Для серологической диагностики брюшного тифа используют

Реакция Видаля. Со второй недели заболевания в крови больных накапливаются антитела против возбудителя инфекции. Для их выявления исследуют сыворотку крови больного в реакции агглютинации. В качестве антигена используют убитые культуры сальмонелл — диагностикумы.

Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида.

Кровь (2-3 мл) из мякоти пальца или локтевой вены собирают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию. В лаборатории пробирку ставят в термостат на 20-30 мин для образования сгустка, затем пастеровской пипеткой обводят сгусток, чтобы отделить от стенки пробирки, и ставят на 30-40 мин на холод. Отделившуюся сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции агглютинации с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифов. Для получения сыворотки кровь можно отцентрифугировать.

При возникновении инфекционного процесса — брюшного тифа или паратифов — в организме вырабатываются О- и Н-антитела к одноименным антигенам возбудителя.

О-антитела появляются первыми и исчезают довольно быстро. Н-антитела сохраняются долго. То же самое происходит и при вакцинации, поэтому положительная реакция Видаля с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших (анамнестическая реакция), и у привитых (прививочная). Исходя из этого, реакцию Видаля ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы).

Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В.

Реакцию Видаля широко используют, так как она проста и не требует специальных условий.

Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным (см. главу 12). В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки (табл. 36).

Таблица 36. Возможный результат реакции агглютинации

Примечание. В практике реакцию Видаля ставят с четырьмя диагностикумами: брюшного тифа «О» и «Н», а паратифов А и В — с диагностикумами «ОН».

Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки — 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. Таким образом, нарастание титра антител в сыворотке крови служит показателем заболевания.

В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей.

Реакция Vi-гемагглютинации. Это наиболее чувствительная реакция для выявления антител.

Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi-антиген и приобретают при этом способность агглютиниповаться соответствующими Vi-антителами.

Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами.

Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут:

1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; З) Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида.

Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в пластмассовых пластинах с лунками.

Кровь у больного берут так же, как для реакции Видаля. Получают сыворотку. Из сыворотки готовят двукратные серийные разведения, начиная с 1:10 до 1:160.

По 0,5 мл каждого разведения вносят в лунку и прибавляют по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Реакцию ставят в объеме 0,75 мл.

Контролем служат: 1) стандартная агглютинирующая монорецепторная сыворотка + диагностикум — реакция должна быть положительной до титра сыворотки; 2) диагностикум в изотоническом растворе натрия хлорида (контроль) — реакция должна быть отрицательной.

Содержимое лунок тщательно перемешивают, ставят в термостат на 2 ч и оставляют при комнатной температуре до следующего дня (на 18-24 ч).

Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума.

Результаты учитывают по четырехкрестной системе:

++++ эритроциты полностью агглютинированы — осадок на дне лунки в виде «зонтика»;

+++ «зонтик» меньше, не все эритроциты агглютинировались;

++ «зонтик» маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов;

— реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки.

1. В какой период заболевания ставят реакцию Видаля?

2. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции Видаля?

3. С какими диагностикумами ставят реакцию Видаля?

4. Какая из серологических реакций является самой чувствительной при диагностике тифопаратифозных инфекций?

5. Каким диагностикумом пользуются при постановке реакции Vi-гемагглютинации?

6. Какой сывороткой определяют наличие Vi-антигена у исследуемой культуры?

7. Какое значение имеет определение Vi-фаготипа?

Возьмите у преподавателя О- и Н-диагностикумы из сальмонелл тифа, паратифа А и паратифа В и сыворотку больного. Поставьте реакцию Видаля.

Питательные среды

Среды ЭМС, Плоскирева, висмут-сульфитный агар выпускаются медицинской промышленностью в виде сухого порошка. Их готовят согласно указаниям на этикетке: отвешивают определенное количество порошка, наливают соответствующее количество воды, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри.

Среда Рассела. В 950 мл дистиллированной воды добавляют 40 г сухой питательной среды и прибавляют 5 г питательного агара. Нагревают до кипения и растворения порошков. В 50 мл дистиллированной воды растворяют 1 г х. ч. глюкозы и добавляют к приготовленной смеси. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл, стерилизуют текучим паром (2 дня по 2 мин) и скашивают так, чтобы оставался столбик. Среду Рассела с маннитом и сахарозой готовят так же.

Среда Олькеницкого из сухого агара. 2,5 г сухого питательного агара расплавляют в 100 мл дистиллированной воды. В остуженный до 50° С агар прибавляют все ингредиенты, указанные в рецептуре (этикетке). Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют текучим паром (3 дня по 20 мин) и затем скашивают. Готовая среда должна быть бледно-розового цвета.

Дата добавления: 2016-11-22 ; просмотров: 485 | Нарушение авторских прав

источник

Тема: Серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и В. Сальмонеллы – возбудители острых гастроэнтеритов.

Цель: Освоение методов микробиологической диагностики сальмонеллезов и серологической диагностики брюшного тифа и паратифов А и В.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема занятия 25. Серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и В. Сальмонеллы – возбудители острых гастроэнтеритов.

Сальмонеллез – острая кишечная инфекция. характеризующаяся преимущественным поражением желедочно-кишечного тракта, возбудителями которой являются многочисленные бактерии рода Salmonella (кроме S. typhi, S, paratyphi A, S. schottmuelleri).

Таксономическое положение и свойства. см. в методичке 26.

Морфология и тинкториальные свойства.

Эпидемиология. Основной источник заболевания – животные, преимущественно домашние и птицы. Реже источниками заболевания являются люди – больные и носители. Механизм заражения – фекально-оральный. Основной путь передачи инфекции – пищевой. Факторами передачи могут быть не только мясо животных и птиц, инфицированное при жизни животного либо при его обработке, но и яйца. Наиболее восприимчивы к заболеванию люди со сниженным иммунным статусом (в том числе грудные дети) и больные, получающие антибиотики. Подъем заболеваемости наблюдается летом.

