Лабораторная диагностика полиомиелита вирусологический метод

Вирусологическая диагностика. Введение в лабораторную практику техники тканевых культур для изоляции и идентификации энтеровирусов, а также разработка некоторых серологических методов сделали возможной этиологическую диагностику каждого отдельного случая заболевания полиомиелитом и выявления вирусоносительства у здоровых. Кроме того, для эпидемиологического анализа можно применять массовые обследования проб крови с определением титров антител, нейтрализующих тот или другой вирус. Хотя без клинического и эпидемиологического подтверждения выделение полиовируса или выявление антител к нему недостаточно для диагноза полиомиелита (полиовирус может обнаруживаться и у здоровых людей или у вирусоносителей, заболевших другой болезнью), вирусологической диагностике при сочетании ряда данных отводится очень важная роль. Диагноз полиомиелита становится более вероятным, если в подкрепление к клиническим данным полиовирус обнаруживается при повторном исследовании и по мере выздоровления титр антител нарастает в 4 раза и более.

Для вирусологического обследования берут пробы фекалий тампоном, введенным в прямую кишку. Материал для анализа может быть взят тампоном или смывом из носоглотки. Предварительное очищение исследуемого материала от бактериальных примесей производится путем обработки антибиотиками или эфиром. Пробы до или после обработки рекомендуется хранить в замороженном состоянии (ниже — 20°). Тампоны (ректальные и глоточные) хранят погруженными в культуральные среды с большой концентрацией антибиотиков.

Спинномозговую жидкость рекомендуется исследовать без промедления. Кровь можно исследовать на вирус, если есть основания подозревать участие каких-либо неполиомиелитных энтеровирусов. В секционных случаях исследуют кишечное содержимое, кишечную стенку и, если смерть наступила не позднее десятого дня болезни, то и мозговую ткань, особенно спинной и продолговатый мозг. В поздних случаях смерти от полиомиелита полиовирус в мозге может не выявляться, в то время как в кишечнике он еще присутствует. Пробы сыворотки крови следует брать в самые ранние сроки заболевания и еще раз спустя 3—4 недели для сравнительной оценки динамики титров антител. Пробы, давшие отрицательные результаты в культурах ткани, могут оказаться положительными при заражении новорожденных белых мышей или хлопковых крыс, что потребует идентификации с вирусами Коксаки группы А. В этой связи большое значение имеют результаты патогистологического изучения ЦНС, скелетных мышц и так называемого коричневого жира у заболевших животных, а также серологические опыты на новорожденных грызунах по типированию выделенного на грызунах вируса.

Определение антигенных типов штаммов энтеровирусов, выделенных в культурах ткани, проводится в таких же культурах клеток при помощи проверенных типоспецифических иммунных сывороток в их оптимальных разведениях.

Ввиду большого количества иммунологических типов энтеровирусов целесообразно пользоваться различными сочетаниями смесей типовых иммунных сывороток.

Это позволяет вначале определить тип ориентировочно, а затем опытом с моновалентными сыворотками — более точно.

Обычно эти опыты выполняют в реакции нейтрализации вируса в первичных или перевиваемых культурах тканей человека или обезьян, с учетом цитопатологического эффекта или цветной пробы или числа образующихся бляшек (колоний вируса) в клеточном слое под агаровым покрытием. С некоторыми типами энтеровирусов (но не с полиовирусом) можно проводить реакцию подавления гемагглютинации с целью типирования выделенного вируса или антител к нему. Реакция преципитации в агаре и реакция связывания комплемента (с гретым и нативным культуральными антигенами) применяются с парными сыворотками в качестве вспомогательных методов серодиагностики в ранней стадии выздоровления больных полиомиелитом одновременно с постановкой реакции нейтрализации в культуре ткани. Может с успехом применяться также реакция иммунофлюоресценции для типирования энтеровирусов в культуре тканей.

В районах применения живой вакцины для идентификации вновь выделенных от больных или здоровых («контактных») людей штаммов полиовируса очень важно определять их генетические признаки, показывающие принадлежность штамма к «диким» или аттенуированным вариантам. С этой целью все вновь выделенные штаммы проверяют в опытах нейтрализации на антигенный признак с иммунными сыворотками, приготовленными против прототипных аттенуированных штаммов соответствующих иммунологических типов (I, II, III); кроме того, проверяются rct40- и d-признаки, позволяющие отличать «дикие» штаммы полиовируса от аттенуированных по разной способности размножаться при 36° и при 40°, а также под слоем агара с различным количеством бикарбоната натрия.

источник

1. Вирусологический метод. Изучение ЦПД вируса полиомиелита. Фильтратом испражнений больного полиомиелитом, обработанных антибиотиками, заражена культура клеток ФЭЧ (фибробласты эмбри­она человека). ЦПД вируса полиомиелита при микроскопии культуры ткани под малым увеличением проявляется мелкозернис­той деструкцией клеток с образованием в них гранул, оттесняю­щих ядро к периферии. Микрокартину описать, зарисовать.

2. Серологический метод (ретроспективная диагностика). Вы­явление антител в парных сыворотках крови больного полиомиелитом с помощью цветной пробы. В пробирках, где не происходит репродукции вируса в результате нейтрализации его антителами, среда окрашивается в желтый цвет из-за образования клетками культуры ткани кислых продуктов метаболизма. Диагностическое значение имеет 4-кратное нарастание титра антител.

3. Дифференциация вирусов Коксаки А и В — биологический метод.Фильтрат испражнений больного, обработанный антибиотиками, вводят внутрибрюшинно 1-4 дневным мышам-сосункам. Мыши забо­левают на 3 -7 день. Вирусы Коксаки А вызывают вялые параличи, Коксаки В – спастические.

4. Изучить биопрепараты для профилактики, диагностики и ле­чения:

· диагностические типоспецифические сыворотки для типирования вирусов полиомиелита, Коксаки и ECHO;

· отечественная живая вакцина против полиомиелита, содержащая вакцинные вирусы трех типов. В России зарегистрированы также 3 вакцины для профилактики полиомиелита фирмы Пастер Мерье Коннот (Франция): Полио Сэбин-ВЕРО – живая вакцина, Имовакс полио — инактивированная вакцина, Тетракокк – комбинированная вакцина для профилактики дифтерии, коклюша, столбняка и полиомиелита.

· иммуноглобулин нормальный человеческий.

Лабораторная диагностика вирусных гепатитов

В настоящее время известно 8 гепатотропных вирусов (A — HAV, B — HBV, C — HCV, D — HDV, E — HEV, F — HFV, G – HGV, а также TTV — transfusion transmitted virus, передающийся при трансфузиях). Поражения печени могут вызывать и другие вирусы (например, цитомегаловирус, герпесвирусы и т.д.). В связи с трудностью культивирования вирусов гепатитов ведущая роль в лабораторной диагностике вирусных гепатитов отводится серологическим методам, а в последнее время — методам генодиагностики (ПЦР).

Вирус гепатита A (HAV)относится к семейству пикорнавирусов, роду Hepatovirus.

Материалом для исследования являются фекалии больного. Вирус гепатита А интенсивно выделяется с фекалиями боль­ных в течение нескольких дней в конце инкубационного периода до появления клинических прояв­лений инфекции, после чего его концентрация резко снижается.

