепатитов:
Тяжесть течения
начало болезни острое, течение преимущественно легкое, клиническая картина как у гриппа
легкие (безжелтушные), средние и тяжелые формы течения
преобладают безжелтушные и легкие формы (40–75% пациентов не имеют симптомов болезни), склонные к хронизации процесса
тяжелое течение, зачастую с неблагоприятным исходом
острая форма начинается медленно, но по симптоматике похожа на гепатит А;
болезнь тяжело протекает у беременных
Вероятность развития осложнений
низкая, фундаментальных повреждений печени не происходит
при хронизации болезни происходит нарушение обменных процессов печени;
при коинфекции с гепатитом Д наблюдаются тяжелые осложнения
высокая, у 25% пациентов формируются опасные для жизни патологии: цирроз, рак печени
при коинфекции (смешанное заражение) высокая вероятность цирроза, печеночной комы или летального исхода
высокая для почек и печени
Фульминантное течение (злокачественная форма гепатита, связанная с массивным некрозом печени)
почти не встречается, но существует риск для пожилых пациентов
наблюдается у больных с хронической формой, при коинфекции вирусами В и Д (зарегистрирована у 52% больных), при чистом вирусе В риск злокачественного течения – 1%
наблюдается при коинфекции вирусами В и Д (зарегистрирована у 42% больных)
почти не встречается, но возможно возникновение у беременных в отдельных регионах (эндемичные области по вирусному гепатиту Е) – регистрируется с частотой 20–40%
от инфицированного к здоровому вирус переходит при несоблюдении гигиены, контакты с предметами, которые потом попадают в рот
высокая, от инфицированного человека к здоровому вирусные агенты передаются через кровь (включая заражение ребенка от матери при родах) и половым путем со спермой;
при целостности кожных и слизистых покровов (через посуду, грудное молоко, поцелуи, рукопожатия) болезнь не передается;
гепатитом С часто заражаются при переливании крови
вирусная инфекция передается преимущественно через воду
Прогноз излечения
зачастую наблюдается полное выздоровление;
летальный исход – единичные случаи
острая форма – выздоровление в 80% случаев;
субклинический гепатит оканчивается хронической формой, выздоровление происходит редко
из-за стертой симптоматики патология с вероятностью 80–90% становится хронической
высокая вероятность летального исхода (до 20%) при коинфекции, формирование хронического носительства вируса
при своевременном лечении прогноз благоприятный, выздоровление наступает через 2 месяца но не исключены осложнения
Лабораторные и инструментальные исследования назначаются для своевременного выявления болезни и определения типа возбудителя, особенно при скрытых формах гепатита. Чем раньше будет проведена диагностика, тем выше шансы подобрать необходимую терапию и предотвратить возникновение тяжелых осложнений и переход заболевания в хроническую стадию.
Для выявления патологии пациенту необходимо посетить инфекциониста и гастроэнтеролога, по необходимости он будет перенаправлен к гепатологу. Обратиться к врачу требуется после полового акта с потенциальным носителем болезни, при планировании беременности, появлении первых симптомов недомогания: слабость, повышение температуры, потеря аппетита, боли справа под ребрами. Диагностика антигенов нужна при подготовке к вакцинации. Если при общем осмотре врач обнаружит увеличение печени или иные клинические признаки гепатита, будут назначены:
анализы кала, мочи;
серологическая диагностика (исследование состава крови);
инструментальные обследования.
Выбор конкретного метода диагностики осуществляет врач, который проведет оценку изменения состояния печени, выявит степень ее поражения, конкретные нарушения функционирования. После сопоставления этой информации с данными анамнеза и жалобами пациента подбирается оптимальный набор методов. Лабораторная диагностика гепатитов для получения максимально достоверных результатов проводится дважды и имеет более высокую информативность, чем инструментальная.