Патогенез. Сальмонеллы проникают в организм через рот, достигают тонкого кишечника, где и развертывается патологический процесс. Бактерии благодаря факторам адгезии прикрепляются к слизистой оболочке, проникают в ее глубокие слои, где захватываются макрофагами. Сальмонеллы размножаются и погибают с освобождением эндотоксина, который, помимо общей интоксикации, вызывает диарею и нарушение вводно-солевого обмена. Находящаяся в нормальном состоянии микрофлора кишечника в значительной мере препятствует накоплению сальмонелл. В некоторых случаях (при снижении иммунного статуса и высокой вирулентности возбудителя) возможно развитие бактериемии и поражение костей, суставов, мозговых оболочек и других органов.

Клиническая картина. Инкубационный период равен в среднем 12-24 часа. Заболевание характеризуется повышением температуры, тошнотой, рвотой, поносом, болью в животе. Как правило, продолжительность болезни составляет 7 дней. но в некоторых случаях наблюдается молниеносная токсическая форма, приводящая к смерти больного.

Иммунитет после перенесенного заболевания сохраняется менее года.

Микробиологическая диагностика. Основной материал для исследования — рвотные массы, испражнения, промывные воды желудка. Применяют бактериологический и серологический (РА, РПГА) методы диагностики.

Лечение сальмонеллеза заключается в промывании желудка, диете, введении жидкостей для нормализации вводно-солевого обмена. Антибиотики при формах средней тяжести и легких не назначают, т.к. их применение приводит к дисбактериозу и в результате более длительному течению болезни; кроме того, очень велико число антибиотикорезистентных сальмонелл.

Профилактика неспецифическая — санитарно-гигиенические мероприятия, заключающиеся, в частности, в правильной кулинарной обработке мяса и яиц.

Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов А и В.

Для постановки диагноза применяется реакция агглютинации Видаля, основанная на обнаружении в сыворотке крови людей агглютининов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Особенности реакции заключаются в том, что реакция ставится одновременно с 4 разными диагностикумами (антигенами): ОН-диагностикум брюшного тифа, О-диагностикум брюшного тифа, ОН-диагностикум паратифа А и ОН-диагностикум паратифа В. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни, т.к. содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела накапливаются в разгвр заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени.

Это помогает дифференцировать острую стадию заболевания и «прививочную» или анамнестическую реакции.

У больных брюшным тифом в сыворотке крови определяются О- и Н-антитела, а в сыворотке крови людей, перенесших брюшной тиф или вакцинированных против него, сохраняются только Н-антитела.

Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации (РПГА), с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотке крови людей, появляющиеся только к концу заболевания, но постоянно обнаруживающиеся у носителей брюшного тифа.

Ознакомиться с биологическими свойствами и классификацией представителей семейства Salmonella.

Описывать патогенез сальмонеллезов.

Изучить методы микробиологической диагностики сальмонеллезов.

Ознакомиться с методами серологической реакции брюшного тифа, паратифов А и В.

Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии брюшного тифа, паратифов А и В.

Трактовать результаты бактериологического и серологического исследования.

Проводить дифференциацию сальмонелл – возбудителей сальмонеллезов.

Забирать материал для исследования от больных сальмонеллезами.

Выделять чистые культуры сальмонелл.

Трактовать результаты бактериологического и серологического исследования.

Сальмонеллы – возбудители пищевых токсикоинфекций.

Антигенная структура, факторы патогенности.

Патогенез и иммуногенез заболеваний. Бактерионосительство.

Методы микробиологической диагностики сальмонеллезов.

Специфическая профилактика и лечение сальмонеллезов.

Практические задания, выполняемые на занятии:

Выделение чистой культуры S. typhi :

Изучение посевов «фекалий» больного брюшным тифом на среде Ресселя.

Проверка чистоты культур: приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопия и зарисовывание.

Пересев чистой культуры на среду Гиса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации выделенной чистой культуры.

Микроскопия демонстрационных микропрепаратов чистых культур S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis.

Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения методов микробиологической диагностики сальмонеллезов и серологической диагностики брюшного тифа, паратифов А и В. Далее студенты знакомятся с правилами забора материала от больных сальмонеллезами для бактериологического и серологического исследования. Потом продолжают выделение чистой культуры S. typhi :

Изучение посевов «фекалий» больного брюшным тифом на среде Ресселя.

Проверка чистоты культур: приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопия и зарисовывание.

Пересев чистой культуры на среду Гиса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации выделенной чистой культуры.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных микропрепаратов чистых культур S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis и зарисовывают их в протокол.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

источник

Для серологической диагностики брюшного тифа используют реакцию Видаля. Какой механизм взаимодействия антигенов и антител лежит в ее основе?

Рабочие строительной бригады после обеда в столовой, через 8 часов поступили в стационар с симптомами острого гастроэнтерита: тошнота, рвота, боли в животе, частый стул, повышение температуры до 38С. Предположительно причиной отравления послужили мясные продукты. Какими микробами мог быть вызван у них острый гастроэнтерит?

Из кала и рвотных масс от больного с подозрением на холеру были выделены культуры вибрионов. Проведение какой реакции позволит определить вид микроба, вызвавшего это заболевание?

А. Агглютинации с сыворотками, содержащими Н-антитела.

В. Пассивной гемагглютинации с эритроцитарным антигенным диагностикумом

*Е. Агглютинации с сыворотками, содержащими О-антитела

При бактериологическом исследовании испражнений 4-х месячного ребенка с симптомами острой кишечной инфекции в среде Эндо через 24 часа выросли в большом количестве красные колонии. Какие это могут быть организмы?

Эпидемиологические данные свидетельствуют о возможности появления в регионе холеры. Какой биовар холерного вибриона вызывает заболевание в последнее время?

Из испражнений больного выделена культура дизентерийных бактерий, которая по международной классификации входит в подгруппу Д. Как называется выделенный подвид бактерий?

В населенном пункте зарегистрированы случаи заболевания дизентерией. Назовите возможный механизм ее передачи от больных к здоровым.

У туриста, который возвратился из Индии, началась острая водянистая диарея. Испражнения имеют вид рисового отвара. При бактериоскопическом исследовании выявлены грамотрицательные подвижные вибрионы. Какой можно поставить диагноз?

Человек выезжает в местность, где отмечены случаи заболевания на холеру. Ему необходимо провести химиопрофилактику холеры. Какой антибиотик необходимо использовать для этой цели?

