Вакцина штамм 82 против бруцеллеза инструкция

взамен временного наставления от. 25 января 1974 г.

и указаний от 8 мая 1974 г.)
1. Общие положения
1.1. Сухая живая вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота готовится из слабоагглютиногенного штамма № 82 бруцелла абортус. Выпускается в ампулах или флаконах и представляет собой аморфную массу коричневато-желтого цвета,

При разведении вакцины физиологическим раствором поваренной соли, дистиллированной или кипяченой водой образуется равномерная взвесь бруцелл беловато-желтоватого цвета

1.2. На этикетках коробок с сухой вакциной должны быть указаны название вакцины, товарный знак и наименование биопредприятия, ее изготовившего, номер серии и номер госконтроля, дата изготовления, срок годности, количество доз в ампуле (флаконе) и в коробке, условия хранения вакцины.

На каждой ампуле (флаконе) с вакциной должна быть надпись с указанием названия вакцины, номера серии и срока годности препарата.

Ампулы или флаконы, не имеющие указанной надписи, а также разбитые, с трещинами, содержащие посторонние примеси или плесень, с истекшим сроком годности препарата, упакованные в коробки без этикеток бракуют и обеззараживают кипячением.

1.3. Сухая живая вакцина подлежит хранению в холодильных камерах или в темном сухом помещении при температуре не выше 8°С. При хранении вакцины при температуре выше оказанной активность препарата теряется в силу отмирания микробных клеток. В жаркое время года вакцину доставляют к месту применения в термочемоданах или термосах со льдом.

Срок годности сухой живой вакцины 12 месяцев со дня ее изготовления

1.4. Перед применением сухую живую вакцину разводят физиологическим раствором, дистиллированной или остуженной кипяченой водой из расчета, чтобы одна доза для прививки крупному рогатому скоту составляла 5 мл разведенной вакцины. Для этого шейку ампулы в верхней части протирают смоченной спиртом ватой и обламывают. В ампулу (флакон) стерильным шприцем и иглой вливают стерильный физиологический раствор (3–5 мл), дистиллированную или кипяченую воду. Ампулы (флаконы) осторожно встряхивают до превращения массы в равномерную взвесь

Разведенную в ампуле (флаконе) вакцину шприцем с длинной иглой отсасывают и переносят в стерильный флакон (емкостью 50–200 мл) с предварительно налитым в него физиологическим раствором (дистиллированной или кипяченой водой). С учетом жидкости, использованной для растворения вакцины в ампулах, во флаконе должно быть столько физиологического раствора (дистиллированной или кипяченой воды), сколько необходимо для приготовления количества доз вакцины в разведенном виде для прививки животным.

Разведенная вакцина пригодна для применения в течение четырех часов, позднее она теряет активность и подлежит уничтожению путем кипячения в течение 30 минут. Обезвреживанию кипячением подлежат также ампулы и флаконы из-под вакцины, шприцы и иглы.

1.5. Вакцину животным вводят подкожно в область средней трети шеи в дозе 5 мл.

Для прививки каждого животного используют отдельную иглу.

Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время прививок допускается стерилизация игл путем протирания их спиртом Место введения вакцины предварительно протирают 70%-ным спиртом или 0,5%-ным раствором кристаллической карболовой кислоты.

1.6. Прививки животных сухой живой вакциной разрешается проводить только ветеринарным врачам или ветеринарным фельдшерам со средним специальным образованием под контролем ветврача.

1.7. Привитых животных метят путем одного выщипа треугольной формы у основания верхней части левого уха, а ревакцинированных – двумя такими выщипами.

1.8. На проведение вакцинации животных в каждом хозяйстве составляют акт, в котором записывают данные об эпизоотическом состоянии хозяйства (фермы, стада) по бруцеллезу за последние два года, результаты исследования на бруцеллез животных перед вакцинацией, количество и возраст вакцинированных животных, номер серии вакцины и другие сведения о препарате. Один экземпляр акта направляют главному ветврачу района.

1.9. В случае, если после вакцинации имели место какие либо осложнения, об этом необходимо сообщить Всесоюзному государственному научно-контрольному институту ветпрепаратов (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5), Казанскому ветеринарному институту имени Н. Э. Баумана (Казань, 74, Ветгородок) и биопредприятию, изготовившему вакцину, и одновременно выслать в их адрес по 3–5 невскрытых ампул (флаконов) с вакциной из серии, вызвавшей осложнения.

1.10. В хозяйствах (на фермах) и населенных пунктах, где применяется живая вакцина из штамма № 82 против бруцеллеза крупного рогатого скота, строго проводят весь комплекс ветеринарных, санитарных, дезинфекционных, организационно-хозяйственных и других мероприятий, предусмотренных действующей инструкцией по борьбе с бруцеллезом животных и планом основных мероприятий по оздоровлению животноводства от этой инфекции, утвержденным Министерством сельского хозяйства СССР.
2. Иммунизация (вакцинация) животных
2.1. Сухую живую вакцину из штамма № 82 применяют для прививки крупному рогатому скоту в неблагополучных и угрожаемых по бруцеллезу хозяйствах (фермах, стадах), в том числе племенных. Допускается прививать вакцину животным, принадлежащим населению.

Вакцину вводят животным начиная с 4-месячного возраста.

У вакцинированных животных после прививки может повышаться температура тела, а на месте введения препарата появляется горячая болезненная припухлость, которая постепенно рассасывается без осложнений.

животные плохой упитанности или больные какой-либо болезнью, а также в период вспышки в хозяйстве острого инфекционного заболевания скота (ящур, сибирская язва и др.);

стельные животные, а также животные, находящиеся на откорме;

коровы, привитые в возрасте старше 2 лет противобруцеллезной вакциной из штамма № 19;

молодняк, полученный от реагирующих при исследовании на бруцеллез коров, ц молодняк, привитый вакциной из штамма № 19 против бруцеллеза;

быки-производители в благополучных по бруцеллезу племенных хозяйствах, а также бычки, отобранные к продаже другим хозяйствам.

2.2. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, в том числе в благополучных фермах таких хозяйств, телок прививают двукратно- первый раз в 4–5-месячном возрасте, второй раз – за 2–3 месяца до осеменения.

В благополучных (угрожаемых) по бруцеллезу хозяйствах (фермах) телок вакцинируют однократно начиная с 4-месячного возраста, но не позднее чем за 2 месяца до осеменения.

2.3. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах телок в 4–5-месячном возрасте (при подсосном методе выращивания – после отъема от матерей) исследуют (РА и РСК, РДСК) на бруцеллез, реагирующих (РА в титре 50 ME и выше или положительная РСК, РДСК) удаляют, а остальных иммунизируют вакциной и содержат их на отдельной ферме (участке).

За 2–3 месяца до осеменения привитых вакциной телок исследуют (РА и РСК) на бруцеллез, реагирующих (РА в титре 100 ME и выше или положительная РСК) удаляют из стада, а остальных повторно прививают вакциной из штамма № 82,осеменяют и оставляют под наблюдением до отелов. Исследование на бруцеллез ревакцинированных перед осеменением животных проводят через 1–2 месяца после родов.

Если отелы прошли нормально и при исследовании на бруцеллез не было выявлено положительно реагирующих животных, в дальнейшем это поголовье исследуют на бруцеллез не реже 2 раз в год. При выявлении положительно реагирующих (РА в титре 100 ME и выше или положительно РСК) животных (их удаляют из стада) все поголовье исследуют па бруцеллез ежемесячно до получения двукратного подряд отрицательного результата по стаду.

При наличии в хозяйстве телок в возрасте старше 8 месяцев их исследуют на бруцеллез, реагирующих (РА в титре 50 ME и выше или положительная РСК, РДСК) удаляют, а остальных не позднее, чем за 2 месяца до осеменения вакцинируют, осеменяют и формируют в отдельное стадо. Исследование на бруцеллез привитых животных затем проводят после отелов и далее с ними поступают, как указано выше в настоящем пункте.

