Методические указания лабораторная диагностика ку лихорадки

Методические рекомендации «Лабораторная диагностика лихорадки КУ» (утв. Минздравом РСФСР 20 марта 1980 г.)

Методические рекомендации
«Лабораторная диагностика лихорадки КУ»
(утв. Минздравом РСФСР 20 марта 1980 г.)

Прямым подтверждением Ку-риккетсиоза у больного человека (или животных) является обнаружение в соответствующих материалах коксиелл Бернета с помощью иммунолюминесцентного исследования по прямому методу Кунса. Материалом для исследования служит кровь больного. При необходимости обследования позвоночных или беспозвоночных животных (определение источника инфекции) целесообразно готовить мазки на околоплодной жидкости, плаценты абортировавших животных, органов абортированных плодов, гемолимфы и кишечника кровососущих клещей. Исследование вышеперечисленных материалов на инфицированность коксиеллами Бернета иммунолюминесцентным методом проводят следующим образом.

На тщательно вымытом и обезжиренном предметном стекле делают тонкий мазок или отпечаток исследуемого материала. После высыхания мазок фиксируют этиловым спиртом или ацетоном в течение 30 мин. По мазку синим восковым карандашом делают две окружности диаметром 0,5 см, чтобы создать барьер, препятствующий растеканию люминесцирующей сыворотки.

На одно окруженное поле фиксированного и высушенного мазка наносят каплю разведенной флуоресцирующей сыворотки против коксиелл Бернета (рабочее разведение указано на ампуле) в смеси с равным объемом бычьего альбумина, меченного родамином* (в смеси оба конъюгата должны быть в рабочем разведении). На другое поле наносят гетерологичный или «нормальный» конъюгат, также в смеси с бычьим альбумином. Обработку мазков проводят 30 мин при температуре 37°С во влажной камере (чашка Петри с увлажненным дном), что предупреждает высыхание конъюгата. Отмывание мазков от избытка флуоресцирующей сыворотки производят в фосфатном буферном растворе (рН 7,2-7,4) в течение 10 мин. После ополаскивания дистиллированной водой препараты высушивают на воздухе и исследуют в люминесцентном микроскопе.

В мазках крови больного Ку-риккетсиозом человека, биопробных морских свинок и белых мышей коксиеллы Бернета специфически флуоресцируют в виде ярко светящихся мельчайших кокко-бациллярных корпускул зеленого цвета. Характерным является расположение возбудителей на поверхности эритроцитов. В контрольных мазках, обработанных нормальной или гетерологичной флуоресцирующими сыворотками, риккетсии не обнаруживаются. Идентифицировать в мазках крови возбудителя можно при условии, когда в большинстве полей зрения видно не менее 2-3 флуоресцирующих риккетсий, что соответствует примерно 2-5 млн риккетсиальных клеток в 1 мл крови. Риккетсии обнаруживаются в мазках крови больного на высоте лихорадки.

В ходе эпидемиологического обследования, особенно при работе в природных очагах инфекции, а также при проведении эпидемиологической разведки, возникает необходимость лабораторного исследования, в том числе микроскопическими методами, кровососущих клещей и грызунов.

Исследование клещей. После определения вида клещей, их последовательно промывают в стерильном физиологическом растворе, 70° спирте, затем снова в двух порциях физиологического раствора. После этого у клеща отсекают лапки, а выделяющиеся капли гемолимфы распределяют по предметному стеклу. Далее клеща вскрывают, отделяя хитин, и извлекают кишечник, который отмывают в физиологическом растворе, и затем, равномерно растирая, распределяют мазок на предметном стекле. Мазки фиксируют, обрабатывают и исследуют так же, как и мазки крови.

Исследование грызунов. Как правило, при исследовании грызунов на носительство коксиелл используют селезенку, в ретикулярных клетках которой коксиеллы сохраняются в течение длительного срока.

Мазки-отпечатки готовят так же, как при исследовании грызунов на туляремию или псевдотуберкулез. При необходимости более длительного сохранения материала или его перевозки можно использовать 50% стерильный глицерин, в который погружают селезенку. Перед приготовлением мазков её промывают в 2-3 порциях физиологического раствора. Затем из селезенки готовят эмульсию в 5-8 мл физиологического раствора, тщательно растирая её с кварцевым стерильным песком. Через 15-20 мин (после осаждения кусочков ткани) из надосадочной жидкости готовят мазки на предметном стекле; в дальнейшем исследование проводят так же, как при исследовании крови и клещей.

Препараты от клещей и грызунов обрабатывают Ку-риккетсиальной флуоресцирующей сывороткой. В качестве контроля часть мазка (см. выше) целесообразно параллельно обрабатывать антитуляремийной сывороткой (гетерологичный препарат). Это с одной стороны обеспечивает перекрестный контроль на специфичность, с другой — дает прямые результаты на инфицированность грызунов и клещей возбудителями двух инфекционных форм.

Для постановки биопроб при Ку-риккетсиозе используют, как правило, тот же материал, что и для микроскопического исследования. Микроскопическое исследование и постановку биопроб проводят обычно параллельно. Для биопроб используют морских свинок (250-300 г), белых мышей (12-14 г) и куриные эмбрионы (7-дневные).

Исследуемый материал растирают, добавляют стерильный физиологический раствор, тщательно эмульгируют и после отстаивания взвеси (или центрифугирования при малых оборотах) вводят внутрибрюшинно или подкожно подопытным морским свинкам (2-3 мл) или белым мышам (0,5-1 мл). При исследовании крови сыворотку отделяют стерильно от сгустка и используют её для серологического исследования. Сгусток растирают с песком, эмульгируют в физиологическом растворе и вводят внутрибрюшинно подопытным животным.

У морских свинок в результате заражения примерно через неделю развивается лихорадка (до 40-41°), продолжающаяся 5-7 дней. Коксиеллы в большом количестве накапливаются в селезенке, печени и других органах. У белых мышей инфекция протекает, как правило, в скрытой форме, с накоплением большого количества коксиелл в селезенке на 7-9-й день после заражения.

Положительный результат экспериментов доказывается обнаружением возбудителей в мазках-отпечатках из органов животных микроскопией, а также выявлением в их сыворотке крови специфических антител.

Серологическое исследование подопытных животных проводят первый раз через 25-30 дней, второй — через 2 месяца. Если при первом исследовании в сыворотке выявлены антитела, то животных убивают, а эмульсией селезенок заражают куриные эмбрионы и параллельно проводят пассаж на свежих морских свинках.

Исходным материалом (особенно сгустком крови) можно заразить и непосредственно куриные эмбрионы. Для этого в желточный мешок 6-7-дневных развивающихся эмбрионов вводят 0,4-0,5 мл взвеси испытуемого материала. Эмбрионы инкубируют в термостате при 35-37° и ежедневно овоскопируют. Эмбрионы, погибшие до 4-го дня включительно, уничтожают (гибель от посторонних причин), а погибшие в более поздние сроки или оставшиеся живыми до предельного срока инкубации (11-12 дней после заражения) помещают в холодильник до вскрытия.

Эмбрионы вскрывают стерильно, берут желточный мешок, каплю содержимого желточного мешка вносят в сахарный бульон с целью контроля на загрязнение посторонней бактериальной флорой. Из кусочка оболочки желточного мешка делают параллельные мазки. Один из них обрабатывают специфической флуоресцирующей сывороткой, а парный окрашивают по Романовскому или по Гименец для световой микроскопии.

Для выделения и пассивирования коксиелл кроме куриных эмбрионов и морских свинок можно использовать белых мышей массой 12-14 г, которых заражают внутрибрюшинно испытуемым материалом. Изолированные культуры коксиелл могут быть лиофильно высушены. В сухом виде культуры коксиелл в холодильнике (+4°С) могут сохраняться в течение десятков лет.

Культивирование коксиелл может осуществляться и в культуре тканей.

Микробиологические исследования с коксиеллами требуют специальных условий, соблюдения особого режима и разрешения на работу с коксиеллами Бернета (II группа)**. Это ограничивает круг практических лабораторий СЭС, работающих по выделению и изучению возбудителей Ку-риккетсиоза. Иммунологические исследования (см. ниже) не требуют особых условий и должны осуществляться повсеместно.

Иммунологические методы диагностики лихорадки Ку включают в себя серологические тесты, из которых наиболее часто применяют реакцию связывания комплемента. Эту реакцию или реакцию агглютинации следует считать обязательной для лабораторного диагноза лихорадки Ку. Кроме того, в настоящее время разработаны дополнительные иммунологические пробы: реакция микроагглютинации (РМА) с диагностикумом из коксиелл Бернета, меченных изотиоционатом флуоресцеина, реакция непрямой иммунофлуоресценции по методу Уиллера-Кунса, реакция кольцепреципитации с растворимым антигеном из коксиелл Бернета 1-й фазы.

Иммунологические реакции применяют для лабораторного подтверждения Ку-риккетсиоза у больных людей и выявления переболевших, обнаружения инфекции у сельскохозяйственных и домашних животных, равно как среда диких грызунов, для оценки эффективности вакцинации и других важных эпидемиологических вопросов. Наконец, серологические реакции — необходимый этап комплекса исследований по изоляции и идентификации возбудителя.

Реакция связывания комплемента (РСК). Сущность реакции заключается в связывании комплемента комплексом антиген + антитело, что обнаруживается в присутствии индикатора (бараньих эритроцитов, сенсибилизированных гемолитической сывороткой). При образовании специфического комплекса антиген + антитело последний связывает комплемент, вследствие чего после добавления гемолитической системы не возникает гемолиза. Если же комплекс ангиген + антитело не образуется, свободный комплемент вызывает гемолиз сенсибилизированных эритроцитов. Таким образом, положительный результат РОК характеризуется отсутствием или задержкой гемолиза, а отрицательный — феноменом гемолиза.

Реакцию связывания комплемента можно ставить при 37°С и путем длительного связывания на холоде (при +4°С). Последний способ чувствительнее, но требует большого срока для завершения исследования (около суток); поэтому для диагностических целей обычно применяют метод постановки РСК в термостате, что позволяет закончить исследование в течение одного дня.

Для постановки РСК необходимы 5 ингредиентов: 1) испытуемая сыворотка, 2) антиген, 3) комплемент, 4) гемолитическая сыворотка, 5) эритроциты барана.

Реакцию ставят в общем объеме 0,5 мл, т.е. берут по 0,1 мл каждого ингредиента. Обязательным условием постановки РСК является использование точно оттитрованных компонентов.

Для обеспечения точности получаемых результатов необходимо пользоваться отдельной посудой (пробирки, пипетки, колбы), хорошо вымытой и высушенной в сухожаровом шкафу.

Для каждого ингредиента реакции используют отдельную пипетку. Все разведения делают в свежеприготовленном стерильном физиологическом растворе (0,85% раствор химически чистого хлорида натрия в дистиллированной воде).

Исследуемую сыворотку прогревают перед опытом в течение 30 мин при 56-58°С (для разрушения содержащихся в ней комплемента и ингибиторов).

Антиген, вырабатываемый в СССР для серодиагностики Ку-риккетсиоза с помощью реакции связывания комплемента, представляет собой очищенную взвесь убитых коксиелл Бернета, выращенных в желточных мешках развивающихся куриных эмбрионов и находящихся во 2-й фазе. Этот препарат выпускается промышленностью в сухом виде, перед постановкой опыта его разводят физиологическим раствором.

Риккетсиальный антиген титруют те институты, которые его готовят. В соответствии с данными титрования на этикетке сухого антигена указывают объем жидкости, в котором он должен быть растворен. Антиген из коксиелл Бернета 2-й фазы снабжен наставлением по его применению. Учитывая, что у реконвалесцентов и переболевших могут быть антитела и к 1-й фазе возбудителей, серологические исследования желательно проводить в РСК с двумя антигенами из коксиелл Бернета 1-го и 2-го фазовых состояний.

Антигены из коксиелл в 1-й фазе представляют очищенную взвесь убитых коксиелл, прошедших после выделения лишь несколько пассажей на куриных эмбрионах. Антиген 1-й фазы может быть получен и из селезенок белых мышей, инфицированных коксиеллами Бернета в 1-й фазе. Антиген из коксиелл Бернета 1-й фазы в настоящее время промышленностью не выпускается, но он может быть приготовлен в любой лаборатории, имеющей право работы с этим возбудителем.

Комплемент применяют согласно прилагаемой к этому препарату инструкции. Комплемент следует титровать каждый раз перед постановкой опыта.

Гемолитическая сыворотка выпускается в ампулах; это сыворотка кролика, иммунизированного по определенной схеме взвесью бараньих эритроцитов. На этикетке гемолитической сыворотки указан её титр. В опыт гемолитическую сыворотку вводят в тройном титре: например, рабочий титр, указанный на этикетке, равен 1:1800; в этом случае в опыт берут сыворотку, разведенную 1:600. При длительном хранении первоначальный титр гемолитической сыворотки может снижаться. Проверку её титра производят следующим образом. Готовят основное разведение сыворотки 1:100 (0,1 мл сыворотки + 9,9 мл физиологического раствора). В ряд пробирок последовательно разливают по 0,2 мл разведений сывороток, начиная с 1:1000; в каждую пробирку добавляют комплемент в разведении 1:10 в объеме 0,2 мл и по 0,2 мл 3% взвеси бараньих эритроцитов; затем доливают в каждую пробирку по 0,4 мл физиологического раствора. Смесь ингредиентов выдерживают в термостате при 37°С в течение 1 ч. По наличию полного гемолиза эритроцитов судят о титре сыворотки. Схема титрования гемолитической сыворотки представлена в таблице 1.

источник

Возбудитель Ку-лихорадки (Coxiella burnetii -рик­кетсии Бернета) вызывает острое (реже подострое или хроническое) инфекцион­ное заболевание с полиморфной клинической картиной. Для ла­бораторной диагностики этого риккетсиоза применяют серологический метод (РА, РСК), в некоторых случа­ях — непрямую РИФ, биологическую и кожно-аллергическую пробы.

Серологический метод является основным в лабораторной диагностике Ку-лихорадки. Серологические реакции (РА и РСК) для определения антител к Coxiella burnetii в парных пробах сыворотки крови больных Ку-лихорадкой ставят с антигенами I фазы (иммуногенный ЛПС) и II фазы (малоиммуногенный антиген) возбудителя. Диагностический титр 1:4.

Аллергодиагностика.Кожную аллергическую пробу проводят по обычной методике (0,1 мл аллергена внутрикожно), исполь­зуя в качестве аллергена растворимый антиген из риккетсий Бернета I фазы, автоклавированную культуру коксиелл или ЛПС I фазы. Результаты пробы учитывают через 24-48 ч по наличию и размерам инфильтрата, гипере­мии, отека. Проба специфична, но пригодна только для ретроспективной диагностики. У переболевших она оста­ется положительной в течение 10 лет.

Биопроба —внутрибрюшинное или интратестикулярное (в толщу яичек) заражение исследуемым материалом морских свинок самцов, куриных эмбрионов в желточный мешок. Обнаружение риккетсий осуществляется в мазках-отпечатках внутренних органов, окрашенных по Романовскому-Гимзе или Здродовскому. В настоящее биопроба в реальной практике не используется в связи с внедрением культур тканей для культивирования и выделения риккетсий.

Микробиологическая диагностика лихорадки цуцугамуши.

Лихорадка цуцугамуши вызывается Orientia tsutsugamushiи характеризуется лихорадкой, по­ражением нервной системы и органов кровообращения в результате развития множественных васкулитов.

Материалом для исследования служат кровь, взятая в период лихорадки, для выделения возбудителя, а также сыворотка крови для серологической диагно­стики.

Культуральный метод. Возбудитель лихорадки цуцугамуши в материале от больного можно выделить путем заражения перевиваемой культуры клеток L и на клетках первично-трипсинизированных фибробластов куриного эмбриона.

Серологический метод.Проводится со второй недели болезни. Для определения специфических антител в крови больных используют ИФА, РА (с антигеном из культуры Proteus mirabilis OXk), непрямую РИФ, РСК.

Биопроба.Кровью больного внутрибрюшинно заражают белых мышей, которые через 6-14 дней погибают. Риккетсии выявляют в мазках-отпе­чатках внутренних органов животного, окрашенных по Романовскому— Гимзе, Здродовскому или люминесцирующими сыворотками против Orientia tsutsugamushi.

.Микробиологическаядиагностика риккетсиозов группы пятнистой лихорадки Скалистых гор.

К этой группе риккетсиозов относятся марсельская (Астраханская) лихорадка (возбудитель Rickettsia conorii), осповидный (везикулярный) риккетсиоз (возбудитель Rickettsia akari) пятнистая лихорадка Скалистых гор (возбудитель Rickeftsia rickettsii), клещевой сыпной тиф Сибири и Северной Азии (воз­будитель Rickettsia sibirica).

Биопроба – внутрибрюшинное заражение материалом от больного морских свинок самцов или белых мышей. Риккетсии этой группы вызывают у морских свинок через 6-14 дней после заражения скротальный феномен с некрозом мошонки, а у белых мышей (возбудитель везикулезного риккетсиоза) — перитонит.

Серологический метод.Для обнаружения антител в сыворотках крови боль­ных со 2 недели заболе­вания в динамике (исследование парных сывороток) используют непрямую РИФ, ИФА, РСК, РНГА. Нарастание титра антител в 4 и более раз в динамике болезни подтверждает диагноз риккетсиоза.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: При сдаче лабораторной работы, студент делает вид, что все знает; преподаватель делает вид, что верит ему. 9090 — | 7218 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Ку-лихорадка (Q-febris) — природно-очаговая риккетсиозная болезнь мно­гих видов животных и человека. У сельскохозяйственных животных забо­левание протекает относительно доброкачественно, но они могут служить источником возбудителя для человека, у которого Ку-лихорадка проявля­ется как острая системная инфекция, обычно сочетающаяся с интерстициальной пневмонией. У животных (крупный и мелкий рогатый скот, мулы, лошади, свиньи, собаки, куры) болезнь характеризуется кратковременной лихорадкой, может сопровождаться конъюнктивитом, ринитом, бронхоп­невмонией, артритами, маститами, абортами, орхитами.

