1. Обнаружение в патологическом материале вирусных оспенных частиц;
2. Выделение вируса на куриных эмбрионах;
4. Микроскопическое выявление в патологическом материале элементарных телец;
5. Заражение куриных эмбрионов, а в сомнительных случаях — проведение биопробы на чувствительных животных;
6. Индикацию вирионов оспы методом световой микроскопии;
7. Выделение вируса на куриных эмбрионах или на цыплятах;
8. Идентификацию выделенного вируса методом световой микроскопии, вирусоскопии, РИФ и РДП [1].
В ветеринарную лабораторию направляют 5…6 клинически больных или павших птиц (куры, индейки, голуби, канарейки и др.)
Из свежих оспин или с мест поражений слизистых оболочек птиц готовят на предметных стеклах тонкие мазки – отпечатки для микроскопического исследования. Одновременно отбирают патологический материал (эпителиомы, дифтерические наложения) для выделения вируса.
Отобранный патологический материал тщательно растирают в ступке со стерильным битым стеклом и готовят 10% — ную суспензию на стерильном физиологическом растворе с рН 7,2…7,4, которую затем обрабатывают в течение 12 ч при 4 градусах смесью в составе 500 ЕД/мл пенициллина, 250 мкг/мл стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина. После указанной обработки суспензию центрифунгируют 10 мин при 1500 об/мин и делают высевы на МПБ, МПА с целью исключения бактериальной контаминации.
Для обнаружения вирусных оспенных частиц приготовленные мазки – отпечатки подсушивают на воздухе, перед окраской выдерживают 10…15 мин в дистиллированной воде и окрашивают методом серебрения по Морозову или по методу Пашена. При микроскопическом исследовании мазков (окраска по Морозову) на светло – коричневом фоне препарата обнаруживают вирусные оспенные частицы в виде мелких круглых образований темно – коричневого или черного цвета, расположенных поодиночке, парно, короткими цепочками или скоплениями; при окрашивании препаратов по Пашену при наличии вирусных оспенных частиц в поле зрения микроскопа видны мелкие округлые образования темно – красного цвета.
Также вирус оспы птиц выделяют на 10…12 – суточных КЭ, полученных из хозяйства, благополучного по инфекционным болезням птиц. Из полученной и обработанной 10% — ной суспензии, свободной от контаминации микрофлорой, дополнительно готовят суспензию на физиологическом растворе 10-2 и 10-3 и затем каждым разведением в объеме по 0,2 мл заражают на хорионаллантоисную оболочку (ХАО) по 4 эмбриона. После заражения КЭ инкубируют в течение 6 сут в термостате при 36,5…36,7 о С и относительной влажности 60…70%. Эмбрионы ежедневно овоскопируют. КЭ, погибшие в первые 48 ч после заражения, не учитывают (неспецифическая гибель). Эмбрионы, погибшие на 3 – и сутки и позже и все оставшиеся живыми на 6 – е сутки после заражения, охлаждают в холодильнике при 4оС в течение 4…5ч, затем их вскрывают и просматривают состояние ХАО. В положительных случаях на ХАО обнаруживают отдельно расположенные или слившиеся оспины. При обнаружении на ХАО оспин надо учитывать, что вирус оспы кур вызывает образование на ХАО мелких плоских поражений, иногда обширных, беловатого цвета. Из оспенных поражений ХАО делают тонкие мазки или мазки – отпечатки на предметных стеклах и окрашивают методом серебрения по Морозову или по методу Пашена для выявления в них вирусных (оспенных) частиц.
В случае неясности результатов, полученных при выделении вируса в первом пассаже, проводят второй последовательный пассаж испытуемого вируса.
Биологическую пробу ставят в случаях получения сомнительных результатов исследований мазков – отпечатков и при выделении вируса на КЭ.
Биопробу проводят на неиммунных к вирусу оспы цыплятах 3…4 – месячного возраста, полученных из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням птиц. Суспензию исследуемого материала, приготовленную, как указано в п. 2.3, втирают в слегка скарифицированную поверхность гребня и в фолликулы голени сразу после выщипывания перьев. При наличии в исследуемом материале вируса оспы птиц на 5…6 – й день после заражения на гребне появляются характерные эпителиомы, а на голени – типичный для оспы фолликулит. При микроскопическом исследовании мазков – отпечатков, приготовленных из эпителиом гребня или из пораженных фолликулов голени и окрашенных методом серебрения по Морозову или по методу Пашена, обнаруживают вирусные оспенные частицы.
Лабораторный диагноз на оспу считают установленным в случаях: обнаружения в мазках – отпечатках из патологического материала вирусных оспенных частиц; выделения возбудителя оспы на КЭ; получения положительных результатов биологической пробы.
Сроки исследований: микроскопических – 1 день; выделение вируса на КЭ – 6 сут; при проведении второго пассажа – 12 сут; биологичкой пробы – 8 сут. [2].
Библиографический список
Барышников, П. И. Ветеринарная вирусология [Текст] : учебное пособие для студ. вузов, обучающихся по спец. 111201 — «Ветеринария» : рек. УМО по образованию / П. И. Барышников. — М. : ФОРУМ, 2009. – С. 14 – 16.
Барышников, П.И. Лабораторная диагностика вирусных болезней животных [Электронный ресурс] : учеб. пособие / П.И. Барышников, В.В. Разумовская. — Санкт-Петербург : Лань, 2015. — С. 443 – 446.
источник
Оспа млекопитающих и птиц – острая контагиозная болезнь, протекающая с характерными стадийными поражениями кожи различных участков тела и слизистых оболочек.
Особенностью патологических изменений при оспе является их стадийность: розеола (локальное покраснение участка кожи), папула (уплотнение участка кожи за счет клеточной инфильтрации), везикула (наполнение его везикулярной серозной жидкостью), пустула (переход серозного воспаления в гнойное) и круста (появление корочек на месте поражения). У птиц, кроме того, выделяют дифтеритическую форму с фибринозным поражением слизистой оболочки носовой и ротовой полостей.
Возбудителями оспы животных являются вирусы из семейства Poxviridae, подсемейства Chordopoxvirinae различных родов: Orthopoxvirus – возбудители оспы у коров, человека, лошадей, кроликов и др., Avipoxvirus – птиц (прежде всего кур), Capripoxvirus – овец и коз, Suipoxvirus – свиней, Leporipoxvirus – вирусы миксомы и фибромы кроликов, Parapoxvirus – параоспенные вирусы. Вирусы различных родов отличаются по биологическим свойствам, главным из которых является спектр патогенности – первый из названных считается полиэтиологическим, то есть способным вызывать оспу у широкого спектра хозяев.
Все оспенные вирусы являются ДНК-геномными и содержат в составе вириона фермент для собственной транскрипции. В этой связи все вирусы данного семейства, не нуждаясь в клеточных ферментах транскрипции, реплицируются в цитоплазме клеток. Другими отличительными особенностями вирусов оспы является их большой размер, сопоставимый с размерами мельчайших бактерий, и они могут быть обнаружены световой вирусоскопией. Для вирусов оспы характерно наличие сложного типа симметрии, который обусловлен присутствием двух дополнительных структур, входящих в состав вириона. Они представляют собой мембраны, наружная из которых большей толщины и имеющая большое количество полых винтообразных филаментов. Нуклеоид в центре вириона имеет характерную двояковогнутую форму. Все вышеотмеченные особенности строения придают зрелому вириону оспы характерную кирпичеобразную форму (обнаруживается в электронном микроскопе).
Вирусы млекопитающих довольно сложно культивировать в лабораторных условиях: на ХАО развивающихся куриных эмбрионов они с трудом культивируются после предварительной адаптации с образованием характерных оспин, способны репродуцироваться в культурах клеток почек и тестикул эмбриона. Лучшим объектом для культивирования вирусов оспы млекопитающих являются естественно восприимчивые животные.
В антигенном отношении различные вирусы оспы млекопитающих идентичны в пределах родов. В основном вирусы оспы млекопитающих гемагглютинирующими свойствами не обладают; вирусы оспы птиц способны агглютинировать эритроциты кур отдельных пород, однако РТГА и РГА в практике используют очень редко.
Диагноз на оспу ставят клиническим методом, однако для его подтверждения проводят лабораторное исследование.
Отбор патматериала. Для исследования берут содержимое везикул и пустул, поверхность которых предварительно очищают ватным тампоном, смоченным в эфире или спирте. Прокол и отбор везикулярной жидкости проводят с помощью пастеровской пипетки, после чего конец ее запаивают. Папулы соскабливают скальпелем. Патологический материал должен быть доставлен в лабораторию в замороженном или охлажденном (4-6ºС) виде. Также его допускается консервировать в 10%-ном растворе глицерина.
Одновременно с отбором патматериала на месте готовят мазки из везикулярной и пустулезной жидкости для последующего вирусоскопического исследования. Для этого поверхности везикул или пустул осторожно срезают бритвой и внутренней поверхностью среза однократным движением проводят по предметному стеклу. После приготовления мазки высушивают на воздухе.
Также отбирают материал из измененных участков кожи на границе с неизмененной для гистологического исследования, который помещают в 10%-ный раствор формалина.
Подготовка материала заключается в получении суспензии для заражения животных. Готовят 10%-ную суспензию на физиологическом растворе, после чего ее центрифугируют при 2 тыс об/мин в течение 15 мин. Затем к надосадочной жидкости добавляют 500 ЕД/мл пенициллина, 250 мкг/мл стрептомицина, 50 ЕД/мл нистатина и выдерживают 12 часов при 4ºС.
Лабораторная диагностика оспы заключается в:
— обнаружении возбудителя в мазках методом световой микроскопии;
— постановке биопробы на животных (в случае получения отрицательного или сомнительного результата первого метода).
Обнаружение вируса в патматериале осуществляют методом световой вирусоскопии препаратов-отпечатков, окрашенных по Морозову. В положительном случае в мазках из пораженных участков кожи обнаруживают характерно расположенные вирионов в виде россыпи.
Одновременно с обнаружением элементарных телец параллельно проводят гистологическое исследование материала из пораженных участков. При этом обнаруживают цитоплазматические оксифильные (оспа овец и коз) или ацидофильные (оспа свиней) включения, внутриядерные вакуоли, гиперплазию эпидермиса кожи.
Положительный результат вирусоскопического исследования дает основание на постановку окончательного диагноза на оспу. При получении сомнительного или отрицательного результатов вирусоскопии проводят постановку биопробы на естественно восприимчивых животных.
Биопроба в диагностике оспы млекопитающих заключается в заражении естественно восприимчивых животных, причем выбор объекта заражения зависит от вида животных, у которых диагностируют болезнь. В качестве тест- объекта для постановки биопробы используют молодых неиммунных овец и коз, поросят 2-3- месячного возраст или кроликов. Экспериментальных животных заражают внутрикожно в бесшерстную поверхность хвоста в дозе 0,1-0,15 мл (овцы, козы) или путем скарификации надосадочной жидкостью в объеме 0,6 мл в кожу живота (свиньи) или на поверхность роговицы глаза (кролик). Биопробу считают положительной в случае развития на месте введения местного оспенного процесса через 6-8 дней. Специфичность патологического процесса в ходе постановки биопробы подтверждают вирусоскопическим исследованием мазков, приготовленных из срезанного оспенного узелка.
Кроме вирусоскопического метода в практике рекомендовано использование РИД для обнаружения вирусного антигена в патматериале.
Серодиагностику и ретроспективную диагностику оспы проводят редко.
Лабораторная диагностика оспы птиц. Для исследования в лабораторию направляют свежие оспенные поражения с лицевой части головы (гребень, бородки, сережки) или свежие дифтеритические поражения гортани и трахеи. Одновременно с отбором патматериала для вирусологического исследования готовят мазки из пораженных участков для вирусоскопического исследования. Фиксацию мазков проводят на месте, помещая их в смесь спирта и эфира на 3 мин.
Лабораторная диагностика оспы птиц включает:
— обнаружение вирионов в мазках из патматериала;
— выделение вируса на РКЭ и курах с последующей его идентификацией;
— выявление специфических антител в крови переболевшей птицы.
Обнаружение вирионов оспы птиц (элементарные тельца Борреля) проводят при исследовании вирусоскопическим методом мазков, окрашенных по Морозову. Параллельно с обнаружением вирионов оспы исследуют мазки, получаемые путем раздавливания оспенных поражений между двумя стеклами и окрашенные суданом III в течение 10-15 мин. В положительных случаях обнаруживают специфические тельца-включения (тельца Боллингера) в цитоплазме клеток.
Выделение вируса оспы птиц осуществляют путем заражения 10%-ной суспензией, свободной от микрофлоры, развивающихся куриных эмбрионов. Для этого предварительно готовят разведения суспензии (10 -2 и 10 -3 ) и заражают четырех эмбрионов на ХАО в объеме 0,2 мл. Погибшие эмбрионы на 3-е сутки, а также выжившие на 6-е сутки охлаждают и вскрывают. В положительных случаях на ХАО обнаруживают отдельно расположенные или слившиеся оспины.
Выделение вируса оспы птиц также осуществляют путем постановки биопробы на курах 3-4- месячного возраста, которых заражают путем втирания суспензии в скарифицированную поверхность гребня, бородок, а также свободные от перьев фолликулы голени. Специфичность оспенных поражений у экспериментально зараженной птицы подтверждают вирусоскопическим методом.
Идентификацию вируса проводят в РИД или РИФ. Указанные серологические реакции могут также быть использованы для обнаружения и идентификации вируса непосредственно в патматериале.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика оспы птиц заключается в обнаружении специфических антител реакцией иммунодиффузии в агаровом геле. Антигеном в реакции служат хорион-аллантоисные оболочки, собранные на 4-5-й день после заражения развивающихся куриных эмбрионов.
Лейкоз крупного рогатого скота — хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, при которой происходит злокачественное размножение клеток кроветворных органов, в результате чего наблюдается диффузная инфильтрация внутренних органов инфицированными клетками. Лейкоз в основном встречается у взрослых животных, наиболее часто в возрасте 5-8 лет. При этом развитие болезни характеризуется стадийностью: инкубационный период, бессимптомная стадия (серологическая), гематологическая и опухолевая. Инкубационный период при лейкозе варьирует в больших временных промежутках. На клеточном уровне представляет собой период инфекции после заражения до появления антител. В этот период происходит инфицирование лимфоцитов и нахождение провируса в интегрированном состоянии.
Серологическая стадия характеризуется выработкой антител со стороны организма и продолжается до момента начала усиленного размножения инфицированных лимфоцитов. При опухолевой стадии происходит инфильтрация внутренних органов инфицированными лимфоцитами – диффузно или локально с появлением опухолей. При этом в патологический процесс может вовлекаться костный мозг или лимфоидная ткань, что дало возможность разделять две группы лейкозов. В связи с тем, что неопластической трансформации подвержены различные популяции лимфоцитов, выделяют несколько форм лейкозов. К первой группе лейкозов (с локализацией патологического процесса в костном мозге) относят лимфоидный, миелоидный, слабодифференцированный и недифференцированный лейкозы. К болезням второй группы (с локализацией патологического процесса в лимфоидной ткани) относят лимфосаркому, ретикулосаркому и лимфогранулематоз.
Возбудителем лейкоза КРС является вирус из семейства Retroviridae рода Deltaretrovirus. Все вирусы, входящие в данное семейство, имеют в составе вириона фермент — обратную транскриптазу — обеспечивающий синтез молекулы ДНК на молекуле РНК. Другой отличительной особенностью ретровирусов является их репликация через стадию образования двунитчатой молекулы ДНК (провирус) на вирусной РНК при участии вышеотмеченного фермента с последующей ее интеграцией в клеточный геном клетки-мишени. Созревание вирионов происходит путем почкования на клеточных мембранах, чаще без разрушения клеток-хозяев.
В жизненном цикле вируса лейкоза КРС (ВЛКРС) выделяют две его формы: эндогенную и экзогенную. Первая из них представляет собой интегрированный вирусный геном в геном клетки (состояние провируса). Распространение эндогенной формы вируса в организме животного происходит при делении инфицированной клетки и представляет собой передачу вирусного генетического материала дочерним клеткам. Данный путь распространения называется вертикальным неинфекционным путем распространения. Экзогенный онковирус представляет собой зрелую вирусную частицу, распространяющуюся горизонтальным путем (от животного к животному) и вертикальным инфекционным, который в отличие от вертикального неинфекционного характеризуется заражением половых клеток или клеток эмбриона от матери.
В составе вириона присутствуют несколько групп белков, наиболее важными из которых в антигенном отношении является внутренний вирионный белок р24, а также наружный структурный гликопротеин gp51. На наличие внутреннего антигена в организме формируются преципитирующие антитела, а поверхностного гликопротеидного антигена – вируснейтрализующие антитела. Клеткой-мишенью для ВЛКРС является В-лимфоцит, реже – Т-лимфоцит, в геном которых одновременно интегрируется около трех копий ДНК-провируса Провирус изменяет экспрессию клеточных генов, в частности onc гена, вблизи которого происходит интеграция вирусной нуклеиновой кислоты. В результате активизации onc гена начинается усиленное размножение лимфоцитов (трансформация). Кроме того, провирус способен длительно персистировать в организме в интегрированном состоянии. В этом виде вирус обычно защищен от действия антител. Защита организма от инфицирования обусловлена выработкой на поверхностные вирионные гликопротеиды (главным образом gp51) вируснейтрализующих антител. Однако даже при их наличии возможно сохранение и размножение вируса в лимфоцитах, инфильтрирующих ткани в местах, не доступных для действия противовирусных антител.
Лабораторная диагностика лейкоза КРС включает в себя серологическое, гематологическое и гистологические исследования.
Отбор патматериала. Для гематологического исследования берут пробы крови из яремной вены, стабилизированные 10%-ным раствором ЭДТА из расчета 0,02 мл (1 капля) на 1 мл крови. Для гематологического исследования отбирают пробы крови от животных старше 2 лет. Не разрешается брать кровь от животных 15 дней до отела и 15 дней после него.
Для серологического исследования отбирают пробы сывороток крови от животных старше 6-месячного возраста. При этом в лабораторию направляют 5-6 мл сыворотки в термосе со льдом. Для гистологического исследования отбирают пробы пораженных органов и посылают в свежем виде в термосе со льдом или консервируют 10%-ным формалином.
Серологический метод заключается в постановке РИД в агаровом геле, с помощью которой выявляются противолейкозные антитела в сыворотке крови. Животных, сыворотки которых дали положительный результат в РИД, считают инфицированными вирусом лейкоза, после чего их дополнительно исследуют гематологическим методом.
Гематологический метод основан на обнаружении в периферической крови повышенного количества лейкоцитов, главным образом, лимфоидного ряда и слабо дифференцированных клеток.
Повышенное количество лейкоцитов устанавливается путем их подсчета в камере Горяева после обработки крови жидкостью Тюрка по обычной методике. При обнаружении лейкоцитоза из этой же пробы крови готовят мазок на стекле, окрашивают одним из методов (по Романовскому-Гимзе, Паппенгейму, Нохту) и выводят лейкограмму. После этого высчитывают абсолютное число лимфоцитов в крови путем умножения количества лейкоцитов на процент лимфоцитов в лейкограмме. Интерпретацию результатов проводят с использованием лейкозного ключа.
Гистологический метод является вспомогательным в диагностике лейкоза и основан на обнаружении инфильтрации внутренних органов лимфоцитами различных популяций. Гистологический метод дает возможность дифференцировать различные формы лейкоза.
Животное считается больным лейкозом при наличии:
— положительного результата однократного гематологического исследования;
— клинических признаков болезни;
— положительного результата гистологического исследования патологического результата.
источник
Оспа птиц (Variolaavium, оспа-дифтерит птицы) — контагиозная болезнь, характеризующаяся образованием на коже специфических оспин, а на слизистых оболочках полости рта, верхних дыхательных путей и конъюнктиве глаз — дифтеритический пленок и наслоений.
Историческая справка. Оспа известна еще с XVIII в., Когда Гузард подробно описал это заболевание в 1775 г. под названием «конъюнктивит кур». Возбудитель болезни впервые установили в 1902 г. Е. Маркс и И. Штиккер. После этого на протяжении двух десятилетий господствовало мнение, что оспа и дифтерит, означающие две формы клинического проявления одной болезни, являются двумя различными болезнями (Борде, фале, 1910). И только в 1935 г. было доказано единую природу их возбудителей и заменено название болезни «оспа-дифтерит» на «оспу». В 1904 г. А. Бо-ррель обнаружил в коже больного оспой птицы элементарные тельца (ви-Риони) вируса, которые стали называть «тельцами Борреля». Другие внутриклеточные включения, которые были открыты Боллингером, впоследствии приобрели диагностического значения и были названы его именем, представляют собой накопление десятков тысяч вирионов.
Заболевания птицы оспой регистрируется во многих странах мира. Экономический ущерб, который наносит оспа птицы, связанные с высокой летальностью (15 — 60%), длительным снижением несущей, низким выходом птенцов при инкубации, значительными затратами на проведение карантинно-ограничительных и ветеринарных мероприятий по ликвидации заболевания. Над разработкой мер профилактики и борьбы с оспой птицы плодотворно работали И. Н. Дорошко, Н. В. Ли-хачов, А. Б. Байдевлятов, В. Ф. Зборщенко.
Возбудитель болезни — ДНК-геномный вирус из семейства Poxviridae, рода Avipoxvirus. Имеет цеглиноподибну форму с округлыми краями, размеры 170 х 350 нм, сложный тип симметрии. В пораженных тканях вирус проявляется в виде телец Борреля или телец Боллингера. Окрашенные по Пашена вирионы оспы проявляются при среднем увеличении под световым микроскопом. Различают следующие антигенные виды вируса, как вирус оспы кур, вирус оспы голубей, вирус оспы канареек, вирус оспы индюков, вирус оспы скворцов. Возбудитель оспы хорошо культивируется на хорион-алантоисний оболочке в 10 — 12-дневных куриных эмбрионах и в культуре клеток фибробластов куриного эмбриона.
Вирус оспы очень устойчив во внешней среде. Оспинки, отступивших из кожи, сохраняют свою заразительность при рассеянном свете до 2 мес, на зерне — до 180 суток, в птичнике — до 158 суток, на земляном полу — до 120 суток, на поверхности перьев и пуха — 182 суток, в водопроводной воде — до 90 суток. При температуре — 15 ° С вирус остается жизнеспособным до 2 лет, в лиофилизированном состоянии под вакуумом — до 8 лет. Солнечный свет разрушает вирус через 1 — 7 суток, нагревание до 56 ° С — через ЗО мин, кипячение — через 55 мин. Чувствителен к этилового спирта, быстро погибает при гниении.
Эпизоотология болезни. Оспой болеют куры, индюки, голуби, цесарки, куропатки, павлины, фазаны и мелкие певчие птицы. Более чувствительны молодые птицы, особенно в период полового созревания. Заболевания цыплят в возрасте до 30 дней наблюдается очень редко. Утки и гуси мало-восприимчивы к вирусу оспы. Источником возбудителя инфекции является больной и переболевшая птица, которая в течение 2 мес после выздоровления выделяет вирус с оспенных корочками, фекалиями, слизью из ротовой и носовой полостей, истечениями из глаз. Факторами передачи возбудителя могут быть контаминированы возбудителем корма, вода, яйца, подстилка, инвентарь, предметы ухода за птицей, одежду и обувь обслуживающего персонала. Вирус может распространяться через жалящих и кровососущих насекомых и клещей. Заражение происходит контактно при совместном содержании больной и здоровой птицы, перорально и респираторным путем.
В организм вирус попадает через поврежденную кожу и слизистые оболочки ротовой полости и пищевода. Первичное возникновение в хозяйстве оспы птицы чаще обусловливается занесением возбудителя болезни извне. В таком случае энзоотии оспы проявляется быстрым распространением болезни, которая на протяжении 2 — 3 недель охватывает большую часть поголовья. Большая скученность птицы, недостаточная вентиляция, гиповитаминоз А способствуют осложнению болезни секундарной микрофлорой, обусловливают высокую летальность — до 70% и более. Заболевания в стадии длится 3 — 4 недели. Переболевшая птица становится устойчивой против последующей инфекции в течение 1 — 2 лет. Поэтому инфекция угасает, однако, постоянно поддерживаясь вирусоносителями и возбудителем по окружающей среде, приобретает стационарного характера. В стационарных ячейках оспа проявляется только среди нового неиммунного молодняка птицы, чаще осенью, зимой и весенней поры на фоне неблагоприятных условий содержания и неполноценного кормления. Такая эпизоотическая особенность оспы значительно затрудняет борьбу с инфекцией и требует решительных действий для окончательной ее ликвидации.
Патогенез. После проникновения в эпителиальные клетки поврежденной кожи или слизистых оболочек вирус быстро размножается, попадает в кровь, вызывая виремии и генерализацию процесса. С током крови возбудитель болезни разносится по всему организму и на 7 — 15-е сутки оказывается в почках, селезенке, головном мозге, а также в оспины. Характерной особенностью патогенетического действия вируса оспы является образование специфических эпителия на гребне и бородке и дифтеритический пленок на слизистых оболочках ротовой полости, гортани, трахеи. Дифтеритическое наслоения нередко становятся причиной затруднения дыхания, удушья и даже гибели больной птицы. В органах и тканях переболевших кур вирус персистирует до 487 суток.
Клинические признаки и течение болезни. Дифтеритическое форма имеет более медленный ход, сопровождающийся образованием на слизистой оболочке ротовой полости, глотки, языка, а иногда гортани и пищевода, дифтеритический пленок, имеющих вид серовато-желтых налетов и плотно прилегают к слизистой. После удаления пленок обнажаются кровоточащие эрозии и язвы, которые вскоре снова покрываются пленками. В заболевшего птицы наблюдают затруднено, с сопением, дыхания, истощение, малоподвижность, трудности в приеме кормов и воды, резкое снижение яйценоскости. Нередко заболевание осложняется секундарной микрофлорой, что значительно ухудшает общее состояние птицы. Выздоровление наступает в конце 5 — 6-й недели. В переболевшей птицы очень медленно восстанавливается яйценоскость.
При смешанной форме болезни оказывается одновременное поражение кожи и слизистых оболочек. Течение заболевания тяжелое, часто заканчивается гибелью. В части птицы оспа приобретает хроническое течение, сопровождается резким похуданием, удушьем, часто осложняется энтеритом, что приводит к полному истощению и гибели.
Патологоанатомические изменения. Наиболее характерные на коже и слизистых оболочках и отображают клиническую форму перенесенной болезни. У птицы, в отличие от оспенных поражений млекопитающих, отсутствуют типичные пустулы с углублением в центре. Дифтеритическое поражение слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, гортани, трахеи, бронхов, воздухоносных мешков имеют вид сырообразных налетов желто-серого или бурого цвета. Воздухоносные мешки и трахея иногда заполнены фибринозной массой. При гистологическом исследовании обнаруживают набухание и увеличение в объеме эпителиальных клеток, в которых у ядра определяются тельца-включения Боллингера, представляющие покрытые липопротеидной оболочкой колонии вируса оспы.
Диагноз основывается на анализе эпизоотологических, клинических данных, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований.
Лабораторная диагностика. Включает световую и электронную вирусоскопию мазков из патологического материала для обнаружения элементарных телец Борреля и телец-включений Боллингера; выделение вируса из патологического материала в куриных эмбрионах или в культурах клеток фибробластов куриных эмбрионов; индикацию и идентификацию вируса оспы в патологическом материале, взятом от больной птицы, а также в околоплодной жидкости инфицированных куриных эмбрионов и первичной культуре клеток фибробластов с помощью серологических реакций — реакции иммунофлюоресценции (РИФ) и реакции диффузной преципитации (РДП) в агаровом гели, проведение биологической пробы на 3 — 4-месячных цыплятах.
В лабораторию для исследования направляют 5 — 6 клинически больных птиц (кур, индеек, голубей, цесарок). Из свежих оспин или дифтеритический поражений слизистой оболочки гортани и трахеи готовят мазки-отпечатки и окрашивают их серебрением по Морозову или по Пашена. Во время микроскопического исследования оспенные вирионы выявляются в виде круглых или цеглиноподибних образований черного или темно-коричневого цвета, размещенных поодиночке, попарно, короткими цепочками или скоплениями. В окрашенных по Пашена препаратах определяются мелкие круглые оспенные вирионы темно-красного цвета.
Для выделения вируса оспы проводят заражения ХАО 10 — 12-дневных куриных эмбрионов 10%-ю суспензией патологического материала, взятого от больных птиц. Через 3 — 6 суток инкубации все погибшие куриные эмбрионы или охлажденные при 4 ° С вскрывают и исследуют на наличие оспенных поражений на ХАО. Вирус оспы кур вызывает образование на ХАО мелких плоских поражений, иногда с неровными краями, серовато-белого цвета; вирус оспы голубей — толстых, крупных, припиднятих посередине оспенных поражений и желеобразного отек всей оболочки (вид медузы); вирус оспы индюков — слабо определенных очаговых оспин, часто окруженных кольцеобразной зоны поражения. Мазки-отпечатки с оспенных поражений ХАО окрашивают и исследуют под микроскопом для выявления вирусных элементарных телец и телец-включений. Изготовленную из оспенных поражений хорион-алантоиснои оболочки суспензию исследуют с помощью РДП со специфическими преципитувальнимы сыворотками для идентификации вирусного антигена. В сомнительных случаях прибегают к биопробы на неиммунных к вирусу оспы молодых курах 3 — 4-месячного возраста, которым патологический материал втирают в скарификовану поверхность кожи гребня и бородок или в перьевые фолликулы голени сразу после выщипывания перьев. В случае наличия в исследуемом патологическом материале вируса оспы через 5 — 7 суток после заражения на коже гребня и бородок появляются характерные оспины, а на голени развивается типичный для оспы фолликулит. Во время микроскопического исследования окрашенных мазков-отпечатков с оспин и пораженных перьевых фолликулов голени проявляют оспенные вирионы. Патологический материал из соскобов гребня и перьевых фолликулов исследуют с РДП на специфичность.
Для установления диагноза большое значение имеет выявление пато-гномоничних телец-включений Боллингера. Для этого из пораженных очагов кожи и слизистой оболочки делают очень тонкие срезы, раздавливают их между двумя предметными стеклами и окрашивают Суданом-3. Во время микроскопического исследования тельца-включения Боллингера определяются в протоплазме клеток в виде окрашенных в желтый цвет круглых накоплений вирионов с равномерной зернистостью.
Дифференциальная диагностика. Предусматривает исключение инфекционного ларинготрахеита, пастереллеза, гиповитаминоза А, аспергиллеза, кандидомикоза. При инфекционном ларинготрахеите кур наблюдается быстрое распространение болезни, острый ее течение, никогда не бывает поражений кожи. Пленки на слизистой оболочке легко снимаются, не кровоточат. Нахождение под микроскопом цитоплазматических телец-включений Боллингера в раздавленных срезах с пораженной кожи или слизистой оболочки позволяют быстро и надежно дифференцировать оспой от инфекционного ларинготрахеита кур. За острого течения пастереллеза характерные явления геморрагического диатеза; посевы из крови и органов трупов птицы дают возможность уже через сутки выявить биполярные бактерии и выделить возбудителя болезни. Хроническое течение пастереллеза сопровождается поражением суставов и сережек, на вскрытии устанавливают бронхопневмонию. Во время бактериологического исследования выделяется культура пастерел. Дифтеритическое форму оспы нужно отличать от авитаминоза А, при котором пленки снимаются очень легко, не оставляя кровоточащих язв. Кроме того, при авитаминозе на слизистой оболочке пищевода образуются многочисленные узелки величиной с просяное зерно, а при оспе — большие дифтеритическое наслоения. При гипоавитаминози А не бывает кожных поражений, в эпителиальных клетках не выявляются тельца-включения Боллингера. А с-пергильоз и кандидамикоз устанавливают на основании результатов микологических исследований — микроскопического выявления мицелия грибов и выделение чистой культуры соответствующего возбудителя на среде Чапека, агаре Сабуро или сусло-агаре.
Лечение. Специфических методов лечения оспы не разработано. Больному птицы добавляют в корма зелень, морковь, сенная мука. При дифтеритический форме пленки со слизистых оболочек ротовой полости удаляют, эрозионные поверхности смазывают эмульсией пенициллина на рыбьем жире, йод-глицерином или пиоктанином. Рекомендуются внутримышечные инъекции 40%-го раствора уротропина из расчета 0,6 — 1,0 г / кг массы или террамицин в дозе 1 мг / кг.
Иммунитет. В переболевшей оспой птицы длится 2 — 3 года. Для проведения предохранительных прививок против оспы предложено сухую вирусвакцину из вируса оспы голубей из штамма НД. Вакцину применяют для прививок цыплят с 1 — 1,5-месячного возраста путем втирания в перьевые фолликулы голени. Иммунитет наступает через 3 недели и продолжается у цыплят до 3 мес, у взрослых кур — до 10 мес.
Профилактика и меры борьбы. Основываются на организации защиты птицеферм от заноса возбудителя оспы, своевременной диагностике заболевания, выявлении и ликвидации источника возбудителя болезни и факторов его распространения. Особое внимание следует уделять выполнению зоогигиенических и ветеринарно-санитарных мероприятий при удержании молодых цыплят, обеспечению птицы полноценными рационами, своевременному проведению предупредительных прививок против оспы в неблагополучных хозяйствах.
В случае появления заболевания птицеферму объявляют неблагоп-лучной и вводят карантин с запретом вывоза птицы и яиц для инкубации. Всю больную и подозреваемую по заболеваемости оспой птицу, а также слабую молодежь птицы забивают на санитарной бойне. Условно здоровую птицу, которая не имеет клинических признаков болезни, используют на мясо. Клинически здоровых кур прививают вирусвакциною оспы голубей из штамма НД. После удаления птицы проводят тщательную очистку и дезинфекцию птичника и оборудование 2%-м раствором гидроксида натрия, 20%-ю суспензию свежегашеной извести, просветленным раствором хлорной извести, содержащей 2% активного хлора, 2% раствором формальдегида. Ограни-из неблагополучной птицефермы снимают через 2 мес после ликвидации заболевания и проведения окончательной дезинфекции.
источник
Оспа птиц — Avian pox ( Avian Diphtheria ). Синонимы: контагиозная эпителиома, дифтерия птиц, злокачественный катар индеек, синусит индеек, заразная болезнь глаз индеек, кожная бугорчатка, ложноперепончатая ангиома, «моллюск» птиц.
Оспа птиц — это контагиозное вирусное заболевание, которое проявляется развитием оспенной экзантемы на неоперенных участках кожи ног, головы, на гребне, сережках, мочках, вокруг клюва и носовых отверстий, а также образованием дифтероидных поражений на слизистой ротовой полости, органов дыхания и глаз.
Историческая справка, распространение и экономический ущерб. Впервые оспа была описана в 1775 г. под названием заразного конъюнктивита. Длительное время внимание уделялось в основном дифтеритической форме болезни, оспенная — с поражением кожи — считалась не столь актуальной. Но затем регистрация в одном и том же стаде оспенных и дифтеритических поражений кожи и внутренних органов послужила основанием считать эти болезни тождественными. Вспышки оспы кур отмечают в ряде стран всех материков мира. Эта болезнь существует и в России, в основном на юге нашей страны, и наносит существенный экономический ущерб птицефабрикам, особенно когда заболевание протекает в респираторной форме. Экономический ущерб в основном складывается из смертности птицы (до 50-70%), выбраковки больной птицы (до 30%), снижением выводимости (до 80%), и яйценоскости (в 5 раз).
Возбудитель. Вирус оспы птиц из семейства Avipoxviridae, рода Avipoxvirus. Вирус содержит 3,2% ДНК и 91,9% РНК. Величина вируса составляет 260-390 нм. Вирус во внешней среде остается жизнеспособным очень длительное время. В сухом эпителии при температуре 37-38°С сохраняется 8 дней, при 0-6°С — 8 лет, при минусовой температуре, ниже -15°С — 15 лет. В оспенных корочках при -15°С возбудитель не теряет вирулентность более 2 лет, на поверхности пуха и пера — 195 дней, на скорлупе яиц — 59 дней, в водопроводной воде — 66 дней. Вирус неустойчив к действию солнечного света, кислот, а также к присутствию в патологическом материале гнилостных бактерий, ускоряющих распад тканей и разрушение вируссодержащих клеток. От прямых солнечных лучей вирус погибает в течение 6-11 ч. Инактивируется 1%-ным раствором едкого калия, сулемы, уксусной кислоты за 5 мин, 70-75%-ным этиловым спиртом за 10 мин, 50% -ным спиртом — за 30 мин.
Вирус оспы птиц агглютинирует эритроциты кур, кроликов, морских свинок, буйволов, овец, ослов, коз.
Установлено 4 вида оспы птиц: вирус оспы кур, вирус оспы индеек, вирус оспы голубей и вирус оспы канареек. Вирусы оспы кур, индеек и голубей антигенно родственны, а иммунологическая характеристика вируса канареек отличается от вирусов оспы кур и голубей. Антигенная структура вируса оспы птиц идентична таковой вируса оспы коров, экромиелии мышей, миксоматоза кроликов.
Штаммы вируса подразделяются на высокопатогенные и природноослабленные.
Эпизоотологические данные. Оспа установлена у кур, индеек, цесарок, павлинов, голубей, куропаток, перепелов, попугаев, канареек, воробьев, зябликов, чаек, страусов, у хищных птиц, реже встречается у гусей, уток.
Источником инфекции является больная и переболевшая птица. Вирус оспы попадает во внешнюю среду с отпадающим детритом кожного эпителия, с выделениями из ротовой и носовой полостей, из глаз и с пометом. Поэтому корм, вода, инвентарь, подстилка, яйца, инкубационные и боенские отходы, инфицированные вирусом, также являются источником инфекции.Переносчиками вируса могут быть дикая птица, грызуны, кровососущие насекомые. Воротами инфекции служат ссадины кожи и слизистых оболочек.
Зачастую оспа регистрируется как стационарно протекающая инфекция и зависит от содержания вируса во внешней среде и от его вирулентности. У кур заболевание чаще встречается в возрасте 4-12 месяцев.
У индеек оспа чаще протекает хронически и может наблюдаться в хозяйстве месяцами. Смертность индеек от оспы зависит от формы течения болезни и может достигать 50% и более.
Канарейки болеют оспой в очень тяжелой форме, при этом наблюдается массовая гибель птицы. Течение болезни может быть сверхострое, острое и хроническое.
Патогенез. После проникновения в организм вирус оспы распространяется в ткани, окружающие место внедрения, а через 24-48 ч с током крови попадает в различные органы. Оспа птиц развивается как циклическая инфекционная болезнь. Местное поражение и разрастание патологической ткани у «ворот» инфекции переходит в первую фазу виремии, в результате которой вирус попадает во внутренние органы, где репродуцируется и накапливается. Вторая фаза виремии сопровождается широким распространением вируса с поражением кожи и слизистых оболочек.
Клинические признаки. Инкубационный период болезни у кур составляет 4-14 дней. Оспа птиц проявляется в кожной (наиболее типичной), дифтеритической, смешанной (наиболее часто встречаемой) и атипичной (с поражением внутренних органов) формах. Оспа кур при кожной и смешанной формах характеризуется поражением в области клюва, век, на гребне, сережках и других бесперьевых участках тела в виде круглых, сначала бледно-желтых, а затем красноватых пятнышек, превращающихся в бородавчатые эпителиомы (наросты), часто сливающиеся между собой и достигающие в диаметре 0,5 см. На 17-19-е сутки возможно вторичное высыпание оспин на непораженных еще участках тела. В участках локализации оспин меняется форма гребня и сережек, сильно утолщается кожа. Поражение век сопровождается их деформацией, в результате чего птица не способна закрыть глаза. Развивается конъюнктивит, кератит и панофтальмия.
При дифтеритической и смешанной формах оспы на слизистой оболочке органов дыхания и желудочно-кишечного тракта образуется сыпь в виде беловатых, непрозрачных и несколько приподнятых узелков. Они быстро распространяются, увеличиваются в размерах и, сливаясь между собой, образуют пленку, тесно связанную с подслизистой оболочкой. Если ее удалить, возникают кровоизлияния и эрозии. При локализации патологии в носовой полости развивается ринит, сопровождающийся серозными, слизистыми и затем гнойными истечениями.
Поражение носоглотки сопровождается распространением инфекции в слезный канал и подглазничную ямку. Под глазом образуется плотная болезненная припухлость, величиной с лесной или грецкий орех. Поражение ротовой полости сопровождается трудностями в приеме корма, а локализация патологического процесса в дыхательной системе — кашлем, приступами удушья. Птицы вытягивают шею, держа открытым или часто открывают клюв, издают свистящие звуки, с трудом вдыхают воздух и нередко погибают от удушья.
Оспа индеек характеризуется более частым поражением желудочно-кишечного тракта, при этом в большей степени поражается зоб и железистый желудок, в меньшей — кишечник. Патология последнего сопровождается профузной диареей с выделением фекалий с примесью крови.
Сверхострое течение оспы у канареек протекает без видимых клинических признаков. Острое течение болезни (легочная форма) сопровождается одышкой, конъюнктивитом, ринитом. При хроническом течении, кроме поражения клюва, глаз, век, крыльев наблюдаются оспинки на подошве и стопе лап, сопровождающиеся некрозом и отпадением пальцев.
Оспа голубей протекает чаще в кожной форме, с локализацией оспенных поражений по краям глаз, у основания клюва и при генерализации оспенного процесса — на ногах.
Патологоанатомические изменения. На коже и слизистых оболочках — характерные поражения. При вскрытии трупа обнаруживаются признаки аутоинтоксикации и истощения. У птиц при дифтеритической и смешанной форме оспы обнаруживают трудноснимаемые пленки на слизистой оболочкеорганов дыхания и пробки в воздухоносных мешках. При атипичной форме изменения на коже отсутствуют, но в печени выявляются мелкие желтоватые очаги. Встречается отек легких, точечные кровоизлияния на эпикарде и серозных оболочках кишечника.
При хроническом течении трупы птиц истощены, наблюдается перерождение печени, почек, сердца, набухание и коричнево-серое окрашивание селезенки.
Гистологические изменения. В цитоплазме клеток эпидермиса и эпителии слизистых оболочек наличие телец-включений (телец Боллингера), представляющих собой скопление вирусных частиц на различной стадии развития (виропласт). Включения хорошо окрашиваются гистологическими красками, в том числе эозином, Суданом III и Суданом черным, по Фельгену, осмиевой кислотой.
Иммунитет. Вирус оспы птиц вызывает образование в организме птиц вируснейтрализующих, комплементсвязывающих, вируспреципитирующих и антигемагглютинирующих антител, которые выявляются на 7-8-й день после вакцинации.
Диагноз ставится на основании клинико-эпизоотических, патологоанатомических данных и результатах лабораторных исследований.
На лабораторные исследования направляют головы птиц, пораженные участки кожи и внутренние органы. Подтверждают диагноз обнаружением оспенных телец в мазках-отпечатках, обработанных серебрением по Морозову или по методу Пашена, которые представляют собой скопления коричневых коккоподобных телец (вид россыпи) Бореля.
Выделение вируса проводят заражением на ХАО эмбрионов кур. Биопробу ставят на клинически здоровых курах, свободных от антител к вирусу оспы. Исследуемый материал втирают стерильной щеточкой в слегка скарифицированную поверхность гребня или фолликулы голени, освобожденные от перьев. Положительная биопроба сопровождается развитием на 5-7-й день после заражения оспенных поражений на гребне и типичного для оспы фолликулита на голени. Для ретроспективной диагностики используются МФА, ИФА, РДП, РИГА, метод иммунной электронной микроскопии.
Дифференциальный диагноз. Оспу дифференцируют от А-авитаминоза, кандидамикоза, аспергиллеза, инфекционного ларинготрахеита и бронхита кур, синусита индеек, трихомоноза у голубей.
Лечение. Оспины на коже размягчают нейтральными жирами, мазями или глицерином, а язвенные поверхности обрабатывают прижигающими средствами: 1%-ным йод-глицерином (йод — 0,1, калий йодистый — 1,0, глицерин — до 30,0), 3-5%-ными растворами хлорамина и др.
Носовую полость и конъюнктиву промывают теплой водой и орошают 2-3%-ными растворами борной кислоты, настоем ромашки и др. Птице дают воду без ограничений, добавляя в нее йодид калия. Антибиотики назначают для предупреждения осложнений (например, парациллин в дозе 1г на 1 л воды в течение 7 дней одновременно с витаминами).
Специфическая профилактика. Для специфической профилактики оспы кур применяют два типа ослабленных вакцин: содержащие куриный вирус оспы и содержащие голубиный вирус оспы. Эти вакцины могут быть использованы для иммунизации цыплят, кур и индеек. Вакцинация осуществляется методом пункции в подкрыльевую перепонку. Кур вакцинируют однократно в возрасте между 4-й и 12-14-й неделями; бройлерных цыплят прививают по достижении 4-недельного возраста. Племенных индеек вакцинируют путем скарификации бедра в 14-недельном возрасте. Появление местной реакции (опухание и краснота) на месте введения от 7 до 10 дней после проведения вакцинации показывает, что птица была правильно иммунизирована. Эта реакция исчезает в течение следующих 2-3 недель.
Профилактика и меры борьбы. При вспышке заболевания на хозяйство накладывают карантин. Больную птицу убивают. При выраженном генерализованном процессе оспы у птиц тушки с внутренними органами направляют в техническую утилизацию, при поражении только головы ее утилизируют, а тушки и органы выпускают после проварки. Навоз обеззараживают биотермически или сжигают. Пух, перо дезинфицируют 3%-ным формальдегидом на 1%-ном растворе едкого натра.
Карантин с хозяйства снимают через 2 месяца после ликвидации заболевания и проведения заключительной дезинфекции и дезинсекции.
Прививки против оспы в ранее неблагополучных хозяйствах проводят в течение двух лет. Если новых случаев заболевания не отмечается, то дальнейшие прививки не обязательны.
источник
СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ
Особенности клинического исследования птицы. Клинические исследования птиц и крупных животных основаны на одних принципах, однако в силу некоторых анатомо-физиологических особенностей птицы указанные исследования не идентичны.
У кур, индеек, цесарок и голубей нет типичных лимфатических узлов, а лимфоидная ткань располагается по всему телу. Наиболее выражена она на таких участках, как кожа, нёбо, глотка, гортань, легкие, печень, стенка кишечника, зобная железа, фабрициева сумка. У гусей и уток типичные лимфоузлы обнаруживают в области яремной вены (у основания шеи) и в области поясницы (на уровне половых желез).
У птиц труднодоступна для исследования сердечнососудистая система, число сердечных сокращений колеблется от 240 до 500 в минуту в зависимости от вида птицы, возраста, температуры тела и состояния окружающей среды.
Наиболее распространенные клинические методы исследования птицы: внешний осмотр и пальпация внутренних органов.
Правила техники безопасности при работе с живой птицей. Входить в аудиторию кафедры следует только в халате, переодеваясь в гардеробе.
Работать полагается в застегнутом халате с застегнутыми манжетами, в шапочке.
При обследованиях и обработках птицу фиксируют руками так, чтобы большие пальцы, проходя у основания крыльев, ложились на спину. Ладонями сжимают бока птицы, а между указательными и безымянными пальцами зажимают конечности. При этом способе фиксации существует опасность удара клювом, поэтому голову птицы отводят в сторону. Чтобы избежать удара клювом, исследователь удерживает гребешок птицы или охватывает его большим и средним пальцами.
Более безопасным способом фиксации будет тот, при котором исследователь одной рукой фиксирует конечности и крылья птицы, а другой — голову.
Для большей безопасности крылья птицы можно сложить крестом на спине. Для длительной фиксации рекомендуют использовать станок (автор И. П. Шаптала).
Запрещается оставлять живую птицу на рабочем столе без присмотра. Дежурный по группе контролирует фиксацию птицы. На рабочем столе не должно быть никаких посторонних предметов.
Отработанные инструменты складывают в стерилизатор для последующего обеззараживания.
Вату, бумагу, перо и другие отходы собирают в специальные контейнеры и в последующем уничтожают.
В конце занятия дежурный приводит в порядок рабочее место, сдает лаборанту птицу, инструменты.
После самостоятельной работы с птицей студенты должны вымыть руки с мылом.
Этапы клинического исследования. При клиническом исследовании придерживаются определенной схемы.
Сбор анамнеза. В историю болезни вносят следующую информацию:
- направление и специализация хозяйства с указанием вида птицы и технологии, принятой в хозяйстве;
- порода, линейная принадлежность, кросс (яичный или мясной);
- условия кормления (сбалансированность рациона по протеину, витаминам, микроэлементам, аминокислотам; тип кормления: сухой или влажный);
- яйценоскость, прирост живой массы, поедаемость корма;
- условия содержания (клеточное, напольное, комбинированное; плотность посадки птицы, обеспеченность фронтом поения, кормления, гнездами, насестами);
- эпизоотическая ситуация в хозяйстве и намеченные плановые лечебно-профилактические мероприятия. При наличии в хозяйстве заболевания охарактеризовать заболеваемость, смертность, летальность и дать оценку мерам, предложенным для ликвидации болезни.
Исследование птицы в естественных условиях. Прежде чем приступить к исследованию, обращают внимание на естественное поведение птицы в клетке, на полу. Оценивают следующие показатели:
- общее состояние птицы (сонливость, возбудимость или расстройство координации движения, затрудненное и учащенное дыхание, что характерно для остропротекающих заболеваний и отравлений);
- окраску гребня, состояние бородок (опухшие или нет), пигментацию конечностей и состояние оперения — взъерошенность, выпадение пера (аптериоз и алопеция);
- акт дефекации и его частоту; цвет и консистенцию помета (при пуллорозе он белого цвета, при острых отравлениях — с кровью);
- состояние глаз: при некоторых заболеваниях (инфекционный ларинготрахеит, орнитоз, гиповитаминоз А и др.) наблюдают конъюнктивит. При болезни Марека зрачок, который в норме круглый, становится трехгранным или звездчатым, одновременно изменяется и цвет радужной оболочки глаза. Слепота развивается при инфекционном ларинготрахеите, инфекционном энцефаломиелите и др.
Исследование птицы после фиксации. При клеточном содержании следует вынуть из клетки несколько птиц с тяжелой формой заболевания и детально их обследовать. При напольном содержании птицу ловят крючком за конечность.
Измерение температуры тела. Температуру измеряют с помощью ртутного термометра в области прямого отдела толстой кишки (термометр вводят с правой стороны) или под крылом. Температура тела птиц колеблется в зависимости от вида, возраста, породы и окружающей среды (табл. 1).
Исследование дыхания. Дыхание исследуют в спокойном состоянии птицы. Число дыхательных движений, которые определяют по числу экскурсий нижней стенки живота в области клоаки, так же как и температура тела, зависит от вида, породы, общего состояния и возраста птицы (табл. 2). Дыхание может быть прерывистым, поверхностным.
Затем обращают внимание на состояние суставов, подошвенного мякиша. Суставы поражаются при хронической форме пастереллеза, стафилококкозе, теносиновите, мочекислом диатезе. Иногда отмечают абсцессы.
Специальные лабораторные исследования. Материал отбирают по определенным правилам и направляют в лабораторию — районную, областную, а также лабораторию птицефабрики. К специальным относят такие исследования:
- гематологические (иногда достаточно одного мазка для того, чтобы установить диагноз, например, на эритробластозную форму лейкоза или на спирохетоз);
- биохимические — на кальций, фосфор, резервную щелочность, витамины, аминокислоты, белок, микроэлементы в сыворотке крови;
- бактериологические — на сальмонеллез, эшерихиоз, пастереллез и другие бактериальные инфекции;
- вирусологические — на инфекционный ларинготрахеит, инфекционный бронхит кур, вирусный гепатит утят и др.;
- на инвазионные заболевания: эймериоз (кокцидиоз), кнемидокоптоз, бовиколез.
Определение массы и упитанности. Массу определяют путем взвешивания птицы кантером или на весах. Разработана таблица, в которой указана стандартная живая масса тела для каждого вида птицы в определенном возрасте (см. приложение).
Упитанность определяют пальпацией по развитию грудных и бедренных мышц. Если упитанность хорошая, то грудная кость (киль) не выступает. Упитанность может быть с избыточным отложением жира, средняя, ниже средней и истощенная.
Определение возраста. Возраст устанавливают по зоотехническим записям (по дате вывода для цыплят, ножному кольцу или крылометке), дате перевода в группу ремонтных молодок или кур-несушек, а также по внешним экстерьерным признакам (рост гребня, шпор, смена маховых перьев, цвет радужной оболочки).
Исследование оперения. В норме перьевой покров блестящий, гладкий. К нарушениям относят патологическую линьку, разрыхление бородок пера, ломкость и изменение окраски пера, простроченное перо и др. Эти изменения часто вызваны нарушением кормления птицы, содержания (сухой воздух в птичнике), инфекционными и инвазионными заболеваниями.
Исследование отдельных органов и систем. При исследовании придерживаются определенного плана.
Гребень и бородки — это производные кожи (дериваты). В норме они красно-розового цвета; при острых инфекционных заболеваниях, сопровождающихся поражением сердечнососудистой системы, — синюшные (цианоз). При хронических заболеваниях наблюдают анемичность гребня, при микотоксикозах — некроз его кончиков. Отечность головы может быть при респираторной форме стафилококкоза и синдроме большой головы.
Ушные отверстия находятся на уровне мочки; чтобы их исследовать, отодвигают перья в этой области. Ушные отверстия чувствительны к закупорке, они могут быть забиты либо клещами (при инвазионных заболеваниях), либо липким кормом, что вызывает беспокойство птицы.
Клюв может быть искривлен, часто наблюдают его неравномерное отрастание. В норме его окраска зависит от породы. У кур породы леггорн клюв светло-желтого цвета. Размягчение его отмечают при остеомаляции, как следствие нарушения фосфорно-кальциевого обмена.
Ротовую полость исследуют, предварительно зафиксировав клюв и придавив язык. Осматривают слизистую оболочку, обращая внимание на ее цвет. В норме она гладкая, бледно-розовая.
При кандидомикозе обнаруживают дифтеритические наложения; в этом случае надо сделать соскоб и исследовать на наличие мицелия гриба. Дифтеритические наложения могут быть также при гиповитаминозах, в этом случае они легко снимаются, а при оспе с трудом соскабливаются. Некроз кончика языка часто наблюдают при микотоксикозах. Нередко можно обнаружить язвы под языком и в сочленении клюва.
Гортань у птиц исследовать легче, чем у млекопитающих. При исследовании гортани указательный палец должен быть в межчелюстном пространстве, большим пальцем прижимают язык. Гортань особенно поражается при инфекционном ларинготрахеите: находят творожистые пробки.
Трахею исследуют методом пальпации: двумя пальцами прощупывают трахеальные кольца. Шея птицы при этом должна быть вытянута. Если трахея поражена, то при легком сдавливании может быть кашель.
Зоб — это расширенная нижняя часть пищевода. Он хорошо развит у кур, индеек, цесарок и голубей, а у гусей и уток есть незначительное расширение на нижнем участке пищевода.
При заболеваниях зоб может быть мягким и твердым. Мягким зоб становится, когда наполнен жидкостью или газом. Твердый зоб отмечают при закупорке. При атонии зоб увеличен и отвисает, птица при этом совершает постоянные движения головой, чтобы не сдавливалась трахея.
Грудную полость исследуют пальпацией — определяют целостность костяка и аускультацией — на наличие хрипов в легких и воздухоносных мешках после вращения птицы в горизонтальном положении. Хрипы хорошо слышны при орнитозе, респираторном микоплазмозе, колисептицемии и других заболеваниях, сопровождающихся поражением легких и воздухоносных мешков.
Брюшную полость исследуют кончиками пальцев обеих рук. При этом ближе к грудной кости прощупывается мышечная часть желудка, а ближе к клоаке у несушки может быть яйцо. Печень увеличена при болезни Марека, лейкозе; узловатые участки кишечника пальпируют при туберкулезе. При желточном перитоните живот увеличен за счет скопления экссудата, перо в области живота выпадает.
Клоака в норме розового цвета. Воспаление слизистой оболочки клоаки — клоацит — встречается часто. Может быть расклев клоаки: в этом случае кишечник кровоточит.
Опорно-двигательный аппарат сначала исследуют в естественном состоянии птицы: определяют постановку конечностей.
источник
Оспа птиц — контагиозная болезнь птиц разных видов (кур, голубей, канареек, скворцов, перепелов, индюков, фазанов, попугали), протекающая с поражением слизистых оболочек ротовой, носовой полостей и кожных покровов преимущественно неоперенных участков тела.
болезнь распространена повсеместно. Отмечается ее сезонное осенне-весеннее усиление. Экономический ущерб заключается в снижении яйценоскости и вынужденном убое больных и переболевших птиц.
Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Poxviridae, подсемейству Chordopoxvirinae и роду Avipoxvirus. Вирионы овальной или прямоугольной формы, размером в среднем 140—450 нм и со сложным типом симметрии. Состоят из нуклеоида, содержащего геном, боковых тел и наружной липопротеидной оболочки, образующей выступы. Геном представлен двуспиральном линейной ДНК.
Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус разрушается при высоких температурах. Высушивание и холод консервируют его. В лиофилизированном виде сохраняется до 8 лет, в патологическом материале (оспенные корочки) при температуре минус 15 °С сохраняет инфекционность более 2 лет. Чувствителен к жирорастворителям и быстро инактивируется в гниющем материале.
Антигенная структура. Вирионы вируса оспы содержат наружным протеидный антиген в составе поверхностных ворсинок (филаментов). Наружный антиген индуцирует образование антигемагглютинирующих вируснейтрализующих антител, которые обеспечивают развитие иммунитета. Внутренние полипептиды индуцируют комплементсвязывающие и преципитирующие антитела.
Антигенная вариабельность и родство. Штаммы вируса оспы кур идентичны в антигенном отношении, но различаются по спектру патогенности, вирулентности и гемагглютинирующей активности.
Между вирусами оспы кур, голубей и индеек существует антигенное родство. Вирусы оспы канареек, перепелов и попугаев в иммунобиологическом отношении отличаются от вирусов оспы кур и голубей.
Антигенная вариабельность у вида вируса оспы кур не установлена. Однако штаммы вируса оспы различаются по спектру патогенности и по вирулентности.
Межродовое антигенное родство установлено между вирусами оспы кур и оспы овец и коз, а также между вирусами оспы птиц и миксоматоза кроликов, оспы коров и эктромегалии мышей (в РСК, РДП)
В иммунобиологическом отношении вирус оспы кур родственен вирусу оспы голубей и индеек, а также овец и коз, однако не родственен вирусам оспы канареек, перепелов и попугаев.
Культивирование вируса. Вирусы оспы кур и голубей хорошо размножаются на ХАО куриных эмбрионов, в первичной культуре клеток куриных фибробластов, вызывая ЦПД и образование симпластов, и в перевиваемой культуре клеток QT-35.
Гемагглютинирующие свойства. Вирус оспы птиц способен агглютинировать эритроциты кур некоторых пород (0,5%-ная взвесь эритроцитов на физиологическом растворе, pH 7,2—7,4; 37 °С). Суспензия вируса при консервировании 0,5%-ным формалином и хранении при 4 °С сохраняет гемагглютинирующую активность более 8 мес и может быть использована в РГА и РТГА.
Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на неиммунных цыплятах и курах при заражении в скарифицированный гребень, бородки и перьевые фолликулы. Оспенный фолликулит удается получить и при заражении голубей разного возраста.
Клинические признаки. Инкубационный период болезни длится в среднем 15—20 дней. В дальнейшем у больной птицы ухудшается аппетит, появляется вялость, снижается яйценоскость. Болезнь может приобретать кожную, дифтеритическую или смешанную формы течения.
При кожной форме чаще на гребне, бородках, сережках, основании клюва, щеках, клоаке, иногда по всему туловищу развиваются бородавчатые образования (оспины). Течение чаще доброкачественное, летальность низкая.
При дифтеритической форме развивается дифтеритическое воспаление слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, а также гортани, трахеи, бронхов и глаз. Прогноз неблагоприятный, летальность в холодное время года может достигать 70 %.
Патологоанатомические изменения. Они достаточно специфические и зависят преимущественно от формы течения болезни. Чаще всего у павшей птицы на характерных участках можно обнаружить одновременно и желтовато-белые возвышающиеся пятна разного размера, иногда покрытые красно-кровянистым струпом, творожистые массы или дифтеритические пленки в дыхательных путях и кишечнике.
Локализация вируса. В организме больной птицы вирус локализуется в оспинах бесперьевых участков головы, на слизистой глотки, гортани, трахеи. На 17—20-й день после инфицирования вирус можно обнаружить в крови, почках, яичниках, селезенке, головном мозге.
У переболевшей птицы остается длительное вирусоносительство (более 10 мес).
В окружающую среду вирус выделяется с содержимым оспин и корочками от больных птиц.
Источник инфекции — больная птица. Переносчиками возбудителя служат клещи и клопы. Вирус передается контактным путем через загрязненные инвентарь, одежду персонала, непосредственно через поврежденную кожу, а также воздушно-капельным и алиментарным путями через загрязненные корм и воду.
В естественных условиях некоторые штаммы вируса оспы кур патогенны только для кур, другие — для кур, голубей и индеек. Есть штаммы, патогенные не только для птиц, но и для других видов животных, например кроликов. По спектру патогенности вирусы оспы птиц можно расположить в следующем порядке: голуби, индейки, куры, канарейки.
Диагностика. Диагноз на оспу птиц ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических и лабораторных данных. Результаты лабораторных исследований являются решающими и диагностике.
Взятие и подготовка материала. От больной птицы срезают оспины (корочки) которые помещают в 50%-ный раствор глицерина и в термосе с охлаждающей смесью транспортируют в лабораторию. Или непосредственно из оспин делают маски-отпечатки, высушивают, фиксируют в спиртоэфирной смеси и отправляют на исследование. От трупов берут дифтеритически пораженные гортань и трахею.
В лаборатории готовые мазки-отпечатки окрашивают и исследуют в световом микроскопе. Из консервированных оспин (корочек) готовят 10%-ную суспензию, которую используют для выделения вируса.
Лабораторная диагностика. Включает индикацию вирионов оспы (элементарных телец) методом световой микроскопии, выделение вируса на куриных эмбрионах или на цыплятах и идентификацию выделенного вируса методом световой микроскопии, вирусоскопии, РИФ и РДП (дополнительно).
Индикацию вируса проводят методом световой микроскопии (вирусоскопия). Для этого готовят мазки-отпечатки из патологического материала или используют уже готовые, привезенные из очага инфекции.
Окрашивают их методом серебрения по Морозову. Мазок покрывают жидкостью Руге (реактив № 1: 1,0 мл ледяной уксусной кислоты, 2,0 мл 40%-ного формальдегида и 100 мл дистиллированной воды) на I мин; промывают дистиллированной водой; протравливают раствором танина (реактив N9 2: 1 г танина и 5 мл дистиллированной воды) в течение 1—2 мин, подогревая до появления паров; промывают и наносят раствор аммиачного серебра (реактив № 3: 5 г кристаллов аммиачного серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды, и к 80 мл полученного раствора добавляют по каплям 25%-ный раствор аммиака до растворения осадка; для окрашивания полученный реактив разводят дистиллированной водой 1 : 10); слегка прогревают до темно-коричневой окраски мазка; промывают дистиллированной водой и просматривают под иммерсионным маслом в световом микроскопе.
Вирусоскопия считается положительной только при наличии характерных образований (элементарных телец Борреля — вирионов оспы) темно-коричневого цвета, в массовом количестве расположенных по всему мазку. При отрицательной вирусоскопии проводят биопробу на куриных эмбрионах или цыплятах. Обнаружение специфических телец-включений (телец Боллингера) в цитоплазме инфицированных клеток является ориентировочным методом индикации вируса оспы.
РИФ является дополнительным экспресс-методом диагностики оспенных антигенов в патологическом материале и позволяет получить результат через 5—7 ч после поступления материала на исследования.
Выделение вируса оспы из патологического материала проводят на 10—12-дневных куриных эмбрионах, которые заражают на ХАО и инкубируют 5—6 дней. Признаком размножения вируса следует считать отдельные или сливные оспины на ХАО, а также значительное утолщение или желеобразный отек всей ХАО (при высокой заражающей дозе). При отсутствии оспин делают три слепых пассажа.
Из оспин на ХАО делают мазки-отпечатки и проводят вирусоскопию (как указано выше).
Биопробу на цыплятах проводят на неиммунных к вирусу оспы 3—4-месячных цыплятах, которым инокулируют 10%-ную суспензию из патологического материала методом втирания (накожно) в скарифицированную поверхность гребня, бородок или в перьевые фолликулы голени. При наличии в материале вируса на месте втирания на 5—6-й день развиваются оспенные поражения. Специфичность этих поражений идентифицируют методом вирусоскопии мазков.
Идентификация выделенного вируса обычно ограничивается вирусоскопией, однако в дополнение к ней можно использовать, и серологические реакции (РДП и РИФ), которые проводят по общепринятым методикам.
Ретроспективная диагностика. Проводится редко. В случае стертого течения болезни у кур, не имеющих видимых клинических признаков, исследуют парные сыворотки в РДП. Однако Преципитирующая сыворотка реконвалесцентов часто оказывается слабоактивной, и у 15 % больных оспой кур антитела не выявляются.
Разрабатываются диагностические наборы на обнаружение специфических антител против вируса оспы птиц методами РИГА и ИФА, которые должны позволить проводить широкомасштабные эпизоотологические мониторинги.
Иммунитет и специфическая профилактика. В нашей стране разработаны и применяются живые аэрозольные вакцины двух типов: из нереактогенного гетерологичного штамма вируса оспы голубей Нью-Джерси и из природно-ослабленного штамма оспы кур АШ-27. А также разработана вакцина из аттенуированного культурального штамма К вируса оспы кур, которую вводят парентерально в перепонку крыла. Иммунитет у привитых цыплят в среднем сохраняется в течение 3—6 мес, у кур — до 10 мес.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.
источник