Диагностика острых и хронических гепатитов обязательно должна носить комплексный характер.
Прежде всего она направлена на определение возбудителя данного заболевания. Также врач обязательно должен оценить степень нарушения работы печени и выявить сопутствующие осложнения. Начальной стадией диагностики является изучения анамнеза и осмотр пациента. После этого специалист назначает другие методы диагностики вирусных гепатитов – лабораторные и инструментальные.
В процессе ПЦР-диагностики заболевания определяют маркеры острых и хронических гепатитов. К ним относят следующее:
- Маркеры гепатита А. Анти-НАV IgM появляются в крови к окончанию инкубационного периода. В этот момент у человека возникают первые симптомы гепатита. Антитела присутствуют в сыворотке около полугода. Благодаря выявлению данных веществ методом ПЦР можно говорить о текущей или недавно возникшей инфекции.
Анти-НАV-total возникают в сыворотке позже. Они говорят о присутствии HAV-инфекции и последующем формировании иммунитета. Данный показатель, полученный в процессе исследований методом ПЦР, может использоваться для определения эффективности профилактики с помощью вакцин. - Маркеры гепатита В. В эту категорию входит НВsAg, который является поверхностным антигеном гепатита В и появляется в завершающей стадии инкубационного периода. Его не удается выявить в 10 % острых случаев заболевания и большинстве хронических.
Антитела анти-НВs возникают спустя 3-12 месяцев после начала развития патологии. Они присутствуют в организме примерно 5 лет. Ангиген НbcorA не удается определить в сыворотке крови. Его удается выявить лишь в гепатоцитах.
Анти-Нвcor IgM представляет собой антитела к ядерному антигену, которые характерны для завершения инкубационного периода и начала развития болезни. Определение данных веществ является значимым критерием при проведении ПЦР-диагностики.
Анти-Нвcor IgG характерны для парентеральных гепатитов во время развернутой клинической картины. Они сохраняются на всю жизнь и свидетельствуют о том, что человек перенес инфекцию. В завершение инкубационного периода можно обнаружить НвeAg. Он сохраняется в течение 10-12 недель и говорит о репликации парентеральных вирусов.
Анти-Нве представляют собой антитела к HbeAg и возникают во время развернутых проявлений. Данные вещества сохраняются на 5 лет после заболевания. При хронических парентеральных гепатитах их выявляют и по истечении указанного времени.
Помимо ПЦР-диагностики, очень важно оценить количество ферментов печени. Поражение тканей органа сопровождается попаданием в кровь ферментов, что влечет их увеличение в составе плазмы. В нормальном состоянии количество АСАТ составляет 5-35 Ед./л, а АЛАТ – 5-40 Ед./л.
Лабораторная диагностика вирусных гепатитов должна включать определение плазматической активности щелочной фосфатазы. В случае развития гепатита она увеличивается. В норме данный показатель составляет 30-115 Ед./л.
Немаловажное значение имеет оценка фракций билирубина – свободного и связанного. Его повышение обусловлено неспособностью клеток печени выводить из организма данный пигмент. В норме концентрация связанного билирубина составляет 0,1-0,3 мг/дл, а свободного – 0,2-0,7 мг/дл.
Наши постоянная читательница
Наша постоянная читательница справилась с ГЕПАТИТОМ С действенными медикаментами — Софосбувир и Даклатасвир. По отзывам пациентов — результат 97% — полное избавление от вируса. Мы решили посоветовать ДЕЙСТВЕННУЮ терапию Вам. Результат почти 100%. ДЕЙСТВЕННЫЙ МЕТОД.
Чтобы обследовать органы брюшной полости, обычно применяют ультразвуковое исследование. Это достаточно простой метод, который помогает визуализировать увеличение печени и других органов, а также оценить происходящие в них изменения. Также с помощью УЗИ оценивается состояние сосудов. Если же врач планирует сделать пункционную биопсию, данный метод поможет выбрать оптимальное место для прокола.
С помощью данного аппарата удается увидеть на мониторе определенные сечения внутренних органов. В результате можно визуализировать локальные изменения в них – камни, опухолевые образования и т.д.
Неправильные результаты можно получить исключительно в том случае, если работа органа нарушается на клеточном уровне. Вследствие этого весь орган поражен. К примеру, при изменении клеток печени удастся обнаружить нарушение оттенка тканей. Однако информацию относительно характера и тяжести болезни получить не удастся.
В такой ситуации проводится пункционная биопсия. Это наиболее точная методика, которая позволяет получить максимальное количество информации. С помощью данного способа оценивается структура тканей печени, что позволяет наиболее точно диагностировать гепатит.
Гепатит у беременных – очень опасная патология, поскольку она практически всегда провоцирует нарушения в развитии плода. При поражении вирусом типа В практически всегда заражается и ребенок. Наличие гепатита С у беременных провоцирует несколько иную картину. Тем не менее, нельзя сказать, развитие данного заболевания у беременных спровоцирует инфицирование малыша.
Чтобы провести правильную диагностику, прежде всего нужно сдать анализ крови и провести ПЦР-диагностику. При гепатите В у беременных имеет значение наличие HBsAg и НВеАg. Если они присутствуют, риск заражения ребенка повышается. В такой ситуации также уменьшается эффективность вакцины для беременных.
Если же будущая мама заболевает гепатитом С, инфицирование ребенка происходишь лишь в 5 % случаев. При этом данный вид заболевания передается от беременных к плоду лишь при условии активного протекания недуга. В большинстве случае ребенок заражается от матери при родах.