У больного с диареей выделена Гр(-) неподвижная палочка, которая на среде Эндо образует бесцветные колонии, ферментирует до кислоты глюкозу, манит, мальтозу, а лактозу сбраживает на 2-3 сутки. Назовите вид возбудителя заболевания.

В бактериологической лаборатории при исследовании молочного продукта обнаружены шигеллы Флекснера. Бактериологу необходимо определить серовар выделенного возбудителя. Какие свойства необходимо исследовать?

В. Чувствительность к фагу

Е. Морфологические свойства

Из испражнений больного выделена изогнутая палочка, спор и капсул не имеет. Ферментирует маннозу, сахарозу, крахмал, разлагает желатин. На щелочных средах дает рост в виде прозрачных колоний. Назовите предполагаемый возбудитель.

При пищевой токсикоинфекции из рвотных масс и подозрительных пищевых продуктов выделены Гр(-) полиморфные палочки, которые при посеве по методу Шукевича на МПА дают ползучий рост. Культура ферментирует глюкозу до кислоты и газа, образует уреазу. К какому роду относится возбудитель?

При посеве испражнений больного на среду Плоскирева рост кишечной палочки сильно угнетен. Какие факторы обуславливают это явление?

Из испражнений больного с острой кишечной инфекцией выделены негемолитический стрептококк, шигеллы Зонне и непатогенная кишечная палочка. Какой диагноз можно поставить по результатам исследования?

Исследуемый материал, взятый от больного гастроэнтеритом, посеян на плотную питательную среду, на которой выросли черные блестящие колонии. На какую среду был посеян исследуемый материал?

В инфекционное отделение поступил ребенок 7 месяцев в состоянии средней тяжести. После осмотра и сбора анамнеза врач предположил колиэнтерит. Испражнения больного ребенка отправили в лабораторию для бактериологического исследования. Какую среду необходимо использовать для первичного посева?

В поселке возникла вспышка диареи. Было заподозрено заболевание холерой и испражнения больных доставлены в бактериологическую лабораторию для быстрого подтверждения этого предположения. Какой экспресс-метод применен в этом случае?

А. Реакция связывания комплемента

*С. Реакция иммунофлюоресценции

Е. Реакция кольцепреципитации

В бактериологической лаборатории возбудитель сальмонеллезной пищевой токсикоинфекции установлен. По каким признакам была проведена его окончательная идентификация?

В 1883 г. Кох открыл возбудителя холеры. С тех пор эта инфекция многократно вызывала эпидемии во многих странах мира. Какая по счету пандемия холеры встречается в наше время?

При исследовании нативного материала, содержащего возбудителя холеры в фазовоконтрастном и темнопольном микроскопе наблюдается очень характерная подвижность. С какими структурами микробной клетки она связана?

23.Для проведения специфической плановой профилактики холеры необходимо правильно подобрать вакцину. Для этого необходимо знать какой вид холерного вибриона вызывает холеру в последние годы?

К врачу- инфекционисту на прием пришел больной с жалобами на лихорадку, длящуюся 3 дня, общую слабость, отсутствие сна, ухудшение аппетита. Врач заподозрил брюшной тиф. Каким методом лабораторной диагностики можно подтвердить этот диагноз?

А. Выделением биликультуры

С. Выделением уринокультуры

*D. Выделением гемокультуры

Е. Выделением миелокультуры

Один из представителей семейства кишечных бактерий обладает способностью образовывать капсулу, как в организме, так и на питательных средах, формируя при этом мутные слизистые колонии. Известно также, что он является возбудителем риносклеромы — хронического атрофического процесса слизистой верхних дыхательных путей. Укажите родовое название возбудителя?

Врач-бактериолог для идентификации культуры, подозрительной на холерный вибрион должен провести реакцию ааглютинации, чтобы установить его принадлежность к серогруппе. С какой холерной О-сывороткой должна агглютинировать выделенная культура, если она является классическим холерным вибрионом?

27. На первом этапе в патогенезе эшерихиозов имеет значение прикрепление эшерихий к эпителиальным клеткам с помощью особых образований и продуцируемых ими адгезинов. Как называются эти образования?

источник

Цель. Провести бактериологический и серологический методы диагностики дизентерии. Оценить их диагностическую ценность. Ознакомиться с ИБМП для лабораторной диагностики дизентерии.

Задача. В инфекционной больнице в течение 6 дней лечиться больной с диагнозом: «Острая дизентерия». Жалобы при поступлении на высокую температуру, частый жидкий стул со слизью и кровью, боли в животе. Для подтверждения диагноза проведено бактериологическое исследование парными сыворотками на 3-й и 6-й дни болезни. Учтите результаты бактериологического и серологические исследования.

Бактериологический метод диагностики: выделение и идентификация чистой культуры.

1-й этап. Посев нативного материала. Или взятого с помощью петли из прямой кишки. Материал засевают на среду Плокирева или Левина или висмут-сульфит агар и помещается в термостат при температуре 37°С и инкубируется в течение 24-48 часов, петлю заливаем средой накопления ( селенитовый или желчный бульоны).

2-й этап. Выделение чистой культуры. Через 24 часа инкубации в термостате с помощью петли отвить типичную для дизентерийных бактерий бесцветную колонию на скошенный МПА или среду Олькеницкого для выделения чистой культуры и поместить в термостат на сутки. Из сред накопления произвести высев на среды Плоскирева, Левина или висмут-сульфит агар.

3-й этап. Идентификация выделенной культуры: а) морфология; б) биохимические свойства; в) антигенная структура;

4-й этап: учесть чувствительность выделенной культуры к антибиотикам и бактериофагу.

Серологический метод диагностики.

Для серологического исследования при постановке РПГА берется: а) сыворотка больного; б) эритроцитарный диагностикум; в) физиологический раствор.

Цель. Изучить специфические препараты для диагностики дизентерии.

Используя аннотации к диагностическим препаратам по теме «микробиология дизентерии», изучите препараты, применяемые при диагностике этой инфекции.