Экспресс-диагностиказаключается в постановке ИЭМ, РИА, ИФА с целью выявления вируса или его антигенов в экстракте фекалий.

Вирусологический метод состоит в заражении фильтратом фекалий чувствительных животных (шимпанзе и обезьян-мармозеток), а также культуры лимфоцитов человека. Индикацию и идентификацию вируса проводят с помощью РИФ или электронной микро­скопии.

Серологический метод– выявление антител класса IgM к вирусу гепатита А, появляющихся в ранние сроки инфекции и указывающих на свежее инфицирование, а также антител класса IgG (обычно с помощью ИФА или РСК, редко — ИЭМ, РИА).

Генодиагностика.Для диагностики гепатита А разработана ПЦР, однако она широ­ко не применяется, так как метод ИФА позволяет в уже ранние сроки инфекции обнаружить антитела класса IgM к данному вирусу.

Вирус гепатита В (HBV)относится к роду Orthohepadnavirusсемейства Hepadnaviridae,содержит поверхно­стный антиген HBsAgи два внутренних — HBcAg(cor -сердце) и HBeAg, (ДНК-полимераза), к которым у больного образуются соответствующие антитела.

Экспресс-диагностикагепатита Ввключает определение HbsAg, с помощью ИФА, РИА, РОНГА, РПГ, встречного иммуноэлектрофореза, РИМ, РОНГА. Антиген появляется в сыворотке крови больного в инкубацион­ном периоде за несколько недель (до 8) до по­вышения активности аминотрансфераз.

Серологическое исследование —выявление в сыворотках крови больных и носителей антител к анти­генам HBV с помощью ИФА, РНГА РПГ, реже — РИА, РВИЭФ. Определение антигенов HBV и антител к ним имеет важное диагностическое и прогностическое значение. В инкубаци­онном периоде в течение 2-5 месяцев выявляется HBsAg, а при хроническом течении более длительный промежуток времени. Острый период инфекции характеризуется появлением HBcAg и HbeAg (обнаруживается в крови в течение 1-7 недель; его появление на 1-3 неделе болезни является неблагоприятным прогностическим признаком). В стадию ранней реконвалесценции из крови исчезают HBcAg и HbeAg, нопоявляются и затем нарастают антитела к НВс и НВе антигенам. Стадия поздней реконвалесценции характеризуется наличием антител ко всем трем антиге­нам HBV.

При хроническом агрессивном гепатите В в крови обнаруживаются HBsAg и HbeAg. Для этой формы гепатита характерновысокое содержание антител к НВс антигену класса IgM, что указывает на активную репродукцию вируса.

У носителей вируса гепатита В в крови выявляются HbsAg, антитела к HbcAg и НВеAg класса IgM, редко – антитела к HbcAg и к HbsAg класса IgG.

В крови больных гепатитом В могут быть обнаружены также дельта-частицы (или дельта-антиген), представляющие собой вирусы гепатита D, часто ассоциированные с вирусом гепатита В.

Генодиагностика.Разработано несколько методов генодиагностики (методы гибридизации, лигазная цеп­ная реакция, ПЦР и др.). Наибольшее распространение получила ПЦР, являющаяся информативным методом при бессимптомных, хронических и смешанных формах гепатитов. ПЦР используют также для оценки уровня вирусемии и эффективности проводимого лечения.

Другие гепатиты

Вирус гепатита С (HCV) РНК-геномный представитель рода семейства Flaviviridae. Выделяют 6 сероваров ЯСК, каж­дый из которых преимущественно встречается в определенной стра­не (например, 1-й тип — в США, 2-й тип — в Японии).

Вирус гепатита D (HDV) — дефектный сателлитный РНК-содержащий вирус, осложняющий течение гепатита В, входит в род Deltavirusсемейства Togaviridae,. Само­стоятельную инфекцию не вызывает.

Вирус гепатита Е (HEV) — РНК-геномный представитель рода Calicivirus семейства Caliciviridae,

Вирус гепатита G (HGV) условно относящийся к семейству Flaviviridae.

Серологический метод является в реальной практике основным методом лабораторной диагностики указанных гепатитов, т.к. культивирование этих вирусов связано с большими трудностями. Антитела к вирусам гепатитов в парных сыво­ротках крови больных выявляют с помощью ИФА, РИА, ИЭМ, РИФ с дифференциацией антител по классам иммуноглобулинов (в частности по IgM — маркеру свежего инфицирования). Антитела класса IgM к вирусам гепатитов D, Е и G появляются через 10-15 дней после начала клинических проявлений инфекции, к вирусам гепатита С – через 3 месяца. Антитела класса IgG IgM к вирусу гепатита D можно выявить спустя от 2 до 11 недель, а к вирусам Е и G через 30 дней после перенесенной инфекции. Подтверждающим лабораторным методом является иммуноблотинг.

Генодиагностика.Важным методом диагностики HCV инфекции является ПЦР, которая позволяет выявить виремию и ее уровень по содержанию РНК вируса в крови у бессимптомных носителей вируса, а также у больных уже в инкубационном периоде (задолго до появления антител) и в период разгара инфекции, что имеет важное значение для выбора обоснованной терапии и прогнозирования инфекции. ПЦР является единственным методом, позволяющим отличить перенесенный гепатит С от имеющейся инфекции у данного пациента в данный момент.

ПЦР позволяет выявить также РНК вируса гепатита D при всех вариантах этой инфекции, подтверждая результаты определения антител к этому вирусу с помощью ИФА, т.к. результаты серологических исследований могут быть сомнительными или отрицательными в случаях связывания антител антигенами вируса.

Самостоятельная работа студентов

источник

ТЕМА № 28 «ВИРУСЫ ПОЛИОМИЕЛИТА, КОКСАКИ, ЕСНО. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА»

Возбудитель полиомиелита входит в семейство Picornaviridae, род Enterovirus.

Исследуемый материал: испражнения (вирусы полиомиелита присутствуют длительное время и в больших концентрациях), в первые дни заболевания материалом для исследования могут служить смывы из носоглотки. Кроме того, могут исследоваться кровь, спинномозговая жидкость, моча. В случае летального исхода – секционный материал: кусочки ткани головного и спинного мозга, миокарда, печени, поджелудочной железы, селезёнки, легких, лимфатических узлов.

Используют методы диагностики: вирусологический, серологический.

Вирусологический метод. Предполагает обнаружение вируса в исследуемом материале и последующую его идентификацию. После приготовления проб, обработки антибиотиками, ими обрабатывают перевиваемые культуры клеток, например, Helia, Hep-2 и др. индикацию осуществляют по цитопатическому действию (ЦПД) и цветной пробе (ЦП). Идентифицируют с помощью типоспецифических стандартных сывороток к трем типам полиовируса, в РН ЦПД, РН ЦП, реакции преципитации.

Серологический метод. Проводится путем исследования парных сывороток крови обследуемого в реакции нейтрализации ЦПД, в реакции нейтрализации ЦП, в реакции связывания комплемента со стандартными штаммами трех типов вирусов полиомиелита (антигенами трех типов). Диагностическое значение имеет лишь четырехкратное и более нарастание титра антител во второй сыворотке, взятой через 2-3 недели от начала заболевания.

Диагностика инфекции, вызванной вирусами Коксаки

Вирусы выделены в местечке Коксаки (штат Нью-Йорк). Входят в семейство Picornaviridae, род Enterovirus.

