Антитела к возбудителю бруцеллеза рпга

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

В норме антитела к возбудителю бруцеллёза в крови отсутствуют. Диагностический титр при реакции агглютинации — 1:160 и выше.

Возбудители бруцеллёза — бруцеллы, мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии. При постановке диагноза бруцеллёза полученные клинико-эпидемиологические данные необходимо подтверждать лабораторно. С этой целью используют бактериологический и серологический методы исследования. При остром бруцеллёзе положительный результат исследования гемокультуры получают в 10-30% случаев (в 62-90%, если возбудитель — Brucella melitensis, в 5-15%, если — Brucella abortus). Культура ликвора бывает положительной у 45% пациентов с менингитом. При посевах крови, костного мозга, мочи культуру бруцелл можно получить через 5-10 сут, а в части случаев — через 20-30 сут. В связи с этим для диагностики бруцеллёза широкое распространение получили серологические методы.

Самым надёжным серологическим тестом определения антител к возбудителю бруцеллёза в сыворотке крои служит стандартный тест пробирочной агглютинации (реакция Райта), с помощью него определяют содержание антител, реагирующих главным образом с липополисахаридными антигенами бруцелл. Увеличение титров антител в 4 раза и более в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1-4 нед, позволяет идентифицировать этиологический фактор заболевания. У большинства больных титры специфических антител повышаются на 3-5-й день от начала заболевания. Достоверным считают титр антител не менее 1:160 с последующим его нарастанием. Повышенный титр антител выявляют у 97% больных в первые 3 нед заболевания. Наиболее высокий титр антител отмечают обычно через 1-2 мес от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться. Стандартный тест пробирочной агглютинации выявляет антитела к B. abortus, B. suis, B. melitensis, но не к B. canis. Повышенный титр антител может сохраняться у 5-7% пациентов в течение 2 лет после перенесённой инфекции. Поэтому реакцию Райта нельзя использовать для дифференциальной диагностики бруцеллёза с другими инфекционными заболеваниями при наличии в анамнезе бруцеллёза в течение 2 последних лет. Причиной ложноположительных результатов могут быть проведение кожной пробы на бруцеллёз, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, иерсиниями, Francisella tularensis. В части случаев возможны ложноотрицательные результаты реакции агглютинации у больных бруцеллёзом, что объясняется эффектом прозоны, или так называемым блокированием антител. При хронических локализованных формах бруцеллёза титры могут быть отрицательными или ниже 1:160. На фоне проводимого лечения титры антител класса IgG быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. При рецидивах уровень антител IgG снова повышается. Наличие однократного повышения титра антител IgG более 1:160 — надёжное объективное указание на текущую или недавно перенесённую инфекцию. После лечения и выписки больного из стационара рекомендуют проведение серологических исследований в течение первого года через 1, 2, 3, 6, 9 и 12 мес, а в течение второго года — ежеквартально.

РПГА более чувствительна и специфична для обнаружения бруцеллёзных антител в сыворотке крови. Нередко гемагглютинины выявляют в тех случаях, когда реакция агглютинации даёт отрицательный или сомнительный результат.

РСК позволяет выявлять комплементсвязывающие антитела к бруцеллам, появляющиеся в крови позже агглютининов. Максимальные титры антител в РСК регистрируют к 4-му месяцу заболевания, в дальнейшем их титр снижается, но в небольшом количестве их обнаруживают в течение 1 года. Существенных преимуществ РСК по сравнению с реакцией агглютинации не имеет.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9]

источник

Бруцеллез – это заразно и хроническая бактериальная болезнь, который также известен как болезнь Банга, каменная лихорадка, мальтийская лихорадка, лихорадка Рио-гранде.

Подтверждение бруцеллеза выполняется с помощью определения уровня специфических антител IgG, IgM и IgA. Наличие соответствующего класса антител позволяет дифференцировать свежую или давно перенесенную инфекцию бактерией Brucella.

Brucella – это грамотрицательные неподвижные бактерии, которые являются внутриклеточными паразитами животных. Люди заражаются ими через контакт с инфицированными животными, с их фекалиями, а также через пищу.

Бруцеллез начинается с лихорадки, затем появляется увеличение печени и селезенки, а также лимфатических узлов. Некоторые больные излечиваются силами иммунитета, но и у других болезнь становится хронической. Тогда нападению бактерий подвергся различные внутренние органы.

Для постановки диагноза необходимо обнаружение возбудителя или реакции антител в спинномозговой жидкости или сыворотке крови.

Метод ИФА используется для дифференциации острой и хронической формы бруцеллеза. Исследование также полезно при поиске антител в плазме и сыворотке крови. Также выполнить определение отдельных классов иммуноглобулинов, чтобы определить наличие антигена и определить степень тяжести заболевания. Исследование можно выполнить также в образце спинномозговой жидкости, но это используется реже.

Микротитрационный планшет, покрытый антигенами, добавляют в пробу крови испытуемого. Если в ней есть антитела бруцеллеза для данного антигена, загруженный материал соединяется с антигеном. Затем жидкий материал, а антитела IgG, IgA или IgM бруцеллеза, связанные с ферментом, вступают в реакцию с комплексом антигена.

Избыток конъюгата промывают и добавляют соответствующий субстрат, который вступает в реакцию с сопряженным ферментом. В результате создается красочный продукт. Концентрация антитела пропорциональна интенсивности окраски.

• Антитела IgM. Положительный результат составляет более 20 ед/мл. Результат пограничный – 15-20 ед/мл. Отрицательный результат в случае IgM-антител составляет менее 15 ед/мл.
• Антитела IgG. Положительный результат составляет более 30 ед/мл. Результат пограничный – 20-30 ед/мл. Отрицательный результат составляет менее 20 ед/мл.
• Антитела IgA. Положительный результат составляет более 15 ед/мл. Результат пограничный – 10-15 ед/мл. А отрицательный результат составляет менее 10 ед/мл.

В случае пограничных результатов, исследование должно быть повторено через неделю или две недели позже.

В случае заражения бактерией Brucella сначала появляются антитела IgM бруцеллеза, а только через некоторое время антитела IgG.

Диагноз острого бруцеллеза имеет место, когда исследование выявило антитела IgM, IgG и IgA или только IgM.

Если было применено лечение, в течение 2 — 4 месяцев концентрация IgG, как правило, значительно уменьшается.

Аналогично, концентрация IgM заметно снижается в течение 2-3 месяцев после заражения. В случае хронического бруцеллеза особое значение имеют антитела IgG и IgA. Они свидетельствуют также о давно перенесенном заражении.

Бруцеллез — инфекционно-аллергическое заболевание, возбудителями которого являются бруцеллы. Заболевание имеет довольно обширную симптоматику, но особенно часто оно сопровождается нарушением функций опорно-двигательной, нервной систем, сбоями в работе сердца, развивающихся на фоне общей интоксикации организма.