При выявлении вирусного гепатита у беременных обязательно требуется стационарная терапия. Если у женщин развивается цирроз печени, нужно принимать все меры, чтобы беременность и вовсе не наступила. Дополнительные нагрузки на организм, которые возникают у беременных, спровоцируют сильное обострение болезни.
При хронизации процесса беременность не оказывает влияния на клиническую картину патологии. Иногда у беременных женщин воспаления в печени и вовсе прекращаются. Однако нужно быть готовой к тому, что после родов гепатит резко обострится. Потому так важно держать данный процесс под контролем.
Дифференциальная диагностика проводится для того, чтобы отличить вирусный гепатит от острых поражений печени, связанных с воздействием химических веществ. Особенно важно провести диф диагностику алкогольной формы заболевания. На начальном этапе развития этого недуга часто ставят ошибочный диагноз, принимая его за вирусный гепатит. Это происходит в 50 % случаев.
Чтобы провести диф диагностику этих процессов, нужно учитывать, что алкогольный гепатит развивается исключительно на фоне постоянного употребления большого количества спиртного. Важными критериями диф диагностики в данном случае является следующее:
источник
О возбудителе HCV-инфекции стало известно сравнительно недавно. До начала 1990-х годов точное выявление заболевания представляло собой серьезную проблему. Это обусловило широкое распространение вируса при гемотрансфузионных процедурах и трансплантации органов, длительное течение инфекции без адекватной терапии. Но сейчас диагностика гепатита С точна, анализы помогают прогнозировать эффективность терапии, а срок выполнения специфических исследований не превышает 3–5 дней.
Так почему масштабы распространения HCV некоторые специалисты сравнивают с эпидемией? В современном российском законодательстве предусмотрена регулярная проверка на гепатит С методом ИФА как у людей из группы риска, так и у работников, способных инфицировать других. Тем не менее, многие не проходят регулярной диспансеризации и не сдают даже стандартные клинические анализы, не говоря о специфических исследованиях.
Но HCV далеко не всегда сопровождается какими-либо клиническими проявлениями, более того, характерные симптомы заболевания отмечают только у четверти пациентов. Вирусная инфекция обычно протекает медленно, но репликация возбудителя патологии происходит постоянно. В результате наступает необратимая гибель гепатоцитов. На месте клеток, утративших свои функции, появляются участки соединительной ткани – своего рода шрамы.
Таким образом развивается фиброз, который, если не предпринять лечебных мер, перерастает в цирроз печени – тяжелое заболевание, сопровождающееся нарушением работы всех внутренних органов. При диагностике на этой стадии можно избавиться от вируса. Однако изменения печеночной паренхимы остаются необратимыми. В некоторых случаях больным требуется срочная трансплантация печени, а лечение начинают после проведения операции.
Поэтому чем раньше поставлен точный диагноз, тем скорее доктор начинает терапию. Таким образом репликацию вируса останавливают еще до развития тяжелых осложнений. Однако обычных клинических исследований недостаточно для выявления инфекции. Необходимо сдать более специфичные анализы, отличающиеся как по технике выполнения, так и по особенностям расшифровки результатов.
Сделать ряд диагностических тестов можно самостоятельно, но интерпретировать полученные данные (особенно если они положительны либо сомнительны) должен только врач.
Заподозрить наличие инфекции можно по некоторым клиническим признакам. К их числу относят:
- постоянное чувство слабости;
- астенический синдром;
- непереносимость физических нагрузок (ранее привычных);
- сонливость;
- эмоциональная раздражительность;
- расстройства пищеварения различной интенсивности (могут отсутствовать, иногда проявляются в виде отсутствия аппетита, тошноты).
Но подобные симптомы не могут достоверно выявить HCV, так как данные признаки не специфичны и указывают на множество других патологий или обычное переутомление.
Как определить гепатит С у взрослых и у детей:
- по анализу крови на содержание определенных иммуноглобулинов (ИФА);
- по результатам исследования, проведенного методом полимеразной цепной реакции;
- по биохимическому анализу на содержание печеночных проб, билирубина.
Недавно на фармацевтическом рынке появились диагностические наборы, позволяющие провести анализ на наличие гепатита С в домашних условиях. Подобные тест-системы менее чувствительны, чем исследования, проводимые в лаборатории. Но в целом, это быстрый и достаточно точный способ самодиагностики.
Интерпретация результатов, особенно сомнительных, должна проводиться врачом. Положительный тест служит показанием для консультации доктора.
Дополнительно необходима проверка показателей общеклинического теста крови и мочи. Перед началом лечения доктор оценивает состояние печени по данным неинвазивных исследований (УЗИ, эластометрия). При подозрении на тяжелые поражения ткани выполняют биопсию органа.
Учитывая длительное бессимптомное течение, результаты обычного анализа крови и мочи могут быть без каких-либо отклонений. Поэтому для выявления вируса гепатита Ц используют серологические (ИФА) и молекулярные (ПЦР) методы лабораторной диагностики. Для этого сдают кровь из вены в частной лаборатории либо поликлинике по месту жительства. Срок получения результатов – до 5 дней.
Основные методы диагностики патологии можно разделить на две группы. Молекулярные исследования направлены на обнаружение частиц вируса. Помимо наличия РНК возбудителя гепатита С, такой анализ показывает его количественное содержание и точный генотип. Серологическое исследование (ИФА) «реагирует» на выработку иммуноглобулинов, синтезируемых при попадании вируса в кровь человека.
Уровень РНК, достаточный для лабораторного определения, достигается через 10–16 дней после инфицирования (если проводить диагностику современными высокочувствительными технологиями). Количественно вирусную РНК можно определить позже, через 4–6 недель после заражения. Тогда же целесообразно проводить и генотипирование. Синтез антител начинается сразу же, при первом контакте вируса с кровью человека. Но лабораторным путем при помощи анализа ИФА их можно обнаружить только через 3–4 недели.
Возможность выявления вируса на ранних стадиях зависит от индивидуальных особенностей больного – сроков выработки антител и активности процессов репликации вируса.
Какие анализы сдают при подозрении на гепатит С:
- биохимия крови, печеночные пробы (отклонения от нормы могут лишь косвенно указывать на наличие гепатита С);
- ИФА;
- ПЦР.
Грамотное поэтапное полное обследование способствует исключению неопределенных результатов, дает максимально точную картину здоровья пациента в целом и позволяет врачу назначить правильное лечение.
Исследование методом ПЦР – самый точный анализ для обнаружения гепатита С в организме. Сам принцип постановки полимеразной цепной реакции достаточно сложен. Для проведения необходим обработанный и соответствующим образом подготовленный образец биологического материала. К нему добавляют фермент, провоцирующий деление заданного участка РНК (при его наличии) в геометрической прогрессии. Впоследствии определение частиц вируса проводят при помощи различных физико-химических методов.
Основные отличия ПЦР-диагностики гепатита C от исследования путем иммуноферментного анализа приведены в таблице:
Молекулярный тест, проведенный по методике ПЦР | Иммуноферментный анализ |
Мишени для исследования | |
РНК вируса в крови | Антитела к гепатиту С (класса G и М) |
Разновидности анализа и изучаемые критерии | |
Качественный анализ позволяет ответить на главный вопрос, здоров человек или болен | Anti HCV Total определяет в крови общий титр всех антител к возбудителю гепатита С вне зависимости от класса |
Количественное исследование оценивает вирусную нагрузку | Определение иммуноглобулинов по классам: обнаруженные маркеры IgG свидетельствует о хронической инфекции, IgM – об острой |
Генотипирование служит для выявления разновидности патологии | Антитела с белку core и неструктурным протеинам HCV – это развернутый анализ, назначается нечасто, служит для дифференциальной диагностики инфекции с другими заболеваниями, прогнозирования особенностей течения и исхода |
Сроки диагностики | |
до 3 дней | 3–5 дней |
Сроки обнаружения (с момента инфицирования) | |
10–14 дней | Через 3–4 недели |
Вероятность получения ложных результатов и ошибочной расшифровки | |
Минимальна, ошибки могут быть связаны с неправильной подготовкой образцов либо нарушением правил постановки реакции | Неправильные результаты (ложноотрицательные или ложноположительные) могут быть следствием определенных заболеваний и состояний (например, беременности, аутоиммунных патологий, ВИЧ, системных инфекций и т.д.) |
Качественный анализ, предназначенный для выявления патогенной РНК строго специфичен, поэтому используется для дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита С и для первичного определения наличия заболевания. Современные наборы реактивов, используемые для проведения исследования, характеризуются высокой чувствительностью. Достоверная диагностика возможна уже через 1,5–2 недели после инфицирования.
Расшифровка анализа не отличается сложностью. Если частицы вируса обнаружены, человек болен либо произошла реконвалесценция болезни. Отрицательный результат свидетельствует в пользу отсутствия патологии или о диагностическом окне, когда человек заражен, но уровень РНК патогена слишком низок для лабораторного обнаружения.
При помощи качественного анализа методом ПЦР возможна ранняя диагностика вирусной инфекции.
Исследование проводится после подтверждения диагноза гепатита С по качественной ПЦР. По анализу определяют показатель вирусной нагрузки. Этот параметр определяет активность патологического процесса. В зависимости от результата количественного анализа выделяют несколько уровней вирусной нагрузки (представлено в таблице).
Уровень вирусной нагрузки (измеряется в МЕ/мл) | Расшифровка |
Ниже 3ˑ104 | Низкая виремия |
3ˑ104–8ˑ105 | Средняя виремия |
Сверх 8ˑ105 | Высокий уровень виремии |
Чем выше параметр вирусной нагрузки (ВН), тем активнее происходит репликация вируса, хуже прогноз и выше вероятность необратимых изменений структуры тканей печени. Как правило, высокая виремия сопровождается достаточно характерными клиническими проявлениями инфекции. Обнаружение низкой ВН, особенно на фоне острой фазы заболевания является предиктором самостоятельного выздоровления. В таком случае начало терапии откладывают на 7–14 дней, после чего исследование повторяют.
Данный анализ проводят только в том случае, если в крови обнаружена вирусная РНК и установлено ее количественное содержание. Генотипирование – единственное исследование, которое определит разновидность возбудителя гепатита С. Только так можно правильно назначить курс терапии и установить продолжительность их применения.
В настоящее время диагностика вирусной инфекции возможна дома, при этом человеку не нужны какие-либо специальные медицинские навыки. Экспресс-тест на гепатит С «работает» по принципу иммуноферментного анализа, то есть набор позволяет определить наличие антител к HCV в образце биологического материала. Большинство тест-систем предназначены для проверки крови. Но появились наборы, позволяющие выяснить, есть ли иммуноглобулины к гепатиту С в слюне.
Относительно достоверности экспресс-тестов было проведено несколько клинических исследований. Установлено, что подобные наборы – не самый точный способ диагностики инфекции, многое зависит от правильности забора биологического материала, соблюдения других правил выполнения анализа. Однако проведение такого теста дает возможность самостоятельно определить инфицирование, не посещая доктора и лабораторию.
Цена одной тест-системы, позволяющей проверить наличие вируса, колеблется в пределах 800–2000 рублей в зависимости от производителя и способа выполнения анализа. Исследование выполняют следующим образом. На тест-полосу наносят образец биологического материала (слюна либо кровь) и ждут отведенное время. Появление одной контрольной полоски свидетельствует об отрицательном результате, две линии – о возможном инфицировании.
При подготовке к проведению обследования необходимо соблюдать такие правила:
- исключить токсическое влияние алкоголя на печень (отказаться от употребления спиртного за 5–7 дней до сдачи анализов);
- соблюдать диету с ограничением жирных, жареных, копченых блюд (стол №5) за неделю до проведения обследования;
- сдавать кровь строго натощак (прием пищи запрещен за 12–14 часов до забора крови);
- не курить за 8 часов до исследования.
Существует несколько способов проведения диагностики. Можно сдать кровь в частной лаборатории, где не требуется направлений от врача. Необходимые тесты выполняют по полису страхования, но перед этим придется получить направления у участкового терапевта или инфекциониста.
Нередко пациенты интересуются, покажет ли общий анализ крови гепатит С, ведь общеклинические исследования сдаются регулярно при вирусных заболеваниях и других, более распространенных инфекциях. Но изменения картины крови возникают далеко не всегда. Кроме того, подобные нарушения неспецифичны и не позволяют провести точную диагностику заболевания.
Приблизительно в 20–30% случаев возникают следующие изменения:
- снижение общего уровня лейкоцитов за счет лимфоцитов;
- уменьшение содержания гемоглобина;
- изменение уровня тромбоцитов за счет нарушений свертывающей системы крови;
- повышение параметров скорости оседания эритроцитов.
Еще одним способом, как обнаружить вирусное поражение печени, служат показатели биохимического исследования крови.
О возможном инфицировании свидетельствует повышение концентрации:
Нарушения функциональной активности печени проходят по мере приема противовирусных препаратов.
Диагноз гепатита С не ставят на основании результатов печеночных проб и стандартного клинического исследования крови.
Для получения полной картины состояния пациента необходимо проведение дополнительных инструментальных исследований. Это связано с длительным бессимптомным течением патологии. Нередко о наличии болезни пациент узнает на стадии фиброза, а при неблагоприятном прогнозе – на этапе цирроза либо злокачественной малигнизации гепатоцитов.
От состояния печени во многом зависит тактика терапии. При декомпенсированных формах цирроза прием таргетных противовирусных препаратов дополняется рибавирином, либо продолжительность лечения увеличивают до 24 недель.
Процедура проводится для определения стадии и степени цирроза, а также подтверждения злокачественного перерождения клеток (предварительно опухоль обнаруживают при помощи ультразвукового исследования). Пункцию выполняют в условиях стационара под местной анестезией.
Под контролем УЗИ специалист делает прокол и вводит в паренхиму печени специальную иглу с системой захвата, позволяющей взять образец биологического материала. Кусочек ткани помещают в специальную среду, при необходимости добавляют краситель и исследуют под микроскопом.
Противопоказанием к проведению процедуры служит паразитарное поражение печени и тяжелые нарушения системы свертывания. Кроме того, возможность выполнения манипуляции напрямую зависит от согласия самого пациента. Для принятия взвешенного решения врач должен подробно объяснить, для чего необходимы результаты биопсии, каковы риски при проведении процедуры.
Ультразвуковое исследование сочетает в себе высокую информативность, безболезненность и безопасность. В течение 15–20 минут доктор может получить подробные данные о размерах и структуре печени и других органов брюшной полости.
Как правило, УЗИ, проведенное на фоне гепатита С, демонстрирует:
- нарушения кровоснабжения органа;
- изменения, связанные с оттоком и секрецией желчи;
- наличие уплотнений, очагов воспаления, некроза, в тяжелых случаях возможно обнаружение новообразований;
- увеличение размеров печени.
По итогам УЗИ доктор поймет масштабы поражения печени, однако точная диагностика гепатита С возможна только по результатам анализа крови.
Сама техника выполнения обследования напоминает ультразвуковую диагностику. Эластометрия – неинвазивное безболезненное исследование, предназначенное для оценки плотности паренхимы печени. Таким образом доктор может определить стадию и тяжесть фиброза, при котором нормальная ткань органа замещается соединительной. Без соответствующей терапии и таргетного противовирусного лечения развивается цирроз печени.
Подобные методики информативны при диагностике цирроза и наличия злокачественных новообразований. Томограмма имеет ряд противопоказаний. Но подобное исследование гораздо информативнее УЗИ и эластометрии, позволяет в полной мере оценить состояние печени.
Самостоятельная диагностика вируса без проведения должных исследований и их грамотной расшифровки невозможна. Человек может предположить наличие инфекции по ряду симптомов, например, повышенной утомляемости, постоянной слабости, сочетающихся с расстройствами пищеварения. К группе риска относят людей, часто подвергающихся инвазивным медицинским или эстетическим процедурам, пренебрегающими барьерными методами защиты при случайных половых контактах.
Наиболее простой способ самостоятельной диагностики – проведение экспресс-теста либо сдача анализов в платной лаборатории. Однако при наличии характерной для вирусного поражения печени лучше пройти комплексное обследование под контролем врача.
Обследование на гепатит С при беременности является обязательным и выполняется дважды: при первой консультации у гинеколога и постановке на учет, а затем в середине последнего триместра. Доктор назначает анализы, выполняемые по методики ИФА. Но основная проблема заключается в получении ложноположительных результатов. После зачатия в организме женщины начинается выработка протеинов, близких по структуре к антителам к гепатиту С.
Поэтому позитивный ИФА при беременности не всегда является признаком инфицирования и требует подтверждения методом ПЦР. Также в период вынашивания ребенка возможно обследование органов брюшной полости при помощи УЗИ, иногда проводится эластометрия. Но при подтверждении диагноза лечение может навредить плоду. Поэтому назначают поддерживающие здоровье женщины медикаменты, а основную терапию начинают после родов.
Лечение гепатита С вполне реально как на острой, так и на хронической фазе. Но одно из условий успешной терапии – своевременная диагностика, когда еще возможно восстановление функциональной активности печени. Поэтому специалисты рекомендуют самостоятельно либо по направлению от врача сдавать соответствующие тесты, а при позитивном результате незамедлительно обращаться за медицинской помощью.
источник
Вирусный гепатит В успешно лечится, если его вовремя обнаружить и правильно определить количество антител и антигенов в крови больного. С помощью иммуноферментного анализа на гепатит можно обнаружить присутствие маркеров вируса, но не могут установить точно стадию процесса.
Для количественной оценки применяют ПЦР диагностику. С помощью теста возможно посчитать количество маркеров, спрогнозировать течение болезни и вероятность излечения при помощи противовирусных препаратов.
Главное преимущество исследования — возможность обнаружить даже минимальные концентрации вируса, идентифицировать возбудителя на видовой стадии.
Вирус гепатита В отличается большой контагиозностью и устойчивостью к внешним воздействиям. Он сохраняет активность в следах крови больного до нескольких недель. Поэтому каждый человек подвержен риску заражения даже при условии соблюдения профилактики.
Для диагностики заболевания назначают следующие исследования:
Иммуноферментный анализ крови на наличие антител к ВГВ | Это быстрый и информативный тест. Его недостатком является то, что исследование только дает информацию о присутствии антител, но не уточняет их количество. |
Биохимический анализ крови | При начавшихся изменениях в печени в крови больного будет повышен уровень билирубина, щелочной фосфатазы и снижен уровень печеночных ферментов. Но на начальной стадии показатели будут находиться в пределах нормы. |
ПЦР (полимеразная цепная реакция) | С ее помощью восстанавливают ДНК вируса, подсчитывают количественные показатели антител, уточняют стадию заболевания. То есть разное количество антител может свидетельствовать об остром этапе или о постпрививочном иммунитете. |
Американский химик К.Муллис получил Нобелевскую премию, и до сих пор применяется его метод диагностики
Родоначальником метода ПЦР (полимеразной цепной реакции) считается ученый из Норвегии Х. Клеппе. Он первый стал проводить амплификацию (восстановление) ДНК при помощи короткой цепочки ДНК, то есть синтетического праймера (своеобразной копии).
Однако, ученому не удалось реализовать свою идею. Похожие исследования сделал американский химик К.Муллис, который в 1993 был удостоен Нобелевской премии за свое изобретение. С тех пор ПЦР используют для установления отцовства, диагностики генетических болезней, обнаружения вирусов.
Суть реакции в том, что при помощи ферментов копируется определенный участок ДНК. Скопировать можно только участок, который соответствует заданным параметрам и если он есть в представленном образце. Для запуска реакции применяют следующие компоненты:
- Матричная ДНК с участком, подлежащим копированию.
- Праймеры, схожие по строению участку ДНК.
- Полимераза, то есть фермент, запускающий реакцию. Она должна быть термостабильной, то есть выдерживать перепады температур.
- Раствор с определенными параметрами, обеспечивающий прохождение реакции.
Реакция проводится в несколько этапов:
Денатурация (прогревание) | Сначала раствор нагревают, в результате чего цепочки ДНК расходятся. |
Стадия отжига | Раствор остужают, праймеры связываются с одноцепочечной матрицей. |
Этап элонгации | Полимераза создает дочернюю цепь ДНК, достраиваются все фрагменты цепочки. Цепочка может расти до пределов, которые задаются количеством реагентов, затем достигает состояния плато. |
Для обнаружения гепатита в применяют два типа реакции: количественную и качественную.
Количественный метод определяет количество генома ВГВ
Количественный ПЦР предполагает одновременное создание копий фрагментов ДНК и определение количества молекул. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования.
Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного.
Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы:
- С какой интенсивностью прогрессирует болезнь.
- Насколько эффективно проводимое лечение.
- Развилась ли резистентность к назначенным препаратам.
Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции. Если количество ДНК ниже 100 шт/мл при нормальном уровне трансаминаза, то человек является носителем вируса.
При острой фазе количество антител значительно выше.При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения.
Качественный ПЦР дает меньше информации, однако может исключить заражение
Качественный ПЦР позволяет только установить присутствие возбудителя в крови. Если они отсутствуют, то пациент не заражен, при попадании возбудителя в кровь результат будет положительным.
Однако, с помощью качественной реакции невозможно уточнить геном вируса, этап заболевания. Поэтому для диагностики ВГВ проводят как количественное, так и качественное измерение.
Для проведения анализа методом полимеразной реакции необходима венозная кровь. Это необходимо сделать утром на голодный желудок.
Пациенту следует правильно подготовиться к исследованию:
- За 10 часов отказаться от пищи, можно пить только чистую воду.
- Накануне прекратить прием алкоголя, за 4 часа не курить.
- Перед обследованием стоит избегать физических и эмоциональных стрессов.
- За 2 суток перестать употреблять лекарства, если это невозможно, то необходимо предупредить лаборанта. Некоторые препараты оказывают влияние на конечный результат.
При количественной реакции оценивают полученные показатели в зависимости от числа копий ДНК
Интерпретировать данные качественного измерения несложно. Он дает либо положительный, либо отрицательный ответ.
При количественной реакции оценить полученные показатели можно в зависимости от числа копий ДНК. Единицей измерения является копий/мл.
Расшифровываются данные следующим образом:
- Если количество ДНК ВГВ менее 90, то инфекция отсутствует. У пациента развился поствакцинальный иммунитет, либо он излечился от болезни.
- При числе копий 2х100 говорят о носительстве вируса.
- Количество 2х106 свидетельствует о хронической стадии болезни.
- При ДНК более 2х109 пациент болен острой стадией гепатита.
Преимущества метода диагностики с помощью полимеразных реакцийи заключаются в следующем:
- Прямое обнаружение возбудителей. В отличие от него, метод ИФА дает информацию о присутствии антител к вирусу.
- Специфичность. То есть копируется именно участок ДНК, который имеется в образце биоматериала.
- Повышенная чувствительность. Метод может обнаружить даже единичные фрагменты клеток.
- Диагностика болезней в острой и в скрытой стадии. То есть, можно диагностировать болезнь на этапе доклинических проявлений.
У метода есть недостатки, которые приводят к ложным результатам. Самый существенный недостаток — вероятность загрязнения материала. Основным источником загрязнения являются плохо обработанные пробирки, руки лаборанта, реактивы.
В кровь может попасть часть ДНК от предыдущей реакции. Поэтому к лабораториям предъявляются повышенные санитарные требования: раздельные помещения, пластиковые пробирки, обработка лабораторий ультрафиолетом и т. д.
Ложноотрицательные результаты могут быть следствием сниженной чувствительности реакции. Это происходит в следующих ситуациях:
- пациент принимает лекарственные препараты, например, антикоагулянты;
- человек перед анализом перенес физическое напряжение (занятия спортом, тяжелая работа);
- заражение произошло недавно.
Если у пациента есть высокая вероятность инфицирования, а результат исследования отрицательный, ему необходимо повторное обследование.
Метод полимеразной цепной реакции является основным и самым информативным для диагностики ВГВ. Он позволяет не просто установить носительство инфекции, но и уточнить этап заболевания, оценить результаты лечения.
Для более точного диагноза применяют качественное и количественное измерение. К недостаткам способа можно отнести вероятность загрязнения, снижение чувствительности и довольно высокую цену.
Для того, чтобы результаты были наиболее достоверными, следует правильно подготовиться к исследованию и проводить его в клинике с соответствующей лицензией и хорошей репутацией.
Смотрите видео о ПЦР:
источник
Гепатит С относится к вирусному поражению печени. Часто это заболевание переходит в хроническую форму. Человек заражается через кровь, половым путем, возможно инфицирование от матери к плоду.
Для диагностики этой болезни выполняют анализ крови на ПЦР (полимеразную цепную реакцию). Исследование на определение вируса бывает количественное и качественное.
Качественный анализ ПЦР на гепатит С помогает обнаружить возбудителя в крови. Количественный – показывает количество этого вируса.
Он используется для установки диагноза хронического вирусного гепатита С и определения генотипа его возбудителя. Метод ПЦР относится к высокоточному способу молекулярной диагностики. Он способен определять даже малую концентрацию имеющегося вируса (10 – 500 МЕ/мл).
При острой фазе болезни качественный анализ определяет наличие патологии уже через 1 – 2 недели после заражения. В этот период специфические антитела к вирусу могут еще не выработаться, и проведение иммуноферментного анализа (ИФА) может быть бесполезно. Этот возбудитель имеет высокую мутационную активность. При помощи качественного метода ПЦР определяют, какой генотип болезни развивается у данного пациента.
Качественный ПЦР проводится:
- При обнаружении антител при ИФА.
- Для диагностики сопутствующих поражений печени. Иногда выявляются смешанные инфекции: одновременно заражение гепатитом B, C и D.
- Для выявления генотипа возбудителя с последующим определением тактики лекарственной терапии.
- Чтобы верифицировать диагноз.
- Для оценки качества лечения и изменений на фоне медикаментозной терапии.
К преимуществами качественного метода исследования относится высокая чувствительность методики, большая скорость диагностики (анализ выполняется от 8 до 24 часов) и выявление скрытого течения заболевания.
Качественный анализ выполняют сразу после обнаружения антител, затем на 4, 12, 24 неделе противовирусной терапии. Потом повторяют через 6 месяцев после завершения лечения и ежегодно.
Анализ ПЦР на гепатит С обязательно выполняют беременным женщинам, донорам, при подготовке к любому оперативному вмешательству.
К людям, находящимся в группе риска инфицирования вирусным гепатитом C, относятся:
- Наркоманы, которые вводят наркотики парентерально (внутривенно или внутримышечно).
- Лица нетрадиционной сексуальной ориентации.
- Дети, рожденные от матерей наркоманок или болеющих гепатитом С.
- Больные хронической почечной недостаточностью и постоянно находящиеся на гемодиализе.
- Лица после трансплантации внутренних органов: печени, почек, сердца.
- Пациенты, нуждающиеся в частых оперативных вмешательствах, заборах крови и инъекциях.
- Люди, которые ведут беспорядочную половую жизнь.
- Врачи, медработники, постоянно контактирующие с кровью.
- Люди, делающие татуировки.
По данным ВОЗ хроническим вирусным гепатитом C в мире страдают 70 миллионов человек, ежегодно умирают от этого заболевания 399.000 людей. 25 млн являются носителями вируса.
Хронические гепатиты могут протекать абсолютно бессимптомно. При начальной стадии заболевания отсутствуют признаки поражения печени либо общие проявления интоксикации.
Необходимо как минимум один раз в год проверять кровь на вирусные гепатиты B и C. Врачи, медицинские сестры, военнослужащие, полицейские, работники силовых структур проходят такое исследование два раза в год.
Для выполнения качественной полимеразной цепной реакции у пациента берется кровь из вены. Затем проводится лабораторное исследование следующим образом: в исследуемый материал добавляют праймеры (короткие химически синтезированные олигодезоксирибонуклеотиды) или специальные ферменты.
С помощью специального прибора охлаждают и нагревают пробирки с кровью. Создается специальная искусственная среда, в которой размножается генетически материал возбудителя до такой степени, что его можно визуально исследовать. При качественном анализе происходит копирование цепей, которые соответствуют вирусной RNA. Затем делается заключение о наличии вируса гепатита в организме пациента.
Перед проведением качественной ПЦР на гепатит С перед исследованием необходимо:
- Избегать физических нагрузок за день до сдачи анализа.
- Прийти натощак, не употреблять пищу за 8 – 10 часов до сдачи анализа.
- Производить забор крови в первой половине дня.
- За два дня до проведения диагностики исключают жирную, жареную пищу, алкоголь.
Суть качественной полимеразной цепной реакции заключается в многократном увеличении фрагментов вирусных частиц.
После проведения качественной ПЦР, в бланке анализа пишется «обнаружено» или «не обнаружено».
Отрицательный результат наблюдается, когда вирус присутствует в крови в малом количестве и чувствительная тест-система не смогла определить концентрацию. Такое наблюдается при недавнем заражении либо при длительно проводимой противовирусной терапии.
Обнаружено | В исследуемом материале определяется РНК HCV (возбудитель). Диагноз гепатита C подтвержден. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Не обнаружено | Возбудитель отсутствует или количество недостаточно для определения. Расшифровка качественного анализа ПЦР не представляет затруднений. Однако при получении положительного результата необходимо обратиться к гепатологу или инфекционисту для уточнения диагноза и назначения противовирусной терапии. Иногда выявляются ложные показатели качественной ПЦР. Это бывает при некоторых ситуациях:
Если нет никаких сомнений в результате, либо повторные проведенные исследования показали такой же результат, то пациенту ставится диагноз хронического вирусного гепатита C. Для определения степени поражения и нарушения работы печени, выполняют дополнительные методы обследования: клинические анализы, определение уровня билирубина, трансаминаз, общего белка, щелочной фосфатазы, гамма – глутамилтрансферазы, УЗИ и биопсию печени. Проводится количественная ПЦР диагностика и генотипирование вируса. Положительный эффект при лечении вызывает применение рибавирина, интерферона – альфа. Обязательно назначаются гепатопротекторные препараты: эссенциале, гептрал, урсосан, иммуномодуляторы. Пациентам ни в коем случае нельзя отказываться от противовирусного лечения. Это чревато развитием серьезных осложнений, которые приведут к летальному исходу. Качественная полимеразная цепная реакция относится к высокоточным анализам. Диагностика с помощью ПЦР выявляет даже небольшое количество возбудителя. Это приводит к раннему диагностированию гепатита С и своевременному назначению лечения. При адекватной терапии полное выздоровление наступает у 20% больных. источник Своевременная диагностика гепатита С минимизирует риски развития тяжелых последствий болезни. Вирус, размножаясь в организме, приводит к уничтожению гепатоцитов и развитию стойкого аутоиммунного воспаления. Основные методы диагностики помогают выявить вирус на ранних стадиях инфицирования. Если заболевание обнаружено, необходимо более полное обследование. Для этого проводятся инструментальные виды проверки течения болезни. Если болезнь протекает в безжелтушной смазанной форме, то практически невозможно понять, что у тебя гепатит С. В 80% случаев заболевание остается незамеченным, а возбудитель вируса постепенно разрушает печеночные клетки и весь организм. Для верификации диагноза и осложнений заболевания у взрослых и у детей обязательно используют аппаратные и лабораторные методы диагностики. Аппаратные процедуры позволяют визуализировать страдающий орган, определить степень разрушения гепатоцитов, отсутствие или наличие тяжелых осложнений (опухоли, фиброза, жирового гепатоза и т. д). Лабораторные анализы – часть дифференциальной диагностики. По анализу крови можно выявить самого возбудителя или наличие антител к нему. Как определить гепатит С в домашних условиях? Для этого существуют новейшие экспресс-тесты (подробнее о них можно почитать в данной статье). Они помогают с высокой точностью обнаружить заболевание после самостоятельно проведенного анализа дома. Для проверки необходима капля крови или слюны. Однако окончательный диагноз ставится только после проведения лабораторных исследований в медицинском учреждении. В настоящее время лабораторная диагностика HCV позволяет не только с точностью определить наличие вируса в организме человека, но и установить, сколько приблизительно времени прошло с момента заражения, насколько активно происходит развитие заболевания. Первичные диагностические исследования проходят в несколько этапов и позволяют получить ответы на ряд вопросов, необходимых для определения дальнейшей тактики терапии:
Но перечисленные исследования целесообразно проводить только после окончательного подтверждения диагноза. Для этого сдают несколько лабораторных анализов. После попадания в организм начинается активная репликация вируса. Однако до достижения определенного уровня, HCV в крови не обнаруживается. Самые современные высокочувствительные тест-системы ПЦР способны выявить болезнь спустя 3–4 недели. Но при подозрении на возможность заражения и отрицательном результате исследования рекомендуют провести повторный тест. Анализ на гепатит Ц путем проведения иммуноферментного исследования (ИФА) информативен на сроке 10–16 недель после заражения. За это время антитела к вирусу вырабатываются в достаточном для определения количестве. Но при этом необходимо учитывать возможность как ложноотрицательных, так и ложноположительных результатов ИФА. Такая вероятность существует при:
Кроме того нельзя исключать и человеческий фактор, то есть лабораторную ошибку, допущенную при выполнении анализа. Поэтому при положительном результате доктора рекомендуют сделать исследование повторно. Аналогичной тактики придерживаются и в том случае, если специфические симптомы прогрессируют на фоне отрицательных ИФА и/или ПЦР. Диагностическое обследование пациента с возможной HCV-инфекцией регламентировано международными медицинскими протоколами. В соответствии с рекомендациями ВОЗ, анализы проводят в таком порядке:
В дополнение врач назначает и стандартный перечень анализов. Он включает исследование на ВИЧ и другие виды вирусного и инфекционного гепатита, ОАК и ОАМ, оценку липидного и белкового профиля крови, иммунограмму и др. При подозрении на наличие фиброза, цирроза или гепатоцеллюлярной карциномы показана биопсия печени. Исследования, проводимые методом ПЦР, считаются наиболее достоверными способами диагностики гепатита C. Проведение полимеразной цепной реакции позволяет выявить специфические вирусные РНК в крови человека, оценить их количество и структуру нуклеотидной цепи. ПЦР диагностика может проводиться несколькими методами (каждый отличается по технологии проведения и стоимости для пациента):
ПЦР рекомендуют проводить после исследования анти HCV методом ИФА, который позволяет определить специфические антитела к гепатиту С. Наличие IgM свидетельствует об остром течении инфекции, IgG – о хроническом или латентном. По титру антител можно предположить активность патологического процесса, однако точную вирусную нагрузку определяют только методом ПЦР. Качественный анализ является своего рода проверкой, есть ли РНК HCV в крови человека. В отличие от результатов ИФА, которые зависят от определенных факторов (например, наличия беременности или состояния иммунной системы) данные ПЦР однозначны. Но при помощи этого исследования можно выявить, есть ли РНК гепатита С или нет. Для полной клинической картины необходимы другие тесты. Поэтому в бланке лаборатории указано только наименование анализа и полученный результат. Средняя стоимость качественного ПЦР в частных клинических кабинетах составляет порядка 1000 рублей. Проводится для определения уровня вирусной нагрузки, то есть количество копий вируса гепатита С в определенном объеме плазмы крови. Единицы измерения МЕ/мл. Высокие показатели указывают на острое течение заболевания и часто свидетельствуют о риске серьезных поражений печени. Данные для расшифровки результатов анализа приведены в таблице, но интерпретировать исследования и ставить окончательный диагноз должен только инфекционист-гепатолог.
В лабораториях могут отличаться марки тест-систем и, соответственно, используемые единицы измерения и нормы. Поэтому при расшифровке рекомендуют ориентироваться на референсные значения. Стоимость исследования в платной лаборатории достигает 2500 рублей. Генотипирование один из основных анализов на этапе подготовки пациента к началу курса противовирусной терапии. Исследование основано на отличиях в структуре известных 6 разновидностей (и около 100 подтипов) HCV. В бланке с результатами указывают выявленный генотип и субтип, например, 1b или 3a и т.д. Полученные данные позволяют врачу определить перечень назначаемых препаратов и продолжительность лечения, объяснить пациенту возможные исходы терапии. Цена проведения генотипирования в частной клинике колеблется в пределах 1000 рублей. Экспресс-тест на вирусный гепатит С рассчитан на выявление антител, которые вырабатывает иммунная система после попадания вируса в организм. Тест-полоски бывают:
Cito-тесты можно купить в аптеке без рецепта. Их достоверность выше 96%. Все зависит от правильности забора биоматериала, соблюдения правил проведения тестирования, фирмы-изготовителя, способа хранения и т. д. Цены на изделия разнятся от 300 до 1600 рублей. Для выработки антител в организме требуется как минимум 2–3 недели. В некоторых случаях это процесс удлиняется до полугода. Общий анализ крови сдают в любое время, по истечении часа от приема пищи. Анализ крови на биохимические показатели строго натощак утром, с 9 до 11 часов. Причина в биологическом ритме организма. Ночной голод должен быть не менее 10 часов. При использовании тест-полосок дома, важно чтобы гематокрит (текучесть крови) был в пределах нормы. Густая кровь искажает полученные результаты. Вирусологический анализ на гепатит (определение антигенов и антител) делают из венозной крови, она обладает большей диагностической ценностью. Между забором биоматериала и последним приемом пищи должно пройти 4–6 часов. Накануне лучше отказаться от слишком жирной пищи, алкоголя, переедания. Если недавно проходили Rg-графию, ректальный осмотр прямой кишки, физиопроцедуры, присутствовал прием сильнодействующих препаратов и антибиотиков, то необходимо сказать об этом своему доктору или лаборанту. Покажет ли общий анализ крови гепатит С? Нет, в нем отсутствуют показатели для дифференциальной диагностики вируса. Но опытного врача-гепатолога должен насторожить лейкоцитоз и резкое увеличение показателей СОЭ (скорость оседания эритроцитов). Развернутый анализ на биохимию, выявит характерные для болезни изменения в работе печение, появление грозных осложнений хронического и острого гепатита С. Приведем типичные лабораторные тесты и их диагностическую ценность:
|