Передача возбудителя от животного к животному может осуществлять­ся инфицированными клещами (свыше 50 видов) или алиментарно.

Возбудителем болезни является Coxiella burneti, род Coxiella, триба Rickettsiae. Лабораторная диагностика основана на результатах бактерио­логического и серологического исследований.

Прижизненно берут кровь. Для заражения куриных эмбрионов готовят про­бы гепаринизированной крови, выделения из матки и влагалища, плаценту в случае аборта, пробы молока, клещей с животного; посмертно — изме­ненные участки легких, фрагменты селезенки, паренхимы вымени, голов­ного мозга, регионарные пораженным органам лимфатические узлы.

Микроскопическое исследование исходного материала,экспресс-методы диагностики. Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по Романовско­му, Гименечу и др. (см. «Хламидиозы»). В положительных случаях внутри клеток при окраске по Романовскому находят пурпурно-красные кокковидные клетки размером 0,2-0,4 мкм или короткие палочки, похожие на C.psittaci.

Используют сэндвич — вариант твердофазного ИФА для обнаружения антигена возбудителя в исследуемом материале. Данные ИФА в 100% слу­чаев совпадают с результатами биопробы на белых мышах. Близкой чувствительностью при обнаружении возбудителя облада­ет метод флуоресцирующих антител (прямой вариант). Детекцию ДНК воз­будителя в материале эффективно проводят при помощи ПЦР.

Выделение и идентификация С.burneti

Культивирование в куриных эмбрионах. Для заражения куриных эмбрионов подходит нитрированная кровь. В случае возможной контаминации материала посторонней микрофлорой тка­невый гомогенат на физиологическом растворе (1:10) обрабатывают пени­циллином (1000 ЕД/мл) и стрептомицином (500ЕД/мл) в течение 60 минут, делают контрольные высевы на МПА, МПБ. Суспензию в объеме 0,2-0,25 мл или нитрированную кровь вводят в желточный мешок (см. «Хлами­диозы»). Используют 5-7-дневные куриные эмбрионы, начиная с 4-5 су­ток яйца ежедневно овоскопируют. Павшие эмбрионы вскрывают по мере гибели, после 8 суток допускается вскрытие живых эмбрионов. При отри­цательных результатах проводят до 4-6 «слепых» пассажей. Риккетсии обнаруживают в оболочках желточного мешка в окрашенных препаратах или при помощи метода люминесцирующих антител. После адаптации штам­ма к куриным эмбрионам из ткани эмбриона можно экстрагировать антиген и идентифицировать его в серологических реакциях с иммунными сыворот­ками против фаз I и II C.burneti.

Выращивание в культуре клеток. Культивирование C. burneti может быть проведено в культуре фибробла-стов куриного эмбриона, эпителия желточного мешка, почечного эпителия и т.д. Риккетсии хорошо размножаются в клет­ках ФСЦ, Нер-2, КП, ПК, ТК, СК, трипсинизированных клетках куриных эмбрионов. С пятого дня зараженные культуры клеток исследуют путем микроскопии окрашенных мазков, в РИФ и ПЦР.

Заражение лабораторных животных. Суспензию из исходного материала (1:5) обрабатывают антибиотиками и вводят интраперитонеально морским свинкам массой 250-300 г в дозе 3-5 мл или молодым кроликам. Морских свинок ежедневно термометрируют, проводят до 3-5 «слепых» пассажей. У погибших или убитых в пе­риод лихорадки животных берут соскобы с брюшины, готовят мазки, микроскопируют, исследуют в РИФ. О результатах заражения судят по нали­чию риккетсией в препаратах. Длительное наблюдение за животными (35-40 дней) позволяет поставить диагноз на основании исследования сыворо­ток крови в РСК.

источник

Лабораторные методы исследования являются большим подспорьем в распознавании заболевания. Серологическая диагностика проводится с антигеном из риккетсий Бернета в реакции агглютинации и реакции связывания комплемента.

Реакция агглютинации часто бывает положительной уже к концу 1-й педели и почти всегда к концу 2-й недели заболевания. Реакция связывания комплемента становится положительной с 5—9-го дня заболевания или несколько позже. Обе реакции наиболее выражены на 3—5-й неделе заболевания, затем титр их снижается, по ой и продолжают оставаться положительными до 6—12 мес, иногда и дольше. У больных, леченных антибиотиками, антитела появляются и крови в более поздние сроки и в более низких титрах.

Метод серодиагностики является довольно простым и повсеместно доступным. Наиболее специфичной считается реакция связывания комплемента. Безусловно достоверным считается титр 1:80. При более низких первоначальных титрах следует учитывать динамику их нарастания.

Вместе с тем в ряде случаев при безусловной клинической и эпидемиологической диагностике Ку-лихорадки титр реакции связывания комплемента остается низким в течение всей болезни, а иногда она оказывается даже отрицательной (до 5% случаев).

Общепризнано, что серологические реакции при Ку-лихорадке (в противоположность другим риккетсиозам) бывают отрицательными со всеми типами протея (реакция Вейля—Феликса) и с возбудителями других риккетсиозов.

Антиген для реакции связывания комплемента выпускается в сухом виде и перед постановкой реакции его разводят в физиологическом растворе из расчета 50 млн. риккетсий на 1 мл.

При отдаленности лаборатории доставка материала возможна также в виде сухой капли сыворотки на бумаге. Для постановки внутрикожной аллергической пробы аллерген вводят на внутреннюю поверхность предплечья в дозе 0,1 мл, в разведении 1:10 — 1:5. Реакция считается положительной, если через 6—8 ч появляется гиперемия, затем отечность. Через 20-24 ч в центре гиперемии отмечается небольшой инфильтрат.

По данным как отечественных, так и зарубежных авторов, аллергическая проба еще более специфична, чем реакция связывания комплемента. Положительная реакция у больных выявляется на 3—8—10-й день заболевания и сохраняется в прослеженных случаях до 4 лет. Возможность более длительного сохранения реакции не исключена. Поэтому аллергическая проба при Ку-лихорадке имеет лишь вспомогательное значение, так как с ее помощью невозможно отличить текущее заболевание от имевшего место в прошлом. В эпидемиологической практике метод аллергической пробы может найти применение для ретроспективной диагностики.

Бактериологическая диагностика Ку-лихорадки является наиболее достоверным методом, однако проведение таких исследований требует специально оборудованной лаборатории и подготовленного персонала.

Для выделения возбудителя можно пользоваться кровью, спинномозговой жидкостью, мочой и мокротой (при легочной форме) больного; взятых в разгар заболевания. Материал в объеме 5 мл вводят внутрибрюшинно морской свинке весом 300—400 г, у которой затем ежедневно измеряют ректальную температуру. Если температура повышается более 39,5°, то производят дальнейшие пассажи здоровым морским свинкам 10% взвесью печени и селезенки больной морской свинки, так как в ряде случаев при первых пассажах обнаружить возбудителя не удается.

Возбудитель идентифицируется по обнаружению риккетсий в окрашенных мазках из тканей инфицированных животных, по результатам опытов перекрестного иммунитета, по наличию в сыворотке выздоравливающих морских свинок специфических комплементсвязывающих антител.

Более быстрым методом лабораторной диагностики является введение 0,25 мл 10% взвеси крови или селезенки в яичко здоровой морской свинки. При этом уже в первом пассаже можно обнаружить риккетсии в зараженном яичке на 7—10-й день заболевания.

Культивирование выделенных штаммов возможно также на 7-дневных куриных эмбрионах, которых заражают 0,5 мл 10% взвеси селезенки пассажной морской свинки.

При посылке материала в лабораторию рекомендуется (для сохранения возбудителя) помещать сгустки крови в химически чистый глицерин. Материал забирают в стерильных условиях.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

источник

Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку «Купить» и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль».

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

• Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
• Курьерская доставка (7 дней)
• Самовывоз из московского офиса
• Почта РФ

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

Заместитель министра здравоохранения СССР

по эпидемиологии, клинике, лечению и профилактике лихорадки Ку *

Лихорадка Ку является остролихорадочным заболеванием человека. Возбудитель ее принадлежит к группе риккетсий и поражает многие виды домашних и диких животных, птиц н членистоногих. Болезнь относится к группе зоонозных инфекций и характеризуется наличием природных и сельскохозяйственных (антропургических) очагов.

Наличие лихорадки Ку на территории Советского Союза было установлено в 1953 году. В настоящее время выявлено значительное распространение этого риккетсиоза. Заболеваемость лихорадкой Ку регистрируется во всех союзных республиках. Более высока инфицироваиность населения в среднеазиатских республиках. На территории РСФСР лихорадка Ку встречается почти во всех областях европейской части; в Сибири и на Дальнем Востоке ее распространение исследовано мало.

Сведения о географическом распространении Ку-риккет-сиоза обусловливается степенью изученности этого заболевания и, возможно, что в связи с неясностью клинического проявления болезни и недостаточным знакомством врачей с ней, больные лихорадкой Ку регистрируются под другими диагнозами.

Возбудитель лихорадки Ку — Rickettsia burneti впервые был выделен из крови больного в Австралии и описан Бернетом и Фрименом в 1937 году.

Почти одновременно и независимо от них в Америке Дэвисом и Коксом (1938) из клещей Dermacentor andersoni был выделен аналогичный возбудитель, названный авторами Rickettsia diaporica.

* Разработано лабораторией эндемических риккетсиозов И ЭМ имени Н. Ф. Гамалеи АМН СССР и Клиникой инфекционных болезней II МОЛМИ им. К. И- Пирогова

Впоследствии была установлена идентичность риккетсий, выделенных в Австралии и Америке, и возбудитель Ку-рик-кетсиоза получил наименование риккетсий Бернета или Coxiella burne’ti.

Возбудитель лихорадки Ку представляет собой мелкий неподвижный граммотрицательный микроорганизм, различимый в световом микроскопе при специальных методах окраски (Романовского-Гимзы, Маккиавелло-Здродовского, Зотова-Блинова, Морозова и др.). Он обладает полиморфизмом и встречается в виде мельчайших кокковидных, палочковидных и биполярных форм или цепочек. Фильтрующиеся формы возбудителя Ку-риккетсиоза проходят через фильтр Мандлера *7, 8 и 9 и Беркефельда N и W и коллодийные мембраны. Отличительным свойством риккетсий Бернета от возбудителей других риккетсиозов является их устойчивость во внешней среде и к воздействию ряда химических и физических агентов.

Риккетсии Бернета, являясь внутриклеточными паразитами, не способны к размножению на обычных питательных средах. Наиболее распространенным и общепринятым методом культивирования риккетсий Бернета является выращивание их в желточном мешке куриного эмбриона (метод Кокса). Используются также культуры тканей и заражение лабораторных животных. Среди последних наиболее чувствительными к риккетсиям Бернета являются морские свинки, менее — мыши, крысы и кролики. Экспериментально установлена восприимчивость к риккетсиям Бернета многих видов диких к домашних млекопитающих и птиц, клещей и некоторых других членистоногих.

Эпидемиология. Ку-риккетсиоз представляет собой зооноз с природной очаговостью. Циркуляция возбудителя в природ* ных очагах осуществляется благодаря высокому носительству риккетсий Бернета многими видами клещей и их теплокровных ирокормителей. В настоящее время риккетсионосительст-во установлено более чем у 60 видов диких млекопитающих, 47 видов птиц и более чем у 40 видов клещей, главным образом, иксодовых. У некоторых видов клещей выявлена способность передавать риккетсии Бернета и трансовариально, что свидетельствует об эволюционной адаптации возбудителя к этим видам членистоногих.

В сельскохозяйственных (антропургических) очагах в циркуляцию возбудителя включаются домашние животные. Заражение сельскохозяйственных животных может осуществляться как в природных очагах от естественно инфицированных клещей, так и от больных домашних животных в условиях их совместного содержания. Степень пораженности скота зависит от

Ку-риккетсиоза в том или ином районе, области или республике. Обследованию подлежат профессиональные группы населения, имеющие наибольшую возможность инфицирования: животноводы и работники производств, перерабатывающих продукты животноводства. Для выявления инфицированности населения, не связанного профессионально с животными или продуктами животноводства, целесообразно исследовать на Ку-риккетсиоз сыворотки доноров.

Дальнейшее обследование очага Ку-лихорадки осуществляется эпидемиологами с привлечением, в случае необходимости, ветеринарных работников, зоологов и паразитологов СЭС.

Зоологи и паразитологи санитарно-эпидемиологических станций должны выявлять природные очаги Ку-риккетсиоза, устанавливать его тип и видовой состав диких теплокровных и членистоногих, участвующих в циркуляции возбудителя в природных очагах. Особое внимание при этом должно быть обращено на обнаружение клещей, которые нападают на скот к людей.

В случае необходимости размещения людей в природных очагах Ку-риккетсиоза разбивку полевых станов и лагерей необходимо проводить только на территории, освобожденной от растительности путем вырубки кустов, перекопки земли, выжигания травы, а в случае большой концентрации клещей на территории станов и лагерей рекомендуется применение инсектицидов: трихлорофоса (по 0,2 гр АДВ на м 2 ), метил-нитрофоса (0,3 гр. АДВ/м 2 ).

Вне пастбищных угодий можно применять 10% Дуст ДДТ с нормой расхода 30—50 кг/га, используя для этой цели авиацию.

Определенный профилактический эффект может быть достигнут при соблюдении личной защиты от нападения клешей: ношение защитной одежды, осмотр тела на наличие присосавшихся клещей, импрегнации одежды репеллентами.

Наряду с дезинсекционными мероприятиями необходимо проводить борьбу с грызунами —• носителями возбудителя Ку-риккетсиоза.

Мероприятия в отношении Ку-риккетсиоза среди сельскохозяйственных животных проводятся ветеринарными организациями согласно специально разработанной инструкции (см. «Ветеринарное законодательство», М, 1959, стр. 737, 1153 и др.)*

Ветеринарные мероприятия должны входить в комплекс профилактических мероприятий по предупреждению заболеваемости лихорадкой Ку людей,

В неблагополучных по Ку-риккетсиозу хозяйствах устанавливается режим работы и меры личной профилактики животноводов аналогичные тому, как это рекомендуется для бруцеллезных хозяйств (см. Санитарные правила по охране здоровья людей, обслуживающих животных в оздоравливаемых от бруцеллеза хозяйствах и в бруцеллезных изоляторах, утвержденные Госсанинспекцией Минздрава СССР и согласованные с Министерством сельского хозяйства СССР 8-го января 1962 г.). К уходу за пораженным скотом допускаются только лица, перенесшие лихорадку Ку или вакцинированные. Обслуживающий больных животных персонал должен находиться под постоянным медицинским наблюдением. Персонал, работающий в карантинных и помещениях для отела, должен быть обеспечен достаточным количеством спецодежды, обеззара жкваяие которой следует производить путем замачивания в дезинфицирующих растворах (3% хлорамин, 5% раствор фенола при экспозиции не менее 1 часа) или путем кипячения в течение 20 минут в 2% содовом растворе. Прорезиненную или резиновую одежду и обувь (фартуки, перчатки, сапоги и т. п.) протирают ветошью, смоченной в одном из указанных выше дезинфицирующих растворов.

В качестве фактора передачи возбудителя инфекции от больного скота человеку большое значение имеют молоко и молочные продукты, которые являются хорошей средой для сохранения риккетсий Бернета. Поэтому молоко от больных коров, овец и коз необходимо обеззараживать кипячением.

Пищевые продукты и промышленное сырье животноводства из неблагополучных по Ку-риккетсиозу хозяйств должны направляться на реализацию с соответствующим указанием ветеринарного и санитарного надзора.

Убой больных животных должен осуществляться лишь в условиях санитарной бойни. Мясо подвергается специальной обработке (проверка), внутренние органы больных животных рекомендуется уничтожать. Каракулевые смушки, шерсть, пух и шкуры животных из неблагополучных по лихорадке Ку хозяйств должны подвергаться специальной обработке согласно режиму, предусмотренному в наставлении о дезинфекции сырья, неблагополучного по бруцеллезу (см. Ветеринарное законодательство М, 1962, стр. 315).

Поскольку заражение людей лихорадкой Ку может происходить не только при уходе за больными животными, но и при обработке продуктов животноводства, профилактические мероприятия, направленные на разрыв путей передачи, входят как обязательный раздел режима работы мясоперерабатывающих и молочных заводов, шерстеобрабатывающих, меховых

■1 кожевенных предприятий, заготовительных саз животного сырья и т. д., которые изложены в ветеринарном законодательстве (М., 1959, гл. 4 и 5).

Контроль за осуществлением режима работы на указан-ных предприятиях возлагается на учреждения санитарно-эпидемиологической службы.

Специфическая профилактика лихорадки Ку осуществляется путем создания активного иммунитета вакцинацией угрожаемых групп населения. Вакцинации подлежат лица в возрасте от 14 до 50 лет, прибывшие в неблагополучные по лихорадке Ку районы, лица, профессионально связанные или временно привлекаемые к работе по обслуживанию крупного и мелкого рогатого скота, рабочие предприятий, обрабатывающих сырье и продукты животноводства, персонал мясокомбинатов и убойных пунктов, ветеринарный и зоотехнический персонал, лица, работающие с живыми культурами риккетсий Бернета. Массовые прививки персонала, работающего в животноводческих хозяйствах, проводятся за 2—3 месяца до окота, на мясокомбинатах (бойнях) за 1—2 месяца до начала массового убоя скота. В первую очередь должны быть привиты лица, вновь поступающие на работу и работающие менее одного года на предприятиях или хозяйствах, где выявилось заболевание Ку-лихорадкой среди людей и скота или имеется подозрение на возможность заноса этой инфекции. При поступлении на работу новых лиц им должны быть сделаны прививки за 3 недели до начала работы. Прививки против Ку-ли-хорадки должны проводиться не позднее, чем за 2 месяца перед другими прививками и не ранее, чем через 2 месяца после других прививок, за исключением прививок против бруцеллеза. Одновременная вакцинация против Ку-лнхорадки и бруцеллеза проводится по эпидемиологическим показаниям указанным выше профессиональным группам населения. Отбор лиц, подлежащих одновременной вакцинации против Ку-лихорадки и бруцеллеза, необходимо проводить в соответствии с наставлениями по вакцинации против бруцеллеза и Ку-риккетсиоза.

Специфическая профилактика лихорадки Ку осуществляется вакциной, представляющей собой взвесь яичной культуры риккетсий Бернета варианта М-44, высушенной под вакуумом на снятом стерильном молоке.

В настоящее время вакцинация осуществляется накожным методом в соответствии с наставленном по применению сухой живой вакцины М-44 (МРТУ-42 № 11, утвержденные Министерством здравоохранения СССР 14/VIM964), прилагаемым к вакцине.

Отбор лиц, подлежащих вакцинации, производится без предварительного обследования по сероиммунологическим реакциям.

Накожная вакцинация сухой вакциной М-44 проводится однократно. Местная реакция после вакцинации против Ку-лихорадки появляется через 2—3 суток в виде покраснения и узелковой припухлости по ходу насечек. Общая реакция возникает лишь в отдельных случаях и выражается в недомогании, головной боли с незначительным повышением температуры.

Установлено, что после вакцинации иммунитет возникает через месяц. Максимальные серологические показатели иммунитета приходятся на второй-третий месяц после вакцинации.

Ревакцинация проводится не ранее, чем через 2 года после вакцинации, в зависимости от эпидемиологических показаний. Ревакцинации подлежат лица с отрицательной РСК с антигеном из риккетсий Бернета. Дозы вакцины, техника прививок и противопоказания при ревакцинации те же, что и при вакцинаций.

В отношении населения, не относящегося к профессиональным группам, вакцинация может быть осуществлена по эпидемиологическим показаниям.

Л 92910 от 12/уПЬ68 г. Объем 1 п. л. Зак. 43

Типография Министерства здравоохранения СССР

широты Еосительства риккетсий клещами и дикими видами теплокровных в той или иной местности. Характер эпидемического процесса в свою очередь зависит от степени пораженное™ скота.

Инфекция у скота протекает в виде легкого лихорадочного заболевания, которое в большинстве случаев остается нераспознанным, не может быть выявлено при серологическом исследовании крови животных. В некоторых случаях заболевание сопровождается абортами, рождением нежизнеспособного молодняка, яловостью и т. д.

Больные Ку-риккетсиозом животные выделяют возбудителя с экскретами и молоком. Особую опасность они представляют в период обострения инфекции, во время отелов и ягнения, когда с плацентой, околоплодными водами, отделяемым родовых путей и плодом выделяется огромное количество возбудителя.

Попав из источника инфекции в условия внешней среды, возбудитель лихорадки Ку обнаруживает значительную выживаемость. Риккетсии Бернета сохраняют свою жизнеспособность в молоке, мясе на различных поверхностях в течение многих месяцев.

Стойкость возбудителя обеспечивает большое разнообразие путей распространения инфекции при лихорадке Ку и распространение случаев заболевания порой на значительные расстояния от источника инфекции.

В качестве источника инфекции для человека больные сельскохозяйственные животные представляют большую опасность, чем дикие. Наиболее активными, в смысле распространения инфекции, являются коровы, овцы и козы, поскольку эти виды животных широко используются в хозяйствах.

Заражение лихорадкой Ку от больного человека происходит очень редко.

При развитии специфической пневмонии у больного не исключена возможность выделения риккетсий Бернета с мокротой, что заставляет больных лихорадкой Ку с легочными явлениями рассматривать как потенциальных источников инфекции.

Механизм заражения человека при лихорадке Ку может быть различным. Наиболее часто заражение наступает вследствие употребления в пищу продуктов питания (молоко) от больных Ку-риккетсиозом сельскохозяйственных животных (алиментарный путь). Однако при производственной обработке животноводческого сырья (шерсть, щетина, пух, а также хлопок и т. д.), инфицированного риккетсиями Бернета, ведущим является аспирационный механизм заражения.

Заражение прямым контактом через кожные покровы может иметь место у лиц, которые оказывают ветеринарную помощь больным животным во время отелов, ягнения, а также при убое больных животных и в разделке туш.

Заболеваемость лихорадкой Ку имеет четко выраженный профессиональный характер, поскольку возникновение как отдельных случаев, так и особенно эпидемических вспышек, связано с заражением от скота или на производствах, перерабатывающих продукты животноводства (мясокомбинаты, молокозаводы, шерстеобрабатывающие предприятия, саиогова-ляльные или пимокатные производства, базы живзаготсырья и т. д.).

Заболеваемость лихорадкой Ку не имеет четко выраженной сезонности. В сельской местности наибольшая заболеваемость приходится на весенние месяцы года, когда у сельско-хозяйственых животных наблюдаются отелы и ягнение. Среди работников мясокомбинатов подъем заболеваемости лихорадкой Ку совпадает с осенним массовым убоем скота. На предприятиях, перерабатывающих животноводческое сырье, появление заболеваний связано с завозом инфицированного сырья и не зависит от времени года.

Клиника. Клиническое течение Ку-лихорадки отличается значительным разнообразием и вариабильиостью.

Чаще всего она протекает как острое доброкачественное лихорадочное заболевание среднетяжелого или легкого течения, сопровождающееся головной болью, ознобом, потами,общей слабостью, мышечными и суставными болями.

Инкубационный период продолжается 10—26 дней.

Начало заболевания, как правило, острое с внезапным потрясающим ознобом и повышением температуры в первый же день болезни до 39—40°. Больные жалуются на сильную, под час невыносимую, головную боль, больше в области лба и глазницах, ломоту в мышцах, особенно икроножных, и суставах, потерю сна, снижение аппетита, на общую слабость и разбитость.

Катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей наблюдаются редко. Возможны диспептические расстройства (тошнота и рвота). Одной из частых жалоб является сухой, реже с мокротой кашель, боли в грудной клетке при дыхании. Иногда мокрота содержит прожилки крови.

Тяжесть течения определяется степенью поражения центральной нервной системы, выраженностью интоксикации, тяжестью осложнений, особенно со стороны органов дыхания.

Нередко развивается вялость, адинамия, нарушение сна, У отдельных больных возможно затемнение сознания и бред.

Характерен общий вид больных: как правило, выраженная гиперемия, одутловатость лица, инъекции сосудов склер и конъюнктивы. Сыпь обычно отсутствует, и лишь у некоторых больных отмечаются быстро проходящие высыпания розеолез-кого или розеолезно-петехиального характера, располагающиеся на коже туловища и конечностях как на сгибательных, так и на разгибательиых поверхностях. Лимфатические узлы часто умеренно увеличены почти у 50% больных, что заставляет проводить тщательное обследование больных в отношении бруцеллеза и туляремии.

У 40—50%: больных лихорадка Ку сопровождается разлитым бронхитом, в 5—10% случаев выявляются пневмонии, преимущественно интерстициальные или очаговые, редко ло-барные. Пневмонии возникают со 2-го до 15-го дня болезни и продолжаются даже в периоде нормальной или субфебрильной температуры, достаточно четко проявляясь при рентгенологическом исследовании. Фнзикальные данные часто отсутствуют или выражены скудно, и лишь наличие изменений легочной ткани при рентгенологическом исследовании, а также жалобы больных на кашель, боль в грудной клетке, отделение мокроты дают основание для установления диагноза пневмонии. Особенностью данных пневмоний является и то, что лечение пенициллином или сульфаниламидами не дают эффекта.

Границы сердца почти у всех больных остаются в пределах нормы, тоны, как правило, приглушенные, первый той на верхушке нечистый. Пульс ритмичный, удовлетворительного наполнения, артериальное давление умеренно снижено. Редко выявляется миокардит.

Язык обложен сплошным белым налетом. У 10—30% больных увеличивается в размерах печень, консистенция ее не изменяется.

Увеличение селезенки обнаруживается у большинства (до 75%) больных. Селезенка выступает из-под края ребер на 0,5—1,5 см, реже — больше; уплотнения, болезненности органа обычно не отмечается.

При исследовании крови в лихорадочном периоде у 80% больных наблюдается лейкопения в пределах 4—4,5 тысяч, увеличивается процент лимфоцитов и моноцитов. Количество моноцитов достигает 15%. В крови часто находят плазматические клетки — до 4—5 на 100 лейкоцитов; у отдельных больных— гистиоциты. У 38—69% больных РОЭ ускоряется до 20—25 мм в час. В период выздоровления лимфоциты встречаются чаще и достигают более высокой степени. Со стороны красной крови как в период лихорадки, так и в период рекон-валесценции, изменения редки. Количество тромбоцитов так-

же остается нормальным. При исследовании мочи лишь у отдельных больных б период лихорадки отмечается незначительная альбуминурия.

Лихорадочный период длится от 3—4 до 15—20 дней. В 65% случаев длительность лихорадки равняется 6—9 дням. Характер лихорадки часто ремиттирующий, реже постоянный, иногда неправильный. Снижение температуры критическое или литическое.

У части больных после снижения температуры долгое время остается субфебрилитет, что, наряду с имеющейся у этих больных слабостью, резко снижает работоспособность в течение длительного времени (2—3 месяца).

У 3—4% больных после окончания основной лихорадочной волны отмечается повторное повышение температуры, сопровождающееся теми же жалобами и клиническими симптомами, что и при первой волне. Эти случаи расцениваются как рецидивы заболевания. Рецидив обычно наступает через 4— 8 дней после снижения температуры и улучшения общего состояния. Длительность лихорадки при рецидиве равняется 4— 10 дням.

Осложнения при Ку-лихорадке редки, но возможны: плевриты, артриты, орхиты, тромбофлебиты, эмболии, гепатиты, холециститы. Осложнения свойственны лицам пожилого возраста, страдающим различными сердечно-сосудистыми заболеваниями.

Легкое течение заболевания отмечается у 30—40% больных, заболевание средней тяжести — у 50—60% и тяжелое течение у 5—10%. Летальные исходы очень редки.

Легкие случаи течения могут дать амбулаторную форму с коротким лихорадочным периодом (несколько дней) и быстрым выздоровлением с восстановлением трудоспособности.

Клиническое течение лихорадки Ку у детей не отличается от течения этого заболевания у взрослых.

Распознавание лихорадки Ку всегда сопровождается дифференциальным диагнозом с рядом инфекционных заболеваний, имеющих сходные клинические проявления. К числу их относятся: грипп, аденовирусные заболевания, брюшной тиф и паратифы, туляремия, бруцеллез, лептоспирозы, орнитоз, пневмонии, особенно атипичные, иногда туберкулез, малярия.

Несмотря на ряд характерных признакоз (лихорадка, поражение легких, увеличение печени, селезенки, лимфоузлов и др.) ставить диагноз часто клинически, даже с учетом эпидемиологических данных сложно и рискованно.

Во всех случаях диагноз Ку-лихорадки должен ставиться с учетом специального лабораторного обследования, причем

не только в отношении Ку-риккетсиоза, но и в отношении тех заболеваний, с которыми он дифференцируется.

Лечение. При лечении больных необходимо постельное содержание в течение всего лихорадочного периода, а у тяжелых больных — более длительное время. Показано обильное питье и легко усвояемая диэта.

Специфическими средствами являются препараты терра-циклинового ряда (террамицин, тетрациклин ,биомицин) в дозе 0,2—03X4 раза в сутки. Возможно применение левомицс-тина или синтомицина в дозе 0,5X4 раза в день.

Длительность курса лечения антибиотиками не менее 5— 8 дней. Следует помнить, что препараты оказывают бактериостатический эффект, поэтому их отмена возможна лишь на 4—5-й день нормальной температуры.

Присоединение вторичной флоры требует комбинированного применения антибиотиков и сульфаниламидов.

Ранняя отмена специфического лечения увеличивает процент рецидивов. Сердечно-сосудистые средства и другие виды патогенетической терапии назначаются в зависимости от показаний и тяжести состояния больного.

Лабораторная диагностика может осуществляться путем определения специфических антител при помощи серологических реакций, а также методом выделения возбудителя из крови больного.

Серологические методы диагностики наиболее просты и могут быть использованы во всех вирусно-риккетсиозных и бактериологических лабораториях.

Наиболее доступен и вполне достоверен метод диагностики при помощи реакции связывания комплемента и реакции агглютинации с риккетсиями Бернета. У больного человека реакция агглютинации с антигеном из риккетсий Бернета становится положительной с конца первой — начала второй недели болезни, максимальных титров достигает на 3—5-й неделе и в низких титрах сохраняется 3—6 месяцев.

Реакция связывания комплемента начинает обнаруживаться с 5—9-го дня или несколько позже, наиболее выражена на 3—5-й неделе и на низких титрах держится несколько лет после перенесенного заболевания. Отрицательные результаты в ранние сроки не исключают предположения о лихорадке Ку. Титры РА и РСК 1:10 и 1:20 считаются убедительными, но для обоснования диагноза (в целях исключения анамнестической реакции) необходимы повторные исследования, которые показывали бы нарастание титр антител.

Методика постановки реакции изложена в «Наставлении по технике постановки реакции связывания комплемента с

риккетсиозными антигенами», утвержденном Министерством здравоохранения СССР (МРТУ-42 от 11 октября 1965 года)

Наставление прилагается производственным институтом к антигену из риккетсий Бернета.

Выделение от больных возбудителя лихорадки Ку требует специально оборудованного помещения и связано с длительным периодом времени, в силу чего к этому методу диагностики прибегают в исключительных случаях, главным образом, при установлении новых очагов инфекции.

Для биологических проб чаще всего используют морских свинок, как наиболее чувствительных к Ку-риккетсиозу животных.

Ку-риккетсиоз у морских свинок развивается при введении материала, содержащего риккетсии Бернета под кожу, внутрибрюшинио, внутритестикулярно, а также при интрана-зальном и пероральном заражении и при нанесении на слизистые оболочки и на поврежденную кожу.

При любом способе заражения у животных развивается генерализованный процесс с повышением температуры и ха рактерными изменениями паренхиматозных органов, в которых происходит размножение и накопление риккетсий Бернета. При подкожном заражении на месте введения материала развивается характерный геморрагический инфильтрат.

При диагностике лихорадки Ку методом биопробы кровь у больного берут из вены в количестве 5—6 мм. Заражение производят цельной или дефибринированной кровью или сгустком, взвешенным в физиологическом растворе. Наиболее оптимальными сроками для выделения возбудителя из крови являются дни первой недели болезни с повышенной температурой. Обычно пробой крови от одного больного заражают 2 свинки весом 200—250 г. Животных ежедневно термометри-руют; одну свинку убивают на высоте подъема температуры, а другую оставляют для серологического обследования, которое проводят через 3—4 недели с момента заражения.

Специфичность экспериментальной инфекции у зараженных животных может быть подтверждена серологически, при микроскопии мазков из паренхиматозных органов, выделением возбудителя на тканевых культурах и куриных эмбрионах, а также путем установления невосприимчивости к повторному заражению достаточной дозой вирулентного штамма.

Профилактика. Основной принцип проведения борьбы с лихорадкой Ку заключается в комплексности, то есть одновременном осуществлении мероприятий в отношении всех звеньев эпидемической цепи. Однако при этом в каждом от-

дельном случае необходимо выделить ведущее мероприятие» проведение которого легче в организационном отношении и более быстро обеспечило бы успех.

Такой дифференцированный подход к проведению профилактических мероприятий может быть осуществлен лишь на основе глубокого анализа данных, полученных путем тщательного изучения зоологопаразитологического, эпизоотологичес-кого и эпидемиологического статуса совместными усилиями медицинских и ветеринарных работников.

Задачей лечебно-профилактических учреждений и учреждений санитарно-эпидемиологической службы является установление наличия заболевания у людей и степени распростра нения этого риккетсиоза в той или иной местности. Решение этой задачи должно осуществляться как по линии лечебной сети — выявление и лечение больных и инфицированных людей, так и по линии санитарно-эпидемиологических станций— установление наличия очагов Ку-риккетсиоза и осуществление мероприятий, направленных на разрыв путей передачи инфекции от животных, птиц, клещей человеку.

Полный учет заболеваемости может быть осуществлен при организации активного выявления больных лихорадкой Ку — путем серологического обследования лихорадочных больных с недостаточно точно установленным диагнозом. Обследованию подлежат больные как поступающие в инфекционные больницы, так и температурящие амбулаторные больные, находящиеся на больничном листе более 5 дней. При отборе больных для серологического обследования на лихорадку Ку необходимо учитывать анамнестические данные и профессию больного.

Госпитализацию больного лихорадкой Ку проводят по клиническим показаниям в инфекционное отделение больниц. Соблюдение обычного режима в этих отделениях обеспечивает безопасность больных лихорадкой Ку для окружающих.

Больные с явлениями поражения легких нуждаются в более тщательной изоляции (боксы, отдельные палаты).

В окружении таких больных проводят текущую дезинфекцию с обязательным обеззараживанием мокроты (кипячением плевательниц и их содержимого в 2% растворе соды в течение 30 минут или погружением на 1 час в 3% раствор хлорамина, 5% раствор перекиси водорода, 2% осветленный раствор хлор-ной извести или 1% раствор двутретиосновной соли гипохлорита кальция.

Посуда больного, нательное и постельное белье кипятятся в течение 20 минут в 2% растворе соды или погружаются на 1 час в один из указанных выше растворов. На 1 кг белья берется 5 литров раствора.

Помещение, предметы обстановки, мебель, предметы ухо* да регулярно протирают ветошью, смоченной 3% раствором перекиси водорода с добавлением 0,5% раствора моющего средства («Прогресс» или «Сульфанол») или другими, указанными выше растворами.

При проведении заключительной дезинфекции по поводу лихорадки Ку применяются те же средства дезинфекции, что и при текущей. Поверхности орошают из расчета 300 мл на 1 М“, а мебель протирают ветошью, смоченной в одном из дезинфицирующих растворов. Кроме того проводят камерную дезинфекцию постельных принадлежностей и верхней одежды больного пароформалиновым методом при температуре 58— 59°С, расходе 40% формалина 300 мл на 1 м 3 камеры, экспозиции 3,5 часа.

При установлении дианоза Ку-лихорадки на каждого больного необходимо направить в санитарно-эпидемиологическую станцию карту экстренного извещения, и все случаи заболевания вносить в журнал (форма № 60).

Каждый выявленный случай лихорадки Ку должен быть обследован врачом-эпидемиологом с заполнением карты эпидемиологического обследования для больных трансмиссивными заболеваниями и зоонозами (форма № 171-в). Эпидемиологическое обследование включает сбор эпиданамнеза больного и посещение очага (по месту жительства и работы), во время которого определяется общая эпидемиологическая ситуация, выявляются причины заболевания и новые больные, проводятся срочные эпидемиологические мероприятия, назначается серологическое обследование и термометрия окружающих. Серологическому обследованию и термометрии подлежат члены семьи заболевшего и ближайшие соседи, если предполагается, что заражение произошло по месту жительства.

В случае установления заболевания на производстве серологическому обследованию подлежат лица, перенесшие в течение последних 3-х месяцев лихорадочное заболевание на данном производстве, и, здоровые, работающие в одном цехе с заболевшим. Целью такого обследования является уточнение действительной распространенности инфекции на данном производстве, выявление легких, стертых и бессимптомных случаев, а также выяснение путей передачи возбудителя и источника инфекции.

Серологическое обследование здоровых лиц является одним из методов выявления и определения распространенности 10

источник

1. БОЛЕЗНИ, ОБЩИЕ ДЛЯ ВСЕХ ИЛИ НЕСКОЛЬКИХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ

КАТАРАЛЬНАЯ ЛИХОРАДКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ОВЕЦ И КОЗ

1.7. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ КАТАРАЛЬНОЙ ЛИХОРАДКИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ОВЕЦ И КОЗ

УТВЕРЖДЕНЫ 11 июня 1986 г., N 432-5

1.1. Лабораторные методы исследования на катаральную лихорадку крупного рогатого скота, овец и коз включают в себя следующие:

— патогистологическое исследование;

— выделение вируса на культуре клеток и куриных эмбрионах с последующей идентификацией в реакции иммунофлуоресценции (ИФ);

— выявление группоспецифических антител в сыворотках крови больных или переболевших животных в РДСК, РДП;

— постановку биологической пробы на овцах (в сомнительных случаях).

Выделение и идентификацию вируса, исследования сывороток крови животных ветеринарные лаборатории проводят группоспецифическими методами. Окончательное титрование вируса по 23 серологическим вариантам в реакции нейтрализации проводят во Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии (ВНИИВВиМ).

1.2. В лабораторию для исследования на катаральную лихорадку направляют:

— кусочки селезенки и лимфатические узлы от павших или убитых животных в свежем виде или консервированные 30%-ным раствором глицерина, приготовленным на фосфатно-буферном растворе (рН 7,2. 7,4);

— пробы крови от больных животных, взятые в период температурной реакции во флаконы в количестве 10 мл, пробы стабилизируют равным объемом антикоагулянта — раствором Эдингтона следующего состава: щавелевокислый калий — 5 г, карболовая кислота — 5 г, глицерин — 500 мл, дистиллированная вода — 500 мл;

— кусочки скелетных мышц, сердца, языка, губ, стенок книжки и рубца, фиксированные 10%-ным раствором формалина для патологогистологического исследования, а также нефиксированные кусочки лимфатических узлов, селезенки, легких, печени и почек с надпочечниками;

— сыворотку крови для серологических исследований от больных или переболевших животных в количестве 2. 3 мл.

Патологический материал для вирусологических исследований отбирают не позднее, чем через два часа после гибели животных, в стерильные флаконы или пробирки и доставляют в лабораторию в термосе со льдом.

Сыворотку крови для серологических исследований можно сохранять при температуре -20°С и ниже. Консервирование сывороток химическими реактивами не допускается.

2.1. Для гистологического исследования готовят парафиновые срезы из фиксированных 10%-ным раствором формалина кусочков скелетных мышц, сердца, языка, губ, стенок книжки и рубца и окрашивают гематоксилин-эозином.

Для выявления внутриклеточных цитоплазматических включений берут кусочки лимфатических узлов, селезенки, легких и почек с надпочечниками, фиксируют их в жидкости Карнуа (спирт этиловый — 60 мл, хлороформ — 30 мл, ледяная уксусная кислота — 10 мл) и заливают в парафин. Срезы окрашивают метиловым зеленым — пиронином или ШИК-реакцией.

При исследовании гистологических препаратов необходимо иметь в виду, что в случае заболевания животных катаральной лихорадкой обнаруживают резко выраженные поражения микроциркуляторного русла в скелетных мышцах и мышечных волокнах сердца, языка, губ — колбовидное набухание, гомогенизацию, губчатый распад, лизис и некроз; в межмышечной соединительной ткани — сильный отек, кровоизлияния и лимфоидно-гистиоцитарный инфильтрат; в стенках книжки и рубца — некроз покровного эпителия и основы слизистой оболочки, а также отек, диффузные кровоизлияния и лимфоидный инфильтрат в соединительной ткани подслизистого слоя.

При окраске специальными методами срезы просматривают под микроскопом с иммерсионной системой, причем в цитоплазме ретикулярных клеток и макрофагов лимфатических узлов и селезенки, в клетках легких, печени, почках и надпочечников могут быть найдены цитоплазматические включения округлой или овальной формы красного цвета (метод Браше), пурпурного или лилово-красного (ШИК-реакция). Часто обнаруживают значительное уменьшение количества лимфоцитов в селезенке и лимфатических узлах (опустошение).

2.2. По обнаруженным характерным патологогистологическим изменениям и тельцам-включениям ставят предварительный диагноз на катаральную лихорадку овец.

3.1. Подготовка материала к исследованию

3.1.1. Для проведения исследований из патологического материала (селезенки, лимфатических узлов) готовят 10%-ную суспензию на фосфатном буферном растворе (рН 7,4. 7,6) или на питательной среде с 0,5% гидролизата лактальбумина, к которой добавляют 1000 ЕД пенициллина и 500 мкг стрептомицина на 1 мл. Патологический материал, консервированный глицерином, предварительно отмывают в фосфатном буферном растворе (рН 7,4. 7,6).

Приготовленную суспензию центрифугируют 30 мин при 2000. 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную пробирку, помещают в холодильник и выдерживают при 2. 4°С в течение 3. 4 ч. Затем делают высевы на питательные среды (МПБ, МПА) для исключения бактериального загрязнения.

Через сутки, при отсутствии роста микрофлоры на питательных средах, надосадочную жидкость используют для заражения клеточных культур и куриных эмбрионов.

3.1.2. Пробы крови с антикоагулянтом центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин. Осадок эритроцитов трижды промывают стерильным физиологическим раствором (рН 7,2. 7,4), затем готовят 20%-ную суспензию эритроцитов на фосфатном буферном растворе (рН 7,4. 7,6) для заражения культур клеток и куриных эмбрионов.

3.2. Выделение вируса на культуре клеток

3.2.1. Выделяют вирус на первично-трипсинизированной культуре клеток почки ягнят (ПЯ) или перевиваемой линии клеток ВНК-21.

3.2.2. В матрасы на 100 мл (не менее 5) с культурой клеток ПЯ или ВНК-21 после удаления ростовой среды вносят 2. 3 мл суспензии исследуемого материала и равномерно распределяют ее по монослою клеток.

Матрасы помещают в термостат на 1 ч при 37°С, после чего вносят поддерживающую среду в количестве 10. 15 мл (для культуры клеток ВНК-21 — среду Игла с двойной концентрацией аминокислот; для ПЯ — 0,5%-ный раствор гидролизата лактальбумина без сыворотки).

Контролем служат матрасы с незараженной культурой клеток, в которых ростовая среда заменена поддерживающей.

3.2.3. Матрасы, зараженные исследуемым материалом, и контрольные помещают в термостат при 37°С. Для учета цитопатического действия вируса (ЦПД) проводят ежедневно микроскопическое исследование клеточных культур в течение 7 дней.

3.2.4. Цитопатическое действие вируса в культуре клеток ВНК-21 можно обнаружить через 36. 40 ч по наличию округлых клеток, с последующим разрушением всего монослоя. ЦПД вируса в культуре клеток ПЯ проявляется на 6. 7-й день зернистостью, округлением клеток, образованием тяжей, отслоением клеток от стекла.

В контрольных незараженных культурах цитопатические изменения должны отсутствовать.

3.2.5. При выявлении в культурах ЦПД отбирают из матрасов культуральную жидкость в объеме 0,4 мл для заражения монослоя клеток аналогичной культуры, выращенных на стеклянных пластинках (стеклышках), в пробирках или пенициллиновых флаконах. После выдерживания зараженных культур в термостате при 37°С в течение 72 ч стеклышки извлекают, высушивают на воздухе, фиксируют 10 мин в охлажденном при температуре -20°С ацетоне и используют для идентификации вируса в иммунофлуоресценции.

3.2.6. При отсутствии цитопатического действия вируса (ЦПД) проводят два последовательных пассажа в аналогичной клеточной культуре.

3.3. Выделение вируса на куриных эмбрионах

3.3.1. Для выделения вируса на куриных эмбрионах (КЭ) суспензию исследуемого материала (см. п.3.1) вводят 8. 9-дневным КЭ в желточный мешок в дозе 0,2. 0,3 мл или 13. 14-дневным КЭ внутривенно в дозе 0,1. 0,2 мл. Каждым материалом заражают не менее 5 эмбрионов.

3.3.2. Зараженные куриные эмбрионы помещают в термостат при 33,5°С и выдерживают в течение 5 дней. В этот период эмбрионы овоскопируют два раза в сутки. Куриные эмбрионы, погибшие в течение первых 24 ч, уничтожают (неспецифическая гибель), остальные эмбрионы после гибели и все оставшиеся живыми на 5-е сутки после заражения охлаждают в холодильнике 2. 4 ч при 2. 4°С, затем их вскрывают и исследуют зародыш на наличие макроскопических изменений. Характерными для возбудителя катаральной лихорадки является вишнево-красная окраска погибших куриных эмбрионов с многочисленными кровоизлияниями на голове и туловище.

3.3.3. Для идентификации выделенного вируса готовят 10%-ную суспензию из эмбрионов (без головы) и заражают клеточные культуры (см. п.3.2.5).

3.3.4. При сохранении жизнеспособности эмбрионов или отсутствии характерных изменений у погибших проводят два последовательных пассажа на КЭ, используя 10%-ную суспензию (см. п.3.3.3).

3.4.1. Для идентификации вируса пользуются прямым и непрямым методом иммунофлуоресценции.

3.4.2. При прямом методе на стеклянные пластинки (стеклышки) с зараженной культурой клеток наносят специфическую флуоресцирующую сыворотку в рабочем разведении. Препараты помещают во влажную камеру на 30 мин при 37°С, затем их промывают в двух сменах фосфатного буферного раствора по 10 мин.

В качестве контроля окрашивают стеклышки с незараженной культурой клеток.

3.4.3. При непрямом методе на стеклышки с зараженной культурой клеток наносят специфическую (немеченую) сыворотку катаральной лихорадки в рабочем разведении. Для контроля на часть препаратов наносят нормальную сыворотку овцы.

Препараты помещают во влажную камеру и выдерживают в термостате 30 мин при 37°С, затем дважды их промывают физиологическим раствором (рН 7,2. 7,4) по 10 мин и после подсушивания наносят антивидовую флуоресцирующую сыворотку в рабочем разведении. Окрашивают их во влажной камере 30 мин при 37°С. После промывания препаратов в двух сменах фосфатного буферного раствора (рН 7,2. 7,4) их подсушивают и просматривают в люминесцентном микроскопе.

3.4.4. При положительном результате в препаратах обнаруживают ярко светящиеся зелено-желтым цветом гранулы, конгломераты в цитоплазме и перинуклеарной зоне или такой же интенсивности диффузное свечение всей или большей части цитоплазмы.

В контрольных препаратах аналогичное свечение должно отсутствовать.

3.4.5. Метод иммунофлуоресценции является группоспецифическим и им может быть идентифицирован любой возбудитель из 23 серологических антигенных вариантов.

Для окончательного установления типа возбудителя применяют реакцию нейтрализации (во ВНИИВВиМ).

4.1. Для постановки биологической пробы используют овец породы «прекос» 6. 8-месячного возраста из хозяйства, благополучного по инфекционным болезням.

Перед заражением исследуют сыворотку крови овец на наличие антител к вирусу катаральной лихорадки в РДСК и РДП.

4.2. Биопробу ставят на двух овцах, которым вводят суспензию исследуемого материала внутривенно в дозе 10 мл.

4.3. Результаты биологического исследования считают положительными в случае повышения температуры (до 41. 42°С) у овец на 5. 7-й день после заражения; появления гиперемии слизистых оболочек рта и носа, отека губ, языка; эрозии в уголках губ, на деснах, языке; угнетения; поражения конечностей; цианоза слизистых оболочек и языка у отдельных овец, выпадения шерсти.

4.4. При отсутствии характерных клинических симптомов заболевания катаральной лихорадкой от зараженных овец берут пробу крови в период температурной реакции (или на 5. 7-е сутки после заражения) для выделения вируса на культуре клеток (см. п.3.2) и через 2. 3 недели после заражения исследуют сыворотки крови в РДСК, РДП для обнаружения специфических антител.

5.1. Реакция длительного связывания комплемента (РДСК) и реакция диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП) — групповые специфические методы, применяемые для обнаружения антител к вирусу катаральной лихорадки в сыворотке крови овец, коз и крупного рогатого скота, переболевших данной болезнью (ретроспективная диагностика).

У крупного рогатого скота серологическая реакция на вирус может быть слабой, поэтому при постановке РДСК антиген берут в меньшем разведении.

5.2. Реакция длительного связывания комплемента

5.2.1. Компоненты реакции:

— сыворотки испытуемые и контрольные (специфическая и контрольная);

— антигены — специфический и нормальный;

— эритроциты барана — 2%-ная взвесь;

— гемолитическая сыворотка (гемолизин) биофабричного производства;

— комплемент — биофабричного производства или свежая сыворотка морской свинки;

— 0,85%-ный раствор химически чистого хлорида натрия на дистиллированной воде, рН 7,2. 7,4.

5.2.2. Подготовка компонентов реакции

Испытуемые сыворотки разводят физиологическим раствором в отношении 1:8, контрольные — до рабочего разведения, указанного на этикетке. Разведенные сыворотки мелкого рогатого скота инактивируют 30 мин при 60°С, крупного рогатого скота — при 58°С.

Проросшие и гемолизированные сыворотки для исследования непригодны.

Специфический и нормальный антигены разводят физиологическим раствором до объема, указанного на этикетке. При исследовании сывороток крупного рогатого скота рабочее разведение антигенов в два раза ниже указанного на этикетке.

Эритроциты барана отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500. 3000 об/мин в течение 10 мин до полной прозрачности надосадочной жидкости и готовят 2%-ную взвесь из осадка.

Гемолизин используют в четырехкратном титре. Так, при титре гемолизина 1:3000 его рабочее разведение 1:750.

Для приготовления гемолитической системы гемолизин в рабочем разведении смешивают с равным объемом 2%-ной взвеси эритроцитов и выдерживают 20. 30 мин при комнатной температуре.

Комплемент титруют в гемолитической системе перед каждой постановкой реакции. Для этого берут 10 пробирок. В первую вносят 5,4 мл, а в остальные по 1 мл физиологического раствора. Затем в первую пробирку добавляют 0,6 мл разведенного до первоначального объема комплемента, хорошо перемешивают и переносят 5 мл во вторую пробирку, из второй — 5 мл в третью и т.д. Получают ряд последовательных разведений комплемента от 1:10 до 1:51,5. Для определения титра комплемента из каждого его разведения переносят по 0,1 мл в соответствующую пробирку основного ряда.

Схема приготовления разведений и титрования комплемента дана в таблице 12*.
________________

* Нумерация рисунков и таблиц сквозная по всему тексту Сборника. — Примечание изготовителя базы данных.

Титром комплемента считают наибольшее его разведение, дающее полный гемолиз эритроцитов. Рабочее разведение соответствует разведению комплемента в четвертой пробирке влево от последней пробирки с полным гемолизом. В приведенном примере титр комплемента — 1:29,8; рабочее разведение для главного опыта — 1:14,4.

Расчет количества чистого комплемента, необходимого дли постановки главного опыта, делают по формуле

где А — доза комплемента для главного опыта; В — количество пробирок главного опыта; С — рабочее разведение комплемента.

Схема разведения и титрования комплемента

источник