Вирусный гепатит лаборатория диагностика

О возбудителе HCV-инфекции стало известно сравнительно недавно. До начала 1990-х годов точное выявление заболевания представляло собой серьезную проблему. Это обусловило широкое распространение вируса при гемотрансфузионных процедурах и трансплантации органов, длительное течение инфекции без адекватной терапии. Но сейчас диагностика гепатита С точна, анализы помогают прогнозировать эффективность терапии, а срок выполнения специфических исследований не превышает 3–5 дней.

Так почему масштабы распространения HCV некоторые специалисты сравнивают с эпидемией? В современном российском законодательстве предусмотрена регулярная проверка на гепатит С методом ИФА как у людей из группы риска, так и у работников, способных инфицировать других. Тем не менее, многие не проходят регулярной диспансеризации и не сдают даже стандартные клинические анализы, не говоря о специфических исследованиях.

Но HCV далеко не всегда сопровождается какими-либо клиническими проявлениями, более того, характерные симптомы заболевания отмечают только у четверти пациентов. Вирусная инфекция обычно протекает медленно, но репликация возбудителя патологии происходит постоянно. В результате наступает необратимая гибель гепатоцитов. На месте клеток, утративших свои функции, появляются участки соединительной ткани – своего рода шрамы.

Таким образом развивается фиброз, который, если не предпринять лечебных мер, перерастает в цирроз печени – тяжелое заболевание, сопровождающееся нарушением работы всех внутренних органов. При диагностике на этой стадии можно избавиться от вируса. Однако изменения печеночной паренхимы остаются необратимыми. В некоторых случаях больным требуется срочная трансплантация печени, а лечение начинают после проведения операции.

Поэтому чем раньше поставлен точный диагноз, тем скорее доктор начинает терапию. Таким образом репликацию вируса останавливают еще до развития тяжелых осложнений. Однако обычных клинических исследований недостаточно для выявления инфекции. Необходимо сдать более специфичные анализы, отличающиеся как по технике выполнения, так и по особенностям расшифровки результатов.

Сделать ряд диагностических тестов можно самостоятельно, но интерпретировать полученные данные (особенно если они положительны либо сомнительны) должен только врач.

Заподозрить наличие инфекции можно по некоторым клиническим признакам. К их числу относят:

• постоянное чувство слабости;
• астенический синдром;
• непереносимость физических нагрузок (ранее привычных);
• сонливость;
• эмоциональная раздражительность;
• расстройства пищеварения различной интенсивности (могут отсутствовать, иногда проявляются в виде отсутствия аппетита, тошноты).

Но подобные симптомы не могут достоверно выявить HCV, так как данные признаки не специфичны и указывают на множество других патологий или обычное переутомление.

Как определить гепатит С у взрослых и у детей:

• по анализу крови на содержание определенных иммуноглобулинов (ИФА);
• по результатам исследования, проведенного методом полимеразной цепной реакции;
• по биохимическому анализу на содержание печеночных проб, билирубина.

Недавно на фармацевтическом рынке появились диагностические наборы, позволяющие провести анализ на наличие гепатита С в домашних условиях. Подобные тест-системы менее чувствительны, чем исследования, проводимые в лаборатории. Но в целом, это быстрый и достаточно точный способ самодиагностики.

Интерпретация результатов, особенно сомнительных, должна проводиться врачом. Положительный тест служит показанием для консультации доктора.

Дополнительно необходима проверка показателей общеклинического теста крови и мочи. Перед началом лечения доктор оценивает состояние печени по данным неинвазивных исследований (УЗИ, эластометрия). При подозрении на тяжелые поражения ткани выполняют биопсию органа.

Учитывая длительное бессимптомное течение, результаты обычного анализа крови и мочи могут быть без каких-либо отклонений. Поэтому для выявления вируса гепатита Ц используют серологические (ИФА) и молекулярные (ПЦР) методы лабораторной диагностики. Для этого сдают кровь из вены в частной лаборатории либо поликлинике по месту жительства. Срок получения результатов – до 5 дней.

Основные методы диагностики патологии можно разделить на две группы. Молекулярные исследования направлены на обнаружение частиц вируса. Помимо наличия РНК возбудителя гепатита С, такой анализ показывает его количественное содержание и точный генотип. Серологическое исследование (ИФА) «реагирует» на выработку иммуноглобулинов, синтезируемых при попадании вируса в кровь человека.

Уровень РНК, достаточный для лабораторного определения, достигается через 10–16 дней после инфицирования (если проводить диагностику современными высокочувствительными технологиями). Количественно вирусную РНК можно определить позже, через 4–6 недель после заражения. Тогда же целесообразно проводить и генотипирование. Синтез антител начинается сразу же, при первом контакте вируса с кровью человека. Но лабораторным путем при помощи анализа ИФА их можно обнаружить только через 3–4 недели.

Возможность выявления вируса на ранних стадиях зависит от индивидуальных особенностей больного – сроков выработки антител и активности процессов репликации вируса.

Какие анализы сдают при подозрении на гепатит С:

• биохимия крови, печеночные пробы (отклонения от нормы могут лишь косвенно указывать на наличие гепатита С);
• ИФА;
• ПЦР.

Грамотное поэтапное полное обследование способствует исключению неопределенных результатов, дает максимально точную картину здоровья пациента в целом и позволяет врачу назначить правильное лечение.

Исследование методом ПЦР – самый точный анализ для обнаружения гепатита С в организме. Сам принцип постановки полимеразной цепной реакции достаточно сложен. Для проведения необходим обработанный и соответствующим образом подготовленный образец биологического материала. К нему добавляют фермент, провоцирующий деление заданного участка РНК (при его наличии) в геометрической прогрессии. Впоследствии определение частиц вируса проводят при помощи различных физико-химических методов.

Основные отличия ПЦР-диагностики гепатита C от исследования путем иммуноферментного анализа приведены в таблице:

Качественный анализ, предназначенный для выявления патогенной РНК строго специфичен, поэтому используется для дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита С и для первичного определения наличия заболевания. Современные наборы реактивов, используемые для проведения исследования, характеризуются высокой чувствительностью. Достоверная диагностика возможна уже через 1,5–2 недели после инфицирования.

Расшифровка анализа не отличается сложностью. Если частицы вируса обнаружены, человек болен либо произошла реконвалесценция болезни. Отрицательный результат свидетельствует в пользу отсутствия патологии или о диагностическом окне, когда человек заражен, но уровень РНК патогена слишком низок для лабораторного обнаружения.

При помощи качественного анализа методом ПЦР возможна ранняя диагностика вирусной инфекции.

Исследование проводится после подтверждения диагноза гепатита С по качественной ПЦР. По анализу определяют показатель вирусной нагрузки. Этот параметр определяет активность патологического процесса. В зависимости от результата количественного анализа выделяют несколько уровней вирусной нагрузки (представлено в таблице).

Чем выше параметр вирусной нагрузки (ВН), тем активнее происходит репликация вируса, хуже прогноз и выше вероятность необратимых изменений структуры тканей печени. Как правило, высокая виремия сопровождается достаточно характерными клиническими проявлениями инфекции. Обнаружение низкой ВН, особенно на фоне острой фазы заболевания является предиктором самостоятельного выздоровления. В таком случае начало терапии откладывают на 7–14 дней, после чего исследование повторяют.

Данный анализ проводят только в том случае, если в крови обнаружена вирусная РНК и установлено ее количественное содержание. Генотипирование – единственное исследование, которое определит разновидность возбудителя гепатита С. Только так можно правильно назначить курс терапии и установить продолжительность их применения.

В настоящее время диагностика вирусной инфекции возможна дома, при этом человеку не нужны какие-либо специальные медицинские навыки. Экспресс-тест на гепатит С «работает» по принципу иммуноферментного анализа, то есть набор позволяет определить наличие антител к HCV в образце биологического материала. Большинство тест-систем предназначены для проверки крови. Но появились наборы, позволяющие выяснить, есть ли иммуноглобулины к гепатиту С в слюне.

Относительно достоверности экспресс-тестов было проведено несколько клинических исследований. Установлено, что подобные наборы – не самый точный способ диагностики инфекции, многое зависит от правильности забора биологического материала, соблюдения других правил выполнения анализа. Однако проведение такого теста дает возможность самостоятельно определить инфицирование, не посещая доктора и лабораторию.

Цена одной тест-системы, позволяющей проверить наличие вируса, колеблется в пределах 800–2000 рублей в зависимости от производителя и способа выполнения анализа. Исследование выполняют следующим образом. На тест-полосу наносят образец биологического материала (слюна либо кровь) и ждут отведенное время. Появление одной контрольной полоски свидетельствует об отрицательном результате, две линии – о возможном инфицировании.

При подготовке к проведению обследования необходимо соблюдать такие правила:

• исключить токсическое влияние алкоголя на печень (отказаться от употребления спиртного за 5–7 дней до сдачи анализов);
• соблюдать диету с ограничением жирных, жареных, копченых блюд (стол №5) за неделю до проведения обследования;
• сдавать кровь строго натощак (прием пищи запрещен за 12–14 часов до забора крови);
• не курить за 8 часов до исследования.

Существует несколько способов проведения диагностики. Можно сдать кровь в частной лаборатории, где не требуется направлений от врача. Необходимые тесты выполняют по полису страхования, но перед этим придется получить направления у участкового терапевта или инфекциониста.

Нередко пациенты интересуются, покажет ли общий анализ крови гепатит С, ведь общеклинические исследования сдаются регулярно при вирусных заболеваниях и других, более распространенных инфекциях. Но изменения картины крови возникают далеко не всегда. Кроме того, подобные нарушения неспецифичны и не позволяют провести точную диагностику заболевания.

Приблизительно в 20–30% случаев возникают следующие изменения:

• снижение общего уровня лейкоцитов за счет лимфоцитов;
• уменьшение содержания гемоглобина;
• изменение уровня тромбоцитов за счет нарушений свертывающей системы крови;
• повышение параметров скорости оседания эритроцитов.

Еще одним способом, как обнаружить вирусное поражение печени, служат показатели биохимического исследования крови.

