Реакция агглютинации видаля при брюшном тифе

Реакция Видаля. Со второй недели заболевания в крови больных накапливаются антитела против возбудителя инфекции. Для их выявления исследуют сыворотку крови больного в реакции агглютинации. В качестве антигена используют убитые культуры сальмонелл — диагностикумы.

Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида.

Кровь (2-3 мл) из мякоти пальца или локтевой вены собирают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию. В лаборатории пробирку ставят в термостат на 20-30 мин для образования сгустка, затем пастеровской пипеткой обводят сгусток, чтобы отделить от стенки пробирки, и ставят на 30-40 мин на холод. Отделившуюся сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции агглютинации с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифов. Для получения сыворотки кровь можно отцентрифугировать.

При возникновении инфекционного процесса — брюшного тифа или паратифов — в организме вырабатываются О- и Н-антитела к одноименным антигенам возбудителя.

О-антитела появляются первыми и исчезают довольно быстро. Н-антитела сохраняются долго. То же самое происходит и при вакцинации, поэтому положительная реакция Видаля с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших (анамнестическая реакция), и у привитых (прививочная). Исходя из этого, реакцию Видаля ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы).

Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В.

Реакцию Видаля широко используют, так как она проста и не требует специальных условий.

Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным (см. главу 12). В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки (табл. 36).

Таблица 36. Возможный результат реакции агглютинации

Примечание. В практике реакцию Видаля ставят с четырьмя диагностикумами: брюшного тифа «О» и «Н», а паратифов А и В — с диагностикумами «ОН».

Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки — 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. Таким образом, нарастание титра антител в сыворотке крови служит показателем заболевания.

В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей.

Реакция Vi-гемагглютинации. Это наиболее чувствительная реакция для выявления антител.

Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi-антиген и приобретают при этом способность агглютиниповаться соответствующими Vi-антителами.

Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами.

Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут:

1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; З) Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида.

Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в пластмассовых пластинах с лунками.

Кровь у больного берут так же, как для реакции Видаля. Получают сыворотку. Из сыворотки готовят двукратные серийные разведения, начиная с 1:10 до 1:160.

По 0,5 мл каждого разведения вносят в лунку и прибавляют по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Реакцию ставят в объеме 0,75 мл.

Контролем служат: 1) стандартная агглютинирующая монорецепторная сыворотка + диагностикум — реакция должна быть положительной до титра сыворотки; 2) диагностикум в изотоническом растворе натрия хлорида (контроль) — реакция должна быть отрицательной.

Содержимое лунок тщательно перемешивают, ставят в термостат на 2 ч и оставляют при комнатной температуре до следующего дня (на 18-24 ч).

Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума.

Результаты учитывают по четырехкрестной системе:

++++ эритроциты полностью агглютинированы — осадок на дне лунки в виде «зонтика»;

+++ «зонтик» меньше, не все эритроциты агглютинировались;

++ «зонтик» маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов;

— реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки.

1. В какой период заболевания ставят реакцию Видаля?

2. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции Видаля?

3. С какими диагностикумами ставят реакцию Видаля?

4. Какая из серологических реакций является самой чувствительной при диагностике тифопаратифозных инфекций?

5. Каким диагностикумом пользуются при постановке реакции Vi-гемагглютинации?

6. Какой сывороткой определяют наличие Vi-антигена у исследуемой культуры?

7. Какое значение имеет определение Vi-фаготипа?

Возьмите у преподавателя О- и Н-диагностикумы из сальмонелл тифа, паратифа А и паратифа В и сыворотку больного. Поставьте реакцию Видаля.

Питательные среды

Среды ЭМС, Плоскирева, висмут-сульфитный агар выпускаются медицинской промышленностью в виде сухого порошка. Их готовят согласно указаниям на этикетке: отвешивают определенное количество порошка, наливают соответствующее количество воды, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри.

Среда Рассела. В 950 мл дистиллированной воды добавляют 40 г сухой питательной среды и прибавляют 5 г питательного агара. Нагревают до кипения и растворения порошков. В 50 мл дистиллированной воды растворяют 1 г х. ч. глюкозы и добавляют к приготовленной смеси. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл, стерилизуют текучим паром (2 дня по 2 мин) и скашивают так, чтобы оставался столбик. Среду Рассела с маннитом и сахарозой готовят так же.

Среда Олькеницкого из сухого агара. 2,5 г сухого питательного агара расплавляют в 100 мл дистиллированной воды. В остуженный до 50° С агар прибавляют все ингредиенты, указанные в рецептуре (этикетке). Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют текучим паром (3 дня по 20 мин) и затем скашивают. Готовая среда должна быть бледно-розового цвета.

источник

Определение нормальных антител к брюшнотифозному антигену в реакции агглютинации

Для определения нормальных антител берут у здорового человека шприцем кровь из локтевой вены в количестве 2-3 мл и дают ей свернуться. Образовавшийся сгусток отделяют, а сыворотку отсасывают в чистую пробирку и готовят ряд разведений от 1:10 до 1:160 следующим образом: во все пробирки разливают по 1 мл (20 капель) физиологического раствора, затем в 1-ю пробирку этой же пипеткой наливают 1 мл сыворотки, разведённой 1:5, перемешивают с физиологическим раствором, получают разведение 1:20. Также получают разведения 1:40, 1:30 и 1:160.

В отдельную контрольную пробирку и наливают 1 мл физиологического раствора без сыворотки (контроль антигена). Во все пробирки закапывают по 2 капли брюшнотифозного ди-агностикума. Штатив ставят в термостат на 2 часа при 37 °С, а затем оставляют на сутки при комнатной температуре.

При учёте реакции сначала просматривают контрольную пробирку. В ней при лёгком встряхивании наблюдается равномерное помутнение, хлопьев не должно быть. Опытные пробирки просматривают одновременно с контрольной, держа в одной руке и встряхивая. При положительной реакции обнаруживаются хлопья из склеенных бактерий. Учитывают максимальное разведение сыворотки, при котором произошла отчетливая агглютинация (титр сыворотки).