Пути заражения бруцеллёзом

Возбудителями бруцеллеза являются многоклеточные организмы, для развития которых необходим постоянный доступ кислорода и при этом большая концентрация углекислого газа. Заражение происходит независимо от возраста и пола, попадание хотя бы десяти микробных тел способно вызвать бруцеллез.

Заразиться человек может от домашних животных (коз, свиней, коров, собак). Бруцеллы проникают организм бруцеллы при попадании на слизистые или пораженные участки тела околоплодной жидкости при ягнении или контакте с новорожденными. Также бруцеллезом часто заражаются при работе с инфицированным мясом или при употреблении продуктов из непастеризованного молока.

Бруцеллез у человека – симптомы

На начальном этапе заболевания в период первично-латентной формы бруцеллез протекает практически бессимптомно. Изменения в организме наблюдаются после истечения инкубационного периода, чья продолжительность может составлять от одной недели до пяти. После чего инфекция переходит в остросептическую форму. На этой стадии бруцеллез можно распознать по следующим симптомам:

• лихорадка, сопровождающаяся высокой температурой тела, которая иногда доходит до 40 градусов,
• озноб с повышенным потоотделением,
• усталость, разбитость, головная боль, боль в мышцах.

Поскольку интоксикация организма умеренна, то состояние больного человека считается вполне удовлетворительным. Серьезных изменений в работе внутренних органов не происходит, потому это часто затрудняет диагностику бруцеллеза.

Хронический бруцеллез характеризуется рецидивирующим течением. Проявления интоксикации (температура и озноб) становятся менее выраженными. Обострения болезни чередуются с ремиссиями, которые могут длиться от одного до двух месяцев. Главными симптомами бруцеллеза являются поражения внутренних органов:

• нарушение работы функций нервной системы происходит в виде межреберной невралгии, радикулитов, вегетативно-сосудистая дистония, развитие неврозов,
• наблюдаются урогенитальные патологии, проявляющиеся у мужчин в виде сальпингитов, орхитов, эндометритов, а у женщин в виде сбоя менструального цикла, развитие бесплодия, преждевременные роды.

Спустя какое-то время инфекция теряет свою активность, однако оставляет непоправимые изменения в опорно-двигательной системе.

При обнаружении признаков заболевания для постановки диагноза, кроме анамнеза, необходимо провести некоторые лабораторные исследования. Для этого человеку необходимо сдать анализы на бруцеллез, включающие три вида исследования:

• бактериологическое,
• серологическое,
• аллергологическое.

При бактериологическом анализе на бруцеллез кровь больного изучается на наличие в нем бруцелл. Серологическое исследование изучает кровь на реакцию Райта-Семпла. При аллергологическом методе под кожу вводят бруциллин, и по размерам отека оценивают результат.

Лечение инфекции на латентной стадии состоит в общеукрепляющих процедурах в назначении отдыха и соответствующего режима труда. При легкой степени заболевания больных не изолируют.

Лечение антибиотиками назначают больным при остросептической форме бруцеллеза. При устранении выраженных проявлений проводят вакцинацию.

На хронической стадии лечение имеет общеукрепляющее направление, которое сочетают с вакцинотерапией. Дополнительно больным назначают прохождение физиотерапии.

Биоматериал: Сыворотка крови

Срок выполнения (в лаборатории): 3 р.д. *

Бруцеллез — инфекционное заболевание, склонное к хроническому течению, характеризуется поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, половой и других систем. Относится к группе зоонозов. Возбудитель бруцеллеза — бруцеллы — мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии. При постановке диагноза бруцеллеза полученные клинико-эпидемиологические данные должны быть подтверждены лабораторно. С этой целью используются бактериологический и серологический методы исследования. При остром бруцеллезе положительный результат исследования гемокультуры получают в 10-30% случаев (в 62-90%, если возбудитель B. melitensis и в 5-15%, если B. abortus). Культура СМЖ бывает положительной у 45% пациентов с менингитом. При посевах крови, костного мозга, мочи рост чистой культуры бруцелл можно получить через 5-10 суток, а в ряде случаев через 20-30 суток. В связи с этим для диагностики бруцеллеза широкое распространение получили серологические методы.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую не минеральную и не газированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются.

Результат исследования – качественный.

Референсные значения: не обнаружено

Оценка результатов исследования

Для определения антител к возбудителю бруцеллеза в сыворотке крови используется РПГА, посредством которой определяют уровень антител, реагирующих главным образом с липополисахаридными антигенами бруцелл. У большинства больных титры специфических антител в крови повышаются на 3-5-й день от начала заболевания.

При однократном исследовании диагностически значимым титром является 1:160 и выше. Если в первом анализе титр ниже, то необходимо через 7-12 дней взять повторную пробу. Увеличение титров антител в четыре и более раз в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1-4 недели, позволяет идентифицировать этиологический фактор заболевания. Повышенный титр антител выявляется у 97 % больных в первые 3 недели заболевания. Наиболее высокий титр антител наблюдают обычно через 1-2 месяца от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться.

РПГА выявляет антитела к B. abortus, B. suis, B. melitensis, но не к B. canis. Повышенный титр антител может сохраняться у 5-7 % пациентов в течение 2-х лет после перенесенной инфекции. Поэтому метод РПГА не может быть использован для дифференциальной диагностики бруцеллеза с другими инфекционными заболеваниями, при наличии в анамнезе бруцеллеза в течение 2-х последних лет.

Причиной ложноположительных результатов могут служить проведение кожной пробы на бруцеллез, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, иерсиниями, Francisella tularensis. В ряде случаев могут отмечаться ложноотрицательные результаты РПГА у больных бруцеллезом, что объясняется эффектом прозоны или так называемым блокированием антител. При хронических локализованных формах бруцеллеза титры могут быть отрицательными или ниже 1:160. На фоне проводимого лечения титры антител быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. При рецидивах уровень антител снова повышается. Наличие однократного повышения титра антител > 1:160 является надежным объективным указанием на текущую или имевшую недавно место инфекцию. После лечения и выписки больного из стационара рекомендуется проведение серологических исследований в течение первого года через 1, 2, 3, 6, 9, 12 месяцев, а в течение второго года – ежеквартально.

Если при первом исследовании уровень антител ниже или антитела не определяются необходимо исследовать парные сыворотки. При исследовании в парных сыворотках для подтверждения диагноза необходимо исследовать кровь с интервалом в 10-14 дней.

• Brucella melitensis, которая паразитирует в организме мелкого рогатого скота,
• B. Abortus, которая поражает крупный рогатый скот,
• B. Sui, которая вызывает болезнь у свиней, северных оленей, зайцев.