О возможном инфицировании свидетельствует повышение концентрации:

Нарушения функциональной активности печени проходят по мере приема противовирусных препаратов.

Диагноз гепатита С не ставят на основании результатов печеночных проб и стандартного клинического исследования крови.

Для получения полной картины состояния пациента необходимо проведение дополнительных инструментальных исследований. Это связано с длительным бессимптомным течением патологии. Нередко о наличии болезни пациент узнает на стадии фиброза, а при неблагоприятном прогнозе – на этапе цирроза либо злокачественной малигнизации гепатоцитов.

От состояния печени во многом зависит тактика терапии. При декомпенсированных формах цирроза прием таргетных противовирусных препаратов дополняется рибавирином, либо продолжительность лечения увеличивают до 24 недель.

Процедура проводится для определения стадии и степени цирроза, а также подтверждения злокачественного перерождения клеток (предварительно опухоль обнаруживают при помощи ультразвукового исследования). Пункцию выполняют в условиях стационара под местной анестезией.

Под контролем УЗИ специалист делает прокол и вводит в паренхиму печени специальную иглу с системой захвата, позволяющей взять образец биологического материала. Кусочек ткани помещают в специальную среду, при необходимости добавляют краситель и исследуют под микроскопом.

Противопоказанием к проведению процедуры служит паразитарное поражение печени и тяжелые нарушения системы свертывания. Кроме того, возможность выполнения манипуляции напрямую зависит от согласия самого пациента. Для принятия взвешенного решения врач должен подробно объяснить, для чего необходимы результаты биопсии, каковы риски при проведении процедуры.

Ультразвуковое исследование сочетает в себе высокую информативность, безболезненность и безопасность. В течение 15–20 минут доктор может получить подробные данные о размерах и структуре печени и других органов брюшной полости.

Как правило, УЗИ, проведенное на фоне гепатита С, демонстрирует:

• нарушения кровоснабжения органа;
• изменения, связанные с оттоком и секрецией желчи;
• наличие уплотнений, очагов воспаления, некроза, в тяжелых случаях возможно обнаружение новообразований;
• увеличение размеров печени.

По итогам УЗИ доктор поймет масштабы поражения печени, однако точная диагностика гепатита С возможна только по результатам анализа крови.

Сама техника выполнения обследования напоминает ультразвуковую диагностику. Эластометрия – неинвазивное безболезненное исследование, предназначенное для оценки плотности паренхимы печени. Таким образом доктор может определить стадию и тяжесть фиброза, при котором нормальная ткань органа замещается соединительной. Без соответствующей терапии и таргетного противовирусного лечения развивается цирроз печени.

Подобные методики информативны при диагностике цирроза и наличия злокачественных новообразований. Томограмма имеет ряд противопоказаний. Но подобное исследование гораздо информативнее УЗИ и эластометрии, позволяет в полной мере оценить состояние печени.

Самостоятельная диагностика вируса без проведения должных исследований и их грамотной расшифровки невозможна. Человек может предположить наличие инфекции по ряду симптомов, например, повышенной утомляемости, постоянной слабости, сочетающихся с расстройствами пищеварения. К группе риска относят людей, часто подвергающихся инвазивным медицинским или эстетическим процедурам, пренебрегающими барьерными методами защиты при случайных половых контактах.

Наиболее простой способ самостоятельной диагностики – проведение экспресс-теста либо сдача анализов в платной лаборатории. Однако при наличии характерной для вирусного поражения печени лучше пройти комплексное обследование под контролем врача.

Обследование на гепатит С при беременности является обязательным и выполняется дважды: при первой консультации у гинеколога и постановке на учет, а затем в середине последнего триместра. Доктор назначает анализы, выполняемые по методики ИФА. Но основная проблема заключается в получении ложноположительных результатов. После зачатия в организме женщины начинается выработка протеинов, близких по структуре к антителам к гепатиту С.

Поэтому позитивный ИФА при беременности не всегда является признаком инфицирования и требует подтверждения методом ПЦР. Также в период вынашивания ребенка возможно обследование органов брюшной полости при помощи УЗИ, иногда проводится эластометрия. Но при подтверждении диагноза лечение может навредить плоду. Поэтому назначают поддерживающие здоровье женщины медикаменты, а основную терапию начинают после родов.

Лечение гепатита С вполне реально как на острой, так и на хронической фазе. Но одно из условий успешной терапии – своевременная диагностика, когда еще возможно восстановление функциональной активности печени. Поэтому специалисты рекомендуют самостоятельно либо по направлению от врача сдавать соответствующие тесты, а при позитивном результате незамедлительно обращаться за медицинской помощью.

источник

Гепатит А считается врачами относительно мягкой формой инфекционного процесса из-за редких случаев хронизации заболевания, но в последнее время этот недуг приобретает более широкое распространение. Вирусный гепатит А является наиболее распространенной формой гепатита. Микробиологические исследования доказали, что передается от человека к человеку инфекция парентальным путем, с пищей и питьем.

В некоторых случаях может иметь место молниеносный гепатит, такая разновидность патологического процесса способна закончиться смертельным исходом. По этой причине пускать развитие недуга на самотек нельзя.

Развитие болезни происходит в три этапа:

• преджелтушная;
• разгара болезни — желтушная;
• реконвалесценции – выздоровления.

Сразу после инфицирования начинается инкубационный период, в течение которого, изменения не выявляются, этот период характеризуется накоплением вирусных частиц в организме.

Патогенез гепатита А сопровождается формированием в организме больного различных синдромов, представляющих собой комплексы симптомов, свидетельствующих о возникновении различных нарушений провоцируемых интоксикацией.

Диагностика гепатита А предполагает использование нескольких диагностических методов. При появлении подозрений на наличие указанной инфекции больной в первую очередь должен обратиться к врачу-инфекционисту для проведения экспресс-теста.

Для диагностирования наличия заболевания инфекционисту достаточно провести беседу с пациентом, в процессе которой выясняются особенности способа жизни человека. После проведения беседы врач осуществляет осмотр больного, обследует печень методом пальпации и ставит первичный диагноз.

Так как большинство симптомов у различных типов вирусных инфекций сходны между собой, поэтому требуется лабораторная диагностика гепатитов.

После первичного осмотра и обследования врач дает направление на анализы.

Проведение лабораторной диагностики гепатита А во многом сходно с лабораторной диагностикой гепатита С.

При проведении первичной диагностики вирусного гепатита А показательной будет следующая информация:

1. Посещал ли пациент в последнее время страны Азии и Африки, где недостаточно развита работа коммунальных служб. Это связано с тем, что передача инфекции осуществляется пищевым и водным путем.
2. Соблюдает ли человек элементарные гигиенические правила.
3. Важной является информация о том, контактировал ли пациент с больными гепатитом А.

На основании полученной информации врач может сделать предварительное заключение и проводить дальнейшую диагностику заболевания. Одновременно с проведением осмотра врач выясняет, как осуществляет функционирование пищеварительная система пациента, присутствуют ли признаки мышечной интоксикации. При проведении процедуры пальпирования доктор определяет размеры печени.

Очень часто течение заболевания происходит в безжелтушной форме, но опытный врач проводит осмотр склер глаз, появление даже небольшой желтушности говорит о возможном факте инфицирования организма.

В качестве первичного метода диагностики на наличие у пациента вирусной инфекции можно использовать экспресс-тест на определение антигена вируса гепатита А в составе кала или крови.

Фармацевтическая промышленность предлагает использовать два вида тестовых наборов – тест компании Vegal и иммуноферментные тест-системы Vintrotest Vitrotest HAV-IgM TK069.

Первая разновидность экспресс-тестов включает в своем составе весь комплект необходимых реактивов и инструментов. Для проведения исследования требуется не более 15 минут. Этот способ не дает 100% точности.

Иммуноферментные тест-системы Vintrotest Vitrotest HAV-IgM TK069 позволяют достаточно быстро определить присутствие антител IgM к вирусным частицам. Это исследование позволяет получить результат в домашних условиях уже через 15 минут.

Использование результатов гемотестов, несмотря на большое количество положительных отзывов о них, не могут использоваться в качестве единственного способа проведения диагностики.

После использования такого метода рекомендуется провести дополнительные лабораторные исследования. Помимо этого, в связи с тем, что появляющиеся симптомы могут свидетельствовать о наличии в организме не только гепатита, а также, например, у взрослых людей алкогольного гепатоза и некоторых других заболеваний печени. По этой причине требуется проведение дифференциальной диагностики. Дополнительно нужно установить какая разновидность вируса поразила организм и спровоцировала появление болезни.

Проведение диагностических мероприятий при подозрении на наличие патологии требует проведения целого комплекса исследований.

При диагностировании недуга применяются лабораторные и инструментальные методы проведения исследований.

Показательные данные позволяет получить биохимический анализ крови и мочи.

В том случае, если выявлены повышенный билирубин, а также увеличенная концентрация печеночных ферментов, то это означает, что развивающийся в организме гепатит уже привел к нарушению работы клеток печеночной паренхимы.

Проведение детальной расшифровки анализа крови и мочи позволяет определить в некоторых случаях степень повреждения печени и организма в целом.

Наиболее показательными лабораторными методами диагностики гепатита А являются:

• анализ мочи;
• общий анализ крови;
• биохимия крови;
• коагулограмма.

Лучше всего сдавать анализы натощак, это позволит получить наиболее точные результаты.

Присутствие вируса в организме можно увидеть по анализу мочи, при появлении в ней билирубина, она начинает светлеть. У здорового человека в моче оно не выявляется, при наличии гепатита А наблюдается повышение концентрации в составе мочи уробилиногена. При тяжелом течении патологии в моче выявляется наличие низкомолекулярных плазменных белков, которые не должны выявляться в моче здорового человека.

При общем анализе крови при гепатите А наблюдается снижение концентрации гемоглобина и лейкоцитов. Помимо этого фиксируется снижение концентрации тромбоцитов. Эти изменения свидетельствуют о наличии аномальных процессов в печени.

Биохимия крови позволяет выявить отклонения в концентрации печеночных ферментов. Такие отклонения свидетельствуют о патологических нарушениях в функционировании печени и разрушении гепатоцитов.

