Вакцина против оспы овец инструкция внииввим

В последние годы для активной иммунизации против оспы овец с положительными результатами применяют гидроокись-алюминиевую формолвакцину против оспы овец, предложенную научным сотрудником Государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Н. В. Лихачевым.

Вакцину применяют для активной иммунизации как в местах, неблагополучных в отношении данной инфекции, так и с профилактической целью в благополучных по оспе овцеводческих хозяйствах.

Лечебными свойствами вакцина не обладает, а поэтому в неблагополучных хозяйствах прививаются только здоровые животные. Вакциной прививают (за исключением больных) всё поголовье: молодняк различных возрастов и маток, как холостых, так и суягных. Больным оспой овцам инъицируют сыворотку против оспы овец.

Перед прививкой флаконы с вакциной тщательно встряхивают до получения равномерной взвеси. Встряхивание повторяют каждый раз, перед тем как набрать вакцину в шприц. Вакцина инъицируется подкожно в области средней части шеи, при этом место прививки выстригают и дезинфицируют. Вакцину инъицируют в дозе 5 см 3 однократно. На месте инъекции у привитых животных образуется небольшое утолщение вследствие слабой рассасываемости гидроокиси алюминия.

У привитых животных не должно быть клиники общего переболевания оспой или оспенного процесса на месте инъекции вакцины. Эти животные безопасны в смысле рассеивания вируса оспы. Иммунитет у привитых овец наступает через 10—12 дней. В течение указанного срока привитые овцы не должны соприкасаться с больными оспой. Продолжительность иммунитета свыше 4 месяцев.

Для активной иммунизации овец против оспы применяют также овину или овину, заключённую в желатину (желатинизированиую овину). Овину прививают всем овцам в неблагополучных по оспе пунктах.

Овина и желатинизированная овина рассылается в ампулах ёмкостью в 1 см 3 . Одновременно с овиной рассылают физиологический раствор во флаконах ёмкостью в 50 см 3 .

Перед прививкой овину, после тщательного встряхивания ампулы, вливают во флаконы с физиологическим раствором с таким расчётом, чтобы получить разведение 1 :50, т.е. 1 см 3 овины на 50 см 3 физиологического раствора. Желатинизированную овину перед прививками предварительно расплавляют, для чего ампулы с овиной погружают в ванночку, наполненную тёплой водой (+25—+30°С). Расплавленную, как указано овину, разводят физиологическим раствором в отношении 1 :50. Овина должна быть защищена от прямых солнечных лучей и высокой температуры. Перед тем как набрать овину в шприц, флакон с разведённой овиной тщательно встряхивают. Шприц с имеющейся в нём овиной перед каждым впрыскиванием также встряхивают. Доза овины, разведённой указанным способом, равна 0,1 см 3 , а желатинизированной овины—0,2 см 3 , независимо от возраста прививаемых овец.

Овину вводят шприцем в области нижней бесшёрстной поверхности хвоста или на внутренней поверхности уха. Иглу вкалывают в толщу кожи с последующим незначительным оттягиванием её обратно. Место прививки сначала тщательно обтирают ватой, овлажняют водой, обсушивают сухой ватой, а затем обтирают ватой, смоченной спиртом, и обсушивают. Применение других дезинфицирующих средств не допускается.

Признаки привившейся оспы определяют тщательным поголовным осмотром привитых овец через 10—12 дней после прививки. У привитых овец на месте прививки должна быть папула или пузырь. У животных повышается температура, на бесшёрстных местах иногда появляется слабая папулёзная сыпь, исчезающая через несколько дней. У привитых овиной овец иммунитет наступает примерно через 20 дней и сохраняется до года и более.

Всех овец, не давших реакции, после просмотра вторично прививают овииой в той же дозе или методом овинной школки. Для этого берут опец, привитых овиной, на 10—11-й день после прививки с непрорвавшимся пузырём 1½ — 2½ в диаметре, содержащим чистую прозрачную лимфу. Поверхность пузыря и окружающую кожу осторожно очищают спиртовым тампоном и при высыхании пузырь прокалывают у основания. Вытекающую из него жидкость—лимфу—собирают и иглой прививают овцам. Овцы, привитые овиной и овнной-школкой, карантинируются в течение двух месяцев. Не следует прививать овиной и овиной-школкой маток во второй половине беременности и ягнят до трёх месяцев. Указанные группы животных прививают противооспенной сывороткой.

При осложнениях от прививки вводят оспенную сыворотку в лечебных дозах. Привитые овиной овцы рассматриваются как больные, за ними организуется особо тщательный уход до 20 дней, их обеспечивают лучшими кормами, а при необходимости применяют лечение. В холодное время года должно быть уделено особое внимание обеспечению этих овец кошарами и защите их от холода, ветра, дождя и снега. Указанные меры необходимо проводить особенно тщательно, если овцы острижены вскоре после прививки.

Противооспенную сыворотку применяют с профилактической и лечебной целью. Дозы сыворотки против оспы для разных возрастов овец, прививаемых с профилактической целью, следующие (в см 3 ):

ягнятам весом до 15 кг . . 10

овцам » от 15 до 25 кг . . 10—15

С лечебной целью сыворотку применяют в двойных дозах. Иммунитет при пассивных прививках сывороткой сохраняется до 12—15 дней.

Сыворотку вводят подкожно, на внутренней поверхности бедра.

Допускаются также симультанные прививки, т. е. Одновременное введение сыворотки и овины. При этом сыворотку вводя г подкожно на внутренней поверхности бедра, а овину в установленных дозах внутрикожно, на внутренней бесшёрстной поверхности хвоста.

Через 1½ месяца после прививки формолвакциной и через 20 дней после прививки овнной ветперсонал учитывает результаты прививки и акт отсылает в контрольную лабораторию биофабрики, изготовившей препарат.

источник

Оспа овец и коз — высоко контагиозное, быстро передающееся, сопровождающееся лихорадкой, папулёзно-пустулёзными высыпаниями на кожных покровах и слизистых, заболевание. Поражает животных любого возраста, в 50% случаев заканчивается летальным исходом. Для предупреждения распространения заболевания показана иммунизация мелкого скота с трёхмесячного возраста.

Выжившие животные приобретают устойчивый иммунитет к этому вирусу на 2 года. В качестве специфической профилактики используется культуральная вирус-вакцина атте-нуированного штамма НИСХИ (вирус оспы), обеспечивающая защиту привитым козам и овцам на 12 месяцев.

Сегодня для прививания мелкого и крупного рогатого скота против оспы и заразного узелкового дерматита используется вакцина «ШипПокс-ЛСД вак». Это единственный вид иммунизации.

Препарат сделан на основе культуральной жидкости перевиваемых клеток ДНК козы, инфицированной штаммом НИСХИ. В качестве дополнительных элементов в составе присутствует 10% сахарозы и 2% пищевого желатина.

Ответная иммунная реакция на однократное введение вакцины у мелкого скота появляется спустя 5 суток. Препарат безвредный, лечебными свойствами не обладает

Предназначение вакцины — профилактика оспы и нодулярного дерматита у здоровых овец, коз и крупного рогатого скота. Иммунизация проводится с возраста 3-х месяцев. Ревакцинация организовывается каждые 12 месяцев.

В неблагополучных пунктах и хозяйствах угрожаемой зоны проводят прививки для всех возрастных групп скота, вне зависимости от количества времени, которое прошло с момента прошлой иммунизации. Ягнят возрастом до 6 мес. вакцинируют двукратно, с интервалом в 2 недели. Ревакцинацию молодняка проводят спустя 6-7 мес., взрослых особей — 1 год.

Инструкция по применению:

Охладить физраствор (натрий хлорид) 0,9% концентрации до +4°С.
Во флакон с сухой порошковой вакциной, рассчитанный на 50 прививных доз, ввести при помощи шприца 2 см³ натрий хлорида, на 100 доз — 4 см³. Встряхивать ёмкость до полного суспензирования препарата.
Объединить полученную суспензию с 48 см³ физраствора (для 50 доз) иди 96 см³ (для 100 доз).
Ввести при помощи шприца 1 см³ готовой вакцины в бесшерстный участок дермы животного (подмышечная впадина или подхвостовая область).

Запрещено прививать:
больных, ослабленных животных;
самок на последней стадии беременности.

Побочных эффектов при введении препарата не выявлено. При превышении дозировок вспышек оспы не обнаружено.

При использовании нужно соблюдать следующие меры предосторожности:

Надеть чистую одежду.
Руки обработать этиловым спиртом.
Работать в стерильных перчатках.
Вводить суспензию в бесшерстный участок кожного покрова, предварительно обработав его спиртом.
При попадании вакцины на кожные покровы или слизистые человека, промыть участок водой.
Если вакцина случайно была введена подкожно работнику фермы, нужно сразу протереть участок этиловым спиртом, обратиться в больницу и сообщить врачу о происшествии.

Лекарственная форма препарата — порошковая масса, светло-жёлтого цвета. Полностью растворяется в физрастворе 0,9% концентрации за 1,5 минуты. Производитель: ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Плановая профилактическая вакцинация позволяет уберечь поголовье от вспышек оспы. Для поддержания нормального состояния животных необходимо проводить манипуляцию ежегодно.

источник

Вакцина предназначена для профилактической иммунизации овец против оспы и заразного узелкового дерматита (нодулярного дерматита) КРС в неблагополучных и угрожаемых пунктах и хозяйствах. Лекарственная форма – лиофилизированная масса. По внешнему виду вакцина представляет собой однородную сухую пористую массу светло-желтого цвета, полностью растворяющуюся в стерильном 0,9% растворе хлорида натрия (физиологическом растворе) в течение 1,5 минуты.

Способ вакцинации

Вирусвакцину вводят овцам подкожно в бесшерстстый участок кожи (подмышечная область, подхвостовая складка) с соблюдением правил асептики в дозе 1 см3. Перед применением сухую вирусвакцину, соблюдая правила асептики, растворяют охлажденным до 4 °C физиологическим раствором. Для чего во флакон, содержащий 50 прививных доз вирусвакцины, при помощи шприца вносят 2 см3, а во флакон, содержащий 100 прививных доз –4 см3 физиологического раствора и тщательно встряхивают до полного ресуспендирования. После ресуспендирования вирусвакцину объединяют с 48 см3 или 96 см3 (для получения 50 и 100 прививных доз) стерильного физиологического раствора и тщательно встряхивают. Для вакцинации используют шприцы и иглы, которые стерилизуют кипячением в течение 20 минут. Допускается использование одноразовых шприцов. Дезинфекция шприцов и игл химическими средствами не допускается. Поверхность кожи в месте введения вирусвакцины обрабатывают 70% этиловым спиртом или другими антисептиками. При плановой вакцинации прививают овец с 3-месячного возраста. Ревакцинацию животных проводят через каждые 12 месяцев. В неблагополучном пункте и хозяйствах угрожаемой зоны вакцинируют животных всех возрастных групп, не имеющих признаков заболевания оспой, не зависимо от срока предыдущей вакцинации. При этом молодняк в возрасте до 6 месяцев прививают двукратно с интервалом 14 суток. Ревакцинируют молодняк через 6–7 месяцев, а взрослых животных – через 12 месяцев. При плановой вакцинации для профилатики нодулярного дерматита КРС прививают животных с 3х месячного возраста. Ревакцинацию животных проводят через каждые 6 месяцев. В неблагополучном пункте и хозяйствах угрожаемой зоны вакцинируют животных всех возрастных групп, не имеющих признаков заболевания нодулярным дерматитом, не зависимо от срока предыдущей вакцинации. При этом молодняк в возрасте до 6 месяцев прививают двукратно с интервалом 14 суток. Через 6 месяцев молодняк и взрослых животных ревакцинируют. Вирусвакцину вводят КРС подкожно в область средней трети шеи, с соблюдением правил асептики, в дозе 1 см3. Перед применением сухую вирусвакцину, соблюдая правила асептики, растворяют охлажденным до 4 °C физиологическим раствором. Для чего во флакон, содержащий 5 прививных доз вирусвакцины, при помощи шприца вносят 2 см3, а во флакон, содержащий 10, 20 или 50 прививных доз –4 см3 физиологического раствора и тщательно встряхивают до полного ресуспендирования. После ресуспендирования вирусвакцину объединяют с 3 см3 (для получения 5 прививных доз), 6 см3 (для получения 10 прививных доз), 16 см3 (для получения 20 прививных доз), 46 см3 (для получения 50 прививных доз) стерильного физиологического раствора и тщательно встряхивают.

Вирусвакцина вызывает формирование иммунного ответа у привитых овец против оспы и заразного узелкового дерматита (нодулярного дерматита) КРС через 5 суток после однократного применения, продолжительностью не менее 12 месяцев. Вакцина безвредна, лечебными свойствами не обладает.

Условия хранения

Вакцину хранят и транспортируют в сухом темном месте при температуре от 2 °C до 8 °C. Срок годности вакцины 24 месяца с даты выпуска при соблюдении условий хранения и транспортирования. По истечении срока годности вирусвакцина к применению не пригодна.

источник

«Временное наставление по применению вирусвакцины против оспы овец сухой культуральной из штамма НИСХИ»

Документ по состоянию на август 2014 г.

Утверждено
Главным управлением
ветеринарии Министерства
сельского хозяйства СССР
23 июня 1984 года

1.1. Вирусвакцина против оспы овец сухая культуральная изготовлена из живого вакцинного штамма НИСХИ, выращенного в первичной культуре клеток почки ягнят. Вакцина лиофильно высушена и представляет собой гомогенную массу желтовато-белого цвета, растворяющуюся в течение 1 — 1,5 мин. в физиологическом растворе.

1.2. Вакцину выпускают в стеклянных, запаянных под вакуумом ампулах, содержащих по 2 мл сухой массы, составляющей 50 прививных доз для овец.

На каждой ампуле указывают наименование препарата, номер серии и дату изготовления. На коробке с сухой вирусвакциной должно быть указано наименование и товарный знак предприятия-изготовителя, полное наименование биопрепарата, номер серии, номер государственного контроля, количество ампул в коробке, объем вакцины и количество доз в ампуле, дата изготовления, срок годности, условия хранения и обозначения настоящих ТУ. В каждую коробку вкладывают наставление по применению вакцины и ярлык с указанием фамилии или номера упаковщика.

1.3. Сухую вакцину хранят при температуре не выше 8 °С в сухом, темном месте (допускается хранение при любой температуре ниже 0 °С).

1.4. Срок годности вирусвакцины 12 мес. со дня изготовления.

2.1. Сухую вирусвакцину применяют для профилактической иммунизации овец против оспы. Вакциной прививают клинически здоровых овец в эпизоотических очагах и угрожаемых по оспе районах. Молодняк вакцинируют с месячного возраста с обязательной ревакцинацией в возрасте 6 мес.; взрослых овец прививают однократно. Периодичность прививок через 12 мес.

2.2. Вирусвакцину нельзя применять ранее чем через 2 нед. после вакцинации другими биопрепаратами.

2.3. Перед употреблением вирусвакцину растворяют охлажденным до 4 — 10 °С стерильным физиологическим раствором хлористого натрия.

Ампулу с вакциной осторожно, соблюдая правила асептики, вскрывают, вносят в нее 2 мл стерильного физиологического раствора и легко встряхивают. После растворения содержимое ампул при помощи шприца переносят в стерильный флакон, в который доливают 48 мл физиологического раствора. Содержимое флакона тщательно смешивают путем встряхивания. Разведенная вакцина должна быть использована в течение 2 ч с момента ее растворения.

2.4. Ампулы с вакциной, имеющие механические повреждения, различного рода включения, видимые изменения цвета и консистенции содержимого, к применению не допускаются и подлежат обезвреживанию путем кипячения в течение 30 мин. Таким же образом уничтожают вакцину, не использованную в течение 2 ч после ее растворения.

Места, загрязненные вакциной, подлежат обеззараживанию 3-процентным раствором едкого натра.

2.5. Разведенную вирусвакцину вводят подкожно по 1 мл в области бесшерстного участка кожи (подмышечная область).

2.6. Иммунитет наступает через 4 — 5 дней после вакцинации и сохраняется в течение 12 мес.

3.1. За привитыми животными устанавливают ветеринарное наблюдение в течение 12 дней, имея в виду, что часть овец (до 3) реагирует на введение вирусвакцины образованием на 4 — 6-й день в месте инъекции воспалительного отека в виде уплотнения размеров 1 — 5 см, иногда с развитием поверхностного некроза. Уплотнение и некротические участки обычно исчезают через 3 — 15 дней. У некоторых овец может повышаться температура тела до 41,5 °С в течение 1 — 4 дней.

3.2. Проведение прививки оформляют актом с указанием даты, количества привитых овец по возрастным группам, номера серии вакцины и госконтроля, срока годности и предприятия-изготовителя, а также ответственного лица, проводившего прививки.

Акт составляют в 2 экз., один из которых хранят в хозяйстве, другой — в делах ветеринарного учреждения.

3.3. В случае, если после прививок имели место осложнения, об этом необходимо в срочном порядке сообщить во Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Минсельхоза СССР (123022, Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5), предприятию-изготовителю в соответствии с указанием Главного управления ветеринарии Минсельхоза СССР от 8 сентября 1982 г. «О порядке предъявления рекламаций на биологические препараты». Одновременно в институт высылают 4 — 5 ампул с вакциной с указанием номера серии вакцины, времени прививок, количества привитых овец, характера осложнений.

источник

Оспа овец (английское название – Sheep pox; латинское — Variola ovina) является очень заразным и опасным заболеванием. Для него характерны лихорадка и поражения в слизистых оболочек и кожного эпителия папулезно-пустулезного характера.

Об этом заболевании известно еще с древних времен. Первые упоминания появились еще во втором веке. Историки считают, что в Европу эта болезнь попала из Центральной Азии. Первые зафиксированные крупные эпидемии овечьей оспы были в 1272 году в Англии и в 1460 году во Франции. Первое подробное научное описание этой болезни сделали в 1777 году Тиссен и Добантон, а некоторое время спустя, в 1798 году, Гилберт, который выделил основные стадии течения этого заболевания.

Наиболее широкое распространение оспа овец получила в странах Африки и Азии (Тунис, Кувейт, Алжир, Ливия, Марокко, Индия, Афганистан, Турция, Пакистан, Иран). На территории России ее время от времени фиксируют вв приграничных районах.

Решением Международного Эпизоотического Бюро это заболевания отнесено к группе А – быстро распространяющаяся болезнь.

Экономический ущерб от вспышек оспы овец колоссален, поскольку помимо прямых убытков от массового падежа и вынужденного забоя больных овец, происходит сильное падение продуктивности скота, а также значительные средства тратятся на ветеринарные, санитарные и карантинные мероприятия.

Возбудителем оспы является ДНК-содержащий вирус семейства Poxviridae (род Capripoxvirus). Он культивируется в как в первичной, так и субкультуре почечных клеток и тестикул у молодняка (ягнят).

Этот вирус способен долгое время сохранятся.

Например, в засохших оспенных корочках и в лимфе при температуре от минус пяти до минус десяти градусов Цельсия он живет от четырех до пяти лет. Его активность в закрытых помещениях для содержания овец сохраняется в течение полугода, а на открытых выпасах и в шерстном покрове переболевших животных – в течение двух месяцев.

Однако при высоких температурах возбудитель овечьей оспы быстро гибнет. Во внешней среде активность вируса быстро гасится при помощи ветеринарных дезинфицирующих растворов, таких, как натрия гидроксид, формалин, хлорная известь, карболка и так далее.

Оспа поражает овец вне зависимости от породной принадлежности или возрастной группы, но особенно подвержены ей тонкорунные животные. В естественной среде обитания заражение происходит в основном в результате контактов больных и здоровых животных.

Отторгаемые больными овцами оспенные корки распространяют возбудителей вируса по внешней среде. Помимо этого пути заражения, вирус может передаваться воздушным путем через выделяемую из носа слизь.

В случае заражения овец оспой на хозяйство сразу же накладываются карантинные меры, которые запрещают:

вывоз любых животных из зоны заражения;
ввоз в карантинную зону любых животных;
любые перегруппировки внутрихозяйственного стада;
совместное содержание, пастьба и водопой больных и здоровых животных ;
вывоз из зоны карантина кормов, с которыми могли контактировать больные животные;
постриг овец;
продажа живых животных и их продукции, проведение базаров, ярмарок и выставок, а также прочих, сопровождающихся большим скоплением животных, мероприятий в зоне карантина;
въезд и выезд любых видов транспорта;
доступ на территорию неблагополучного хозяйства любых посторонних людей, кроме специалистов, связанных с лечением и обследованием заболевшего скота;
применение для любых целей не обеззараженного овечьего молока.

Клинические осмотры всего поголовья проводятся не реже одного раза каждые десять дней. Выявленных больных овец изолируют и лечат исходя из проявившихся симптомов.

Трупы погибших от оспы овец сжигают. Всем здоровым животным немедленно проводят вакцинацию, после которой их наблюдаю в течение двух недель.

Каждый раз, когда фиксируется случай падежа животного, после ликвидации его трупа, а также после иммунизации, все загоны, помещения и прочие места содержания овец тщательно чистят и дезинфицируют. Дезинфекция проводится раз в пять дней в течение всего карантинного срока.

При этом используются горячие щелочные растворы, хлорная известь (в растворе), серно-карболовые смеси, двадцатипроцентный раствор гидроксида кальция, формальдегид (в растворе). Деревянные ограждения обеззараживают при помощи свежего раствора хлорной извести (негашеной). Также биотермическим методом в течение трех недель обеззараживают весь собранный навоз.

Если случаи заражения оспой появились в тех районах, где её не было более трех лет, всех зараженных животных немедленно убивают (даже при малейшем подозрении на оспу). Санитарную оценку продуктов убоя проводят согласно инструкциям и требованиям путем проведения санитарной и ветеринарной экспертизы. Шкуры убитых животных дезинфицируют в течение суток в ваннах с эмульсией креолина или раствором карболовой кислоты с последующей их просушкой. Вывоз обеззараженных овчин возможен только по окончании карантина.

Перед тем, как снять карантинные ограничения, проводится массовая заключительная дезинфекция всех мест, где находились заболевшие животные. Снимается карантин только через двадцать дней, отсчитываемых с последнего случая падежа или забоя больного животного, или с последнего случая заражения.

источник

Изобретение предназначено для получения живых культуральных вакцин против оспы овец. Получают посевные серии перевиваемых клеток почки овцы сублинии ПО-ВНИИВВиМ в роллерных сосудах. Сформированный монослой инфицируют посевным вирусом в оптимальной дозе. Инкубируют инфицированную культуру в роллерных условиях в течение 5-6 сут со сменой поддерживающей среды через каждые 2-3 сут культивирования. Замораживают пораженные на 75-80% культуры при минус 40 o C и оттаивают при комнатной температуре. Смешивают полученное вируссодержащее сырье с защитной средой определенного состава в объемном соотношении 1: 1. Лиофильно высушивают до содержания массовой доли влаги не более 4%. Изобретение обеспечивает получение стандартной, безвредной, высокоиммуногенной, стабильной при хранении вакцины против оспы овец по высокопроизводительной технологии. 1 табл.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к способам получения живых культуральных вакцин против оспы овец, и может использоваться на предприятиях биологической промышленности.

Для профилактики оспы овец за рубежом применяются вакцины из аттенуированных штаммов, адаптированных к первичным культурам клеток почки и текстикул ягненка и козленка (патент СРР кл. A 61 K 35/76 N 110713, 1985. Solyom F. et al. // Acta vet. Acad sci. hung. — 1980 (1981)- V. 28 — N4 — P. 389-398. Das S. K.//Indian J. Exp. Biol/ — 1986 — V. 24 — N 6 — P. 367-370. Kitching R.P.// Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. — 1986 — V. 5 — N 2 — P. 503-511).

В Российской Федерации используются вакцина против оспы овец из штамма с 113/86 (Авт. св-во N 1614201), вирусвакцина культуральная сухая против оспы овец и штамма НИСХИ (ТУ 10-09-101-91) и вирусвакцина против оспы овец из штамма ВНИИЗЖ культуральная сухая (ТУ 9384-001-00008064-97).

Недостатки этих препаратов заключаются в том, что вакцина из штамма С 113/86 представляет собой тканевую суспензию, вакцина из штамма НИСХИ, как и зарубежные препараты, изготавливается в первичной культуре клеток, а из штамма ВНИИЗЖ — в перевернутой культуре клеток, выращенной стационарным способом в матрасах. Это осложняет технологию получения препаратов и увеличивает их стоимость.

Наиболее близок к предлагаемому способ получения сухой культуральной вирусвакцины, содержащей вакцинный штамм «НИСХИ», выращенный в первичной культуре клеток почки овцы, и стабилизатор высушивания (% по массе) 6 — пептона, 5 — сахарозы. Штамм НИСХИ вируса оспы овец в производственных целях выращивают в матрасах емкостью 1 или 1,5 дм куб. при заражающей дозе вируса 0,01 — 0,001 ТЦД 50/кл первичной культуры клеток почки овцы. В качестве ростовой среды применяют 0,5%-ный гидролизат лактабульмина (ГЛА) на растворе Хенкса с 10% сыворотки крови крупного рогатого скота (КРС) и антибиотиками, а в качестве поддерживающей среды 0,5% ГЛА на растворе Хенкса с 5% прогретой сыворотки КРС и антибиотиками. Культивирование вируса проводят в течение 5 — 10 сут при температуре 37± 1 o C. Титр вакцинного вируса в сухом препарате составляет не менее 100000 ТЦД 50/см куб. (Технические условия ТУ 10-09-101-91 Вирусвакцина сухая культуральная против оспы из штамма «НИСХИ»).

Основным недостатком прототипа в современных условиях производства является использование дорогостоящей технологии, предусматривающей получение вирусного сырья в первичной культуре клеток почки ягнят. Получение клеточного субстрата связано с сезонностью, возможностью контаминации его посторонними микроорганизмами и нерентабельным использованием молодых ягнят, что приводит к большим затратам на получение промышленных серий культуры клеток и повышает себестоимость вакцины.

Другим недостатком прототипа является то, что с целью сохранения биологической активности вакцины необходима укупорка лиофилизированной вакцины под вакуумом, что усложняет технологию производства.

Целью данного изобретения является разработка высокопроизводительной технологии производства безвредной, высокоиммуногенной, стабильной при хранении вакцины против оспы овец.

Поставленная цель достигается тем, что для получения вируссодержащего сырья используется высокопроизводительная роллерная технология культивирования вакцинного вируса в перевиваемой культуре клеток почки овцы ПО-ВНИИВВиМ, а для стабилизации применяется защитная среда, обеспечивающая длительное хранение препарата и позволяющая исключить стадию укупорки флаконов или отпайки ампул под вакуумом.

Предлагаемый способ изготовления вирусовакцины против оспы овец сухой культуральной включает в себя получение посевных серий перевиваемых клеток почки овцы сублинии ПО-ВНИИВВиМ в роллерных сосудах емкостью 3 дм куб. при температуре 37,5 — 38,5 o C в течение 24 ч при скорости вращения сосудов 10 — 12 об/ч, объеме их заполнения 0,3 дм куб. и посевной концентрации 100 — 120 тыс. клеток в см. куб., с последующим серийным пассированием с коэффициентом пересева 1:5; инфицирование сформированного монослоя посевным вирусом в дозе 0,001 — 0,01 ТЦД 50/клетку; инкубирование инфицированной культуры в указанных условиях в течение 5-6 сут, со сменой поддерживающей среды через каждые 2-3 суток культивирования; замораживание пораженной на 75 — 80% культуры при минус 40 o C и оттаивание при комнатной температуре; смешивание полученного вируссодержащего сырья с защитной средой определенного состава в объемном соотношении 1:1 и лиофильное высушивание до содержания массовой доли влаги в пределах 1-4%.

Новый способ отличается от известного тем, что для выращивания вируса используется перевиваемая культура клеток почки овцы, сублинии ПО-ВНИИВВиМ (депонирована во ВНИИВВиМ в 1978 г., кат. N 22). Клетки эпителиоидного типа полигональной формы со стабильным кариотипом. Модальный класс представляют клетки с 70 хромосомами, что составляет 10%. Выращивают клетки в пристеночных культурах в среде Игла (МЭМ) с 5 — 10% нативной сыворотки КРС. Использование этой клеточной культуры позволяет исключить из технологического процесса дорогостоящую нестандартную, малотехнологичную первичную культуру клеток почки ягненка.

Другим отличием предлагаемого способа от прототипа является использование более производительной роллерной технологии культивирования вируса, что позволяет получить за один цикл культивирования 30,0 дм куб. вирусного сырья с активностью 5,5 — 6,1 lg ТЦД 50/см куб., из которого можно приготовить 1,5 млн. доз вакцины.

В качестве защитной среды предлагается стабилизатор, содержащий (% по массе) ферментативного пептона — 20, лактозы — 4, деминерализованной воды — остальное.

Для приготовления серий вакцины используют вируссодержащее сырье с биологической активностью 5,5 — 6,0 lg ТЦД 50/см куб. и стабилизатор в объемном соотношении 1:1, что обеспечивает следующее содержание защитных веществ (% по массе): пептона — 9,8 — 10; лактозы — 1,8 — 2,0. Предлагаемый комплекс обеспечивает минимальные потери титра вируса при лиофилизации (не более 0,5 lg) и стабильность физических и иммунобиологических свойств вакцины при ее укупорке без вакуума.

Для подтверждения преимущества настоящего изобретения приведены примеры конкретного исполнения.

Пример 1. Получение вируссодержащего материала
Для получения вакцины использовали перевиваемую культуру клеток сублинии ПО-ВНИИВВиМ, выращенную в роллерных сосудах.

Перед заражением среду из 100 роллерных сосудов слили и в каждый внесли по 5 см куб. матровой расплодки вируса с биологической активностью 5,0 lg ТЦД 50/см куб. и по 300 см куб. поддерживающей питательной среды ИГЛА МЭМ с 5% инактивированной сыворотки КРС.

Выращивание вируса проводили при температуре (38±1) o C. Скорость вращения роллерных сосудов составляла 10-12 об./ч. Смену среды проводили через каждые 2 сут. Через 120 часов (5-е сутки культивирования) около 80% монослоя было поражено. Содержимое роллерных сосудов заморозили при минус 40 o C.

В опыте было получено 30 дм куб. вируссодержащей жидкости с биологической активность 5,75 lg ТЦД 50/см куб., которую использовали для изготовления вакцины.

Пример 2. Изготовление серии вакцины
К 15,0 дм куб. вируссодержащего материала добавляли при помешивании 15,0 дм куб. защитной среды, содержащей (% по массе) пептона — 19,5; лактозы — 4,0 и деминерализованной воды — 76,5. К полученной смеси добавили комплекс антибиотиков и расфасовали по 4 см куб. во флаконы емкостью 10 см куб. и лиофилизировали.

Сухую вакцину герметично укупоривали.

Аналогичным способом были получены еще 3 серии вакцины.

Пример 3. Контроль биологических показателей вакцины
Комиссионно (с участием ОБТК института) 3 серии вакцины изучены по следующим показателям: биологическая активность, безвредность и иммуногенная активность.

Требования на вакцину изложены в технических условиях ТУ 9384-068-00008064-97 «Вирусвакцина против оспы овец сухая культуральная», утвержденных в декабре 1997 г. Департаментом ветеринарии МСХ и ПРФ.

Биологическая активность
При титровании биопрепаратов в монослойной пробирочной культуре клеток ПО активность по сериям составила: серия N 4 — 5,25 lg, серия N 5 — 5,25 lg, серия N 7 — 5,75 lg ТЦД 50/см куб.

Безвредность
При введении препаратов овцам по 5 см куб. (6 голов — по 2 головы на серию) все животные оставались клинически здоровыми в течение 10 суток наблюдения.

Иммуногенная активность
Проверяли иммуногенную активность 4 и 7 серий. Овцы (6 гол), привитые в дозе 1000 ТЦД 50, через 12 суток после вакцинации не реагировали на введение 1000 ИД 50 вирулентного штамма вируса оспы овец. При этом контрольные животные (2 гол) заболевали оспой с характерными клиническими признаками
Пример 4. Изучение стабильности биологической активности вакцины при хранении
Изучена сохраняемость сухой вирусвакцины в течение 2-х лет хранения при температуре 4±4 o C. В опыте использовали вирусвакцину, лиофилизированную с пептоно-лактозным стабилизатором и укупоренную без вакуума. Результаты исследований приведены в таблице.

Как видно из таблицы, вакцина при температуре 4±4 o C сохраняет исходную активность в течение 1 года, через 2 года хранения в некоторых сериях вакцины происходит незначительное снижение титра вирус (на 0,25 lg ТЦД 50/мл). Использование пептоно-лактозного стабилизатора позволяет максимально сохранить биологические свойства вируса в процессе высушивания и хранения, а также исключить стадию укупорки флаконов (ампул) под вакуумом.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает получение по стандартной и производительной технологии вирусвакцины против оспы овец сухой культуральной. Он прост в исполнении, доступен и может быть реализован в промышленном масштабе.

Научно-техническая документация на препарат (Технические условия и Наставление по применению) утверждена Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 4 декабря 1997 г.

Способ получения вакцины против оспы овец, включающий получение вируссодержащего материала в культуре клеток и его лиофилизацию, отличающийся тем, что для выращивания вируса используют перевиваемую культуру клеток почки овцы сублинии ПО-ВНИИВВиМ, роллерную технологию культивирования вируса, а для стабилизации вируса при высушивании применяют защитную среду при следующем содержании компонентов вакцины, мас.%:
Вируссодержащий материал — 48 — 52
Пептон — 9,8 — 10
Лактоза — 1,8 — 2,0
Деминерализованная вода — Остальное

источник

Вакцина содержит вируссодержащий материал аттенуированного штамма Sheep capripoxvirus ВНИИЗЖ с титром биологической активности 10 5,0 -10 6,0 ТЦД₅₀/мл и стабилизатор в соотношение 80-90/10-20. Штамм ВНИИЗЖ адаптирован к перевиваемой культуре клеток гонад Capra hircus L. В качестве стабилизатора затора используют защитную среду, включающую 3% пептона, 5% сахарозы и 1% желатина. Полученная вакцина представляет гомогенную массу желтовато-белого цвета без посторонней примеси. Вакцину вводят животным однократно в дозе 1 см 3 подкожно. Продолжительность иммунитета 12 месяцев. Технический результат от использования изобретения заключается в обеспечении высокой иммуногенной активности, безвредности, ареактогенности для овец и низкой себестоимости. 4 табл.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии, представляет собой лиофилизированную вирусвакцину из аттенуированного штамма вируса оспы овец, выращенного на перевиваемой культуре клеток гонад козы, и может быть использовано для профилактической иммунизации овец.

Оспа овец — контагиозная вирусная болезнь, характеризующаяся интоксикацией организма, лихорадкой, папулезно-пустулезными поражениями кожи и слизистых оболочек. Она наносит овцеводству огромный экономический ущерб, слагающийся из гибели и вынужденного убоя больных животных, снижения продуктивности, затрат на проведение ветеринарно-санитарных и охранно-карантинных мероприятий. К оспе овец восприимчивы домашние козы, а также дикие животные — сайгаки и козероги, служащие источником инфекции и переносчиками возбудителя. Оспа овец внесена в список наиболее опасных (конвенционных) болезней сельскохозяйственных животных. Она широко распространена во многих странах Азии, Африки и Ближнего Востока. В СССР ее эпизодически регистрировали в южных пограничных регионах.

В нашей стране для специфической профилактики в течение многих лет использовали инактивированную ГОА-формолвакцину, приготовленную из суспензии органов и тканей больных оспой овец (Лихачев Н.В. Ветеринария, 1945, N 2).

Наряду с положительными качествами она имеет ряд недостатков: трудоемка в приготовлении, для получения сырья требуются вирулентный вирус и овцы высокочувствительных пород; иммунитет у животных формируется медленно сроком на 5,5 месяцев, поэтому необходима двукратная иммунизация их в течение года.

В связи с этим предпринимались попытки создать более экономичные, безопасные и эффективные живые вакцины против оспы овец из аттенуированных штаммов. В последние десятилетия предпочтение отдавали культуральным вирусвакцинам.

По сообщениям зарубежных авторов получено несколько аттенуированных культуральных вариантов вируса оспы, отличающихся реактогенностью и продолжительностью создаваемого у овец иммунитета, однако большинство из них изучено лишь в лабораторных опытах (Jassim F.A. et al. Indian Vet. J., 1981, 58, 10; Martin W.B. et al. Res. Vet. Sci., 1973, 14; Mateva-Penkova V. et al. Bull. Off. Int. Epiz., 1974, 81; Ramisse J. et al. Rev. Elev. Med. Vet. Pays trop. , 1978, 31, 1; Pamyar H. et al. Bull. Off. Int. Epiz., 1974, 81; Soman J.P. et al. Indian J. Anim. Sci., 1979, 49, 8).

Известно использование в ряде стран вирусвакцины из аттенуированного штамма RM/65, но она малоэффективна против некоторых местных полевых изолятов вируса оспы в Индии и Марокко (Fassi-Feliri M. et al. Ann. Rech. Vet., 1984, 15, 1; Sharma P.C. et al. Indian J. Anim. Sci., 1987, 57, 9; Singh F. P. et al. J. Anim. Sci., 1984, 54, 7). Поэтому были разработаны аттенуированные варианты вируса оспы овец из местных эпизоотических штаммов (Das S.K. et al. Indian J. Exp. Biol. 1986, 24, 6; Kalra S. K. et al. Indian J. Anim. Sci., 1984, 54, 5).

В нашей стране получили культуральную вирусвакцину против оспы овец из вируса, адаптированного к культуре клеток почки крольчат, и проверили ее в производственных условиях (Жидкова Л.А. и соавт. Тез. докл. IV Всес. вет. вирусол. конф., 1976, 2; Лихачев Н.В. и соавт. Докл. ВАСХНИЛ, 1972, II; Лихачев Н.В. и соавт. Науч.отчет ВГНКИ, 1977; Лихачев Н.В. и соавт. Мат. к заседанию НТС МСХ СССР, 1978).

Указанная вакцина широкого практического применения не нашла по причине ее низкой иммуногенности.

Известен также штамм культивируемых клеток гонад Capra hircus L. — продуцент вирусов животных. Указанный штамм монослойных клеток получен из первичнотрипсинизированной ткани гонад 3-дневной козы путем последовательного пассирования на полусинтетических питательных средах, обладает стабильными морфологическими характеристиками и чувствительностью к заражению вирусами ящура A₂₂-663, O₁-194, Азия-1-48, болезни Гамборо, болезни Ауески и африканской чумы лошадей, репродуцирует их при культивировании в монослое в титрах 5,0 — 8,25 lg ТЦД₅₀/мл, хранится в музее клеток ВНИИЗЖ и депонирован на 234 пассаже в монослое в ВСКК (СХЖ) РАСХН под N 45 (пат. РФ N 2061753; МПК 6 C 12 N 5/06, 7/00; 02.08.94 г.).

Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина против оспы овей, включающая вируссодержащий материал аттенуированного штамма Variola ovina ВГНКИ (НИСХИ) N 77, репродуцированного в культуре клеток почки ягнят с титром биологической активности 10 5,0 — 10 6,0 ТЦД₅₀/мл, и стабилизатор при следующем соотношении компонентов, мас.%: Вируссодержащий материал — 40 — 60 Стабилизатор — 40 — 60 В качестве стабилизатора используют защитную среду, включающую 3% пептона и 5% сахарозы (Иванющенков В.Н. и соавт. Реактогенные и иммуногенные свойства вирусвакцины против оспы овец. Ветеринария, 1990, 7, 28 — 30).

Недостатки известной вакцины состоят в ее низкой иммуногенной активности, реактогенности и трудностях, обусловленных получением сырья в виде почек ягнят. Почки телят можно получить только после окотной кампании.

В задачу создания изобретения входила разработка вакцины против оспы овец аттенуированного штамма вируса, адаптированного к перевиваемой культуре клеток гонад козленка (Capra hircus L.). Технический результат от использования изобретения заключается в обеспечении высокой иммуногенной активности, безвредности, ареактогенности для овец и низкой себестоимости.

Указанный технический результат достигнут созданием изобретения, охарактеризованного следующей совокупностью признаков: 1) вакцина против оспы овец; 2) вируссодержащий материал аттенуированного штамма Sheep capripoxvirus ВНИИЗЖ, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток гонад Capra hircus L. , с титром биологической активности 10 5,0 — 10 6,0 ТЦД₅₀/мл в концентрации 80 — 90%; 3) стабилизатор в концентрации 10 — 20%.

В качестве стабилизатора используют защитную среду, включающую 3% пептона, 5% сахарозы и 1% желатина.

Предлагаемое изобретение включает совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана: 1) вакцина против оспы овец; 2) вируссодержащий материал аттенуированного штамма Sheep capripoxvirus ВНИИЗЖ, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток гонад Capra hircus L. , с титром биологической активности 10 5,0 — 10 6,0 ТДЦ₅₀/мл в концентрации 80-90%; 3) стабилизатор в концентрации 10-20%.

Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1) вакцина против оспы овец;
2) вируссодержащий материал аттенуированного штамма вируса оспы овей, репродуцированного в культуре клеток, с титром биологической активности 10 5,0 — 10 6,0 ТДЦ₅₀/мл;
3) стабилизатор.

По сравнению с прототипом существенными отличительными признаками изобретения являются использование в качестве вируссодержащего материала аттенуированного штамма Sheep capripoxvirus ВНИИЗЖ, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток гонад Capra hircus L. По сравнению с вирусвакциной-прототипом вирусвакцина на основе штамма ВНИИЗЖ обладает более высокой иммуногенной активностью, является ареактогенной и безвредной для овец, более дешевой по себестоимости. Перевиваемая линия клеток исключает необходимость убоя животных для получения почек и позволяет в любое время года получить необходимое количество вирусного сырья. Экономия средств включает также стоимость убоя животных.

Аттенуированный штамм Sheep capripoxvirus ВНИИЗЖ, используемый для изготовления вакцины против оспы овец, депонирован 27.06.96 г. в коллекции вирусов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ), имеет регистрационный шифр «ВНИИЗЖ». Местом хранения штамма определена коллекция микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института защиты животных (600900, Владимир, п/о Юрьевец).

Штамм вируса оспы ВНИИЗЖ получен путем адаптации исходного вируса оспы овец ВГНКИ (НИСХИ) N 77 к перевиваемой культуре клеток гонад Capra hircus L.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентам и научно-техническим источником информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявленного изобретения, позволили установить, что заявитель не обнаружил источник, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявленного изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков в заявляемой вакцине, изложенных в формуле изобретения. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности «новизна».

Для проверки соответствия предлагаемого способа условию патентоспособности «изобретательский уровень» проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть формулы предлагаемого изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемая вакцина не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками заявляемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований для достижения технического результата, изложенных в п. 19.5.3. Правил составления, подачи и рассмотрения заявки на выдачу патента на изобретение. Следовательно, предлагаемая вакцина соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень».

Пример 1. Вирус адаптирован в 5 последовательных пассажах к перевиваемой линии культуры клеток гонад козленка. В первом пассаже цитопатогенное действие на площади 70-80% монослоя клеток отмечали через 5-6 дней. С увеличением количества пассажей выявлялось сокращение сроков патогенного действия вируса до 2-3 дней. Титр вируса достигал 10 5,0 — 10 6,0 лог. Специфическое действие вируса характеризовалось образованием клеток со светопреломляющим эффектом по всей поверхности монослоя клеток.

Пример 2. Штамм вируса оспы овец ВНИИЗЖ характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства
Вирус штамма обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя оспы овец.

Культуральные свойства
Штамм ВНИИЗЖ выращивается и поддерживается в перевиваемой культуре клеток гонад козленка. Вирус адаптируют к указанной культуре клеток путем проведения 3-5 пассажей. Цитопатогенное действие наступает через 48-96 часов на 18-100% поверхности монослоя заражения культуры клеток вирусом. При стационарном способе культивирования в культуре клеток гонад козленка вирус накапливается в титрах 10 5,0 — 10 6,0 ТЦД₅₀/мл.

Антигенные свойства
При подкожном введении овцам вызывает образование вируснейтрализующих и комплементсвязывающих антител.

Безвредность
Штамм безвреден для овец при подкожном введении. Не передается контактным путем чувствительным животным. Для лабораторных животных (кроликов, морских свинок, мышей) не является патогенным. При введении вакцины в прививной дозе в разведении 1:25 кожной и температурной реакции не отмечается.

Реактогенность
Штамм ареактогенен для овец при подкожном введении. У овец может вызывать исчезающую через 5-7 дней местную реакцию в виде воспалительного отека размером 2х3 см при введении штамма в нативном виде по 5 мл подкожно в бесшерстный участок подмышечной области.

Иммуногенные свойства
При подкожном введении штамм в дозе 1000 ТЦД₅₀ создает стойкий иммунитет у привитых овец на 4-5 день после вакцинации продолжительностью 12 месяцев.

Реверсибельность и контагиозность
Штамм ВНИИЗЖ не восстанавливает вирулентных свойств после пяти последовательных пассажей на овцах (не реверсибелен) и не передается при совместном содержании привитых и интактных овец (не контагиозен).

Стабильность свойств при пассировании
Основные биологические свойства штамма стабильно сохраняются на протяжении 10 пассажей в перевиваемой культуре клеток гонад козленка (период наблюдения).

Сохраняемость
В нативном состоянии штамм вируса оспы овец ВНИИЗЖ не снижает своей активности в течение 3 месяцев при +4 o C, в лиофилизированном виде в присутствии 3% пептона, 5% сахарозы и 1% желатина его активность остается на исходном уровне при +4 o C и -20 o C в течение 2 лет (срок наблюдения). После восстановления из лиофилизированного состояния физиологическим раствором вирус не инактивируется при комнатной температуре в течение 24 часов, при -4 o C — 7 суток.

Пример 3. Изготовление вакцины для профилактики оспы овец на основе штамма ВНИИЗЖ.

Вирус выращивают в перевиваемой монослойной культуре клеток гонад козленка (ГК). Для этого штамм клеток ГК, хранящийся в жидком азоте, размораживают путем оттаивания в водяной бане при 37-38 o C и проводят 1-2 пассажа для восстановления исходной скорости роста в монослое. Из культурального сосуда с монослоем клеток удаляют среду культивирования. Монослой клеток дважды обрабатывают диспергирующим раствором, содержащим 0,25% раствор трипсина и 0,02% раствор версена, взятых в соотношении 1:3, с добавлением 0,5% декстрозы, до начала отслаивания клеток. Диспергирующий раствор сливают, вносят среду Игла с 10% сыворотки КРС и 0,03% глутамина и суспензию разливают в культуральные сосуды. Культуру клеток инкубируют при 37 o C в течение 48-72 часов до момента формирования плотного монослоя. Для пересева выбирают сосуды с культурой клеток ГК в виде сформировавшегося равномерного монослоя. Для выращивания вируса используют сосуды емкостью 200 см 3 с выросшим плотным монослоем клеток ГК. В сосуды вносят 5 см 3 расплодки вируса ВНИИЗЖ производственной серии. После этого сосуда ставят на 1 час в термостат при 37 o C, вносят в них поддерживающую питательную среду Игла по 100 или 200 см 3 в зависимости от объема сосудов и инкубируют при 37 o C. Для контроля оставляют 2-3 сосуда с неинфицированной культурой клеток, в которые вносят поддерживающую среду и инкубируют в тех же условиях, что и инфицированную культуру клеток. Смену среды осуществляют через каждые 2 суток после инфицирования клеток. На 3-5 сутки после заражения клеток при наличии цитопатогенных изменений на 80-90% и более площади монослоя содержимое сосудов подвергают замораживанию при -20 o C и оттаиванию при 25 o C, энергично встряхивая для отделения монослоя. Из каждого сосуда берут пробу по 3 мл для определения загрязнения и цитопатической активности.

Полученный материал хранят при 40 o C + 2 o C не более 30 суток до получения результатов контроля. Содержимое сосудов без бактериального заражения оттаивают, сливают в одну емкость, тщательно перемешивают и из общей массы берут 3 пробы для определения биологической активности. Вируссодержащую суспензию хранят в замороженном состоянии при -20 o C не более 6 мес. При активности вируса не ниже 10 4,5 ТЦД₅₀/мл стерильный вируссодержащий материал используют для изготовления производственной серии вирусвакцины. Для этого его оттаивают при 25 o C, добавляют стабилизатор, содержащий 3% пептона, 5% сахарозы и 1% желатина, тщательно перемешивают, разливают в стерильные флаконы по 4,0 см 3 и помещают в холодильники при +4 o C. Лиофилизацию вирусного материала производят при 50 o C. Величину вакуума в камере сублимационного аппарата устанавливают в пределах 4-7 Па. Конечная температура полок аппарата в процессе высушивания 30-40 o C. Высушивание при подогреве полок до указанной температуры осуществляют до того момента, когда температура материала достигнет 8-10 o C, после чего обогрев переводят на температуру 28-30 o C. Высушивание при температуре материала 24-26 o C проводят в течение 5-6 часов. Конечная температура материала не должна превышать 28-30 o C. Ампулы с высушенной вакциной запаивают на карусельно-коллекторном аппарате при остаточном давлении 25-30 Па. Полученная вакцина представляет гомогенную массу желтовато-белого цвета без посторонней примеси. Остаточная влажность препарата составляет 3-6%. Полученная вакцина против оспы овец имеет компонентный состав ,%, представленный в табл. 1.

Полученная вакцина против оспы овец при титровании в культуре клеток ГК имеет титр 4,5-5,5 lgТЦД₅₀/мл.

Пример 4. Проведены испытания вакцины, содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал аттенуированного штамма оспы овец ВНИИЗЖ, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток ГК, с титром биологической активности 10 5,0 -10 6,0 ТЦД₅₀/мл — 80
Стабилизатор — 20
Определение иммуногенной активности вакцины проводят на 4 овцах. В качестве контроля используют 2 неиммуногенные овцы. Вакцину вводят животным однократно в дозе до 1 см 3 подкожно в область бесшерстного участка подмышечной области. Через 12 дней всех вакцинированных и контрольных животных заражают эпизоотическим вирусом оспы овец штамм «Афганский» при 500 ИД₅₀/0,5 см 3 внутрикожно в область внутренней поверхности хвоста. Вакцинированные овцы остались устойчивыми к заражению. Контрольные животные заболели оспой в генерализованной форме.

Пример 5. Проведены испытания вакцины против оспы овец, имеющей следующий компонентный состав, мас.%:
Вируссодержащий материал аттенуированного штамма оспы овец ВНИИЗЖ, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток ГК, с титром биологической активности 10 5,0 — 10 6,0 ТЦД₅₀/мл — 85
Стабилизатор — 15
Определение иммуногенной активности вакцины проводят на 4 овцах. В качестве контроля используют 2 неиммуногенные овцы. Вакцину вводят животным однократно в дозе по 1 см 3 подкожно в область бесшерстного участка подмышечной области. Через 12 дней всех вакцинированных и контрольных животных заряжают эпизоотическим вирусом оспы овец штамм «Афганский» по 500 ИД₅₀/0,5 см 3 внутрикожно в область внутренней поверхности хвоста. Вакцинированные овцы остались устойчивыми к заряжению. Контрольные животные заболели оспой в генерализованной форме.

Пример 6. Проведены испытания вакцины против оспы овец, имеющей следующий компонентный состав, мас.%:
Вируссодержащий материал аттенуированного штамма оспы овец ВНИИЗЖ, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток ГК, с титром биологической активности 10 5,0 — 10 6,0 ТЦД₅₀/мл — 90
Стабилизатор — 10
Определение иммуногенной активности вакцины проводят на 4 овцах. В качестве контроля используют 2 неиммуногенные овцы. Вакцину вводят животным однократно в дозе по 1 см 3 подкожно в область бесшерстного участка подмышечной области. Через 12 дней всех вакцинированных и контрольных животных заражают эпизоотическим вирусом оспы овец штамм «Афганский» по 500 ИД₅₀/0,5 см 3 внутрикожно в область внутренней поверхности хвоста. Вакцинированные овцы остались устойчивыми к заражению. Контрольные животные заболели оспой в генерализованной форме.

Пример 7. Изучение безвредности вакцины против оспы овец из штамма ВНИИЗЖ.

Для определения безвредности используют 2 овец 1-2-летнего возраста массой не менее 30 кг. Лиофилизированную вакцину разводят физиологическим раствором до исходного объема и вводят каждому животному подкожно в область бесшерстного участка подмышечной области по 5,0 см 3 . Через 3-4 суток на месте введения вакцины образуется отечность, исчезающая через 5-7 дней. Температура тела остается в пределах нормы.

Пример 8. Изучение иммуногенной активности вакцины против оспы овец из штамма ВНИИЗЖ.

Определение иммуногенной активности вакцины проводят на 4 овцах. В качестве контроля используют 2 неиммуногенные овцы. Для этого лиофилизированную вакцину разводят физиологическим раствором в соотношении 1:25 и вводят по 1 см 3 подкожно в область бесшерстного участка подмышечной области каждому животному. Через 12 дней всех вакцинированных и контрольных животных заражают эпизоотическим вирусом оспы овец штамм «Афганский» по 500 ИД₅₀/0,5 см 3 внутрикожно в область внутренней поверхности хвоста. Вакцинированные овцы остались устойчивыми к заражению. Контрольные животные заболели оспой в генерализованной форме. Результаты исследований приведены в табл. 2.

Пример 9. Изучение эффективности вакцины против оспы овей из штамма ВНИИЗЖ при иммунизации различными дозами.

Определение иммуногенной активности вакцины проводят на 8 овцах. Вакцину разводят физиологическим раствором до исходного объема, а затем из него готовят разведения таким образом, чтобы в 1 см 3 содержалось вируса 1200 и 300 ТЦД₅₀/1 см 3 . Каждую указанную дозу вводят 4 животным подкожно в область бесшерстного участка подмышечной области. Через 12 дней всех вакцинированных и 2 контрольных неиммунных овец заражают вирулентным вирусом оспы овец штамм «Афганский» внутрикожно в область внутренней поверхности хвоста по 500-1000 ИД₅₀/см 3 . Вакцинированные овцы остались устойчивыми к заражению. Контрольные овцы заболели оспой в генерализованной форме. Результаты исследований приведены в табл. 3.

Пример 10. Изучение эффективности вакцины с титром вируса 10 5,5 ТЦД₅₀/1,0 см 3 .

Эффективность вакцины оценивают по устойчивости овец, иммунизированных различными дозами вакцины. Для этого вакцину разводят физиологическим раствором до исходного объема, из которого готовят разведения таким образом, чтобы в прививной дозе 1,0 см 3 содержалось 40000, 10000, 1000 и 100 ТЦД₅₀/см 3 . С этой целью 12 овец размещают в 4 группы и каждую группу прививают вышеуказанными дозами подкожно в бесшерстный участок подмышечной области. Через 12 дней всех вакцинированных и 2 контрольных овец заражают вирулентным вирусом оспы овец штамм «Афганский» внутрикожно в область внутренней поверхности хвоста по 500-1000 ИД₅₀/см 3 . Все вакцинированные овцы оказались устойчивыми к заражению. Контрольные животные заболели оспой в генерализованной форме (см. табл. 4).

Таким образом, изложенные сведения свидетельствуют о выполнении при использовании предлагаемой вакцины следующей совокупности условий:
вакцина против оспы овец, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарии;
для предлагаемой вакцины в том виде, как она охарактеризована в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность ее осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
вакцина, полученная в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью, безвредностью, аректогенностью и низкой себестоимостью.

Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость».

Источники информации
1. Лихачев Н.В. Ветеринария, 1945, 2.

2. Jassim F.A. et al. Indian. Vet.J., 1981, 58, 10.

3. Martin W.B. et al. Res. Vet. Sci., 1973. 14.

4. Matewa-Penkova V. et al. Bull. Off. Int. Epiz., 1974, 81.

5. Ramisse J. et al. Rev. Elev. Med. Vet. Pays trop., 1978, 31, 1.

6. Ramyar H. et.al. Bull. Off. Int. Epiz., 1974, 81.

7. Soman J.P. et. al. Indian J. Anim. Sci., 1979, 49, 8.

8. Fassi-Fehri M., et. al. Ann. Rech. Vet., 1984, 15, 1.

9. Sharma P.C. et. al. Indian J. Anim. Sci., 1987, 57, 9.

10. Singh J.P. et. al. Anim Sci., 1984. 54, 7.

11. Das S.K. et. al. Indian J. Exp. Biol., 1986, 24, 6.

12. Kabra S.K. Anim. Sci., 1984, 54, 7.

13. Жидкова Л.А. и соавт. Тез. докл. IV Всес.вет.вирусол. конф., 1976, 2.

14. Лихачев Н.В. и соавт. Докл. ВАСХНИЛ, 1972, 11.

15. Лихачев Н.В. и соавт. Научн.отчеты ВГНКИ, 1977.

16. Лихачев Н.В. и соват. Материалы к заданию НТС МСХ СССР, 1978.

17. Патент РФ N 2061753, МПК 6 C 12 N 5/06, 7/00; 02.08.94 г.

18. Иванющенков В.Н. и соавт. Реактогенные с иммуногенные свойства вирусвакцины против оспы овец. /Ветеринария, 1990, 7, 28 — 30 (прототип).

19. Авт. свид. СССР N 1356460, МПК 4 C 12 N 7/00, 05.06.85.

20. Авт. свид. СССР N 1614201, МПК 5 A 61 K 39/275,24.03.89.

21. Иванющенков В.Н. и соавт. Биологические свойства вакцинного штамма НИСХИ вируса оспы овец. /Ветеринария, 1990, 8.22 — 26.

22. Черняк Е.П. и соавт. Биологические свойства производственных штаммов вируса оспы овец. /Ветеринария, 1991, 3, 24 — 26.

23. Курченко Ф.П. и соавт. Эффективность сухой культуральной вирусвакцины из штамма НИСХИ против оспы овец. /Ветеринария, 1991, 10, 21 — 24.

24. Иванющенков В.Н. и соавт. Реактогенные и иммуногенные свойства вирусвакцины против оспы овец из штамма НИСХИ. Вирусные и микробные болезни животных. Сб. науч. трудов. Владимир, 1995, 186 — 191.

25. Иванющенков В.Н. и соавт. Биологические свойства вакцинного штамма НИСХИ вируса оспы овец. Вирусные и микробные болезни животных. Сб. науч. трудов. Владимир, 1995, 254 — 259.

Вакцина против оспы овец, включающая вируссодержащий материал аттенуированного штамма оспы овец и стабилизатор, отличающаяся тем, что в качестве вируссодержащего материала вакцина содержит штамм Sheep capripoxvirus ВНИИЗЖ, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток гонад Capra hircus L., с титром биологической активности 10 5,0 — 10 6,0 ТЦД₅₀/мл при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Вируссодержащий материал штамма Sheep capripoxvirus ВНИИЗЖ, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток гонад Capra hircus L., с титром биологической активности 10 5,0 — 10 6,0 ТЦД₅₀/мл — 80 — 90
Стабилизатор — 10 — 20п

источник

Читайте также: Сообщение про вирус оспа