• контактно-бытовой (через повреждения на коже и слизистой),
• фекально-оральный (через зараженные продукты, например, молоко, сыр, мясо),
• аэрогенный.

Источниками инфекции являются зараженные козы, коровы, овцы, свиньи. Это заболевание наиболее распространено в животноводческих регионах, особенно в среднеазиатских странах. Инфекция проникает в организм через ссадины на коже, слизистую оболочку дыхательной и пищеварительной системы, не вызывая изменений в области входных ворот. Далее микроорганизмы разносятся в органы, где много ретикулоэндотелиальной ткани, образуя там гранулемы. Болезнь имеет длительное течение и тенденцию к хронизации процесса.

Выделяют основные клинические формы бруцеллеза

• острая (длится 1,5 месяца),
• подострая (от 1,5 до 3 месяцев),
• хроническая (более 3 месяцев).

Однако больные предъявляют такие основные жалобы

• Сильная боль в суставах ног перемежающегося характера.
• Выраженная слабость.
• Повышенная потливость, иногда в ночное время.
• Температура увеличивается до субфебрильных цифр на длительный промежуток времени, или ее подъемы и падения чередуются (волнообразное течение).
• Микраденопатия – периферические лимфатические узлы слегка увеличиваются в размерах, отмечается незначительная болезненность их при пальпации.
• В мышцах и сухожилиях появляются болезненные плотные узлы (фиброзиты, целлюлиты).

Проводят бактериологическое исследование путем посева пунктата лимфатических узлов, костного мозга, крови на питательные среды. Широко применяется серологическая диагностика, направленная на выявление специфических антител в крови больных.

Реакция Кумбса применяется при хроническом бруцеллезе и направлена на выявление неполных антител. Реакция Райта положительная на 10-е сутки болезни при острой форме недуга.

Широко используется проба Бюрне. Этот анализ на бруцеллез представляет собой внутрикожную аллергическую пробу для оценки сенсибилизации организма к бруцеллам.

• Антибактериальное лечение комбинациями антибиотиков.
• Дезинтоксикационная терапия, иммуностимуляторы.
• Противовоспалительные вещества: стероидные и нестероидные.
• При болях применяют новокаиновые блокады
• Вакцина против бруцеллеза (эффективность низкая).
• При хронической форме: ЛФК, физиотерапия, санаторно-курортное лечение.

Так как бруцеллез имеет тенденцию к переходу в хроническую форму, наблюдение за больными ведется еще 2 года после выздоровления.

источник

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: РА, реакция агглютинации.

Бруцеллез – острое инфекционно-аллергическое, зоонозное заболевание. Возбудитель бруцеллеза относится к роду Brucella. Род Brucella состоит из 9 самостоятельных видов, вызывающих заболевание у животных и людей. Заболевания людей преимущественно вызывают B. melitensis, B. abortus и B. suis биовары 1-4, реже B. сanis, B. сeti и B. рinnipedialis. Основные источники инфекции — овцы, козы, крупный рогатый скот, свиньи. Факторы передачи — сырье животного происхождения (шерсть, пух, шкуры), мясомолочные продукты. Болезнь начинается, как правило, с острой лихорадки с неспецифическими гриппоподобными проявлениями, склонна к хронизации и появлению осложнений в виде артритов, спондилитов, эндокардитов, менингитов, нейропатии, васкулитов, нефритов, лимфоаденопатии.

Референсные значения (вариант нормы):

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

» [«serv_cost»]=> string(3) «560» [«cito_price»]=> NULL [«parent»]=> string(2) «25» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(1) array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(31) «Кровь (сыворотка)» > > >

Биоматериал и доступные способы взятия: Подготовка к исследованию:

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: РА, реакция агглютинации.

Бруцеллез – острое инфекционно-аллергическое, зоонозное заболевание. Возбудитель бруцеллеза относится к роду Brucella. Род Brucella состоит из 9 самостоятельных видов, вызывающих заболевание у животных и людей. Заболевания людей преимущественно вызывают B. melitensis, B. abortus и B. suis биовары 1-4, реже B. сanis, B. сeti и B. рinnipedialis. Основные источники инфекции — овцы, козы, крупный рогатый скот, свиньи. Факторы передачи — сырье животного происхождения (шерсть, пух, шкуры), мясомолочные продукты. Болезнь начинается, как правило, с острой лихорадки с неспецифическими гриппоподобными проявлениями, склонна к хронизации и появлению осложнений в виде артритов, спондилитов, эндокардитов, менингитов, нейропатии, васкулитов, нефритов, лимфоаденопатии.

Референсные значения (вариант нормы):

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 — 2019

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

источник

м. Полежаевская, Проспект Маршала Жукова, д.38 к.1

Бруцеллез (мальтийская лихорадка, болезнь Банга) является разновидностью бактериальных инфекционных заболеваний. За возникновение заболевания отвечают бактерии из рода Бруцелла. Источники возбудителя – животные, такие как овцы, козы, крупный рогатый скот, олени, лоси, свиньи и собаки. Бруцеллез у человека может развиться в результате контакта с зараженными животными или продуктами животного происхождения.

В развитых странах случаи бруцеллеза являются относительно редкими. Однако в странах, где программы контроля болезней животных не развиты в должном масштабе, частота возникновения бруцеллеза гораздо выше. К ним относятся, прежде всего, страны, где традиционно употребляются непастеризованные продукты (молоко, сыр), термически необработанные мясные продукты.

Бруцеллез у человека вызывает симптомы, сходные к симптомам гриппа. К ним относятся: лихорадка, потливость, головные боли, боли в спине и общая слабость. Могут также развиться симптоматика поражения центральной нервной системы или сердца. Бруцеллез способен также вызвать длительные или хронические симптомы, среди них выделяют рецидивирующую лихорадку, боли в суставах и усталость.

Люди могут заразиться бруцеллезом следующими способами:

• употребляя пищу и напитки, содержащие патогенные бактерии;
• вдыхая микроорганизмы с пылью;
• при попадании бактерий в организм через повреждения кожи.

Основной путь передачи бактерий – оральный. Если животное инфицировано бактерией, то заражено также мясо, как и молоко, которое оно выделяет. Поэтому употребление «сырого» молока от зараженного животного часто является причиной заболеваний людей. Бруцеллез наиболее часто диагностируется у ветеринаров, а также у лиц, работающих на скотобойнях и у упаковщиков мяса. Бруцеллез от человека к человеку не передается.

Для определения уровня антител к возбудителю бруцеллеза в сыворотке крови широко используется реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), с помощью которой можно определить уровень антител. У большинства больных бруцеллезом титр специфических антител в сыворотке крови повышается на 5-й день от начала заболевания.