После проведения первичного осмотра и лабораторных анализов можно поставить диагноз, но для качественной диагностики требуется проведение дополнительных тестов и исследований.

После ряда анализов врач-инфекционист направляет больного для количественных и качественных обследований гепатита А.

Существует ряд методик, позволяющих определить количество вируса в организме и степень его агрессивности.

Наиболее распространенными методами проведения такой диагностики являются:

1. Иммуноферментная диагностика.
2. Ультразвуковое исследование.
3. Полимеразная цепная реакция.

Наиболее точной и специфической диагностикой является выявление РНК вируса в крови при помощи ПЦР.

Для точного определения наличия антител к вирусу необходимо проверить кровь на маркеры. Специфическими маркерами являются иммуноглобулины класса М анти-HAV IgM. Наличие этого компонента можно установить с первых дней после проникновения патогена в организм при помощи методики ИФА.

Иммуноглобулины появляются в организме больного в первые месяцы развития патологии. Выработка антител у больного происходит в независимости от тяжести, формы и симптомов болезни. Эти антитела носят название ранних, это связано с тем, что спустя полгода после инфицирования их уже невозможно выявить методом ИФА в организме. Спустя 6 месяцев наблюдается их возврат в крови пациента, после возвращения анти тела способны сохраняться в составе крови на протяжении всей жизни.

Наличие указанных антител к вирусу является доказательством того, что человек инфицировался гепатитом А и у него выработался иммунитет к этому патогену. Аналогичные антитела появляются у человека, если ему делалась прививка против вируса в качестве профилактики развития патологии.

Для определения наличия маркеров требуется сдать кровь для проведения лабораторных тестов. Сотрудники клинической лаборатории в процессе проведения тестов имеют возможность выявить не только само наличие антител, но и их количество в организме пациента.

Эта методика определения патологии относится к высокоточным лабораторным методам, требующим наличие специального оборудования и реактивов.

Применение ультразвукового исследования позволяет выявить наличие нарушений вызванных инфекционным процессом в структуре и форме печени. Такие нарушения являются частым спутником при развитии у человека гепатита А.

В процессе исследования выявляется наличие пятен на органе что говорит о повышении эхогенности, наличие уплотнений может свидетельствовать о развитии в печени цирроза.

УЗИ может помочь диагностировать присутствие в железе любых серьезных изменений на самых ранних стадиях их прогрессирования. Так, например, при помощи ультразвука выявляются нарушения, возникающие в результате развития холестаза и цитолиза гепатоцитов.

УЗИ может быть назначено человеку для подтверждения наличия вирусной инфекции даже в случае наличия у него на руках результатов ИФА, это требуется для того чтобы определить полную картину развивающихся патологических изменений в тканях железы.

Для получения максимально точной картины нарушений УЗИ рекомендуется проводить натощак, а за два дня до процедуры исключить из рациона питания такие продукты как:

Исключение указанных компонентов из рациона связано с тем, что они усиливают процессы газообразования, а это в свою очередь приводит к неточностям при проведении ультразвукового обследования.

Метод ПЦР дает возможность определить уровень нуклеиновых кислот и присутствие чужеродной ДНК или РНК.

Использование ПЦР позволяет выявить генетический материал патогена еще на самой начальной стадии, когда в составе крови отсутствуют антитела. Эта методика диагностики является наиболее многогранной и точной, что позволяет проводить наиболее раннюю диагностику заболевания.

Использование этого метода оправдано в тех случаях, когда требуется получение наиболее точного результата в максимально короткие сроки для предотвращения распространения инфекционного процесса.

Недостатком методики является высокая стоимость инструментов необходимых в процессе анализа, а также его недоступность в целом ряде стран с высокой степенью распространения вирусной инфекции.

Методика ПЦР дает возможность определить чувствительность вируса к определенным противовирусным препаратам и определяет точное расположение очагов заболевания – мест наибольшего скопления частиц патогена. Наличие у лечащего врача такой информации позволяет подобрать наиболее оптимальный вариант проведения терапевтических мероприятий.

Специфичность методики составляет около 98%. Наличие у ПЦР высокой степени чувствительности позволяет его использовать, как наиболее показательный при проведении диагностики гепатита А.

источник

Вирусные гепатиты — инфекционные воспалительные заболевания печени, самая распространённая в мире патология среди других печёночных поражений. В зависимости от вида вирусного гепатита диагностика заболевания базируется на клинических симптомах и лабораторных исследованиях. Большую роль играет тщательно выясненный анамнез заболевания и эпидемиологический анамнез. Выделяют несколько форм вирусного гепатита с учётом разновидности возбудителя, клинических проявлений, течения и тяжести болезни. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов во многих случаях является единственным методом, позволяющим точно установить заболевание. В настоящее время выявлено и изучено несколько видов вирусов с гепатотропным действием (А, В, С, Д, Е), которые вызывают сходную клиническую картину. Из — за малосимптомности и трудности диагностики гепатита С, он считается самым тяжёлым из всех известных видов.

Он имеет фекально — оральный путь передачи, что делает его широко распространённой инфекцией. Диагностика гепатита А не представляет больших трудностей. Инкубационный период относительно короткий – от 7 до 50 дней; характеризуется острым началом: появляется высокая лихорадка, выраженный астенический синдром, боли во всех суставах — клинически напоминает грипп. Длительность заболевания — 1 месяц. Лёгкое течение заболевания иногда не требует особых лечебных мероприятий, бывают случаи самоизлечения.

Для субклинического течения лабораторная диагностика гепатита В является единственным точным методом для верификации диагноза – в крови определяются антиген вируса и антитела к белку возбудителя, а также ДНК ВГВ. Пути передачи:

• парентеральный – через кровь;
• половой – через сперму;
• вертикальный: от матери — плоду (через молоко матери вирус ребёнку не передаётся).

Инфекция попадает в организм при использовании грязных шприцов (использование одной иглы наркоманами), через инструменты (при проведении оперативных вмешательств, татуажа, иглоукалывания, прокалывания ушей, маникюра, педикюра), при гемотрансфузиях. Скрытый период — от 2 месяцев до полугода. Симптомы напоминает начало вирусного гепатита А: развивается гриппоподобный синдром, появляется ломота во всём теле и в суставах, сильная слабость, недомогание. Иногда возникают высыпания. Прогноз при остром гепатите относительно благоприятный: в 80% случаев наступает выздоровление. Субклиническая форма болезни часто приобретает хроническое течение – добиться полного излечения в таких случаях удаётся редко.

Одновременно при многих случаях заболевания определяется спутник гепатита В – вирус Д (дельта), вызывающий вирусный гепатит Д и усугубляющий течение основного заболевания.

Вирусный гепатит Е по клиническим симптомам напоминает ВГА, но имеет постепенное начало и гораздо опаснее для беременных.

Лабораторная диагностика гепатита С (ВГС) в лабораторных условиях особенно важна, т. к. ним заражены около 3% населения земного шара. Ежегодно заболеваемость повышается — это связывают с неуклонным ростом наркомании в мире.

Внимание! Вирусный гепатит С относится к самым опасным и тяжёлым среди известных форм инфекционных поражений печени. Его называют «ласковым убийцей» из — за субклинического течения на протяжении длительного времени, а затем быстрого исхода в цирроз с возможным летальным исходом. Сочетание ВГС с другими формами инфекционного гепатита значительно утяжеляет течение болезни и ускоряет смертельный исход.

Острый ВГС протекает бессимптомно, поэтому диагностируется крайне редко. Если же удаётся выявить заболевание в этой фазе, то при своевременном начале лечения в 20 % может наступить выздоровление.

ВГС чаще всего наблюдается в хронической форме, на её поздних стадиях. Хронизация процесса происходит в 50% случаев.

При бессимптомном носительстве вируса С клетки печени постепенно повреждаются, развивается фиброз. В дальнейшем, если не проведено своевременное лечение, повышается риск возникновения цирроза или рака печени.

Диагностика вирусного гепатита при любой его форме основывается на определении:

• возбудителя и его репликации;
• маркеров инфицирования.

Методы диагностики включают иммунохимические и молекулярно – биологические реакции, благодаря которым выявляются:

• антигены возбудителя;
• антитела к вирусу;
• нуклеиновые кислоты.

Вирус С (ВС) имеет в своём геноме однонитчатую РНК. Он является единственным среди возбудителей вирусных гепатитов, имеющих такое строение. И носитель, и больной могут не догадываться об имеющемся у них вирусе. Поэтому для выявления патологии при неясном диагнозе необходимо проведение ряда исследований и диагностических тестов.

Геном вируса С (его РНК) состоит из 10 тысяч нуклеотидных оснований. Такая высокая гетерогенность определяет особенности ВГС. При изучении нуклеотидов РНК выявлены значительные различия в их строении. С учётом обнаруженных структурных особенностей создана классификация ВГС, согласно которой выделяют:

• варианты (их существует 6 — 9);
• подтипы;
• генотипы.

Одни из них встречаются во всех без исключения странах мира, некоторые — локально в определённых регионах. При проникновении в организм вирус С встраивается в цепочку нуклеотидов молекулы РНК. Он постоянно мутирует (видоизменяется), и человек может стать носителем сразу 50 подтипов одного генотипа вируса. Иммунная система не успевает за быстрой мутацией: вырабатываются антитела на одну группу вируса, болезнь становится хронической.

Диагностирование ВГС стало реальностью с появлением молекулярной биологии. Объясняется это крайне низким содержанием вируса в крови, что не позволяет выделять его антигены имеющимися ранее методами.

При подозрении на ВГС лабораторная диагностика направлена на определении:

• антител (Ig G, Ig M) методом ИФА (иммуноферментного анализа);
• РНК вируса с использованием ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Внимание! Серологические маркеры гепатита С – это РНК — ВГС и антитела, которые образуются в организме.

РНК — ВГС относится к ранним маркерам ВГС: его появление в крови происходит на 10 — 12 день после заражения, т. е. гораздо раньше повышения аминотрансфераз (AST, ALT, GGT). Обнаружение РНК – ВГС указывает на активную репликацию (размножение) вируса. Это «золотой стандарт» диагностики, поскольку уточняет и подтверждает диагноз даже в период, когда симптомы болезни практически отсутствуют. ПЦР необходимо проводить для контроля результатов ИФА. Она выполняется в качественном и количественном вариантах.