Реакция агглютинации видаля для серодиагностики брюшного тифа

Специфические антитела (агглютинины) обнаруживаются в крови больного со 2-ой недели болезни. Для постановки реакции Видаля берут шприцем кровь из локтевой вены в количестве 2-3 мл и дают ей свернуться. Образовавшийся сгусток отделяют, а сыворотку отсасывают в чистую пробирку и готовят из неё 3 ряда разведений сыворотки больного от 1:100 до 1:800 следующим образом: во все пробирки разливают по 1 мл (20 капель) физиологического раствора; затем этой же пипеткой наливают 1 мл сыворотки, разведенной 1:50 в первую пробирку, перемешивают с физиологическим раствором, таким образом получают разведение 1:100, Из этой пробирки переносят 1 мл сыворотки в следующую пробирку, перемешивают с физиологическим раствором, получают разведение 1:200 также получают разведения 1:400 и 1:800 в каждом из трёх рядов. Реакция агглютинации Видзля ведётся в объеме 1 мл жидкости, поэтому из последней пробирки после смешения жидкости удаляют 1 мл. В отдельную контрольную пробирку наливают 1 мл физиологического раствора без сыворотки. Этот контроль ставится для проверки возможности спонтанной агглютинации антигена (диагностикума) а каждом ряду

В сыворотках больных могут быть как специфические, так и групповые антитела, которые различаются по высоте титра. Специфическая реакция агглютинации идёт обычно до более высокого титра. Реакция считается положительной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1:200. Обычно она наступает в больших разведениях. Если наблюдается групповая агглютинация с двумя или тремя антигенами, то возбудителем болезни считают того микроба, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.

1. реакция положительна, начиная со 2-ой недели заболевания;

2. реакция положительна в 3-х случаях: у больных (инфекционная реакция), у переболевших (анамнестическая) и у вакцинированных (прививочная).

Для дифференциации реакций прибегают к повторной постановке ее через 5-6 дней. У больных отличается резкое нарастание титра антител При прививочной и анамнестической реакциях титр антител не изменится.

Реакцию Видаля можно поставить одновременно с Н- и О-антигенами бактерий брюшного тифа, что помогает дифференцировать инфекционную реакцию от прививочной, так как у привитых обнаруживаются только Н-антитела, О-агглютинин в высоком титре отмечается только в разгар болезни.

Дата добавления: 2016-07-29 ; просмотров: 1043 | Нарушение авторских прав

источник

Агглютинация – это склеивание и выпадение в осадок микроорганизмов или других клеток(корпускулярных антигенов) под действием специфических антител в присутствии электролитов.

Развернутая РА в пробирках (объемный способ) применяется для серологической диагностики инфекционных заболеваний, то есть для определения динамики нарастания титра противомикробных антител в сыворотке крови (реакция Видаля — при брюшном тифе и паратифах, р. Вейгеля— при эпидемическом сыпном тифе, р. Райта— при бруцеллезе и др.) и для серологической идентификации микробов.

РА Видаля применяется с целью серодиагностики брюшного тифа и паратифов А и В, то есть для определения антител, и изучения динамики нарастания и сохранения антител против S.typhi, S. paratyphi A и S. paratyphi B, которые обнаруживаются в крови больного со 2-ой недели заболевания.

1)исследуемая сыворотка крови в разведениях от 1:100 до 1:800;

2) три диагностикума — взвеси убитых сальмонелл: S.typhi, S. paratyphi A и S. paratyphi В;

3) изотопический раствор хлорида натрия (электролит).

Реакция ставится в три ряда пробирок по 5 пробирок в каждом ряду, из которых 4 опытных и одна контрольная (физ.раствор+диагностикум).

1) в термостате в течение 2 часов при 37°С, при этом образуются крупнохлопчатый осадок за счет жгутикового Н-антигена;

2) при комнатной температуре в течение 18-24 часов, выпадает мелкозернистый осадок за счет соматического О-АГ.

Механизм реакции. Реакция протекает в две фазы:

1) соединение АГ с АТ (специфическая фаза);

2) выпадение образовавшегося комплекса АГ-АТ (агглютината) в растворе солей (электролите) в осадок (неспецифическая фаза).

Антигены поливалентны, а антитела двух – (IgG) или более валентны (IgМ). Соединение их приводит к образованию макроконгломератов, выпадающих в осадок.

1) реакция положительна начиная со 2-ой недели заболевания;

2) реакция положительна в 3-х случаях: у больных («инфекционная» реакция), у переболевших («анамнестическая») и у вакцинированных («прививочная»).

Для дифференциации реакций прибегают к повторной постановке ее через 5-6 дней. У больных отмечается нарастание титра антител в 4 и более раза. При «прививочной» и «анамнестической» реакциях титр антител не изменится;

3) реакция может быть группоспецифической — положительной с двумя или тремя антигенами. При групповой агглютинации учет реакции проводится по максимальному титру антител.

Реакцию Видаля можно поставить одновременно с Н- и О-антигенами бактерий брюшного тифа, что помогает дифференцировать «инфекционную» от «прививочной», так как у привитых и переболевших обнаруживаются только Н-антитела, О- агглютинин в высоком титре отмечается только в разгар болезни.

РА Вейгеляставится с диангостикумомRicketsia prowazekii (взвесь убитых риккетсий), РА Райта – с бруцеллезным диагностикумом (взвесь убитых бруцелл: B. melitensis, B. abortus и B. suis).

9.3 РПГА – реакция пассивной гемагглютинации (определение напряженности поствакцинального противодифтерийного и противоскарлатинозного антитоксических иммунитетов)

Под РПГА понимают реакцию, в которой АТ-а взаимодействуют с высокодисперсными АГ (гаптенами), предварительно адсорбированными на корпускулярных носителях — эритроцитах, которые при этом склеиваются (рис.29).

Читайте также: Пятна при брюшном тифе

Компоненты РПГА, применяемой для определения напряженности поствакцинального противодифтерийного антитоксического иммунитета:

1) испытуемая сыворотка крови в разведениях от 1:10 до 1:20480;

2) диагностикум дифтерийный эритроцитарный – дифтерийный анатоксин, адсорбированный на поверхности эритроцитов;

3) физиологический раствор;

4) противодифтерийная контрольная сыворотка с активностью 10МЕ/мл;

5) полистероловые пластины (при их отсутствии – пробирки).

Испытуемую сыворотку разводят физ. раствором от 1:10 до 1:20480 в 12 лунках.

Вносят по 1 капле диагностикума в каждую лунку.

Ставят контроли специфичности реакции с иммунной противодифтерийной антисывороткой (положительная реакция) и нормальной сывороткой (отрицательная реакция).

Противодифтерийную контрольную сыворотку (с активностью 10МЕ/мл) разводят от 1:10 до 1:20480 и вносят также по 1 капле диагностикума.

Оставляют при комнатной температуре на 3 часа (максимум на 15-20 часов) и читают реакцию.