ДНК гарднереллы и лактобактерии (количественно) в соскобе – количественное определение ДНК Lactobacillus spp. и Gardnerella vaginalis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе эпителиальных клеток.

Для определения уровня антител к возбудителю бруцеллеза проводится забор крови из локтевой вены правой или левой руки. Пациент садится на стул и кладет руку на стол. Выше места венепункции накладывают жгут, ладонь нужно сжать в кулак. Затем находится вена и после обработки кожи дезинфицирующим раствором в нее вводят иглу. Осуществляют забор крови для анализа, после чего на место укола прикладывают ватный шарик для предотвращения развития синяка. Через 5-10 минут шарик выбрасывают. Полученный образец крови отправляется в лабораторию для определения титра антител.

Кровь на исследование рекомендуется сдавать утром натощак. Специальной диеты перед исследованием соблюдать не нужно. За несколько дней до исследования следует воздержаться от алкоголя. Не употребляйте кофе и чая, по крайней мере, за 12 часов перед анализом. По мере возможности устраните причины стресса. Если Вы постоянно принимаете какие-либо препараты, рекомендуется уведомить об этом сотрудников лаборатории. Следует отметить, что антитела к возбудителю бруцеллеза начинают выявляться к началу 2 недели.

Осложнения при исследовании встречаются редко. Может появиться синяк в области укола и припухлость вен. Прикладывание теплых компрессов в течение нескольких дней облегчит данные симптомы. Если у Вас нарушена система свертывания крови или если Вы принимаете лекарства, действующие на систему крови, то после забора крови может возникнуть кровоточивость.

Забор крови производится стерильными одноразовыми инструментами. На всех этапах процедуры строго соблюдаются все санитарно-гигиенические правила. Возможен забор материала на дому. Результат будет известен в течение 3 рабочих дней с момента сдачи анализа. Анализ крови на бруцеллез выполняют опытные специалисты.

Сдать анализ крови на антитела к возбудителю бруцеллеза без очереди и в удобное для Вас время можно в ближайшей к Вам клинике НИАРМЕДИК. Цену перечисленных исследований можно узнать на нашем сайте в прейскуранте услуг. Дополнительную информацию по подготовке к забору материала на исследования Вы можете узнать на нашем сайте в разделе «Подготовка к анализам», а также у операторов контакт-центра по телефону +7 (495) 6-171-171.

ДНК гарднереллы и лактобактерии (количественно) в соскобе – количественное определение ДНК Lactobacillus spp. и Gardnerella vaginalis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе эпителиальных клеток.

Возбудители бруцеллеза – это грамотрицательные неподвижные бактерии, которые являются паразитами животных. Люди могут заразиться бруцеллезом при контакте с инфицированными животными, с их фекалиями, а также через употребление зараженных продуктов. Бактерии достигают лимфатических узлов, где начинают интенсивно размножаться и накапливаться. Инкубационный период в среднем длится 7-16 дней, после чего появляются первые признаки заболевания: повышение температуры до 38 °C, боли в суставах, слабость, потливость. Некоторые пациенты могут выздороветь без лечения, но у других болезнь приобретает хронический характер. В таком случае страдают различные внутренние органы. Как осложнения бруцеллеза могут возникнуть септический артрит, остеомиелит позвоночника, миокардит, тромбофлебит, бронхит, воспаление легких, менингит, простатит, пиелонефрит, спленомегалию. Эти симптомы характерны для многих других заболеваний. Подозрение на бруцеллез возникает, когда началу симптомов предшествует контакт с животными, особенно если пациент употреблял свежее «сырое» молоко, сыр или сырую печень.

В случае подозрения на бруцеллез проводится ряд лабораторных исследований. Для постановки диагноза необходимо обнаружить возбудителя бактериоскопическим методом или с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) сыворотки крови. РПГА занимает особое место среди серологических методов диагностики, эта реакция связана с исследованием взаимодействия антигенов с антителами сыворотки крови.

При серологическом исследовании крови суспензию, содержащую ранее убитые теплом бруцеллы, подвергают реакции с сывороткой крови. Если сыворотка содержит антитела к бруцеллам, образуются комки и формируется осадок (происходит реакция агглютинации). Это возможно только в том случае, когда в организме уже есть инфекция. Если происходит агглютинация, то можно говорить о положительной реакции. РПГА становится положительной в начале заболевания, благодаря чему можно своевременно выставить диагноз у людей и животных.

Диагностически значимым считается титр антител не менее 1:160. В дальнейшем титр антител может нарастать. Практически у всех больных титр антител нарастает в течение первых четырех недель заболевания, достигает пика ко второму месяцу от начала заболевания, после чего он начинает быстро снижаться. Анализ крови на бруцеллез включает в себя стандартный тест РПГА, который выявляет антитела к большинству встречаемых бруцелл. Повышенный титр антител у 5% пациентов сохраняется в течение нескольких лет после перенесённой инфекции.

ДНК гарднереллы и лактобактерии (количественно) в соскобе – количественное определение ДНК Lactobacillus spp. и Gardnerella vaginalis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе эпителиальных клеток.

источник

Биоматериал: Сыворотка крови

Срок выполнения (в лаборатории): 2 р.д. *

Бруцеллез — инфекционное заболевание, склонное к хроническому течению, характеризуется поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, половой и других систем. Относится к группе зоонозов. Возбудитель бруцеллеза — бруцеллы — мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии. При постановке диагноза бруцеллеза полученные клинико-эпидемиологические данные должны быть подтверждены лабораторно. С этой целью используются бактериологический и серологический методы исследования. При остром бруцеллезе положительный результат исследования гемокультуры получают в 10-30% случаев (в 62-90%, если возбудитель B. melitensis и в 5-15%, если B. abortus). Культура СМЖ бывает положительной у 45% пациентов с менингитом. При посевах крови, костного мозга, мочи рост чистой культуры бруцелл можно получить через 5-10 суток, а в ряде случаев через 20-30 суток. В связи с этим для диагностики бруцеллеза широкое распространение получили серологические методы.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую не минеральную и не газированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются.

Результат исследования – качественный.

Референсные значения: не обнаружено

Для определения антител к возбудителю бруцеллеза в сыворотке крови используется РПГА, посредством которой определяют уровень антител, реагирующих главным образом с липополисахаридными антигенами бруцелл. У большинства больных титры специфических антител в крови повышаются на 3-5-й день от начала заболевания.

При однократном исследовании диагностически значимым титром является 1:160 и выше. Если в первом анализе титр ниже, то необходимо через 7-12 дней взять повторную пробу. Увеличение титров антител в четыре и более раз в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1-4 недели, позволяет идентифицировать этиологический фактор заболевания. Повышенный титр антител выявляется у 97 % больных в первые 3 недели заболевания. Наиболее высокий титр антител наблюдают обычно через 1-2 месяца от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться.