Вирусная нагрузка считается высокой при ПЦР > 800 тысяч МЕ/мл или 2 миллиона копий/мл; низкой – при ПЦР ИФА — определение антител к вирусу

Иммунная система человека при попадании любого инфекционного агента вырабатывает антитела (Ig G, Ig M) к возбудителю. Образовавшиеся иммуноглобулины создают прочный комплекс с чужеродным белком (с антигеном вируса), количественные и качественные параметры которого определяются при проведении ИФА. Относится к непрямым методом обследования: при проведении выявляется не сам вирус, а возникает иммунный ответ организма на внедрившийся инфекционный агент. ИФА проводят для ранней диагностики, наблюдения процесса в динамике.

Антитела выявляются у 80% заражённых только к 5 — 6 неделе после начала болезни, у 90% — к 12 неделе. Иногда эти анализы дают ложноположительные ответы. Для таких случаев существуют специальные тесты — определяется спектр белков антител способом рекомбинантного иммуноблотинга.

Для достижения достоверных результатов обследование методами ПЦР и ИФА проводится дважды с некоторым промежутком времени. Как правило, временной отрезок составляет 6 месяцев.

Для уточнения активности процесса в печени, для определения тактики лечения, определяются печёночные пробы:

• трансаминазы крови (ALT, AST, GGT);
• общий билирубин и его фракции;
• щелочная фосфатаза (ЩФ);
• общий белок с фракциями.

В зависимости от полученных результатов лабораторных исследований применяется разная тактика ведения больного:

• При нормальных цифрах пациент находится под наблюдением врача. При изменениях в самочувствии анализы повторяются.
• При увеличении показателей в 2 и более раз проводится ИФА на анти — HCV.
• Если иммуноферментный анализ выявился положительным, используется ПЦР — полимеразная цепная реакция, по результатам которой проводится подбор противовирусной терапии.
• При повышенных в 2 раза и более показателях печёночных проб, но отрицательном ИФА, либо при повышении печёночных проб в 2 раза, положительном ИФА и отрицательной ПЦР продолжается динамическое наблюдение с осмотром и контролем биохимических анализов крови 1 раз в 3 месяца.
• При высоких биохимических показателях, положительных результатах ИФА и ПЦР проводят клиническую диагностику, подбирают противовирусный препарат, контролируют лечение.

По результатам биохимического анализа крови оценивается уровень аминотрансфераз.

• ALT — аланинаминотрансфераза — входит в состав гепатоцитов. Даже небольшое превышение нормы указывает на имеющийся гепатит (в т. ч. и вирусный) на ранних стадиях.
• AST — аспартатаминотрансфераза: если её уровень превышает показатели ALT, это показатель начинающегося фиброза (разрастания соединительной ткани).

Высокие показатели ALT, AST в крови является результатом некроза печёночной клетки. Они являются косвенным показателем активности воспалительного процесса. Если уровень ALT превышают норму в 3 раза, речь идёт о минимальной активности, в 3 — 10 раз —умеренная активность воспалительного процесса, более, чем в 10 раз — гепатит с высокой активностью.

Уровень AST изменяется и при других патологиях, ALT считается более специфичным для болезней печени.

• Увеличение уровня общего и прямого билирубина происходит при повышенном образовании или замедленном выведении его из организма. Вирусные гепатиты протекают с нарушением выведения билирубина. Иктеричность слизистых и склер наблюдается при уровнях билирубина выше 30 — 35 ммоль/л, при дальнейшем его накоплении желтеет кожа. При хроническом течении этого не происходит.
• Повышение щелочной фосфатазы (ЩФ), гаммаглютаминтрансферазы (GGT), холестерина и жёлчных кислот характерно для синдрома. Но болезни печени — это не единственная причина их повышения.
• Увеличение альбумина связано с нарушенной синтетической функцией печени.

В пользу вирусного гепатита С свидетельствуют клинические проявления. Хроническое течение характеризуется скудной симптоматикой: беспокоят недомогание и повышенная усталость к концу дня, снижение толерантности к привычным физическим нагрузкам. При нормальных биохимических анализах подобные клинические проявления редко связывают с вирусным гепатитом. Развёрнутая клиническая картина появляется на поздних стадиях: появляются телеангиэктазии и печёночные «звёздочки», гепато – и спленомегалия, желтушность склер, кожных покровов и слизистых полости рта, зуд кожи (при очень высоком уровне билирубина в крови), тёмная моча, обесцвеченный кал, кровоточивость, похудание, печёночные ладони.

Внимание! При наличии хронической формы ВГС может с высокой вероятностью развиться рак печени, поэтому необходимо через определённые промежутки времени (1 раз в полгода) исследовать кровь на онкомаркеры и альфа — фетопротеины.

Кроме лабораторных методов существуют дополнительные методы обследования, которые играют важную роль в диагностике ВГС. К ним относится УЗИ ОБП. При этом методе обследования изучается состояние органов брюшной полости. Определяются размеры, плотность, строение, расположение органов, выявляют объёмные образования, конкременты, нарушение оттока жёлчи, размеры портальной и селезёночной вены. Спленомегалия, гепатомегалия, расширение портальной вены указывают на гепатит с переходом в цирроз. Необходимо дальнейшее обследование, серодиагностика для исключения или подтверждения вирусного гепатита С.

Метод косвенной диагностики, эквивалент биопсии — фибросканирование (эластометрия): неинвазивный, безопасный, может проводиться неоднократно для контроля терапии. Показаниями для проведения эластометрии являются подозрения на патологические процессы в печени, в т. ч. – наличие вируса.

Существует также много диагностических тестов, которые являются альтернативой биопсии печени. Тесты дают возможность определить точную морфологическую картину поражённого органа, имеющегося фиброза, стеатоза, некроза или воспаления. Некоторые из них:

• ФиброТест — с его помощью проводится комплексный анализ 5 биохимических показателей и своевременная диагностика стадий фиброза.
• АктиТест — определяет 6 биохимических показателей и даёт возможность диагностировать некрозовоспалительный процесс в печени.

Внимание! Прогноз ВГС зависит от своевременной диагностики, от степени заражения и от желания больного излечиться. Современные терапевтические методы с применением противовирусных препаратов дают возможность вылечить болезнь или добиться длительной ремиссии, продлевая жизнь и улучшая её качество у инфицированного человека или носителя. Вирусный гепатит С, несмотря сложную диагностику и длительное лечение, не является приговором. Нужно вовремя обратиться к врачу для получения качественной медицинской помощи и тщательно выполнять все его назначения.

источник

Диагностика начинается с обследование больного. Для правильной и своевременной постановки диагноза «вирусный гепатит» врачи сначала обследуют пациента, направляют его на сдачу анализов крови и мочи.

В первую очередь они обращают внимание на такие характерные для начального периода этого заболевания симптомы, как вялость, общая мышечная слабость, снижение аппетита, тошнота, неприятные ощущения в животе, потемнение цвета мочи, увеличение и уплотнение печени, повышение болевой чувствительности ее нижнего края. В общем анализе крови врачи обращают внимание на содержание лейкоцитов, лимфоцитов, СОЭ.

Прибегают к проведению биохимических анализов крови и мочи для того, чтобы оценить степень поражения печени и подтвердить, связана ли желтуха с воспалением печени. Наиболее показательным является уровень желчного пигмента — билирубина, образующегося в печени в результате распада эритроцитов.

В норме билирубин связывается белками крови и не оказывает токсического действия на ткани организма. При гепатитах концентрация свободного и связанного билирубина в крови резко повышается. Когда она превышает 200–400 мг/л, желтуха становится видимой на глаз.

Говорит о повреждении гепатоцитов возрастающий уровень активности трансаминаз — АлАТ и АсАТ, которые попадают в кровь из клеток печени сквозь поврежденные оболочки. Существуют также специальные тесты на состояние системы свертывания крови, в которой участвуют белки, синтезируемые в печени. Диагностическое значение имеет положительная реакция мочи на уробилин.

Свидетельствующим о нарушении функции печени, является показателем — тимоловая проба. Изменение протромбинового индекса характеризует тяжесть течения вирусного гепатита, а повышение активности щелочной фосфатазы, общего билирубина свидетельствуют о нарушении секреторной функции печени. Реакция мочи на желчные пигменты в начале болезни бывает положительной значительно реже.

В диагностике немаловажное значение, как острых, так и хронических форм вирусных гепатитов отводится ультразвуковому обследованию органов брюшной полости. С помощью этого метода врачи могут определить такие изменения, которые не обнаруживаются при внешнем обследовании: увеличение печени, сужение печеночных вен, уплотнение и утолщение их стенок, признаки воспаления желчного пузыря и поджелудочной железы, расширение воротной и селезеночной вен, увеличение селезенки, увеличение лимфатических узлов. Важнейшим методом диагностики, в особенности хронических гепатитов, является биопсия печени.

Методы обнаружения антител и антигенов в крови и других жидкостях организма включает в себя серологическая диагностика. Для ранней диагностики вирусных гепатитов, в том числе безжелтушных, бессимптомных форм, в сыворотке крови определяют наличие вирусных белков (антигенов, которые еще называют маркерами вирусных гепатитов) или антител к ним с помощью иммупоферментного анализа (ИФА). Кроме того, ИФА по возможности дополняется полимеразной цепной реакцией (ПЦР), позволяющей определить наличие в сыворотке крови вирусных нуклеиновых кислот — ДНК вируса гепатита В, РНК вирусов других гепатитов, что особенно важно для начала своевременного лечения.

Иммуноферментный анализ (ИФА) — является универсальным методом иммунологической диагностики, который широко используется на практике. Он предназначен для выявления вирусных белков (антигенов) или антител, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на проникновение вирусов в организм человека. Эти белки являются своеобразными маркерами (метками) или признаками, наличие которых позволяет поставить точный диагноз, оценить характер заболевания, помочь лечащему врачу выбрать правильное лечение. Этот метод основан на известном взаимодействии «антиген-антитело».