Аннотация лечебно-профилактических и диагностическим препаратов по теме «Микробиология дизентерии»

Бактериофаг дизентерийный поливалентный жидкий или в таблетках – стерильный фильтрат фаголизатов возбудителей бактериальной дизентерии: шигелл Флекснера 1,2,3,4,6- типов и шигелл Зонне

Интести-бактериофаг жидки – смесь стерильных фильтратов фаголизатов шигелл Флекснера 1,2,3,4,6-го серовариантов, шигелл Зоне; сальмонелл паратифа А, паратифа В, тифимуриум, инфантис, холерасуис, ораниенбург, энтеритидис; наиболее распространенных серовариантов кишечной палочки, протеус вульгарис и мирабилис, энтерококков, стафилококков, псевдомонас аеругиноза. Применяется для лечения кишечных инфекций.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл. Получены из крови животных, иммунизированных определенными видами шигелл. Используются в бактериологическом методе для идентификации чистых культур.

Дизентерийный диагностикум. Состоит из взвеси убитых бактерий Флекснера и Зоне. Используется в серологическом методе.

Дизентерийный эритроцитарный диагностикум состоит из взвеси эритроцитов, нагруженных антигенами Флекснера, Зоне и др. используются для постановки РПГА в серологическом методе.

Цель. Изучить этиологию, эпидемиологию и патогенез брюшного тифа, паратифов и ПТИ. Овладеть основными методами лабораторной диагностики брюшного тифа, паратифов, и оценки результатов исследований. Научиться практически решать вопросы по специфической профилактике брюшного тифа.

По последней классификации отмечают два вида сальмонелл: 1)Salmonella bogori содержит 10 очень редких сероваров; 2)Salmonella choleraesuis включает 2500 сероваров. Диагностическим лабораториям рекомендовано внутри рода Salmonella использовать названия сероваров, например: Salmonella typhi или Salmonella typhimurium. Природный резервуар сальмонелл – человек, животные и птицы. Основной путь передачи – водный и пищевой. Сальмонеллы высокоустойчивы в окружающей среде: в питьевой воде – до 120 суток, в комнатной пыли – до 560 суток, в замороженном мясе – до 13 месяцев. Сальмонеллы имеют сложную антигеннюую структуру: в соответствии с содержанием тех или иных О-АГ сальмонеллы разделяют на серологические группы, обозначаемые арабскими цифрами. По Н-АГ микроорганизмы делят на серовары, Vi-АГ – фактор вирулентности. При идентификации сальмонелл принимают во внимание 3 антигена: О, Н и Vi. Этот принцип положен в основу диагностической антигенной схемы Кауфмана-Уайта. Типичную клиническую картину брюшного тифа и характерные патологоанатомические изменения вызывают как брюшнотифозные бактерии, так и бактерии паратифа А и В. Остальные сальмонеллы вызывают заболевания с синдромом гастроэнтероколита.

Для лабораторной диагностики сальмонеллезов используют оба принципа:

1) обнаружение возбудителя – метод бактериологический;

2) обнаружение специфических изменений – метод серологический;

Самостоятельная практическая работа

Цель. Провести бактериологический и серологический методы диагностики брюшного тифа, паратифов.

Задача. В инфекционную больницу поступила женщина на 6-й день болезни. для подтверждения диагноза был сделан посев крови, мочи, испражнений больной для выделения чистой культуры. Поставлена серологическая реакция с сывороткой больной. Учтите результаты исследований, оформите протокол.

Бактериологический метод диагностики

Выделение и идентификация чистой культуры.

1-й этап. Посев материала. Материал для исследования в зависимости от условий задачи может быть различным: кровь, испражнения, моча. Кровь больного берется на первой неделе болезни в количестве 5-10 мл стерильно из локтевой вены и засевается у постели больного во флаконы с 50-100 мл 10-20% желчного бульона. Испражнения и мочу засевают на среду Плоскирева, висмут-сульфит агар и залить средами обогащения: магниевую среду и селенитовый бульон.

2-й этап. Выделение чистой культуры. Через сутки делается посев петлей с желчного бульона на среды Плоскирева и висмут-сульфит агар для выделения чистой культуры. Из чашки со средой Плоскирева петлей откалывают типичную для сальмонеллезных палочек бесцветную колонию на трехсахарный (Олькеницкого, Клиглера) агар. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С на сутки.

3-й этап идентификация чистой культуры:

а) морфологические свойства;

Положительная реакция агглютинации с одной из О-сывороток позволит определить групповую принадлежность выделенной культуры сальмонелл по таблице Кауфмана, после чего с соответствующими данной группе Н-монорецепторными сыворотками определяется серовар культуры.

Исследование выделенной культуры заканчивается определением фаготипа микроорганизмов. С этой целью выделенную культуру сеют на питательную среду и наносят петлей на засеянную поверхность брюшнотифозные фаги различных типов. Лизис культуры вызывается определенным фагом, что соответствует фаготипу культуры.

Серологический метод диагностики брюшного тифа. РНГА.

Ставиться по стандартной схеме в плашках или пробирках.

Выделение чистой культуры и её идентификация

Цель. Провести исследования для диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.

Задача. Больной перенес брюшной тиф. Перед выпиской из стационара он был обследован для выявления бактерионосительства: возбудитель обнаружен в испражнениях, из мочи и желчи микроорганизмы не выделены. Проведен серологический метод диагностики: поставлена реакция Vi-гемагглютинации. Учтите результат. Оформите протокол.

Для серологического метода использованы ингредиенты: сыворотка больного, эритроцитарный Vi-диагностикум, физиологический раствор.

Цель. Изучить специфические препараты для диагностики сальмонеллезных инфекций.

Из аннотации по теме «Микробиология брюшного тифа » внести в протокол перечень специфических диагностических препаратов.

Аннотация К лечебно-профилактическим и диагностическим препаратам по теме «Микробиология брюшного тифа».

Вакцина брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном.

Вакцина брюшнотифозная Vi-полисахаридная.

Интести бактериофаг жидкий.

Люминисцирующаю брюшнотифозная сыворотка.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки.

Эритроцитарный сальмонеллезный диагностикум

Тема:Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций.

Цель. Изучить этиологию, эпидемиологию и патогенез пищевых токсикоинфекций (далее ПТИ). Овладеть основными методами лабораторной диагностики ПТИ и оценки результатов исследований.