РПГА выявляет антитела к B. abortus, B. suis, B. melitensis, но не к B. canis. Повышенный титр антител может сохраняться у 5-7 % пациентов в течение 2-х лет после перенесенной инфекции. Поэтому метод РПГА не может быть использован для дифференциальной диагностики бруцеллеза с другими инфекционными заболеваниями, при наличии в анамнезе бруцеллеза в течение 2-х последних лет.

Причиной ложноположительных результатов могут служить проведение кожной пробы на бруцеллез, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, иерсиниями, Francisella tularensis. В ряде случаев могут отмечаться ложноотрицательные результаты РПГА у больных бруцеллезом, что объясняется эффектом прозоны или так называемым блокированием антител. При хронических локализованных формах бруцеллеза титры могут быть отрицательными или ниже 1:160. На фоне проводимого лечения титры антител быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. При рецидивах уровень антител снова повышается. Наличие однократного повышения титра антител > 1:160 является надежным объективным указанием на текущую или имевшую недавно место инфекцию. После лечения и выписки больного из стационара рекомендуется проведение серологических исследований в течение первого года через 1, 2, 3, 6, 9, 12 месяцев, а в течение второго года – ежеквартально.

Если при первом исследовании уровень антител ниже или антитела не определяются необходимо исследовать парные сыворотки. При исследовании в парных сыворотках для подтверждения диагноза необходимо исследовать кровь с интервалом в 10-14 дней.

Адреса медицинских центров, в которых можно заказать исследование, уточняйте по телефону 8-800-100-363-0
Все медицинские центры СИТИЛАБ в г. Москва >>

* На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории.
Приведенная информация носит справочный характер и не является публичной офертой. Для получения актуальной информации обратитесь в медицинский центр Исполнителя или call-центр.

источник

Серологическое исследование антител IgG к бруцелле определяет наличие в организме бактерий рода Brucella. Иммуноглобулины класса G вырабатываются к антигенам, расположенным на поверхности микроорганизмов. Положительный результат позволяет поставить пациенту диагноз «бруцеллёз».

Бактерии рода Brucella вызывают развитие бруцеллёз. Люди заражаются от больных коров, коз, овец, которые являются основным источником и природным резервуаром инфекции. Заражение происходит при употреблении в пищу недостаточно термически обработанного мяса или молочных продуктов. Инкубационный период длится около трех недель. Заболевание может иметь острое, подострое или хроническое течение. Поражаются суставы, сердце, нервная, пищеварительная и другие системы организма.

Для диагностики бруцеллёза используют культуральный, бактериологический методы и серологические реакции. К последним относится определение иммуноглобулинов G в сыворотке крови больного человека.

Полученные результаты анализа показывают титр антител к бруцелле. Возможны такие варианты:

Отрицательный результат (R = 1,1) говорит о наличии острой или хронической формы инфекции (для уточнения необходимо провести определения иммуноглобулинов других классов).

Однако высокий титр IgG не всегда говорит о наличии бруцеллёза. Он может свидетельствовать о перенесённой острой инфекции или вакцинации. В таком случае уровень иммуноглобулинов не отображает активности процесса.

анализы Вопрос: Доктор назначила ребенку: 1. Анализ крови на органические и аминокислоты методом тандемной масспектрометрии 2. Анализ мочи на органические и аминокислоты методом газовой спектрометрии (разовая порция). Мы можем сделать такие анализы в вашей лаборатории в Адлере? стоимость и сроки, а так же как подготовиться к анализу написшите, пожалуйста.

Ответ: Здравствуйте! Да, Вы можете сдать кровь и мочу на исследование в Адлере. Комплексное определение концентрации ненасыщенных жирных кислот семейства Омега-6 в крови методом тандемной масс-спектрометрии — 8250 руб. Срок выполнения до 10 рабочих дней. Комплексное определение концентрации на аминокислоты в крови (32 показателя) — 8140 руб., 10 р.дней., Комплексное определение содержания органических кислот в моче — 5000 руб., 10 р. дней. Сдавать утром после 8 часового ночного голодания.

Какой анализ крови нужно сдать Вопрос: Добрый день,хотел бы у вас уточнить один вопрос.Был на приеме у невролога, т.к. в последнее время немеет лобная часть головы,он установил диагноз,прописал лекарства и сказал,что надо бы сделать общий анализ крови для проверки.Какой-то отдельный анализ крови надо еще делать или хватит только общего?

Ответ: Здравствуйте! Если доктор Вам назначил общий анализ крови, значит его следует выполнить. Общий клинический анализ крови является комплексным исследованием, который поможет врачу провести скрининг. Данный анализ отражает текущее состояние человека и дает такие показатели крови, как эритроциты, гемоглобин, лейкоциты, лейкоцитарная формула и еще до 18 показателей.

источник

• Главная
• «ПРОФИЛАКТИКА И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА ЛЮДЕЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 3.1.7.1189-03» (утв. Главным государственным санитарный врачом РФ 30.01.2003)

5.2. Методы выявления специфических антител

При бруцеллезе рекомендуется несколько методов, которые используются в зависимости от целей исследования.

При проведении эпидобследования населения в очагах рекомендуется: реакция агглютинации — пластинчатая (Хеддлсона), РПГА, ИФА, кожно-аллергическая проба Бюрне.

При обследовании населения перед профилактической вакцинацией: пластинчатая реакция агглютинации (Хеддлсона) или ИФА и кожно-аллергическая проба Бюрне или реакция лизиса эритроцитов.

Для диагностики острого и подострого бруцеллеза проводят бактериологические исследования, ставят реакцию агглютинации и РПГА. В случаях отрицательного результата используют реакцию Кумбса. Может быть использована ИФА.

Для диагностики хронического бруцеллеза и при проведении диспансерного наблюдения за переболевшими бруцеллезом рекомендуется реакция Кумбса, ИФА и аллергические тесты.

Серологические реакции и аллергическая кожная проба по своему диагностическому значению в различные периоды заболевания не равноценны, вследствие чего не могут заменять друг друга. Это обуславливает необходимость применения комплексного серо-аллергического метода, являющегося наиболее надежным способом диагностики бруцеллеза.

В ранние сроки от начала заболевания (в первые 6 месяцев) диагностическая ценность серологического метода выше, чем аллергического; серологические реакции в этот период оказываются положительными почти в 98% случаев. По мере удлинения срока заболевания процент положительных серологических реакций (реакция агглютинации, РПГА) начинает падать. В поздние периоды заболевания большую диагностическую ценность имеет реакция Кумбса, ИФА и внутрикожная аллергическая проба.

При проведении обследования нужно учитывать, что если высокие титры антител почти всегда указывают на наличие инфекции, то антитела в низких титрах или их полное отсутствие не исключают возможности заболевания. В связи с этим рекомендуется проводить повторные исследования с интервалом 1 — 2 недели, особенно при подозрении на острую форму бруцеллеза.