Исследуемый материал. В первые дни болезни вирусы Коксаки можно обнаружить в крови, в смывах из зева, испражнениях, спинномозговой жидкости. Последний материал особенно удобный, т.к. спинномозговая жидкость стерильна и её можно вводить мышам-сосункам или в культуру клеток без предварительной обработки антибиотиками.

Используют методы диагностики: вирусологический, серологический.

Вирусологический метод. Индикацию вирусов Коксаки осуществляют путем введения исследуемого материала в культуру клеток или в организм новорожденных мышей-сосунков (1-3 дневных). Клинические проявления, обусловленные вирусом Коксаки А, возникают на 2-5 день и характеризуются появлением парезов и вялых параличей мышц спины и конечностей. Клинические проявления, обусловленные вирусом Коксаки В, возникают на 4-9 день и характеризуются появлением спастических параличей. Идентификация обнаруженных вирусов осуществляется в реакции нейтрализации на животных со специфическими диагностическими сыворотками.

В культуре клеток вирусы обнаруживают по ЦПД, ЦП. Идентифицируют в реакции нейтрализации ЦПД, ЦП со специфическими диагностическими сыворотками.

Полимеразная цепная реакция. Применяется в диагностике Коксаки – вирусных инфекций при выделении штаммов, которые не культивируются в клеточных культурах.

Серологический метод. Выявляют специфические антитела к вирусам Коксаки в парных сыворотках крови больных в реакции нейтрализации ЦПД, ЦП и РСК.

Диагностика инфекции, вызванной вирусами ЕСНО

Вирусы ЕСНО входят в семейство Picornaviridae, род Enterovirus.

Исследуемый материал: слизь из носоглотки, испражнения, кровь, спинномозговая жидкость.

Используют методы диагностики: вирусологический, серологический, молекулярно-генетический.

Вирусологический метод. Обнаруживают вирус только в культурах клеток Животные не чувствительны. Одной суспензией исследуемого материала, после выдерживания с антибиотиками, обрабатывают 2-3 культуры клеток (первично-трипсинизированные или перевиваемые). Индикация вируса осуществляется по ЦПД, ЦП, т.к. в культурах клеток идёт активная репродукция вируса с проявлением типичного для энтеровирусов цитопатического эффекта.

Идентификация проводится в реакции нейтрализации ЦПД, реакции нейтрализации ЦП, РТГА с диагностическими типовыми иммунными сыворотками.

Серологический метод. Выявляют нарастание титров антител, как правило, вируснейтрализующих в парных сыворотках крови, взятой у обследуемого. Диагностическое значение имеет 4-х кратное нарастание. Используют реакцию нейтрализации ЦПД, ЦП. Можно применять РСК и РТГА.

Молекулярно-генетический метод. Используют полимеразную цепную реакцию, молекулярную гибридизацию.

источник

Полиомиелит – это серьезное заболевание, вызванное вирусной инфекцией. Недуг тяжелый, протекает преимущественно с поражением ЦНС. Он приводит к самым разным последствиям, а потому важно вовремя его обнаружить и начать лечение.

Диагностика полиомиелита подразумевает проведение ряда исследований. О них следует рассказать подробнее, а также уделить немного внимания причинам, симптомам и возможным последствиям данного недуга.

Прежде чем обсудить принципы диагностики полиомиелита, необходимо изучить специфику данного недуга. Это – энтеровирусная инфекция, которую вызывают полиовирусы. Они поражают мотонейроны передних рогов спинного мозга. Данное воздействие приводит к серьезным паралитическим осложнениям с последующей инвалидизацией больного.

Как правило, недуг поражает детей, возраст которых составляет менее 4 лет. На них приходится 60-80% случаев.

Последняя эпидемия пришлась на середину прошлого столетия. В конце 80-х ВОЗ приняла резолюцию, целью которой стала ликвидация данного заболевания во всем мире.

На сегодняшний день в странах, где проводят профилактическую вакцинацию против полиомиелита, недуг встречается в виде спорадических единичных случаев. Это Индия, Афганистан, Сирия, Нигерия, Пакистан. Наша страна, а также Северная Америка и государства Западной Европы свободны от полиомиелита.

Данное заболевание вызывают антигенные типы полиовируса, которые относятся к роду энтеровирусов. Всего их три. Но наибольшую опасность несет вирус первого типа – на него приходится 85% случаев. Он очень живучий, может сохраняться до 6 месяцев в испражнениях и до 100 суток в воде.

Он переносит даже замораживание и высушивание, на него не воздействуют антибиотики и пищеварительные соки. Погибнуть вирус может лишь в результате следующих воздействий:

• Нагревание и последующее кипячение.
• Обработка дезинфицирующими средствами.
• Ультрафиолетовое облучение.

Источником вируса может быть не только зараженный человек. Его способен распространить бессимптомный носитель. Сам он может не болеть полиомиелитом. Однако своей носоглоточной слизью и испражнениями распространять будет. Передается вирус фекально-оральным, воздушно-капельным и контактным путями.

Попадая в организм, он внедряется в клетки, вследствие чего нарушается синтез белка и нуклеиновых кислот. Результатом становятся деструктивные и дистрофические изменения. Возможна полная гибель нейрона. Следствие разрушения 1/3-1/4 нервных клеток – развитие полных параличей и парезов.

Прежде чем перейти к обсуждению диагностики и принципов лечения полиомиелита у детей и взрослых, надо перечислить симптомы, которые указывают на развитие столь специфического недуга.

Инкубационный период длится 8-12 дней. Если развивается инаппарантная форма, то клинически недуг никак не проявляется. Его обнаруживают лишь в результате лабораторных исследований.

Недуг висцеральной формы проявляется интоксикацией, лихорадкой, диареей, болями в животе, умеренными катаральными явлениями. Заболевание заканчивается примерно через 3-7 дней после того, как симптомы дают о себе знать. Никаких остаточных неврологических проявлений не наблюдается.

Самым тяжелым является заболевание паралитической формы. Наблюдается диспепсия, трахеит, фарингит, ринит, боли в конечностях и позвоночнике, 2-волновая лихорадка, судороги, спутанность сознания. На 3-6 день наступает паралитическая фаза. К концу второй недели поражаются жизненно важные центры продолговатого мозга, возможен паралич диафрагмы и дыхательных мышц.

Рассмотрев причины, симптомы и виды полиомиелита, нужно уделить внимание и этой теме. Этот серьезный редкий недуг обычно начинает подозревать детский невролог или педиатр. Основаниями для предположений является анамнез, диагностически значимые симптомы и эпидемиологические данные.

Есть определенные трудности. Не все доктора сразу назначают анализ на полиомиелит, так как не всегда подозревается именно данный недуг. Часто ошибочно устанавливают диагноз серозного менингита, острой кишечной инфекции, ОРВИ, гриппа.

Точно определить заболевание способны помочь лабораторные тесты, о которых подробно будет рассказано далее. Сейчас же нужно обсудить другие методы.

Важно дифференцировать вирус, а потому проводится полимеразная цепная реакция. Еще часто назначают люмбальную пункцию. При ее проведении спинномозговая жидкость вытекает под большим давлением. В ходе исследования удается выявить ее бесцветность, прозрачность, а также увеличенное содержание глюкозы и белка. После проведения электромиографии удается подтвердить поражение на уровне передних рогов спинного мозга.