2.4. В благополучных (у рожаемых) по бруцеллезу хозяйствах вакцину из штамма № 82 допускается применять для иммунизации животных с профилактической целью только в случае наличия прямой угрозы заноса возбудителя болезни и заражения скота (отгонно-пастбищное содержание животных, расположение благополучных ферм вблизи от неблагополучных хозяйств и т. п.).

У телок с 4-месячного возраста берут кровь и исследуют на бруцеллез (РА и РСК, РДСК, согласно наставлениям по постановке и учету этих реакций), затем животных вакцинируют. После прививки телок исследуют на бруцеллез перед осеменением и затем через 1–2 месяца после отела. Если у вакцинированных животных были аборты, для выяснения их причины все плоды и кровь абортировавших животных направляют в ветеринарную лабораторию для исследования, а животных изолируют. При установлении поствакцинального характера абортов (выделение культуры вакцинного штамма) абортировавших животных оставляют в стаде.

2.5. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах (фермах), оздоровление которых не достигается длительное время, коров, выращенных из телок, привитых вакциной из штамма № 82 однократно в возрасте 4–8 месяцев или перед осеменением, а также коров, привитых однократно этой вакциной после отела (по мере растела), допускается ревакцинировать вакциной из штамма № 82 однократно, но не ранее чем через 2 года после первой вакцинации. При этом перед прививкой животных исследуют на бруцеллез (РА и РСК), реагирующих (РА в титре 100 ME и выше или положительная РСК) удаляют из стада, остальных ревакцинируют. Коров после ревакцинации исследуют на бруцеллез (РА и РСК) через 6 месяцев и затем через 30 дней, при необходимости исследования продолжают ежемесячно до получения двукратного подряд отрицательного результата по стаду. В дальнейшем поголовье скота проверяют на бруцеллез не реже 1 раза в год. Животных, при исследовании которых получены положительные результаты (РА в титре 100 ME и выше или положительная РСК), во всех случаях удаляют из стада.

Ревакцинацию коров вакциной из штаума № 82 проводят только с разрешения ветеринарного отдела министерства сельского хозяйства автономной республики, областного (краевого) управления сельского хозяйства или главного управления (управления) ветеринарии министерства сельского хозяйства союзной республики, не имеющей областного деления.

Примечание. Если в неблагополучном хозяйстве имеются телки случного возраста или коровы, ранее (до выхода в свет настоящего наставления) привитые однократно против бруцеллеза в возрасте 5–8 месяцев вакциной из штамма № 19, телок допускается ревакцинировать вакциной из штамма № 82 за 2–3 месяца до осеменения, а коров – после их отела (через 15–25 дней).

После ревакцинации животных исследуют на бруцеллез и в дальнейшем с ними поступают в порядке, как указано выше в настоящем пункте и в пункте 2.3 (абзацы второй, третий).

2.6. В отдельных случаях в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах вакциной из штамма № 82 прививают быков-производителей (пробников). Перед прививкой животных исследуют на бруцеллез (РА и РСК, РДСК), реагирующих удаляют и остальных прививают вакциной. После вакцинации их исследуют (РА и РСК) через 4–5 месяцев и затем каждые 30 дней до получения двукратных подряд отрицательных результатов исследований по группе животных.

источник

Вакцина предназначена для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота. В качестве антигена вакцина содержит бактериальную массу нового вакцинного штамма Brucella abortus 75/79АВ — ДЕП ВГНКИ. В состав вакцины входит также желатиновый стабилизатор. Использование новой вакцины в ветеринарной практике расширяет ассортимент средств специфической профилактики бруцеллеза и позволяет в 1,5-2 раза повысить эффективность противобруцеллезных мероприятий. 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к препаратам, применяемым для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.

Эффективность борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота во многом определяется средствами специфической профилактики данной болезни.

В настоящее время для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота применяют в основном живую противобруцеллезную вакцину из штамма B. abortus 82, содержащую антиген (живые микробные клетки) и сахарозо-желатиновый стабилизатор.

К недостаткам вакцины из штамма B.abortus 82 относятся нестабильность, обусловленная нестабильностью свойств вакцинного штамма, абортогенность, исключающая возможность иммунизации стельных животных, и низкая иммуногенность [1].

Для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота был предложен штамм B.abortus 75/79A, отличающийся от штамма 82 меньшей агглютиногенностью и отсутствием абортогенности [2]. Однако при дальнейшем изучении свойств данного штамма было установлено, что по ряду причин, в частности недостаточно высокой иммуногенности для крупного рогатого скота [1], сложности культивирования и относительно невысокой стабильности культуральных свойств, он не может быть рекомендован для изготовления противобруцеллезной вакцины.

Целью изобретения является получение слабоагглютиногенной, неабортогенной, высокоиммуногенной живой вакцины из штамма бруцелл, обладающего стабильными свойствами.

Цель достигается тем, что вакцина в качестве антигена содержит бактериальную массу штамма B.abortus 75/79AB при следующем содержании компонентов, мас./об.%: Бактериальная масса из штамма B.abortus — 10-40 г (12510 11 — 50010 11 микр.клеток) Сахароза — 6,0 — 9,0 г Желатин пищевой — 0,9 — 0,135 г Дистиллированная вода — Остальное до 100 см 3 Штамм B.abortus 75/79 AB, используемый для изготовления вакцины, получен из культуры штамма B.abortus 75/79A посредством пятикратного пассажа через организм крупного рогатого скота с последующей целенаправленной селекцией по культуральным, морфологическим, антигенным и иммуногенным свойствам.

Штамм B.abortus 75/79 AB депонирован в ВГНКИ за номером 75/79 AB-ДЕП.

Штамм характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки. Короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные поодиночке или парами, без спор и капсул. Размер 1,2 — 1,3 мкм, ширина 0,5 — 0,6 мкм.

Культурные свойства. Культура штамма хорошо растет на плотных и жидких питательных средах: мясо-пептонном печеночном глюкозоглицериновом агаре (МППГГА), МППГГА с добавлением перевара Хоттингера, МППГТБ в аэробных условиях (не требует для культивирования повышенного процентного содержания CO₂).

На МППГГА (4-5 сутки инкубирования при 37-38 o C) растет в виде круглых, выпуклых, шероховатых, с нечетко контурированным краем, прозрачных с голубовато-зеленоватым оттенком колоний диаметром 2,5 — 3,0 мм. При окрашивании раствором кристаллического фиолетового 1/2000 (по Уайт-Вилсону) 100% колоний окрашивается как RS-форма: по фиолетовому фону желтая исчерченность в виде 8-10 трещин слоя краски, расположенных в центре колонии. Культура дает положительную пробу с акрифлавином и положительную реакцию термоагглютинации.

Культура штамма растет на МППГГА, содержащем фуксин, тионин в концентрации 1:50000, натриевую соль бензилпенициллина в концентрации 5 ЕД/см 3 , эритритол — 1 мг/см 3 , и не растет на среде, содержащей 5 мкг/см 3 стрептомицина сульфат. Продуцирует H₂S(8-10 мм). Лизируется фагом Тб.

Агглютинабельные свойства. Культура штамма агглютинируется S- и R-антибруцеллезными сыворотками, А-моноспецифической сывороткой в титре 1:10 и не агглютинируется М-моноспецифической сывороткой.

Антигенные свойства. При введении культуры штамма крупному рогатому скоту (50-200 млрд.клеток) у животных вырабатываются специфические S- и R-бруцеллезные антитела, выявляемые S и R-бруцеллезными антигенами в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РДСК).

Безвредность. Штамм 75/79 АВ безвреден для лабораторных животных и крупного рогатого скота. При введении мышам 250 млн и морским свинкам 2 млрд микробных клеток не вызывает патологоанатомических изменений, характерных для бруцеллезной инфекции. При подкожном введении крупному рогатому скоту до 200 млрд микробных клеток не вызывает аборты и бруцеллезную инфекцию.