Следует иметь в виду, что положительную реакцию агглютинации с бруцеллезным антигеном могут давать также сыворотки, содержащие антитела к микроорганизмам, имеющим общие антигенные детерминанты с бруцеллами (Е.coli, V.cholerae, Fr.tularensis, Y.enterocolitica 0 — 9, S.typhimurium).

Преимущество этого метода заключается в простоте постановки реакции, быстром получении результатов и чувствительности реакции. В качестве антигена для постановки реакции Хеддлсона и Райта применяют единый бруцеллезный диагностикум. Реакцию ставят на обычном оконном, тщательно вымытом, обезжиренном стекле, расчерченном на квадраты величиной 4 x 4 см каждый, по горизонтали должно быть 5 квадратов. На первом квадрате с левой стороны записывается номер испытуемой сыворотки, в последующие квадраты слева направо разливают (микропипеткой или 1 мл градуированной пипеткой) испытуемую сыворотку в следующих дозах: 0,04, 0,02, 0,01 и 0,03 (контроль сыворотки). К первым трем дозам сыворотки добавляют по 0,03 мл антигена. К последней дозе сыворотки (0,03) добавляют 0,03 мл физиологического раствора. Сыворотку осторожно смешивают с антигеном палочкой, начиная с минимальной дозы сыворотки. Контроль антигена ставят, добавляя 0,03 мл физиологического раствора к 0,03 мл антигена. Затем стекло слегка подогревают над пламенем спиртовки так, чтобы происходило равномерное нагревание всей поверхности стекла.

В случае положительной реакции в первые же минуты в каплях сыворотки с антигеном появляются хлопья (агглютинат). Максимальный срок наблюдения 8 минут:

а) контроль сыворотки ставят с каждой испытуемой сывороткой для исключения спонтанной агглютинации;

б) контроль антигена ставят один (при любом числе испытуемых сывороток) для исключения спонтанной агглютинации применяемого антигена.

Учет реакции проводят невооруженным глазом по следующей схеме:

а) полное просветление жидкости с крупными и мелкими хлопьями, т.е. 100% агглютинации (4+);

б) почти полное просветление жидкости с ясно заметными хлопьями, т.е. 75% агглютинации (3+);

в) незначительное просветление жидкости с заметными хлопьями, т.е. 50% агглютинации (2+);

г) мутная жидкость с едва заметной зернистостью (+);

д) равномерная мутная жидкость (-).

Для оценки результатов рекомендуется следующая схема:

а) агглютинация на 4+ во всех дозах сыворотки — результат «резко положительный»;

б) агглютинация не менее 2+ во всех дозах сыворотки — результат «положительный»;

в) агглютинация только в первой или в первой и второй дозах сыворотки — результат «сомнительный»;

г) отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки — реакция «отрицательная».

Для диагностики бруцеллеза имеет значение только положительный результат реакции. При сомнительном или отрицательном результатах реакции и наличии эпидемических и эпизоотических показаний, а также в стационаре и при обследовании доноров, где необходимо определение титра агглютининов и их динамики, следует применять реакции Райта и Кумбса, РПГА и ИФА.

Реакция агглютинации является одним из основных методов диагностики бруцеллеза у людей. Наибольшую диагностическую ценность реакция агглютинации представляет при острой и подострой форме бруцеллеза.

Техника постановки реакции.

В пробирки разливают физиологический раствор: в первую — 2,4 мл, в остальные по 0,5 мл. В первую пробирку добавляют 0,1 мл исследуемой сыворотки, перемешивают, переносят 0,5 мл в третью пробирку и т.д. Из последней пробирки 0,5 мл смеси выливают, в результате получают в каждой пробирке по 0,5 мл следующих разведений 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. Из первой пробирки 0,5 мл переносят в чистую пробирку и добавляют туда 0,5 мл физиологического раствора (контроль сыворотки в разведении 1:50), а 1,0 мл выливают.

Диагностикум разводят физиологическим раствором согласно прилагаемому к нему наставлению и добавляют по 0,5 мл во все пробирки, кроме контроля. После добавления диагностикума разведение сыворотки соответственно удваивается, т.е. получается 1:50, 1:100 и т.д. Сыворотки с антигеном смешивают путем встряхивания и помещают в термостат (37 °C ) на 18 — 20 часов. После инкубации пробирки выдерживают 1 — 2 часа при комнатной температуре и проводят учет реакции.

Учет реакции проводят по стандарту мутности в зависимости от степени осаждения агглютината и просветления жидкости.

Для приготовления стандарта мутности антиген, применяемый для постановки РА, еще раз разводят в два раза.

Дальнейшее разведение антигена физиологическим раствором производят по схеме 1.

РАЗВЕДЕНИЕ АНТИГЕНА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИМ РАСТВОРОМ

Стандарт мутности готовят каждый раз при постановке РА и ставят в термостат одновременно с основной реакцией.

Титром сыворотки является максимальное ее разведение, дающее 50% агглютинации, — просветление, оцениваемое на 2+.

При применении стандартизированного диагностикума титры исследуемых сывороток соответствуют количеству международных единиц антител (ме/мл).

Так, титры 1:50, 1:100, 1:200 и т.д. соответственно равны 50, 100, 200 и т.д. ме/мл.

При диагностической оценке РА рекомендуется следующая схема:

— титр сыворотки 1:100 (100 ме/мл) — результат положительный;

— титр сыворотки 1:200 (200 ме/мл) — результат положительный;

— титр сыворотки 1:400 (400 ме/мл) — результат резко положительный.

Диагностическим титром принято считать реакцию агглютинации не менее 2+ при разведении сыворотки 1:100 и выше.

В диагностике бруцеллеза у людей и животных, особенно при хроническом течении инфекции, когда реакция агглютинации может быть отрицательной или положительной в низких титрах, важное место следует отвести выявлению неполных антител. При постановке реакции Кумбса используют предварительно оттитрованную антиглобулиновую сыворотку против глобулинов человека (например — антиглобулиновая сыворотка для иммуноэлектрофореза против глобулинов человека) (см. схему титрации).

Техника постановки реакции Кумбса (РК).

В начале ставят реакцию агглютинации (Райта). После учета реакции агглютинации (через 20 часов) берут не менее трех пробирок первых разведений при отрицательном результате реакции агглютинации или не менее трех пробирок, начиная со слабоположительного результата (+, ++). Эти пробирки центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 20 минут для осаждения антигена. Надосадочную жидкость осторожно отсасывают с помощью пастеровской пипетки и отбрасывают, затем в каждую пробирку наливают по 1 мл физиологического раствора, тщательно встряхивают и снова центрифугируют, таким образом осадок промывают три раза. После последнего центрифугирования к осадку отмытого антигена добавляют 0,5 мл антиглобулиновой сыворотки в рабочем титре, пробирки тщательно встряхивают и помещают в термостат на 18 — 20 часов. Учет реакции проводят так же, как при реакции агглютинации. Диагностическим титром РК считается агглютинация не менее 2+ в разведении сыворотки 1:50.

Для контроля антиглобулиновой сыворотки взять в опыт сыворотку, содержащую неполные антитела с известным титром.

Контроль антигена. Взвесь антигена в физиологическом растворе подвергается отмыванию центрифугированием, как в основной реакции, после чего добавляют 0,5 мл антиглобулиновой сыворотки. При учете в контроле антигена наблюдается равномерное помутнение.

Схема титрования антиглобулиновой сыворотки для РК.

Для титрования антиглобулиновой сыворотки (против глобулинов человека) необходимо иметь сыворотку крови человека, заведомо содержащую неполные антитела к бруцеллам в высоком титре. Титрование антиглобулиновой сыворотки производят следующим образом. Вначале титруют положительную бруцеллезную сыворотку в реакции агглютинации (Райта). При этом делают несколько рядов разведений сыворотки, приблизительно — 8 рядов (схема 2).

РЕЗУЛЬТАТЫ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ

После учета реакции агглютинации во всех рядах отбирают пробирки, в которых отсутствует агглютинация (в схеме 1 — начиная с 1:400) и в каждой из них отмывают антиген согласно методике постановки реакции Кумбса. Затем (схема 3) делают несколько разведений титруемой антиглобулиновой сыворотки (в нашем примере от 1:10 до 1:250) и добавляют по 0,5 мл каждого разведения этой сыворотки в один ряд пробирок с оставшимся после отмывания антигеном. Объем жидкости в каждой пробирке должен быть доведен до 0,5 мл. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37 °C. Результаты учитывают так же, как реакцию агглютинации. За титр антиглобулиновой сыворотки принимают ее наибольшее разведение (в нашем примере 1:80 — 4 ряд), которое выявляет неполные антитела в максимальном титре (1:3200). Для реакции Кумбса антиглобулиновая сыворотка применяется в удвоенном титре (1:40).

РЕЗУЛЬТАТЫ РЕАКЦИИ КУМБСА

РПГА является специфичным и высоко чувствительным методом выявления бруцеллезных антител в сыворотке крови человека. Для постановки РПГА необходимо иметь: а) бруцеллезный эритроцитарный антигенный диагностикум; б) контрольные (несенсибилизированные) эритроциты; в) нормальную сыворотку кролика; г) бруцеллезную сыворотку.

Для титрования испытуемых сывороток применяется нормальная сыворотка кролика, инактивированная при 56 °C в течение 30 минут и разведенная физиологическим раствором 1:100.

Испытуемую сыворотку разводят физиологическим раствором 1:25 (0,1 мл сыворотки +2,4 мл физиологического раствора) и инактивируют в течение 30 минут при 56 °C. Перед исследованием сыворотку адсорбируют 50% взвесью контрольных эритроцитов. К 1,2 мл инактивированной сыворотки добавляют 0,2 мл 50% эритроцитов, встряхивают и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Затем смесь центрифугируют при 1000 об./мин. в течение 2 минут.

Можно оставить сыворотки с эритроцитами на ночь в холодильнике (+4 °C), в этом случае исключается центрифугирование.

Эритроцитарный диагностикум перед применением разводят физиологическим раствором (pH 7,0 — 7,2) согласно указанию на этикетке и получают 2,5%-ную взвесь, которая применяется в РПГА. Контрольные (несенсибилизированные эритроциты также разводят согласно указанию на этикетке и применяют полученную 2,5%-ную взвесь для контроля сывороток).

Реакцию ставят в прозрачных полистироловых пластинках с лунками. Каждую сыворотку исследуют не менее чем в 6 — 8 разведениях, начиная с 1:50. Сначала нормальную разведенную 1:100 инактивированную сыворотку кролика разливают во все лунки по 0,5 мл. Затем в первую лунку (контроль сыворотки) вносят 0,5 мл испытуемой сыворотки, предварительно инактивированной и разведенной 1:25, перемешивают и 0,5 выливают. Во вторую лунку также добавляют 0,5 мл испытуемой сыворотки (1:25), перемешивают, переносят 0,5 мл в третью лунку и титруют сыворотку до конца ряда, из последней лунки 0,5 мл выливают. Таким образом получают ряд последовательных двукратных разведений испытуемой сыворотки, начиная с 1:50, в объеме 0,5 мл.

В первые лунки (контроль сыворотки) добавляют микропипеткой по 0,05 мл контрольных эритроцитов. Затем в каждую лунку, начиная со второй, с помощью микропипетки добавляют по 0,05 мл диагностикума. Пластины осторожно встряхивают до полного перемешивания содержимого лунки, следя, чтобы не было разбрызгивания жидкости, и оставляют при комнатной температуре. Учет реакции проводят через 2 — 3 часа.

При постановке РПГА предусматриваются следующие контроли:

а) контроль качества нормальной сыворотки кролика (1:100) проводят в двух лунках. К 0,5 мл сыворотки добавляют в первую лунку 0,05 мл 2,5% взвеси диагностикума, во вторую — 0,05 мл контрольных эритроцитов;

б) качество диагностикума проверяют путем титрования специфической бруцеллезной сыворотки, начиная с разведения 1:50 до 1:100000. Затем в каждую лунку добавляют по 0,05 мл 2,5% взвеси диагностикума.

Реакция считается специфической, если в контролях исследуемых и контрольной сыворотки отсутствует гемагглютинация, а титр специфической сыворотки в реакции будет соответствовать титру, указанному на этикетке флаконов эритрицитарного диагностикума.

Оценка реакции проводится по следующей схеме:

4+ — эритроциты покрывают все дно лунки равномерным слоем, иногда наблюдается зонтик.

3+ — эритроциты выстилают все дно лунки тонким равномерным слоем, но площадь его меньше, чем при 4-крестовой реакции, размеры зонтика также меньше.

2+ — агглютинат небольшой, расположен в центре лунки.

1+ — вокруг осадка эритроцитов в центре виден небольшой агглютинат.

Отрицательная реакция — осадок эритроцитов на дне лунки в виде пуговки или маленького кольца.

За титр сыворотки принимают ее последнее разведение с оценкой реакции не менее чем 3+. Оценка результатов исследования сывороток на бруцеллез в РПГА у людей: титр 1:50 — реакция сомнительная, титр 1:100 и выше — реакция положительная. При записи результатов РПГА следует указывать титр сыворотки.

Техника постановки РПГА микрометодом.