Для определения антигенов различные коммерческие фирмы выпускают тест-системы, которые представляют собой 96-луночные полистироловые планшеты. На дно лунок заранее сорбируют («пришивают») антитела к тому или иному антигену возбудителя, например, к поверхностному антигену вируса гепатита В — HBs-антигену.

На первом этапе в каждую лунку добавляют образец, например, сыворотку крови больного в разных разведениях, содержащую пока не определенный вирусный белок (антиген). Если этот белок (антиген) «узнал» свое антитело, то происходит их связывание. Это означает, что сыворотка больного содержит тот антиген, антитела к которому сорбированы на дне планшетки.

Для того чтобы увидеть результаты этой реакции, существует следующая стадия, на которой к комплексу «антиген-антитело» добавляют соединение, которое связывается с антителом. Это соединение содержит фермент, например, пероксидазу хрена. При добавлении к нему субстрата происходит расщепление последнего с последующим окрашиванием раствора в желто-коричневый цвет.

На следующей стадии проводят тщательную промывку каждой лунки от непрореагированных компонентов. В тех лунках, где антиген, как в нашем случае, полностью связан с антителом, он уже не может взаимодействовать с добавляемым соединением.

Поэтому оно удаляется из лунки при отмывании. По мере разведения сыворотки содержание в ней антител снижается, и они уже не в состоянии полностью связать антиген. В этих лунках соединение, содержащее фермент, связывается с антигеном и остается в лунке после промывания. На следующей стадии добавляют субстрат и смотрят результаты реакции, которые оценивают визуально или с помощью спектрофотометра.

Таким образом, мы выявили, что в образце сыворотки от больного содержится HBs-антиген. Можно также выяснить его количество или титр, определив то последнее разведение сыворотки, где появилось желтое окрашивание. Чем больше степень разведения, тем больше вируса содержится в крови больного.

Подобным образом можно определить наличие антител к тому или иному возбудителю вирусного гепатита. Только в этих случаях используют диагностические тест-системы с «пришитыми» на дно лунок не антителами, а известными антигенами. Достоинствами этого метода являются высокая чувствительность и специфичность, простота постановки реакции, возможность обследования одновременно большого количества пациентов. Среди недостатков метода можно отметить необходимость специального дорогостоящего оборудования и соответствующей квалификации персонала.

В современной лабораторной диагностике ПЦР занимает особое место. Метод ПЦР поднял клиническую лабораторную диагностику па принципиально иную высоту — уровень определения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), что позволяет провести прямое обнаружение инфекционного агента или генетической мутации в любой биологической среде.

При этом способом ПЦР теоретически может быть обнаружена одна искомая молекула нуклеиновой кислоты среди миллионов других. С точки зрения клинической медицины определение нуклеиновой кислоты равнозначно обнаружению возбудителя в объекте исследования.

Из биологии известно, что нуклеиновые кислоты (ДНК или РНК) обладают свойством к саморепродукции (воспроизводству). Этот принцип и лежит в основе метода ПЦР, когда этот процесс осуществляется искусственно в лабораторных условиях. Для этого из полученного от больного образца ткани (например, в случае подозрения на вирусный гепатит) выделяют сначала нуклеиновую кислоту.

Она выполняет роль своеобразной «матрицы», на которой осуществляется синтез. Нуклеиновая кислота имеет свой «отпечаток» — уникальную последовательность нуклеотидов, из которых она состоит. Для каждого возбудителя такая последовательность изучена, составлена своеобразная «карта».

Самый главный элемент в ПЦР — это праймер (короткие участки ДНК, комплементарные (соответствующие) участкам выделенной из образца нуклеиновой кислоты). Праймеры обеспечивают запуск и специфичность реакции.

Таким образом, тест-система для ПЦР состоит из смеси нуклеиновых кислот испытуемого образца, праймера и специальных ферментов (полимераз)) с помощью которых эта реакция невозможна. ПЦР-анализ включает несколько циклов (этапов), в результате которых получаются точные копии распознаваемого участка матричной нуклеиновой кислоты. Эти циклы повторяются 30–50 раз в соответствии с заданной программой. Конечный продукт этой реакции распознается с помощью метода электрофореза в геле.

Одним из важнейших критериев диагностической эффективности любого лабораторного анализа является показатель «чувствительности». При этом следует различать аналитическую и диагностическую чувствительность. Аналитическая чувствительность, применительно к ПЦР, представляет собой то минимальное количество копий ДНК или РНК в 1 мл раствора образца, которое может быть определено данной тест-системой.

Большинство коммерческих тест-систем позволяет обнаружить в биологической пробе искомую нуклеиновую кислоту, даже если ее концентрация составляет несколько сот копий в 1 мл образца. С этим связано общее положение, определяющее клиническую пригодность любых лабораторных способов диагностики или тест-систем — диагностическая чувствительность метода не должна быть ниже 95–98 %.

Второй универсальный критерий лабораторной эффективности — «специфичность», которая определяется процентом здоровых людей, имеющих истинно отрицательные результаты анализа. Метод ПЦР обладает высочайшей специфичностью, которая достигает 99-100 %.

Диагностическая чувствительность и специфичность ПЦР сопоставимы, а зачастую и превосходят показатели, обеспечиваемые другими методами, которые являются «золотым стандартом» в диагностике инфекционных заболеваний.

Результаты ПЦР-анализа можно получить в течение одного рабочего дня, при этом отобранные для анализа пробы могут храниться (накапливаться) в течение даже нескольких недель при соблюдении соответствующих температурных норм. Проведенная недавно в нескольких зарубежных исследовательских центрах суммированная оценка чувствительности различных методов диагностики показала, что ИФА имеет чувствительность 50–70 %, а ПЦР — от 90 до 100 %.

ПЦР, по сравнению с ИФА и другими способами, обладает двумя важными преимуществами: высокой чувствительностью и непродолжительностью анализа по времени, то есть «актуальностью» получения результата исследования врачом и пациентом.

— метод позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК даже в тех случаях, когда с помощью других способов это сделать невозможно;

— метод обладает высокой специфичностью (до 100 %). Она обусловлена тем, что в исследуемом «материале определяется уникальный фрагмент нуклеиновой кислоты, характерный только для данного возбудителя или гена;

— возможность проведения не только качественной (наличие), но и количественной (концентрация) оценки содержания нуклеиновой кислоты. В настоящее время с помощью коммерческих тест-систем можно определять несколько сот копий в исследуемом образце;

— высокая технологичность и автоматизация метода позволяют врачу получить результаты исследования и ознакомить с ними пациента в день проведения анализа;

— ПЦР позволяет выявить возбудителя в организме еще до развития заболевания, например, в инкубационном периоде;

— для проведения ПЦР—анализа достаточен минимальный объем пробы (до нескольких микролитров);

— ПЦР-анализ позволяет одновременно диагностировать несколько возбудителей заболеваний в одной пробе без ущерба для чувствительности или специфичности результата;

— полученные результаты ПЦР можно вносить в компьютерные информационные носители или фотографировать для дальнейшей оценки независимыми экспертами.

Несмотря на вышеуказанные достоинства метод ПЦР все же не лишен некоторых недостатков, которые следует учитывать при оценке результатов исследований:

— высочайшие требования к оснащению лаборатории, качеству тест-систем и строжайшее соблюдение регламента исследования во избежание получения ложных результатов. Решение проблемы качества анализов возможно при соответствующей квалификации персонала и обязательной сертификации лаборатории;

— неоднозначная оценка положительного результата ПЦР. Именно этот факт зачастую является необоснованным аргументом врачей-практиков для сомнения в полученном результате и эффективности метода ПЦР. Например, у лиц с обнаруженной в крови методом ПЦР ДНК возбудителя клинически заболевание может развиться не всегда.

В данной ситуации при оценке ПЦР-анализа следует говорить об инфицированное больного, а не о развитии инфекционной болезни. Метод ПЦР — анализа позволяет определять наличие или отсутствие возбудителя, в значительной мере отвечает на вопрос «лечить не лечить», а также дает возможность оценить качество лечения путем контроля наличия или отсутствия возбудителя. Врач, оценивая итог ПЦР-анализа, осознает, что этот результат является не единственным аргументом в принятии решения о начале лечения или отказе от него.

Для каждого вида возбудителя вирусных гепатитов разработаны тест-системы, но наиболее ценным метод ПЦР оказался в диагностике вирусов гепатитов В, С, D, G. Метод ПЦР является крайне важным для диагностики гепатита В. Это связано с тем, что среди множества разновидностей этого вируса встречаются мутантные (с измененными признаками), которые не определяются обычными серологическими тестами.

Метод ПЦР-анализа позволяет выявить, и какой форме находится вирус гепатита 15, способен ли он к самостоятельному размножению или интегрировался (встроился) в ДНК клетки-хозяина. Это имеет крайне важное клиническое значение, так как при интегративной форме этой инфекции человек не заразен для окружающих (безопасность для полового партнера, профессиональная пригодность, отсутствует риск вертикальной передачи вируса от матери к плоду и т. п.).

Кроме того, таким пациентам не показана противовирусная терапия, более того — она даже опасна. Вместе с тем, при интегративной форме инфекции резко возрастает (более чем в 200 раз) вероятность развития рака печени. Таким людям необходимо не менее одного раза в год проходить комплексное клинико-лабораторное и инструментальное обследование.

Метод ПЦР может выступать в качестве арбитра для определения необходимости начала лечения и контроля его эффективности. Быстрое исчезновение из крови ДНК вируса гепатита В является прямым и надежным тестом успешного исхода противовирусного лечения.

Таким образом, определение ДНК вируса гепатита В в плазме крови является важнейшим анализом, который в совокупности с другими лабораторными исследованиями позволяет объективно диагностировать инфекцию, определять характер инфекционного процесса, выступать в качестве критерия в проведении терапии и оценки ее эффективности.

Метод ПЦР—анализа не имеет себе равных и в диагностике, оценке прогноза и успеха противовирусной терапии инфекции, вызванной вирусом гепатита С. Применение ПЦР позволяет выявлять вирус гепатита С на самом раннем этапе инфекционного процесса, поскольку РНК вируса гепатита С может обнаруживаться в сыворотке крови уже через неделю после инфицирования. С помощью этого метода определяют генетические разновидности этого вируса, которые позволяют врачу назначить правильное лечение.

В случае вирусного гепатита D метод ПЦР-анализа позволяет определить вирусную РНК в сыворотке крови пациента, а также смешанную гепатит В и D инфекцию. Поэтому данный метод исследования может использоваться для контроля эффективности лечения, прогноза течения и исхода болезни. Врачу важно определить, имеется ли смешанная инфекция, так как гепатит D усиливает некротический эффект при гепатите В, а, стало быть, повышает риск его развития.

Метод ПЦР-анализа в настоящее время остается единственным способом доказать наличие заражения вирусом гепатита С.

Гепатит Е. Основными диагностическими признаками вируса гепатита Е являются: предположение о водном механизме передачи, возраст больного от 20 до 40 лет, распространение в регионах преимущественно тропического и субтропического пояса, клинические проявления подобно гепатиту А с преобладанием легких форм, регистрация тяжелых форм с угрозой летального исхода у беременных женщин во второй половине беременности, реже — в раннем послеродовом периоде и у кормящих матерей (протекают с интенсивным гемолизом, гемоглобинурией, острой почечной недостаточностью и тяжелым тромбогеморрагическим синдромом). Подтверждает диагноз выявление антител в крови.

Гепатит В. Вирусный гепатит В врачи подозревают в случае, если заболевшему за 45-180 дней до начала болезни переливали кровь или ее компоненты (эритроцитарную, лейкоцитарную, тромбоцитарную массу), проводили оперативные вмешательства, исследования внутренних органов, многочисленные инъекции (в том числе наркотиков), или, что случается гораздо реже, если больной имел половой или тесный контакт с больным гепатитом В. Критерием раннего подтверждения диагноза служит обнаружение в крови HBs, НВе и НВс-антигенов, а также вирусной ДНК.

Гепатит С. В отличие от гепатита В, в диагностике которого учитываются антигенные и антительные маркеры, при гепатите С методом ИФА улавливаются только антитела, что связано с низкой концентрацией вируса в крови. Антигены вируса гепатита С могут быть обнаружены в биоптатах печени.

Лабораторная диагностика включает в себя три основных вида анализов.

Определение антител. Несмотря на высокую специфичность, современные диагностические иммуноферментные системы не застрахованы от гипердиагностики, то есть отложноположительных результатов. Для их исключения также требуется оценка на основе результатов анализов, полученных через разные промежутки времени. Возможны и ложноотрицательные результаты, когда антивирусные антитела не удается обнаружить, несмотря на присутствие вируса в организме. Это бывает в следующих случаях:

— начальный период заболевания;

— во время приема больными иммунодепрессантов — препаратов, подавляющих иммунную систему;

— при заражении некоторыми генотипами (прежде всего 3 и 4).

В настоящее время выпускаются коммерческие тест-системы для выявления антител к вирусу гепатита С 1-го генотипа. Однако такие тесты могут быть недостаточно эффективны для надежного определения антител при инфицировании вирусом иного генотипа. Это имеет огромное значение для регионов, где превалируют вирусы других типов. Таким образом, для эффективной диагностики гепатита С необходим высокочувствительный тест, способный реагировать с антителами к вирусу гепатита С любого генотипа.

Определение вирусной РНК. С диагностической целью производится обнаружение РНК вируса гепатита С. На сегодняшний день этот тест считается «золотым стандартом» в диагностике гепатита С. Для этого наиболее широко используется классический вариант полимеразной цепной реакции (ПЦР). С ее помощью удается следить за размножением вируса, а также судить о присутствии его в печени и других тканях. Определение РНК наиболее часто применяют для подтверждения результатом выявления антител, постановки раннего диагноза острою гепатита (вирусную РНК удается обнаружить уже на 7-21-й день после инфицирования, то есть задолго до появления первых антител), для наблюдения за беременными в перинатальный период заражения и контроля за эффективностью антивирусной терапии.

Данные этих двух анализов хорошо дополняют друг друга. Положительные результаты ПЦР-анализа в сочетании с отрицательными результатами на антивирусные антитела характерны для некоторых периодов острого гепатита. Негативные показатели ПЦР-анализов на фоне положительных антительных тестов могут быть следствием низкой (не улавливаемой в ПЦР) концентрации вируса в крови. Повторные положительные ПЦР-анализы крови отражают активацию вируса в клетках печени или других органов.

Также ПЦР применяется для обнаружения вируса в тканях печени, взятых при биопсии. Это дает более полную информацию о развитии инфекционного процесса, так как вирус способен длительное время находиться в гепатоцитах, не выходя в кровь или присутствуя в ней в низких концентрациях. Это чаще происходит на ранних этапах инфекции, но наблюдается и при хроническом гепатите.

Определение белков (антигенов) вируса гепатита С. Принципиальная возможность выявления белков вируса гепатита С была установлена вскоре после открытия вируса при иммунофлюоресцентном изучении тканей, взятых из печени больных хроническим гепатитом С людей и шимпанзе, зараженных этим вирусом.

Определение вирусных белков (антигенов) в сыворотке крови из-за их низкого содержания долго не удавалось. Лишь недавно были разработаны методические подходы для иммуноферментного выявления внутреннего С-белка в крови и организовано производство первых коммерческих тест-систем. Их внедрение в практику позволит решать спорные вопросы диагностики на более экономичной основе, чем определение вирусной РНК. Определение уровней АлАТ является наиболее дешевым методом оценки активности течения гепатита С. Однако однократно полученные данные могут быть недостаточными для определения тяжести заболевания.

Более важную информацию относительно поражения печени может дать определение концентрации АлАТ в течение нескольких месяцев. Получить информацию о степени поражения печени, недоступную при других методах исследования, может дать врачу биопсия печени. Данные, полученные в результате этой процедуры, позволяют принять решение в пользу начала или отмены противовирусного лечения.

В статье использованы материалы из открытых источников: Автор: Трофимов С. — Книга: «Болезни печени»

А. А. Асратян Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН,
Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова

Основой лабораторной диагностики вирусных гепатитов служат:

— знания об их возбудителях и репликации

— информация о появлении и исчезновении маркеров инфицирования

— современные иммунохимические и молекулярно- биологические методы детекции антигенов, антител и нуклеиновых кислот/

Лабораторная диагностика гепатита В (ГВ) Строение вириона см. рис. 1.

Лабораторная диагностика ГВ — основана на выявлении специфических для ГВ антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот, основными из которых являются:

анти-НВс класса Ig М и IgG

Наиболее широко в диагностике ГВ используется определение НВsAg. Данный антиген выявляется как при остром, так и при хроническом заболевании (однако острая инфекция обычно подтверждается наличием высоких титров анти-НВс IgМ). При остром ГВ поверхностный антиген вируса обнаруживается через 3-5 недель от момента инфицирования, то есть задолго до появления клинических признаков болезни и в этих случаях является единственным серологическим маркером. НВsAg постоянно выявляется в преджелтушном и желтушном периодах болезни. Персистирование НВsAg в течение 6 месяцев и более указывает на затяжное или хроническое течение болезни, и позволяет предположить хроническое носительство вируса. Элиминация НВsAg и появление антител к нему является непременным условием выздоровления. Серологическими маркерами репликации ВГВ являются — анти-НВс класса IgМ, НВеAg, ДНК и ДНК-полимераза, которые обнаруживаются при остром ГВ с первых дней клинических проявлений и могут обнаруживаться при обострении хронического ГВ. Серологические маркеры репликации ВГВ определяют как в целях общей диагностики, так и для оценки эффективности применяемой терапии. НВсAg выявляется в ткани печени и не определяется в сыворотке крови. Опосредовано его присутствие в организме отражают циркулирующие антитела – анти-НВс класса IgМ и IgG. В острый период ГВ наличие анти-НВс класса IgМ является дополнительным маркером этого заболевания. Однако необходимо учитывать, что около 50% больных хроническим ГВ также могут иметь эти антитела в периоде обострения, но чаще в низких концентрациях. Наличие в сыворотке крови только анти-НВс класса IgG наблюдается в период между исчезновением НВsAg и образованием анти-НВs. Сочетанное выявление анти-НВс класса IgG в низком титре с анти-НВs указывает на перенесенную ГВ-инфекцию и наличие иммунитета. Тестирование НВеAg проводят в сыворотках крови только с наличием НВsAg и позитивный результат данного маркера свидетельствует об активном процессе – либо подтверждает диагноз острого ГВ, либо свидетельствует об обострении хронического ГВ. Длительность циркуляции НВеAg имеет важное прогностическое значение: выявление НВеAg через 2 и более месяца после начала заболевания служит признаком возможного развития хронического гепатита. Выявление НВеAg без присутствия НВsAg в сыворотке крови в подавляющем большинстве случаев указывает на ложный результат анализа. Однако больные, инфицированные мутантным вирусом могут оставаться серонегативными по НВеAg, несмотря на сохраняющуюся инфекционность и наличие анти-НВе Наличие ДНК-ВГВ (наиболее чувствительный маркер продолжающейся репликации ВГВ) в сыворотке крови указывает на высокую инфекционность данного образца и активное размножение вируса в организме. Позитивный результат удается зарегистрировать практически у всех больных острым ГВ в разгар заболевания. Снижение его концентрации в процессе лечения хронического гепатита является хорошим прогностическим признаком, указывающим на эффективность применяемой терапии. Высокая активность аминотрансфераз сыворотки отражает воспалительное повреждение ткани печени, вызываемое преимущественно реакциями иммунной системы организма против инфицированных вирусом гепатоцитов, а не прямым цитопатическим действием вируса. Высокий уровень ДНК-ВГВ в сочетании с низким уровнем аминотрансфераз свидетельствует о недостаточном иммунном ответе организма. Выявление анти-НВе при отсутствии НВеAg и ДНК-ВГВ свидетельствует о закончившейся активной репликации инфекции. Сероконверсия НВsAg в анти-НВs происходит у 90-95% больных с острым ГВ в стадии разрешения инфекционного процесса и, является показателем иммунитета к вирусу ГВ, то есть наличие анти-НВs свидетельствует о перенесенной инфекции и наличие иммунитете к этой инфекции. Лица, имеющие эти антитела в защитной концентрации (10 МЕ и более) не болеют ГВ и не нуждаются в вакцинации. Все применяемые методы исследования для определения специфических маркеров ГВ можно разделить на 2 группы – иммунохимический и молекулярно-биологические. Иммунохимические – основное место принадлежит иммуноферментному анализу (ИФА) с его высокой чувствительностью и специфичностью, простотой проведения и стабильностью реактивов. Молекулярно-биологические – точечная и жидкостная гибридизация, а также цепная полимеразная реакция (ПЦР) – позволяет выявлять наличие ДНК-ВГВ непосредственно, либо с помощью определения вирусоспецифического фермента – ДНК- полимеразы. НВ sAg /анти-НВ s Для выявления основного маркера ВГВ, разработаны разнообразные методы, позволяющие определить антиген в концентрации до 0,05 нг/мл, которые подразделяются на так называемые «поколения» (табл. 1). В настоящее время основным методом обнаружения НВsAg является ИФА Важным этапом в развитии лабораторной диагностики вирусных гепатитов в России стали проведение (с 1998 г.) сравнительных испытаний диагностических препаратов для оценки их качества под эгидой МЗ РФ. Современные диагностические препараты обладают высокой специфичностью, но возможны и ложноположительные результаты. Для разграничения ложноположительных от истинно положительных результатов применяется тест нейтрализации НВsAg – специфической сывороткой. Принципиально новым для системы выявления НВsAg стало требование к отечественным производителям диагностических препаратов – обязательное включение в тест-систему слабоположительного контрольного образца, содержащего НВsAg в концентрации 1 нг/мл. Для определения анти- НВsAg был испытан весь спектр иммунохимических методов, основной из которых сейчас – ИФА (для качественного и количественного анализа). Анти-НВс класса Ig М и IgG , НВе Ag – анти-НВе (рис. 2 и табл. 2) Для тестирования этих маркеров могут быть использованы различные варианты твердофазного иммуноанализа: иммуноферментный, радиоиммунный, химиолюминисцентный и их различные варианты. ДНК ВГВ — определяют при помощи проведения ПЦР– анализа. В настоящее время наиболее широкое распространение получили амплификационные методы детекции ДНК ВГВ. Появилась возможность определять ДНК ВГВ в качественном и количественном варианте.

Лабораторная диагностика гепатита Д (ГД) Вирус гепатита Д (ВГД) – это дефектный вирус, содержащий одно-спиральную РНК, которому для репликации необходимо помощь вируса ГВ для синтеза оболочечных белков, состоящих из HBsAg, который используется для инкапсуляции генома ВГД. ВГД не принадлежит ни к одному из известных семейств вирусов животных, по своим свойствам ВГД наиболее близок к вироидам и сателлитным вирусам растений. Лабораторная диагностика осуществляется путем обнаружения серологических маркеров ВГД, включая наличие антигена, антител к нему и РНК ВГД. Обнаружение антигена ВГД и РНК ВГД в сыворотке крови или ткани печени свидетельствует о наличии активной ГД-инфекции, однако, следует отметить, что эти маркеры могут не обнаруживаться в сыворотке больных фульминантным ГД. Маркером активной репликации ВГД также является анти-ВГД класса IgМ. Серологические маркеры инфекции ГД зависят от того, как был приобретен вирус – в виде коинфекции с ВГВ (у большинства больных заболевание имеет острое течение и заканчивается выздоровлением) или суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией (протекает тяжелее, чем коинфекция — в 10% развивается фульминантный гепатит). При коинфекции в большинстве случаев антитела — анти-ВГД класса IgМ и IgG — обнаруживаются в течение заболевания. Титр анти-ВГД обычно снижается до практически неопределяемых уровней после выздоровления, и не сохраняется никаких серологических маркеров того, что человек был когда-либо инфицирован ВГД. Антиген ВГД определяется только у 25% больных и обычно исчезает вместе с исчезновением HВsAg. При суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией серологическая картина имеет следующие характерные особенности: – титр HBsAg снижается к моменту появления антигена ВГД в сыворотке; — антиген ВГД и РНК-ВГД продолжают определяться в сыворотке, так как обычно у большинства пациентов с суперинфекцией ГД (70-80%) развивается хроническая инфекция, в отличие от случаев коинфекции; — определяются высокие титры антител (анти-ВГД) как класса IgМ, так и IgG, которые сохраняются неопределенное время. Серологические маркеры вируса ГД определяют методом иммуноферментного и радиоиммунного анализа, а РНК-ВГД — методом полимеразной цепной реакции. Отечественными и зарубежными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все необходимые компоненты и реактивы для постановки теста. В диагностических препаратах используют дельта-антиген, полученный из печени сурков, экспериментально зараженных ГД; антиген, выделенный из печени погибших носителей ВГД; дельта-антиген, полученный генно-инженерным способом.

Лабораторная диагностика гепатита С (ГС) Открытие возбудителя ГС стало возможным благодаря методам молекулярной биологии в 1989-1991 гг. Сначала путем клонирования был получен из сыворотки больных с гепатитом “ни-А, ни-В” вирусный геном, а затем был установлена и структура самого вируса. Физико-химическая характеристика вируса позволили отнести ВГС к семейству флавовирусов. Геном вируса ГС (ВГС) представлен однонитчатой позитивной РНК, состоящих из 10 000 нуклеотидных оснований, образующих регионы, которые кодируют три структурных белка (С, Е1, Е2) и пять неструктурных (NS2, NS3, NS4, NS5). Особенностью ВГС является чрезвычайно высокая гетерогенность его генома. Анализ нуклеиновых кислот РНК-ВГС различных изолятов выявил существенные отличия в их первичной структуре. На основании этих данных была построена классификация ВГС, разделяющая их на варианты ( их 6-9) и субтипы- генотипы, одни из которых присутствуют во всех регионах мира, а другие только в отдельных странах. Лабораторная диагностика ГС была решена при помощи современных методов молекулярной биологии, учитывая, что при ГС вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса. В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-ВГС, полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах – С22-3; С33с, С100-3, С200, NS5, S-1-1). Лабораторная диагностика ГС основывается на обнаружении серологических маркерв ВГС: антител к вирусу ГС (анти-ВГС, анти-ВГС класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК-ВГС методом ПЦР. К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем для выявления анти-ВГС в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. РНК-ВГС является показателем активной репликации ВГС и самым ранним маркером инфекции, и может быть обнаружена методом полимеразной цепной реакции уже через 1- 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз. Анти-ВГС обнаруживаются к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц методом иммуноферментного анализа. При определении анти-ВГС в некоторых случаях регистрируется ложноположительная реакция. Для разграничения ложноположительных образцов от образцов действительно содержащих антитела к ВГС, разработаны дополнительные тесты – рекомбинантный иммуноблотинг, определение спектра белков анти-ВГС. Иммуноблотинговые диагностикумы позволяют исключить неспецифический результат, полученный методом ИФА, однако визуальная оценка иммуноблотинговых полос может быть неоднозначной в разных диагностических центрах. В нашей стране более широкое распространение получили отечественные подтверждающие твердофазные иммуноферментные тест-системы (так называемы системы «Спектр»), основанные на определении антител к отдельным вирусным антигенам: core, NS3, NS4ab, NS5a. Выявление РНК ВГС считается «золотым» стандартом в диагностике ГС и подтверждением положительных результатов обнаружения анти-ВГС. В настоящее время для индикации РНК ВГС используется ПЦР в качественном и количественном варианте. Чувствительность методов определения РНК ВГС повышается с каждым годом, достигая в настоящее время 10-50 копий РНК в 1 мл крови. Диагноз хронического ГС у лиц с наличием анти-ВГС обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев.

Лабораторная диагностика гепатита А (ГА) Вирус ГА (рис. 3) — это РНК- содержащий вирус, размером 27 нм, классифицированный как пикорнавирус. Во всех изолятах собранных в разных частях мира, наблюдается только один серотип ВГА. ВГА не имеет наружной оболочки, но состоит из наружной белковой капсулы, или капсида, содержащего внутри положительную одноцепочную РНК, который действует в качестве матрицы для выработки вирусных белков внутри клетки-хозяина. Лабораторная диагностика ГА основана на выявлении маркеров вируса ГА – антигена ВГА, антител (анти-ВГА класса IgМ и IgG ), а также РНК ВГА. Окончательным доказательством о текущей или недавней инфекции служит наличие в сыворотке крови (даже в одной пробе сыворотки) антител к ВГА класса IgM (анти-ВГА IgM) и наличие ВГА в фекалиях. На перенесенную инфекцию ГА, а также на длительный иммунитет, указывает наличие антител к ВГА класса IgG (анти-ВГА IgG). Диагноз острого ГА подтверждается в острой или ранней стадии выздоровления при наличии анти-ВГА класса IgM, которые появляются в последние 5-10 дней инкубационного периода и продолжают выявляться на протяжении 6-7 месяцев от начала заболевания. Кроме того, эти антитела могут быть выявлены в первые месяцы у лиц (20-30%), вакцинированных инактивированной вакциной против ГА. Их образование связано с первичным иммунным ответом на введение антигена, а не на инфекцию, вызванную вакциной. РНК ВГА может быть выявлена за несколько дней до повышения активности АлАТ и в течение 5 — 59 дней заболевания при типичном течении ГА; при затяжных случаях — РНК ВГА в среднем может определяться до 95 дней. Антиген вируса ГА (ВГА-Ag) обнаруживается в фекалиях больных за 7-10 дней до проявления клинических симптомов и в первые дни заболевания, что используется также для ранней диагностики и выявления источников возбудителя инфекции. Концентрация ВГА в фекалиях является наивысшей на протяжении 2-х нед. перед появлением желтухи. У взрослых выделение вируса с фекалиями продолжается обычно менее одной недели после появления желтухи. Вирус, однако, был обнаружен также через 2 мес. от начало заболевания (во время обострения). Дети могут выделять вирус более длительно, чем взрослые, возможно в течение нескольких недель после клинического проявления заболевания. Хроническое выделения ВГА из фекалий не отмечается. Определение антигена ВГА нашло также применение в санитарной вирусологии при исследовании воды на наличие вируса. Анти-ВГА класса IgG (рис. 4) также появляются рано в начале заболевания (с 3-4 недели), сохраняются на протяжении всей жизни и обеспечивают пожизненную защиту от этого заболевания. Определение анти-ВГА IgG используется для изучения иммуноструктуры населения, динамики специфического гуморального иммунитета. Определение анти-ВГА класса IgG важно также для пред- и поствакцинального скрининга (минимальная протективная концентрация анти-ВГА соответствует 20 МЕ/л). Для их определения отечественными производителями выпускаются коммерческие диагностические препараты иммуноферментного анализа. Лабораторная диагностика основана на выявлении маркеров вируса ГА с помощью специфических иммунодиагностических методов — методы ИФА, РИА. Отечественными и зарубежными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все необходимые компоненты и реактивы для постановки теста. Кроме твердофазных ИФА и РИА с успехом применяется и метод иммуноэлектронной микроскопии, метод ПЦР. Все вышеупомянутые методы иммунодиагностики с равной вероятностью выявляют инаппарантные, бессмиптомные или клинически выраженные формы ГА. Особое место в лабораторной диагностике ГА занимают молекулярно-генетические методы тестирования РНК ВГА. ПЦР диагностика позволяет обнаружить РНК ВГА в концентрации 40 копий/мл. В настоящее время происходит накопление данных о месте ПЦР в системе лабораторной диагностики ГА.

Лабораторная диагностика гепатита Е (ГЕ) Этиологический агент гепатита Е (ГЕ) — это сферический вирус, лишенный внешней оболочки, это односпиральный РНК-вирус размером около 32-34 нм в диаметре. При постановке диагноза ГЕ в каждом отдельном случае необходимо принять во внимание несколько диагностических аргументов: — наличие у больного симптомокомплекса острого, и предположительно инфекционного гепатита, — надежное исключение этиологического участия вирусов ГА и ГВ, основанное на отрицательных результатах серологических тестов — анти-ВГА класса IgM и анти-НВс класса IgM, — тщательный анализ данных эпидемиологического анамнеза, включая указания на недавние выезды в эндемичные регионы, — исследование (по возможности) фекалий больного на присутствие частиц вируса ГЕ методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР. Существуют диагностические методы, основанные на применении иммунофлюоресцирующих антител (МФА) для определения антигена ВГЕ в фекалиях и иммуноферментного анализа (ИФА) для определения антител к ВГЕ — анти-ВГЕ класса IgM и IgG. Наличие анти-ВГЕ класса IgM с высокой частотой определяются в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции; выявление анти-ВГЕ класса IgG свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ — инфекции. Для диагностики ГЕ определяют также РНК ВГЕ. Отечественные фирмы производители диагностических тест-систем для выявления маркеров вирусных гепатитов:

МОСКВА и область — НИАРМЕДИК — ЭКОлаб — БИОСЕРВИС

НОВОСИБИРСК — ВЕКТОР БЕСТ — ВЕКТОР МБС ( МЕДИКОБИОЛ.СОЮЗ) — ВЕКТОР БИАЛЬГАМ

НИЖНИЙ НОВГОРОД — МИКРОГЕН (бывший ИМБИО) — ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ САНКТ-ПЕТЕРБУРГ — АВИЦЕННА — АКВАПАСТ

Когда необходима лабораторная диагностика вирусного гепатита С, то врач обязательно учитывает следующие факторы, которые являются важными:

• наличие или отсутствие в крови маркеров инфицирования вирусом гепатита С, а также других типов;
• показатели активности ферментов печени;
• результаты клинического осмотра больного;
• данные эпидемиологического анамнеза.

Диагностировать гепатит С с высокой степенью надежности позволяет только комплексный учет всех данных (нужно отметить, что диагностика гепатита В проводится также). Для полной диагностики вирусного проводится ряд анализов крови:

• общий анализ крови;
• биохимический анализ крови;
• ПЦР на определение РНК вируса (ПЦР – полимеразная цепная реакция);
• коагулограмма (определение свертываемости крови).

Также проводится УЗИ органов брюшной полости. Может назначаться пункционная биопсия печени. Только имея на руках все результаты, врач сделает точную диагностику. Также будет определен уровень развития вирусного процесса в организме, сделана оценка состояния печени и степень ее повреждения. Доктор подберет безопасное и эффективное лечение.

Задача врача при определении предрасположенности к вирусному гепатиту С существенно упрощается, если он располагает информацией о ранее имеющихся у человека заболеваниях и проведенных обследованиях.

Для проверки функционирования печени ее необходимо обследовать. Для выявления дисфункции в ее работе помогут исследования крови. При предположении наличия гепатита С врач назначает специальные исследования для обнаружения антител, которые вырабатываются для борьбы с этим тяжелым недугом.

При исследовании крови вирус гепатита С в крови подтверждается прямым или косвенным путем, на основании РНК – наследственной информации вируса (определяется с помощью ПЦР) либо при обнаружении антител в крови. Если посредством ПЦР подтверждается наличие в крови РНК вируса, то это говорит об остром течении заболевания.

При наличии антител против вируса гепатита С существует два варианта – либо хроническое течение заболевания, либо инфекция была излечена ранее. Дело в том, что даже после полного излечения антитела обнаруживаются в крови человека еще продолжительное время.

То есть лабораторная диагностика подразумевает сдачу анализа на определение наличия антител к вирусу гепатита С (если проводится диагностика гепатита В, то определяются антитела к этому типу вируса). При положительном результате назначается прямое исследование на нахождение в крови вируса. Для этого применяется метод ПЦР – полимеразная цепная реакция. Тест ПЦР является особо чувствительным, он используется именно для подтверждения наличия в крови человека вируса гепатита С.

В связи с тем, что у людей с хронической формой гепатит С очень высока вероятность возникновения рака печени, у них систематически, через определенные промежутки времени (от полугода до года) берут анализ крови для определения наличия онкомаркера рака печени или альфа-фетопротеина. Точно с такими же временными интервалами проводится и ультразвуковое исследование печени.

При положительных результатах анализов, то есть если анализ ПЦР подтвердил наличие вируса в организме, врачом может быть назначена биопсия печени. Эта процедура позволяет увидеть, насколько вирус распространен в печени, и определить степень ее повреждения.

При проведении биопсии производится забор участка ткани печени. Для анализа материал забирают с помощью специальной иглы. Далее полученный образец ткани подвергают исследованию, которое проводится под микроскопом.

Для диагностики назначаются и другие процедуры, такие как КТГ, УЗИ. Они применяются для того, чтобы исключить рак печени.

Анализ крови сдается также для определения типа вируса гепатита С или его генотипа, который поразил организм больного человека. Если есть данные о генотипе вируса и области поражения им печени, лечащему доктору будет проще подобрать необходимые методы лечения.

Необходимо провериться и сдать анализы крови на наличие гепатита С, в том числе сделать исследование методом ПЦР, если:

• присутствуют симптомы каких-либо заболеваний печени, например, плохой анализ крови;
• были использованы нестерильные шприцы, даже если это произошло много лет назад;
• половой партнер имеет такое заболевание, как гепатит С;
• проводился гемодиализ;
• при лечении применялись донорские органы или кровь, которые были получены до 1992 года (после этого года все донорские материалы подвергаются проверке на гепатит С).

Обязательно сдают анализ крови на гепатит С работники медицинских учреждений, которые по роду своей работы контактируют со шприцами, кровью и другими биологическими жидкостями пациентов.Нужно отметить, что в настоящее время существует возможность обследоваться в домашних условиях. Для этого применяется специальный тест, который продается в аптеке. При получении положительного результата необходимо сразу же обратиться к врачу и пройти обследование, которое определит наличие или отсутствие вируса в организме.

При постановке диагноза гепатит С врач назначит лечение и даст рекомендации для того, чтобы предотвратить дальнейшее распространение вируса.

двунитчатая ДНК с однонитчатым участком

в среднем 60-90 дней, может быть до 6 месяцев

преимущественно дети до 1 5 лет

Переход в хрониче­скую форму

I. Гепатит А (гА). Лабораторная диагностика гА основывается либо на выявлении самого возбудителя (метод иммунной электронной микроскопии — ИЭМ), его антигенов (радиоиммунный, иммуноферментный, иммунофлюорес-центный метод — РИА, ИФА, ИФ) или антител к вирусу гА (РИА, ИФА).

Для ранней диагностики заболевания, а также выявления источников ин­фекции используется определение антигена вируса гА в фекалиях больных, где он появляется за 7-10 дней до клинических симптомов и в первые дни заболе­вания.

Из определяемых в настоящее время специфических маркёров гА важ­нейшими являются антитела класса Ig M к вирусу гА, которые появляются в сыворотке крови и слюне уже в начале заболевания и сохраняются в течение 3-6 месяцев. Обнаружение антител класса Ig M к вирусу гА однозначно свидетельствует о гепатите А и используется для диагностики заболевания, в том числе и бессимптомных случаев инфекции,и выявления источников инфекции в очагах.

Антитела к вирусу гА класса Ig G выявляются с 3-4-й недели заболевания и сохраняются длительно, что позволяет оценить состояние иммунитета насе­ления, динамику специфического гуморального иммунитета.

Вирус гепатита А в материале от больного можно выявить методом им­мунной электронной микроскопии. В основе метода лежит смешивание суспен­зии вируса с антисывороткой, отделение иммунных комплексов и исследование их в электронном микроскопе.

II. Гепатит В (гВ). В организме людей, заражённых вирусом гВ, с разной частотой и на разных этапах могут выявляться серологические маркёры: по­верхностный HBs Ag и сердцевинный НВе Ag, а также антитела к ним (anti-НВс, anti-HBe, anti-HBs). Динамика их появления и интерпретация результатов представлены в табл. 4 и 5.

источник