Теоретическая справка. К пищевым отравлениям микробной природы относятся острые системные заболевания, возникающие в результате употребления пищевых продуктов, массивно обсемененных некоторыми микроорганизмами или зараженных микробными экзотоксинами. Это определение позволило подразделить все пищевые отравления, связанные с микроорганизмами, на пищевые токсикоинфекции и интоксикации. Первые вызывают преимущественно грамотрицательные бактерии, среди которых энтеробактерии занимают первое место. При этом название токсикоинфекции определяется поступлением в кровь бактериального эндотоксина (ЛПС), освобождающегося в большом количестве после массивного разрушения бактерий. Пищевые продукты, содержащие экзотоксины бактерий, вызывают пищевые интоксикации, а токсины грибов микотоксикозы.

Наиболее распространенными возбудителями пищевых токсикоинфекций являются сальмонеллы, реже E.coli, P.vulgaris, P.morganii, Bacillus cereus.

Патогенез и клиническая картина ПТИ определяются проникновением в желудочно-кишечный тракт большого количества соответствующих бактерий с зараженными пищевыми продуктами (мясо, рыба), подвергшимися недостаточной термической обработке. При этом сохранившие жизнеспособность бактериальные клетки быстро размножаются в благоприятных условиях. Одновременное проникновение в кишечник человека массивной дозы возбудителя, его последующее размножение и разрушение бактериальных клеток приводит к освобождению большого количества эндотоксина, оказывающего воздействие на интрамуральный нейрорецепторный аппарат тонкой кишки, периферические сосуды брюшной полости. Это сопровождается нейродистрофическими изменениями в стенке тонкой кишки и поражением клеток других органов. При ПТИ освобождение желудочно-кишечного тракта от возбудителей во многих случаях происходит достаточно быстро, иногда через несколько часов после начала заболевания. Бактериемия при этих заболеваниях как правило не наступает..

Лабораторная диагностика проводится бактериологическим методом, Материалом для исследования являются испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка больных людей и остатки пищи и продуктов, из которых лона была приготовлена.

Пищевые интоксикации бактериальной природы возникают также при попадании с пищей в желудочно-кишечный тракт бактериальных токсинов, из которых наибольшую опасность представляют энтеротоксины Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens и особенно ботулонейротоксин C. Botulinum. Для возникновения пищевой интоксикации не обязательно присутствие в продукте живых возбудителей.

Микробиологическая диагностика пищевых отравлений проводится методом выявления токсинов, а также выделения чистых культур возбудителя – продуцентов токсинов в остатках пищи и в материале, взятом от больного.

Бактериологическая диагностика токсикоинфекций, вызванных сальмонеллами, эшерихиями и протеем.

Материалом для исследования являются испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, остатки пищевых продуктов – возможные факторы передачи инфекции.

1этап Производится посев материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфит агар) для выделения чистой культуры сальмонелл или эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным агаром.

2 этап. После инкубации посевов при температуре 37°С в течение 20 – 24 ч. отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие «ползучего» роста, характерного для протея, в пробирке со скошенным агаром. Подозрительные колонии пересевают на трехсахарный агар для получения чистой культуры и одновременно ставят с ними реакцию агглютинации на стекле, используя смесь диагностических сывороток к разным сероварам сальмонелл.

3 этап. С выросшей культуры на трехсахарном агаре делают мазок и определяют чистоту выделенной культуры, ставят реакции агглютинации с групповыми О сыворотками и монорецепторными Н- сыворотками и делают посев на среды «пестрого» ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл из организма больного и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой токсикоинфекции- факторе передачи инфекции.

На условно-патогенную микрофлоруфлору

2этап При наличии «ползучего» роста на скошенном питательном агаре из конденсационной воды петлей берут материал для приготовления препарата «висячая» капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по Граму и микроскопируют.

3 этап Производят пересев на трехсахарный агар (Клиглера, Олькеницкого) и выделяют чистую культуру протея,

4 этап определяют биохимические и другие признаки и устанавливают вид: P. vulgaris, P. mirabilis.

Оценка роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций должна быть строго аргументирована:

а) бактериологическим, серологическим, эпидемиологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры;

б) выделением идентичных штаммов условно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов;

в) нарастанием титров реакции агглютинации с аутоштаммами возбудителей в динамике заболевания.

Лабораторная диагностика пищевых интоксикаций бактериальной природы

1. Материалом для определения стафилококкового энтеротоксина являются рвотные массы, промывные воды желудка больных, остатки пищи (чаще кремы, сметана, мороженое, а также мясные продукты, в которых хорошо размножаются стафилококки).

С целью выделения чистой культуры стафилококка исследуемые материалы, которые могут содержать жизнеспособные бактерии, засевают в чашки с ЖСА.

Для эпидемиологического анализа массовых стафилококковых интоксикаций проводят фаготипирование выделенных культур с помощью набора стафилококковых фагов.

2. Материалом для выявления энтеротоксина клостридий С. perfringens являются мясные, рыбные консервы и другие продукты, из которых экстрагируют токсин изотоническим раствором хлорида натрия. Экстракт центрифугируют и надосадочную жидкость вводят внутрибрюшинно белым мышам или внутрикожном морским свинкам. Гибель животных в течение первых 3-4 дней появление некроза на месте внутрикожных инъекций свидетельствует о наличии токсина. Для его идентификации ставят реакцию нейтрализации с антитоксическими сыворотками С. perfringens.

Выделение чистой культуры С. perfringens и С. botulinum производят, используя методы выделения анаэробных бактерий.

3. Материалом для выявления ботулотоксина служат сыворотка крови, моча, испражнения, промывные воды желудка больного, остатки пищи или подозреваемые продукты (колбасы, мясные, рыбные, фруктовые, овощные консервы и др.). Для обнаружения ботулотоксина в сыворотке крови больного ставят реакцию нейтрализации таксина антитоскической сывороткой в биопробе на белых мышах. (с , моновалентными антитоксическими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е. F,C В качестве контроля берут нормальную сыворотку крови. При нейтрализации токсина гомологичной антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.

Дата добавления: 2013-12-13 ; Просмотров: 2631 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Брюшной тиф диагностируют на основании длительной лихорадки, головной боли, нарастающей интоксикации с развитием тифозного статуса, типичных изменений языка, появления метеоризма, розеолёзной сыпи, гепатоспленомегалии и изменений периферической крови.

Лабораторная диагностика брюшного тифа основана на обнаружении возбудителя в биоматериале и специфических антител в крови больного. Решающее значение имеет обнаружение возбудителя в крови (гемокультура), моче (уринокультура), испражнениях (копрокультура), жёлчи (биликультура), а также в костном мозге, спинномозговой жидкости, розеолах, гное или экссудате.

В практической работе для ранней диагностики брюшного тифа наибольшее значение имеет гемокультура, которую следует проводить на протяжении всего лихорадочного периода. Кровь из вены в количестве 5-10 мл засевают во флакон с 50-100 мл 10-20% жёлчного бульона (лучшие результаты даёт посев в трипсин-соевый бульон). Положительные результаты гемокультуры чаще получают при посевах крови на первой неделе заболевания, когда бактериемия наиболее выражена. Со второй недели болезни брюшнотифозные палочки можно обнаружить в посевах кала, мочи и дуоденального содержимого. Наиболее высокий процент выделения палочек брюшного тифа получают при посевах костного мозга. В целом бактериологическое подтверждение диагноза брюшного тифа удаётся получить у 80-90% больных.

Серологические методы позволяют обнаружить специфические антитела в крови или антигены в биосубстрате. В практической работе чаще всего применяют реакцию Видаля и РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с использованием эритроцитарных О-, Н- и Vi-антигенов. Реакция Видаля основана на обнаружении специфических О- и Н-антител-агглютининов в крови больного с помощью соответствующих антигенов. Положительные результаты можно получить с 8-9 сут болезни. Реакция Видаля может быть положительной у привитых и перенёсших брюшной тиф, поэтому решающее значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания. Для более точного выявления специфических иммунных сдвигов в крови больного реакцию Видаля следует повторять с О- (IX и XII) и Н-монодиагностикумами для исключения перекрёстных реакций с сальмонеллами других групп.

Более специфичны и чувствительны РНГА с эритроцитарными О- и Vi-антигенами и реакция Vi-гемагглютинации. Эти реакции используют для ранней диагностики брюшного тифа. В РНГА концентрация О-антител нарастает в динамике заболевания, а титры Vi-антител существенно не меняются. Реакция Vi-гемагглютинации имеет наибольшее значение при обследовании лиц, подозрительных на брюшнотифозное носительство.

Серологические реакции на обнаружение специфических антител в крови больного следует ставить с 4-5-го дня болезни, а затем на 2-3-й нед и позднее. Диагноз брюшного тифа считают серологически подтверждённым при титре антител 1:200 и выше или при нарастании титра антител в 2-3 раза в динамике заболевания. При оценке серологических реакций важно учитывать, что нарастание титров специфических О-антител свидетельствует об остром инфекционном процессе, а наличие только Н- или Vi-антител — о перенесённом ранее брюшном тифе или бактерионосительстве.

Для серологической диагностики бактерионосительства и вакцинальных реакций предложено раздельное определение специфических антител, относящихся к IgM и IgG в ИФА. Выявление специфических брюшнотифозных IgM указывает на текущий инфекционный процесс, а изолированное обнаружение специфических антител, относящихся к классу IgG, — о вакцинальной природе антител или перенесённом ранее брюшном тифе.

Дифференциальная диагностика брюшного тифа

В практической работе брюшной тиф у детей чаще приходится дифференцировать с тифоподобной формой сальмонеллёза, паратифами, инфекционным мононуклеозом, лимфогранулематозом, иерсиниозом, малярией, а в начальном периоде — с гриппом, энтеровирусной инфекцией и острой кишечной инфекцией другой этиологии.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19]

источник

Возбудителями брюшного тифа и паратифов (А, В) являются бактерии рода Salmonella, в состав которого входят два вида: Salmonella enterica с 6 подвидами (включая возбудители брюшного тифа, паратифов, сальмонеллезов – всего более 2400 сероваров) и Salmonellabongori(редко встречающиеся сальмонеллы).Возбудитель брюшного тифа обозначается как Salmonellaсеровара Typhi (Salmonella entericaspp. enterica ser. typhi, прежнее назва­ние Salmonella typhi), паратифа А — Salmonellaсеровара ParatyphiA, паратифа В — Salmonellaсеровара Paratyphi В.

Методы микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов представлены в схеме 9.

Выбор материала и метода микробиологической диагностики этих заболеваний зависит от стадии патогенеза. На первой неделе заболевания и в течение всего лихорадочного периода возбудитель можно выделить из крови (гемокультура), с конца второй и на третьей неделе — из мочи (уринокультура) и испражнений (копрокультура). Высокий процент высеваемости возбудителя отмечается при исследовании костного мозга (выделение миелокультуры). Удается обнаружить сальмонеллы в скарификате розеол (розеоло-культура), ликворе, содержимом две­надцатиперстной кишки, секционном материале. У реконвалесцентов исследуют испражнения и желчь (выделение биликультуры). Начиная со второй недели заболевания проводят серологи­ческое исследование. Микроскопическое исследование материала от больного не проводится, т.к. все энтеробактерии (как патогенные, так и непатогенные, например, E.coli) по морфологическим свойствам идентичны (рис. 14).

Бактериологическое исследованиеявляется основным лабораторным методом диагностики брюшного тифа и паратифов.

Ранним и надежным методом бактериологической диагностики является выделение возбудителей из крови (гемокультура).Взятую в асептических условиях кровь (15-20 мл) засевают на 10% желчный бульон или среду Рапопорт (10% желчный бульон, 1 % маннита или 2 % глюкозы, 1 % индикатора Андреде; в среду помещен поплавок для улавливания газа) в соотношении крови и среды 1:10 для накопления сальмонелл. Посевы инкубируют при 37 0 С 18 —24 ч. При наличии сальмонелл маннит или глюкоза расщепляется с образованием кислоты и среда приобрета­ет красный цвет; появление в поплавке газа свидетельствует о газообразовании — характерном признаке паратифозных бактерий.

Схема 9.Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

Рис. 14. а — кишечная палочка(E.coli ув. Х1350), б— возбудитель брюшного тифа(S.typhi, ув. Х630) в мазках из чистой культуры. Окраска по Граму. Грамотрицательные беспорядочно расположенные палочки средних размеров.

Копрокультуру выделяют путем посева фекалий на среду Плоскирева, Эндо, висмут-сульфит агар и среды накоп­ления (селенитовую, магниевую, тетратионатную, Кауфмана, Мюллера) с последующей 18 —24-часовой инкубацией при 37 °С.

На 2-й день на средах Плоскирева, МакКонки или Эндо вырастают бесцветные (лактозоотрицательные) колонии, а на висмут-сульфит-агаре – черные. Колонии сальмонелл па­ратифа А окрашены взеленый цвет, так как не образуют сероводород. Из типичных колоний готовят мазок, окрашивают по Граму и после микроскопии остаток колонии пересевают на среду Ресселя или Олькеницкого. При отсутствии типичных колоний на те же среды засевают материал со среды обогащения.

На 3-й день исследования учитывают характер роста на среде Ресселя или Олькеницкого (окрашивание столбика среды Ресселя в синий цвет, среды Олькеницкого в желтый в результате ферментации глюкозы в анаэробных условиях; скошенная часть среды не изменена – отсутствие ферментации лактозы), готовят мазок для проверки чистоты выделенной культуры, выполняют пересев в среды «пестрого» ряда для изучения биохимических свойств (см. табл. 10), после чего

ставят ориентировочную, а потом развернутую РА. Ориентировочную РА ставят со смесью О-сывороток, включающей агглютинины к О-антигенам 2, 4, 7, 8, 9, 3-10. При отсутствии РА с этой смесью используют смесь монорецепторных О-сывороток к редким группам сальмонелл (антитела к антигенам 11, 13, 15, 19, 23 и т.д.) При получении положительных результатов культуру испытывают отдельно с каждой из О-сывороток, входящих в состав смеси. После этого культуру агглютинируют с Н-сыворотками 1 фазы (a, b, i, c, d, g, m) а потом 2 фазы (1,2; 1,5), устанавливая антигенную формулу выделенной сальмонеллы в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта (таблица 9). Эта схема разработана на основании изучения у сальмонелл О и Н антигенов и применяется с целью антигенной идентификации патогенных сальмонелл.

Таблица 9. Антигенная структура сальмонелл (сокращенная схема Кауфмана-Уайта)

На 4-й день от начала исследования учитывают изменения сред «пестрого» ряда (см. табл. 10), результаты развернутой РА и выдают ответ. Выделенные культуры подвергают фаготипированию, что позволяет установить источник и пути заражения.

Мочу, дуоденальное содержимое, соскоб розеол, сек­ционный материал с целью выделения тифо-паратифозных бактерий засевают на плот­ные среды (Эндо, Мак-Конки и т.п. в чашке Петри), а также в среды накоп­ления. При наличии характерного роста идентификация прово­дится по вышеописанной схеме.

Таблица 10. Биохимические свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов

Обозначения: (+) — наличие свойства, (-) — отсутствие свойства, К – образование кислоты, КГ – образование кислоты и газа.

Аналогично проводится исследование испражнений уперебо­левших брюшным тифом и паратифом лиц, а также у работников детс­ких учреждений, питания и водоснабжения с целью выявления бактерионосителей.

Серологическое исследование.Для серологической диагности­ки брюшного тифа и паратифов ставят ре­акцию Видаля (развернутая РА) с целью определения соответствующих антител в крови больного. Антитела к возбудителям брюшного тифа, парати­фов А и В обнаруживаются в сыворотке крови больных с 8— 10-го дня заболевания. Исследуемую сыворотку крови разводят двукратно в 6 параллельных рядах пробирок от 1:100 до 1: 1600 в объеме 1 мл, куда вносят по 2 капли ОН— и О- брюшнотифозного, паратифозного Аи паратифозного В диагностикумов. О-диагностикумы получают кипячением или обработкой спиртом взвеси соот­ветствующих культур, ОН—диагностикумы — обработкой формалином. Для контроля антигена диагностикумы вносятся в той же дозе в 1 мл физиологического раствора, а для контроля сыворотки ис­пользуют сыворотку в разведении 1:100 без добавления диагностикумов.

О-антитела имеют диагностическое значение, они появляются в крови на второй неделе заболева­ния и исчезают к его концу, а Н-агглютинины нараста­ют к концу заболевания. и диагностической ценности не имеют. Н-антитела могут обнаруживаться также у переболевших и вакцинированных. Ряд брюшнотифозных вакцин вызывает также выработку Vi – и О антител. Диагностический титр О-антител в реакции Видаля у неиммунизированных лиц 1 :100, а при отсутствии типичной клинической картины — 1 :200. Однако титр антител у больных может быть ниже диагностического в связи с ранним назначением антибиотиков или наличием у больного вторичного иммунодефицита. Таким образом, отрицательная реакция Видаля не исключает тифопаратифозное заболевание. С другой стороны, повышенные титры О-антител могут быть обусловлены прививками. Поэтому при подозрении на брюшной тиф или паратифы целесообразно исследовать сыворотку крови как можно раньше (до появления антител), а затем в динамике (с интервалом 7-12 дней) для выявления нарастания титра антител более чем в 4 раза. Если сыворотка крови больного агглютинирует одновре­менно два или три вида диагностикумов, учитывают титр агглютинации: специфическая агглютинация происходит обычно с более высокими, а групповая — с более низкими разведениями сыворотки.

Более чувствительны РНГА с эритроцитарными групповыми (А, В, С, Д, Е)и монорецепторными диагностикумами, а также ИФА, которые ставят с парными сыворотками в динамике заболевания.

Vi-антитела чаще обнаруживаются у бактерионосителей сальмонелл брюш­ного тифа, т.к. Vi-антиген способствует длительной персистенции возбудителя в организме. При обследовании лиц, подозрительных на носительство брюшнотифозных палочек, применяется РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом для определения соответствующих антител и их принадлеж­ности к классу IgG.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

Выбор материала и метода микробиологической диагностики брюшного тифа зависит от стадии патогенеза. На 1 неделе заболевания возбудитель выделяют из крови (гемокультура), с конца 2 недели и на 3 неделе- из мочи (уринокультура), испражнений (копрокультура), костного мозга, ликвора.

Основным методом диагностики является бактериологический, начиная со 2 недели проводят серологическое исследование.

Серологический метод исследования:

1.Для серологической диагностики брюшного тифа используют развернутую реакцию агглютинации (РА)- реакцию Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей агглютининов (АТ), которые появляются в конце 1, начале 2 недели заболевания, и на изучении динамики нарастания и длительности сохранения антител. Реакция ставится с антигенами: О- и Н-брюшнотифозными. Боюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни: О-антитела накапливаются в разгар болезни, Н-антитела- появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени.

Для реакции Видаля берут 2-3 мл крови из вены.

Реакцию Видаля ставят в 4 рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду ( 5 опытных и 2 контрольных- контроль сыворотки и контроль АГ). Сначала готовят основное разведение сыворотки. Титры: 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800. Затем делают серию разведений сыворотки путем последовательного переноса 1 мл из предыдущей пробирки в следующую пробирку ряда. Из последней пробирки 1 мл удаляют для сохранения объема. В контроль АГ вносят 1 мл ИХН. В каждую пробирку с разведениями сыворотки и в контрольную пробирку сыворотки вносят по 2 капли взвеси бактерий(диагностикума). Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37 гр на 2ч. , затем сутки выдерживают при комнатной температуре. Учет РА проводят оценивая каждую пробирку, начиная с контрольных. В контрольной пробирке (без диагностикума) не должно быть хлопьев.

Контроль сыворотки- светло-желтая жидкость, контроль АГ- равномерно мутная жидкость.

Реакцию учитывают как положительную при наличии отчетливой агглютинации во 2 опытной пробирке, и её отсутствие в обеих контрольных пробирках.

Титр сыворотки- наименьшее разведение, где наблюдается положительный результат, т.е. титр реакции Видаля равен 1:200.

2.РНГА с эритроцитарными групповыми (A, B, C, D, E) и монорецепторными диагностикумами.

3.ИФА, которые ставят с парными сыворотками в динамике заболевания.

4.Реакция пассивной Vi-гемагглютинации , с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотки крови больного. В качестве АГ используют эритроцитарный Vi-диагностикум. Испытуемую сыворотку разводят от 1:10 до 1:1280. При положительном результате эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубренными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательном- диск с ровными краями. Диагностический титр- 1:40 и выше.

Лактобактерин сухой. Холерная вакцина.

Лактобактерин сухой.

Содержание: Лактобактерин сухой представляет собой микробную массу живых, лиофилизированных в среде культивирования лактобактерий L. plantarum или L.fermentum.

Получение: клетки выращивают в достаточном объеме, отделяют от жидкой среды центрифугированием, суспендируют осадок в стерильном криопротекторе. Суспесию заливают в ампулы, замораживают в течение часа, затем подвергают лиофильной сушке.

Применение: предназначен для лечения детей и взрослых, страдающих:

•хроническими колитами различной этиологии, в том числе неспецифическими язвенными колитами;

•соматическими заболеваниями, осложненными дисбактериозами, возникшими в результате применения антибиотиков, сульфаниламидных препаратов и других причин;

•для лиц, перенесших острые кишечные инфекции, при наличии дисфункций кишечника или выделении патогенных и условно-патогенных бактерий;

•в акушерско-гинекологической практике для санации половых путей при неспецифических воспалительных заболеваниях гениталий и предродовой подготовке беременных группы «риска» с нарушениями чистоты вагинального секрета до III-IV степени.

Холерная вакцина.

Содержание: взвесь убитых холерных вибрионов

Получение: готовится из вибрионов Эль-Тори классических холерных вибрионов серотипов Инаба и Огава. Получают путем выращивания на искусственных питательных средах возбудителей холеры, которые затем подвергают инактивации, разрушению, выделению антигенных комплексов, очистке, конструированию в виде сухого или лиофильно высушенного препарата. В препарат обязательно добавляют консервант, иногда- адъюванты. Проводят контроль вакцины.

Применение: для активной иммунизации против холеры.

24.Возбудители дизентерии Зонне. Биологические свойства (морфологические, культуральные, ферментативные, антигенные, токсинообразование).

Дизентерия Зонне— анторпонозное инфекционное заболевание с преимущественным поражением толстой кишки и общей интоксикацией, вызываемое Shigella Sonnei. Вызывает шигеллез в легкой форме, часто в виде бактерионосительства.

Возбудитель: семейство : Enterobacteriaceae, род: Shigella, вид: S.Sonnei. (1 серовар).

Морфологические свойства: неподвижные (не имеют жгутиков) грамотрицательные палочки, размером 0.5-0.7*2-3 мкм. Спор и капсул не образуют. Многие имеют половые пили, а также снабжены фимбриями(для адгезии).

Культуральные свойства: хорошо растут на простых питательных средах. На плотных средах образуют мелкие гладкие блестящие полупрозрачные колонии, на жидких- диффузное помутнение. Образуют два типа колоний: S-формы (1 фаза) и R-формы (2 фаза).

Ферментативные (биохимические) свойства: S. Sonnei является наиболее биохимически активным видом, по биохимической активности подразделяется на хемовары. 1. Не образуют газ при ферментации глюкозы. 2. Способен ферментировать лактозу и сахарозу медленно, в течение 72 ч. 3. Не прдуцирует сероводород и индол 4. Ферментирует маннит.

Антигенные свойства: О-антиген, также обладает антгеном фазы 1, который является К-антигеном.

Токсинообразование: S. Sonnei продуцирует шигаподобные токсины- белковые токсины, состоящие из 1 субъединицы А- энзиматическая и 5 субъединиц В- рецепторные (имеют сродство к рецептору Gb3 на эндотелии капилляров). Субъединица А, проникнув в клетку, взаимодействует с субъединицей рибосом, необратимо блокируя синтез белка. Шигаподобные токсины накапливаются в периплазматическом пространстве и выделяются в окружающую среду после гибели шигелл. Эндотоксин защищает шигеллы от действия низких значений рН и желчи.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Папиллярные узоры пальцев рук — маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ — конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой.

источник