Для вирусных гепатитов типов А, В, Д и Е общие проявления схожи, поэтому дифференцировать их между собой в процессе первичной диагностики сложно. У гепатита С на начальном этапе (который длится месяцами или годами) внешние признаки могут полностью отсутствовать. При осмотре врач обращает внимание на:
цвет кожи, склер, слизистой ротовой полости – становится желтушным;
зуд кожных покровов (на фоне повышенного билирубина);
сыпь (возможна при гепатите В);
размеры печени – она увеличивается (гепатомегалия) или сокращается при злокачественной форме;
массу тела – сильно снижается;
сосудистые звездочки;
потемнение мочи вместе с обесцвечиванием каловых масс.
Сами внешние признаки болезни на конкретный тип вирусного гепатита указывают редко. К результатам клинической диагностики врач должен добавить жалобы пациента – тошнота, боли в правом подреберье, диарея, рвота, повышение температуры, слабость, недомогание. Дополнительно учитываются данные анамнеза, которые помогают найти возможный путь заражения, соотнести его с конкретным вирусом.
Один из самых специфичных тестов для диагностики гепатита используется для точного выявления возбудителя и оценки активности вирусного процесса. Поиск антигенов (частиц патогенного микроорганизма) осуществляется для раннего обнаружения болезни, особенно бессимптомных форм, во время проведения иммуноферментного анализа крови. Дополнительно проводят проверку на антитела или иммуноглобулины, которые иммунитет вырабатывает в ответ на вирусную инфекцию. У каждого вида вирусного гепатита свои маркеры:
А – Anti-HAV IgM наблюдается ближе к концу инкубационного периода, одновременно с появлением первых признаков болезни, и сохраняется до полугода. Наличие HAV-инфекции и формирование иммунитета к ней определяется по Anti-HAV-total.
В – на последней стадии инкубационного периода появляется антиген HBsAg, при хронической форме не выявляется. Антитела к нему вырабатываются через 3–12 месяцев. На начальной стадии развития болезни наблюдаются антитела Anti-HBcor IgM, а при развернутой клинической картине – Anti-HBcor IgG, которые не исчезают впоследствии и свидетельствуют о перенесенной вирусной инфекции. Определение Anti-HBsAg необходимо для оценки иммунного ответа, течения болезни и предположения ее исхода. Маркер Anti-HBs на фоне отсутствия HBsAg говорит о выздоровлении, а если его нет и течение болезни тяжелое, врачи допускают вероятность гибели пациента. О заразности больного говорит маркер HBeAg.
С – маркеры Anti-HCV возникают спустя 4–6 месяцев, свидетельствуют об острой/хронической форме. Если они не обнаружены, это говорит об отсутствии вируса С, инкубационном периоде. Маркер острой фазы – иммуноглобулин IgM, а перенесенной инфекции – IgG.
Д – при коинфекции Anti-HEV выше, чем при суперинфекции (заражение HBsAg-позитивных пациентов), что помогает провести дифференциальную диагностику болезни. В острой стадии обнаруживается большое количество IgM.
Е – антигены обнаруживаются в инкубационном периоде, антитела Anti-HEV выявляются в продромальном (начальном) и сохраняются на всю жизнь (IgG) или на полгода (IgM).
Значимость имеют уровень лейкоцитов (снижается), скорость оседания эритроцитов (растет), альбумин (падает), особенно при выявлении гепатита А. После общего и биохимического анализов определение состава крови проводят через:
Иммунологический анализ, ИФА – необходим для обнаружения антигенов и антител, их качественных и количественных показателей. При хроническом гепатите наблюдаются только IgG и/или IgA, при остром добавляется IgM. Все 3 иммуноглобулина присутствуют при обострении хронической формы, а IgG одиночно говорит о поствакциональном или постинфекционном иммунитете.
Полимеразную цепную реакцию, ПЦР – обязательный и самый информативный метод диагностики, при котором выявляются частицы ДНК или РНК вирусных агентов, даже если их концентрация минимальна. С помощью ПЦР можно установить момент заражения (если диагностирован вирусный гепатит А), стадию болезни, эффективность проводимого лечения, вирусную активность.
Метод ПЦР может назначаться для проверки данных ИФА, поскольку его достоверность абсолютна, а у ИФА возможны ложноположительные или ложноотрицательные результаты при наличии хронических воспалительных заболеваний. Исключение составляет гепатит А, для которого преимущественно используют только иммуноферментный (иммунологический) анализ.
При повреждении тканей больного органа в результате вирусной активности в кровь выбрасывается большое количество ферментов из гепатоцитов (печеночные клетки). На фоне этого у пациента снижается уровень альбумина и общего белка, повышаются показатели:
АЛТ (АлАТ), АСТ (АсАТ) – выше нормы в 20–50 раз, имеют коэффициент АЛТ/АСТ ниже 0,5 единиц;
щелочной фосфатазы – говорит о застое желчи;
тимоловой пробы (повышение нормы наблюдается уже на ранней стадии вирусного гепатита);
ГГТ – повышается при всех печеночных заболеваниях, одиночно на гепатит не указывает.
Посредством биохимического анализа крови врач выявляет повышение фракций свободного и связанного билирубина: пигмента, который перестает выводиться поврежденными клетками печени с желчью, поэтому попадает в мочу. На фоне этого у пациента наблюдается и желтушность кожи. В норме уровень связанного билирубина составляет 0,1-0,3 мг/дл, а свободного – 0,2-0,7 мл/дг. У пациентов с вирусной злокачественной формой билирубин возрастает резко за 3–5 суток, соотношение свободного к связанному превышает 1 единицу.
В дополнение к серологическим обследованиям пациентам с гепатитом назначается ультразвуковая диагностика – она нужна для оценки происходящих в печени и соседних органах изменения (появление опухолей, камней), определения степени ее увеличения, состояния сосудов. Реже назначают магнитно-резонансную или компьютерную томографию. Дополнительно с помощью УЗИ выявляется оптимальная точка прокола для пункционной биопсии, которая помогает изучить структуру тканей печени при гепатите вирусного происхождения, является высокоинформативным методом диагностики.
источник
А. Для обнаружения вируса — заражение животных (обезьяны шимпанзе, мармозеты; электронная и иммуноэлектронная микроскопия.
Б. Для обнаружения антител к вирусу (или к его антигенам) иммунологические реакции: РСК, гемагглютинация иммунного прилипания, иммунофлуоресценция, иммуноферментный и радиоиммунный методы, реакция пассивной гемагглютинации и др.способы.
Наиболее специфичным методом диагностики гепатита А является использование иммуноферментного метода «захвата» антител класса IgМ. Суть метода. На стенках полистироловых луночек вначале адсорбируют антитела против IgM(анти-IgM, затем добавляют исследуемую сыворотку, в которой определяют наличие антител класса IgМ к вирусу гепатита А. Если они имеются, то образуется комплекс IgM- анти IgM. Далее добавляют специфический антиген (вирус гепатита А)-который связывается с противовирусными антителами. Для обнаружения образовавшегося комплекса добавляют противовирусные антитела; меченные ферментом (пероксидазой). После отмывания луночек в них добавляют субстрат для фермента (ортофенилендиамин) и определяют интенсивность образующейся окраски. Схема.
Методика постановки реакции обратной пассивной гемагглютинации для определения поверхностного антигена вируса гепатита В
Определение поверхностного антигена вируса гепатита В (HBSAg) в сыворотке больного или носителя осуществляется с помощью анти-тельного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой лиофилизированные формалинизированные куриные эритроциты с адсорбированными: на них антителами к НВsАg.
К содержимому ампулы с сенсибилизированными эритроцитами добавляют 5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида (ФР). Исследуемую сыворотку разводят 1:8. Для этого в лунку планшета вносят при помощи пипеточного дозатора 200 мкл ФР, добавляют 25 мкл исследуемой сыворотки крови, перемешивают и 25 мкл приготовленного разведения переносят в пустую луночку планшета. В качестве контрольных образцов используют сыворотку заведомо положительную в разведении 1:8 и ФР. В лунки, содержащие по 25 мкл исследуемых проб, добавляют 25-33 мкл 1%-ной взвеси сенсибилизированных эритроцитов. Реагенты перемешивают постукиванием о край планшета в течение 30 ,сек и выдерживают 20-30 мин при комнатной температуре. Результаты РОПГА считают отрицательными при отсутствии гемагглютинации с исследуемой сывороткой и ФР, но при наличии ее в заведомо положительной пробе. Все сыворотки, агглютинирующие сенсибилизированные эритроциты, исследуют в подтверждающем тесте. Суть его состоит в том, что в лунках планшета готовят два ряда двукратных разведений исследуемой сыворотки крови от 1:2 до 1:256 в объемах по 25 мкл. В контрольный ряд добавляют несенсибилизированные эритроциты. Планшеты с разведениями выдерживают не менее 30 минут при комнатной температуре, а затем добавляют в оба ряда по 25-33 мкл сенсибилизированных эритроцитов. Результаты реакции считают положительными, если в опытном ряду наблюдается по крайней мере 4-х кратное снижение титра исследуемой сыворотки.
Известны следующие формы вирусных гепатитов:
1.Гепатит А (инфекционный гепатит).
2.Гепатит В (сывороточный гепатит).
3.Гепатит-дельта — эпидемиологически сходен с гепатитом В, но вызывается дельта-вирусом.
4.Гепатит С (гепатит ни А ни В) — заражение происходит главным образом парентеральным путем, но возбудитель отличается от вирусов А и В.
5.Гепатит Е (гепатит ни А ни В) — заражение происходит, как при гепатите А, главным образом фекально-оралъным путем, но возбудитель отличается от вирусов А и В.
Вирус гепатита А — изометрический РНК-содержащий вирус. Геном представлен однонитчатой позитивной РНК с м.м. 2,6 млн. Диаметр вириона 27 нм, суперкапсида нет, тип симметрии кубический, икосаэдр. Капсид имеет 32 капсомера Оболочка образована 4 полипептидами.
Возбудитель гепатита В — ДНК-содержащий сферический вирус. Диаметр вириона 42 ны. Геном представлен двунитчатой кольцевидной ДНК с м.м. 1,6 млн; одна нить имеет брешь. Вирион содержит обратную транскриптазу, принимающую участие в репликации. С ее участием происходит синтез на прегеномной РНК вначале минус, а затем плюс-цепей ДНК, в составе генома только четыре гена: S,С,Р и X. Оболочка вириона состоит из трех белков (главного, большого и среднего). Схему строения вириона см. на стр.124.
В составе вириона имеется три основных антигена: НВSАg-поверхностный антиген; 2)НВсАg — сердцевинный и 3) антиген НВeАg.
Возбудитель дельта-гепатита имеет сферическую форму с диаметром З5-37 нм.
Геном представлен РНК с м.м. 500000. Внешняя оболочка вириона состоит из поверхностного антигена вируса гепатита В (НВSАg), а при ее разрушении выделяется компонент со специфической антигенностью (дельта-антиген).
Б. Культивирование вирусов гепатитов удается с большим трудом и требует соблюдения ряда условий. В нашей стране разработан метод культивирования вируса гепатита А в культуре клеток 4647 (перевиваемая линия клеток почек зеленых мартышек).
В. Для профилактики гепатита А создаются различные вакцины:
1.Цельновирионные из ослабленных или инактивированных (формоловые) вирусов вакцины.
3.Вакцины химические (из химических аналогов антигенных детерминант вируса).
4.Генно-инженерные вакцины (гены вируса гепатита А рекомбинированы в геном вируса осповакцины).