РПГА может быть выполнена в микрообъемах с помощью микротитратора типа Такачи (или круглодонных микропланшетах с микропипетками), который позволяет проводить титрование в объемах 25 и 50 мкл. Техника постановки реакции, последовательность всех операций такая же, как и при использовании макрометода. Следует учитывать то, что чувствительность микрометода обычно на одно разведение ниже, чем макрометода.

Для постановки реакции в микротитраторе с помощью пипетки-капельницы в каждую лунку вносят разводящую жидкость в объеме 50 мкл. Затем с помощью титраторов с головкой объемом 50 мкл забираем исследуемую сыворотку, погружая в нее головку. Титратор с сывороткой переносят в первую лунку и делают несколько вращательных движений в обе стороны. Затем титратор переносят в следующую лунку и повторяют манипуляцию. Титрование можно проводить одновременно в нескольких рядах. После титрования всего ряда титратор промывают дистиллированной водой путем вращательных движений, удаляют воду из головки с помощью тампона и обжигают ее на пламени горелки.

В лунки после титрования добавляют 25 мкл эритроцитарного диагностикума, разведенного 1:10, пластины слегка встряхивают до получения гомогенной взвеси. Учет проводят через 2 — 3 часа по аналогичной схеме, как и при использовании макрометода.

Метод используют для диагностики всех форм заболевания, а также при эпидемиологическом обследовании населения и при отборе лиц для вакцинации против бруцеллезной инфекции.

Для постановки ИФА используют диагностическую тест-систему, иммуноферментную для определения бруцеллезных антител. Выявление специфических антител в сыворотках людей происходит за счет взаимодействия бруцеллезного антигена (ЛПС), адсорбированного на полистироловом планшете (плоскодонном) с антителами исследуемой сыворотки. Образовавшийся комплекс «антиген + антитело» выявляют с помощью антител против иммуноглобулинов человека, меченных пероксидазой хрена.

Тест-система представляет собой набор ингредиентов для проведения ИФА на твердофазном носителе и включает в себя: бруцеллезный ЛПС (либо планшет, сенсибилизированный этим антигеном), антитела против иммуноглобулинов человека, меченных пероксидазой (конъюгат), контрольные (положительную и отрицательную) сыворотки человека, набор солей, необходимых для приготовления буферных растворов, субстрат — ортофенилиндиамин (ОФД). Твин-20, бычий сывороточный альбумин (БСА), планшеты для ИФА однократного применения.

1. Сенсибилизация твердой фазы. В лунки планшета вносят с помощью дозатора по 200 мкл раствора бруцеллезного антигена в концентрации 10 мкг/мл в 0,02М растворе фосфатно-солевого буфера (ФСБ), pH 7,2. Адсорбцию антигена на планшетах проводят в течение 2 часов в термостате при температуре 37 °C или при 4 °C в течение 18 часов. Затем антиген удаляют встряхиванием планшета с последующей трехкратной отмывкой (по 5 мин.) раствором ФСБ, содержащим 0,1% детергента — твит-20.

2. Внесение исследуемого материала. Испытуемые сыворотки, разведенные 1:200, вносят по 100 мкл в первую лунку ряда и далее последовательно путем двукратных разведений на ФСБ + твин, содержащий 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА), раститровывают. Параллельно на каждом планшете ставят отрицательный и положительный контроль. Планшеты встряхивают и выдерживают при 37 °C в течение 1 часа. После чего жидкость удаляют и отмывают планшеты, как указано в п. 1.

3. Внесение конъюгата. В каждую лунку планшета вносят по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении (конъюгат разводят на ФСБ + твин и 1% БСА). Планшеты помещают в термостат на 40 мин., после чего жидкость удаляют, а планшеты отмывают 4 — 5 раз, как указано в п. 1.

4. Проявление реакции. В каждую лунку вносят по 100 мкл субстратного раствора, содержащего 0,04% ОФД и 0,04% H2O2 в 0,1М цитратно-фосфатном буфере, pH 5,5. Инкубацию проводят при комнатной температуре 15 — 30 мин. и останавливают реакцию внесением 50 мкл 0,5 моль/л серной кислоты.

5. Учет и оценка результатов ИФА. Результат реакции можно учитывать визуально с помощью сравнивания окраски в опытных и контрольных лунках, а также с помощью спектрофотометра типа Multiskan при длине волны 492 нм. Появление желто-оранжевого окрашивания в опытных лунках при его отсутствии в лунках с отрицательными контролями свидетельствует о положительной реакции. При фотометрическом учете результатов проба считается положительной, если оптическая плотность (ОП) в 2 и более раз превосходит наивысшее значение ОП отрицательных контролей.

Диагностическим титром в ИФА считается разведение сыворотки более чем 1:400.

Использование ИФА в эпидемиологической практике.

При проведении массовых обследований на бруцеллез для постановки ИФА может быть использована не сыворотка крови, а цельная кровь. Для этого кровь из пальца, с помощью микропипетки, в объеме 10 мкл вносится в микропробирку с физиологическим раствором в объеме 1 мл. Пробирку встряхивают и затем либо центрифугируют при 1000 об./мин. 5 мин., либо дают отстояться в холодильнике при 4 °C в течение 18 часов. Таким образом получают разведение сыворотки 1:200. Для постановки ИФА используют надосадочную жидкость. ИФА как скрининг-тест можно ставить в 2 лунках микропланшета, при получении сомнительного или положительного результата ИФА повторяют в количественном варианте с последующей раститровкой надосадочной жидкости. При получении положительного результата необходимо исследовать сыворотку крови.

При использовании непрямого ИФМ для обнаружения антител к бруцеллам заранее готовят мазки из 1 — 2 суточной агаровой

9 культуры возбудителя (1 x 10 мкл/мл). На одном предметном стекле делают 8 мазков, фиксируют их в этиловом спирте в течение 30 мин., высушивают на воздухе и помещают во влажную камеру. Исследуемую сыворотку разводят 2-кратно, начиная с разведения 1:2 до 1:320, и наносят пастеровской пипеткой на мазки, начиная с большего разведения. Влажную камеру с препаратом помещают в термостат при 37 °C на 30 мин. Мазок отмывают от несвязавшихся антител и после подсыхания его вновь помещают во влажную камеру, докрашивая антивидовой люминисцирующей сывороткой в рабочем разведении. Дальнейшая обработка препарата ведется, как при прямом иммуннофлюоресцентном методе (см. раздел 4). После просмотра препарата под люминесцентным микроскопом устанавливают титр антител в исследуемой сыворотке.

В качестве контролей служат препараты, в которых бруцеллы обработаны бруцеллезной сывороткой (положительный контроль) и сывороткой, не содержащей антитела к бруцеллам (отрицательный контроль). Диагностическим титром считается титр не менее 1:4.

источник