Серологическая диагностика вирусный гепатит с

Гепатит С – вирусное инфекционное заболевание печени, передающееся трансфузионно, отличающееся легким, зачастую субклиническим, реже среднетяжелым течением в фазе первичного инфицирования и склонностью к хронизации, циррозу и озлокачествлению. В большинстве случаев гепатит С имеет безжелтушное малосимптомное начало. В связи с этим он может оставаться не диагностированным в течение нескольких лет и выявляется, когда в тканях печени уже развивается цирроз или происходит злокачественная трансформация в гепатоцеллюлярный рак. Диагноз гепатита С считается достаточно обоснованным при выявлении в крови вирусной РНК и антител к ней в результате повторных исследований методом ПЦР и различными видами серологических реакций.

Гепатит С – вирусное инфекционное заболевание печени, передающееся трансфузионно, отличающееся легким, зачастую субклиническим, реже среднетяжелым течением в фазе первичного инфицирования и склонностью к хронизации, циррозу и озлокачествлению. Вирусный гепатит С вызывается РНК-содержащим вирусом семейства Flaviviridae. Склонность этой инфекции к хронизации обуславливается способностью возбудителя пребывать в организме продолжительное время, не вызывая интенсивных проявлений инфекции. Как и остальные флавивирусы, вирус гепатита С способен, размножаясь, формировать квазиштаммы, имеющие разнообразные серологические варианты, что мешает организму формировать адекватный иммунный ответ и не позволяет разработать эффективную вакцину.

Вирус гепатита С не размножается в клеточных культурах, что не дает возможности детально изучить его устойчивость во внешней среде, однако известно, что он немного более устойчив, нежели ВИЧ, погибает при воздействии ультрафиолетовых лучей и выдерживает нагревание до 50 °С. Резервуаром и источником инфекции являются больные люди. Вирус содержится в плазме крови больных. Заразны как страдающие острым или хроническим гепатитом С, так и лица с бессимптомно протекающей инфекцией.

Механизм передачи вируса гепатита С – парентеральный, преимущественно передается через кровь, но иногда может происходить заражение и при контакте с другими биологическими жидкостями: слюной, мочой, спермой. Обязательным условием для заражения является непосредственное попадание достаточного количества вируса в кровь здорового человека.

В подавляющем большинстве случаев в настоящее время заражение происходит при совместном употреблении наркотиков внутривенно. Распространение инфекции среди наркоманов достигает 70-90%. Лица, употребляющие наркотики, являются наиболее опасным в эпидемическом плане источником вирусного гепатита С. Кроме того, риск заражения инфекцией возрастает у больных, получавших медицинскую помощь в виде многократных переливаний крови, хирургических мероприятий, парентеральных инъекций и пункций с применением нестерильного инструментария многократного пользования. Передача может осуществляться при нанесении татуировок, пирсинге, порезах во время маникюра и педикюра, манипуляций в стоматологии.

В 40-50% случаев не удается отследить способ заражения. В медицинских профессиональных коллективах заболеваемость гепатитом С не превышает таковую среди населения. Передача от матери к ребенку осуществляется тогда, когда в крови матери накапливается высокая концентрация вируса, либо при сочетании вируса гепатита С с вирусом иммунодефицита человека.

Возможность развития гепатита С при единичном попадании малого количества возбудителя в кровоток здорового человека невелик. Половой путь передачи инфекции реализуется редко, в первую очередь — у лиц с сопутствующей ВИЧ-инфекцией, склонных к частой смене половых партнеров. Естественная восприимчивость человека к вирусу гепатита С в значительной степени зависит от полученной дозы возбудителя. Постинфекционный иммунитет недостаточно изучен.

Инкубационный период вирусного гепатита С колеблется в пределах от 2 до 23 недель, иногда затягиваясь до 26 недель (что обусловлено тем или иным путем передачи). Острая фаза инфекции в подавляющем большинстве случаев (95%) не проявляется выраженной симптоматикой, протекая в безжелтушном субклиническом варианте. Позднее серологическое диагностирование гепатита С может быть связано с вероятностью «иммунологического окна» — периода, когда, несмотря на имеющуюся инфекцию, антитела к возбудителю отсутствуют, либо титр их неизмеримо мал. В 61% случаев вирусный гепатит диагностируется лабораторно спустя 6 и более месяцев после первых клинических симптомов.

Клинически манифестация вирусного гепатита С может проявляться в виде общей симптоматики: слабость, апатия, пониженный аппетит, быстрое насыщение. Могут отмечаться местные признаки: тяжести и дискомфорт в правом подреберье, диспепсия. Лихорадка и интоксикация при вирусном гепатите С являются довольно редкими симптомами. Температура тела если и поднимается, то до субфебрильных значений. Интенсивность проявления тех или иных симптомов часто зависит от концентрации вируса в крови, общего состояния иммунитета. Обычно симптоматика незначительна и больные не склонны придавать ей значение.

В анализе крови в острый период гепатита С нередко отмечают пониженное содержание лейкоцитов и тромбоцитов. В четверти случаев отмечается кратковременная умеренная желтуха (часто ограничивается иктеричностью склер и биохимическими проявлениями). В дальнейшем при хронизации инфекции эпизоды желтухи и увеличения активности печеночных трансфераз сопровождают обострения заболевания.

Тяжелое течение вирусного гепатита С отмечается не более чем в 1% случаев. При этом могут развиваться аутоиммунные нарушения: агранулоцитоз, апластическая анемия, невриты периферических нервов. При таком течении вероятен летальный исход в доантительном периоде. В обычных случаях вирусный гепатит С протекает медленно, без выраженной симптоматики, годами оставаясь недиагностируемым и проявляясь уже при значительной деструкции ткани печени. Часто впервые больным ставят диагноз гепатита С, когда уже имеют место признаки цирроза или гепатоцеллюлярного рака печени.

Осложнения вирусного гепатита С – это цирроз и первичный рак печени (гепатоцеллюлярная карцинома).

В отличие от вирусного гепатита В, где возможно выделение вирусного антигена, клиническая диагностика вирусного гепатита C производится с помощью серологических методик (антитела IgM к вирусу определяются с помощью ИФА и РИБА), а также определением в крови вирусной РНК с помощью ПЦР. При этом ПЦР осуществляется дважды, поскольку есть вероятность ложноположительной реакции.

При выявлении антител и РНК можно говорит о достаточной достоверности диагноза. Определение в крови IgG может означать как наличие вируса в организме, так и ранее перенесенную инфекцию. Пациентам с гепатитом С назначается проведение биохимических проб печени, коагулограммы, УЗИ печени, а в некоторых сложных диагностических случаях — биопсия печени.

Терапевтическая тактика при гепатите такая же, как и при вирусном гепатите В: прописана диета №5 (ограничение жиров, в особенности тугоплавких, при нормальном соотношении белков и углеводов), исключение продуктов, стимулирующих секрецию желчи и печеночных ферментов (соленая, жареная, консервированная пища), насыщение рациона липолитически активными веществами (клетчатка, пектины), большое количество жидкости. Полностью исключается алкоголь.

Специфическая терапия вирусного гепатита – это назначение интерферона в сочетании с рибавирином. Продолжительность терапевтического курса – 25 дней (при стойком к противовирусной терапии варианте вируса возможно удлинение курса до 48 дней). В качестве профилактики холестаза в комплекс терапевтических мер включают препараты урсодеоксихолиевой кислоты, а в качестве антидепрессанта (поскольку психологическое состояние больных нередко сказывается на эффективности лечения) – адеметионин. Действие противовирусной терапии напрямую зависит от качества интерферонов (степени очистки), интенсивности терапии и общего состояния больного.

По показаниям базисную терапию могут дополнять оральной дезинтоксикацией, спазмолитическими средствами, ферментами (мезим), антигистаминными препаратами и витаминами. При тяжелом течении гепатита С показана внутривенная дезинтоксикация растворами электролитов, глюкозы, декстрана, при необходимости терапию дополняют преднизолоном. В случае развития осложнений курс лечения дополняется соответствующими мерами (лечение цирроза и рака печени). При необходимости производят плазмаферез.

При должном лечении выздоровлением заканчивается 15-25% случаев заболевания. Чаще всего гепатит С переходит в хроническую форму, способствуя развитию осложнений. Смерть при гепатите С, как правило, наступает вследствие цирроза или рака печени, летальность составляет 1-5% случае. Менее благоприятен прогноз сочетанной инфекции вирусами гепатита В и С.

Общие меры профилактики гепатита С включают тщательное соблюдение санитарного режима в медицинских учреждениях, контроль над качеством и стерильностью переливаемой крови, а также санитарный надзор над учреждениями, оказывающими услуги населению с использованием травматических методик (татуаж, пирсинг).

Помимо прочего, ведется разъяснительная, просветительская деятельность среди молодежи, рекламируется индивидуальная профилактика: безопасный секс и отказ от наркотиков, осуществление медицинский и иных травматических процедур в сертифицированных учреждениях. Среди наркоманов распространяются одноразовые шприцы.

источник

Современная лабораторная диагностика HCV-инфекции основана на нескольких основных методиках исследования, которые делят на две группы в зависимости от технологии проведения – серологические и молекулярные. Эти анализы направлены на то, чтобы выявить основные маркеры гепатита С максимально точно и в кратчайшие сроки. В большинстве лабораторий сейчас применяют современные реагенты и оборудование, что позволяет поставить диагноз через 14–20 дней после заражения.

Эксперты не могут озвучить точное количество инфицированных HCV, так как в подавляющем большинстве случаев через несколько недель после заражения происходит хронизация вирусного процесса. В дальнейшем болезнь часто протекает в скрытой, латентной форме годами. Более чем у половины пациентов патологию диагностируют случайно при обращении к врачу по другому поводу, прохождении диспансеризации, оформлении медицинской книжки, постановке на учет по причине беременности и т.д.

По данным Всемирной организации здравоохранения, более полумиллиона человек ежегодно умирают от осложнений, вызванных HCV. Данная патология лидирует в перечне показаний для трансплантации печени.

Несмотря на меры по профилактике распространения заболевания, появление высокоэффективных лекарственных препаратов и методов диагностики, позволяющих своевременно выявить и полностью излечить болезнь, остановить рост количества инфицированных не удается ни в одной стране мира.

Возбудитель гепатита С, Hepatitis C Virus, относится к семейству Flaviviridae. Основу генома вируса составляет одноцепочечная РНК, включающая более 10 000 нуклеотидных остатков. Из-за неоднородности структуры специалисты выделили несколько генотипов HCV. Их распространенность не одинакова в различных уголках планеты. Но в большей степени диагностируют первый генотип (более 46% инфицированных), на втором месте – третий (треть случаев).

Еще одной характерной особенностью возбудителя гепатита Ц является мутационная активность. Так, у пациента в рамках одного генотипа идентифицируют до 40 подвидов HCV. По этой причине специалисты не могут создать вакцину для пожизненной защиты от инфицирования.

Заражение часто происходит при использовании одного шприца несколькими людьми для введения внутривенных наркотиков. Путь передачи болезни может быть также связан с применением уже использованных или недостаточно стерилизованных медицинских и/или косметологических инструментов. Возможно заражение при половом контакте, не исключен и вертикальный путь инфицирования.

В 80% случаев болезнь протекает без выраженных клинических проявлений.

Только у незначительного количества пациентов возникает один или несколько из таких симптомов:

• повышение температуры без катаральных признаков;
• усталость;
• снижение аппетита;
• тошноту с приступами рвоты;
• боли в животе;
• потемнение мочи;
• появление у фекальных масс сероватого оттенка;
• боли в суставах;
• желтизна склер и кожных покровов (встречается относительно редко, только при желтушной форме заболевания).

Что касается хронического течения патологии, период отсутствия симптомов может продолжаться вплоть до развития цирроза печени, печеночной недостаточности либо злокачественного онкологического образования.

Острую форму HCV диагностируют крайне редко, что связывают с бессимптомным прогрессированием заболевания. Для выявления патологии используют серологические методы, направленные на определение ряда специфических иммуноглобулинов, которые являются обязательной частью иммунного ответа на попадание вирусного патогена внутрь гепатоцитов. Другим методом диагностики является определение структурных частиц вируса при помощи молекулярно-химических реакций.

Что значит маркеры гепатита С? В медицинской литературе этот термин означает ряд высокоспецифичных лабораторных параметров, свидетельствующих о наличии острого либо хронического ВГС. Это, в частности, иммуноглобулины G и M (и их суммарный титр без дифференцирования на классы) и РНК (определенная часть генома) вириона. Соответственно, результаты, полученные в ходе выполнения ИФА и ПЦР (данные оценивают только в комплексе), и являются маркерами HCV.

В настоящее время существуют законодательно определенные критерии (на основе рекомендаций ВОЗ и Министерства здравоохранения), кому нужно обязательно сдавать анализ крови для выявления возможной HCV-инфекции:

• в период вынашивания ребенка (в I и III триместре);
• реципиентам донорского биологического материала (вне зависимости от его вида и количества), особенно если процедура и/или операция была проведена до 1992 года (именно тогда появились достоверные методы исследования, позволяющие выявить основные маркеры гепатита C);
• работникам медицинской, косметологической, торговой сферы (в соответствии со сроками оформления медкнижки);
• пациентам, регулярно проходящим процедуру гемодиализа, регулярно подвергающихся разнообразным инвазивным вмешательствам;
• перед назначением операционных вмешательств;
• перед началом курса химиотерапии;
• при отклонениях в показателях печеночных проб (для исключения или подтверждения гепатита);
• пациенты, состоящие на учете в специализированных клиниках и диспансерах на предмет пристрастия к наркотическим веществам;
• персонал детских образовательных учреждений, интернатов (при регулярном прохождении диспансеризации);
• члены семей и находящиеся в близком контакте с человеком с диагностированным ВГС;
• лица с повышенным риском инфицирования (инъекционные наркоманы, люди, отдающие предпочтение гомосексуальным, случайным или коммерческим половым связям);
• осужденные и пребывающие в местах лишения свободы;
• доноры биологического материала, органов;
• дети до достижения годовалого возраста (если выявлены положительные серологические маркеры вирусных гепатитов, то дольше) при наличии у матери диагностированного ВГС во время беременности;
• у людей с ВИЧ.

HCV-инфекция – серьезный диагноз, требующий немедленного начала терапии. Поэтому положительные маркеры, выявленные в одном из исследований, не являются показанием к приему лекарственных препаратов. Подтверждают наличие инфекции по нескольким специфическим анализам.

Где сдать кровь на выявление HCV, решает пациент. Можно обратиться в поликлинику по месту жительства, записавшись на консультацию к терапевту или инфекционисту. Врач выдаст направление на проведение анализа, но перед этим придется сделать клиническое исследование крови, печеночные пробы. Стоимость тестов компенсируется по полису ОМС.

Можно выполнить анализы в платной лаборатории. Там не требуется направление от врача. Стоимость в клиниках Москвы колеблется в пределах 3000–7000 тысяч рублей и выше в зависимости от разновидности диагностического теста и того, сколько маркеров необходимо определить.

Все исследования, применяемые для диагностики HCV-инфекции, можно разделить на несколько групп. Проведение каждого анализа является обязательным до начала терапии, а некоторые исследования выполняются и на определенных этапах лечебного цикла для оценки правильности и эффективности подобранной противовирусной схемы.

Для постановки диагноза врачу нужны следующие данные:

1. Серологические маркеры вирусных гепатитов. Обнаруживаются вне зависимости от генотипа HCV. Это специфические антитела (anti-HCV) разновидностей G и/или M. Выявляются иммуноферментными методами (ИФА), технологиями иммунохемилюминисценции, иммуноблотинга и т.д. Изначально определяют суммарное количество антител (IgG + IgM) А подтверждающее исследование направлено на выявление антител к специфическим протеинам HCV, входящим в структуру капсида и оболочки, при помощи ИФА или иммуноблотинга.
2. Молекулярные маркеры. Назначаются в качестве подтверждающих тестов для определения наличия РНК возбудителя патологии, оценки его количественного содержания. К этой же группе исследований относят генотипирующие анализы, предназначенные для установления разновидности вируса. Для проведения тестов используются различные методики постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Следующий этап диагностики проводят только при положительном результате предыдущих тестов. По мнению специалистов у пациентов с первым генотипом HCV целесообразно определение уровня IL28B. Подобное исследование помогает прогнозировать эффективность противовирусного лечения. Но такая схема диагностики подходит при использовании интерфероновых схем терапии. Связь между показателем IL28B и действием современных лекарственных средств (Софосбувира, Асунапревира и т.д.) не установлена, потому необходимость в проведении такого исследования остается под вопросом.

Первичная лабораторная диагностика HCV начинается с определения в сыворотке крови параметра anti-HCV. Положительный результат свидетельствует об активном течении патологического процесса (то есть заражении гепатитом С) либо о встрече иммунной системы организма с инфекцией в прошлом.

В большинстве лабораторий Москвы и других крупных городов серологический маркер определяется при помощи иммуноферментных систем (ИФА) II и III поколения. Суть анализа состоит в захвате рекомбинантными белками антител к HCV из исследуемой сыворотки. Впоследствии они определяются вторичными антителами против Ig класса G и V, мечеными ферментами, которые катализируют течение цветной реакции.

Тест-системы I поколения имели низкую специфичность, так как были способны обнаружить антитела, вырабатываемые к белку NS4. Чувствительность ИФА не превышала 70%, а сроки обнаружения иммуноглобулинов – минимум 16 недель с момента инфицирования.

ИФА II поколения способны выявить антитела к участку генома core, NS3 и NS4, что повышает специфичность теста до 95%, снижает риск получения ложноположительных результатов и сокращают срок обнаружения иммуноглобулинов до 10 недель от дня попадания РНК вируса в кровь человека.

Тест-системы ИФА III поколения разработаны на основе антигена NS5 и высокоиммуногенного эпитопа (части молекулы антигена) NS3. Подобная техника выполнения анализа обеспечивает срок сокращения серологического окна: положительные маркеры (либо отрицательный результат) можно получить уже на 4–6 неделе после заражения. Чувствительность ИФА последнего поколения достигает 99%.

Несмотря на то, что серологическое исследование является одним из золотых стандартов диагностики HCV, возможно получение ложноположительных или ложноотрицательных результатов, связанных не с качеством тест-систем, а особенностями состояния пациента.

Так, на проведение ИФА могут повлиять:

• аутоиммунные поражения суставов, особенно при положительном ревматоидном факторе, и другие заболевания подобного генеза;
• беременность;
• регулярное проведение гемодиализа;
• тяжелые иммуносупрессивные состояния (например, на фоне ВИЧ);
• гематологические злокачественные новообразования.

Современные тест-системы, дополненные рекомбинантными NS5, специфичны и чувствительны на 99,95% не реагируют на наличие в крови ревматоидного фактора и/или С-реактивного белка.

Серологический скриннинг является обязательным, но недостаточным компонентом диагностики HCV. Для подтверждения результатов анализа обязательно назначают исследование методом полимеразной цепной реакции.

Сейчас доступны качественные и количественные способы выявления РНК возбудителя вирусного гепатита С. Первая методика предназначена для подтверждения диагноза HCV-инфекции у лиц с положительным anti-HCV и для обследования донорского материала.

Количественный анализ служит основным маркером определения вирусной нагрузки. Является ключевым для оценки активности патологического процесса и эффективности противовирусной терапии. Применяемые тест-системы позволяют провести полимеразную цепную реакцию в режиме «real time». Диапазон вирусной нагрузки колеблется в пределах от 10–15 до 10 млн. МЕ/мл.

Техника количественной полимеразной цепной реакции – маркер репликации хронического вирусного гепатита С. Согласно современным рекомендациям, анализ проводят на 4–12–24 неделе лечения (и дополнительно на 48 при проведении интерфероновой терапии). Повторно исследование делают через 24 и 48 недель после окончания приема и/или инъекций медикаментов.

Отрицательный результат количественной ПЦР на 4 неделе лечения – один из основных факторов быстро вирусологического ответа и благоприятного исхода заболевания. Отсутствие РНК вируса на 24 неделе после завершения терапии является признаком выздоровления.

После базовых диагностических тестов и подтверждения положительных маркеров гепатита С обязательно проведение генотипирования. От результатов этого исследования зависит тактика дальнейшей терапии и прогноз развития риска осложнений. Определение генотипа HCV выполняется путем анализа нуклеотидной последовательности участка NS5 протеина вируса.

Но применяемые для генотипирования тест-системы недостаточно совершенны и не могут точно идентифицировать недавно выявленные, редко встречающиеся генотипы (в частности, 7,8 и 9).

В последних клинических исследованиях доказана роль определения полиморфизма гена IL28B у пациентов с генотипом 1а и 1b HCV. Проведение анализа важно для выбора между интерфероновыми схемами терапии и приемом комбинации противовирусных лекарственных препаратов.

Пункционная биопсия печени также входит в перечень необходимых для пациента с вирусом гепатита С анализов. Процедура позволяет оценить тяжесть структурных изменений в печеночной ткани, установить локализацию и распространенность фибротического процесса, некроза гепатоцитов, наличие злокачественной малигнизации клеток (при длительном течении хронического гепатита С), роль сопутствующих осложнений в повреждениях печени.

Но перед выполнением процедуры необходимо принять во внимание несколько факторов:

1. Оценивают соотношение целесообразности проведения биопсии и потенциального вреда здоровью пациента.
2. Перед манипуляцией делают УЗИ для оценки риска возможных осложнений. В идеале пункцию также нужно проводить под ультразвуковым контролем.
3. За несколько дней до процедуры выполняют коагулограмму, определяют протромбиновое время и протромбиновый индекс. Если количество тромбоцитов менее 90 тыс. клеток/мм3, биопсию откладывают или выполняют при наличии строгих жизненных показаний.
4. Перед манипуляцией необходимо взять письменное согласие пациента на процедуру.
5. При необходимости (например, перевозбуждении) больному дают седативные средства (при отсутствии противопоказаний).
6. После проведения забора ткани оценивают количество и качество биоптата. При необходимости процедуру сразу же повторяют.
7. На протяжении 8 часов после манипуляции пациент должен оставаться под медицинским наблюдением.

Еще одним сравнительно новым методом оценки состояния печени является эластометрия, проводимая с использованием приборов ФиброСкан, ФиброТест, ФиброМетр и др. Преимуществом данного способа диагностики служит неинвазивность, быстрое получение результатов и безболезненность, что важно в педиатрической практике. Но проведение исследования затруднительно при избыточном весе пациента, наличии стеатоза, превышении уровня печеночных ферментов в 3 раза и более.

Для получения точных результатов важно соблюдать правила, предписывающие, как сдавать кровь и готовиться к проведению исследования.

Все аспекты необходимо уточнить у врача, но перечень стандартных рекомендаций включает:

• соблюдение диеты (№5 или №5а) с ограничением жирного, жареного, копченого за 7–10 дней до процедуры;
• строгое ограничение алкоголя за 2–2,5 недели до выполнения анализа;
• отказ от курения за 12–14 часов до забора крови;
• сдачу крови строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории).

Результаты может быть искажены при приеме некоторых лекарственных препаратов. Поэтому при расшифровке данных необходимо сообщить врачу о каких-либо принимаемых медикаментах.

Сколько ждать результатов исследования зависит от загруженности лаборатории, технологической оснащенности (иногда требуется транспортировка биологического материала). В среднем постановка полимеразной цепной реакции или выполнение ИФА занимает от 2 до 5 дней. Некоторые клиники предлагают услугу платного срочного исследования.

Диагностика гепатита С проводится в несколько этапов.

Показанием для определения серологических маркеров методом ИФА (anti-HCV Total) служат:

• беременность (первый и третий семестр);
• отношение к группам риска по ВГС;
• ежегодное оформление медицинской книжки;
• повышение уровня печеночных трансаминаз и/или билирубина;
• самостоятельное желание пациента.

Для подтверждения диагноза HCV при положительных результатах серологического исследования назначают качественный анализ ПЦР. Обнаружение РНК вируса свидетельствует об остром или хроническом течении вирусной инфекции, что требует дальнейшего обследования пациента для подготовки к проведению терапии.

Назначают следующие диагностические тесты:

• определение иммуноглобулинов G и М для установления стадии заболевания (острая, хроническая, рецидив латентного течения инфекции);
• оценка вирусной нагрузки;
• генотипирование;
• • определение степени поражения печени.

Обязательны и другие исследования: клинические анализы крови, мочи и кала, выявление возможных сопутствующих коинфекций (ВИЧ, аутоиммунные заболевания), исключение или подтверждение беременности.

Биологическим материалом для проведения ИФА и ПЦР является сыворотка крови. Реже исследование проводят на биоптате печени, но такой тест трудоемкий, дорогостоящий и требует выполнение инвазивных медицинских процедур.

В 2017 году на фармацевтическом рынке появились экспресс-тесты, позволяющие проводить предварительную диагностику гепатита С по образцу слюны. Преимуществом набора является возможность выполнения самостоятельно в домашних условиях. Но результат экспресс-теста также требует подтверждения, несмотря на то, что его специфичность достигает 96%.

Расшифровка серологических маркеров на гепатит С обязательно проводится в тандеме с данными полимеразной цепной реакции. Значение полученных результатов приведено в таблице ниже.

Иногда пациенты и врачи сталкиваются с ситуацией, когда качественный анализ методом ПЦР на РНК отрицательный, а маркеры положительные (при проведении серологического обследования).

В таком случае доктора придерживаются следующей тактики:

1. Повторная постановка полимеразной цепной реакции для исключения ошибочного результата вследствие лабораторной ошибки.
2. Исключение/подтверждение заболеваний, синдромов и состояний, которые могут быть вероятной причиной ложноположительного результата ИФА.
3. Сбор анамнеза. Такая картина характерна после перенесенного острого гепатита С. При этом человек может сам не знать о прошедшем заболевании. Сопоставление симптоматики (в том числе неспецифической), предположение пути заражения и данных клинических исследований позволяют доктору предположить такой исход патологического процесса.
4. Повтор анализа через 3–4 недели, когда можно исключить вероятность диагностического окна.

Но вне зависимости от результатов исследований трактовать полученные данные должен только врач. Специалисты предостерегают от самостоятельной терапии. Комбинация противовирусных препаратов и длительность их применения подбирается с учетом генотипа HCV наличия или отсутствия коинфекций и ряда других факторов.

источник

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

По дисциплине « Инфекционные болезни»

МАРКЕРНАЯ ДИАГНОСТИКА ОСТРЫХ И ХРОНИЧЕСКИХ ГЕПАТИТОВ В И С.

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

Выявление серологических маркеров вирусных гепатитов …. 3 стр

Серодиагностика вирусного гепатита В…………………………. 4 стр

Серодиагностика вирусного гепатита С………………………….10 стр

Список использованной литературы. ………………………….. 19 стр

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

Выявление серологических маркеров вирусных гепатитов

Установить вирусную природу гепатита и получить информацию об его этиологии возможно только путем выявления серологических маркеров вирусов гепатита. К таким маркерам относят вирусные белки (антигены), специфичные антитела, вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию, и нуклеиновые кислоты вируса (ДНК или РНК), представляющие его геном. Совокупность методов, позволяющих выявлять в биологических тканях и жидкостях специфические вирусные или бактериальные белки (антигены) или антитела, вырабатываемые в организме хозяина в присутствии того или иного возбудителя, относят к иммунологическим методам лабораторного анализа. За последние несколько десятилетий иммунологические методы исследования получили повсеместное распространение. Причиной этого явилось тесное слияние иммунологии и биотехнологии, которое позволило разработать и внедрить в практику широкий спектр тест-систем, основанных на взаимодействии антиген — антитело. Применительно к вирусным гепатитам, иммуноферментный анализ относится к непрямым методам обнаружения возбудителя, позволяющим установить этиологию болезни. Сравнительно недавно в практику клинико-диагностических лабораторий вошли методы генодиагностики, позволяющие обнаруживать и характеризовать гены или несмысловые последовательности ДНК и/или РНК. Своим развитием эти методы обязаны разработкой в 1983 г принципа полимеразной цепной реакции (ПЦР). Первые сообщения по практическому применению ПЦР появились в 1985 г и с тех пор количество публикаций, где ПЦР используется в качестве одного из методов исследования, занимает одно из первых мест в мировой научной литературе. Эти подходы приложимы для обнаружения и исследования геномов инфекционных

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

агентов, обнаружения маркеров онкологических заболеваний, выявления генетических изменений в геноме человека, связанных с теми или иными функциональными нарушениями. В отличие от ИФА, ПЦР-анализ относится к прямым методам обнаружения возбудителя в клиническом материале, что позволяет оценить активность вирусного процесса и проследить процессы распространения возбудителя в различных органах и тканях.

Серодиагностика вирусного гепатита В.

Вирус гепатита В (hepatitis B virus, HBV) относится к семейству Hepadnoviridae. Геном вируса представлен частично сдвоенной кольцевой молекулой ДНК размером 3200 п.н. При световой микроскопии HBV выглядит сферической частицей диаметром 42 нм (частица Дейна), состоящей из ядра — нуклеоида, имеющего форму икосаэдра диаметром 28 нм, внутри которого находится двуцепочечная ДНК, концевой белок и фермент ДНК-полимераза. В состав нуклеоидного белка входят HBcAg и HBeAg. Внешняя оболочка (толщиной 7 нм) образована поверхностным антигеном HBV — HBsAg . Вирус гепатита В является псевдоретровирусом, т. е. его ДНК может частично встраиваться в геном гепатоцитов.

При ОВГ и обострении ХГ вирусные частицы можно обнаружить в гепатоцитах и сыворотке крови больного. При интегративной форме ХГ В и в стадии ремиссии HBV в сыворотке крови не выявляется. Основой лабораторной диагностики инфекции HBV является определение серологических маркеров инфицирования вирусом: HBsAg, HВeAg, анти-НВс класса IgM и IgG, анти-НВе и анти-HBs, HBV ДНК и активности вирусной ДНК — полимеразы. В зависимости от течения вирусного гепатита В спектр изменения серологических маркеров выглядит по-разному.

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

HBsAg — основной маркер инфицирования HBV. При остром вирусном В в большинстве случаев (90-80 %) HBsAg удается выявить в инкубационном периоде, начиная с 3-5-й недели заражения. Средняя продолжительность циркуляции антигена — 70-80 дней. Быстрое исчезновение HBsAg (в первые дни желтухи) с появлением антиНВs — плохой прогностический признак. При хроническом гепатите В HBsAg может циркулировать в крови больного на протяжении многих лет. Следует отметить, что применяющиеся в настоящее время методы определения HBsAg, в том числе ИФА, имеют порог чувствительности. Поэтому при наличии клинических признаков гепатита и отсутствиии HBsAg в сыворотке крови необходимо исследовать другие маркеры инфекции HBV. Наличие HBsAg в крови свидетельствует о присутствии вируса в печени и с большой долей вероятности в крови. Не всякая сыворотка, содержащая HВsAg, содержит вирус гепатита В. В ряде случаев ДНК вируса встраивается в ДНК гепатоцита не полностью, а частично, только тем участком, который кодирует синтез HBsAg. В этих случаях синтезируются HBsAg без других компонентов вириона, (то есть без других антигенов). Считают, что такая ситуация возникает при «здоровом» носительстве HBsAg. HBeAg вируса гепатита В характеризует высокую инфекционность крови, являясь показателем активной репликации HBV. HBeAg циркулирует в крови больного только в присутствии HBsAg. В первую неделю желтушного периода он выявляется у 85-95 % больных. Выявление HBeAg в течение двух и более месяцев служит прогностическим признаком развития хронического гепатита. У большинства больных хроническим гепатитом с высокой активностью процесса HBeAg сохраняется на длительный срок (до нескольких лет). Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В класса M (анти-НВc IgM) — маркер активной репликации НВV и острой инфекции. Выявляются через 1-2 недели после обнаружения HBsAg и сохраняются на протяжении 2-18 месяцев. У 4-20 % больных острым гепатитом В анти-HBc IgM являются единственным маркером инфекции. При

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

ХГ В анти-НВс IgM могут быть выявлены у некоторых больных в меньших титрах, чем при острой инфекции, причем титр антител отражает тяжесть гепатита. Антитела к HBcAg класса G (анти-НВс IgG) появляются практически одновременно с анти-НВс IgM. Как првило, они остаются у всех лиц, переболевших гепатитом В, пожизненно. У 95 % носителей HBsAg наряду с HBsAg циркулируют и анти-НВс IgG. Антитела к HBsAg (анти-НВs) свидетельствуют о ранее перенесенной инфекции или о наличии поствакцинального иммунитета (защитный уровень — 10 МЕ/мл). Они появляются в период выздоровления, через 4 недели после исчезновения HBsAg, достигая максимальной концентрации через 1-2 года, с последующим постепенным снижением уровня, недоступного выявлению современными методами диагностики. В некоторых случаях анти-HВs могут циркулировать пожизненно. Появление анти-HBs на фоне клинического улучшения у больного гепатитом В является хорошим прогностическим признаком. Важно отметить, что в динамике острой инфекции HBV имеется «окно», когда HBsAg уже не определяется, а анти-HBs еще не появились. При этом выявляются анти-HBc IgM и IgG. Из этого следует вывод о необходимости обследования больных ОВГ на анти-HBc IgM даже при отрицательных результатах исследования HBsAg и анти-НВs. Антитела к HBeAg (анти-НВе) появляются в крови после элиминации HBeAg и завершения репликации вируса. К концу 9-й недели острого периода гепатита В более 90 % больных имеют анти-НВе. В период выздоровления анти-НВе могут исчезать. Однако, наличие анти-НВе не является показателем отсутствия инфекционности конкретной сыворотки крови. Показано, что у ряда больных в ходе развития гепатита В (около 10%) под влиянием «иммунного давления» на вирус возникают мутантные формы, которые «избегают» иммунного надзора и не элиминируются. У носителей анти-HBe был выделен мутант, неспособный продуцировать HBeAg из-за дефектов в области precore и получивший обозначение HBeAg-отрицательного. Появление HBeAg-отрицательного мутанта приводит к прогрессированию поражения печени при

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Ульяновский государственный университет

Институт медицины, экологии и физической культуры

Кафедра инфекционных и кожно-венерических болезней

продолжающейся репликации вируса (наличие ДНК HBV в сыворотке крови). При первичном инфицировании HBeAg-отрицательным мутантом существенно возрастает риск развития фульминантного гепатита. Описанные маркеры гепатита В исследуются методом ИФА. Спектр антител (анти-НВе, анти-НВs, анти-НВc IgM, анти-НВc IgG) и антигенов (HBsAg, HBeAg) позволяет установить диагноз гепатита В и определить стадию заболевания (таблица 3). Недостатком данного метода является невозможность его использования при заражении мутантными формами вируса, при иммуносупрессии (больные онкологическими заболеваниями, наркоманы и т.д.) и для количественной оценки присутствующего в организме возбудителя. Решение этих задач стало возможным в результате внедрения молекулярно-биологических методов в практику клинико-диагностических лабораторий.

Таблица 3. Различные сочетания серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В и их интерпретация

источник

Диагностика начинается с обследование больного. Для правильной и своевременной постановки диагноза «вирусный гепатит» врачи сначала обследуют пациента, направляют его на сдачу анализов крови и мочи.

В первую очередь они обращают внимание на такие характерные для начального периода этого заболевания симптомы, как вялость, общая мышечная слабость, снижение аппетита, тошнота, неприятные ощущения в животе, потемнение цвета мочи, увеличение и уплотнение печени, повышение болевой чувствительности ее нижнего края. В общем анализе крови врачи обращают внимание на содержание лейкоцитов, лимфоцитов, СОЭ.

Прибегают к проведению биохимических анализов крови и мочи для того, чтобы оценить степень поражения печени и подтвердить, связана ли желтуха с воспалением печени. Наиболее показательным является уровень желчного пигмента — билирубина, образующегося в печени в результате распада эритроцитов.

В норме билирубин связывается белками крови и не оказывает токсического действия на ткани организма. При гепатитах концентрация свободного и связанного билирубина в крови резко повышается. Когда она превышает 200–400 мг/л, желтуха становится видимой на глаз.

Говорит о повреждении гепатоцитов возрастающий уровень активности трансаминаз — АлАТ и АсАТ, которые попадают в кровь из клеток печени сквозь поврежденные оболочки. Существуют также специальные тесты на состояние системы свертывания крови, в которой участвуют белки, синтезируемые в печени. Диагностическое значение имеет положительная реакция мочи на уробилин.

Свидетельствующим о нарушении функции печени, является показателем — тимоловая проба. Изменение протромбинового индекса характеризует тяжесть течения вирусного гепатита, а повышение активности щелочной фосфатазы, общего билирубина свидетельствуют о нарушении секреторной функции печени. Реакция мочи на желчные пигменты в начале болезни бывает положительной значительно реже.

В диагностике немаловажное значение, как острых, так и хронических форм вирусных гепатитов отводится ультразвуковому обследованию органов брюшной полости. С помощью этого метода врачи могут определить такие изменения, которые не обнаруживаются при внешнем обследовании: увеличение печени, сужение печеночных вен, уплотнение и утолщение их стенок, признаки воспаления желчного пузыря и поджелудочной железы, расширение воротной и селезеночной вен, увеличение селезенки, увеличение лимфатических узлов. Важнейшим методом диагностики, в особенности хронических гепатитов, является биопсия печени.

Методы обнаружения антител и антигенов в крови и других жидкостях организма включает в себя серологическая диагностика. Для ранней диагностики вирусных гепатитов, в том числе безжелтушных, бессимптомных форм, в сыворотке крови определяют наличие вирусных белков (антигенов, которые еще называют маркерами вирусных гепатитов) или антител к ним с помощью иммупоферментного анализа (ИФА). Кроме того, ИФА по возможности дополняется полимеразной цепной реакцией (ПЦР), позволяющей определить наличие в сыворотке крови вирусных нуклеиновых кислот — ДНК вируса гепатита В, РНК вирусов других гепатитов, что особенно важно для начала своевременного лечения.

Иммуноферментный анализ (ИФА) — является универсальным методом иммунологической диагностики, который широко используется на практике. Он предназначен для выявления вирусных белков (антигенов) или антител, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на проникновение вирусов в организм человека. Эти белки являются своеобразными маркерами (метками) или признаками, наличие которых позволяет поставить точный диагноз, оценить характер заболевания, помочь лечащему врачу выбрать правильное лечение. Этот метод основан на известном взаимодействии «антиген-антитело».

Для определения антигенов различные коммерческие фирмы выпускают тест-системы, которые представляют собой 96-луночные полистироловые планшеты. На дно лунок заранее сорбируют («пришивают») антитела к тому или иному антигену возбудителя, например, к поверхностному антигену вируса гепатита В — HBs-антигену.

На первом этапе в каждую лунку добавляют образец, например, сыворотку крови больного в разных разведениях, содержащую пока не определенный вирусный белок (антиген). Если этот белок (антиген) «узнал» свое антитело, то происходит их связывание. Это означает, что сыворотка больного содержит тот антиген, антитела к которому сорбированы на дне планшетки.

Для того чтобы увидеть результаты этой реакции, существует следующая стадия, на которой к комплексу «антиген-антитело» добавляют соединение, которое связывается с антителом. Это соединение содержит фермент, например, пероксидазу хрена. При добавлении к нему субстрата происходит расщепление последнего с последующим окрашиванием раствора в желто-коричневый цвет.

На следующей стадии проводят тщательную промывку каждой лунки от непрореагированных компонентов. В тех лунках, где антиген, как в нашем случае, полностью связан с антителом, он уже не может взаимодействовать с добавляемым соединением.

Поэтому оно удаляется из лунки при отмывании. По мере разведения сыворотки содержание в ней антител снижается, и они уже не в состоянии полностью связать антиген. В этих лунках соединение, содержащее фермент, связывается с антигеном и остается в лунке после промывания. На следующей стадии добавляют субстрат и смотрят результаты реакции, которые оценивают визуально или с помощью спектрофотометра.

Таким образом, мы выявили, что в образце сыворотки от больного содержится HBs-антиген. Можно также выяснить его количество или титр, определив то последнее разведение сыворотки, где появилось желтое окрашивание. Чем больше степень разведения, тем больше вируса содержится в крови больного.

Подобным образом можно определить наличие антител к тому или иному возбудителю вирусного гепатита. Только в этих случаях используют диагностические тест-системы с «пришитыми» на дно лунок не антителами, а известными антигенами. Достоинствами этого метода являются высокая чувствительность и специфичность, простота постановки реакции, возможность обследования одновременно большого количества пациентов. Среди недостатков метода можно отметить необходимость специального дорогостоящего оборудования и соответствующей квалификации персонала.

В современной лабораторной диагностике ПЦР занимает особое место. Метод ПЦР поднял клиническую лабораторную диагностику па принципиально иную высоту — уровень определения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), что позволяет провести прямое обнаружение инфекционного агента или генетической мутации в любой биологической среде.

При этом способом ПЦР теоретически может быть обнаружена одна искомая молекула нуклеиновой кислоты среди миллионов других. С точки зрения клинической медицины определение нуклеиновой кислоты равнозначно обнаружению возбудителя в объекте исследования.

Из биологии известно, что нуклеиновые кислоты (ДНК или РНК) обладают свойством к саморепродукции (воспроизводству). Этот принцип и лежит в основе метода ПЦР, когда этот процесс осуществляется искусственно в лабораторных условиях. Для этого из полученного от больного образца ткани (например, в случае подозрения на вирусный гепатит) выделяют сначала нуклеиновую кислоту.

Она выполняет роль своеобразной «матрицы», на которой осуществляется синтез. Нуклеиновая кислота имеет свой «отпечаток» — уникальную последовательность нуклеотидов, из которых она состоит. Для каждого возбудителя такая последовательность изучена, составлена своеобразная «карта».

Самый главный элемент в ПЦР — это праймер (короткие участки ДНК, комплементарные (соответствующие) участкам выделенной из образца нуклеиновой кислоты). Праймеры обеспечивают запуск и специфичность реакции.

Таким образом, тест-система для ПЦР состоит из смеси нуклеиновых кислот испытуемого образца, праймера и специальных ферментов (полимераз)) с помощью которых эта реакция невозможна. ПЦР-анализ включает несколько циклов (этапов), в результате которых получаются точные копии распознаваемого участка матричной нуклеиновой кислоты. Эти циклы повторяются 30–50 раз в соответствии с заданной программой. Конечный продукт этой реакции распознается с помощью метода электрофореза в геле.

Одним из важнейших критериев диагностической эффективности любого лабораторного анализа является показатель «чувствительности». При этом следует различать аналитическую и диагностическую чувствительность. Аналитическая чувствительность, применительно к ПЦР, представляет собой то минимальное количество копий ДНК или РНК в 1 мл раствора образца, которое может быть определено данной тест-системой.

Большинство коммерческих тест-систем позволяет обнаружить в биологической пробе искомую нуклеиновую кислоту, даже если ее концентрация составляет несколько сот копий в 1 мл образца. С этим связано общее положение, определяющее клиническую пригодность любых лабораторных способов диагностики или тест-систем — диагностическая чувствительность метода не должна быть ниже 95–98 %.

Второй универсальный критерий лабораторной эффективности — «специфичность», которая определяется процентом здоровых людей, имеющих истинно отрицательные результаты анализа. Метод ПЦР обладает высочайшей специфичностью, которая достигает 99-100 %.

Диагностическая чувствительность и специфичность ПЦР сопоставимы, а зачастую и превосходят показатели, обеспечиваемые другими методами, которые являются «золотым стандартом» в диагностике инфекционных заболеваний.

Результаты ПЦР-анализа можно получить в течение одного рабочего дня, при этом отобранные для анализа пробы могут храниться (накапливаться) в течение даже нескольких недель при соблюдении соответствующих температурных норм. Проведенная недавно в нескольких зарубежных исследовательских центрах суммированная оценка чувствительности различных методов диагностики показала, что ИФА имеет чувствительность 50–70 %, а ПЦР — от 90 до 100 %.

ПЦР, по сравнению с ИФА и другими способами, обладает двумя важными преимуществами: высокой чувствительностью и непродолжительностью анализа по времени, то есть «актуальностью» получения результата исследования врачом и пациентом.

— метод позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК даже в тех случаях, когда с помощью других способов это сделать невозможно;

— метод обладает высокой специфичностью (до 100 %). Она обусловлена тем, что в исследуемом «материале определяется уникальный фрагмент нуклеиновой кислоты, характерный только для данного возбудителя или гена;

— возможность проведения не только качественной (наличие), но и количественной (концентрация) оценки содержания нуклеиновой кислоты. В настоящее время с помощью коммерческих тест-систем можно определять несколько сот копий в исследуемом образце;

— высокая технологичность и автоматизация метода позволяют врачу получить результаты исследования и ознакомить с ними пациента в день проведения анализа;

— ПЦР позволяет выявить возбудителя в организме еще до развития заболевания, например, в инкубационном периоде;

— для проведения ПЦР—анализа достаточен минимальный объем пробы (до нескольких микролитров);

— ПЦР-анализ позволяет одновременно диагностировать несколько возбудителей заболеваний в одной пробе без ущерба для чувствительности или специфичности результата;

— полученные результаты ПЦР можно вносить в компьютерные информационные носители или фотографировать для дальнейшей оценки независимыми экспертами.

Несмотря на вышеуказанные достоинства метод ПЦР все же не лишен некоторых недостатков, которые следует учитывать при оценке результатов исследований:

— высочайшие требования к оснащению лаборатории, качеству тест-систем и строжайшее соблюдение регламента исследования во избежание получения ложных результатов. Решение проблемы качества анализов возможно при соответствующей квалификации персонала и обязательной сертификации лаборатории;

— неоднозначная оценка положительного результата ПЦР. Именно этот факт зачастую является необоснованным аргументом врачей-практиков для сомнения в полученном результате и эффективности метода ПЦР. Например, у лиц с обнаруженной в крови методом ПЦР ДНК возбудителя клинически заболевание может развиться не всегда.

В данной ситуации при оценке ПЦР-анализа следует говорить об инфицированное больного, а не о развитии инфекционной болезни. Метод ПЦР — анализа позволяет определять наличие или отсутствие возбудителя, в значительной мере отвечает на вопрос «лечить не лечить», а также дает возможность оценить качество лечения путем контроля наличия или отсутствия возбудителя. Врач, оценивая итог ПЦР-анализа, осознает, что этот результат является не единственным аргументом в принятии решения о начале лечения или отказе от него.

Для каждого вида возбудителя вирусных гепатитов разработаны тест-системы, но наиболее ценным метод ПЦР оказался в диагностике вирусов гепатитов В, С, D, G. Метод ПЦР является крайне важным для диагностики гепатита В. Это связано с тем, что среди множества разновидностей этого вируса встречаются мутантные (с измененными признаками), которые не определяются обычными серологическими тестами.

Метод ПЦР-анализа позволяет выявить, и какой форме находится вирус гепатита 15, способен ли он к самостоятельному размножению или интегрировался (встроился) в ДНК клетки-хозяина. Это имеет крайне важное клиническое значение, так как при интегративной форме этой инфекции человек не заразен для окружающих (безопасность для полового партнера, профессиональная пригодность, отсутствует риск вертикальной передачи вируса от матери к плоду и т. п.).

Кроме того, таким пациентам не показана противовирусная терапия, более того — она даже опасна. Вместе с тем, при интегративной форме инфекции резко возрастает (более чем в 200 раз) вероятность развития рака печени. Таким людям необходимо не менее одного раза в год проходить комплексное клинико-лабораторное и инструментальное обследование.

Метод ПЦР может выступать в качестве арбитра для определения необходимости начала лечения и контроля его эффективности. Быстрое исчезновение из крови ДНК вируса гепатита В является прямым и надежным тестом успешного исхода противовирусного лечения.

Таким образом, определение ДНК вируса гепатита В в плазме крови является важнейшим анализом, который в совокупности с другими лабораторными исследованиями позволяет объективно диагностировать инфекцию, определять характер инфекционного процесса, выступать в качестве критерия в проведении терапии и оценки ее эффективности.

Метод ПЦР—анализа не имеет себе равных и в диагностике, оценке прогноза и успеха противовирусной терапии инфекции, вызванной вирусом гепатита С. Применение ПЦР позволяет выявлять вирус гепатита С на самом раннем этапе инфекционного процесса, поскольку РНК вируса гепатита С может обнаруживаться в сыворотке крови уже через неделю после инфицирования. С помощью этого метода определяют генетические разновидности этого вируса, которые позволяют врачу назначить правильное лечение.

В случае вирусного гепатита D метод ПЦР-анализа позволяет определить вирусную РНК в сыворотке крови пациента, а также смешанную гепатит В и D инфекцию. Поэтому данный метод исследования может использоваться для контроля эффективности лечения, прогноза течения и исхода болезни. Врачу важно определить, имеется ли смешанная инфекция, так как гепатит D усиливает некротический эффект при гепатите В, а, стало быть, повышает риск его развития.

Метод ПЦР-анализа в настоящее время остается единственным способом доказать наличие заражения вирусом гепатита С.

Гепатит Е. Основными диагностическими признаками вируса гепатита Е являются: предположение о водном механизме передачи, возраст больного от 20 до 40 лет, распространение в регионах преимущественно тропического и субтропического пояса, клинические проявления подобно гепатиту А с преобладанием легких форм, регистрация тяжелых форм с угрозой летального исхода у беременных женщин во второй половине беременности, реже — в раннем послеродовом периоде и у кормящих матерей (протекают с интенсивным гемолизом, гемоглобинурией, острой почечной недостаточностью и тяжелым тромбогеморрагическим синдромом). Подтверждает диагноз выявление антител в крови.

Гепатит В. Вирусный гепатит В врачи подозревают в случае, если заболевшему за 45-180 дней до начала болезни переливали кровь или ее компоненты (эритроцитарную, лейкоцитарную, тромбоцитарную массу), проводили оперативные вмешательства, исследования внутренних органов, многочисленные инъекции (в том числе наркотиков), или, что случается гораздо реже, если больной имел половой или тесный контакт с больным гепатитом В. Критерием раннего подтверждения диагноза служит обнаружение в крови HBs, НВе и НВс-антигенов, а также вирусной ДНК.

Гепатит С. В отличие от гепатита В, в диагностике которого учитываются антигенные и антительные маркеры, при гепатите С методом ИФА улавливаются только антитела, что связано с низкой концентрацией вируса в крови. Антигены вируса гепатита С могут быть обнаружены в биоптатах печени.

Лабораторная диагностика включает в себя три основных вида анализов.

Определение антител. Несмотря на высокую специфичность, современные диагностические иммуноферментные системы не застрахованы от гипердиагностики, то есть отложноположительных результатов. Для их исключения также требуется оценка на основе результатов анализов, полученных через разные промежутки времени. Возможны и ложноотрицательные результаты, когда антивирусные антитела не удается обнаружить, несмотря на присутствие вируса в организме. Это бывает в следующих случаях:

— начальный период заболевания;

— во время приема больными иммунодепрессантов — препаратов, подавляющих иммунную систему;

— при заражении некоторыми генотипами (прежде всего 3 и 4).

В настоящее время выпускаются коммерческие тест-системы для выявления антител к вирусу гепатита С 1-го генотипа. Однако такие тесты могут быть недостаточно эффективны для надежного определения антител при инфицировании вирусом иного генотипа. Это имеет огромное значение для регионов, где превалируют вирусы других типов. Таким образом, для эффективной диагностики гепатита С необходим высокочувствительный тест, способный реагировать с антителами к вирусу гепатита С любого генотипа.

Определение вирусной РНК. С диагностической целью производится обнаружение РНК вируса гепатита С. На сегодняшний день этот тест считается «золотым стандартом» в диагностике гепатита С. Для этого наиболее широко используется классический вариант полимеразной цепной реакции (ПЦР). С ее помощью удается следить за размножением вируса, а также судить о присутствии его в печени и других тканях. Определение РНК наиболее часто применяют для подтверждения результатом выявления антител, постановки раннего диагноза острою гепатита (вирусную РНК удается обнаружить уже на 7-21-й день после инфицирования, то есть задолго до появления первых антител), для наблюдения за беременными в перинатальный период заражения и контроля за эффективностью антивирусной терапии.

Данные этих двух анализов хорошо дополняют друг друга. Положительные результаты ПЦР-анализа в сочетании с отрицательными результатами на антивирусные антитела характерны для некоторых периодов острого гепатита. Негативные показатели ПЦР-анализов на фоне положительных антительных тестов могут быть следствием низкой (не улавливаемой в ПЦР) концентрации вируса в крови. Повторные положительные ПЦР-анализы крови отражают активацию вируса в клетках печени или других органов.

Также ПЦР применяется для обнаружения вируса в тканях печени, взятых при биопсии. Это дает более полную информацию о развитии инфекционного процесса, так как вирус способен длительное время находиться в гепатоцитах, не выходя в кровь или присутствуя в ней в низких концентрациях. Это чаще происходит на ранних этапах инфекции, но наблюдается и при хроническом гепатите.

Определение белков (антигенов) вируса гепатита С. Принципиальная возможность выявления белков вируса гепатита С была установлена вскоре после открытия вируса при иммунофлюоресцентном изучении тканей, взятых из печени больных хроническим гепатитом С людей и шимпанзе, зараженных этим вирусом.

Определение вирусных белков (антигенов) в сыворотке крови из-за их низкого содержания долго не удавалось. Лишь недавно были разработаны методические подходы для иммуноферментного выявления внутреннего С-белка в крови и организовано производство первых коммерческих тест-систем. Их внедрение в практику позволит решать спорные вопросы диагностики на более экономичной основе, чем определение вирусной РНК. Определение уровней АлАТ является наиболее дешевым методом оценки активности течения гепатита С. Однако однократно полученные данные могут быть недостаточными для определения тяжести заболевания.

Более важную информацию относительно поражения печени может дать определение концентрации АлАТ в течение нескольких месяцев. Получить информацию о степени поражения печени, недоступную при других методах исследования, может дать врачу биопсия печени. Данные, полученные в результате этой процедуры, позволяют принять решение в пользу начала или отмены противовирусного лечения.

В статье использованы материалы из открытых источников: Автор: Трофимов С. — Книга: «Болезни печени»

А. А. Асратян Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН,
Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова

Основой лабораторной диагностики вирусных гепатитов служат:

— знания об их возбудителях и репликации

— информация о появлении и исчезновении маркеров инфицирования

— современные иммунохимические и молекулярно- биологические методы детекции антигенов, антител и нуклеиновых кислот/

Лабораторная диагностика гепатита В (ГВ) Строение вириона см. рис. 1.

Лабораторная диагностика ГВ — основана на выявлении специфических для ГВ антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот, основными из которых являются:

анти-НВс класса Ig М и IgG

Наиболее широко в диагностике ГВ используется определение НВsAg. Данный антиген выявляется как при остром, так и при хроническом заболевании (однако острая инфекция обычно подтверждается наличием высоких титров анти-НВс IgМ). При остром ГВ поверхностный антиген вируса обнаруживается через 3-5 недель от момента инфицирования, то есть задолго до появления клинических признаков болезни и в этих случаях является единственным серологическим маркером. НВsAg постоянно выявляется в преджелтушном и желтушном периодах болезни. Персистирование НВsAg в течение 6 месяцев и более указывает на затяжное или хроническое течение болезни, и позволяет предположить хроническое носительство вируса. Элиминация НВsAg и появление антител к нему является непременным условием выздоровления. Серологическими маркерами репликации ВГВ являются — анти-НВс класса IgМ, НВеAg, ДНК и ДНК-полимераза, которые обнаруживаются при остром ГВ с первых дней клинических проявлений и могут обнаруживаться при обострении хронического ГВ. Серологические маркеры репликации ВГВ определяют как в целях общей диагностики, так и для оценки эффективности применяемой терапии. НВсAg выявляется в ткани печени и не определяется в сыворотке крови. Опосредовано его присутствие в организме отражают циркулирующие антитела – анти-НВс класса IgМ и IgG. В острый период ГВ наличие анти-НВс класса IgМ является дополнительным маркером этого заболевания. Однако необходимо учитывать, что около 50% больных хроническим ГВ также могут иметь эти антитела в периоде обострения, но чаще в низких концентрациях. Наличие в сыворотке крови только анти-НВс класса IgG наблюдается в период между исчезновением НВsAg и образованием анти-НВs. Сочетанное выявление анти-НВс класса IgG в низком титре с анти-НВs указывает на перенесенную ГВ-инфекцию и наличие иммунитета. Тестирование НВеAg проводят в сыворотках крови только с наличием НВsAg и позитивный результат данного маркера свидетельствует об активном процессе – либо подтверждает диагноз острого ГВ, либо свидетельствует об обострении хронического ГВ. Длительность циркуляции НВеAg имеет важное прогностическое значение: выявление НВеAg через 2 и более месяца после начала заболевания служит признаком возможного развития хронического гепатита. Выявление НВеAg без присутствия НВsAg в сыворотке крови в подавляющем большинстве случаев указывает на ложный результат анализа. Однако больные, инфицированные мутантным вирусом могут оставаться серонегативными по НВеAg, несмотря на сохраняющуюся инфекционность и наличие анти-НВе Наличие ДНК-ВГВ (наиболее чувствительный маркер продолжающейся репликации ВГВ) в сыворотке крови указывает на высокую инфекционность данного образца и активное размножение вируса в организме. Позитивный результат удается зарегистрировать практически у всех больных острым ГВ в разгар заболевания. Снижение его концентрации в процессе лечения хронического гепатита является хорошим прогностическим признаком, указывающим на эффективность применяемой терапии. Высокая активность аминотрансфераз сыворотки отражает воспалительное повреждение ткани печени, вызываемое преимущественно реакциями иммунной системы организма против инфицированных вирусом гепатоцитов, а не прямым цитопатическим действием вируса. Высокий уровень ДНК-ВГВ в сочетании с низким уровнем аминотрансфераз свидетельствует о недостаточном иммунном ответе организма. Выявление анти-НВе при отсутствии НВеAg и ДНК-ВГВ свидетельствует о закончившейся активной репликации инфекции. Сероконверсия НВsAg в анти-НВs происходит у 90-95% больных с острым ГВ в стадии разрешения инфекционного процесса и, является показателем иммунитета к вирусу ГВ, то есть наличие анти-НВs свидетельствует о перенесенной инфекции и наличие иммунитете к этой инфекции. Лица, имеющие эти антитела в защитной концентрации (10 МЕ и более) не болеют ГВ и не нуждаются в вакцинации. Все применяемые методы исследования для определения специфических маркеров ГВ можно разделить на 2 группы – иммунохимический и молекулярно-биологические. Иммунохимические – основное место принадлежит иммуноферментному анализу (ИФА) с его высокой чувствительностью и специфичностью, простотой проведения и стабильностью реактивов. Молекулярно-биологические – точечная и жидкостная гибридизация, а также цепная полимеразная реакция (ПЦР) – позволяет выявлять наличие ДНК-ВГВ непосредственно, либо с помощью определения вирусоспецифического фермента – ДНК- полимеразы. НВ sAg /анти-НВ s Для выявления основного маркера ВГВ, разработаны разнообразные методы, позволяющие определить антиген в концентрации до 0,05 нг/мл, которые подразделяются на так называемые «поколения» (табл. 1). В настоящее время основным методом обнаружения НВsAg является ИФА Важным этапом в развитии лабораторной диагностики вирусных гепатитов в России стали проведение (с 1998 г.) сравнительных испытаний диагностических препаратов для оценки их качества под эгидой МЗ РФ. Современные диагностические препараты обладают высокой специфичностью, но возможны и ложноположительные результаты. Для разграничения ложноположительных от истинно положительных результатов применяется тест нейтрализации НВsAg – специфической сывороткой. Принципиально новым для системы выявления НВsAg стало требование к отечественным производителям диагностических препаратов – обязательное включение в тест-систему слабоположительного контрольного образца, содержащего НВsAg в концентрации 1 нг/мл. Для определения анти- НВsAg был испытан весь спектр иммунохимических методов, основной из которых сейчас – ИФА (для качественного и количественного анализа). Анти-НВс класса Ig М и IgG , НВе Ag – анти-НВе (рис. 2 и табл. 2) Для тестирования этих маркеров могут быть использованы различные варианты твердофазного иммуноанализа: иммуноферментный, радиоиммунный, химиолюминисцентный и их различные варианты. ДНК ВГВ — определяют при помощи проведения ПЦР– анализа. В настоящее время наиболее широкое распространение получили амплификационные методы детекции ДНК ВГВ. Появилась возможность определять ДНК ВГВ в качественном и количественном варианте.

Лабораторная диагностика гепатита Д (ГД) Вирус гепатита Д (ВГД) – это дефектный вирус, содержащий одно-спиральную РНК, которому для репликации необходимо помощь вируса ГВ для синтеза оболочечных белков, состоящих из HBsAg, который используется для инкапсуляции генома ВГД. ВГД не принадлежит ни к одному из известных семейств вирусов животных, по своим свойствам ВГД наиболее близок к вироидам и сателлитным вирусам растений. Лабораторная диагностика осуществляется путем обнаружения серологических маркеров ВГД, включая наличие антигена, антител к нему и РНК ВГД. Обнаружение антигена ВГД и РНК ВГД в сыворотке крови или ткани печени свидетельствует о наличии активной ГД-инфекции, однако, следует отметить, что эти маркеры могут не обнаруживаться в сыворотке больных фульминантным ГД. Маркером активной репликации ВГД также является анти-ВГД класса IgМ. Серологические маркеры инфекции ГД зависят от того, как был приобретен вирус – в виде коинфекции с ВГВ (у большинства больных заболевание имеет острое течение и заканчивается выздоровлением) или суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией (протекает тяжелее, чем коинфекция — в 10% развивается фульминантный гепатит). При коинфекции в большинстве случаев антитела — анти-ВГД класса IgМ и IgG — обнаруживаются в течение заболевания. Титр анти-ВГД обычно снижается до практически неопределяемых уровней после выздоровления, и не сохраняется никаких серологических маркеров того, что человек был когда-либо инфицирован ВГД. Антиген ВГД определяется только у 25% больных и обычно исчезает вместе с исчезновением HВsAg. При суперинфекции у больных с хронической ГВ-инфекцией серологическая картина имеет следующие характерные особенности: – титр HBsAg снижается к моменту появления антигена ВГД в сыворотке; — антиген ВГД и РНК-ВГД продолжают определяться в сыворотке, так как обычно у большинства пациентов с суперинфекцией ГД (70-80%) развивается хроническая инфекция, в отличие от случаев коинфекции; — определяются высокие титры антител (анти-ВГД) как класса IgМ, так и IgG, которые сохраняются неопределенное время. Серологические маркеры вируса ГД определяют методом иммуноферментного и радиоиммунного анализа, а РНК-ВГД — методом полимеразной цепной реакции. Отечественными и зарубежными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все необходимые компоненты и реактивы для постановки теста. В диагностических препаратах используют дельта-антиген, полученный из печени сурков, экспериментально зараженных ГД; антиген, выделенный из печени погибших носителей ВГД; дельта-антиген, полученный генно-инженерным способом.

Лабораторная диагностика гепатита С (ГС) Открытие возбудителя ГС стало возможным благодаря методам молекулярной биологии в 1989-1991 гг. Сначала путем клонирования был получен из сыворотки больных с гепатитом “ни-А, ни-В” вирусный геном, а затем был установлена и структура самого вируса. Физико-химическая характеристика вируса позволили отнести ВГС к семейству флавовирусов. Геном вируса ГС (ВГС) представлен однонитчатой позитивной РНК, состоящих из 10 000 нуклеотидных оснований, образующих регионы, которые кодируют три структурных белка (С, Е1, Е2) и пять неструктурных (NS2, NS3, NS4, NS5). Особенностью ВГС является чрезвычайно высокая гетерогенность его генома. Анализ нуклеиновых кислот РНК-ВГС различных изолятов выявил существенные отличия в их первичной структуре. На основании этих данных была построена классификация ВГС, разделяющая их на варианты ( их 6-9) и субтипы- генотипы, одни из которых присутствуют во всех регионах мира, а другие только в отдельных странах. Лабораторная диагностика ГС была решена при помощи современных методов молекулярной биологии, учитывая, что при ГС вирус находится в крайне низкой концентрации и его антигены не доступны выявлению с помощью современных методов индикации, усилия исследователей сосредоточены на выявлении антител к различным антигенным компонентам вируса, обнаружение которых может служить индикатором наличия вируса. В качестве антигенов использовали белки, кодированные структурной и неструктурной зоной РНК-ВГС, полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза (полипептиды, используемые в современных иммунологических методах – С22-3; С33с, С100-3, С200, NS5, S-1-1). Лабораторная диагностика ГС основывается на обнаружении серологических маркерв ВГС: антител к вирусу ГС (анти-ВГС, анти-ВГС класса IgМ, IgG) методом ИФА и РНК-ВГС методом ПЦР. К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем для выявления анти-ВГС в иммуноферментном методе, но ИФА первого поколения сейчас не используется из-за низкой чувствительности. РНК-ВГС является показателем активной репликации ВГС и самым ранним маркером инфекции, и может быть обнаружена методом полимеразной цепной реакции уже через 1- 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз. Анти-ВГС обнаруживаются к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц методом иммуноферментного анализа. При определении анти-ВГС в некоторых случаях регистрируется ложноположительная реакция. Для разграничения ложноположительных образцов от образцов действительно содержащих антитела к ВГС, разработаны дополнительные тесты – рекомбинантный иммуноблотинг, определение спектра белков анти-ВГС. Иммуноблотинговые диагностикумы позволяют исключить неспецифический результат, полученный методом ИФА, однако визуальная оценка иммуноблотинговых полос может быть неоднозначной в разных диагностических центрах. В нашей стране более широкое распространение получили отечественные подтверждающие твердофазные иммуноферментные тест-системы (так называемы системы «Спектр»), основанные на определении антител к отдельным вирусным антигенам: core, NS3, NS4ab, NS5a. Выявление РНК ВГС считается «золотым» стандартом в диагностике ГС и подтверждением положительных результатов обнаружения анти-ВГС. В настоящее время для индикации РНК ВГС используется ПЦР в качественном и количественном варианте. Чувствительность методов определения РНК ВГС повышается с каждым годом, достигая в настоящее время 10-50 копий РНК в 1 мл крови. Диагноз хронического ГС у лиц с наличием анти-ВГС обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев.

Лабораторная диагностика гепатита А (ГА) Вирус ГА (рис. 3) — это РНК- содержащий вирус, размером 27 нм, классифицированный как пикорнавирус. Во всех изолятах собранных в разных частях мира, наблюдается только один серотип ВГА. ВГА не имеет наружной оболочки, но состоит из наружной белковой капсулы, или капсида, содержащего внутри положительную одноцепочную РНК, который действует в качестве матрицы для выработки вирусных белков внутри клетки-хозяина. Лабораторная диагностика ГА основана на выявлении маркеров вируса ГА – антигена ВГА, антител (анти-ВГА класса IgМ и IgG ), а также РНК ВГА. Окончательным доказательством о текущей или недавней инфекции служит наличие в сыворотке крови (даже в одной пробе сыворотки) антител к ВГА класса IgM (анти-ВГА IgM) и наличие ВГА в фекалиях. На перенесенную инфекцию ГА, а также на длительный иммунитет, указывает наличие антител к ВГА класса IgG (анти-ВГА IgG). Диагноз острого ГА подтверждается в острой или ранней стадии выздоровления при наличии анти-ВГА класса IgM, которые появляются в последние 5-10 дней инкубационного периода и продолжают выявляться на протяжении 6-7 месяцев от начала заболевания. Кроме того, эти антитела могут быть выявлены в первые месяцы у лиц (20-30%), вакцинированных инактивированной вакциной против ГА. Их образование связано с первичным иммунным ответом на введение антигена, а не на инфекцию, вызванную вакциной. РНК ВГА может быть выявлена за несколько дней до повышения активности АлАТ и в течение 5 — 59 дней заболевания при типичном течении ГА; при затяжных случаях — РНК ВГА в среднем может определяться до 95 дней. Антиген вируса ГА (ВГА-Ag) обнаруживается в фекалиях больных за 7-10 дней до проявления клинических симптомов и в первые дни заболевания, что используется также для ранней диагностики и выявления источников возбудителя инфекции. Концентрация ВГА в фекалиях является наивысшей на протяжении 2-х нед. перед появлением желтухи. У взрослых выделение вируса с фекалиями продолжается обычно менее одной недели после появления желтухи. Вирус, однако, был обнаружен также через 2 мес. от начало заболевания (во время обострения). Дети могут выделять вирус более длительно, чем взрослые, возможно в течение нескольких недель после клинического проявления заболевания. Хроническое выделения ВГА из фекалий не отмечается. Определение антигена ВГА нашло также применение в санитарной вирусологии при исследовании воды на наличие вируса. Анти-ВГА класса IgG (рис. 4) также появляются рано в начале заболевания (с 3-4 недели), сохраняются на протяжении всей жизни и обеспечивают пожизненную защиту от этого заболевания. Определение анти-ВГА IgG используется для изучения иммуноструктуры населения, динамики специфического гуморального иммунитета. Определение анти-ВГА класса IgG важно также для пред- и поствакцинального скрининга (минимальная протективная концентрация анти-ВГА соответствует 20 МЕ/л). Для их определения отечественными производителями выпускаются коммерческие диагностические препараты иммуноферментного анализа. Лабораторная диагностика основана на выявлении маркеров вируса ГА с помощью специфических иммунодиагностических методов — методы ИФА, РИА. Отечественными и зарубежными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все необходимые компоненты и реактивы для постановки теста. Кроме твердофазных ИФА и РИА с успехом применяется и метод иммуноэлектронной микроскопии, метод ПЦР. Все вышеупомянутые методы иммунодиагностики с равной вероятностью выявляют инаппарантные, бессмиптомные или клинически выраженные формы ГА. Особое место в лабораторной диагностике ГА занимают молекулярно-генетические методы тестирования РНК ВГА. ПЦР диагностика позволяет обнаружить РНК ВГА в концентрации 40 копий/мл. В настоящее время происходит накопление данных о месте ПЦР в системе лабораторной диагностики ГА.

Лабораторная диагностика гепатита Е (ГЕ) Этиологический агент гепатита Е (ГЕ) — это сферический вирус, лишенный внешней оболочки, это односпиральный РНК-вирус размером около 32-34 нм в диаметре. При постановке диагноза ГЕ в каждом отдельном случае необходимо принять во внимание несколько диагностических аргументов: — наличие у больного симптомокомплекса острого, и предположительно инфекционного гепатита, — надежное исключение этиологического участия вирусов ГА и ГВ, основанное на отрицательных результатах серологических тестов — анти-ВГА класса IgM и анти-НВс класса IgM, — тщательный анализ данных эпидемиологического анамнеза, включая указания на недавние выезды в эндемичные регионы, — исследование (по возможности) фекалий больного на присутствие частиц вируса ГЕ методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР. Существуют диагностические методы, основанные на применении иммунофлюоресцирующих антител (МФА) для определения антигена ВГЕ в фекалиях и иммуноферментного анализа (ИФА) для определения антител к ВГЕ — анти-ВГЕ класса IgM и IgG. Наличие анти-ВГЕ класса IgM с высокой частотой определяются в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции; выявление анти-ВГЕ класса IgG свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ — инфекции. Для диагностики ГЕ определяют также РНК ВГЕ. Отечественные фирмы производители диагностических тест-систем для выявления маркеров вирусных гепатитов:

МОСКВА и область — НИАРМЕДИК — ЭКОлаб — БИОСЕРВИС

НОВОСИБИРСК — ВЕКТОР БЕСТ — ВЕКТОР МБС ( МЕДИКОБИОЛ.СОЮЗ) — ВЕКТОР БИАЛЬГАМ

НИЖНИЙ НОВГОРОД — МИКРОГЕН (бывший ИМБИО) — ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ САНКТ-ПЕТЕРБУРГ — АВИЦЕННА — АКВАПАСТ

Когда необходима лабораторная диагностика вирусного гепатита С, то врач обязательно учитывает следующие факторы, которые являются важными:

• наличие или отсутствие в крови маркеров инфицирования вирусом гепатита С, а также других типов;
• показатели активности ферментов печени;
• результаты клинического осмотра больного;
• данные эпидемиологического анамнеза.

Диагностировать гепатит С с высокой степенью надежности позволяет только комплексный учет всех данных (нужно отметить, что диагностика гепатита В проводится также). Для полной диагностики вирусного проводится ряд анализов крови:

• общий анализ крови;
• биохимический анализ крови;
• ПЦР на определение РНК вируса (ПЦР – полимеразная цепная реакция);
• коагулограмма (определение свертываемости крови).

Также проводится УЗИ органов брюшной полости. Может назначаться пункционная биопсия печени. Только имея на руках все результаты, врач сделает точную диагностику. Также будет определен уровень развития вирусного процесса в организме, сделана оценка состояния печени и степень ее повреждения. Доктор подберет безопасное и эффективное лечение.

Задача врача при определении предрасположенности к вирусному гепатиту С существенно упрощается, если он располагает информацией о ранее имеющихся у человека заболеваниях и проведенных обследованиях.

Для проверки функционирования печени ее необходимо обследовать. Для выявления дисфункции в ее работе помогут исследования крови. При предположении наличия гепатита С врач назначает специальные исследования для обнаружения антител, которые вырабатываются для борьбы с этим тяжелым недугом.

При исследовании крови вирус гепатита С в крови подтверждается прямым или косвенным путем, на основании РНК – наследственной информации вируса (определяется с помощью ПЦР) либо при обнаружении антител в крови. Если посредством ПЦР подтверждается наличие в крови РНК вируса, то это говорит об остром течении заболевания.

При наличии антител против вируса гепатита С существует два варианта – либо хроническое течение заболевания, либо инфекция была излечена ранее. Дело в том, что даже после полного излечения антитела обнаруживаются в крови человека еще продолжительное время.

То есть лабораторная диагностика подразумевает сдачу анализа на определение наличия антител к вирусу гепатита С (если проводится диагностика гепатита В, то определяются антитела к этому типу вируса). При положительном результате назначается прямое исследование на нахождение в крови вируса. Для этого применяется метод ПЦР – полимеразная цепная реакция. Тест ПЦР является особо чувствительным, он используется именно для подтверждения наличия в крови человека вируса гепатита С.

В связи с тем, что у людей с хронической формой гепатит С очень высока вероятность возникновения рака печени, у них систематически, через определенные промежутки времени (от полугода до года) берут анализ крови для определения наличия онкомаркера рака печени или альфа-фетопротеина. Точно с такими же временными интервалами проводится и ультразвуковое исследование печени.

При положительных результатах анализов, то есть если анализ ПЦР подтвердил наличие вируса в организме, врачом может быть назначена биопсия печени. Эта процедура позволяет увидеть, насколько вирус распространен в печени, и определить степень ее повреждения.

При проведении биопсии производится забор участка ткани печени. Для анализа материал забирают с помощью специальной иглы. Далее полученный образец ткани подвергают исследованию, которое проводится под микроскопом.

Для диагностики назначаются и другие процедуры, такие как КТГ, УЗИ. Они применяются для того, чтобы исключить рак печени.

Анализ крови сдается также для определения типа вируса гепатита С или его генотипа, который поразил организм больного человека. Если есть данные о генотипе вируса и области поражения им печени, лечащему доктору будет проще подобрать необходимые методы лечения.

Необходимо провериться и сдать анализы крови на наличие гепатита С, в том числе сделать исследование методом ПЦР, если:

• присутствуют симптомы каких-либо заболеваний печени, например, плохой анализ крови;
• были использованы нестерильные шприцы, даже если это произошло много лет назад;
• половой партнер имеет такое заболевание, как гепатит С;
• проводился гемодиализ;
• при лечении применялись донорские органы или кровь, которые были получены до 1992 года (после этого года все донорские материалы подвергаются проверке на гепатит С).

Обязательно сдают анализ крови на гепатит С работники медицинских учреждений, которые по роду своей работы контактируют со шприцами, кровью и другими биологическими жидкостями пациентов.Нужно отметить, что в настоящее время существует возможность обследоваться в домашних условиях. Для этого применяется специальный тест, который продается в аптеке. При получении положительного результата необходимо сразу же обратиться к врачу и пройти обследование, которое определит наличие или отсутствие вируса в организме.

При постановке диагноза гепатит С врач назначит лечение и даст рекомендации для того, чтобы предотвратить дальнейшее распространение вируса.

двунитчатая ДНК с однонитчатым участком

в среднем 60-90 дней, может быть до 6 месяцев

преимущественно дети до 1 5 лет

Переход в хрониче­скую форму

I. Гепатит А (гА). Лабораторная диагностика гА основывается либо на выявлении самого возбудителя (метод иммунной электронной микроскопии — ИЭМ), его антигенов (радиоиммунный, иммуноферментный, иммунофлюорес-центный метод — РИА, ИФА, ИФ) или антител к вирусу гА (РИА, ИФА).

Для ранней диагностики заболевания, а также выявления источников ин­фекции используется определение антигена вируса гА в фекалиях больных, где он появляется за 7-10 дней до клинических симптомов и в первые дни заболе­вания.

Из определяемых в настоящее время специфических маркёров гА важ­нейшими являются антитела класса Ig M к вирусу гА, которые появляются в сыворотке крови и слюне уже в начале заболевания и сохраняются в течение 3-6 месяцев. Обнаружение антител класса Ig M к вирусу гА однозначно свидетельствует о гепатите А и используется для диагностики заболевания, в том числе и бессимптомных случаев инфекции,и выявления источников инфекции в очагах.

Антитела к вирусу гА класса Ig G выявляются с 3-4-й недели заболевания и сохраняются длительно, что позволяет оценить состояние иммунитета насе­ления, динамику специфического гуморального иммунитета.

Вирус гепатита А в материале от больного можно выявить методом им­мунной электронной микроскопии. В основе метода лежит смешивание суспен­зии вируса с антисывороткой, отделение иммунных комплексов и исследование их в электронном микроскопе.

II. Гепатит В (гВ). В организме людей, заражённых вирусом гВ, с разной частотой и на разных этапах могут выявляться серологические маркёры: по­верхностный HBs Ag и сердцевинный НВе Ag, а также антитела к ним (anti-НВс, anti-HBe, anti-HBs). Динамика их появления и интерпретация результатов представлены в табл. 4 и 5.

источник