Одним из важных условий борьбы с гепатитом В в глобальном плане, по мнению ВОЗ, является массовая иммунизация новорожденных и детей раннего возраста. Полный курс иммунизации против гепатита В состоит из трех прививок: первая доза вводится сразу после рождения, вторая через 1-2 месяца и третья — до конца первого года жизни ребенка.
Для вакцинации против гепатита В применяется два типа высоко эффективных вакцин: плазменная вакцина (плазма хронических носителей вируса содержит огромное количество поверхностного антигена вируса гепатита В, он извлекается и надежно обезвреживается) и реком-бинантная генно-инженерная вакцина, которая готовится на основе рекомбинантного клона дрожжей, несущего гены НВsАg.
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СИНДРОМА ПРИОБРЕТЕННОГО ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА (СПИДа)
1.Особенности структурной организации вируса и его генома.
2.Механизм взаимодействия вируса СПИДа с клеткой, особенности патогенеза инфекции.
3.Вирусологическая диагностика ВИЧ-инфекции.
4.Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции:
а)определение противовирусных антител у больных и носителей с помощью коммерческих тест- систем; демонстрация;
б)метод иммуноблотинга и его значение.
5.Знакомство с иммунопрепаратами, применяемыми для диагностики, профилактики и лечения вирусных заболеваний. Обязательные прививки против кори, полиомиелита и гепатита В.
§ I. Вирус СПИДа (ВИЧ) имеет шаровидную форму, его диаметр 100 нм. Оболочка вируса имеет форму многогранника, составленного из 12 пятиугольников и 20 шестиугольников. В центре и углах каждого шестиугольника расположены молекулы gp120 (всего 80 молекул на вирион), оболочка содержит двойной слой липидов, над которыми выступают молекулы gp120, а через мембрану проходит трансмембранный белок gр41.
Сердцевина вириона имеет форму снаряда, составляющие его молекулы из трех-четырех белков образуют поверхность в виде дельта-икосаэдра.
Белок gp120 является рецептором вируса, взаимодействующим с рецептором СД4 чувствительных к нему клеток (Т- лимфоциты, макрофаги, моноциты).
В сердцевине вириона содержится его геном. Он представлен двумя идентичными молекулами РНК (у ВИЧ-1 из 9213 нуклеотидов), двумя молекулами затравочной РНК, двумя молекулами полимеразы, обладающей пятью активностями (протеазной, обратной транскриптазы, РНК-азы, ДНК-зависимой ДНК-полимеразы и эндонуклеазы, или интегразы). РНК связана с нуклеокапсидным белком.
Особенности организации генома
ДНК провируса (ВИЧ-1) состоит из 9283 нуклеотидных пар (н.п.) и фланкирована LTR из 638 н.п.
В составе генома (ДНК-провируса) девять генов, которые контролируют синтез 8 структурных и 6 регуляторных белков:
gag — p17, р30, р15 — эти белки образуют сердцевину вириона;
Таким образом, девять генов вируса кодируют синтез 14 белков. Это связано с тем, что некоторые гены имеют экзонно-интронную структуру и имеют несколько рамок считывания.
Схематическое расположение генов вируса можно изобразить следующим образом:
Сложность работы генома вируса связана с наличием в LTR специальных регуляторных элементов:
г)элемент позитивной регуляции (TAR)
д)элемент негативной регуляции (NRE)
Кроме того, обнаружены элементы, участвующие в регуляции сплайсинга РНК (CRS — стимулирует сплайсинг) и CAR (ингибирует сплайсинг при наличии белка REV ), и элемент Psi , который контролирует упаковку геномной РНК в капсид. В LTR имеются элементы, которые определяют участок прикрепления затравочной РНК (тРНК л из ) для синтеза минус-цепи ДНК и участок, служащий затравкой для синтеза плюс-цепи ДНК.
В регуляции вируса особенно важную роль играют белки ТАТ (позитивный контроль размножения вируса через участок TAR), и NEF и VPU-негативный контроль репродукции вируса (через участок NRE) и белок REV (позитивно-негативный контроль через участок CAR). Белок REV контролирует экспрессию генов gag pol env и осуществляет негативную регуляцию сплайсинга.
Таким образом, размножение вируса СПИДа находится под сложным тройным контролем — позитивным, негативным и позитивно-негативным .
§ 2. Взаимодействие вируса с клеткой протекает по следующей схеме: — адсорбция вируса — окаймленная ямка — окаймленный пузырек-лизосома — слияние мембран — выход нуклеокапсида в цитоплазму -синтез обратной транскриптазой минус-цепи ДНК — разрушение РНК-азой Н вирионной РНК — синтез ДНК-полимеразой плюс-цепи ДНК-образование LTR-проникновение ДНК-провируса в ядро (в хромосому с помощью интегразы). Активация вируса-синтез полноразмерных и субгеномных РНК клеточной РНК-полимеразой — протеолиз и процессинг env- белков -синтез других белков — ассоциация двух молекул геномной РНК с кап-сидными белками — включение двух молекул РНК (а также двух молекул затравочной тРНК и pol- белков) в капсид — мембрана клетки — липидная оболочка — белки gp4I и gpI20 — отпочкование вирионов — образование симпластов из Т-лимфоцитов — их гибель — иммунодефицит — нарушение других систем — присоединение оппортунистических инфекций.
Заражение вирусом — начало вирусоносительства. Активация Т-лимфоцита (и, соответственно, вируса) — начало болезни.
§ 3. Вирусологический диагноз ВИЧ-инфекции трудно осуществим, так как животные к вирусу не чувствительны, а вирус размножается только в одном клоне лимфоцитов (Н9), которых лаборатории не имеют. Наличие вируса или его антигенов можно обнаружить с помощью некоторых иммунологических реакций, но для этого требуются специфические антитела, получение которых связано с большими трудностями. В принципе, возможно использование также метода РНК-зонда.
4. Основным способом диагностики ВИЧ-инфекции и особенно выявления вирусоносительства является использование метода иммуноферментного анализа. Имеющиеся коммерческие тест-системы просты в употреблении, содержат сенсибилизированные антигеном лунки в планшетах, все необходимые ингредиенты и контроли. В силу своей универсальности этот метод получил повсеместное применение. Демонстрация отечественных тест-систем для иммуноферментного определения антител к вирусу СПИДа. Постановка опыта (методика опыта описана в занятии 11).
§ 5. Недостатком иммуноферментного метода является то, что нередко он дает ложнопозитивные результаты. Поэтому в случае сомнения такая сыворотка подвергается контрольному испытанию более чувствительными специфичными методами, например с помощью метода иммуноблотинга или иммунопреципитации.
Метод иммуноблотинга представляет собой тестирование твердо-фазным иммунологическим анализом электрофоретически разделенных белков. Реакция ставится в следующей последовательности: электрофоретическое разделение анализируемого материала на индивидуальные белки или полипептиды в геле; получение реплики путем переноса исследуемых белков с геля на твердофазный матрикс; блокирование незанятых центров связывания белков матрикса; инкубирование со специфической тест-сывороткой; отмывка от избытка сыворотки; инкубирование с меченым иммунореагентом на антитела специфической сыворотки; отмывка от избытка меченого иммунореагента; выявление тестируемых белков или полипептидов с помощью метки иммунореагента.
Для разделения анализируемого материала используют чаще всего различные варианты электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ).
После электрофоретического разделения белков их иммобилизуют на твердой фазе (матриксе), в качестве которой в основном применяют нитроцеллюлозные мембраны (НЦМ). На ПААГ помещают НЦМ и проводят электрофоретический перенос в перпендикулярном к гелю направлении.
На полученной нитроцеллюлозной реплике блокируют активные центры связывания во избежание неспецифической адсорбции реагентов. С этой целью НЦМ инкубируют с раствором бычьего сывороточного альбумина в концентрации 2-5% в течение 1-2 часов.
После блокирования активных мест связывания НЦМ инкубируют с эмпирически подобранным разведением специфической сыворотки (т.е. заведомо положительной сывороткой), причем время инкубирования изменяется в широком диапазоне в зависимости от авидности компонентов. Обычно инкубирование в течение двух часов при 37° или в течение ночи при 4° дает хорошие результаты. НЦМ несколько раз отмывают блокирующим раствором от неспецифически адсорбированной сыворотки и тестируют специфические антитела одним из методов твердофазного иммунного анализа, чаще всего используют ИФМ или РИМ. В том и другом случае НЦМ после обработки специфической сывороткой инкубируют с меченными ферментом антивидовыми антителами, в качестве метки используют пероксидазу хрена (ИФМ) либо радиоактивный йод (РИМ).
После отмывки физиологическим буфером избытка меченых антител на заключительном этапе проведения иммуноблотинга выявляют тестируемые антитела по ферментативной реакции с соответствующим субстратом или авторадиографическим методом.
Контрольные вопросы по вирусологии
Что собой представляют вирусы, являются ли они живыми существами или неживыми структурами?
Каким образом происходит проникновение вируса в клетку?
Какие вакцины применяют для профилактики гриппа? Чем отличаются вирусы от всех прочих живых существ?
Рис.1 СХЕМА СТРОЕНИЯ ВИРИОНА ВИРУСА СПИДа
Каким способом происходит заражение вирусом гепатита В? Какие формы вирусных гепатитов Вы знаете?
С какой целью производится фаготипирование бактерий, например, стафилококков?
Какие методы культивирования вирусов Вы знаете и какие методы их типирования применяются?
Что собой, представляют аденовирусы и какие наиболее характерные признаки проявления аденовирусной инфекции?
Какие вирусы являются возбудителями острых респираторных заболеваний (ОРЗ)?
Каким образом происходит заражение человека вирусом иммунодефицита?
По каким признакам можно судить о размножении вирусов в культуре клеток?
Какие клетки организма поражает вирус иммунодефицита и какой рецептор имеют эти клетки?
В чем заключается сущность иммуноферментного метода (ИФМ) диагностики инфекционных заболевании?
Сколько типов вирусов гепатита Вы знаете?
Какие серологические реакции применяются для диагностики гриппа?
Какие серологические реакции можно использовать для диагностики вирусных инфекций?
Из каких основных этапов складывается процесс взаимодействия вируса с клеткой?
Какие типы вирусных геномов Вы знаете?
Чем характеризуются арбовирусы? Какие типы флавивирусов вызывает клещевой весенне-летний энцефалит и омскую геморрагическую лихорадку?
Каковы методы микробиологической диагностики клещевого энцефалита?
Из каких структурных компонентов состоят вирусы? Что такое капсид? Нуклеокапсид? Какие типы их симметрии Вы знаете?
Изменение каких наружных белков вируса гриппа приводит к появлению пандемических вариантов его и почему?
Как устроен вирус гриппа? Каковы особенности его генома?
Какая вакцина применяется в нашей стране для создания активного коллективного иммунитета против полиомиелита?
В каком возрасте делают прививки против полиомиелита?
Каким образом можно выделить от больного гриппом возбудителя и установить его серотип?
Как устроен вирус полиомиелита и каковы способы заражения этим возбудителем?
Как устроен вирус иммунодефицита человека?
Сколько генов имеет вирус иммунодефицита и какие белки они контролируют?
Какие регуляторные элементы содержатся в длинных концевых повторах (LTR) генома вируса иммунодефицита?
Каков механизм развития иммунодефицита человека в результате заражения его возбудителем?
Какие методы применяются для диагностики вирусного гепатита А?