Бруцеллы штамма 75/79 АВ не мигрируют от вакцинированных животных к интактным.

Пример 1. Штамм B.abortus 75/79 АВ культивируют на плотной питательной среде или в ферментере на жидкой питательной среде. К 10-40 г бактериальной массы добавляют 90-60 см 3 (до 100 см 3 ) сахарозо-желатинового стабилизатора, содержащего 10.0% сахарозы в дистиллированной воде и 1,5% желатина, устанавливают концентрацию бакмассы, равную 12510 11 — 50010 11 микробных клеток. Готовую вакцину расфасовывают в ампулы (или флаконы) и консервируют, лиофильно высушивая.

Готовая вакцина представляет собой сухую пористую массу светло-коричневого или светло-желтого цвета, укупоренную в ампулу под вакуумом или во флаконы под азотом, хорошо растворяющуюся в физиологическом растворе.

Полученная вакцина имеет следующий компонентный состав (табл.1).

Пример 2. Полученную вакцину серий 1-3 испытывают на антигенную активность в сравнении с экспериментальной вакциной штамма B.abortus 75/79 АВ (прототип) и коммерческой вакциной из штамма B.abortus 82 (аналог). Противобруцеллезные вакцины вводят телкам в возрасте 4-5 месяцев под кожу в область задней трети шеи. Вакцину из штамма B.abortus 75/79 AB в дозах 50, 100 и 200 млрд микробных клеток, из штамма 82 и 75/79 A в дозе 100 млрд микробных клеток в объеме 5 см 3 . Каждым препаратом прививают 10-12 животных. Спустя 30,60,90,180,270 и 350 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют серологическими методами (РБП, РА, РСК с S-бруцеллезными антигенами).

Результаты испытаний антигенных свойств вакцин приведены в табл.2.

Из табл. 2 видно, что вакцина из штамма 75/79 AB имеет преимущества перед экспериментальной из штамма 75/79A и вакциной из штамма 82. Спустя три месяца после иммунизации живой вакциной из штамма 75/79 AB можно проводить исследования на бруцеллез в принятых диагностических реакциях и выявлять заразившихся бруцеллезом животных. Телки, иммунизированные вакциной штамма 75/79 A (прототип) и вакциной из штамма 82 (аналог), дольше содержали в крови антитела, улавливаемые S-бруцеллезными антигенами, что затрудняет дифференциацию иммунных животных от заразившихся и оздоровление поголовья.

Пример 3. Вакцину из штамма 75/79 AB серий 1-3 испытывали на иммуногенную активность в сравнении с вакцинами из штаммов 75/79 A и 82.

Телок в возрасте 4-6 мес иммунизируют испытуемой вакциной в дозах 50, 100, 200 млрд микробных клеток. Вакцинами из штамма 75/79 A и из штамма 82 в дозе 100 млрд микробных клеток. Вакцины вводят в объеме 5 см 3 под кожу в область задней трети шеи. Каждым препаратом иммунизируют 7-10 телок. Через 10 мес после вакцинации животных заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма Б. абортус 54М/ВГНКИ в дозе 15 млн микробных клеток. Культуру вирулентного штамма наносят на конъюнктиву обоих глаз по 7,5 млн микробных клеток в объеме 0.1 см 3 . Спустя 42-45 дней после заражения животных убивают и проводят бактериологическое исследование лимфатических узлов и внутренних органов (30-35 объектов). Критерием оценки заражения животных служит наличие бруцелл вирулентного штамма в лимфатических узлах и внутренних органах вакцинированных животных. Результаты испытания приведены в табл.3.

Из табл. 3 видно, что предложенная вакцина, содержащая антиген из штамма Б. абортус 75/79 AB, обеспечивает защиту 90-100% иммунизированных животных и по этому показателю значительно превосходит вакцинный штамм Б.абортус 75/79 A и вакцину из штамма 82.

Пример 4. Испытания абортогенности (безвредности для стельных животных) проводят на 195 коровах и 64 нетелях со стельностью от 2-х до 6 мес. Испытуемую вакцину из штамма Б абортус 75/79 AB вводят в дозе 100 млрд микробных клеток в объеме 5 см 3 под кожу в область задней трети шеи. За вакцинированными животными наблюдают в течение 7 мес. В результате испытания установлено, что у всех животных отелы прошли нормально. Испытуемая вакцина не вызывает аборты у стельных коров и может быть использована для иммунизации коров независимо от срока стельности.

Использование предложенной вакцины в ветеринарной практике позволит повысить эффективность специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и расширить ассортимент высокоэффективных биопрепаратов против данного заболевания.

Литература: 1. Апробация вакцины из штамма 75/79A Br.abortus на крупном рогатом скоте. Никифоров И.П. и др./Ветеринария, 1995, N 8, c.20-22.

2. Авторское свидетельство SU 1701743 Al.Штамм бактерий Brucella abortus, используемый для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая антиген бруцелл и водный сахарозо-желатиновый стабилизатор, отличающаяся тем, что она в качестве антигена содержит бактериальную массу штамма Brucella abortus 75/79 AB — ДЕП ВГНКИ при следующем содержании компонентов: Сахороза, г — 6,0 — 9,0 Желатин пищевой, г — 0,9 — 1,35
Бактериальная масса штамма Brucella abortus 75/79 AB — ДЕП ВГНКИ г (микр.клетки) — 10 — 40 (12510 11 — 50010 11 м.к.)
Вода дистиллированная, см 3 — До 1005

NF4A Восстановление действия патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 32-2003

источник

Бруцеллёз не только крупного, но и мелкого рогато­го скота на протяжении многих лет остается одним из самых распространённых заболеваний в Казахстане. Как предотвратить болезнь с помощью вакцинации – читайте в интервью с доктором ветеринарных наук, про­фессором, академиком НАН РК Николаем Петровичем Ивановым (на снимке).

— Почему одной из самых распространённых болез­ней среди КРС в Казахстане на протяжении многих лет остается бруцеллёз?

– Согласно данным ветери­нарной статистики, около 20% имеющегося поголовья сель­скохозяйственных животных является неблагополучным. Проблема повсеместной лик­видации бруцеллеза среди животных представляет зна­чительные трудности из-за: его широкого распростране­ния, способности возбудите­ля к обитанию в организме са­мых разнообразных видов жи­вых существ, а также, в ряде случаев, латентного (не прояв­ляя себя) течения инфекции и связанные с ним сложности диагностики и специфической профилактики заболевания.

— Первое, что нужно пред­принять с целью недопу­щения заражения скота бруцеллёзом?

-Выполнять полный ком­плекс организационно-хозяй­ственных, ветеринарно-сани­тарных и специальных ветери­нарных мероприятий. Все эти меры должны быть отражены в плане противобруцеллезных мероприятий, который дол­жен быть комплексным (воз­действовать на все три звена эпизоотической цепи), своев­ременным и реально выпол­нимым (согласно имеющим­ся финансовым и материаль­но-техническим средствам). В нем должны быть указаны мероприятия, сроки их испол­нения и ответственные лица.

— А, что нужно предпри­нять уже в случае появле­ния болезни среди крупного рогатого скота?

-При появлении инфекции нужно:

1. заменить все неблагопо­лучное поголовье здоровыми, то есть не инфицированными животными;
2. проводить регулярные (че­рез каждые 15-20 дней) диа­гностические исследования с последующим выделением и убоем выявленных больных животных;
3. применять вакцинные пре­параты с последующими, по­ствакцинальными исследова­ниями, согласно инструкции по применению вакцины.

— Какие, в данном случае, существуют виды и назна­чения вакцин?

– Существующие противо­бруцеллёзные вакцины услов­но подразделяются на следу­ющие группы, которые разли­чаются по антигенности, реак­тогенности, иммуногенности и другим признакам.

1.Агглютиногенные. Эти препараты являются иммуно­генами. Но их применение не рекомендуется для взросло­го поголовья, так как они ин­дуцируют антитела, которые в последующем не позволя­ют проводить диагностические исследования.

2.Слабоагглютиногенные. Они выгодно отличаются от первой группы, так как созда­ют возможность проводить ди­агностические исследования в относительно короткие сро­ки поствакцинального пери­ода. Одной из наиболее рас­пространённых в нашей стра­не вакцин для иммунизации против бруцеллёза крупного рогатого скота является вак­цина из штамма В.abortus 82. Отрицательная сторона этого препарата – чрезмерная реак­тогенность. В организме бере­менных животных эта вакцина вызывает аборты, что сдержи­вает её применение на стель­ном поголовье крупного рога­того скота.

3.Неагглютиногенные. Наз- ванные вакцины обладают вы­раженными провоцирующими свойствами. В организме ла­тентно больных животных они обостряют течение инфекции, то есть позволяют выявить максимальное количество ин­фицированных особей.

4.Инактивированные вак­цины. К н им о тносятся п ре­параты из агглютиногенных и неагглютиногенных штам­мов. Эти вакцины, в том чис­ле Казахского НИВИ находят­ся на стадии производствен­ных испытаний и пока не име­ют широкого практического применения.

— В каких областях Казахстана наиболее рас­пространена болезнь?

– Наибольшее число небла­гополучных пунктов и количе­ство больных животных среди КРС отмечается в северных и центральных регионах страны, а мелкий рогатый скот чаще по­ражён на юге и юго-востоке ре­спублики. В некоторых обла­стях возрастает число случаев заболевания людей.

— Что включают в себя про­тивобруцеллёзные мероприятия?

– Специальные противо­бруцеллёзные мероприятия включают своевременную и качественную диагностику, в особых случаях применение средств специфической про­филактики и антибактериаль­ных препаратов. Для выявле­ния источника инфекции, с це­лью последующей его ликви­дации, используют различные диагностические приёмы. К примеру, серологические ме­тоды и аллергическая проба базируются на иммунологиче­ских реакциях. Следует особо отметить, что иммунологиче­ская реактивность животных тесно связана с видовыми, ин­дивидуальными и возрастными особенностями организма.

Помимо этого,содержать не­вакцинированное поголовье к настоящему времени возмож­но только при отсутствии угро­зы заражения животных. В дру­гих хозяйствующих субъектах должна быть предусмотрена иммунизация молодняка (по­сле предварительного сероал­лергического исследования) и возможна повторная вакцина­ция половозрелых животных за 2-3 месяца до осеменения.

А главное, во всех случа­ях нужно использовать вакци­ны и методы их применения, разрешённые для иммуниза­ции животных на территории Республики Казахстан.

— Кто наиболее чувстви­те лен к бруцеллёзной инфекции?

– Наиболее чувствительными и восприимчивыми к бруцеллез­ной инфекции являются парно­палые, половозрелые, но от­носительно молодые особи на пике их гормональной активно­сти (половозрелые тёлки, ярки, козочки, нетели или первотель­ные и беременные животные). Ведь с возрастом реактивность организма животных снижается. Нередко, когда среди «старого» поголовья много больных, име­ющих отрицательные показа­ния диагностических реакций. Особого внимания в диагности­ческой работе, благодаря высо­кой разрешающей способности, заслуживают тест ELISA (ИФА) и полимеразо-цепная реакция (ПЦР).

— Есть ли какие-то но­вые современные мето­ды вакцинации КРС против бруцеллёза?

Уместно отметить, что в со­временных условиях особо­го внимания заслуживает так называемый «конъюнктиваль­ный» метод иммунизации. Известно, что через слизистую оболочку конъюнктивы глаза в организм могут поступать раз­личные вещества, в том чис­ле и антигены. При конъюн­ктивальном методе иммуни­зации, как показали результа­ты исследований, благодаря проникновению антигена по слёзно-носовому каналу в но­совую полость, площадь его всасывания резко увеличива­ется, что обеспечивает индук­цию иммунитета, не уступа­ющего таковому при подкож­ном методе вакцинации. При этом резко снижается период циркуляции в крови антител, улавливаемых стандартны­ми антигенами, что позволяет своевременно проводить диа­гностические исследования и, безусловно, выгодно отличает этот метод от других.

источник

УПРАВЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРИИ СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ

от 2 ноября 2015 года N 207

О ПРИМЕНЕНИИ ПРОТИВОБРУЦЕЛЛЕЗНЫХ ВАКЦИН НА ТЕРРИТОРИИ СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ

В целях выполнения требований раздела 3.2 «Профилактика и борьба с бруцеллезом сельскохозяйственных животных» Ветеринарных правил 13.3.1302-96 «Бруцеллез», инструкций по применению вакцин против бруцеллеза животных из штамма Brucella abortus 19 и инструкций по применению вакцин против бруцеллеза животных из штамма Brucella abortus 82 (далее соответственно — инструкции, вакцины) и актуализации списка хозяйствующих субъектов, расположенных на территории Ставропольского края, применяющих вакцины, приказываю:

1.1. Перечень хозяйствующих субъектов, расположенных на территории Ставропольского края, применяющих вакцины против бруцеллеза животных из штамма Brucella abortus 19 и вакцины против бруцеллеза животных из штамма Brucella abortus 82.

1.2. Схемы применения вакцин против бруцеллеза животных из штамма Brucella abortus 19 и вакцины против бруцеллеза животных из штамма Brucella abortus 82 (далее — схемы).

2. Разрешить применение хозяйствующим субъектам, расположенными на территории Ставропольского края, вакцин в профилактических целях по схемам согласно инструкций.

3. Определить, что созданным хозяйствующим субъектам, расположенным на территории Ставропольского края, применять вакцины разрешено только по решению управления ветеринарии Ставропольского края.

4. Запретить применение вакцин на поголовье сельскохозяйственных животных племенных предприятий и индивидуального сектора.

5. Определить, что при ликвидации очагов бруцеллеза решение о применении вакцин принимается управлением ветеринарии Ставропольского края в индивидуальном порядке.

6. Признать утратившими силу приказы управления ветеринарии Ставропольского края:

от 20 января 2012 года N 48 «О применении противобруцеллезных вакцин на территории Ставропольского края»;

от 13 июня 2013 года N 177 «О применении противобруцеллезных вакцин на территории Ставропольского края»;

от 09 сентября 2013 года N 268 «О применении противобруцеллезных вакцин на территории Ставропольского края».

7. Контроль за выполнением настоящего приказа возложить на первого заместителя начальника управления ветеринарии Ставропольского края Руденко А.В.

8. Настоящий приказ вступает в силу на следующий день после дня его официального опубликования.

Начальник управления ветеринарии
Ставропольского края
А.Н.ТРЕГУБОВ

СХЕМЫ ПРИМЕНЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ ИЗ ШТАММА BRUCELLA ABORTUS 19 И ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ ИЗ ШТАММА BRUCELLA ABORTUS 82

Утверждены
приказом
управления ветеринарии
Ставропольского края
от 02 ноября 2015 года N 207

Применение у крупного рогатого скота противобруцелезных вакцин из штамма 19 живой сухой и вакцины из слабо агглютиногенного штамма 82 живой сухой.

Вакциной из штамма 19 иммунизируют только телок один раз в возрасте 4 — 6 месяцев. Перец вакцинацией приводят серологическое исследование на бруцеллез.

Через 10 месяцев после первичной иммунизации телок исследуют на бруцеллез и реиммунизируют вакциной из штамма 82.

Коров-первотелок исследуют через 1 — 2 месяца после отела всего стада и реиммунизируют штаммом 82.

Ревакцинируют коров с интервалом не менее одного года, после серологического исследования на бруцеллез.

Применение у крупного рогатого скота противобруцеллезной вакцины из слабо агглютиногенного штамма 32 живой сухой.

Телок вакцинируют в 4 — 6 месячном возрасте после серологических исследований на бруцеллез.

Через 10 месяцев после иммунизации телок исследуют на бруцеллез серологически и иммунизируют вакциной из штамма 82.

Телок не иммунизированных против бруцеллеза в 4 — 6 мес. возрасте, за 2 — 4 месяца до осеменения исследуют на бруцеллез серологически, не реагирующих, вакцинируют вакциной из штамма 82.

Коров-первотелок исследуют через 1 — 2 месяца после отела всего стала и реиммунизируют штаммом 82.

Ревакцинируют коров с интервалом не менее одного года, после серологического исследования на бруцеллез.

Применение у мелкого рогатого скота противобруцеллезной вакцины из штамма 19 живой сухой.

Ярочек и козочек вакцинируют в возрасте 4 — 6 месяцев.

Овец и коз вакцинируют не позже чем за 2 месяца до осеменения. Ревакцинируют животных через 12 месяцев и далее ежегодно.

О проведении вакцинаций по каждой группе, стаду (отаре) составляется акт, я котором указывают: название и адрес владельца животных, состояние поголовья по бруцеллезу, опись животных с указанием инвентарных номеров, количество и возраст вакцинированых, все данные о вакцине.

Утвержден
приказом
управления ветеринарии
Ставропольского края
от 02 ноября 2015 года N 207

источник

Номер патента: 1725904

(51)5 А 61 К 39/10, С 12 Й 1/04 ОПИСДНИЕ ИЗОБ СТЕНК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОЙ ВАКЦИНЫ ИЗ ШТАММА 82(57) Изобретение отн биотехнологии и мож для получения бруц штамма 82. Сущност в том, что бактериал культивирования на ся на разделительнь волокнами из арома в котором создается фильтрация проводит гу в течение 6 — 10 ч. 2 инарной ьзовано цины из состоит ии после подают- полыми амидов,кг/см; ому крум О вращается в ферментер по замкнутому кругу. При этом бакмасса концентрируется в 6,7раза. В табл, 1 приведены сравнительные данные по концентрированию бакмассы Бруцелла абортус шт, 82 с использованием флокулянта Й аКМЦ и разделительных аппаратов на полых волокнах.Из табл. 1 видно, что концентрирование бакмассы с помощью использования АР сокращается в 15 — 32 раза по сравнению с использованием й аКМЦ, а основной критерий вакцины — количество доз в 1 см, полученной концентрированием с использованием флокулянта и разделительных аппаратов на полых волокнах, идентичны. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР(71) Государственный щелковский биокомбинат(56) Методы общей бактериологии в 3-х томах. М 1983, т. 1.Инструкция по изготовлению и контролю живой сухой вакцины против бруцеллезас/х животных из. шт. 19, Гув ГлавбиопромСССР, 26.08.87,Скичко Н, Д;, Павленко В. С Бондаренко и др. Производство бруцеллезной вакцины из шт. 19 и 82 в АКМИ. В кн, Научныеосновы технологии производства ветеринарно-биологических препаратов, Тезисыдок, 2-й Всесоюзной конференции — М.,1981, с, 62 — 63. Изобретение относится к ветеринарии и биологической промышленности и может быть использовано при изготовлении биологических средств специфической профилактики болезней сельскохозяйственных животных, в частности бруцеллезной вакцины штамма Бруцелла абортус 82.Цель изобретения — сокращение времени изготовления вакцины при сохранении иммуногенных свойств,П р и м е р . Бакмасса после культивирования с помощью перестальтическогонасоса из ферментера попадает на разделительный аппарат, в котором создается давление до 1 кг/см . После прохождения разделительного аппарата бакмасса возосится к ветер ет быть испол еллезной вак ь изобретения ьные суспенз жидкой среде й аппарат с тических поли давление до ся по замкнут табл.1725904 Проверка сухой живой вакцины против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма 3 Ф 82 проводилась согласно ТУ 10.19.69-89 и показала, что вакцина по сво 5 им физико-химическим и биологическим свойствам соответствовала требованиям данных ТУ, Формула изобретения 10 Способ получения бруцеллезной вакцины из штамма 82, включающий культивирование штамма на жидкой питательной среде с последующим отделением и концентрированиембакмассы,отличаю щийсятем, 15 что, с целью сохранения иммуногенныхсвойств вакцины, концентрирование проводят с помощью ультрафильтрации на полых волокнах из ароматических полиамидов в течение 6-10 ч.20 табпица 1 КоличеВремя кон» Объем ба центрации ,масс, л Во сколькораз концентр ПлощадьДР мз Дата культи г сериивирования При мер во доз1 смз именением М аКМЦ (базовый вариантМ 6.7 Конц1 22 -23,03.89 трирование массы с и 1″024 бс 2 500 500 6 сут,7 сут. 0275-0277 0294-0295 0313″0315 03.89 30 т 3 3 -4.13 -1 24 -2 6,7 6,7 6,7 4.8,04.89 .04,89 5-0337 8 сут,среднем Р на полых волокнах Концентрирование бакмассы с применени,ы,5 6 5.07.8 Микробная клетка Бруцелла абортус шт 82 при концентрации на полых волокнах физическим воздействиям не подвергается.Данные контроля вакцины, полученной концентрированием бакмассы на полых волокнах на безвредность, антигенность, приведены в табл. 2. Из табл, 2 следует, что серии вакцины, полученные методом ультрафильтрации (УФ) из шт. 82 ВМ 02-03-04-05-06, без. вредны, не вызывали гибели белых мышей в течение 10 днморских свинок в течение 20 дн, При убое морских свинок во внутренних органах видимых патологических изменений, характерных для бруцеллеза, не обнаружено. Агглютиногенный титр у морских свинок, привитых данной вакциной из шт. 82, отрицательный. Изменений вовнутренних органах, характерных для бруцеллеэных, не об- наружено

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ЩЕЛКОВСКИЙ БИОКОМБИНАТ

СКИЧКО НИКОЛАЙ ДАНИЛОВИЧ, ЗЕНОК НИКОЛАЙ ИВАНОВИЧ, МЕЛЬНИК НИКОЛАЙ ВАСИЛЬЕВИЧ, ТРОЙНИН АНАТОЛИЙ СЕРАФИМОВИЧ, МУРАШКИНА ЕЛЕНА МИХАЙЛОВНА, КАСЬКОВ АЛЕКСАНДР ВАСИЛЬЕВИЧ

. типа пассируют в течение 1 — 1,5 лет на мясопептонно-глицериновом бульоне, а в качестве мутагена используют препарат эктерицид, причем препарат 20 эктерицид вводят в концентрации от 3 до 15 оо по мере возрастания кратности пассажей.Препарат эктерицид получают из рыбьего жира путем продолжительного окисления его кислородом воздуха до получения водораство римого препарата.П р и м е р, Вирулентный туберкулезный штамм, например, Валле пассируют через каждые 10 — 12 дней в течение 1 — 1,5 лет при 38 С на мясопептонно-глицериновом бульоне Зо следующего состава, вес. оо: Пептон 0,85 — 1Глицерин 4 — 5Хлористый натрий 0,5 — 0,7Аминный азот, мг% 50 — 525 Препарат эктерицид % 3 — 15рН 7,0 — 7,2Концентрацию препарата увеличивают помере.

. При пероральном введении новорожденным поросятам одно-двухдневного возраста вакцины ТГЭ из штамма В 5 ВГНКИ выживаемость их составляет 80-85.Иммунное состояние наблюдается к 8 дню, достигая максимума к 21 дню у свиноматок и на 3 день у новорожденных поросят при введении им 100 — 10 э ТЦДе/мл. Вирус не передается при койтакте от вакцинированных невакцинированным свиньям.Штамм сохраняется в лиофилизированном состоянии при 4-8 С.оДля получения данного штамма был использован японский штамм ТО (ТаЦаща), который был адаптирован к клеткам почки плода свиньи 36 пассажей, к клеткам щитовиднойжелезы — 124 пассажа, к клеткам почки плода свиньи — 40 пассажей и клеткам почки , двух-трехдневных крольчат — 10 пас- . сажей.Для.

. Д,И. Ивановского У ГКВ3 8332Морфология штамма Н/32/5 (НИ 1) полиморфная структура, типичная для вируса гриппа.Антигенная, структура — Н 1 И 1, В перекрестной РТГА вакцинный штамм взаимодействует с антисывороткой А (Хаба 5 ровск) 1/77 (Н 1 И 1) до гомологичного титра и не реагирует с антисывороткой к вирусу А(Ленинград)134/7/57 (Н 2 И 2).Штамм Н/32/5 (Н 1 И 1) обладает высокой репродукционной активностью на развивающихся курина эмбрионах,в которых накапливается до «,5 Ч ЭИД 50/0,2 мл в течение 48 ч при 34 С.Агглютинирует эритроциты кур в раз ведении 1:256.Репродукционная активность при 40 С снижена на 7,753 ИД 50/0,2 млцо сравнению с репродукцией при 32 С,Проявляет стабильность биологи О ческих признаков в течение 5 пасса» .жей на.

. них микроорганизмы высвобоздаются. Полученной вэвесью; микробов, собранных из 3-4 флаконов (первый пассаж субкультуры), инфицируют свежие макрофаги для получения следующего пассажа. Всего проводят20 пассажей.Параллельно проводят пассирование этойже субкультуры У. резсз Е 7 на морских свинках массой 250-300 г,39 2Двусуточную культуру, выращенную при28 С на агаре Хоттннгера (рН. 7,2),вводят подкозно в дозе 5 10 микробных клеток 2-3 морским свинкам, Таккак животные от указанных доз не погибают, нх забивают на 5-7-е сутки,делают высевы из места введения культуры, лимфатического узла, печени, «селезенки на соответствующие питательные среды и полученной субкультурой вновь заражают животных. Всегопроводят 20 пассажей.Иммуногенность исходных .и.

. сут 50% взятых в опыт животных от 200 вирулентного штамма.Иммуногенность субкультур 1.резс 1 з ЕЧ 76, инкубированных в сыворотке крови человека, по сравнению с исходной культурой повысилась в 25,1 раз.П р и м е р 2, Аналогично примеру 1 вносят в сыворотку культуру в количестве 110 ф м.кл./мп, время инкубации 18 ч. Иммуногенность инкубированной в сыворотке субкультуры по сравнению с исходной повышается в 29,1 раза.П р и м е р 3. Аналогично пр 2 инкубацию субкультуры в сывор проводят 24 ч. Иммуногенность инкуби1520098 лагаемый способ не имеет ограниченийв количестве исследуемых культур,прост в исполнении и легко воспроизводим. Формула изобретения СубкультурыТ.ревсхв ЕЧ 76 Посевнаядоза всыворотку,м.кл/мп Время инкубации в сыворотке,ч ш 135.

источник

Автор: Шубина Е. А., технолог, кандидат биологических наук, ФГУП «Щелковский биокомбинат»

Опубликовано: 14 февраля 2011

Бруцеллез (Brucellosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечения, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства.

Сообщение об этом заболевании, по данным Хаджеса (1897), встречается уже у древнегреческого врача Гиппократа. Первое научное описание бруцеллеза было сделано в 1861 году английским военным врачом Мэрстоном. Широкое распространение среди людей отмечалось в 18 и 19 веках в странах, расположенных в бассейне Средиземного моря.

Изучая причины мальтийской лихорадки, английский врач Д. Брюс в 1886 – 1887 гг. установил, что виновником ее является специфический микрококк, названный им Micrococcus melitensis. Дальнейшие исследования показали, что источником возбудителя мальтийской лихорадки являются козы, пораженные инфекцией, а причиной заражения людей — потребление молока от таких коз. Несколько позже Micrococcus melitensis был выделен у овец.

В1897 г. датские ученые Банг и Стриболд установили, что массовые аборты у коров вызывает микроорганизм, названные B. abortus bovis. В 1914 г. Траум обнаружил очень сходный микроорганизм, названный Br. abortus suis, при массовых абортах у свиней.

Для диагностики бруцеллеза в 1897 г. Райтом была предложена серологическая реакция агглютинации, а в 1922 г. Берне разработал внутрикожную аллергическую пробу, облегчающую распознавание болезни.

Долгое время мальтийская лихорадка у людей и массовые аборты у домашних животных считались самостоятельными заболеваниями. В 1918 – 1920 гг. Ивенс, Мейер и Фезье, изучая биологические свойства возбудителя мальтийской лихорадки и массовых абортов у крупного рогатого скота, обнаружили их чрезвычайную близость. Эти исследования явились основанием объединить указанных возбудителей, в том числе и возбудителя массовых абортов у свиней, в одну родовую группу под наименованием Brucella (в честь Брюса), а вызываемые ими заболевания именовать бруцеллезом.

В России начало изучения бруцеллеза было положено работами Е. И. Марциновского (1911), но детальному изучению заболевание подверглось в различных местностях СССР лишь с 1935 г. Большой вклад в изучение бруцеллеза сельскохозяйственных животных внесли отечественные ученые: С. Н. Вышелесский, П. Ф. Здродовский, П. А. Вершилова, М. К. Юсковец, Е. С. Орлов, Р. А. Цион, А. П. Бессонов и др. Были всесторонне изучены биологические свойства возбудителя, усовершенствованы методы диагностики, показаны значение в борьбе с бруцеллезом вакцинальной профилактики и пути ее совершенствования.

Клинические признаки бруцеллеза у крупного рогатого скота

Длительность инкубационного периода 2 – 3 недели. Первым показателем развившегося инфекционного процесса служит появление в крови инфицированных животных агглютининов в постепенно нарастающих титрах.

У коров основным клиническим признаком бруцеллеза является аборт и реже рождение нежизнеспособного приплода. Коровы, заразившиеся до покрытия, в большинстве случаев приносят нормальный приплод. Аборт чаще всего происходит на 5 – 8-м месяце. За 1 – 2 дня до наступления аборта у коров отмечается припухание наружных половых органов, выделение из влагалища бесцветной или буроватой жидкости и набухание вымени. После аборта происходит задержка последа и развивается эндометрит, сопровождающийся обильными слизисто-гнойными или гнойно-фибринозными выделениями. При тяжело протекающем эндометрите повышается температура тела, снижаются удои, отмечается потеря веса, убыстряется СОЭ; умеренный лейкоцитоз. Эндометритам нередко сопутствуют серозные или серозно-катаральные маститы. В процессе могут вовлекаться яичники и фаллопиевы трубы, что приводит к нарушению полового цикла и временному или стойкому бесплодию.

У отдельных животных в связи с абортом или независимо от него можно наблюдать развитие серозных бурситов или серофибринозных артритов. Последние в большинстве случаев возникают в суставах передних конечностей — запястном, путовом, коленном, локтевом. У быков бруцеллез, хотя и редко, сопровождается развитием орхитов и эпидидимитов.

Лабораторная диагностика бруцеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований. Бактериологическое исследование в основном применяют при первичной постановке диагноза на бруцеллез в ранее благополучных хозяйствах.

В лабораторию направляются пробы крови (сыворотки) для серологического исследования, абортивный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей или желудок плода, кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое животных берут паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пораженные суставы, у самцов — семенники. Объектом исследования могут быть молочные продукты (брынза, сыр, масло), объекты внешней среды.

При массовых диагностических исследованиях ставят пробирочную РА, роз бенгал пробу (РА на стекле), РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком (КР). Диагностикумы для этих исследований, а также бруцеллин ВИЭВ для аллергической диагностики готовятся на Щелковском биокомбинате.

Для специфической профилактики бруцеллеза ФГУП «Щелковский биокомбинат» выпускает живые сухие вакцины из штамма B. abortus 19, 82 и 75/79-АВ; инактивированную адъювант — вакцину из штамма B. abortus КВ 17/100.

По данным К. В. Шумилова до 1952 года борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота в нашей стране сводилась к проведению диагностических исследований и удалению из стад больных животных, без применения противобруцеллезных вакцин. В связи с осложнением эпизоотической ситуации в 1953 году в систему противобруцеллезных мероприятий была включена иммунизация животных вакциной из штамма B. abortus 19.

Вакцину из штамма B. abortus 19 применяли до 1970 года. За 20 лет применения вакцины многие хозяйства, даже области, были оздоровлены от болезни. Однако в регионах с широким распространением бруцеллеза эффективность оздоровительных мероприятий оказалась низкой. В первую очередь, это было обусловлено высокой агглютиногенностью вакцины. Агглютинины и комплементсвязывающие антитела, вырабатывающиеся в ответ на введение вакцины, сохраняются в организме животных до 5 – 8 лет и затрудняют дифференциацию иммунизированных животных от больных бруцеллезом.

С 1971 по 1974 год вакцину из штамма B. abortus 19 использовали только на телках 5 – 8 месячного возраста. С 1974 года и по настоящее время в России в комплексе противобруцеллезных мероприятий применяются вакцины из штаммов B. abortus 82 и 19. Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма № 82 отличается от вакцины из штамма 19 слабым серологическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологических реакций дифференцировать вакцинированных животных.

За 30 лет работы с применением вакцины из штамма B. abortus 82 и смены пяти поколений коров к 2004 году (К. В. Шумилов) количество неблагополучных по бруцеллезу пунктов и заболевших животных значительно сократилось.

Сухая живая вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B. abortus 75/79-АВ разработана сотрудниками ВГНКИ и Алтайской НИВС с использованием культуры штамма 75/79, выделенного от коровы, ранее иммунизированной вакциной из штамма B. abortus 82. После многократных пассажей выделенного штамма через организм морских свинок и телок и целенаправленной селекции на питательных средах, был получен новый вакцинный штамм 75/79-АВ. Вакцины не обладает абортогенными свойствами, что дает возможность проводить иммунизацию маточного поголовья независимо от сроков стельности. Вакцина является слабоагглютиногенной; агглютинины и комплементсвязывающие антитела регистрируются у привитых животных в течение трех месяцев после иммунизации, что делает возможным их исследование по истечении указанного срока. У животных, иммунизированных вакциной, выраженный иммунитет сохраняется в течение года, что позволяет за указанный срок оздоравливать неблагополучные хозяйства от бруцеллеза.

Значительный интерес для практики представляет адъювант-вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, сконструированная во ВГНКИ. Вакцина представляет собой эмульсию типа «вода в масле», состоящую из инактивированной культуры штамма B. abortus КВ 17/100 и масляного адъюванта.

Штамм B. abortus КВ 17/100, находящийся в R-форме, получен путем целенаправленной селекции по культуральным, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам из вакцинного штамма B. abortus 104М, находящегося в S-форме. Адъювант-вакцина не индуцирует синтез S-бруцеллезных антител в диагностических титрах у животных, не сенсибилизированных бруцеллами. Адъювант-вакцина индуцирует синтез S-бруцеллезных антител у крупного рогатого скота с латентной формой бруцеллеза, что позволяет за счет быстрого удаления из стад таких животных, ускорить оздоровление хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу.

Адъювант-вакцина не абортогенна и может быть использована для иммунизации маточного поголовья крупного рогатого скота независимо от сроков стельности.

источник

Штамм brucella abortus уф-1 для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии. Вакцинный штамм Brucella abortus УФ-1 используется для приготовления биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ФГУ «ФЦТРБ» под регистрационным номером 289. Штамм имеет низкую остаточную вирулентность и высокую иммуногенность. 3 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии.

Известен штамм Brucella abortus 82 и 82 ПЧ, используемые при изготовлении сухой живой бруцеллезной вакцины для иммунизации крупного рогатого скота (1).

Недостатками известного штамма Brucella abortus 82 являются высокая остаточная вирулентность и абортогенные свойства при вакцинации.

Целью изобретения является штамм Brucella abortus, не обладающий абортогенными свойствами при использовании его в качестве вакцины для иммунизации тельных коров и обладающий высокой иммуногенностью

Штамм Brucella abortus УФ-1 (чувствительный к эритритолу, получен и шт.19 воздействием ультрафиолетовых лучей и последующим отбором на селективной питательной среде) имеет следующие морфологические и физиологические характеристики. Клетки представляют собой неподвижные овальные коккобактерии размером от 0,3 до 0,5 мкм, спор и капсул не образуют, в мазках располагаются отдельно, попарно или в виде цепочек из 2-3 клеток. Бактерии красятся по Граму отрицательно, по Козловскому — в красный цвет.

Штамм является факультативным аэробом. Хорошо растет на мартеновском агаре с переваром Хоттингера и пептонно-печеночном глюкозо-глицериновом агаре и бульоне. На искусственных питательных средах рост появляется на 2-3 сутки и проявляется в жидких питательных средах в виде мути и иногда с образованием пристеночного кольца и на плотных питательных средах — виде однородных колоний величиной от 1,5 до 2 мкм в диаметре. При визуальном осмотре под малым увеличением микроскопа окрашенные по методу Уайт-Вилсона 3-4-суточные колонии имеют фиолетовую поверхность и фиолетовый ободок. Популяции представлены из SR-колоний.

Дифференциальные среды. Brucella abortus УФ-1 растет на среде с фуксином 1:25000. Растет в синтетической среде следующего состава: фосфатный буфер 1/15М, рН 7,4-1,0 л, сернокислый магний — 0,1 г/л, железо-лимоннокислое закисное 50 мг/л, L-цистерн 50 мг/л, L-глутаминовая кислота — 100 мг/л, DL-лейцин — 100 мг/л, 1-гистидин — 100 мг/л, 1-цистин 50 мг/л, рибофлавин, тиамин, биотин, патентенат кальция по 2 мг/л. В отличие от штамма Brucella abortus 82 не растет на средах с тионином, пенициллином в дозе 5 ед./мл среды и эритритолом в концентрации 1 мг/л.

При росте на пептонно-печеночном агаре образует сероводород, проявляет уреазную активность.

Агглютинирует с монорецепторной М-сывороткой в S- и R-специфических бруцеллезных сыворотках; в 0,9% раствора хлористого натрия рН 7,0 образует гомогенную суспензию.

Дает слабо положительную термоагглютинацию, положительную пробу в растворе трипафлавина.

При подкожном заражении 1-5 млрд взвесью Brucella abortus УФ-1 морские свинки в течение 6 месяцев не имели клинических признаков заболевания. Культура штамма вызывает умеренное обсеменение морских свинок в течение 1-2 мес. Минимальная инфицирующая доза Brucella abortus УФ-1 для морских свинок находится в пределах 10000 микробных клеток.

Элиминируется из организма морских свинок после подкожной инъекции в дозах 1-2 млрд микробных клеток через 2 месяца. Иммуногенность для морских свинок в дозе 2-4 млрд микробных клеток составляет не менее 70%, а у штамма 82 ПЧ — только 50%.

Сыворотки крови, взятые от морских свинок, через месяц после введения препарата в реакции агглютинации со стандартным S-антигеном отрицательны. Лишь некоторые из них дают положительные реакции в титре 10-20 ME, а затем утрачивают эти показатели в короткие сроки. Телята в возрасте 6-8 месяцев, иммунизированные вакциной из штамма Brucella abortus УФ-1, через месяц реагируют отрицательно. Через 5 месяцев все подопытные животные дают отрицательные показатели.

Абортогенные свойства штамма Brucella abortus УФ-1 изучали на 22 коровах, находившихся в различной стадии беременности. В течение 6 месяцев после прививки у опытных животных прошли нормальные отелы. В отличие от штамма Brucella abortus 82 аборты не отмечались.

У морских свинок, привитых штаммом УФ-1 в дозе 2 млрд м.к., формируется длительный и стойкий иммунитет. Через 3 месяца 85% морских свинок устойчивы к контрольному заражению в дозе (10 МИД) вирулентным штаммом 54, а через 5 месяцев 66,6% животных. Штамм Brucella abortus УФ-1 обладает низкой остаточной вирулентностью и лишен абортогенных свойств.

У крупного рогатого скота через два месяца после введения штамма антител в диагностических титрах не обнаруживаются. Через 5 месяцев все подопытные животные дают отрицательные показатели.

Полученный штамм обладает низкой остаточной вирулентностью и лишен абортогенных свойств.

Пример 1. Изготовление вакцины. Для изготовления вакцины против бруцеллеза штамм УФ-1 культивировали на печеночно-пептонном, глюкозо (1%) — глицериновом (2%) агаре (рН 7,2) в течение 72 часов при 37°С. Затем бактериальную массу смывали с поверхности питательного агара со средой высушивания следующего состава: сахароза — 5%, желатин — 1,5%, рН 6,6-7,0, разводили этой средой до конечной концентрации 200 млрд/мл, разливали в ампулы по 5 мл и лиофилизировали в аппарате «Lozanna».

По окончании лиофилизации ампулы с вакциной запаивали под вакуумом. Сохранность бруцелл при этих условиях лиофилизации была 75±5% при остаточной влажности 1,5-2%. Количество живых клеток определяли методом посева на ППГГА до и после лиофилизации препарата.

Пример 2. Имунногенность полученного вакцинного препарата определяли на морских свинках. Для этого лиофилизированную биомассу разводили до конечной концентрации 2 млрд микробных клеток разбавителем сухой живой вакцины (авторское свидетельство №1638855 от 30 октября 1989 г.).

Вакцину вводили подкожно в области внутренней поверхности правого бедра в дозе 1 мл. Контрольной группе морских свинок инициировали физиологический раствор хлористого натрия в той же дозе. Через 3 месяца опытных и контрольных групп морских свинок заражали культурой вирулентного штамма Brucella abortus-54 в дозе 50 (10 минимальных инфицирующих доз микробных клеток). Через месяц после заражения морских свинок усыпляли эфиром и определяли индекс инфицированности и количество иммунных животных. Опыты были повторены 5 раз с использованием 100 морских свинок. Количество иммунных морских свинок составляло 88,3±8,1% при 100%-ном инфицировании контрольных животных с индексом инфицированности 72.

Пример 3. В другой серии опытов определяли иммуногенность вакцины на крупном рогатом скоте.

Опыты проводили на трех группах крупного рогатого скота: 1 группа — 5 голов, привили суспензией бруцелл штамма УФ-1, 2 группа — 3 головы, иммунизировали вакциной из штамма 82, 3 группа — 2 головы, вводили вакцину из штамма 19. Вакцины штамма 19 и 82 использовали согласно Наставления по их применению. Для изготовления вакцины бактериальную массу бруцелл штамма УФ-1 получали из печеночно-пептонном глюкозо (1%) глицериновом (2%) агаре (ППГГА). Бактерии смывали через 2,5 суток культивирования при 37±0,5°С стерильным физиологическим раствором хлористого натрия, рН 7,1. Вакцину готовили в концентрации 20 млрд м.к./см 3 . Этой суспензией вакцинировали крупный рогатый скот. Доза 5 см 3 . Все препараты вводили подкожно в область верхней трети шеи.

В первой группе из 5 животных 4 были стельными и одна телка бесплодной, во второй и третьей группах все животные — стельные.

До вакцинации всех животных двукратно с интервалом 7 дней исследовали серологически на бруцеллез.

Через 6 месяцев после вакцинации всех 3 групп и группу непривитых коров заражали конъюктивально вирулентной культурой штамма 54 в дозе 40 МИД. Предварительно культуру вирулентного штамма оттитровали заражением аналогичного поголовья крупного рогатого скота. Через 40 дней после заражения опытных и контрольных животных убивали и исследовали бактериологически. Исследования производили из лимфоузлов (подчелюстные, заглоточные, околоушные, предлопаточные, надвымянные, крестцовые, брыжеечные), печени, селезенки, почек, матки, костного мозга на ППГГА, ППГГБ и эритрит-агар. Посевы инкубировали в термостате в течение 30 дней. По количеству выделенных культур определяли индекс инфицированности (И.И.) и процент иммунных животных по группам.

В первые дни после вакцинации у всех животных наблюдалось повышение температуры на 0,5-2,0°С, учащение пульса на 5-10 ударов/мин и дыхания на 4-8 движения в минуту. Эти показатели приходили к норме на 5-6 день после вакцинации.

На месте инъекции вакцин образовалась упругая, болезненная припухлость, размеры которой достигали максимума на 3-4 день после прививки и составили в среднем 5×6 см. Эта местная реакция полностью угасала через 25-28 дней после вакцинации.

Иммунологическая перестройка организма животных после вакцинации сопровождалась усилением фагоцитарной активности лейкоцитов.

После иммунизации телок вакциной из штамма бруцелл УФ-1 агглютинины в сыворотках крови в РА обнаруживались в титрах 1:40-1:80, а с вакциной из штамма 82 — в титрах 1:160. После иммунизации вакцин из штамма 19 титры антител достигли 1:640 и более. Максимальное содержание агглютининов в сыворотках крови отмечалось к 15 дню после вакцинации, затем их уровень постепенно снижался. Через 120-150 дней у коров, привитых штаммами УФ-1 и 82, агглютинины не обнаруживались, тогда как у коров, вакцинированных штаммом 19, они выделялись в титрах 1:320 даже через 180 дней.

Розбенгал-проба (РБП) и РСК была положительной у большинства привитых SR штаммами (УФ-1, 82) в течение первых 45 дней после вакцинации. У всех животных этих групп РБП стала отрицательной к 60 дню, тогда как у коров, привитых штаммом 19-0, так же как и РСК, она оставалась положительной в течение всего срока наблюдения (6 месяцев), Комплементсвязывающие антитела у коров, привитых штаммом УФ-1 и 82, уже не выделялись через 60 дней после вакцинации.

У всех коров, привитых штаммами УФ-1 и 19, беременность и роды проходили без осложнений. В группе животных, вакцинированных штаммом 82, одна корова №1-абортировала (возраст плода 7,5 мес), а у другой — (№9) после родов было задержание последа. Из абортированного плода коровы №1 и истечений матки были выделены культуры вакцинного штамма 82. У коровы №9 при бактериологических исследованиях выделений матки культуры вакцинного штамма не обнаруживали из-за пророста посторонней микрофлорой. Однако при радиоиммунологическом анализе истечений из матки была получена положительная реакция.

У коров №19, привитой вакциной из штамма 82, стельность протекала без осложнений в течение всего срока наблюдения. Телята, родившиеся от всех вакцинированных коров, развивались нормально.

В результате определения устойчивости животных конъюнктивальному заражению установили, что у непривитых коров происходило интенсивное расселение бруцелл штамма 54. При этом у всех трех животных наблюдалась генерализованная форма бруцеллеза (И.И. — 60,2), тогда как у всех вакцинированных групп животных проявилась более высокая устойчивость. В частности, в группе коров, привитых культурой штамма УФ-1, из 5 животных, иммунными были 3 (60%). В отличие от непривитых животных у вакцинированных коров, заразившихся бруцеллами, генерализация процесса не происходила и бруцеллы выделялись лишь из региональных лимфатических узлов (И.И. — 14,3).

Из трех коров, привитых штаммом 82, заразилась одна (И.И.-7,0). Из двух коров, вакцинированных штаммом 19, у одной отмечался прорыв иммунитета (И.И.-3,4).

Результаты исследований по определению иммуногенности лабораторных образцов вакцин из штамма УФ-1 в зависимости от сроков хранения приведены в таблице 1.