При положительной реакции, в результате образования комплекса (АГ-АТ) на поверхности эритроцитов, последние склеиваются и равномерно покрывают все дно пробирки или всю лунку пластинки в виде зонтика с неровными краями. При отрицательной реакции эритроциты выпадают в осадок в виде меленького диска с ровными краями («пуговки»).

Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, которое еще вызывает агглютинацию эритроцитов.

Расчет активности испытуемой сыворотки производят по формуле:

где: Х – активность испытуемой сыворотки в МЕ/мл.;

10 – титр контрольной сыворотки в МЕ/мл.;

А – максимальное разведение испытуемой сыворотки с положительным результатом;

В – максимальное разведение контрольной сыворотки с положительным результатом.

Неиммунными считаются лица с титром антитоксина менее 0,03 МЕ/мл. (1:20).

РПГА с целью определения напряженности противоскарлатинозного антитоксического иммунитетаставятсанатоксином S. pyogenes, адсорбированным на поверхности эритроцитов.

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

Папиллярные узоры пальцев рук — маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

источник

Для постановки реакции берут:

1) сыворотку исследуемого больного для определения в ней
антител;

2) О — и Н-диагноста кумы бактерий брюшного тифа, паратифа А и паратифа В;

3) физиологический раствор.

Кровь для получения сыворотки берут в количестве—15—20 капель путем укола мякоти пальца или 2 —3 мл при помощи венепункции.

Дают крови свернуться в термостате в течение 30—60 минут, затем простерилизованной петлей обводят сгусток, отделяя его от стенки пробирки, и дают отстояться сыворотке на холоду до образования над сгустком прозрачного слоя. Сыворотку помещают пипеткой в отдельную пробирку. Первое разведение (1:50) делают при помощи пипетки—0,1 мл сыворотки + 4,9 мл физиологического раствора. Дальнейшие разведения (1:100— 1:200 — 1 : 400—1:800) готовят по обычной схеме.

Берут 6 рядов пробирок по 6 пробирок в каждом. По 1 мл сыворотки разведения 1: 100 наливают в первую пробирку каждого ряда, 1: 200 — во вторую, 1 : 400 — в третью и т. д.; в шестую, контрольную, пробирку наливают 1 мл физиологического раствора.

Во все пробирки первого ряда добавляют по 1—2 капли брюшнотифозного Н-диагностикума; в пробирки второго ряда — брюшнотифозный 0-диагностикум; в пробирки третьего я четвертого ряда добавляют А-паратифозный, Н — и 0-диагностикумы, а в 5-й и 6-й ряд— В-паратифозный H — и 0-диагностикум. Пробирки ставят в термостат на 2 часа, отмечают результат реакции, затем оставляют при комнатной температуре на сутки; после этого срока дают заключение об окончательном результате реакции.

Возбудителем заболевания считается тот микроб, который агглютинируется сывороткой больного. Реакция считается положителыной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1: 100; обычно она наступает в больших разведениях. Если происходит групповая агглютинация с двумя или с тремя антигенами, то за возбудителя болезни принимается тот микроб, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.

5. РСК с целью серодиагностики сыпного тифа

Тип реакции — реакция связывания комплемента.

Исследуемый материал — парные сыворотки крови больного (сыворотки одного и того же больного, взятые у него с временным промежутком не менее 5-7 дней).

Диагностический препарат — сыпнотифозный антиген для РСК.

Дополнительные ингредиенты реакции: комплемент в рабочей дозе; гемолитическая сыворотка в рабочей дозе; эритроциты барана (3 % взвесь).

Положительная реакция — задержка гемолиза; отрицательная — гемолиз.

Диагностическим критерием является нарастание титра антител не менее, чем в 4 раза (во второй сыворотке по сравнению с первой).

Обычно реакцию применяют для ретроспективной диагностике.

В данном случае. (результат и вывод).

Реакции Вассермана (серодиагностика сифилиса)

Исследуемый материал: сыворотка обследуемого.

1. Неспецифический кардиолипиновый АГ (антиген) для реакции Вассермана — спиртовая липидная вытяжка из миокарда быка, обогащенная холестерином.

2. Специфический ультраозвученный трепонемный АГ – содержит АГ культуральных трепонем, разрушенных ультразвуком.

Положительная реакция — задержка гемолиза; отрицательная — гемолиз.

Качественный метод — сыворотку обследуемого вносят в 2 лунки, добавляют соответственно АГ 1 и АГ 2, а затем в обе лунки — дополнительные ингредиенты реакции. Применение: отбор лиц для постановки количественной реакции Вассермана.

В данном случае обследованы пациенты . (результат, вывод).

Количественный метод — диагностика сифилиса, контроль эффективности терапии. Готовят разведения положительной сыворотки (по качественной реакции). К каждому разведению добавляют трепонемный ультраозвученный АГ (АГ2) и дополнительные ингредиенты реакции. Положительный результат — ЗГ (задержка гемолиза), отрицательный — Г (гемолиз).

Результат интерпретируют, основываясь на количестве антител.

В данном случае. (результат и вывод).

7. РСК с целью раздельного определения IgM и IgG

Тип реакции — реакция связывания комплемента.

Исследуемый материал — сыворотка крови больного (нативная и обработанная меркаптоэтанолом).

Диагностический препарат — известный антиген для РСК.

Положительная реакция — задержка гемолиза; отрицательная — гемолиз.

Принцип метода: при обработке сыворотки меркаптоэтанолом разрушаются IgM.

Следовательно, с обработаной сывороткой реакция идет только за счет IgG.

Постановка реакции: готовят разведения нативной и обработанной сывороток, добавляют диагностический препарат и дополнительные ингредиенты реакции.

Трактовка результатов: если с обработанной сывороткой реакция идет практически таком же титре, как с необработанной, значит она содержит преимущественно IgG Если в обработанной сыворотке титр антител резко снизился по сравнению с необработанной, значит она содержит преимущественно IgM.

В данном случае. (результат и вывод).

8. РНГА с Vi-эритроцитарным диагиостикумом

Тип реакции — реакция непрямой гемагглютинации.

Исследуемый материал — сыворотка крови обследуемого.

Диагностический препарат — Vi-эритроцитарный диагностикум (взвесь в физиологическом растворе эритроцитов барана с нагруженными на них Vi — антигенами S.typhi ).

Принцип реакции: к разведениям сыворотки обследуемого добавляют Vi-эритроцитарный диагностикум.

Положительный результат – гемагглютинат («зонтик»); отрицательный результат — плотный осадок эритроцитов на дне лунки («пуговка»).

Диагностический тигр реакции 1/ 40.

Применение: отбор лиц, имеющих титр антител к Vi – антигенам S.typhi выше диагностического.

Трактовка результатов: лица с положительной реакцией в титре выше, чем 1/40 считаются подозрительными на бактерионосительство S.typhi и подлежат бактериологическому обследованию на наличие S.typhi в кале, моче и желчи.

В данном случае. (результат и вывод).

Реакция флоккуляции

Тип реакции: частный случай реакции преципитации (нейтрализации).

Исследуемый материал: антитоксическая сыворотка.

Диагностический препарат: токсин или анатоксин в строго определенном количестве.

Принцип метода: к серийным разведениям антитоксической сыворотки добавляют одинаковое количество антигенных единиц токсина или анатоксина.

Положительный результат — образование хлопьев преципитата (флоккулята); отрицательный результат — прозрачная жидкость.

Применение: определение активности антитоксической сыворотки (количества ME — международных единиц в 1 мл сыворотки).

Трактовка результатов: первичная (инициальная) флоккуляция наступает в пробирке, где АГ (антиген) и АТ (антитело), находятся в эквивалентных количествах. Зная количества ингредиентов в пробирке, где произошла инициальная флоккуляция, можно рассчитать активности антитоксической сыворотки. Например, инициальная флоккуляция наступила в пробирке, где находится 0,02 мл сыворотки и 4 АЕ (антигенных единиц) токсина или анатоксина. Составляем пропорцию: 0,02 мл сыворотки эквивалентно 4 АЕ токсина или анатоксина.

Одна АЕ — это такое количество токсина или анатоксина, которое связывается одной ME антитоксической сыворотки, следовательно, 0,02 мл данной сыворотки содержит 4 ME.

Титр антитоксической сыворотки — это количество ME в 1 мл этой сыворотки.

В данном случае, составив пропорцию, можно определить титр:

В данном случае. (результат и расчет).

Титрование комплемента

Тип реакции — реакция иммунного гемолиза.

Исследуемый материал — свежая сыворотка крови.

Дополнительные ингредиенты реакции: гемолитическая система (гемолитическая сыворотка в рабочей дозе и 3% взвесь эритроцитов барана).

Положительная реакция — гемолиз; отрицательная — задержка гемолиза.

Титр комплемента — наибольшее разведение комплемента, в котором наблюдается гемолиз.

Применение: для определения титра комплемента. Если речь идет о титровании комплемента перед постановкой РСК, то титр определяют для дальнейшего расчета рабочей дозы. Используется разведение на 25% концентрированнее, чем титр.

В данном случае. (результат).

Дата добавления: 2018-09-22 ; просмотров: 55 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник

ВИДАЛЯ РЕАКЦИЯ (F. Widal, франц. инфекционист и интернист, 1862—1929) — диагностическая реакция агглютинации при брюшном тифе и других сальмонеллезах. Предложена в 1896 г. Ф. Видалем. Первоначальная методика В. р. была несложной: один объем испытуемой сыворотки смешивали с девятью объемами бульонной культуры брюшнотифозных бактерий. Результаты учитывали через 2 и 24 часа. При положительной реакции в пробирке с испытуемой сывороткой образовывался осадок и бульон просветлялся. В контрольных пробирках (с сывороткой здорового человека и без сыворотки) бульон оставался равномерно мутным. В дальнейшем методика В. р. была усовершенствована, что дало возможность определять количество агглютининов (титр) в испытуемой сыворотке (титр — максимальное раз-ведение, при к-ром происходит реакция агглютинации). Полученную из крови больного сыворотку можно использовать тотчас или сохранять в рефрижераторе. Постановка реакции заключается в следующем: сыворотку разводят изотоническим раствором хлорида натрия в геометрической прогрессии (1 : 20; 1 : 40; 1 : 80 и т. д. или 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200 и т. д.). В качестве антигенов употребляют стандартные тифо-паратифозные диагностикумы (см.), которые дают более однородные результаты, чем живые культуры. Соответственно антигенной структуре возбудителя брюшного тифа в сыворотке больного могут присутствовать О-, Н-, Vi-агглютинины. Vi-агглютинины появляются в сыворотке больного нерегулярно и в невысоких титрах, в связи с чем В. р. с Vi-антигеном для диагностики не используют. Диагностическое значение имеют О- и Н-агглютинины. Для их обнаружения пользуются соответствующими диагностикумами (Н-диагностикум — культура, убитая формалином, О-диагностикум — культура, убитая спиртом или кипячением). Результаты Н-агглютинации учитывают после 2-часового пребывания в термостате; О-агглютинация учитывается после 2-часового пребывания в термостате и 18—20 часов при комнатной температуре.

В связи с антигенной близостью различных представителей рода сальмонелл нередко могут возникать групповые реакции. Для выявления в сыворотке больного специфических агглютининов к различным видам сальмонелл рекомендуют использовать для постановки В. р. более широкий набор диагностикумов [О-диагностикумы из сальмонелл, принадлежащих к следующим группам: группа А — S. paratyphi А; группа В — S. paratyphi В; группа С — S. potsdam; группа D — S, typhi, S. enteritidis (jena); Н-диагностикумы из следующих культур: b — S. paratyphi В; С — S. paratyphi С; d — S. typhi, i — S. typhimurium; g, m — S. enteritidis (jena); 1,5—S. choleraesuis, var. kunzendorf].

Простота постановки B. р. обусловила широкое использование этой реакции для диагностики тифо-паратифозных заболеваний. Однако с течением времени были накоплены наблюдения, показавшие, что диагностическая ценность этой реакции относительна. Положительная В. р. может быть следствием ранее перенесенного заболевания (анамнестическая В. р.) или профилактической вакцинации (прививочная В. р.). При инфекционных заболеваниях различной этиологии (грипп, малярия, туберкулез и пр.) у ранее переболевших или привитых могут появляться агглютинины к бактериям тифо-паратифозной группы, но их титры не достигают высокого уровня, и они быстро исчезают. Положительная В. р. у лиц неболевших и непрививавшихся может быть обусловлена так наз. нормальными антителами. Однако их титр обычно невысок (ниже 1 : 50), но может быть несколько выше в местностях, эндемичных по тифо-паратифозным заболеваниям.

Агглютинины в крови больных обнаруживают с конца первой недели заболевания. Первыми появляются О-, а затем Н-агглютинины. Титр антител постепенно повышается до конца заболевания и даже в первое время реконвалесценции. Затем наступает постепенное снижение содержания агглютининов, которые исчезают через 4—6 мес. после выздоровления, но в отдельных случаях могут быть обнаружены и через 12 мес.

Основное диагностическое значение имеет В. р. с О-антигеном. Диагностическим титром этой реакции считают разведение 1 : 200. Агглютинация только с H-антигеном наблюдается при анамнестической или прививочной В. р. Диагностическое значение придается не столько высоте титра реакции, сколько нарастанию титра в процессе заболевания. Поэтому даже высокие титры при однократной постановке не дают права на окончательный диагноз. Решающим является наблюдение за динамикой В. р., т. е. повторное исследование сывороток, взятых через 5—7 дней. Результаты повторной реакции дают также возможность исключить анамнестическую и прививочную реакции, при которых не наблюдается повышения титра агглютининов. При тифо-паратифозных заболеваниях титры В. р. могут колебаться в весьма широких пределах.

В связи с доступностью и простотой постановки В. р. стала одним из наиболее широко применяемых методов серологической диагностики. Однако при оценке этой реакции, помимо сказанного выше, следует учитывать, что В. р. не является методом ранней диагностики, т. к. она может быть использована лишь с конца первой недели заболевания, но она полностью сохраняет значение диагностического метода там ,где исключена возможность использования ранних методов диагностики (посев крови); бесспорно значение В. р. для ретроспективного диагноза, что имеет большую эпидемиол, ценность.

Модификации В. р., ранее предлагавшиеся с целью упрощения методики ее постановки, более раннего выявления антител и пр. (метод Нобля, постановка реакции с растворами поваренной соли различной концентрации и пр.) потеряли свое значение.

Наряду с обычным методом постановки В. р. для серологического диагноза тифо-паратифозных заболеваний широко пользуются PHГА — реакцией непрямой гемагглютинации (см.). Для ее постановки применяют стабильный эритроцитарный диагностикум, изготовляемый производственными ин-тами. Эти диаг-ностикумы представляют собой специально обработанные эритроциты человека 0-группы, сенсибилизированные очищенными О- и Vi-ан-тигенами из культур тифо-паратифозных бактерий. PHГА зарекомендовала себя как более чувствительный и специфичный метод, позволяющий обнаруживать антитела в более ранние сроки заболевания. Преимуществом этой реакции является также простота ее постановки и возможность более быстрого получения результатов. Диагностическое значение имеет PHГА с О-антигеном. Ее диагностический титр равен разведению 1 : 640, но нередко она дает очень высокие титры. PHГА с Vi-антигеном не имеет диагностического значения при брюшном тифе, т. к. титры Vi-антител, как правило, невысоки.

PHГА с Vi-антигеном нашла применение при обследовании на бактерионосительство. После полного выздоровления Vi-агглютинины быстро исчезают, но у хрон, брюшнотифозных носителей они присутствуют постоянно и легко выявляются при помощи PH ГА с Vi-антигеном. У лиц, содержащих Vi-антитела, бактерионосительство должно быть подтверждено бактериол, методом, т. е. выделением культуры. В весьма редких случаях Vi-антитела у бактерионосителей отсутствуют, что, по-видимому, может быть связано с особенностями антигенной структуры брюшнотифозных бактерий или особенностями иммунологической реактивности носителя.

Библиография: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, М., 1973; Kohler W. u. М о с h m a n n H. Grundriss der medizinischen Mikrobiologie, Jena, 1968; W i d a 1 F. Serodiagnostic de la fievre typhoide, Bull. Soc. m6d. Hop. Paris, t. 13, p. 561, 1896; W i 1 d-f ii h r G. Medizinische Mikrobiologie, Im-munologie und Epidemiologie, T. 1—2, Lpz., 1959 —1961, Bibliogr.

источник

Реакция Видаля – анализ, материалом для которого является кровь. Как уже было отмечено, происходит склеивание антител и некоторых микроорганизмов. В результате происходит образование гранул и хлопьев. Их можно рассмотреть даже невооруженным глазом.

В прошлом осуществление исследования происходило очень просто. Реакция Видаля на брюшной тиф производилась следующим образом:
1. Брали 1 часть сыворотки крови человека.
2. Смешивали ее с 9 частями бульонной культуры вредоносных организмов.
3. Нагревали смесь до температуры 37 градусов по Цельсию и ждали 2 часа или же не нагревали смесь, но результатов приходилось ждать 24 часа. Если заболевание имело место, то в пробирке образовывался сильный осадок.

Сейчас анализ крови «реакция Видаля» осуществляется несколько иначе:
• используется не одна, а несколько пробирок;
• смесь изготавливается в разных пропорциях: 1 к 50, 1 к 100, 1 к 200 и т.д.;
• добавляются разные антигены.

Бульонную культуру тоже уже не используют. Вместо нее – смыв с питательных сред. Таким образом, в современных условиях реакция Видаля на тиф позволяет определить различных «модификаций». Очень важно выявить опасные кишечные заболевания на ранних стадиях, и реакция Видаля сильно помогает в этом.

На основе реакции Видаля постановка анализа не всегда бывает точной. Если раньше медики возвышали и восхваляли данный анализ, то современные специалисты склоняются к такому мнению, что всегда необходимо проводить дополнительные исследования. Почему так?

Типичные примеры:
1. У некоторых тяжело больных при взятии крови на реакцию Видаля анализ показывает отрицательный результат. Связано это с тем, что организм не вырабатывает необходимых антител. Это, кстати говоря, влияет и на то, что болезнь протекает тяжело. Организм не в состоянии бороться.
2. Отрицательный результат реакции можно получить, если антибиотики начали применять на начальных стадиях болезни, причем в больших количествах.
3. Положительная реакция случается, если анализ сдает здоровый человек, переболевший тифом ранее. Агглютинины в такой ситуации могут вырабатываться и при других инфекциях. Их число не будет существенным. Повторная диагностика даст понять, что результат анализа – ложноположительный.
4. Если человеку делали прививку от тифа, то антитела могут находиться в крови. Реакция, естественно, будет положительной, но не будет наблюдаться динамики роста количества антител, что даст возможность прийти к выводу: заболевание не наблюдается.

Вывод: для получения достоверных результатов, анализ нужно проводить не один раз, наблюдая за динамикой роста числа антител.

Если по какой-то причине вы не желаете сдавать анализы, но справка об их сдаче необходима, то можно купить анализы.

Лучший вариант – обратиться в компанию «Документы РФ», которая долгие годы успешно продает справки в Москве.

Наши преимущества заключаются в следующем:
1. Купить анализы в Москве можно в нашей компании, получив гарантию, что документ не посчитают подделкой и не отвергнут. Мы изготавливаем все справки на специальном оборудовании, максимально учитывая форму и особенности оригинала.
2. Приобрести анализы в Москве в «Документы РФ» возможно в самые короткие сроки. Мы знаем, что справки о сдаче анализов бывает нужно получить за очень короткое время. И мы готовы оперативно помочь в этом вопросе!
3. Купить справки в Москве у нас можно по низким ценам. Адекватная ценовая политика в сфере реализации документов – наше кредо.

Таким образом, обращение в «Документы РФ» – это правильный шаг. Сотрудничество с нами – это всегда выгодно и надежно.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Брюшной тиф диагностируют на основании длительной лихорадки, головной боли, нарастающей интоксикации с развитием тифозного статуса, типичных изменений языка, появления метеоризма, розеолёзной сыпи, гепатоспленомегалии и изменений периферической крови.

Лабораторная диагностика брюшного тифа основана на обнаружении возбудителя в биоматериале и специфических антител в крови больного. Решающее значение имеет обнаружение возбудителя в крови (гемокультура), моче (уринокультура), испражнениях (копрокультура), жёлчи (биликультура), а также в костном мозге, спинномозговой жидкости, розеолах, гное или экссудате.

В практической работе для ранней диагностики брюшного тифа наибольшее значение имеет гемокультура, которую следует проводить на протяжении всего лихорадочного периода. Кровь из вены в количестве 5-10 мл засевают во флакон с 50-100 мл 10-20% жёлчного бульона (лучшие результаты даёт посев в трипсин-соевый бульон). Положительные результаты гемокультуры чаще получают при посевах крови на первой неделе заболевания, когда бактериемия наиболее выражена. Со второй недели болезни брюшнотифозные палочки можно обнаружить в посевах кала, мочи и дуоденального содержимого. Наиболее высокий процент выделения палочек брюшного тифа получают при посевах костного мозга. В целом бактериологическое подтверждение диагноза брюшного тифа удаётся получить у 80-90% больных.

Серологические методы позволяют обнаружить специфические антитела в крови или антигены в биосубстрате. В практической работе чаще всего применяют реакцию Видаля и РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с использованием эритроцитарных О-, Н- и Vi-антигенов. Реакция Видаля основана на обнаружении специфических О- и Н-антител-агглютининов в крови больного с помощью соответствующих антигенов. Положительные результаты можно получить с 8-9 сут болезни. Реакция Видаля может быть положительной у привитых и перенёсших брюшной тиф, поэтому решающее значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания. Для более точного выявления специфических иммунных сдвигов в крови больного реакцию Видаля следует повторять с О- (IX и XII) и Н-монодиагностикумами для исключения перекрёстных реакций с сальмонеллами других групп.

Более специфичны и чувствительны РНГА с эритроцитарными О- и Vi-антигенами и реакция Vi-гемагглютинации. Эти реакции используют для ранней диагностики брюшного тифа. В РНГА концентрация О-антител нарастает в динамике заболевания, а титры Vi-антител существенно не меняются. Реакция Vi-гемагглютинации имеет наибольшее значение при обследовании лиц, подозрительных на брюшнотифозное носительство.

Серологические реакции на обнаружение специфических антител в крови больного следует ставить с 4-5-го дня болезни, а затем на 2-3-й нед и позднее. Диагноз брюшного тифа считают серологически подтверждённым при титре антител 1:200 и выше или при нарастании титра антител в 2-3 раза в динамике заболевания. При оценке серологических реакций важно учитывать, что нарастание титров специфических О-антител свидетельствует об остром инфекционном процессе, а наличие только Н- или Vi-антител — о перенесённом ранее брюшном тифе или бактерионосительстве.

Для серологической диагностики бактерионосительства и вакцинальных реакций предложено раздельное определение специфических антител, относящихся к IgM и IgG в ИФА. Выявление специфических брюшнотифозных IgM указывает на текущий инфекционный процесс, а изолированное обнаружение специфических антител, относящихся к классу IgG, — о вакцинальной природе антител или перенесённом ранее брюшном тифе.

Дифференциальная диагностика брюшного тифа

В практической работе брюшной тиф у детей чаще приходится дифференцировать с тифоподобной формой сальмонеллёза, паратифами, инфекционным мононуклеозом, лимфогранулематозом, иерсиниозом, малярией, а в начальном периоде — с гриппом, энтеровирусной инфекцией и острой кишечной инфекцией другой этиологии.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19]

источник

Наибольшую достоверность реакция Видаля приобретает при постановке ее раздельно с Н- и 0-антигенами. Положительный результат с Н-антигеном свидетельствует о неспецифичности реакции (прививочная, анамнестическая).

Положительная реакция только с 0-антигеном указывает на тифозно-паратифозный характер заболевания без уточнения возбудителя. Наличие положительной агглютинации одновременно с Н- и 0-антигенами уточняет заболевание, вызванное брюшнотифозным возбудителем .

Реакция Видаля ставится не только с культурами брюшного тифа и паратифов А и В, но и с культурой паратифа N₂, которая во многих случаях брюшного тифа дает положительную реакцию с первых дней болезни, когда бактерии брюшного тифа не подвергаются еще агглютинации (М. Н. Фишер, М. Р. Давыдов), и служит диагностическим признаком брюшного тифа.

Н. А. Минкевич с соавторами (1935) предложили ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с гемолизированной кровью больных. Она проста по технике применения непосредственно у постели больного. Результаты реакции читаются через 2 минуты.

При постановке этой реакции результаты, по данным автора, оказались строго специфичными: у здоровых и нетифозных больных реакция агглютинации отрицательна, за исключением единичных случаев слабо положительной реакции у лиц, ранее перенесших тиф или иммунизированных; резко положительная реакция агглютинации наблюдается, в разгаре болезни и в периоде реконвалесценции.

О. М. Княжанский и соавторы (1936) рекомендовали в качестве ориентировочной реакции агглютинации при брюшном тифе реакцию по методу Нобль-Фишера, которая представляет собой упрощенную модификацию реакции Видаля с небольшими количествами (0,2 мл) более концентрированных разведений сыворотки и более густой взвесью микробов (до 5 — 6 млрд. особей в 1 мл).

В пробирках готовят различные разведения сыворотки с физиологическим раствором или с концентрированным раствором поваренной соли 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160 и т. д. Преимущества этой модификации заключаются в том, что не нужен термостат, результат агглютинации читается через 15 — 20 минут. Постановка такой реакции удобна в походной обстановке и в условиях сельской местности (Б. М. Берман, С. И. Игнатов).

«Брюшной тиф у детей», Н.В.Дмитриева

Как известно, брюшной тиф сопровождается наиболее интенсивной бактериемией в первые дни болезни и на высоте заболевания. Бактериемия становится менее напряженной в поздние периоды болезни, но во время рецидивов она вновь усиливается. Для распознавания брюшного тифа наряду с клиническим и эпидемиологическим обследованием используется посев крови — гемокультура. В 1903 г. 3. Ф. Орловский предложил для бактериологической…

Высеваемость брюшнотифозного возбудителя из крови больных детей, по данным ряда авторов, различна. Булль указывает на сравнительно низкий процент высеваемости брюшнотифозной палочки в гемокультурах при брюшном тифе у детей: из 69 посевов крови только 22 были положительными на тиф. Аналогичные результаты были получены Р. Д. Мартинец и Бамбах. Авторы не отмечают у детей постоянства высеваемости брюшнотифозной…

Серологическая реакция агглютинации при инфекционных заболеваниях рассматривается как реакция иммунитета. Сущность ее заключается в обнаружении в сыворотке крови больного специфических агглютининов — антител. Агглютинины появляются и нарастают по мере воздействия на организм тех или иных возбудителей инфекционных болезней. И. И. Мечников был первым исследователем, широко поставившим вопрос о филогенезе явлений иммунитета. Он установил, что способность…

Механизм выработки антител до сих пор не изучен. Научными исследованиями доказано, что это физиологический процесс, который подчинен тем же закономерностям, каким подчинены другие физиологические процессы, и зависит от регуляции нервной системы. Превращение нормальных глобулинов в иммунные катализируется, по мнению А. Д. Адо, непосредственным действием антигена на эффекторы — клетки, вырабатывающее антитела. Опыты, проведенные учеными в…

О влиянии возраста на продукцию антител нет единого мнения. Некоторые авторы полностью отрицают эту способность в детском возрасте, другие признают, что она имеется, но резко заторможена. Б. М. Берман и его сотрудники (Соколова, Колегова) экспериментальным путем доказали отсутствие нормальных антител у новорожденных и в младших возрастных группах животных. Однако после первичного иммунизаторного раздражения продукция антител…

источник

• Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: исходя из особенностей патогенеза брюшного тифа, на 1-й неделе заболевания, в период бактериемии, возбудителей выделяют из крови (получение гемокультуры), со 2-й недели заболевания — из испражнений (получение копрокультуры), мочи или желчи.

Бактериологическое исследование(схема 13.2.1).

Получение гемокультуры. В 1-й день из локтевой вены больного берут 5—10 мл крови и засевают в колбу с 50—100 мл селективной среды Раппопорт, содержащей желчный бульон (для подавления роста других бактерий), глюкозу, индикатор Андреде и поплавок для обнаружения газа. Указанные соотношения крови и среды необходимы для подавления бактерицидного действия белков крови. Посевы инкубируют при 37 «С в течение 18—20 ч. На 2-й день при росте сальмонелл наблюдается помутнение и изменение цвета среды. При росте паратифозных бактерий (биовары paratyphi А, Си schottmuelleri) наряду с указанными изменениями появляются пузырьки газа в поплавке. Для ускорения ответа из среды Раппопорт делают мазки и препараты «висячая» капля. При наличии чистой культуры грамотрицательных подвижных палочек и изменении цвета среды (или наличии газа) дают первый предварительный ответ. Затем культуру из среды Раппопорт пересевают в пробирку со средой Ресселя, полагая при этом, что из крови выделена чистая культура и можно сразу приступить к ее идентификации. Одновременно со среды Раппопорт делают посевы на среду Эндо для получения изолированных колоний с целью проверки чистоты выделенной культуры.

На 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Ресселя и ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. На основании полученных данных дают второй предварительный ответ. Для дальнейшего исследования отбирают несколько бесцветных колоний со среды Эндо и пересевают их в среду Ресселя или скошенный питательный агар (для контроля полученных результатов). Чистую культуру пересевают на среды «пестрого» ряда и серотипируют в реакции агглютинации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с

адсорбированными монорецепторными О- и Н-сальмонеллез-ными сыворотками. Окончательный диагноз устанавливают на основании биохимических (табл. 13.2.1) и антигенных свойств.

Таблица 13.2.1. Биохимические свойства сальмонелл — возбудителей брюшного тифа и паратифов

Биовар S.enterica	Ферментация	Образование
лактозы	глюкозы	мальтозы	сахарозы	ман-нита	H₂S	NH₃	индола

Paratyphi А — КГ КГ — КГ — —
Schottmuelleri — КГ КГ — КГ + +

Условные обозначения: К — образование кислоты; КГ — образование кислоты и газа; (+) — обнаружение признака; (—) — отсутствие признака.

Биохимические признаки (развернутый «пестрый» ряд) позволяют дифференцировать сальмонеллы от схожих сними энтеробактерий: Citrobacter, Hafnia (табл. 13.2.2).

Таблица 13.2.2. Дифференциация сальмонелл и других энтеробакте рий по биохимическим признакам

Род	Лизин- декар- бокси- лаза	Ферментация углеводов	р- Галак-този-даза
дуль-цита	сорбита	ксилозы	рам-нозы	салицина	4% лактозы

Citrobacter — К(-) К К К К(±) К(±) К
Hafnia + — — К К К(+) — К

Условные обозначения: (+) — положительная реакция; (—) — отрицательная реакция; ± — вариабельная реакция; К — образование кислоты; К(—) — образование кислоты (редко); К(±) — образование кислоты (вариабельно).

Выделенную чистую культуру бактерий используют для определения чувствительности к антимикробным препаратам.

Фаготипирование. С помощью набора стандартных Vi-фагов определяют до 78 фаготипов S.enterica биовара typhi. При этом необходимым условием является наличие в культуре FZ-антигена. Культуры S.enterica биовара paratyphi В (schottmuelleri) дифференцируются на11 фаготипов и подтипов.

Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо или Левина) или элективные среды обогащения (Мюллера, селени-

товая или висмут-сульфит агар). Для посева петлю фекалий вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию. После оседания крупных комочков суспензию петлей наносят на поверхность агаровой среды — на одну половину чашки. Материал тщательно растирают шпателем по одной, а затем по другой половине чашки для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18—20 ч. На 2-й день изучают характер колоний, выросших на чашках (рис. 13.2.1; на вклейке), пересевают 2—3 бесцветные колонии (со среды Эндо или Левина) или колонии черного цвета (висмут-сульфит агар) на среду Ресселя и в пробирки со скошенным питательным агаром. При отсутствии подозрительных колоний на чашках делают высевы из среды Мюллера или селенитовой среды на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Для ускорения ответа ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с материалом, взятым из бесцветной колонии. Далее поступают так же, как и при идентификации гемокультуры.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Влабораторной практике широко применяют развернутую реакцию агглютинации Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей антител — агглютининов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Реакцию ставят одновременно с четырьмя антигенами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяют для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела появляются на 1-й неделе, накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются в разгар заболевания, накапливаются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. У людей, вакцинированных против брюшного тифа и парати-фов, также наблюдается положительная реакция Видаля, причем в довольно высоком титре, поэтому «инфекционный Ви-даль» удается отличить от «прививочного» только по нарастанию титра агглютининов у больных в процессе заболевания. Реакцию Видаля ставят в четырех рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные. Для контроля каждого диагностикума в пробирки вносят по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в который добавляют 2 капли диагностикума. В контрольной пробирке с

1 мл сыворотки (без диагностикума) не должно быть хлопьев. При спонтанной агглютинации реакция не учитывается. Диагностический титр реакции Видаля равен 1:200. Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию непрямой И-гемаг-глютинации, с помощью которой в сыворотке крови людей определяют присутствие антител к К/-антигену. В качестве антигена используют эритроцитарный Р?-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека 1(0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Fz’-антиге-ном S.enterica биовара typhi. Готовят разведения испытуемой сыворотки от 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубренными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательной реакции, так же как и в контроле, эритроциты осаждаются на дно пробирки и имеют виддиска с ровными краями («пуговки»). Диагностическое значение имеет титр пассивной Й-гемагглютинации, начиная с 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови у которых дает положительный результат в РНГА с эритроцитарным F/f-диагностикумом, рассматривают как подозрительных на носительство S.enterica биовара typhi и подвергают многократному бактериологическому обследованию.

• Микробиологическая диагностика сальмонеллезов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ: микробиологическая диагностика сальмонеллезов принципиально не отличается от диагностики брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика не применяется по причине большого числа сероваров возбудителей.

• Микробиологическая диагностика кишечного иерсиниоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь, моча, спинномозговая жидкость.

МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование.Посев материала на дифференциально-диагностические (среда Эндо, Мак-Конки, СБТС-агар с желчью и бромтимоловым синим) и селективные (CIN-arap с антибиотиками цефсулодином и новобиоцином) плотные среды или жидкие среды обогащения (буферно-казе-иново-дрожжевой бульон, 1 %, пептонная вода с рН 7,6—7,8). Посевы инкубируют при 25 «С в течение 24—48 ч. Идентификация чистой культуры осуществляется на основании морфологии, подвижности, тинкториальных свойств (грамотрица-

тельные палочки с закругленными концами и характерным биполярным окрашиванием, неспорообразующие, перитрихи), культуральных, биохимических признаков.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика.Диагностическое значение имеет обнаружение антител к поверхностным антигенам возбудителей наиболее распространенных серотипов (03, 04, 05, 06, 08, 09) в РА. Положительной считается РА в титре не менее 1:160. Разработаны также ИФА-тесты.

• Микробиологическая диагностика кишечного дисбактериоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.Имеет ориентировочное значение. При резко выраженном дисбактериозе в мазках преобладают микроорганизмы определенных видов (например, дрожжеподобные грибы, стафилококки и др.) на фоне существенного уменьшения грамотрицательной микрофлоры.

Бактериологическое исследование.Проводится количественное исследование состава микрофлоры кишечника. Для этого из исследуемого материала готовят разведения Ю -2 , 10 -4 , Ю -6 и т.д. Первичные посевы по 0,1 мл каждого разведения производят параллельно на несколько питательных сред (Эндо, кровяной агар, ЖСА, агар Сабуро и др.) и инкубируют при 37 °С. Подсчитывают число выросших колоний и определяют число КОЕ в 1 г материала. Проводят отсев 2—3 колоний каждого вида для выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов.

Дляобнаружения анаэробных Bifidobacterium spp. делают мерные посевы материала в разведениях 10″ 7 и выше в пробирки с 13—15 мл модифицированной среды Блаурокка, в состав которой входит печеночный бульон, пептон — 1 %, лактоза — 1 %, хлорид натрия — 0,5 %, цистин — 0,01 %, агар-агар — 0,75%, твин-80 — 0,1 %. При росте Bifidobacterium spp. через 24—48 ч происходит помутнение всей среды с образованием тяжей или отдельных колоний. Готовят мазки и окрашивают по методу Грама. Выделение чистых культур Bifidobacterium spp. является весьма трудоемким и практически необязательным. При необходимости идентификацию представителей рода осуществляют по биохимическим свойствам.

Для оценки результатов бактериологического исследования

сопоставляют полученные данные с количественным содержанием микроорганизмов в норме. Ориентировочные критерии нормальной микрофлоры толстой кишки представлены в табл. 13.2.3.

Таблица 13.2.3. Критерии нормы кишечной флоры

Патогенные микробы сем. Enterobacteriaceae О

Общее количество E.coli, млн/г 300—400

E.coli со слабовыраженными ферментативными
свойствами, % До 10

E.coli с гемолитическими свойствами, % Нет

Энтеробактерии (лактозоотрицательные и лактозополо
жительные): Hafnia, Aerobacter, Citrobacter, Klebsiella,
Serratia, % До 5

Гемолитический стафилококк по отношению ко
всем кокковым формам, % Нет

Bifidobacterium spp. (рост при посеве разведения) 10 и выше

Бактерии рода Proteus Нет

При кишечном дисбактериозе происходит значительное снижение облигатной анаэробной микрофлоры, и в первую очередь Bifidobacterium spp., а также увеличение аэробных видов, в частности E.coli, содержание которых может превышать 10 11 микробных клеток в 1 г испражнений. Увеличивается частота обнаружения штаммов E.coli со слабой ферментацией лактозы и имеющих гемолитические свойства (до 30—40 %), гемолитических и негемолитических стафилококков, бактерий рода Proteus, грибов рода Candida (до 15—16 %). У лиц с дис-бактериозами более часто обнаруживают лактозоотрицательные и лактозоположительные энтеробактерии, относящиеся к родам Hafnia, Aerobacter, Citrobacter. Для микроорганизмов, в норме отсутствующих в испражнениях или имеющихся в небольшом количестве, показателем дисбактериоза будет содержание их 10 5 —10 6 и выше КОЕ в 1 г материала (Proteus spp., Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida spp.). Для окончательного заключения о кишечном дисбактериозе важное значение имеет повторное его выявление в динамике обследования больного.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Только сон приблежает студента к концу лекции. А чужой храп его отдаляет. 8609 — | 7412 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник