Диагностика полиомиелита по реакции нейтрализации

Полиомиелит – это серьезное заболевание, вызванное вирусной инфекцией. Недуг тяжелый, протекает преимущественно с поражением ЦНС. Он приводит к самым разным последствиям, а потому важно вовремя его обнаружить и начать лечение.

Диагностика полиомиелита подразумевает проведение ряда исследований. О них следует рассказать подробнее, а также уделить немного внимания причинам, симптомам и возможным последствиям данного недуга.

Прежде чем обсудить принципы диагностики полиомиелита, необходимо изучить специфику данного недуга. Это – энтеровирусная инфекция, которую вызывают полиовирусы. Они поражают мотонейроны передних рогов спинного мозга. Данное воздействие приводит к серьезным паралитическим осложнениям с последующей инвалидизацией больного.

Как правило, недуг поражает детей, возраст которых составляет менее 4 лет. На них приходится 60-80% случаев.

Последняя эпидемия пришлась на середину прошлого столетия. В конце 80-х ВОЗ приняла резолюцию, целью которой стала ликвидация данного заболевания во всем мире.

На сегодняшний день в странах, где проводят профилактическую вакцинацию против полиомиелита, недуг встречается в виде спорадических единичных случаев. Это Индия, Афганистан, Сирия, Нигерия, Пакистан. Наша страна, а также Северная Америка и государства Западной Европы свободны от полиомиелита.

Данное заболевание вызывают антигенные типы полиовируса, которые относятся к роду энтеровирусов. Всего их три. Но наибольшую опасность несет вирус первого типа – на него приходится 85% случаев. Он очень живучий, может сохраняться до 6 месяцев в испражнениях и до 100 суток в воде.

Он переносит даже замораживание и высушивание, на него не воздействуют антибиотики и пищеварительные соки. Погибнуть вирус может лишь в результате следующих воздействий:

• Нагревание и последующее кипячение.
• Обработка дезинфицирующими средствами.
• Ультрафиолетовое облучение.

Источником вируса может быть не только зараженный человек. Его способен распространить бессимптомный носитель. Сам он может не болеть полиомиелитом. Однако своей носоглоточной слизью и испражнениями распространять будет. Передается вирус фекально-оральным, воздушно-капельным и контактным путями.

Попадая в организм, он внедряется в клетки, вследствие чего нарушается синтез белка и нуклеиновых кислот. Результатом становятся деструктивные и дистрофические изменения. Возможна полная гибель нейрона. Следствие разрушения 1/3-1/4 нервных клеток – развитие полных параличей и парезов.

Прежде чем перейти к обсуждению диагностики и принципов лечения полиомиелита у детей и взрослых, надо перечислить симптомы, которые указывают на развитие столь специфического недуга.

Инкубационный период длится 8-12 дней. Если развивается инаппарантная форма, то клинически недуг никак не проявляется. Его обнаруживают лишь в результате лабораторных исследований.

Недуг висцеральной формы проявляется интоксикацией, лихорадкой, диареей, болями в животе, умеренными катаральными явлениями. Заболевание заканчивается примерно через 3-7 дней после того, как симптомы дают о себе знать. Никаких остаточных неврологических проявлений не наблюдается.

Самым тяжелым является заболевание паралитической формы. Наблюдается диспепсия, трахеит, фарингит, ринит, боли в конечностях и позвоночнике, 2-волновая лихорадка, судороги, спутанность сознания. На 3-6 день наступает паралитическая фаза. К концу второй недели поражаются жизненно важные центры продолговатого мозга, возможен паралич диафрагмы и дыхательных мышц.

Рассмотрев причины, симптомы и виды полиомиелита, нужно уделить внимание и этой теме. Этот серьезный редкий недуг обычно начинает подозревать детский невролог или педиатр. Основаниями для предположений является анамнез, диагностически значимые симптомы и эпидемиологические данные.

Есть определенные трудности. Не все доктора сразу назначают анализ на полиомиелит, так как не всегда подозревается именно данный недуг. Часто ошибочно устанавливают диагноз серозного менингита, острой кишечной инфекции, ОРВИ, гриппа.

Точно определить заболевание способны помочь лабораторные тесты, о которых подробно будет рассказано далее. Сейчас же нужно обсудить другие методы.

Важно дифференцировать вирус, а потому проводится полимеразная цепная реакция. Еще часто назначают люмбальную пункцию. При ее проведении спинномозговая жидкость вытекает под большим давлением. В ходе исследования удается выявить ее бесцветность, прозрачность, а также увеличенное содержание глюкозы и белка. После проведения электромиографии удается подтвердить поражение на уровне передних рогов спинного мозга.

Рассказывая про методы диагностики полиомиелита, также следует оговориться, что недуг необходимо вовремя дифференцировать с ботулизмом, миелитом, синдромом Гийена-Барре, серозным менингитом, клещевым энцефалитом и полиомиелитоподобными заболеваниями.

Он применим в диагностике полиомиелита в обязательном порядке. Очень важно выделить вирус и идентифицировать его. В качестве биоматериала необходим кал больного. Чуть реже берут ликвор, кровь и носоглоточный смыв.

Материал сначала фильтруют, а затем подвергают обработке антибиотиком. Затем вносят его в культуру клеток Нер-2 и RD (из человеческой рабдомиосаркомы). Приблизительно через 5-7 суток возникает цитопатическое действие вирусов (ЦПД), проявляющееся в форме мелкозернистой деструкции клеток.

Идентификацию вируса проводят в реакции нейтрализации. Это значит, что в культуры тканей заносят вирус, соединенный с поливалентной противополиомиелитной сывороткой трех типов. Это первый этап. Следующий шаг – ведение вируса с отдельными типовыми сыворотками, являющимися моновалентными. Каков результат? Если сыворотка и тип вируса идентичны, то ЦПД не наблюдается.

Его также задействуют для диагностики полиомиелита. Он помогает определить, нарастает ли в крови переболевших пациентов титр антител.

Для этого в культуре ткани применяют реакцию нейтрализации с парными сыворотками, которые были получены в период острой стадии заболевания, а также в момент реконвалесценции.

Ставят иммуноферментный анализ (ИФА), а также реакцию связывания комплемента (РСК). В случае положительного результата удается определить 4-кратное нарастание титра антител во 2-й сыворотке, если сравнивать с 1-й.

Что это такое – ИФА-анализ? Активно развивающееся направление химической энзимологии. Это метод с уникальной специфичностью иммунохимической реакции. Проще говоря, антитела связываются лишь с конкретными антигенами. ИФА широко внедрился в разные медицинские области, поскольку используемые реагенты стабильны, методы регистрации просты, а цена проведения довольно мала.

Рассуждая о диагностике полиомиелита у детей и взрослых, необходимо оговориться, что пресловутая дифференциация всегда проводится на основе симптоматики. И у каждой формы заболевания она индивидуальна. Можно выделить такой перечень:

• Менингеальная форма. Проявления: выраженный болевой синдром, натянутые корешки спинномозговых нервов и нервных стволов, их болезненность при пальпации.
• Спинальная форма. Проявления: щадящая, не паретическая походка, сохранность мышечного тонуса, дискомфорт в суставах при пассивных движениях, повышение глубоких рефлексов, воспалительные изменения в крови. Данный недуг часто путают с полирадикулоневритом, дифтерийной полинейропатией, спинальной амиотрофией Верднига-Гоффманна.
• Полиомиелитическая форма. Патологический процесс диагностируется в шейных сегментах. Проявления: параличи мышц плечевого пояса и шеи, вялые парезы, лимфоцитарный плеоцитоз (незначительный, 40-60 клеток), увеличенный уровень белка (примерно 0,66-1,0 г/л). Изучая исследуемый материал при лабораторной диагностике полиомиелита, врачи учитывают эпидемиологический анамнез. Это может быть употребление сырого молока, укус клеща и т. д.
• Дифтерийная форма. Проявления: симметричность поражений, медленное нарастание парезов на протяжении нескольких недель, обнаружение нарушений биоэлектрической активности в процессе проведения электронейромиографии. Диагностируется спустя 1,5-2 месяца после дифтерии.
• Полирадикулоневрит. Проявления: медленное развитие и дальнейшее нарастание симметричных парезов, расстройство чувствительности по корешковому и полиневритическому типам, повышенное количество в спинно-мозговой жидкости белка.
• Понтийная форма. Проявления: снижение вкусовой восприимчивости на соленое и сладкое, слезотечение на пораженной стороне, ощущаемая при пальпации боль тригеминальных точек, нарушения в чувствительности лица и спонтанные боли.
• Бульбарная форма. Проявления: судорожный синдром и глубокие расстройства сознания. Важно дифференцировать ее со стволовыми энцефалитами.

В рамках темы, касающейся дифференциальной и микробиологической диагностики полиомиелита, надо оговориться, что поражения нервной системы, которые клинически не отличаются от рассматриваемого недуга, часто вызывают энтеровирусы группы Коксаки-ЕСНО. В таких случаях задействуют весь комплекс серологических и вирусологических диагностических методов и уже упомянутый ранее метод ПЦР.

Выше было рассказано об особенностях недуга, основном методе лабораторной диагностике и о том, что такое ИФА-анализ. Это все важно, но теперь стоит также поведать про специфическую профилактику, осуществляемую убитыми и живыми вакцинами.

Метод интересный. В убитой вакцине содержатся вирусы полиомиелита З-го, 2-го и 1-го типов. Их выращивают в почечной ткани обезьян. Убитая вакцина провоцирует гуморальный иммунитет – образование IgM и IgG. Но в то же время не препятствует происходящей в клетках слизистой оболочки кишечника репродукции вирусов.

Живая вакцина типов 3, 2 и 1 образуется из аттенуированных штаммов, которых культивируют также в почечных клетках, но только других животных – зеленых африканских мартышек.

Кроме пресловутых IgM и IgG-антител, ею индуцируются секреторные IgA. Данный процесс происходит в слизистой оболочке ЖКТ (тонкого кишечника, если быть точнее). И именно они являются антителами к полиомиелиту, препятствующими циркуляции диких штаммов.

В подавляющем большинстве больниц стран СНГ распространена оральная вакцина. Прививка делается просто: препарат, о котором рассказывалось выше, закапывают в ротовую полость.

Выполняют это после того, как ребенку исполнится 3 месяца. Далее потребуется сделать еще две вакцинации. Интервал между ними – 1,5 месяца. Выходит, к врачу младенца нужно будет отнести, когда ему будет 4 и 6 соответственно. Ревакцинацию проводят в 18 и 20 месяцев, а потом лишь в 14 лет.

Нужно быть предупрежденным о том, что после введения в организм ослабленных вирусов, способен развиться так называемый вакцинноассоциированный полиомиелит. Вероятность очень мала, но имеется. Чаще всего недуг развивается у младенцев после их первой вакцинации. Какова причина? Обычно – сниженный иммунитет или спонтанная мутация вируса в условиях организма ребенка.

И, кстати, так как после прививки грудничок становится потенциальным носителем вируса, от него могут заразиться не вакцинированные люди, а еще те, у кого иммунитет подавлен.

Немного внимания надо уделить и клиническим рекомендациям. Полиомиелит манифестных форм всегда лечится стационарно. Больному показана изоляция, покой, высококалорийная диета и постельный режим.

Очень важно придать конечностям правильное с точки зрения физиологии положение. Необходим массаж грудной клетки и профилактика пролежней. Если у больного наблюдается дисфагия, то питание организуют через назогастральный зонд. В случае нарушения самостоятельного дыхания показана искусственная вентиляция легких.

К сожалению, специфическое лечение не разработано. Вакцины, особенности которых были рассмотрены выше, предотвращают развитие заболевания, не давая ему развиться (выработка иммунитета). Но они не лечат полиомиелит. А потому проводят патогенетическую и симптоматическую терапию.

Прописывают прием аскорбиновой кислоты, витаминов группы В, дегидратирующих и обезболивающих препаратов, дыхательных аналептиков, неостигмина и т. д.

В восстановительный период время уделяется реабилитационным мероприятиям. А именно:

• Лечебная физкультура.
• УВЧ.
• Лечение в санаториях.
• Ортопедический массаж.
• Общие лечебные ванны.
• Парафинолечение.

Лечение и профилактика детей всегда проводится при непосредственном участии детского ортопеда. Если выявляется риск развития контрактур, то назначают наложение лонгет, гипсовых повязок, ортопедических шин, а также ношение специальной обуви.

Всегда есть вероятность возникновения остаточных явлений. Их лечение обычно включает сухожильно-мышечную пластику, теномиотомию, артрориз, тенодез, резекцию и дальнейшую остеотомию костей, коррекцию сколиоза хирургическим методом и т. д.

Нельзя не рассказать о том, чем опасен полиомиелит. Данное заболевание часто приводит к инвалидности. Если парализованные конечности и начинают двигаться, то они остаются деформированными – они укорачиваются, а мышцы атрофируются.

Патологический процесс может затронуть дыхательную систему, а это чревато дыхательными расстройствами, из-за которых человек может даже умереть (задохнуться).

Легкие формы недуга обычно проходят бесследно. А за счет целенаправленной многолетней вакцинопрофилактики в структуре преобладают лишь абортивная и инаппарантная формы инфекции. Они лечатся успешно. Паралитические формы поражают лишь людей, не прививавшихся от полиомиелита. А это – обязательная профилактика.

Если вдруг возникает подозрение, что ребенок заразился полиомиелитом, то его немедленно изолируют, а в помещениях, где он находился, проводят дезинфекцию. Лица, с которыми он контактировал, помещаются под наблюдение, а также подвергаются иммунизации ОПВ вне очереди.

источник

Заболевание полиомиелитом было известно очень давно. В египетском храме был обнаружен барельеф с изображением египетского жреца, у которого одна нога тоньше другой (сухая нога), а стопа другой находилась в положении «конской стопы» — теперь известно, что это результат заболевания полиомиелитом.

Возбудители полиомиелита входят в семейство Picornaviridae (от лат. pico — маленький, rna — РНК-содержащий).

Это семейство включает три рода, из которых в патологии человека наибольшее значение имеют энтеровирусы: возбудители полиомиелита, Коксаки и ECHO (Enteric cytopathogenic human orphan viruses) (orphan — сирота).

Вирусная этиология полиомиелита была установлена К. Ландштейнером и Э. Папером в 1909 г. в опытах на обезьянах.

Морфологическая структура (см. рис. 52) Полиовирус относится к малым вирусам (15-30 нм). Вирус состоит из однонитчатой РНК и белкового капсида, состоящего из 32 капсомеров. Форма вируса кубоидальная. Внешней оболочки нет. Углеводы и липиды не обнаружены. Инфекционные свойства связаны с РНК.

Культивирование. Вирус полиомиелита хорошо размножается в культуре клеток почек обезьян, фибробластов, эмбриона человека и перевиваемых культурах клеток. Размножение вируса сопровождается цитопатическим действием (дегенерацией клеток).

Антигенная структура. Известны три серологических типа вируса полиомиелита, которые обозначаются римскими цифрами (I, II, III). Наибольшее эпидемиологическое значение имеет вирус I типа (вызывает заболевания в 65-90% случаев). Вирус II типа обнаруживается в 10-12%, вирус III типа вызывает отдельные спорадические заболевания.

Серотипы полиовируса различаются в реакции нейтрализации. Они не вызывают перекрестного иммунитета.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Кипячение убивает вирус быстро. Температура 50° С губит его через 30 мин. При комнатной температуре вирус может сохраняться до 3 мес. Низкие температуры он переносит хорошо. В испражнениях на холоде полиовирус сохраняется до 6 мес. В молоке — до 3 мес. Полиовирусы длительно сохраняются в почве, открытых водоемах, что имеет эпидемиологическое значение. Вирусы устойчивы к воздействию желудочного сока и к 1% фенолу. Чувствительны к формалину, хлорамину, перекиси водорода, перманганату калия и др.

Восприимчивость животных. К вирусу полиомиелита I и III типа чувствительны обезьяны (шимпанзе, макаки). К вирусу II типа чувствительны грызуны (хлопковые крысы, хомяки, мыши). Экспериментальное заражение вызывает у них заболевание, сопровождающееся параличами.

Источники инфекции. Больные люди и вирусоносители.

Пути передачи. Пищевой (вирус выделяется с фекалиями до 40 дней). Заболевание может передаваться мухами (мухи переносят вирус на лапках, брюшке) и через объекты окружающей среды; воздушно-капельный (в первые дни болезни вирус выделяется из носоглотки).

Патогенез. Входными воротами является слизистая оболочка верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Попав в организм на слизистую носоглотки, вирус проникает в лимфатические узлы глоточного кольца и тонкого кишечника, где происходит его репродукция (размножение). В крови накапливаются вируснейтрализующие антитела, блокирующие проникновение вируса в ЦНС. В том случае, когда вирус все-таки проникает в ЦНС, он локализуется с двигательных клетках передних рогов спинного мозга и в сером веществе подкорки, где вызывает воспалительно-дегенеративный процесс. В результате возникают вялые параличи, чаще нижних конечностей.

Клинически полиомиелит протекает в трех формах: абортивной, непаралитической (менингеальной) и паралитической (в 1% случаев).

Полиомиелитом чаще болеют дети в возрасте от 5 мес до 5-6 лет. Выделяется вирус полиомиелита с испражнениями и слизью носоглотки.

Иммунитет. После перенесенного заболевания остается пожизненный иммунитет, обусловленный образовавшимися вируснейтрализующими антителами к гомологичным типам вируса.

Профилактика. Ранняя диагностика и изоляция больных.

Специфическая профилактика осуществляется активной иммунизацией. Первая вакцина была предложена Солком в 40-х годах XX века. Эта вакцина состояла из инактивированных формалином полиовирусов I, II и III типа. Однако она не вызывала образования стойкого иммунитета и была очень болезненна при внутримышечном введении.

Вторая вакцина была предложена Сэбином. Она состояла из живых аттенуированных (ослабленных) штаммов-мутантов трех типов полиомиелита. Эти штаммы были лишены инфекционных свойств, но сохранили иммуногенность.

В 60-х годах М. П. Чумаков и А. А. Смородинцев, использовав ослабленный штамм, полученный Сэбином, разработали метод приготовления вакцины в виде конфет-драже, что значительно облегчило ее применение. Массовая вакцинация детей привела к почти полной ликвидации полиомиелита в СССР, за, что авторы получили Ленинскую премию.

Механизм действия вакцины состоит в интерференции вирусов, т. е. вакцинный штамм вируса, заселяя клетки кишечника, блокирует репродукцию дикого штамма, а также в образовании вируснейтрализующих антител.

Лечение. Симптоматическое. Применяют иммуноглобулин.

Цель исследования: выявление вируса и определение его типа; серодиагностика.

1. Кал больных (взятые на 1-й и 2-й неделе заболевания).

2. Носоглоточное отделяемое (взятое в первые дни заболевания).

3. Кусочки головного и спинного мозга, содержимое тонкого и толстого кишечника, лимфоузлы (секционный материал).

Способы сбора материала

1. Выделение вирусов путем заражения различных культур клеток.

2. Серологическое исследование (реакция нейтрализации) и РСК.

Выделение вирусов проводят путем заражения исследуемым материалом двух видов культур — первичных и перевиваемых клеток.

Ход исследования

О наличии вируса судят по цитопатическому действию на клетки.

При отсутствии дегенерации клеток в течение 7-10 дней после заражения проводят следующий пассаж. Для второго посева используют культуральную жидкость, взятую из первого пассажа, и заражают новую культуру клеток.

При отсутствии дегенерации клеток во втором пассаже результат считают отрицательным.

При положительном результате проводят типирование выделенного вируса с коммерческими сыворотками против вируса полиомиелита трех типов методом нейтрализации в культуре клеток и РСК.

Методы ретроспективной диагностики. Для подтверждения диагноза полиомиелита ставят реакцию нейтрализации с парными сыворотками больного. Одну сыворотку берут в начале заболевания, вторую — через месяц после начала заболевания. Обе сыворотки исследуют одновременно в реакции нейтрализации. Для этого сыворотки прогревают в течение 30 мин при 56° С и разводят раствором Хенкса. Разведения делают от 1:4 до 1:1024. Каждое разведение смешивают со стандартной дозой вируса I, II и III типа. После часового контакта (при комнатной температуре) каждой смесью заражают по 2 пробирки со взвесью культуры клеток и помещают в термостат на 4-9 дней. О результатах реакции судят по изменению цвета среды (от малинового до желтого). Изменение цвета свидетельствует о наличии антител. Изменение цвета происходит потому, что клетки остаются жизнеспособными, образуют продукты обмена, изменяющие реакцию рН и соответственно цвет среды. Жизнеспособность клеток обеспечивает нейтрализация вируса соответствующей сывороткой.

Положительной реакцию считают только при четырехкратном увеличении титра вируснейтрализующих антител, т. е. если, например, титр первой сыворотки был 1:8, а во второй, взятой через 1-2 мес, титр не менее чем 1:32.

Вирус Коксаки впервые выделили в 1948 г. Г. Долдорф и И. Сиклс в городе Коксаки в США из испражнений детей при полиомиелитоподобных заболеваниях.

Морфологическая структура. Вирусы Коксаки относятся к мелким вирусам (20-30 нм). В их состав входит РНК и белок, форма кубоидальная.

Культивирование. Культивируются они так же как и полиовирус.

Антигенная структура. По антигенной структуре и патогенным свойствам вирусы Коксаки разделяют на 2 группы: А и В.

В группу А входят 24 серологических типа, которые различаются в реакции нейтрализации.

В группу В входят 6 серотипов, различающихся также в реакции нейтрализации.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Кипячение губит вирусы Коксаки быстро, 50-55° С — через 30 мин. Низкие температуры вирусы переносят хорошо. При температуре -70° С они сохраняются около 3 мес. Вирусы устойчивы к различным концентрациям водородных ионов, действию эфира, 5% лизолу, но проявляют чувствительность к хлороводородной кислоте, формальдегиду и т. д.

Восприимчивость животных. Вирус типа А вызывает у новорожденных мышей параличи, а серотип 7 — полиомиелитоподобные заболевания у обезьян и хлопковых крыс. Вирус типа В у новорожденных мышей вызывает спастические параличи.

Источники инфекции. Вирусы Коксаки в природе широко распространены. Они выделяются с испражнениями и из носоглотки от больных и вирусоносителей.

Пути передачи. Пищевой (при использовании зараженной воды, пищи и при контакте с объектами внешней среды, инфицированными вирусом; вирусы могут переноситься мухами), воздушно-капельный (больной выделяет вирусы при чиханье, кашле в первые дни болезни).

Патогенез. Входными воротами является слизистая оболочка носоглотки и пищеварительного такта. Вирусы Коксаки характеризуются нейро- и миотропностью. Вирусы Коксаки А могут вызвать паралитические заболевания, схожие с полиомиелитом. Вирусы Коксаки группы В вызывают асептический серозный менингит, асептический миокардит и другие энтеровирусные заболевания.

Иммунитет. После перенесенного заболевания остается стойкий типоспецифический иммунитет.

Профилактика. Санитарные мероприятия: изоляция больных, карантин. Специфическая профилактика не разработана.

Цель исследования: выделение вируса и определение его типа.

Материал для исследования, способы его сбора и основные методы исследования такие же, как и при полиомиелите.

Методы диагностики. Выделение вирусов проводят так же, как и при полиомиелите: посев исследуемого материла на первичные и перевиваемые культуры клеток. Некоторые серотипы Коксаки А с трудом адаптируются в культуре клеток.

Выделенные вирусы идентифицируют в РСК и реакции нейтрализации.

Для дифференциации вируса Коксаки типа А от типа В ставят биологическую пробу: заражают новорожденных белых мышей (сосунков).

Вирус типа А вызывает у них вялые параличи без энцефалита, а вирус типа В вызывает судороги и параличи, кроме того, наблюдается поражение внутренних органов — печени, поджелудочной железы и др. При заболевании, вызванном вирусами Коксаки, используют также ретроспективный метод серодиагностики, ставят реакции нейтрализации с парными сыворотками (см. главу 45).

В 1941 г. Д. Эндерс при изучении полиомиелита выделил из кишечника больного вирус, который по серологическим свойствам отличался от вируса полиомиелита и других кишечных вирусов, и назвал его orphan — сирота. Дальнейшие работы показали, что имеется большое количество схожих с ним вирусов, а всю группу назвали ECHO — Enteric cytopathogenic human orphan viruses.

Морфологическая структура. Величина вируса ECHO 10-15 нм. По своей структуре и репродуктивной способности он мало отличается от полиовирусов и вирусов Коксаки.

Культивирование. Вирусы ECHO, так же как вирусы полиомиелита и Коксаки, культивируют на первичных и перевиваемых линиях клеток.

Антигенные свойства. Вирусы ECHO включают 32 серологических типа, не создающих перекрестного иммунитета.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Такая же, как и у вирусов Коксаки.

Восприимчивость животных. Животные не чувствительны к вирусам ECHO.

Источники инфекции, пути передачи и входные ворота. Такие же, как у вирусов полиомиелита и Коксаки.

Патогенез. Вирусы ECHO являются причиной разнообразных заболеваний — вызывают асептический серозный менингит, энтеровирусную лихорадку, эпидемические экзантемы, миокардит и другие лихорадочные заболевания.

Иммунитет. Вирусы ECHO создают стойкий иммунитет за счет вируснейтрализующих антител.

Профилактика. Общесанитарные мероприятия как и при других кишечных инфекциях, но следует помнить, что переохлаждение и перегревание способствуют распространению энтеровирусных заболеваний. Специфическая профилактика не разработана.

Материал для исследования, способы его сбора, основные методы исследования и диагностики такие же, как и для других энтеровирусных заболеваний. Однако в качестве культуры клеток ткани лучше использовать первично-трипсинизированные.

1. Какие вирусы включены в семейство Picornaviridae?

2. Каковы величина и морфологическая структура вирусов полиомиелита, Коксаки и ECHO?

3. Какие Вы знаете методы культивирования полиовирусов? Чем сопровождается размножение вирусов в культурах клеток?

4. Какие Вы знаете типы полиовирусов? Какой из них имеет наибольшее эпидемиологическое значение?

5. Источники заболевания, ворота инфекции и патогенез при заболевании полиомиелитом.

6. Расскажите о специфической профилактике полиомиелита.

7. Какой материал следует взять для исследования и какие основные методы используются для диагностики при подозрении на полиомиелит?

источник

Материал исследования: отделяемое носоглотки, испражнения, спинномозговая жидкость, кал.

Методы исследования:

Вирусологическое исследование:

Готовят 10% взвесь испражнений в физиологическом растворе (0,9%), фильтруют, добавляют антибиотики.

3-7 дни: Доказательства присутствия вируса в заражённых объектах:

Дни: Идентификация выделенного вируса эталонными диагностическими сыворотками.

Приложение 7

Дополнение к диагностике полиомиелита в культуре ткани.

I. Для культивирования вирусов полиомиелита чаще используют:

­ Первично трипсинизированные почки обезьяны,

­ Первично трипсинизированные клетки почек эмбриона человека.

­ Перевиваемые культуры клеток Нер-2, Детройт (первые-злокачественные клетки рака гортани человека).

О размножении вируса в культуре клеток свидетельствуют:

­ ЦПД энтеровирусного типа (округление клеток).

­ Отсутствие феномена гемадсорбции (вирусы полиомиелита не имеют антигена-гемагглютиногена),

­ Отсутствие феномена гемагглютинации с культуральной жидкостью и взвесью эритроцитов,

­ При прямой люминесцентной микроскопии клеточного пласта, обработанного только флюорохромом, включений вируса ни в протоплазме, ни в ядре обнаружить не удается.

— При иммунофлюоресцентном методе исследования –РИФ – то есть его комплексной обработке иммунной сывороткой с меченными антителами , вирусные включения хорошо видны.

II. цветная проба:

­ В культуре ткани, не зараженной вирусом, под влиянием продуктов ее метаболизма рН среды меняется в кислую сторону. Поэтому и цвет индикатора (фенолрот) в питательной среде меняется с красного на желтый.

­ В культуре клеток, зараженных вирусом, клетки гибнут, рН среды практически не меняется, цвет среды остается обычным — красным.

­ Тип вируса устанавливают по реакции нейтрализации цветной пробы с помощью специфических антител иммунной сыворотки.

III. метод бляшек.

— Выращивают однослойную культуру клеток.

— Удаляют питательную среду (культуральный субстрат).

— Вносят вируссодержащий материал, встряхивают осторожно.

— Заливают инфицированный монослой клеток расплавленным агаром с индикатором (нейтральным красным), помещают в термостат на 24 – 72 часа.

— Там, где клетки растут, рН над ними изменяется в кислую сторону и среда, т. е. слой агара в этой зоне, становится розовым.

— Тип вируса устанавливают по реакции нейтрализации феномена бляшкообразования путём обработки вирусосодержащего материала специфической иммунной сывороткой.

Приложение 8

Иммунологические методы диагностики:

­ Раннее применение иммунологической диагностики используют для идентификации выделенных от больного вирусов с помощью известных специфических противовирусных иммунных сывороток. По сути все эти реакции демонстрируют разные варианты биологической нейтрализации действия вирусов:

­ Соединив вирусосодержащий материал с иммунной сывороткой, помещают взвесь в термостат при температуре +4,+18,+37 0 С (в зависимости от вида вируса) на 1 час. Предполагаем, что антитела при этом взаимодействуют с вирионами и лишают их инфекционности;

­ Далее эту смесь можно ввести чувствительным животным и не наблюдать симптомов, присущих активности данного возбудителя, в связи с его нейтрализацией антителами;

­ Её можно ввести в культуру ткани и наблюдать феномен подавления ЦПД, цветной пробы, бляшкообразования. На том же основании эту смесь можно ввести в развивающиеся куриные эмбрионы (если изучаемый вирус способен развиваться в них) не причиняя им при этом вреда. На этом же основании поиск вирусного антигена в организме больного или вирусоносителя.

II. Методы поздней и ретроспективной диагностики – основан на поиске антител в сыворотках крови больных и переболевших. Они выполняются с помощью эталонных вирусных диагностикумов. При этом можно использовать разные реакции.

-РСК с парными сыворотками по общим правилам, с учётом нарастания их титра и интенсивности.

­ Реакцию иммунодиффузии (РИД) – взаимодействие (с предполагаемыми антителами) сыворотки крови больного и антигена (известного, приготовленного на биофабрике) наблюдают в полужидкой агарозной среде и оценивают по появлению линий преципитации.

­ Различные варианты реакций иммунобиологической нейтрализации (см. выше).

­ Иммуноферментный метод и многие другие.

Приложение 9.

Этапы патогенеза прионных инфекций:

­ На нормальных нейронах экспрессируется клеточный гомолог PrP, по своим свойствам мало отличающийся от инфекционной формы. Он содержит резистентную к протеазам сердцевину, гомологичную инфекционному прионозу (PrP sc ).

­ PrP sc локализуется внутриклеточно, полимеризуясь в амилоидные полочковидные структуры. Внутриклеточная локализация прионов и резистентность его к действию протеаз обуславливает отсутствие у него иммуногенных свойств.

­ Проникновение инфекционного агента в клетку изменяет ход структуры PrP и приводит к развитию дегенеративных процессов в нейроне.

Клиническиприонные инфекции протекают по типу спонгиоформных энцефалопатий с постепенным расстройством рефлексов с конечностей, гипотонией, нарушением глотания и деменцией. Процесс медленно прогрессирует и заканчивается гибелью пациента. Поэтому прионозы называются медленными инфекциями.

В группу возбудителей медленных (неконвенционных) инфекций включены агенты, способные вызвать развитие подострых, но прогрессирующих поражений ЦНС. Среди болезней человека наиболее изучены Куру, болезнь Крайтцефельда-Якоба, синдром Рерсимана-Страуселера-Шайкера, амнотрофическийлейкоспондгиоз, спогиоформная энцефалопатия крупного рогатого скота. Особенность этих заболеваний – практически полное отсутствие значимых иммунных реакций. Гистологически в тканях мозга выявляют амилоидные скопления, генерализованную гипертрофию астроцитов и выраженную губчатую дегенерацию.

Дата добавления: 2018-05-02 ; просмотров: 55 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

источник

Характеристика возбудителей полиомиелита. Патогенез полиомиелита. Использование реакции нейтрализации в диагностике полиомиелита. Профилактика и лечение заболевания.

Полиомиелит— острое инфекционное заболевание с поражением двигательных нейронов передних рогов спинного мозга и возникновением параличей мышц ног, рук, туловища. Как особая форма болезни полиомиелит известен уже много тысячелетий, в самостоятельную нозологическую форму выделен в 1860 г. Гейне и назван «детским цереброспинальным параличом». В 1909 г. Поппер и Ландштейнер доказали вирусную этиологию заболевания. С 1951 г. выделено 3 группы возбудителя. Возбудители полиомиелита — полиовирусы I, II, III типов. Морфология вирусов типична для энтеровирусов.

Антигенная структура полиовирусов достаточно стабильна, возможны лишь редкие серологические вариации. Полиовирусы I, II, III типов не вызывают перекрестного иммунитета и различаются в реакции нейтрализации.
Культивируются с трудом. Для культивирования используются первичные культуры тканей человека и обезьян (почки обезьян и эмбриона человека) и перевиваемые культуры (НеLа, Нер-2 и др.). Размножаются в цитоплазме клеток. Резистентность. Устойчивы к действиюфакторов окружающей среды. 1% фенол, спирт, ПАВ — малоэффективны. Не боятся желчи и желудочного сока. Погибают при действии окислителей и формалина, УФ-лучей, при высушивании, при температуре 50°С, 30 мин, при кипячении — через несколько. сек. В воде сохраняются 114 дней, хорошо переносят низкие температуры (в испражнениях на холоде сохраняются 6 мес.) длительное сохранение в почве, открытых водоемах имеет большое эпидемиологическое значение. Патогенность для животных. В эксперименте удается заразить шимпанзе, макак (1 и III типы), хлопковых крыс, мышей. хомяков (II тип). Экспериментальное заражение вызывает у них заболевание, которое сопровождается параличами. Эпидемиология заболевания.Источник инфекции — больные люди и носители. Широко распространено носительство полиовирусов. Человек — естественный хозяин. Полиовирусы также способны размножаться в клетках некоторых животных. Инфицированный человек выделяет вирус с фекалиями в течение 5недель. Основной механизм передачи фекально-оральный. Пути передачи: 1) водный; 2) пищевой; З) контактно-бытовой (через предметы обихода, игрушки, загрязненные руки, мух). Не следует исключать воздушно-капельный путь передачи, т.к. полиовирусы в первые 1-2 недели заболевания выделяются из носоглотки. Полиомиелит встречался в древние времена (5 тыс. лет назад). На Египетском барельефе (1580-133 г. до лэ.) изображен жрец с атрофированной и характерно укороченной ногой — последствие полиомиелита. Родина заболевания — Африка, затем — Европа, Америка, Индия. Заболевание распространено повсеместно. Более часто встречается в странах Северного полушария с умеренным климатом. В развивающихся странах практически у каждого жителя в возрасте 5 лет обнаруживаются антитела к полиовирусам. Возбудители высококонтагиозны, особенно при наличии большого скопления людей и при нарушении элементарных санитарных правил и гигиены. Заболевание отличается массовым характером с преимущественным поражением детей от 5мес. до 5- 6 лет. Дети старшего возраста более тяжело переносят полиомиелит (летальность 20-50%).
Характерна сезонность с подъемом заболеваемости в летние месяцы, что связано с распространением возбудителя с фекалиями. Патогенез и клиника.Входные ворота — слизистые оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Первичная репродукция — в лимфатических узлах глоточного кольца и в лимфатическом аппарате тонкой кишки. После накопления в лимфоузлах вирус поступает в кровь (вирусемия). В это время его можно выделить из глоточных смывов, фекалий и крови. В крови накапливаются вируснейтрализующие антитела. Если их образовалось достаточное количество, то они блокируют проникновение вируса в ЦНС. Если же антител недостаточно, то вирус по нервным стволам достигает ЦНС и избирательно поражает двигательные нейроны спинного мозга, продолговатого мозга и варолиева моста, в результате чего развивается атрофия мышц.

Инкубационный период в среднем 7-14 дней. Имеется 3 клинические формы: 1) паралитическая (0,1 — 1%); 2) менингиальная (без параличей); 3) абортивная (легкая форма).

Заболевание начинается с повышения температуры, общего недомогания, головных болей, рвоты. болей в горле, кашель, резь в глазах (гриппоподобное или энтероподобнос начало). Это так называемая «малая болезнь». После этого наступает улучшение, которое длится от 1 до 7 дней. При абортивной форме заболевание па этом и заканчивается.

При классической форме полиомиелита кажущееся благополучие сменяется «большой болезнью», симптомы возвращаются в более выраженной форме. Температура поднимается до 39 — 40 °С, появляются боли в спине, неврологические расстройства (бред, судороги). Затем температура снижается, больному становится лучше, однако вслед за этим развиваются параличи, преимущественно нижних конечностей. Параличи развиваются внезапно, на 3-5-есутки. При поражении клеток передних рогов спинного мозга возникает спинальный полиомиелит. Чаще наблюдают ассиметричное поражения нижних конечностей (60-80%). При поражении нейронов продолговатого мозга — бульбарный паралич. Заболевание носит более тяжелый характер, т.к. возможно поражение дыхательного центра. Наиболее тяжело протекают спинально-бульбарные поражения. Часто наблюдают присоединение бактериальных инфекций с развитием тяжелых пневмоний. Частота и тяжесть паралитической формы заболевания увеличивается с возрастом. Для детей старше 10-15 лет характерно развитие тяжелых, калечащих форм.
Лабораторная диагностика.Микробиологическая диагностика имеет важное значение, т.к. многие энтеровирусы и герпесвирусы способны вызывать похожие поражения. Исследуемый материал: кровь, спинно-мозговая жидкость, фекалии, отделяемое носоглотки, трупный материал (кусочки головного и спинного мозга). Методы: 1) вирусологический — выделение вируса на культуре клеток и его идентификация по ЦПД (мелкозернистая деструкция и округление клеток) и при помощи реакции нейтрализации (РН) с типосцецифическими сыворотками; 2) серологическии — определение увеличения титра специфических антител в парных сыворотках в РСК или РН с помощью эталонных штаммов вируса (дляподтверждения диагноза) ( «парные сыворотки прогревают при 56°Си делают разведения от 1:4 до 1:1024; каждое разведение смешивают со стандартной дозой вируса I,II,III типов и оставляют на 1 час. Затем этой смесью заражают по 2 пробирки со взвесью культуры клеток и выдерживают при 37°С 4-9 дней. Изменение цвета среды (малиновый на желтый) в пробирке с добавлением вируса определенного типа свидетельствует о наличии антител этого же типа, т.к. происходит нейтрализация вируса антителами, клетки культуры остаются жизнеспособными, образуются продукты их обмена, которые изменяют цвет среды; если цвет среды не изменяется, следовательно антитела к данному типу вируса отсутствуют); 3) метод иммунофлюоресценции (через 24-48 час) — специфическая флюоресценция с одной из иммунных сывороток. Лечение и профилактика.Проводят симптоматическое лечение и предупреждают развитие вторичных бактериальных инфекций. для предупреждения паралитических форм и экстренной профилактики применяется человеческий гамма-глобулин из крови взрослых здоровых доноров. После стихания клинических проявлений проводят коррекцию ортопедических дефектов (физиотерапия, оперативные вмешательства, применение специальных устройств). Спецпрофилактика. Применяют убитую вакцину Дж. Солкома и ослабленную живую вакцину Сэбина, содержащую агтенуированньте штаммы 1, II, III, полученные методом селекции. Вакцинные штаммы выращивают в культурах клеток почек зеленых африканских Мартышек. Отечественные вирусологи А.А. Смородинцев и М.П. Чумаков разработали технологию крупносерийного производства пероральной живой вакцины из штаммов Сэбина. Выпускают в жидком виде (для грудных детей) и в виде конфет-драже (для детей старшего возраста). Вакцины применяют с 3-х месячного возраста. Вакцина создает стойкий гуморальный и местный иммунитет. Применение вакцины резко снизило заболеваемость в мире и в нашей стране. Общая профилактика. Ранняя диагностика и изоляция больных. Постоянный контроль за санитарно-гигиеническим режимом в детских учреждениях. Особое внимание нужно уделять обеззараживанию молока (кипячение, пастеризация).

86.Характеристика возбудителя ВИЧ-инфекции. Понятие о СПИДе и ВИЧ – инфекции. Эпидемиология, патогенез и клиника. Принципы лабораторной диагностики заболевания. Применение иммуноблотинга. Препараты для лечения. Профилактика заболевания.

СПИД — синдром приобретенного иммунодефицита или AIDS (acquired immunodefi­ciency Syndrom) — тяжелое заболевание человека, характеризующееся преимущественным пора­жением иммунной и нервной систем, длительным течением, полиморфностью клинических про­явлений, высокой летальностью. В естественных условиях передается при половых контактах, а также с кровью при медицинских манипуляциях и способна к быстрому эпидемическому распространению.

Характеристика возбудителя СПИДа. Возбудитель СПИДа — вирус иммунодефицита человека — ВИЧ или HIV (human immu­nodeficiency virus) относится к сем. Retroviridae, подсемейству Lentivirinae. ВИЧ был открыт в 1983 г. французской исследовательской группой Л.Монтанье в Институте Пастера в Париже и обозначен LAV (связанный с лимфоаденопатией). В 1984 г. этот вирус был выделен группой уче­ных (Р.Галло) из онкологического института в Мериленде (США) и обозначен как HTLW — III (на родства с вирусом «человеческой Т-лейкимии» I и II). На 2-ом международном кoнгресе по проблеме СПИДа дано название HIV (ВИЧ). В 1984 г. в США создан институт по проблеме СПИДа. Морфология. РНК-содержащий вирус сферической формы (100нм). Имеет сердцевину (РНК + белковая оболочка) и липидную оболочку, пронизанную гликопротеидами, выполняющими антигенную функцию. ВИЧ имеет ферменты обратную транскриптазу или ревертазу (РНК-зависимая ДНК-полимераза), а также протеазу и интегразу. Культивирование. Вирус очень трудно культивируется. Размножается только в культу­рах лимфоцитов, но накопление вируса невысокое.

Антигенная структура. Имеет поверхностные антигены — gp 160, gp 120, gp 41 и сердце­винные антигены — р 24, р18. Различают 2-е антигенные разновидности: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Антиге­ны вызывают образование в крови антител вначале к gp 120, затем gp 41 и р 24. Они длительно со­храняются в крови. ВИЧ обладает уникальной изменчивостью (в 100 и 1000 раз больше, чем у ви­руса гриппа). Это затрудняет диагностику и профилактику заболеваний. Резистентность. Сравнительно малоустойчив к физическим и химическим факторам. При комнатной температуре сохраняется 4 суток, после обработки спиртом, эфиром, гипохлоритом инактивируется через 5-10 мин, быстро погибает при действии моющих средств. Кипячение уби­вает через 1-3 мин, 80°С — 6-7 мин, 60°С — 30 мин. Для ВИЧ губительно солнечное и УФ — излучение. Возможно сохранение вируса во внешней среде в жидкостях, содержащих вирус в высоких концентрациях (кровь и сперма). В крови, предназначенной для переливания, вирус жи­вет годы, в замороженной сперме — несколько месяцев. Восприимчивость животных. К вирусу чувствителен только человек. Отдельные прояв­ления инфекции можно вызвать только у шимпанзе. ВИЧ — подобные вирусы выделены из марты­шек в Африке. Нашли СПИД — подобные болезни у обезьян, кошек, овец и других животных.

Эпидемиология заболевания.СПИД впервые был зарегистрирован зимой 1981 г. в Нью-Йорке и Сан-Франциско, где появились больные мужчины-гомосексуалисты с пневмоцистной пневмонией (возбудитель этого заболевания не является патогенным для людей с нормальной иммунной системой) и саркомой Капоши (злокачественное заболевание кожи, которое является излечимым). К августу уже было зарегистрировано 111 таких больных. Все погибли. Иммунологические исследования показали, что у всех больных наблюдалось снижение Т-4 и относительный рост Т-8 (Т-4/Т-8 9 клеток в 1 мл крови; 0,2-0,5х10 9 в 1 мл и менее 0,2×10 9 в 1 мл).

Иммунитет клеточный и гуморальный. Роль антител не выяснена.

Лабораторная диагностика заболевания.Диагностика ВИЧ-инфекции осуществляется путем комплексной оценки эпидемиологи­ческих данных, клинических и лабораторных исследований.

Диагностика включает 2 этапа: 1) установление диагноза, т.е. определения состояния ин­фицирования ВИЧ; 2) определение стадии и прогноза заболевания.

Клиническое обследование является обязательным этапом диагностики. Лабораторная диагностика заключается в следующем:

1) обнаружение вируса или его антигенов в жидкостях и тканях организма (кровь, лимфоциты, макрофаги, сперма, слюна, содержимое влагалища);

2) обнаружение антител к ВИЧ в сыворотке крови в основном при помощи ИФА; наличие антител подтверждается при помощи иммуноблотинга; появление ан­тител — свидетельство иммунного ответа на заражение, но положительный результат еще не показатель того, заболеет ли и когда заболеет человек СПИДом.
Тест обязательно необходим, если есть симптомы, т.к. при своевременном диагнозе можно целенаправленно воздействовать на болезнь.

Выделение вируса проводят на культурах клеток лимфоцитов, что довольно трудно в обычных условиях.

Клиническими критериями оценки тяжести заболевания является наличие, тяжесть и час­тота возникновения клинических проявлений и вторичных поражений. Чем чаще возника­ют оппортунистические заболевания, чем они тяжелее, и чем хуже они поддаются лечению, тем тяжелее прогноз заболевания.

Лабораторные критерии оценки тяжести — определения количества СД4-лимфоцитов количества вируса в крови (вирусная нагрузка). Уровень СД4-лимфоцитов свидетельст­вует о глубине развившегося иммунодефицита. Высокий показатель вирусной нагрузки — наиболее ранний признак начинающегося прогрессирования заболевания. Этот показатель также используется для быстрой оценки эффективности противовирусной терапии. На основании клинических и лабораторных исследований каждый больной может быть отнесен к той или иной категории (стадии ВИЧ-инфекции), в соответствии с которой про­водится лечение этого заболевания (определяется необходимость противоретровирусной терапии и химиотерапии вторичных, заболеваний). Своевременно и правильно начатое ле­чение может на несколько лет увеличить продолжительность жизни инфицированных лиц.

Лечение и профилактика.Лечение ВИЧ-инфекции является важнейшей проблемой современной медицины. Хотя в России количество ВИЧ-инфицированных невелико, но оно неуклонно возрастает. Проблема заключается в следующем. Возможно 3 направления в лечении ВИЧ-инфекции: 1) этиологическое — противоретровирусная терапия — торможение развития вируса путем бло­кирования обратной транскриптазы или синтеза вирусных белков; но пока нет лекарственных препаратов, которые могли бы полностью освободить организм от возбудителя; 2) патогене­тическое — стимуляция иммунитета; для этого имеются лекарственные препараты, но они не нормализуют количество Т-4, а лишь дополнительно стимулируют еще имеющиеся возможности; 3) симптоматическое — лечение сопутствующих заболеваний, но лечение этих заболеваний. является малоэффективным, т.к. человек живет среди микроорганизмов и укрыться от них больному негде, а постоянное применение противомикробных средств истощает организм. Т.о. лечение неэффективно, но предупреждение прогрессирования заболевания является вполне реальной задачей. Основная цель лечения при ВИЧ-инфекции — предотвратить или от­срочить развитие угрожающих жизни поражений и обеспечить более длительное сохранение качества жизни больного. Для этого необходимо: 1)своевременное начало противоретровирус­ной терапии и профилактика вторичных заболеваний; 2) ранняя диагностика и своевременное ле­чение вторичных заболеваний; 3) тщательный подбор комбинаций лекарственный препаратов.

Безусловным показанием к противоретровирусной терапии являются: острая ВИЧ-инфекция в клинически выраженной форме и наличие у больных клинических проявлений оппор­тунистических заболеваний. При бессимптомной ВИЧ-инфекции больных можно только наблю­дать, т.к. ранняя терапия может привести к развитию устойчивости вируса. К противоретровирусным средствам относятся:

1) нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (зидовудин, диданозин и др.); 2) ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (ифавиренц, делавирдин и др.); 3) ингибиторы протеазы (индинавир, саквинавир и др.).

Наиболее эффективной считается комбинация одного ингибитора протеазы и двух нуклеозидных ингибиторов. Монотерапия любыми противоретровирусными средствами считается неэффективной. Антиретровирусная терапия снижает вирусную нагрузку и благоприятно влияет на иммунную функцию, однако отдаленный клинический эффект подобной терапии изучен недос­таточно. Многие эксперты считают целесообразным продолжать лечение неопределенно долгое время, т.к. после прекращения терапии виремия может появиться вновь или возрасти.

Развитию резистентности вируса препятствует комбинированное применение с антивирусными препаратами иммуномодуляторов, интерферона. Борьба с оппортунистическими инфекциями проводится при помощи подбора адекват­ных химиотерапевтических средств: сульфаниламиды, бактрим, тобрамицин (при пневмоцистной пневмонии), клотримазол, миконазол (при грибковых заболеваниях), рибавирин, ацикловир, интерферон (при вирусных заболеваниях) и т.д.

Существует острая потребность в новых средствах и способах лечения для постоянно рас­тущего числа ВИЧ-инфицированных. Получен новый класс противовирусных препаратов — инги­биторы фузии (препарат Т-20), которые препятствуют не размножению вируса в клетке, а его проникновению в клетки.

Специфическая профилактика не разработана. Разработаны живые, убитые, субъе­диничные, генно-инженерные вакцины (около 100 вакцин). Но заметная эффективность вак­цин не установлена. Разработка эффективных вакцин против ВИЧ сложна из-за отсутствия адек­ватных животных моделей и адекватных индексов защиты у людей. Отсутствие защитного эффек­та антител обусловлено изменчивостью gp.120. Различные штаммы вируса по его структуре отли­чаются более, чем на 20%, и антитела, действующие на один штамм, не дают перекрестных реак­ций с другими. Однако некоторые штаммы циркулируют более активно, и это делает возможным изготовление вакцин из смеси наиболее распространенных штаммов.

Создана генно-инженерная вакцина на основе гликопротеида 160 вируса и около 20 адъювантов для нее, но иммунный ответ развивается слабый. Усиление эффекта найдено у препарата — мурамилпептида, который сейчас испытывается в качестве адъюванта. Эта вакцина проходит 2-ой этап клинических испытаний, которые завершаться через 10-15 лет. В связи с тем, что на сегодняшнем уровне медицинских знаний СПИД неизлечим, отсутст­вуют эффективные вакцины, заболевание приводит к летальному исходу, имеет продолжительный латентный период и является болезнью определенных групп людей, очень важна общая профи­лактика. Основным в общей профилактике является предохранение от заражения:

— пресечение возможностей инфицирования при половых контактах: использование ме­ханических средств защиты — женские и мужские кондомы и химических средств защиты — микробициды (женские — свечи, шарики, растворы и мужские — растворы и гели);

— борьба с проституцией, наркоманией;

— использование одноразовых шприцев, игл, систем для переливания крови; — строгий иммунологический контроль за кровью, предназначенной для переливания, и препаратами крови на ВИЧ;

санитарно-просветительная работа среди населения: давать нужные сведения о болезни, особенно о путях заражения, объяснять необходимость здорового образа жизни, пра­вильного сексуального поведения.

источник

Вирусологическийметод – выделение вируса и его идентификация. Материал – фекалии больного, реже носоглоточный смыв, кровь, ликвор. Материал фильтруют, обрабатывают антибиотиком, вносят в культуру клеток Hep-2 и RD (из рабдомиосаркомы человека). Через 5-7 дней возникает ЦПД в виде мелкозернистой деструкции клеток.

Идентификация вируса проводится в реакции нейтрализации, т. е. в культуры тканей вносят вирус в смеси с поливалентной противополиомиелитной сывороткой типов 1, 2, 3, а затем для определения типа – с отдельными типовыми моновалентнымисыворотками. При идентичности типа вируса и данной сыворотки ЦПД не возникает.

Серологическийдиагноз используют для определения нарастания титра АТ в крови переболевших людей. С этой целью применяют реакцию нейтрализации в культуре ткани с парными сыворотками, полученными в острой стадии болезни и в период реконвалесценции. СтавятРСК, ИФА. При положительном результате выявляют четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой.

Специфическая профилактикаосуществляется живыми и убитыми вакцинами.

Убитая вакцинасодержит вирусы полиомиелита 1, 2, 3 типов, выращенные в почечной ткани обезьян. Она вызывает гуморальный иммунитет – образование IgG и IgM, но не препятствует репродукции вирусов в клетках слизистой оболочки кишечника.

Пероральная живая вакцинатипов 1, 2, 3, получена из аттенуированных штаммов вируса полиомиелита, культивированных в культуре клеток почек африканских зеленых мартышек. Помимо IgG и IgM-антител она индуцирует образование секреторных IgA-антител в слизистой оболочке пищеварительного тракта, особенно тонкого кишечника, и тем самым препятствует циркуляции диких штаммов вируса полиомиелита.

В настоящее время вакцина выпускается в жидком виде, применяется для вакцинации детей, начиная с 3-х месячного возраста, (вводят трехкратно, чтобы создать иммунитет против всех трех типов вируса) с интервалом в 4-6 недель и далее по схеме (в два года и 7 лет).

Для леченияиспользуют сывороточный человеческий иммуноглобулин против полиомиелита, полученный из сыворотки доноров.

19. Вирусы Коксаки и echo свойства, роль в патологии человека, лабораторная диагностика, профилактика, лечение.

Строение вирусов типично для всех пикорнавирусов, но есть следующие особенности: содержат гемагглютинин; патогенны для новорожденных мышей-сосунков. Причем, внутримышечное введение вируса Коксаки А вызывает вялые параличи и участки омертвения мышц, а Коксаки В – поражение внутренних органов и энцефаломиелит.

Клиника. Вирусы вызывают разнообразные по клинике заболевания:

а) герпангину – острую лихорадку с болями в животе, зеве и пузырьковыми высыпаниями на слизистой ротовой полости, иногда с ригидностью затылочных мышц;

б) эпидемическую миалгию – протекает с высокой температурой и колющими мышечными болями в области грудной клетки и живота;

в) эпидемическую плевродинию – сопровождается лихорадкой, плевритами, болевыми приступами в области груди (болезнь Борнхольма);

г) асептический серозный менингит – острая лихорадка с менингеальными симптомами;

д) энцефаломиокардит новорожденных – миокардит и паралитичекие формы, похожие на полиомиелит, кардиотропность больше выражена у вирусов Коксаки В.

В целом для вирусов Коксаки характерен полиорганный тропизм.

Диагностикаосуществляется при выделении вируса из фекалий, смыва из носоглотки, ликвора путем заражения материалом мышей-сосунков и культур клеток. Для идентификации ставят реакцию нейтрализации в культуре клеток, на новорожденных мышах со специфическими сыворотками.

Серологический диагноз проводят путем выявления нарастания титра антител в парных сыворотках больного в РН, РТГА, ИФА.

Так как их роль в патологии человека долго оставалась неизвестной, они были названы «сиротами». Отличаются от других энтеровирусов тем, что не патогенны для новорожденных мышей, имеют гемагглютинин. Известны 1-33 серотипы (кроме 10, 22, 23, 28), которые идентифицируются в реакции нейтрализации, ПЦР, ИФА.

Вирусы вызывают различные заболевания преимущественно в детском возрасте. Сродство к лимфоидной ткани – одна из характерных особенностей этих вирусов. После размножения вирусы проникают в лимфу, а затем в кровь, наступает вирусемия и генерализация инфекции. Дальнейшее развитие болезни зависит от свойств вируса, его тканевого тропизма и иммунного статуса организма. Многие серотипы способны поражать ЦНС, вызывая полиомиелитоподобные заболевания, асептический серозный менингит (серовары 2-9, 12, 14, 16, 21), желудочно-кишечные заболевания с синдромом диареи, респираторные заболевания (серовары 8-11, 20), увеит – воспаление слизистой оболочки глаза, заболевания паренхиматозных органов.

Диагностика проводится так же, как и при вирусах Коксаки.

Энтеровирус 70вызывает субконъюнктивальные кровоизлияния и кератит. Иногда возникают осложнения со стороны ЦНС – боли в области корешков спинномозгового нерва, слабость мышц конечностей, парезы лицевого и языкоглоточного нервов. Основной путь передачи – контактный, реже фекально-оральный.

Энтеровирус 71по свойствам занимает промежуточное положение между вирусами полиомиелита и нейротропными штаммами вируса Коксаки. Против энтеровируса 71 разработана эффективная инактивированная вакцина.

Специфическая профилактика. Получены положительные результаты при применении формалинизированных вакцин из наиболее патогенных энтеровирусов (Коксаки А-9, В-1, ЕСНО-6).

источник

65.Характеристика возбудителей полиомиелита. Патогенез полиомиелита. Использование реакции нейтрализации в диагностике полиомиелита. Профилактика и лечение заболевания.

Полиомиелит — острое инфекционное заболевание с поражением двигательных нейронов передних рогов спинного мозга и возникновением параличей мышц ног, рук, туловища. Как особая форма болезни полиомиелит известен уже много тысячелетий, в самостоятельную нозологическую форму выделен в 1860 г. Гейне и назван «детским цереброспинальным параличом». В 1980 г. Медли описал большую эпидемию этого заболевания в Швеции, т.е. установлен эпидемический характер полиомиелита. В 1909 г. Поппер и Ландштейнер доказали вирусную этиологию заболевания. С 1951 г. выделено 3 группы возбудителя. Возбудители полиомиелита — полиовирусы I, II, III типов. Морфология вирусов типична для энтеровирусов.

Антигенная структура полиовирусов достаточно стабильна, возможны лишь редкие серологические вариации. Полиовирусы I, II, III типов не вызывают перекрестного иммунитета и различаются в реакции нейтрализации.

Культивируются с трудом. Для культивирования используются первичные культуры тканей человека и обезьян (почки обезьян и эмбриона человека) и перевиваемые культуры (НеLа, Нер-2 и др.). Размножаются в цитоплазме клеток. Резистентность. Устойчивы к действию факторов окружающей среды. 1% фенол, спирт, ПАВ — малоэффективны. Не боятся желчи и желудочного сока. Погибают при действии окислителей и формалина, УФ-лучей, при высушивании, при температуре 50°С, 30 мин, при кипячении — через несколько. сек. В воде сохраняются 114 дней, хорошо переносят низкие температуры (в испражнениях на холоде сохраняются 6 мес.) длительное сохранение в почве, открытых водоемах имеет большое эпидемиологическое значение. Патогенность для животных. В эксперименте удается заразить шимпанзе, макак (1 и III типы), хлопковых крыс, мышей. хомяков (II тип). Экспериментальное заражение вызывает у них заболевание, которое сопровождается параличами. Эпидемиология заболевания. Источник инфекции — больные люди и носители. Широко распространено носительство полиовирусов. Человек — естественный хозяин. Полиовирусы также способны размножаться в клетках некоторых животных. Инфицированный человек выделяет вирус с фекалиями в течение 5 недель. Основной механизм передачи фекально-оральный. Пути передачи: 1) водный; 2) пищевой; З) контактно-бытовой (через предметы обихода, игрушки, загрязненные руки, мух). Не следует исключать воздушно-капельный путь передачи, т.к. полиовирусы в первые 1-2 недели заболевания выделяются из носоглотки. Полиомиелит встречался в древние времена (5 тыс. лет назад). На Египетском барельефе (1580-133 г. до лэ.) изображен жрец с атрофированной и характерно укороченной ногой — последствие полиомиелита. Родина заболевания — Африка, затем — Европа, Америка, Индия. Заболевание распространено повсеместно. Более часто встречается в странах Северного полушария с умеренным климатом. В развивающихся странах практически у каждого жителя в возрасте 5 лет обнаруживаются антитела к полиовирусам. Возбудители высококонтагиозны, особенно при наличии большого скопления людей и при нарушении элементарных санитарных правил и гигиены. Заболевание отличается массовым характером с преимущественным поражением детей от 5 мес. до 5- 6 лет. Дети старшего возраста более тяжело переносят полиомиелит (летальность 20-50%).

Характерна сезонность с подъемом заболеваемости в летние месяцы, что связано с распространением возбудителя с фекалиями. В 40-50-е годы наблюдались эпидемии полиомиелита, которые охватывали десятки тыс. человек, из которых 10% умирали, а 40% оставались инвалидами.

Наибольшую эпидемиологическую опасность представляют вирусы I типа.

Патогенез и клиника. Входные ворота — слизистые оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Первичная репродукция — в лимфатических узлах глоточного кольца и в лимфатическом аппарате тонкой кишки. После накопления в лимфоузлах вирус поступает в кровь (вирусемия). В это время его можно выделить из глоточных смывов, фекалий и крови. В крови накапливаются вируснейтрализующие антитела. Если их образовалось достаточное количество, то они блокируют проникновение вируса в ЦНС. Если же антител недостаточно, то вирус по нервным стволам достигает ЦНС и избирательно поражает двигательные нейроны спинного мозга, продолговатого мозга и варолиева моста, в результате чего развивается атрофия мышц.

Инкубационный период в среднем 7-14 дней. Имеется 3 клинические формы: 1) паралитическая (0,1 — 1%); 2) менингиальная (без параличей); 3) абортивная (легкая форма).

Заболевание начинается с повышения температуры, общего недомогания, головных болей, рвоты. болей в горле, кашель, резь в глазах (гриппоподобное или энтероподобнос начало). Это так называемая «малая болезнь». После этого наступает улучшение, которое длится от 1 до 7 дней. При абортивной форме заболевание па этом и заканчивается.

При классической форме полиомиелита кажущееся благополучие сменяется «большой болезнью», симптомы возвращаются в более выраженной форме. Температура поднимается до 39 — 40 °С, появляются боли в спине, неврологические расстройства (бред, судороги). Затем температура снижается, больному становится лучше, однако вслед за этим развиваются параличи, преимущественно нижних конечностей. Параличи развиваются внезапно, на 3-5-е сутки. При поражении клеток передних рогов спинного мозга возникает спинальный полиомиелит. Чаще наблюдают ассиметричное поражения нижних конечностей (60-80%). При поражении нейронов продолговатого мозга — бульбарный паралич. Заболевание носит более тяжелый характер, т.к. возможно поражение дыхательного центра. Наиболее тяжело протекают спинально-бульбарные поражения. Часто наблюдают присоединение бактериальных инфекций с развитием тяжелых пневмоний. Частота и тяжесть паралитической формы заболевания увеличивается с возрастом. Для детей старше 10-15 лет характерно развитие тяжелых, калечащих форм.

Полиомиелит может протекать в виде кишечного расстройства, а иногда без выраженных симптомов, что имеет важное эпидемиологическое значение. Бессимптомная инфекция наблюдается у детей до 1 года (90-95%). Несмотря на антигенные различия, все З серотипа обуславливают сходную клиническую картину, и могут вызывать паралитические формы, но чаще эту форму вызывает вирус серотипа I. После выздоровления развивается стойкий пожизненный типоспецифический иммунитет. Иммунитет обусловлен вируснейтрализующими антителами и местной резистентностью слизистой оболочки глотки и кишечника. У лиц старше 10 лет в 86% обнаруживаются антитела.

Лабораторная диагностика. Микробиологическая диагностика имеет важное значение, т.к. многие энтеровирусы и герпесвирусы способны вызывать похожие поражения. Исследуемый материал: кровь, спинно-мозговая жидкость, фекалии, отделяемое носоглотки, трупный материал (кусочки головного и спинного мозга). Методы: 1) вирусологический — выделение вируса на культуре клеток и его идентификация по ЦПД (мелкозернистая деструкция и округление клеток) и при помощи реакции нейтрализации (РН) с типосцецифическими сыворотками; 2) серологическии — определение увеличения титра специфических антител в парных сыворотках в РСК или РН с помощью эталонных штаммов вируса (для подтверждения диагноза) ( «парные сыворотки прогревают при 56°С и делают разведения от 1:4 до 1:1024; каждое разведение смешивают со стандартной дозой вируса I,II,III типов и оставляют на 1 час. Затем этой смесью заражают по 2 пробирки со взвесью культуры клеток и выдерживают при 37°С 4-9 дней. Изменение цвета среды (малиновый на желтый) в пробирке с добавлением вируса определенного типа свидетельствует о наличии антител этого же типа, т.к. происходит нейтрализация вируса антителами, клетки культуры остаются жизнеспособными, образуются продукты их обмена, которые изменяют цвет среды; если цвет среды не изменяется, следовательно антитела к данному типу вируса отсутствуют);

3) метод иммунофлюоресценции (через 24-48 час) — специфическая флюоресценция с одной из иммунных сывороток. Лечение и профилактика. Проводят симптоматическое лечение и предупреждают развитие вторичных бактериальных инфекций. для предупреждения паралитических форм и экстренной профилактики применяется человеческий гамма-глобулин из крови взрослых здоровых доноров. После стихания клинических проявлений проводят коррекцию ортопедических дефектов (физиотерапия, оперативные вмешательства, применение специальных устройств). Спецпрофилактика. Применяют убитую вакцину Дж. Солкома и ослабленную живую вакцину Сэбина, содержащую агтенуированньте штаммы 1, II, III, полученные методом селекции. Вакцинные штаммы выращивают в культурах клеток почек зеленых африканских Мартышек. Отечественные вирусологи А.А. Смородинцев и М.П. Чумаков разработали технологию крупносерийного производства пероральной живой вакцины из штаммов Сэбина. Выпускают в жидком виде (для грудных детей) и в виде конфет-драже (для детей старшего возраста). Вакцины применяют с 3-х месячного возраста. Вакцина создает стойкий гуморальный и местный иммунитет. Применение вакцины резко снизило заболеваемость в мире и в нашей стране. Общая профилактика. Ранняя диагностика и изоляция больных. Постоянный контроль за санитарно-гигиеническим режимом в детских учреждениях. Особое внимание нужно уделять обеззараживанию молока (кипячение, пастеризация).

66.Характеристика возбудителя ВИЧ-инфекции. Понятие о СПИДе и ВИЧ-инфекции. Эпидемиология, патогенез и клиника. Проявления в полости рта. Принципы лабораторной диагностики заболевания. Применение ИФА и иммуноблотинга. Препараты для лечения. Профилактика заболевания.

СПИД — синдром приобретенного иммунодефицита или AIDS (acquired immunodeficiency Syndrom) — тяжелое заболевание человека, характеризующееся преимущественным поражением иммунной и нервной систем, длительным течением, полиморфностью клинических проявлений, высокой летальностью. В естественных условиях передается при половых контактах, а также с кровью при медицинских манипуляциях и способна к быстрому эпидемическому распространению.

Характеристика возбудителя СПИДа. Возбудитель СПИДа — вирус иммунодефицита человека — ВИЧ или HIV (human immunodeficiency virus) относится к сем. Retroviridae, подсемейству Lentivirinae. ВИЧ был открыт в 1983 г. французской исследовательской группой Л.Монтанье в Институте Пастера в Париже и обозначен LAV (связанный с лимфоаденопатией). В 1984 г. этот вирус был выделен группой ученых (Р.Галло) из онкологического института в Мериленде (США) и обозначен как HTLW — III (на родства с вирусом «человеческой Т-лейкимии» I и II). На 2-ом международном кoнгресе по проблеме СПИДа дано название HIV (ВИЧ). В 1984 г. в США создан институт по проблеме СПИДа. Морфология. РНК-содержащий вирус сферической формы (100нм). Имеет сердцевину (РНК + белковая оболочка) и липидную оболочку, пронизанную гликопротеидами, выполняющими антигенную функцию. ВИЧ имеет ферменты обратную транскриптазу или ревертазу (РНК-зависимая ДНК-полимераза), а также протеазу и интегразу. Культивирование. Вирус очень трудно культивируется. Размножается только в культурах лимфоцитов, но накопление вируса невысокое.

Антигенная структура. Имеет поверхностные антигены — gp 160, gp 120, gp 41 и сердцевинные антигены — р 24, р18. Различают 2-е антигенные разновидности: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Антигены вызывают образование в крови антител вначале к gp 120, затем gp 41 и р 24. Они длительно сохраняются в крови. ВИЧ обладает уникальной изменчивостью (в 100 и 1000 раз больше, чем у вируса гриппа). Это затрудняет диагностику и профилактику заболеваний. Предполагается, что в организме человека по мере прогрессирования инфекции, от бессимптомной до манифестной происходит эволюция вируса от менее вирулентного к более вирулентному варианту. Резистентность. Сравнительно малоустойчив к физическим и химическим факторам. При комнатной температуре сохраняется 4 суток, после обработки спиртом, эфиром, гипохлоритом инактивируется через 5-10 мин, быстро погибает при действии моющих средств. Кипячение убивает через 1-3 мин, 80°С — 6-7 мин, 60°С — 30 мин. Для ВИЧ губительно солнечное и УФ — излучение. Возможно сохранение вируса во внешней среде в жидкостях, содержащих вирус в высоких концентрациях (кровь и сперма). В крови, предназначенной для переливания, вирус живет годы, в замороженной сперме — несколько месяцев. Восприимчивость животных. К вирусу чувствителен только человек. Отдельные проявления инфекции можно вызвать только у шимпанзе. ВИЧ — подобные вирусы выделены из мартышек в Африке. Нашли СПИД — подобные болезни у обезьян, кошек, овец и других животных.

источник