Рассказывая про методы диагностики полиомиелита, также следует оговориться, что недуг необходимо вовремя дифференцировать с ботулизмом, миелитом, синдромом Гийена-Барре, серозным менингитом, клещевым энцефалитом и полиомиелитоподобными заболеваниями.

Он применим в диагностике полиомиелита в обязательном порядке. Очень важно выделить вирус и идентифицировать его. В качестве биоматериала необходим кал больного. Чуть реже берут ликвор, кровь и носоглоточный смыв.

Материал сначала фильтруют, а затем подвергают обработке антибиотиком. Затем вносят его в культуру клеток Нер-2 и RD (из человеческой рабдомиосаркомы). Приблизительно через 5-7 суток возникает цитопатическое действие вирусов (ЦПД), проявляющееся в форме мелкозернистой деструкции клеток.

Идентификацию вируса проводят в реакции нейтрализации. Это значит, что в культуры тканей заносят вирус, соединенный с поливалентной противополиомиелитной сывороткой трех типов. Это первый этап. Следующий шаг – ведение вируса с отдельными типовыми сыворотками, являющимися моновалентными. Каков результат? Если сыворотка и тип вируса идентичны, то ЦПД не наблюдается.

Его также задействуют для диагностики полиомиелита. Он помогает определить, нарастает ли в крови переболевших пациентов титр антител.

Для этого в культуре ткани применяют реакцию нейтрализации с парными сыворотками, которые были получены в период острой стадии заболевания, а также в момент реконвалесценции.

Ставят иммуноферментный анализ (ИФА), а также реакцию связывания комплемента (РСК). В случае положительного результата удается определить 4-кратное нарастание титра антител во 2-й сыворотке, если сравнивать с 1-й.

Что это такое – ИФА-анализ? Активно развивающееся направление химической энзимологии. Это метод с уникальной специфичностью иммунохимической реакции. Проще говоря, антитела связываются лишь с конкретными антигенами. ИФА широко внедрился в разные медицинские области, поскольку используемые реагенты стабильны, методы регистрации просты, а цена проведения довольно мала.

Рассуждая о диагностике полиомиелита у детей и взрослых, необходимо оговориться, что пресловутая дифференциация всегда проводится на основе симптоматики. И у каждой формы заболевания она индивидуальна. Можно выделить такой перечень:

• Менингеальная форма. Проявления: выраженный болевой синдром, натянутые корешки спинномозговых нервов и нервных стволов, их болезненность при пальпации.
• Спинальная форма. Проявления: щадящая, не паретическая походка, сохранность мышечного тонуса, дискомфорт в суставах при пассивных движениях, повышение глубоких рефлексов, воспалительные изменения в крови. Данный недуг часто путают с полирадикулоневритом, дифтерийной полинейропатией, спинальной амиотрофией Верднига-Гоффманна.
• Полиомиелитическая форма. Патологический процесс диагностируется в шейных сегментах. Проявления: параличи мышц плечевого пояса и шеи, вялые парезы, лимфоцитарный плеоцитоз (незначительный, 40-60 клеток), увеличенный уровень белка (примерно 0,66-1,0 г/л). Изучая исследуемый материал при лабораторной диагностике полиомиелита, врачи учитывают эпидемиологический анамнез. Это может быть употребление сырого молока, укус клеща и т. д.
• Дифтерийная форма. Проявления: симметричность поражений, медленное нарастание парезов на протяжении нескольких недель, обнаружение нарушений биоэлектрической активности в процессе проведения электронейромиографии. Диагностируется спустя 1,5-2 месяца после дифтерии.
• Полирадикулоневрит. Проявления: медленное развитие и дальнейшее нарастание симметричных парезов, расстройство чувствительности по корешковому и полиневритическому типам, повышенное количество в спинно-мозговой жидкости белка.
• Понтийная форма. Проявления: снижение вкусовой восприимчивости на соленое и сладкое, слезотечение на пораженной стороне, ощущаемая при пальпации боль тригеминальных точек, нарушения в чувствительности лица и спонтанные боли.
• Бульбарная форма. Проявления: судорожный синдром и глубокие расстройства сознания. Важно дифференцировать ее со стволовыми энцефалитами.

В рамках темы, касающейся дифференциальной и микробиологической диагностики полиомиелита, надо оговориться, что поражения нервной системы, которые клинически не отличаются от рассматриваемого недуга, часто вызывают энтеровирусы группы Коксаки-ЕСНО. В таких случаях задействуют весь комплекс серологических и вирусологических диагностических методов и уже упомянутый ранее метод ПЦР.

Выше было рассказано об особенностях недуга, основном методе лабораторной диагностике и о том, что такое ИФА-анализ. Это все важно, но теперь стоит также поведать про специфическую профилактику, осуществляемую убитыми и живыми вакцинами.

Метод интересный. В убитой вакцине содержатся вирусы полиомиелита З-го, 2-го и 1-го типов. Их выращивают в почечной ткани обезьян. Убитая вакцина провоцирует гуморальный иммунитет – образование IgM и IgG. Но в то же время не препятствует происходящей в клетках слизистой оболочки кишечника репродукции вирусов.

Живая вакцина типов 3, 2 и 1 образуется из аттенуированных штаммов, которых культивируют также в почечных клетках, но только других животных – зеленых африканских мартышек.

Кроме пресловутых IgM и IgG-антител, ею индуцируются секреторные IgA. Данный процесс происходит в слизистой оболочке ЖКТ (тонкого кишечника, если быть точнее). И именно они являются антителами к полиомиелиту, препятствующими циркуляции диких штаммов.

В подавляющем большинстве больниц стран СНГ распространена оральная вакцина. Прививка делается просто: препарат, о котором рассказывалось выше, закапывают в ротовую полость.

Выполняют это после того, как ребенку исполнится 3 месяца. Далее потребуется сделать еще две вакцинации. Интервал между ними – 1,5 месяца. Выходит, к врачу младенца нужно будет отнести, когда ему будет 4 и 6 соответственно. Ревакцинацию проводят в 18 и 20 месяцев, а потом лишь в 14 лет.

Нужно быть предупрежденным о том, что после введения в организм ослабленных вирусов, способен развиться так называемый вакцинноассоциированный полиомиелит. Вероятность очень мала, но имеется. Чаще всего недуг развивается у младенцев после их первой вакцинации. Какова причина? Обычно – сниженный иммунитет или спонтанная мутация вируса в условиях организма ребенка.

И, кстати, так как после прививки грудничок становится потенциальным носителем вируса, от него могут заразиться не вакцинированные люди, а еще те, у кого иммунитет подавлен.

Немного внимания надо уделить и клиническим рекомендациям. Полиомиелит манифестных форм всегда лечится стационарно. Больному показана изоляция, покой, высококалорийная диета и постельный режим.

Очень важно придать конечностям правильное с точки зрения физиологии положение. Необходим массаж грудной клетки и профилактика пролежней. Если у больного наблюдается дисфагия, то питание организуют через назогастральный зонд. В случае нарушения самостоятельного дыхания показана искусственная вентиляция легких.

К сожалению, специфическое лечение не разработано. Вакцины, особенности которых были рассмотрены выше, предотвращают развитие заболевания, не давая ему развиться (выработка иммунитета). Но они не лечат полиомиелит. А потому проводят патогенетическую и симптоматическую терапию.

Прописывают прием аскорбиновой кислоты, витаминов группы В, дегидратирующих и обезболивающих препаратов, дыхательных аналептиков, неостигмина и т. д.

В восстановительный период время уделяется реабилитационным мероприятиям. А именно:

• Лечебная физкультура.
• УВЧ.
• Лечение в санаториях.
• Ортопедический массаж.
• Общие лечебные ванны.
• Парафинолечение.

Лечение и профилактика детей всегда проводится при непосредственном участии детского ортопеда. Если выявляется риск развития контрактур, то назначают наложение лонгет, гипсовых повязок, ортопедических шин, а также ношение специальной обуви.

Всегда есть вероятность возникновения остаточных явлений. Их лечение обычно включает сухожильно-мышечную пластику, теномиотомию, артрориз, тенодез, резекцию и дальнейшую остеотомию костей, коррекцию сколиоза хирургическим методом и т. д.

Нельзя не рассказать о том, чем опасен полиомиелит. Данное заболевание часто приводит к инвалидности. Если парализованные конечности и начинают двигаться, то они остаются деформированными – они укорачиваются, а мышцы атрофируются.

Патологический процесс может затронуть дыхательную систему, а это чревато дыхательными расстройствами, из-за которых человек может даже умереть (задохнуться).

Легкие формы недуга обычно проходят бесследно. А за счет целенаправленной многолетней вакцинопрофилактики в структуре преобладают лишь абортивная и инаппарантная формы инфекции. Они лечатся успешно. Паралитические формы поражают лишь людей, не прививавшихся от полиомиелита. А это – обязательная профилактика.

Если вдруг возникает подозрение, что ребенок заразился полиомиелитом, то его немедленно изолируют, а в помещениях, где он находился, проводят дезинфекцию. Лица, с которыми он контактировал, помещаются под наблюдение, а также подвергаются иммунизации ОПВ вне очереди.

источник

Тема: Лабораторная диагностика полиомиелита и заболеваний, вызываемых вирусами полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

Стом. ф-т, 2006

Тема: Лабораторная диагностика полиомиелита и заболеваний, вызываемых вирусами полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

Цель: на основе знаний особенностей биологии вирусов полиомиелита, Коксаки, ЕСНО, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ими заболеваний.

1. Классификацию, морфобиологическую характеристику вирусов полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

2. Экологию, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при полиомиелите и заболеваниях, вызываемых вирусами Коксаки, ЕСНО.

3. Материал и методы лабораторной диагностики полиомиелита и заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки, ЕСНО.

4. Специфическую профилактику полиомиелита, неспецифическую профилактику при полиомиелите и заболеваниях, вызываемых вирусами Коксаки, ЕСНО.

1. Учитывать и оценивать результаты цветной пробы (ЦП), реакции нейтрализации (РН) с целью диагностики полиомиелита.

2. Учитывать и оценивать результаты РГА, РТГА с целью диагностики герпетической ангины.

Контрольные вопросы:

1. Классификация, морфобиологическая характеристика и антигенное строение вирусов полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

2. Программа ВОЗ по глобальной ликвидации полиомиелита; результаты ее реализации в РФ и Красноярском крае.

3. Особенности патогенеза и иммунитета при заболеваниях, вызываемых вирусами полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

4. Лабораторная диагностика полиомиелита и заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки, ЕСНО: материал и методы (вирусологический, серологический).

5. Специфическая профилактика полиомиелита.

6. Неспецифическая профилактика заболеваний, вызываемых вирусами полиомиелита, Коксаки, ЕСНО.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Провести вирусологическое исследование с целью диагностики полиомиелита:

1.1. Учесть и оценить результаты заражения культуры ткани исследуемым материалом от обследуемого с диагнозом «полиомиелит» (микроскопически, ЦП).

1.2. Учесть и оценить результаты РН в культуре ткани по ЦП с поливалентной и типовыми полиомиелитными сыворотками и вирусосодержащим материалом.

На основании полученных результатов сделать заключение, заполнить бланк-направление и бланк-ответ из вирусологической лаборатории.

2. Провести вирусологическое исследование с целью диагностики герпетической ангины:

2.1. Учесть и оценить результаты РГА с вирусосодержащим материалом, полученным при заражении культур ткани содержимым везикул обследуемого с клиническим диагнозом «герпетическая ангина».

2.2. Учесть и оценить результаты РТГА с поливалентной, типовыми диагностическими сыворотками Коксаки А и полученной культурой вируса.

На основании полученных результатов сделать заключение, заполнить бланк-направление и бланк-ответ из вирусологической лаборатории.

3. Изучить и описать биопрепараты: живая полиомиелитная вакцина, диагностические поливалентные и типовые сыворотки полиомиелитные, Коксаки, ЕСНО.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

I. Проведите вирусологическое исследование с целью диагностики полиомиелита:

1.1. Учтите и оцените результаты заражения культуры ткани исследуемым материалом от обследуемого с диагнозом «полиомиелит» (микроскопически, ЦП).

Материалом для вирусологической диагностики полиомиелита являются: фекалии в первые 10 дней заболевания, отделяемое носоглотки – в первые 3 дня заболевания; из СМЖ – полиовирус выделяют редко. После приготовления проб и проверки их на отсутствие бактерий заражают культуры клеток (фибробластов человеческого эмбриона или почек обезьян, HeLa и др.).

Индикацию вируса проводят по ЦПД; для полиовируса – это полная или частичная дегенерация клеток, выявляемая на 2-3 день инкубации.

Учет результатов осуществляется микроскопически или по ЦП (см. занятие №25).

Контролем служит интактная культура клеток ткани.

1.2. Учтите и оцените результаты РН в культуре ткани по ЦП с поливалентной и типовыми полиомиелитными сыворотками и вирусосодержащим материалом.

Идентификацию полученной культуры цитопатогенного вируса осуществляют в РН с поливалентной, а затем с типоспецифическими сыворотками I, II, III.

В качестве культуры вируса используют культуральную жидкость первично зараженной культуры ткани, которую смешивают с равным объемом диагностической сыворотки, разведенной 1:5 или 1:10, оставляют на 1-1,5 ч при комнатной t° и после этого заражают культуру ткани. Для этого в пробирку с культурой ткани вносят 0,2 мл смеси и 0,8 мл питательной среды 199.

Критерием достоверности результатов РН являются контроли:

— контроль тканевых культур (незараженная культура ткани с добавлением 1 мл среды 199) для выявления возможной неспецифической дегенерации клеток;

— контроль токсичности сыворотки (наименьшее разведение сыворотки, используемое в опыте, в объеме 0,1 мл вносят в пробирку с культурой ткани и добавляют 0,9 мл среды 199);

— контроль вируса (0,1 мл культуры вируса вносят в пробирку с культурой ткани и добавляют 0,9 мл среды 199).

Учет результатов РН осуществляется на 5-7 день. При этом следует иметь ввиду, что во флаконах с вирусом культура ткани погибает и цвет среды 199 не меняется (остается красным). Там же, где вирус нейтрализуется, среда 199 становится желтой. Положительный и достоверный результат РН свидетельствует о принадлежности вируса к соответствующему виду и типу.

На основании полученных результатов сделайте заключение, заполните бланк-направление и бланк-ответ из вирусологической лаборатории.

II. Проведите вирусологическое исследование с целью диагностики герпетической ангины:

2.1. Учтите и оцените результаты РГА с вирусосодержащим материалом, полученным при заражении культур ткани содержимым везикул обследуемого с клиническим диагнозом «герпетическая ангина».

Вирусы Коксаки А типов 1-6, 8, 10, 22 вызывают герпангину, характеризующуюся везикулярными высыпаниями на мягком небе, дужках, язычке, миндалинах. Диагноз ставится на основе использования вирусологического метода. Материалом служит содержимое везикул. Для индикации гемагглютинирующего вируса в культуральной жидкости используют РГА с эритроцитарными I (0) группы человека (см. занятие №26).

2.2. Учтите и оцените результаты РТГА с поливалентной, типовыми диагностическими сыворотками Коксаки А и полученной культурой вируса.

Для сероидентификации культуры гемагглютинирующего вируса используют РТГА с диагностическими сыворотками Коксаки А, разведенными 1:5 или 1:10 и культурой вируса в дозе 4 АЕ.

Для проверки достоверности результатов РТГА ставят контроли:

— контроль эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации;

— контроль сывороток на отсутствие неспецифических факторов агглютинации;

— контроль гемагглютинирующих свойств полученной культуры вируса.

На основании полученных результатов сделайте заключение, заполните бланк-направление и бланк-ответ из вирусологической лаборатории.

Дата добавления: 2016-12-17 ; просмотров: 351 | Нарушение авторских прав

источник

Материал:кал, носоглоточная слизь; секционный материал – спинной и головной мозг, ЛУ

Заражение перевиваемых и неперевиваемых культур клеток

Идентификация:типоспецифические сыворотки РН

Внутривидовая дифференцировка (отличить дикие штаммы от вакцинных): ИФА, РНЦПД, ПЦР

Серодиагностика:

Материал: парные сыворотки

Диагностикум: эталонный штамм вируса

Определение IgG, IgA, IgM методом радиальной иммунодиффузии

Профилактика

· Парентеральная вакцина Солка инактивированная;

· Энтеральнаяаттенуированная вакцина – создание стойкого общего и иместногоиммунтета (массоваяиммунизация)

Ротавирусы. Характеристика. Диагностика инфекций, вызываемых ротавирусами. Принципы профилактики.

Семейство: Reoviridae; род: Rotavirus

· Белки капсида: гемагглютинин, типоспецифический АГ

· Неструктурные белки: вирусный энтеротоксин вызывает диарею

Репродукция

1. Проникает с помощью рецепторопосредованногоэндоцитоза

2. Активация вирионов протеазами ЖКТ — превращение в субвирусные частицы — пенетрация клеток

Клиника и патогенез

Источник инфекции: больные и вирусоносители

Инкубационный период: 5 сут

Вызывают: гастроэнтериты, рвоту с болями в животе, диарею с возможным летальным исходом детей

Размножаются в эпителии кишки, вызывают гибель клеток

Диагностика

1. Иммунная электронная микроскопия

2. Серологические методы: ИФА, РСК, РН, РИФ, коагглютинация

Нарастание титра АТ: ИФА, РИФ, РПГА, РФ, РСК, ПЦР

Профилактика

2. Пероральные аттенуированные вакцины

Вирусы ЭКХО и Коксаки, вызываемые ими заболевания.

Семейство:Picornoviridae; род: Enterovirus; вирус Коксаки А и В

Диагностика

1. Вирусологический метод: заражение животных/ культивирование на перевиваемых культурах

Материал: носоглоточная слизь, фекалии

Профилактика

Семейство: Picornoviridae; род: Enterovirus; \ECHO– кишечный цитопатологический вирус человека

· +1 РНК; сферической формы; маленький;

· 34 серовара, 12 из которых обладают гемагглютинирующими свойствами

· Репликация в носоглотке и ЛУ

· Тропен к различным органам и тканям

· Репликация может происходить в кишке без повреждения самих клеток

ОРВИ, диспепсии, менингит, энцефаломиокардит (сходно с полиомиелитом)

У новорожденных поражается печень и сердце – возможен летальный исход

Механизмы передачи

Диагностика

1. Вирусологический метод: заражение клеток почек обезьян

Материал: парные сыворотки; фекалии, носоглоточная слизь, ликвор (у погибших – секционный материал – печень, сердце…)

Профилактика

Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых вирусами ЭКХО и Коксаки.

Материал: кал, ликвор, кровь, секционный материал

Культивирование на перевиваеых и неперевиваемых культурах

Вирус Коксаки А- в животных

Характеристика возбудителей гепатитов с фекально-оральным механизмом передачи.

Гепатиты А и Е –острые инфекции

Семейство: Picornoviridae, род:Hepatovirus

· РНК-содержащий, один вирусспецифичный АГ

· Механизм: фекально-оральный; выделение вирусов в начале клинических проявлений, при желтухе — снижается

· Репликация в тонкой кишке и лимфатической системе—кровь——печень— размножение в гепатоцитах

· Вызывает эпидемиологическую желтуху (болезнь Боткина)

· Инкубационный период 15-50 дней

· Течение легкое, без осложнений, возможна тошнота, повышение температуры

Резистентность

Устойчив к нагреванию до 100 градусов; инактивация при кипячении в течение 5 мин. Устойчив в воде

Т-лимфоциты распознают вирус и убивают пораженные клетки печени

IgM, IgG– связывают вирусы (РН)

После перенесеннойболезни пожизненный иммунитет — IgG

Диагностика

1. Вирусологический метод: на культурах клеток ЦПД не выражен (в теории)

Можно экспериментально воспроизвести инфекцию на обезьянах (в теории)

Определение IgMс помощью ИФА, РИА, и иммунной электронной микроскопии

Профилактика

1. Неспецифическая – улучшение условий приготовления пищи

· Пассивная — введение иммуноглобулина – до 3 мес. иммунитет

· Активная — рекомбинантная вакцина генноинженерная

Семейство: Caliciviridae род:

· 1+РНК: кодирует трансмембранный белок для проникновения в клетку

Эпидемиология и патогенез

Источник: больной, возможна передача от животного (олени. КРС, свиньи)

Механизм: фекально-оральный – водный путь

Инкубационный период: 2-6 нед.

Прогноз благоприятный, если нет беременности

После перенесенной инфекции пожизненный иммунитет

Диагностика

Определение в сыворотке и плазме IgG, IgM с помощью ИФА

ПЦР – определение вирусной РНК в острую фазу

Симптоматическе. Беременным – введение специфического иммуноглобулина

Профилактика

1. Специфическая: введение иммуноглобулина (пассивная)

Инактивированная вакцина цельновирионная (активная)

2. Неспецифическая: улучшение качества воды

8. Вирусы гепатита А и Е. Характеристика возбудителей.=7 Frage

Дата добавления: 2018-06-01 ; просмотров: 168 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник

«Полиомиелит: вирусологическая диагностика и лечение»

Методы вирусологической (в том числе и серологической) диагностики полиомиелита применяются в зависимости от задач, которые возникают в каждом отдельном случае. При наличии ясной клинической характеристики в типичных паралитических случаях болезни следует определить иммунологический тип и генетические признаки вирусного штамма, вызвавшего данное заболевание. Но, конечно, в этих случаях клиницист не очень заинтересован в вирусологическом подтверждении диагноза и обычно удовлетворяется результатами обследования на антитела в парных пробах крови. Следует указать на возможность ошибочного клинического диагноза полиомиелита даже в паралитических случаях, т. к. описаны сходные с полиомиелитом заболевания, вызванные вирусами из группы Коксаки и ЕСНО (М.П. Чумаков, М.К. Ворошилова и др., 1959). Поэтому необходимо вирусологическое подтверждение даже в ясных для клинициста случаях.

В непаралитических и абортивных случаях полиомиелита, когда клиническая и клинико-лабораторная диагностика недостаточно обоснована, выделение из патологических субстратов и определение типа вируса в сочетании с результатами серологического обследования может подтвердить или отвергнуть предполагаемый диагноз полиомиелита, что имеет практическое значение (например, для организации противоэпидемических мероприятий).

Многие агенты могут вызывать синдром асептического менингита, который нельзя без лабораторного исследования отличить от непаралитической формы полиомиелит. Серозный менингит, не отличимый от непаралитической формы полиомиелита, могут вызывать следующие вирусы: возбудители свинки (паротита), лпмфоцитарного хориоменингита, ряд вирусов из групп ЕСНО и Коксаки, герпес простой, герпес зостер, вирусные энцефалиты, кроме того, лептоспиры и др. Чаще всего приходится проводить одновременное обследование материала на присутствие вируса полиомиелита и других энтеровирусов (Коксаки, ЕСНО, РЭО-групп). И, наконец, вирусологические, серологические методы исследования приобретают особое значение для контроля качества профилактических прививок пероральной полиомиелитной живой вакциной, напр. для определения частоты хорошей прививаемости живой вакцины по результатам выделения вакцинных штаммов из кишечного содержимого или из глоточного отделяемого у привитых и контактирующих с ними лиц, а также по динамике нарастания уровней антител в крови у вакцинированных людей. Периодически могут потребоваться выборочные обследования здорового населения на распределение уровней антител к разным типам полиовирусов, а также на частоту спонтанного носительства штаммов вируса полиомиелита и других энтеровирусов.

Материал для обследования. Полиовирус можно выделить заражением обезьяны или восприимчивых тканевых культур, в отдельных случаях также хлопковых крыс и новорожденных белых мышей (для штаммов II и IV типов). Вирусы ЕСНО и нескольких типов Коксаки могут быть выделены заражением культур, а большинство вирусов Коксаки группы А только заражением новорожденных белых мышей. Фекалии больного или здорового человека в очаге инфекции представляют наиболее богатый и регулярный источник для изоляции полиовируса и других энтеровирусов. Полиовирус в фекалиях может обнаруживаться в течение 2—3 недель, иногда 12 недель и больше после начала болезни или скрытой инфекции; максимальное количество полиовируса в фекалиях — до 10 инфекционных доз в 1 г.Выделение энтеровирусов возможно также из сточных вод канализации, из мух и других объектов внешней среды, которые могут быть загрязнены фекалиями. Полиовирус можно выделить также из носоглоточных смывов и тампонов из зева вскоре после начала заболевания или при скрытой инфекции (примерно в течение первой недели).

Исследование крови на присутствие вируса полиомиелита (например, вакцинного штамма) чрезвычайно трудоемкое, сложное и возможно только при решении экспериментальных задач в особых условиях. Исследование спинномозговой жидкости при полиомиелите нецелесообразно.

В секционных случаях следует получить асептично пробы из спинного (шейного и поясничного отделов) и продолговатого мозга по 2 см 3 (способ сохранения при 1° 4° в 50% растворе нейтрального глицерина или в замороженном состоянии без глицерина); кроме того, следует в этих случаях обследовать на вирус содержимое кишечника (5—15 г)пли отмытую ткань кишечной стенки на разных уровнях. Все пробы должны пересылаться в лаборатории и сохраняться на холоду (при 1° от -(-4 0 до +8°) или в замороженном виде (от —20° до -70°).

Подготовка обследуемых материалов для заражения культур или животных предусматривает обязательное удаление бактериальных контаминантов путем обработки проб антибиотиками (смесью пенициллина от 500 до 10 000 ЕД в 1 мл,стрептомицина — 500—2000 [в 1 мли, возможно, других антибиотиков). Раньше для этих целей применялась обработка проб эфиром, но она уступает антибиотикам по эффективности. До обследования экстракты фекалий с антибиотиками (20 или 10% взвеси) следует освободить от грубых частиц путем центрифугирования.

Методика исследования. При первичном выделении вирусов из группы Коксаки заражаются в мозг и подкожно новорожденные белые мыши в возрасте не старше 24 час. Молодые белые мыши и хлопковые крысы могут быть заражены материалом, содержащим полиовирус II типа, в головной мозг или в спинной мозг и в брюшную полость, или внутримышечно. Для перевивки вируса от заболевших к свежим животным используется взвесь спинного и головного мозга.

Обезьяны макаки (любой вид), мартышки и др. могут быть заражены материалом, содержащим вирус полиомиелита, разными путями: в головной или в спинной мозг (по 1,0 или 0,2 млсоответственно), через нос под легким наркозом (можно 3—5 дней подряд), в брюшную полость и внутримышечно. В пассажах на обезьянах используется ткань спинного и продолговатого мозга заболевших животных.

Наиболее употребительны в наст, время культуральные пробирочные методы вирусологической и серологической диагностики как самые дешевые и доступные для обследования большого числа проб. Благодаря целой серии исследований Эндерса, Солка, Янгнера, Мельника, Дульбекко и многих других в 1949—1955 гг. были разработаны эффективные методики выделения, размножения и идентификации энтеровирусов в культурах клеток.

Выделение и размножение вируса полиомиелита для лабораторных целей возможно в первичных культурах нормальных тканей от человека (хирургические отходы и эмбрионы) или разных видов обезьян. Для этого чаще всего использовались фибробласты кожно-мышечной ткани, клетки почек, семенника, амниона и др. Кроме того, могут с успехом использоваться вторичные культуры или лабораторные линии непрерывно растущих клеток ракового происхождения (часто применялись лабораторные линии клеток человеческого рака: Не1а, НЕР-2, КВ, НЬ8, Детройт-6 и др.), а также непрерывные линии клеток, происходящих от нормальных тканей (напр., клетки амниона человека и клетки СОЦ— из сердца обезьяны циномольгус). Кроме того, оказалось, что в ряде случаев непрерывные лабораторные линии клеток, происходящие от животных (кроликов, свиней), не восприимчивых к полиомиелиту, могут становиться полностью восприимчивыми к заражению полиовирусом в результате происходящей трансформации (возможно ма-лигнизации ткани) в процессе длительных пассажей непрерывно растущих клеток.

Культуры клеток в подходящей жидкой среде для размножения полиовируса могут изготовляться асептично разными методами (взвесь фрагментов ткани, однослойная клеточная мембрана на стекле; фиксирование фрагментов в куриной плазме; покрытие агаром клеточного слоя на стекле и т. п.) в герметически закрытых стерильных сосудах. Добавление небольшого количества антибиотиков (100—200 ЕД пенициллина, 50 цг стрептомицина на 1 млсреды) надежно предохраняет большинство асептично приготовленных культур клеток от случайного прорастания ми-кробами-контаминантами из воздуха.

О присутствии активного полиовируса в растущей культуре клеток можно судить по наступающей дегенерации клеток в результате цитопатогенного действия вируса. При этом необходимо сравнение с контрольными незараженными клетками и последующая проверка специфичности цитопатогенного эффекта в опыте нейтрализации типовой иммунной сывороткой.

Кроме того, цитопатогенное действие полиовируса во взвеси клеток можно зарегистрировать с помощью наблюдений за изменениями цвета фенолрот или другого индикатора рН среды, а именно клетки во взвеси, не содержащей полиовируса, постепенно в течение нескольких дней сдвигают рН среды в кислую сторону и цвет фенолрот меняется из красного в желтый; в то же время в пробирках с активным вирусом полиомиелита клетки быстро дегенерируют, метаболизм прекращается, кислотность среды не изменяется, и исходный красный цвет среды (с индикатором фенолрот около 0,004%) сохраняется до конца наблюдения. На этой основе разработана методика так наз. цветной пробы (или рН-тест) для выделения и титрования вируса полиомиелита, а также для определения титра антител в сыворотке. В цветной пробе могут ставиться и опыты нейтрализации с целью определения иммунологического типа обследуемого вируса.

Вирус полиомиелита можно обнаруживать и по образованию изолированных колоний, или бляшек, в культурах однослойных клеток, покрытых слоем питательного агара. Бляшкообразование в агаровых культурах растущих клеток с индикатором нейтральрот используется для точного определения титра полиовируса в материале или для дифференциации выделенных штаммов по чувствительности к снижению концентрации бикарбонатов и катионов.

Ход исследования материала в пробирочных культурах ткани на вирус полиомиелита включает следующие методики: предварительное выращивание в течение нескольких дней незараженных клеточных культур, внесение в хорошо развившиеся культуры исследуемого материала, предварительно обработанного антибиотиками и др., инкубирование зараженных культур при 1° 37° и наблюдение за состоянием клеток культуры примерно в течение 10 дней. Некоторые пробы фекалий токсичны для культур, что обычно выявляется через 24 часа, и в этих случаях следует перевить материал культуры на 5-й день. Специфическое действие вируса на клетки обычно выявляется на 3—5-й день, иногда на 6—8-й день после заражения; при отсутствии дегенерации в культурах первого заражения можно попытаться продолжить наблюдение за культурами после замены среды свежей питательной жидкостью. При обнаружении дегенерации клеток зараженных культур проводится перевивка жидкости из таких культур на свежие культуры и определение в серии культур титра выделенного цитопатогенного вируса, а затем опыт нейтрализации с включением специфических иммунных сывороток. Выделение и типирование вируса можно проводить одновременно, добавляя в питательную среду культур разные виды типоспецифических иммунных сывороток; при этом вирус будет подавляться в культурах с гомотиповои иммунной сывороткой и проявлять свое действие в культурах с гетеротиповыми иммунными сыворотками или без сыворотки.

источник

Вирус полиомиелита. Характеристика. Экология. Патогенез. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.

Семейство пикорновирусы (маленькие, полиорганотропные → имм патология (2тип ГЧ с образованием аутоАГ и аутоАТ + 3 тип ГЧ), с цитопотическим действием = клетка гибнет и образованием типоспецифического иммунитета).

Род энтеровирусы (устойчивы к рН желудка, попадают в кишечник и репродуцируются на слизистой).

Полиомиелит = спинальный детский паралич = б. Гейне- Медина. Агент выделен из СМ погибшего мальчика. Острое инфекционное вирусное заболевание, тропен к двигательным нейронам передних рогов СМ, вызывая паралич и атрофию. Не подвергался иммунному прессингу, т.к. участки прикрепительных белков в укрытии = каньоном , который уже , чем молекулы иммунноглобулинов

АГ: 3 серотипа (общий комплемент связывающий АГ) для дифф диагностики от клещевого энцефалита (поведение одинаковое, надо дополнительно следить за родственниками)-реакция нейтрализации.Источник: больные и носители.

Механизм: фек-ор, аспирационный (возд-кап), гемотрансфузионный. РНК + однонитевая ассоциирована с внутренним Б. Вирион = икосаэдр из 60 субъединиц.Устойчив к УФ лучам, высушиванию, дезинфицирующим средствам. Погибает при ƭ 50

Лаб.диагностика: выделение вируса и определение увеличения титра АТ в парных сыворотках. Вирусологическое исследование: смыв из зева, можно испражнения (на 1 неделе).

Культивирование: на клетках фибробластов человеческого эмбриона, выделенный вирус идентифицируют в реакции нейтрализации с типоспецифическими сыворотками.

Серология: устанавливается титр комплемент связывающих, вирус нейтрализующих и преципитирующих АТ. На парных сыворотках (1- как можно ранее, 2-через 4 недели). У взрослых 4х-кратное увеличение титра, у детей 2х-кратное.

Вирусы Коксаки А и В. Характеристика. Экология. Патогенез. Лабораторная диагностика. Иммунитет.

Семейство пикорновирусы (маленькие, полиорганотропные → имм патология (2тип ГЧ с образованием аутоАГ и аутоАТ + 3 тип ГЧ), с цитопотическим действием = клетка гибнет и образованием типоспецифического иммунитета). Род энтеровирусы (устойчивы к рН желудка, попадают в кишечник и репродуцируются на слизистой). Острое инфекционное вирусное заболевание с характерными острыми мышечными болями, лихорадкой и головной болью.

АГ: 30 серотипов (А-24, В-6), общий комплемент связывающий АГ, для дифф диагностики-реакция нейтрализации, у некоторыхесть гемагглютинирующие свойства (гр О), который м/б выявлен в РТГА.

Источник: больной, носитель. Механизм: фек-ор, аспирационный (воздушно-капельный).

Патогенез: входные ворота — слизистые оболочки верхних дыхательных путей и пищевого канала = первичная репродукция → лимфатическая система → кровь. Вирус А обладает большой миотропностью (у мышей-сосунков вялые параличи и парезы, атрофия, поражение сердца). Вирус В нейротропностью (у сосунков энцефаломиелит).

Клинические формы: герпетическая ангина, ЭПИДЕМИЧЕСКАЯ МИАЛГИЯ, серозный менингит, миелит (с параличами, энцефалит, перикардиты и миокардиты, инфекционная экзантема).

Иммунитет: напряженный типоспецифический. Резистентность пищеварительного тракта к реинфекции гомологичным типом. Комплемент связывающие АТ исчезают через несколько месяцев. Вируснейтрализующие АТ сохраняются

Лаб.диагностика: выделяют из крови, смыва из зева, испражнений и ликвора. Биологическая проба на культуре клеток и животных (в мозг сосункам и внутрибрюшинно, мышцы задней конечности). Реакция нейтрализации типоспецифична. Патогистология определяет группу А и В.

Серлогия: выявление вируснейтрализующих АТ в РН.

Специфическая профилактика отсутствует(т.к. много серотипов, необходима поливаленная сыворотка)

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студента самое главное не сдать экзамен, а вовремя вспомнить про него. 9766 — | 7381 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник