Заболевание полиомиелитом было известно очень давно. В египетском храме был обнаружен барельеф с изображением египетского жреца, у которого одна нога тоньше другой (сухая нога), а стопа другой находилась в положении «конской стопы» — теперь известно, что это результат заболевания полиомиелитом.
Возбудители полиомиелита входят в семейство Picornaviridae (от лат. pico — маленький, rna — РНК-содержащий).
Это семейство включает три рода, из которых в патологии человека наибольшее значение имеют энтеровирусы: возбудители полиомиелита, Коксаки и ECHO (Enteric cytopathogenic human orphan viruses) (orphan — сирота).
Вирусная этиология полиомиелита была установлена К. Ландштейнером и Э. Папером в 1909 г. в опытах на обезьянах.
Морфологическая структура (см. рис. 52) Полиовирус относится к малым вирусам (15-30 нм). Вирус состоит из однонитчатой РНК и белкового капсида, состоящего из 32 капсомеров. Форма вируса кубоидальная. Внешней оболочки нет. Углеводы и липиды не обнаружены. Инфекционные свойства связаны с РНК.
Культивирование. Вирус полиомиелита хорошо размножается в культуре клеток почек обезьян, фибробластов, эмбриона человека и перевиваемых культурах клеток. Размножение вируса сопровождается цитопатическим действием (дегенерацией клеток).
Антигенная структура. Известны три серологических типа вируса полиомиелита, которые обозначаются римскими цифрами (I, II, III). Наибольшее эпидемиологическое значение имеет вирус I типа (вызывает заболевания в 65-90% случаев). Вирус II типа обнаруживается в 10-12%, вирус III типа вызывает отдельные спорадические заболевания.
Серотипы полиовируса различаются в реакции нейтрализации. Они не вызывают перекрестного иммунитета.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Кипячение убивает вирус быстро. Температура 50° С губит его через 30 мин. При комнатной температуре вирус может сохраняться до 3 мес. Низкие температуры он переносит хорошо. В испражнениях на холоде полиовирус сохраняется до 6 мес. В молоке — до 3 мес. Полиовирусы длительно сохраняются в почве, открытых водоемах, что имеет эпидемиологическое значение. Вирусы устойчивы к воздействию желудочного сока и к 1% фенолу. Чувствительны к формалину, хлорамину, перекиси водорода, перманганату калия и др.
Восприимчивость животных. К вирусу полиомиелита I и III типа чувствительны обезьяны (шимпанзе, макаки). К вирусу II типа чувствительны грызуны (хлопковые крысы, хомяки, мыши). Экспериментальное заражение вызывает у них заболевание, сопровождающееся параличами.
Источники инфекции. Больные люди и вирусоносители.
Пути передачи. Пищевой (вирус выделяется с фекалиями до 40 дней). Заболевание может передаваться мухами (мухи переносят вирус на лапках, брюшке) и через объекты окружающей среды; воздушно-капельный (в первые дни болезни вирус выделяется из носоглотки).
Патогенез. Входными воротами является слизистая оболочка верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Попав в организм на слизистую носоглотки, вирус проникает в лимфатические узлы глоточного кольца и тонкого кишечника, где происходит его репродукция (размножение). В крови накапливаются вируснейтрализующие антитела, блокирующие проникновение вируса в ЦНС. В том случае, когда вирус все-таки проникает в ЦНС, он локализуется с двигательных клетках передних рогов спинного мозга и в сером веществе подкорки, где вызывает воспалительно-дегенеративный процесс. В результате возникают вялые параличи, чаще нижних конечностей.
Клинически полиомиелит протекает в трех формах: абортивной, непаралитической (менингеальной) и паралитической (в 1% случаев).
Полиомиелитом чаще болеют дети в возрасте от 5 мес до 5-6 лет. Выделяется вирус полиомиелита с испражнениями и слизью носоглотки.
Иммунитет. После перенесенного заболевания остается пожизненный иммунитет, обусловленный образовавшимися вируснейтрализующими антителами к гомологичным типам вируса.
Профилактика. Ранняя диагностика и изоляция больных.
Специфическая профилактика осуществляется активной иммунизацией. Первая вакцина была предложена Солком в 40-х годах XX века. Эта вакцина состояла из инактивированных формалином полиовирусов I, II и III типа. Однако она не вызывала образования стойкого иммунитета и была очень болезненна при внутримышечном введении.
Вторая вакцина была предложена Сэбином. Она состояла из живых аттенуированных (ослабленных) штаммов-мутантов трех типов полиомиелита. Эти штаммы были лишены инфекционных свойств, но сохранили иммуногенность.
В 60-х годах М. П. Чумаков и А. А. Смородинцев, использовав ослабленный штамм, полученный Сэбином, разработали метод приготовления вакцины в виде конфет-драже, что значительно облегчило ее применение. Массовая вакцинация детей привела к почти полной ликвидации полиомиелита в СССР, за, что авторы получили Ленинскую премию.
Механизм действия вакцины состоит в интерференции вирусов, т. е. вакцинный штамм вируса, заселяя клетки кишечника, блокирует репродукцию дикого штамма, а также в образовании вируснейтрализующих антител.
Лечение. Симптоматическое. Применяют иммуноглобулин.
Цель исследования: выявление вируса и определение его типа; серодиагностика.
1. Кал больных (взятые на 1-й и 2-й неделе заболевания).
2. Носоглоточное отделяемое (взятое в первые дни заболевания).
3. Кусочки головного и спинного мозга, содержимое тонкого и толстого кишечника, лимфоузлы (секционный материал).
Способы сбора материала
1. Выделение вирусов путем заражения различных культур клеток.
2. Серологическое исследование (реакция нейтрализации) и РСК.
Выделение вирусов проводят путем заражения исследуемым материалом двух видов культур — первичных и перевиваемых клеток.
Ход исследования
О наличии вируса судят по цитопатическому действию на клетки.
При отсутствии дегенерации клеток в течение 7-10 дней после заражения проводят следующий пассаж. Для второго посева используют культуральную жидкость, взятую из первого пассажа, и заражают новую культуру клеток.
При отсутствии дегенерации клеток во втором пассаже результат считают отрицательным.
При положительном результате проводят типирование выделенного вируса с коммерческими сыворотками против вируса полиомиелита трех типов методом нейтрализации в культуре клеток и РСК.
Методы ретроспективной диагностики. Для подтверждения диагноза полиомиелита ставят реакцию нейтрализации с парными сыворотками больного. Одну сыворотку берут в начале заболевания, вторую — через месяц после начала заболевания. Обе сыворотки исследуют одновременно в реакции нейтрализации. Для этого сыворотки прогревают в течение 30 мин при 56° С и разводят раствором Хенкса. Разведения делают от 1:4 до 1:1024. Каждое разведение смешивают со стандартной дозой вируса I, II и III типа. После часового контакта (при комнатной температуре) каждой смесью заражают по 2 пробирки со взвесью культуры клеток и помещают в термостат на 4-9 дней. О результатах реакции судят по изменению цвета среды (от малинового до желтого). Изменение цвета свидетельствует о наличии антител. Изменение цвета происходит потому, что клетки остаются жизнеспособными, образуют продукты обмена, изменяющие реакцию рН и соответственно цвет среды. Жизнеспособность клеток обеспечивает нейтрализация вируса соответствующей сывороткой.
Положительной реакцию считают только при четырехкратном увеличении титра вируснейтрализующих антител, т. е. если, например, титр первой сыворотки был 1:8, а во второй, взятой через 1-2 мес, титр не менее чем 1:32.
Вирус Коксаки впервые выделили в 1948 г. Г. Долдорф и И. Сиклс в городе Коксаки в США из испражнений детей при полиомиелитоподобных заболеваниях.
Морфологическая структура. Вирусы Коксаки относятся к мелким вирусам (20-30 нм). В их состав входит РНК и белок, форма кубоидальная.
Культивирование. Культивируются они так же как и полиовирус.
Антигенная структура. По антигенной структуре и патогенным свойствам вирусы Коксаки разделяют на 2 группы: А и В.
В группу А входят 24 серологических типа, которые различаются в реакции нейтрализации.
В группу В входят 6 серотипов, различающихся также в реакции нейтрализации.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Кипячение губит вирусы Коксаки быстро, 50-55° С — через 30 мин. Низкие температуры вирусы переносят хорошо. При температуре -70° С они сохраняются около 3 мес. Вирусы устойчивы к различным концентрациям водородных ионов, действию эфира, 5% лизолу, но проявляют чувствительность к хлороводородной кислоте, формальдегиду и т. д.
Восприимчивость животных. Вирус типа А вызывает у новорожденных мышей параличи, а серотип 7 — полиомиелитоподобные заболевания у обезьян и хлопковых крыс. Вирус типа В у новорожденных мышей вызывает спастические параличи.
Источники инфекции. Вирусы Коксаки в природе широко распространены. Они выделяются с испражнениями и из носоглотки от больных и вирусоносителей.
Пути передачи. Пищевой (при использовании зараженной воды, пищи и при контакте с объектами внешней среды, инфицированными вирусом; вирусы могут переноситься мухами), воздушно-капельный (больной выделяет вирусы при чиханье, кашле в первые дни болезни).
Патогенез. Входными воротами является слизистая оболочка носоглотки и пищеварительного такта. Вирусы Коксаки характеризуются нейро- и миотропностью. Вирусы Коксаки А могут вызвать паралитические заболевания, схожие с полиомиелитом. Вирусы Коксаки группы В вызывают асептический серозный менингит, асептический миокардит и другие энтеровирусные заболевания.
Иммунитет. После перенесенного заболевания остается стойкий типоспецифический иммунитет.
Профилактика. Санитарные мероприятия: изоляция больных, карантин. Специфическая профилактика не разработана.
Цель исследования: выделение вируса и определение его типа.
Материал для исследования, способы его сбора и основные методы исследования такие же, как и при полиомиелите.
Методы диагностики. Выделение вирусов проводят так же, как и при полиомиелите: посев исследуемого материла на первичные и перевиваемые культуры клеток. Некоторые серотипы Коксаки А с трудом адаптируются в культуре клеток.
Выделенные вирусы идентифицируют в РСК и реакции нейтрализации.
Для дифференциации вируса Коксаки типа А от типа В ставят биологическую пробу: заражают новорожденных белых мышей (сосунков).
Вирус типа А вызывает у них вялые параличи без энцефалита, а вирус типа В вызывает судороги и параличи, кроме того, наблюдается поражение внутренних органов — печени, поджелудочной железы и др. При заболевании, вызванном вирусами Коксаки, используют также ретроспективный метод серодиагностики, ставят реакции нейтрализации с парными сыворотками (см. главу 45).
В 1941 г. Д. Эндерс при изучении полиомиелита выделил из кишечника больного вирус, который по серологическим свойствам отличался от вируса полиомиелита и других кишечных вирусов, и назвал его orphan — сирота. Дальнейшие работы показали, что имеется большое количество схожих с ним вирусов, а всю группу назвали ECHO — Enteric cytopathogenic human orphan viruses.
Морфологическая структура. Величина вируса ECHO 10-15 нм. По своей структуре и репродуктивной способности он мало отличается от полиовирусов и вирусов Коксаки.
Культивирование. Вирусы ECHO, так же как вирусы полиомиелита и Коксаки, культивируют на первичных и перевиваемых линиях клеток.
Антигенные свойства. Вирусы ECHO включают 32 серологических типа, не создающих перекрестного иммунитета.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Такая же, как и у вирусов Коксаки.
Восприимчивость животных. Животные не чувствительны к вирусам ECHO.
Источники инфекции, пути передачи и входные ворота. Такие же, как у вирусов полиомиелита и Коксаки.
Патогенез. Вирусы ECHO являются причиной разнообразных заболеваний — вызывают асептический серозный менингит, энтеровирусную лихорадку, эпидемические экзантемы, миокардит и другие лихорадочные заболевания.
Иммунитет. Вирусы ECHO создают стойкий иммунитет за счет вируснейтрализующих антител.
Профилактика. Общесанитарные мероприятия как и при других кишечных инфекциях, но следует помнить, что переохлаждение и перегревание способствуют распространению энтеровирусных заболеваний. Специфическая профилактика не разработана.
Материал для исследования, способы его сбора, основные методы исследования и диагностики такие же, как и для других энтеровирусных заболеваний. Однако в качестве культуры клеток ткани лучше использовать первично-трипсинизированные.
1. Какие вирусы включены в семейство Picornaviridae?
2. Каковы величина и морфологическая структура вирусов полиомиелита, Коксаки и ECHO?
3. Какие Вы знаете методы культивирования полиовирусов? Чем сопровождается размножение вирусов в культурах клеток?
4. Какие Вы знаете типы полиовирусов? Какой из них имеет наибольшее эпидемиологическое значение?
5. Источники заболевания, ворота инфекции и патогенез при заболевании полиомиелитом.
6. Расскажите о специфической профилактике полиомиелита.
7. Какой материал следует взять для исследования и какие основные методы используются для диагностики при подозрении на полиомиелит?
источник
Полиомиелит является высокозаразным инфекционным заболеванием вирусной природы, протекающим с поражением двигательных нейронов серого вещества спинного и продолговатого мозга. Поражение мотонейронов приводит к их гибели с последующим развитием парезов и параличей иннервируемых ими мышц. Возбудителем заболевания является вирус полиомиелита человеческий — Poliovirus hominis. Данное название он получил из-за того, что человек является его единственным естественным хозяином и источником распространения. Полиомиелитом болеют чаще всего дети до 5-летнего возраста. Фекально-оральный является основным путем распространения инфекции. Всеобщая вакцинопрофилактика в настоящее время практически победила болезнь. Случаи полиомиелита и вспышки заболевания регистрируются в странах, где недостаточно проводится вакцинопрофилактика, господствует антисанитария, недоедание и хроническая диарея среди детского населения.
Рис. 1. В экономически неразвитых странах в связи с недостаточной вакцинопрофилактикой, антисанитарией, недоеданием и хронической диареей в настоящее время регистрируются вспышки полиомиелита.
Полиомиелит известен с древних времен. На основании данных археологических раскопок появились указания на то, что в Египте и Палестине за тысячи лет до новой эры встречались лица, больные полиомиелитом.
Отдельные сведения о заболеваниях, сопровождающихся параличами, встречаются в литературе средних веков.
В литературных источниках имеются указания на эпидемические вспышки полиомиелита в XVI и XVII веках в разных странах.
Во второй половине XIX столетия вспышки детского церебрального паралича регистрируются в разных странах. Они подробно описываются. В это же время исследователи предполагают инфекционную природу заболевания. К 1840 году немецкий ортопед Гейне сделал описание значительного количества случаев с последствиями перенесенного заболевания. С этого времени начинается научная история полиомиелита. Через 20 лет Гейне выпустил вторую работу с описанием 192 случаев заболевания, 158 из которых он наблюдал лично.
В 1863 году Cornil опубликовал сообщение о наличии изменений в спинном мозгу, а в 1870 году Шарко и Жоффруа обнаружили изменения в ганглиозных нервных клетках передних рогов спинного мозга у больных, перенесших в прошлом детский паралич. Они предположили, что в основе патогенеза заболевания лежит паренхиматозное воспаление. С этого времени заболевание получило название полиомиелит. Далее стали появляться описания разных форм заболевания.
После целого ряда вспышек полиомиелита в странах Европы и США и далее, в большинстве странах мира, заболевание получило название «эпидемический детский полиомиелит».
В 1908 году Ландштейнер и Поппер экспериментально воспроизвели полиомиелит путем введения в организм обезьяны эмульсии спинного мозга умершего ребенка. Было высказано предположение, что возбудитель заболевания имеет вирусную природу, так как результаты бактериологического исследования давали отрицательные результаты.
Рис. 2. На фото Карл Ландштейнер и Эрвин Поппер.
В 1949 — 1951 году Джон Франклин Эндерс, Томас Хэкллу Уэллер и Фредерику Чепмену Роббинс открыли способность вируса полиомиелита расти в культурах различных типов тканей. Открытие дало толчок к началу работ по производству вакцины, стали разрабатываться методики лабораторных методов диагностики и профилактики заболевания.
В 1981 году был полностью расшифрован геном вируса полиомиелита.
Рис. 3. Томас Хэкллу Уэллер, Джон Франклин Эндерс и Фредерик Чепмену Роббинс открыли способность вируса полиомиелита расти в культурах различных типов тканей, за что в 1954 году были удостоены Нобелевской премии.
В 1953 году Джонас Солк разработал и внедрил инактивированную вакцину от полиомиелита. В 1956 году Альберт Сабин разработал живую вакцину из 3-х типов вируса полиомиелита.
Рис. 4. На фото разработчики вакцин против полиомиелита: Альберт Брюс Сабин и Джонас Солк. Их вакцины победили заболевание в большинстве стран мира.
Возбудитель полиомиелита (poliovirus hominis) принадлежит к семейству Picornaviridae, род Enterovims, вид Poliovirus.
- Пикорновирусы принадлежат к семейству безоболочечных вирусов, содержат однонитевую положительно заряженную РНК.
- Энтеровирусы принадлежат к группе РНК-содержащих вирусов. Распространены повсеместно. Их репродукция происходит преимущественно в кишечнике человека и вызывают у него разнообразные заболевания, большая часть которых протекает стерто. Энтериты развиваются редко. К роду энтеровирусов относятся 67 серотипов, патогенных для человека: вирусы полиомиелита (3 типа), вирусы Коксаки (23 типа подгруппы А и 6 типов подгруппы В), 31 тип вирусов ECHO и 4 типа респираторноэнтеральных вирусов (РЭВ).
Рис. 5. Вирус полиомиелита (увеличение в 90 тысяч раз).
- Полиовирус является представителем мелких фильтрующихся вирусов. Его размер составляет от 15 до 30 нм, масса — 8 — 9 МД.
- Полиовирусы имеют сферическую форму, икосаэдрический тип симметрии.
- Внутри располагается однонитчатая плюс-РНК и протеин VPg. Генетический материал вируса защищен снаружи капсидом. РНК составляет 20 — 30% очищенного вируса, состоит из 7,5 — 8 тысяч нуклеотидов. Молекулярная масса РНК составляет 2,5 МД.
- Капсид состоит из 12-и пентамеров (пятиугольников). Каждый из пентамеров состоит из 5 протомеров — белковых субъединиц. Каждый из протомеров образован 4-я вирусными полипептидами. 3 вида белка (VP1, VP2 и VP3) образуют внешнюю поверхность капсида, белок VP4 образует внутреннюю поверхность капсида. Вирусные белки определяют иммуногенные свойства возбудителя.
- Внешняя оболочка отсутствует.
Рис. 6. Схема строения полиовируса. Полиовирусы имеют сферическую форму, икосаэдрический тип симметрии.
Возбудители полиомиелита проникают в организм ребенка через слизистые оболочки пищеварительного тракта и носоглотки. Они обладают тропностью к нервным клеткам, поэтому с током крови быстро достигают спинной и головной мозг и оседают в сером веществе. Клетками-мишенями являются мотонейроны передних рогов спинного и продолговатого мозга.
1 этап. Вирусы полиомиелита прикрепляются к клеточной мембране клеток-мишеней. Их адсорбция происходит в основном на липопротеиновых рецепторах клеток.
2 этап. Геном вируса полиомиелита проникает в клетку-мишень путем эндоцитоза или инъекции РНК через ее цитоплазматическую мембрану.
3 этап. Разрушение капсида вируса и выделение репликативной формы РНК, являющейся матрицей для синтеза матричной РНК и РНК будущих вирионов.
4 этап. Сборка вирионов и воспроизведение вирусных частиц (репродукция) происходят в цитоплазме клетки-мишени. Вначале происходит синтез единого гигантского полипептида, который под влиянием протеолитических ферментов разрезается на фрагменты. Из одних фрагментов (капсомеров) строится капсид, другие представляют собой внутренние белки, третьи — вирионные ферменты. В каждой из клеток формируется несколько сотен вирионов.
5 этап. Деструкцией (разрушением) клеток и выход вирионов наружу.
Рис. 7. Возбудители полиомиелита (вид в электронном микроскопе).
Известны 3 типа вируса полиомиелита: I тип «Брунгильда» II тип «Лансинг», III тип «Леон», отличающиеся друг от друга по антигенным признакам и патогенности. Все типы вирусов патогенны для человека. Имеют общий комплементсвязывающий антиген. Дифференциация серотипов вирусов производится в реакции нейтрализации.
- Наиболее часто (в 65 — 90% случаев) встречаются вирусы I типа. Они же обладают наибольшей патогенностью и являются виновниками возникновения всех значительных эпидемий.
- Вирусы II типа обнаруживаются в 10 — 12% случаев, вызывают латентную форму полиомиелита.
- Вирусы III типа эпидемии вызывают редко, являются виновниками спорадических случаев заболевания.
Каждый из штаммов обеспечивает пожизненную защиту от повторного заболевания, но не гарантирует от заболевания, вызванного другим штаммом, поэтому вакцины от полиомиелита состоят из всех 3-х типов вирусов.
Вирусы полиомиелита отличаются по патогенности. Так полиовирусы 1 и 3 типов способны вызвать заболевание у обезьян макак и шимпанзе, 2 типа — у хлопковых крыс, белых и серых мышей, полевок, хомяков и др.
Рис. 8. На фото вирусы — возбудители полиомиелита.
Культивирование вирусов полиомиелита осуществляется на культурах клеток почек обезьян, эмбриона человека, фибробластов, перевиваемых культурах клеток HeLa и др. При наличии вируса отмечается лизис клеток (цитопатическое действие).
Рис. 9. Полиомиелит у ребенка. Спинальная форма. Поражены мышцы верхних и нижних конечностей.
- Вирусы мгновенно погибают при кипячении. В течение 30 минут погибают при нагревании до 50° С.
- Вирусы чувствительны к целому ряду дезсредств: хлорамину, формалину, перекиси водорода, марганцовокислому калию и др.
- УФО и высушивание губительны для вирусов.
- До 3-х месяцев вирус сохраняется при комнатной температуре.
- Хорошо переносит низкие температуры и замораживание. На холоде сохраняется до 6-и месяцев. В условиях бытового холодильника сохраняет жизнеспособность 3 и более недель.
- В фекальных массах возбудитель полиомиелита сохраняется около 6 месяцев.
- В воде сохраняется около 100 суток.
- В масле и молоке вирусы полиомиелита сохраняются до 3-х месяцев
- Огромное эпидемиологическое значение имеет способность вирусов длительно (в течение многих месяцев) сохраняться в открытых водоемах и почве, куда они попадают с фекальными массами.
- Вирусы не разрушаются антибиотиками и желудочным соком. Они устойчивы к 1% фенолу, ацетону, спирту и моющим средствам. При температуре от -20°С до -70°С в 50% глицерине сохраняются до 8-и лет.
Рис. 10. На фото полиовирусы (вид в электронном микроскопе).
источник
103. Возбудитель полиомиелита. Таксономия и характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
Таксономия.: семейство Picornaviridae, род Enterovims, вид Poliovirus.
Структура. По структуре полиовирусы — типичные представители рода Enterovirus. РНК-содержащие вирусы.
Морфология: мелкие, просто организованные вирусы, сферической формы, состоят из одноцепочечной РНК и капсида.
Культивирование: Хорошо репродуцируются в первичных и перевариваемых культурах клеток из тканей человека и сопровождается цитопатическим эффектом. В культуре клеток под агаровым покрытием энтеровирусы образуют бляшки.
Антигенные свойства: Различают 3 серотипа внутри вида: 1, 2, 3, не вызывающие перекрестного иммунитета. Все серотипы патогенны дл человека.
Патогенез и клиника. Естественная восприимчивость человека к вирусам полиомиелита высокая. Входными воротами служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Первичная репродукция вирусов происходит в лимфатических узлах глоточного кольца и тонкой кишки. Из лимфатической системы вирусы проникают в кровь, а затем в ЦНС, где избирательно поражают клетки передних рогов спинного мозга (двигательные нейроны). Инкубационный период продолжается в среднем 7—14 дней. Различают 3 клинические формы полиомиелита: паралитическую, менингеальную (без параличей), абортивную (легкая форма). Заболевание начинается с повышения температуры тела, общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле.
Иммунитет. После перенесенной болезни остается пожизненный типоспецифический иммунитет. Иммунитет определяется наличием вируснейтрализующих антител, среди которых важная роль принадлежит местным секреторным антителам слизистой оболочки глотки и кишечника (местный иммунитет). Пассивный естественный иммунитет сохраняется в течение 3—5 недель после рождения ребенка.
Микробиологическая диагностика. Материал для исследования — кал, отделяемое носоглотки, при летальных исходах — кусочки головного и спинного мозга, лимфатические узлы.
Вирусы полиомиелита выделяют путем заражения исследуемым материалом первичных и перевиваемых культур клеток. О репродукции вирусов судят по цитопатическому действию. Идентифицируют выделенный вирус с помощью типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации в культуре клеток. Важное значение имеет внутривидовая дифференциация вирусов, которая позволяет отличить патогенные штаммы от вакцинных штаммов, выделяющихся от людей, иммунизированных живой полиомиелитной вакциной. Различия между штаммами выявляют с помощью ИФА, реакции нейтрализации цитопатического действия вируса в культуре клеток со штаммоспецифической иммунной сывороткой, а также в ПЦР.
Серодиагностика основана на использовании парных сывороток больных с применением эталонных штаммов вируса в качестве диагностикума. Содержание сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA, IgM определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини.
Лечение. Патогенетическое. Применение гомологичного иммуноглобулина для предупреждения развития паралитических форм ограничено.
Профилактика. Основной мерой профилактики полиомиелита является иммунизация. Первая инактивированная вакцина для профилактики – создавала общий гуморальный иммунитет, не формировала местной резистентности слизистых оболочек ЖКТ, не обеспечивала надежную защиту.
Пероральная живая культуральная вакцина из трех серотипов штаммов. Используют для массовой иммунизации детей, она создает стойкий общий и местный иммунитет.
Неспецифическая профилактика сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям.
источник
| Название | Практикум по медицинской микробиологии и вирусологии |
| страница | 11/15 |
| Дата публикации | 09.03.2015 |
| Размер | 2.79 Mb. |
| Тип | Учебное пособие |
d.120-bal.ru > Биология > Учебное пособие
| ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЭНТЕРОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПОЛИОМИЕЛИТА. |
Цель: иметь представление о биологических особенностях энтеровирусов, их классификация. Изучить методы лабораторной диагностики полиомиелита и других энтеровирусных инфекций.
В семейство пикорнавирусов (pico — мелкие, rna –содержащие РНК) включены энтеровирусы (вирус полиомиелита, Коксаки, ECHO), вирус ящура, риновирусы и некоторые неклассифицированные агенты. Всего более 100 вирусов. Энтеровирусы – группа вирусов, обитающих преимущественно в кишечнике человека, и вызывающих разнообразные по клиническим признакам болезни.
Для энтеровирусов характерен фекально-оральный механизм заражения. Местом их первичной локализации является кишечник (или носоглотка), они могут проникать в кровь и гематогенно попадать в другие органы.
К энтеровирусам относятся вирусы полиомиелита, вирусы Коксаки А и В, вирусы ЕСНО, энтеровирусы серотипов 68-71 и вирус гепатита А (энтеровирус серотип 72).
Полиомиелит (старое название детский паралич или болезнь Гейне-Медине) — заболевание известное с древнейших времен. Вирус полиомиелита имеет мельчайшие размеры, РНК-содержащий. Вирион имеет сферическую форму, капсид состоит из 60 капсомеров, располагающихся по кубическому типу симметрии, в виде икосаэдров, не имеет суперкапсидной оболочки. В его составе нет углеводов и липидов, поэтому он не чувствителен к эфиру. По антигенным и биологическим свойствам различают 3 типа вируса полиомиелита — I, II и III типа. Паралитическую форму чаще вызывает серовар I.
Вирус полиомиелита — размножается как в первичных, так и перевиваемых (например, Неlа) культурах клеток, что сопровождается ЦПД и образованием внутриклеточных включений. Вирус не обладает гемагглютинирующей активностью.
Вирус устойчив к факторам внешней среды, к действию эфира, 70% спирта, к детергентам, формальдегиду, хлору. В канализационных водах, в фекалиях при 0°С вирус сохраняет инфекционную активность в течение месяца.
Источником инфекции является больной человек, который выделяет возбудителя в течение всего периода заболевания и даже после выздоровления. Наиболее заразительными являются последние 3-5 дней инкубационного периода и первые 3-5 дней заболевания. Основной механизм передачи — фекально-оральный. Заражение происходит через пищу, воду, грязные руки. Мухи играют роль как механический переносчик.
Входными воротами инфекции являются слизистые полости рта. Еще до появления клинических признаков возбудителя можно обнаружить в носоглотке.
В эти ранние сроки вирус может передаваться при кашле, чихании, т.е. воздушно-капельным путем. Но этот путь не основной и кратковременный.
Из полости рта, носоглотки вирус попадает в лимфатические узлы, затем в кровь и гематогенно поражает клетки передних рогов спинного мозга, т.е. двигательный нейрон, и вызывает параличи. Полиовирус может поражать и двигательные клетки продолговатого мозга, варолиева моста, мозжечка.
По течению заболевания различают 4 клинические формы полиомиелита: паралитическую (около 1% случаев), непаралитическую (менингеальную), абортивную (кишечную форму с маловыраженной симптоматикой) и инаппарантную (скрытую).
Инкубационный период продолжается в среднем 1-2 недели. Заболевание начинается с повышения температуры тела, общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле. Параличи развиваются внезапно, на 1-6-й день болезни, в первые часы после понижения температуры. Восстановительный период длится 3-6 месяцев.
Иммунитет после перенесенного заболевания стойкий к соответствующему серотипу, носит гуморальный и клеточный характер.
Важная роль принадлежит местным секреторным IgA кишечника.
Вирусы Коксаки выделены от больных с полиомиелитоподобным заболеванием в 1948 году в США в местечке Коксаки. Вирусы Коксаки делятся на подгруппы А и В. Вирусы Коксаки А имеют 1- 24 серовара, а В 1 — 6 сероваров. Некоторые серовары обладают гемагглютинирующей активностью, в отличие от вируса полиомиелита.
Клинические формы инфекции, вызванной вирусами Коксаки, разнообразны. Вирусы Коксаки А вызывают заболевания, характеризующиеся лихорадкой, менингеальными явлениями, «герпетической» ангиной, перикардитами. Вирусы Коксаки В в силу своей нейротропности вызывают энцефаломиелиты, менингиты, полиомиелитоподобные заболевания.
Вирусы ЕСНО (enteric cytopathogenic human orphan в дословном переводе: кишечные цитопатогенные человеческие вирусы – сироты) насчитывают более 30 сероваров этих вирусов, отличающихся по антигенным свойствам. В 1951-53г были выделены из фекалий Дж. Мельником, их роль была неизвестна поэтому назвали вирусами – «сиротами».
Большинство из них обладают гемагглютинирующей активностью, непатогенны для белых мышей, а в культуре тканей дают выраженное цитопатическое действие.
Вирусы ЕСНО вызывают кишечные инфекции, ОРВИ у детей, а также полиомиелитоподобные заболевания с синдромами поражения ЦНС-асептический менингит, иногда энцефалит. ЕСНО вызывают также гастроэнтериты и диареи у детей.
Микробиологическая диагностика энтеровирусных инфекций.
Лабораторный диагноз полиомиелита может быть поставлен на основании:
1. Вирусологического метода — обнаружение вируса в испражнениях больного или носителя путем заражения первичных культур почек обезьян, клеток HELA и др.,
2. Иммунноиндикации – обнаружение антигена вируса в носоглоточном смыве с помощью ПЦР, ИФА и РИМ.
3. Серологической диагностики — используется РБН (реакция биологической нейтрализации методом «цветной пробы»), РСК, ИФА, обнаружение противовирусных антител с помощью реакции преципитации.
Самостоятельная работа студентов:
- Изучить и зарисовать схему микробиологической диагностики энтеровирусных инфекций (полиомиелита, вирусов Коксаки, ECHO и др.).
- Зарисовать в тетради модель строения вириона полиомиелита, обозначить на рисунке НК, капсид, капсомеры, нуклеокапсид.
- Изучить результаты идентификации энтеровирусов в реакции нейтрализации со специфическими иммунными сыворотками. Дать заключение. Зарисовать в тетради схему РБН (реакция биологической нейтрализации) для идентификации вируса.
- Оценить результаты титрования вируснейтрализующих антител в РБН парными сыворотками. Дать заключение.
- Разобрать схему обнаружения противовирусных антител или антигенов с помощью реакции преципитации.
Указания к самостоятельной работе:
1. Схема микробиологической диагностики энтеровирусных инфекций (таблица).
2. Обнаружение вируса в культуре ткани методом «цветной пробы». В основу «цветной реакции» положено, то обстоятельство, что в процессе размножения и роста клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты обмена веществ, сдвигающие рН среды, в кислую сторону. В ткани, зараженной вирусом, наступает дегенерация клеток, метаболизм их подавляется и не происходит изменения рН среды. Для выявления этих изменений в питательную среду добавляют индикатор феноловый. При рН выше 7 цвет индикатора красный, при рН 7- оранжевый, рН ниже 7- желтый. Если клетки не заражены вирусом (или он нейтрализован специфической сывороткой), то рН питательной среды сдвигается в кислую сторону, и она становится желтой. Если вирус размножается, то клетки дегенерируют и среда сохраняет исходный красный цвет.
3. Схема определения титра антител методом цветной пробы
| Ингредиент | Разведение сыворотки | Контроль | ||||||||||||||||
| 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | 1:64 | Токсичности сыворотки | Роста клеток | Роста вируса | |||||||||||
| Сыворотка, мл 0,25 | ||||||||||||||||||
| 40 минут при комнатной температуре для нейтрализации вируса | ||||||||||||||||||
| Клеточная 0,25 | ||||||||||||||||||
| Вазелиновое масло, мл | По 0,4 во все пробирки Термостат 37 0 3-7 дней | |||||||||||||||||
| Результат: Пожелтение цвета среды свидетельствует о нейтрализации вируса 4. Обнаружение противовирусных антигенов с помощью реакции преципитации. Реакция преципитации в агаре широко используется для диагностики вирусных заболеваний (полиомиелита, Коксаки и др.) Реакция может быть поставлена в чашках Петри, на предметных стеклах и в капиллярах. Постановка реакций преципитации на предметных стеклах для выявления антигена вируса полиомиелита. На обычные предметные стекла наносят 2 мл расплавленного и охлажденного до 60 º агара (I % — ый агар на физиологическом растворе с 1:20000 мертиолята). Толщина слоя агара на стекле составляет около I мм. После застывания агара в нем вырезают лунки диаметром 3-4мм с расстоянием между центрами луночек 5-6 мм. Количество луночек и их расположение на стекле могуть быть различными в зависимости от условий опыта. Объем используемых ингредиентов 0,02 мл. Реакция ставится с несколькими контролями. Для определения антигена вируса вырезают 4 лунки (см. схему) и каждую из них наливают соответственно следующие ингредиенты: специфическая сыворотка, специфический антиген, нормальная сыворотка, искомый антиген. Если искомый интиген соответствует сыворотке, то между соответствующими луночками должна появиться линия преципитации. Линия преципитации должна также появиться между лунками со специфической сывороткой и специфическим антигеном. Преципитация наблюдается через 4-5 часов инкубации в термостате во влажной камере. Схема постановки реакции преципитации в агаре для выявления вирусного антигена (рис. 7). Сс — сыворотка специфическая; Сн — сыворотка нормальная; Ас — антиген специфический; Аи — антиген искомый. Рис.№7. Реакция преципитации для обнаружения противовирусных антигенов Препараты для специфической профилактики полиомиелита
Примечание: курсивом выделен более используемый препарат. Вопросы для самоконтроля:
Занятие 22 Цель: иметь представление о биологических особенностях возбудителей вирусных гепатитов. Изучить методы микробиологической диагностики вирусных гепатитов. Иметь представление о биологических особенностях возбудителя вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Изучить методы микробиологической диагностики ВИЧ. Вирусный гепатит А — антропонозное острое инфекционное заболевание, вызывается РНК содержащим вирусом гепатита А и характеризуется лихорадкой, поражением печени, интоксикацией. Вирус гепатита А — обозначается HAV (Hepatis A Virus) и относится к семейству Picornaviridae, к роду Enterovirus. Открыт Фейнстоном в 1973 году в фекалиях методом ИЭМ. Вирион гепатита А представляет однонитевую + РНК, окруженную белковой оболочкой. Как и другие представители семейства пикорнавирусов, имеет мелкие размеры 27 — 32 нм. Капсид состоит из 60 капсомеров, суперкапсидной оболочки не имеет. Вирус гепатита А не размножается в куриных эмбрионах и организме лабораторных животных. В отличие от других энтеровирусов плохо размножается в культурах тканей. Вирус устойчив к действию температуры (60 0 С в течение 12 часов), инактивируется при 100 0 в течение 5 минут. Быстро погибает при действии дезинфицирующих веществ. Источником инфекции являются больные с явной клинической картиной и со скрытой инфекцией. Вирус выделяется с фекалиями в течение последней недели инкубационного периода и в поджелтушном периоде. Хроническое носительство при гепатите А не установлено. Механизм передачи фекально — оральный. Пути передачи: через воду, пищу, предметы обихода. Нередко отмечаются водные вспышки заболевания в связи с фекальным загрязнением открытых водоемов. Распространен повсеместно, чаще в странах с дефицитом воды, с низкой санитарной культурой населения. Наиболее восприимчивы дети от 4 до 15 лет (60% заболевших — это дети до 14 лет). Исход благоприятный 90% полного выздоровления, после перенесенного заболевания формируется стойкий иммунитет. Вирусный гепатит Е антропонозная инфекция с фекально- оральным механизмом передачи и преимущественным поражением печени, вызывается вирусом гепатита E (HEV). HЕV — РНК содержащий вирус, выделен в отдельный род Hepevirus. Вирион безоболочечный, сферический, диаметром 27 — 34 нм. Геном – однонитевая плюс — РНК. Источник инфекции- больной человек. Механизм передачи фекально-оральный. Пути передачи — через пищу, воду. Инкубационный период 2 — 6 недель. Заболевание сопровождается умеренным поражением печени, интоксикацией, реже желтухой. Прогноз благоприятный. Заболевание тяжело протекает у беременных, летальность у них достигает 20%. Иммунитет после перенесенного заболевания стойкий. Возбудители парентеральных гепатитов. Гепатит В — антропонозная инфекция, вызываемая ДНК содержащим вирусом с преимущественным парентеральным механизмом заражения и поражением печени в виде острого и хронического гепатита с переходом в цирроз или первичный рак печени. Возбудитель гепатита В (HВV) относится к семейству Hepadnaviridae. В 1970 году Дейн впервые обнаружил частицы сферической формы в сыворотке крови больных гепатитом методом электронной микроскопии. Возбудитель гепатита В — ДНК- содержащий вирус, имеющий суперкапсид сферической формы, диаметром 42 нм. Сердцевина вируса Нвс, окружена оболочкой, содержащей поверхностный Нвs аг (австралийский аг). Таким образом при вирусном гепатите B обнаруживаются Нвs, Нвс, Нве, и иногда обнаруживается Нвx аг. Нвs – аг (австралийский аг) представляет собой гликопротеин с липидным компонентом, который содержится во внешней оболочке вируса. Нвс – является нуклеопротеином. Содержится в сердцевине вирионов, находится в ядрах гематоцитов, но не постоянно в крови. Нве – аг – отщепляетя от Нвс аг при прохождении через мембрану гепацитов, вследствие чего обнаруживается в крови. Вирусы чувствительны к эфиру, детергентам. Необычным свойством вируса является устойчивость к высокой температуре. Они выдерживают нагревание до 100 о с 1 – 2 мин., устойчивость повышается при нахождении в сыворотке крови. Источником инфекции являются больные с острой и хронической формами гепатита, а также вирусоносители. Основной путь заражения — парентеральный. Механизм передачи — при переливании крови, ее препаратов, массовые прививки, хирургические вмешательства, зубоврачебные манипуляции и пр). Заражение возможно при близком бытовом контакте, половым путем. Возможна передача вируса от матери плоду трансплацентарно, а также после родов через молоко, слюну и т.д. , т.е. почти все биологические жидкости больных гепатитом В содержат вирус. Вирус проникает в кровь парентерально, с кровью переносится в печень и размножается в гепатоцитах. Вирус гепатита D. был открыт в 1977 году Ризетто. Вирус гепатита D неклассифицирован. Было установлено, что ВГD является сателлитом вируса гепатита В, дефектным вирусом. Дефектом его является отсутствие собственной оболочки, поэтому для проявления патогенного действия он должен использовать оболочку вируса гепатита В. Вирион имеет сферическую форму, диаметр-36 нм, однонитчатую РНК, сердцевинный дельта антиген (НДс-антиген). Резервуаром вируса гепатита D являются носители ВГВ. Передается парентерально, также как и вирус В, но распространен реже. Вирус гепатита D может вызвать поражение печени лишь у людей, уже инфицированных вирусом гепатита В (супер-инфекция). Инфицирование вирусом гепатита больных с хроническим гепатитом В вызывает тяжелые формы заболевания с развитием печеночной недостаточности и цирроза печени. Одновременное заражение вирусом гепатита В и ГD (коинфекция) обычно приводит к развитию умеренной формы болезни. Диагностика заключается в выявлении антител к ВГD с помощью иммуноферментного метода. Разработана также полимеразная цепная реакция (ПЦР). Вакцина против гепатита В защищает и от гепатита D. Гепатит С. (иначе его называли гепатит ни А ни В). Вирус гепатита С относится к семейству Flaviviridae род Нерасivirus. Это РНКсодержащий вирус диаметром — 55 — 60 нм. вирион сферической формы. Вирус имеет сложную структуру. Имеет поверхностные гликопротеидные антигены, сердцевинный антиген (НСс-антиген). Источником инфекции являются больные и носители гепатита С.Пути передачи такие же, как для вируса ГВ. Наиболее часто заболевают лица после повторных переливаний крови. Антитела к вирусу гепатита С обнаружены у 0,5 — 1% доноров. Заболевание протекает легче, чем вызванное вирусом ГВ, лишь в четверти случаев сопровождается желтухой. Гепатит G. Вирус гепатита G предположительно относится к семейству к Feaviviridae к роду Hepacivirus. известно 5 генотипов вируса – GB-A, GB-B, GB-C и др. Микробиологическая диагностика вирусных гепатитов. Гепатит А Для лабораторной диагностики гепатита А применяются методы: ИЭМ (иммунной электронной микроскопии). Принцип метода ИЭМ основан на формировании комплексов антиген- антитело (при смешивании исследуемого антигена и заведомо известный специфической антисыворотки или заведомо известного антигена и исследуемой сыворотки). Образующиеся специфические комплексы выявляются в электронно- микроскопических препаратах. Основной метод диагностики серологический. Серологическая диагностика основана на использовании РИМ и ИФА обнаружении Ig M. Выявление в сыворотке больного анти- HAV Ig M дает основание установить диагноз гепатита А, т.к. антитела этого класса появляются еще в инкубационном периоде и сохраняются на протяжении 1,5- 6 мес. Ig G, обнаруживаемые в периоде реконвалесценции имеет анамнестическое значение. — серологический метод, с помощью ИФА в сыворотке крови определяют анти- HЕV антитела- Ig M и Ig G. — молекулярно- генетический метод, который заключается в определении РНК вируса с помощью ПЦР в кале и сыворотке крови больных в острой фазе инфекции. Гепатит B Диагностика основана на обнаружении специфических антигенов и антител с использованием ИФА (РИМ, РНГА): Нвs – аг, анти Нвs, Нве – аг, анти Нве, Нвс– аг, анти Нвс. Определяющим является обнаружение Нвs – аг, который выявляется в сыворотке больных через 3-5 недель от момента инфицирования и сохраняется в течение всей болезни. Наибольшее количество Нвs – аг в разгар заболевания продолжает оставаться на высоком уровне 2-3 месяца, исчезает через 6-8 месяцев. Обнаружение Нвs – аг через год свидетельствует о развитии хронического гепатита или бессимптомного носительства. Показателем острой инфекции является одновременное обнаружение Нвs – аг и Нве – аг. Присутствие в крови анти- Нвс – аг класса Ig M достоверно свидетельствует об остром гепатите В. Гепатиты C,D. Диагностируют серологическим методом в парных сыворотках путем постановки ИФА, и путем обнаружения вируса в крови с помощью ПЦР. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) относится к семейству ретровирусов. Имеется два типа ВИЧ- ВИЧ-1 и ВИЧ-2, вызывающие ВИЧ-инфекцию. ВИЧ-1 является основным возбудителем и вызывает до 90% ВИЧ-инфекции. ВИЧ-2 выделяют, в основном, в Западной Африке. Впервые ВИЧ-инфекция в своей финальной стадии описана в 1981 году в Калифорнии (США). Возбудитель был обнаружен французскими учеными под руководством Л. Монтанье в 1983 году, а затем независимо от него американскими исследователями под руководством Р. Галлов 1984 году. ВИЧ представляет собой сложный вирус сферической формы 100-120 нм в диаметре. Характерной особенностью вируса является наличие фермента обратной транскриптазы. В наружной двухслойной липидной оболочке имеются гликопротеиновые шипы, каждый из которых состоит из двух субъединиц – gp 41 и gp 120. Из них gp 120 находится на поверхности суперкапсида, а gp 41 погружен в оболочку. Под суперкапсидом находится сердцевина вируса, которая имеет форму усеченного конуса, в состав которого входят белки р 24 и р25. Промежуток между суперкапсидом и сердцевиной вируса заполнен матриксным белком, состоящим из р 17 и р18. Геном вируса — это две однонитчатые молекулы РНК со знаком +. Кроме генома в сердцевине находятся ферменты — обратная транскриптаза (ревертаза), интеграза и протеазы. Геном вируса имеет 9 генов, из которых 3 кодируют синтез белков вирусных частиц, а 6- являются регуляторными генами, обеспечивающими осуществление процессов репродукции и участие вируса в инфекционном процессе. Антигенными свойствами обладают белки сердцевины и оболочечные гликопротеины. Они характеризуются высокой изменчивостью, что объясняется высокой скоростью замен нуклеотидов. ВИЧ характеризуется невысокой устойчивостью к действию физических и химических факторов. Температура выше 56 С быстро и полностью инактивирует вирус. При комнатной температуре в жидкой и сухой среде сохраняется до недели. ВИЧ устойчив к высушиванию, в высохшей крови сохраняется до 7 суток. Мало чувствителен к действию УФ излучения. Вирус погибает быстро (в течение нескольких секунд) под действием 70% спирта, О,5% раствора формальдегида, 3% раствора перекиси водорода, О,5% раствора лизола, О, 2 % раствора гипохлорита натрия. Источником инфекции является инфицированный человек. Факторами передачи являются кровь, сперма, влагалищные и цервикальные выделения, грудное молоко. Слюна, моча, слезная жидкость также содержат ВИЧ, однако, количество вирусов недостаточно для заражения. Пути заражения: половой, парентеральный (через нестерильные инструменты, шприцы, при переливании инфицированной крови, кровезаменителей) и вертикальный — от зараженной матери к плоду. В мире 85-90 % случаев заболевания возникает при половых контактах, причем в 70% при гетеросексуальных контактах. Передача вируса от зараженной матери трансплацентарно, во время родов, при кормлении грудью происходит в 25-30 % случаев. Вирус иммунодефицита не проникает через неповрежденные кожные покровы. Нет опасности заразиться, купаясь в бане или бассейне. Заражение не происходит бытовым путем, вирус не передается при рукопожатии, соприкосновениях, при кашле, чихании, через продукты питания. Нет риска заразиться при пользовании общей посудой, ванной, общественным туалетом. Не доказана возможность передачи вируса через комаров. К вирусу иммунодефицита человека восприимчивы как женщины, так и мужчины независимо от возраста. Наиболее высокие показатели зараженности приходятся на возрастную группу от 20 до 39 лет. Вирус обладает иммунотропностью. Взаимодействие вируса с клеткой организма начинается со связывания gp 120 ВИЧ с рецептором CD4. ВИЧ избирательно поражает клетки, имеющие рецептор CD4 – Т хелперы, моноциты, макрофаги, клетки микроглии, т.е. иммунокомпетентные клетки. После проникновения вируса внутрь клетки и депротеинизации на +РНК вируса с помощью фермента обратной траскриптазы достраивается комплементарная нить ДНК. Затем под действием другого фермента рибонуклеазы у этой гибридной молекулы происходит расщепление исходной РНК. На оставшейся нити ДНК обратная транскриптаза синтезирует вторую цепь ДНК, используя первую как матрицу. Генетическая информация вируса уже в форме двухцепочечной ДНК проникает в клеточное ядро и с помощью фермента интегразы происходит « встраивание» (интеграция) геном а вируса в геном клетки. Эта вирусная ДНК, интегрированная в геном клетки называется «провирус». В таком состоянии вирус сохраняется годами в клетке, передаваясь при делении клетки их следующим поколениям. При этом у зараженных пациентов на протяжении 10-15 лет могут отсутствовать симптомы заболевания. Это интегративная, перманентная форма инфекции. В случае продуктивной инфекции в клетках под влиянием ферментов происходит синтез вирусных частиц и белковой оболочки, затем их сборка. При активной репродукции ВИЧ происходят множественные повреждения мембраны и клетка-хозяин погибает. ВИЧ-инфекция протекает в несколько стадий. Инкубационный период, составляющий от одной недели до трех месяцев, в среднем 2-4 недели. Стадия первичных проявлений — клинически эта стадия напоминает любую острую инфекцию. Длится эта стадия 2- недели и завершается бессимптомной инфекцией. Латентный период связан с тем, что вирус замедляет свою репликацию и переходит в состояние персистенции. Эта стадия может длиться 5-10 лет и более. Стадия вторичных заболеваний протекает с поражением дыхательной, нервной системы, желудочно-кишечного тракта. Терминальная стадия характеризуется кахексией, упорной диареей, адинамией, анемией, деменцией, снижением всех иммунных показателей с летальным исходом.
Самостоятельная работа
Рис. 8. Схема строения вириона ВИЧ
Твердофазный ИФА – наиболее распространенный вариант иммунологического теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антиела) сорбирован на твердом носителе, например в лунках планшеток из полистерола. При определении антител в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстратом, и субстрат (хромоген) для фермента. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем тщательного промывания. При положительном результате изменяется цвет раствора хромогена. Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителами. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, а затем субстрата для фермента.
Антиген выделяют с помощью электрофореза с полиакриламидном геле, затем переносят его (блоттинг — от англ. blot. пятно) из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоска с «блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем после инкубации отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченую ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс антиген+ антитело больного+ антитело против Ig человека выявляют довалением субстрата хромогена, изменяющего окраску под действием фермента. ИБ используют как дагностический метод при ВИЧ – инфекции и др. Препараты для специфической профилактики гепатитов
| ||||||||||||||||||