Какая иммунологическая реакция применяется для обнаружения поверхностного антигена (HBsAg) вируса гепатита В у больных и вирусоносителей?
Какие вакцины используются для создания активного коллективного иммунитета против гепатита В?
Что собой представляет возбудитель дельта-гепатита?
Чем характеризуется возбудитель гепатит А?
Как устроен вирус — возбудитель гепатита В? Какую роль играет содержащаяся в вирионе обратная транскриптаза?
Каковы особенности размножения ретровирусов, почему они получили такое название?
Какие механизмы лежат в основе противовирусного иммунитета?
Как распознают Т-киллеры клетки, инфицированные вирусом?
Какую роль играют в патологии человека вирусы Коксаки и ЕСНО?
Каковы методы диагностики заболеваний, вызываемых энтеровирусами?
Почему для диагностики вирусного гепатита А наиболее приемлемой является методика «захвата» антител, относящихся к иммуноглобулинам класса IgM?
Какие Т-лимфоциты обеспечивают защиту организма от вирусов?
С помощью какой серологической реакции можно определить наличие вируса иммунодефицита в организме человека и в чем сущность этой реакции?
Что такое иммуноблотинг и для какой цели он применяется?
Почему лица, пораженные вирусом иммунодефицита, становятся легко восприимчивыми к различным, даже слабо патогенным, микроорганизмам, иначе говоря,почему у них часто развиваются оппортунистические инфекции?
Какие типы симметрии известны у вирусов?
Как проникает в организм вирус гриппа и из каких основных этапов складывается процесс его внутриклеточного размножения?
Каково значение гемагглютининов вируса гриппа?
Каков механизм противовирусного действия интерферона? Как происходит заражение гепатитом В?
Какие клетки поражает вирус иммунодефицита человека и как он распознает их, т.е. какие рецепторы содержат эти клетки для вируса?
Что такое лизогения и лизогенная конверсия и какими фагами она вызывается — вирулентными или умеренными?
Каковы механизмы персистирования вирусов в организме человека?
Каким образом бактериофаг может изменить генетические свойства бактерий?
Что такое первично-трипсинизированные культуры клеток и перевиваемые культуры клеток?
Каким образом РНК-содержащие вирусы могут интегрировать в хромосому клетки?
Каким образом онкогенные вирусы вызывают трансформацию нормальных клеток в злокачественные? Что такое протоонкоген и онкоген?
Почему вирусы являются облигатными паразитами?
Как устроен вирус дельта-гепатита? Какой нуклеиновой кислотой представлен его геном?
Каков механизм реакции торможения гемагглютинации?
Из каких основных этапов складывается процесс взаимодействия вируса СПИДа с клеткой?
Какие типы антигенной изменчивости вируса, гриппа Вы знаете и каково их значение в эпидемиологии этой болезни?
Каков механизм формирования вириона гриппа в клетке?
Как осуществляется специфическая профилактика бешенства и какие препараты применяются для этой цели и в каких случаях?
Как осуществляется микробиологическая диагностика бешенства?
Как устроены аденовирусы, чем представлен их геном, какой тип симметрии имеет вирион и сколько у него капсомеров?
Каковы особенности репликации вирусов, у которых геном представлен однонитчатой ДНК?
о Каковы особенности репликации вирусов, у которых геном представлен однонитчатой РНК?
Какая разница между позитивными и негативными вариантами однонитчатых РНК-геномов?
В чем заключается сущность радиоимиунного метода (РИМ) диагностики инфекционных заболеваний?
Наша постоянная читательница справилась с ГЕПАТИТОМ С действенными медикаментами — Софосбувир и Даклатасвир. По отзывам пациентов — результат 97% — полное избавление от вируса. Мы решили посоветовать ДЕЙСТВЕННУЮ терапию Вам. Результат почти 100%. ДЕЙСТВЕННЫЙ МЕТОД.
