Какой диагностических метод применяют при оспе

Ветряная оспа (Varicella, в народе — ветрянка) — острая вирусная антропонозная инфекционная болезнь с аэрозольным механизмом передачи возбудителя. Характерна полиморфная макуло папулёзно-везикулёзная сыпь и лихорадка.

Коды по МКБ -10
В01. Ветряная оспа.
В01.0. Ветряная оспа с менингитом (G02.0).
В01.1. Ветряная оспа с энцефалитом (G05.1).
В01.2. Ветряная оспа с пневмонией (J17.1).
В01.8. Ветряная оспа с другими осложнениями.
В01.9. Ветряная оспа неосложнённая.

Возбудитель — вирус ветряной оспы Varicella zoster virus семейства Herpesviridae.

Размер вируса от 150 до 200 нм, он находится в ветряночных пузырьках в первые 3–4 дня болезни; после 7-го дня обнаружить вирус не удаётся. Геном имеет двуспиральную линейную молекулу ДНК, липидную оболочку. Вирус репродуцируется только в ядре инфицированных клеток человека. Установлена идентичность вируса, вызывающего опоясывающий герпес, и вируса ветряной оспы. В окружающей среде вирус неустойчив и быстро погибает, в капельках слизи, слюны вирус сохраняется не более 10–15 мин. Нагревание, солнечные лучи, УФ-излучение быстро инактивируют его.

Источник вируса — больной от последнего дня инкубационного периода до 5-го дня после появления последних высыпаний. Основной путь передачи — воздушно-капельный. Вирус способен распространяться на расстояния до 20 м (через коридоры в соседние комнаты квартиры и даже с одного этажа на другой). Возможен вертикальный механизм передачи вируса через плаценту.

Восприимчивость к ветряной оспе очень высокая (минимум 90%), за исключением детей первых 3 мес жизни, у которых сохраняется пассивный иммунитет.

Заболеваемость характеризуется выраженной сезонностью, достигая максимума в осенне-зимние месяцы. Болеют преимущественно дети. Постинфекционный иммунитет напряжённый, поддерживается персистенцией вируса в организме. При снижении его напряжённости возникает опоясывающий герпес.

Входные ворота вируса ветряной оспы — слизистые оболочки верхних дыхательных путей, где происходит репликация вируса, далее по лимфатическим путям возбудитель проникает в кровь. В конце инкубационного периода развивается виремия. Вирус фиксируется в клетках эктодермального происхождения, преимущественно в эпителиальных клетках кожи и слизистых оболочек дыхательных путей, ротоглотки. Возможно поражение межпозвоночных ганглиев, коры мозжечка и больших полушарий, подкорковых ганглиев. В редких случаях при генерализованной форме поражается печень, лёгкие, ЖКТ. В коже вирус вызывает формирование пузырьков, заполненных серозным содержимым, в котором вирус находится в высокой концентрации. При тяжёлых генерализованных формах болезни везикулы и поверхностные эрозии обнаруживают на слизистых оболочках ЖКТ, трахеи, мочевого пузыря и почечных лоханок, уретры, конъюнктивы глаз. В печени, почках, лёгких и ЦНС выявляют мелкие очаги некроза с кровоизлияниями по периферии.

В патогенезе значительную роль отводят клеточному иммунитету, в основном системе Т-лимфоцитов, при угнетении которой наблюдают более тяжёлое течение болезни. После стихания острых проявлений первичной инфекции вирус пожизненно персистирует в спинальных нервных ганглиях.

Инкубационный период ветряной оспы длится от 10 до 21 дня, при введении нормального иммуноглобулина человека может удлиняться до 28 дней.

Различают следующие клинические формы ветряной оспы.
• По течению:
— типичные;
— атипичные:
– рудиментарная;
– геморрагическая;
– гангренозная;
– генерализованная.
• По тяжести:
— лёгкие;
— среднетяжёлые;
— тяжёлые:
– с выраженной общей интоксикацией;
– с выраженными изменениями на коже.

Продромальные явления чаще отсутствуют, редко отмечают кратковременный субфебрилитет на фоне ухудшения общего самочувствия. Везикулы появляются обычно одновременно с повышением температуры или на несколько часов позднее. При обильной экзантеме температура может повышаться до 39 °С и выше.

Высыпания появляются волнами на протяжении 2–4 дней и сопровождаются подъёмом температуры. Сыпь локализована на лице, волосистой части головы, туловище и конечностях. На ладонях и подошвах она встречается только при обильных высыпаниях. Элементы сыпи вначале имеют вид мелких макуло-папул, которые в течение нескольких часов превращаются в везикулы круглой или овальной формы, и размер 2–5 мм. Они располагаются поверхностно и на неинфильтрированном основании, стенка их напряжена, блестяща, содержимое прозрачно, но в некоторых везикулах мутнеет. Большинство везикул окружено узкой каймой гиперемии. Везикулы подсыхают через 2–3 дня, на их месте образуются корочки, которые отпадают через 2–3 нед. После отпадения корочек рубцов, как правило, не остаётся. Высыпания наблюдаются и на конъюнктиве, слизистых оболочках ротоглотки, иногда гортани, половых органов. Пузырьки на слизистых быстро превращаются в эрозии с желтовато-серым дном, которые через несколько дней эпителизируются. Высыпания на слизистой оболочке гортани и трахеи, сопровождаемые отёком слизистой оболочки, могут вызывать грубый кашель, охриплость голоса, в редких случаях явления крупа. Высыпания на слизистой оболочке половых губ представляют угрозу развития вульвовагинита. Высыпания часто сопровождаются увеличением лимфатических узлов.

К концу первой недели болезни одновременно с подсыханием везикул нормализуется температура, улучшается самочувствие больного. В это время многих больных беспокоит кожный зуд.

В гемограмме в период высыпания наблюдают небольшую лейкопению и относительный лимфоцитоз, СОЭ обычно не увеличена.

Принято выделять типичную и атипичную ветряную оспу. К типичной относят случаи с характерной сыпью. Чаще всего типичная ветряная оспа протекает в лёгкой и среднетяжёлой форме. Тяжёлая форма болезни возникает редко, чаще у ослабленных детей и взрослых, для неё характерна длительная ремиттирующая лихорадка до 6–8 сут. Отмечают головную боль, возможна рвота, менингеальный синдром, нарушение сознания, артериальная гипотензия, судороги. Сыпь обильная, крупная, метаморфоз её замедлен, возможны элементы с пупковидным вдавлением в центре, напоминающие элементы сыпи при натуральной оспе.

К атипичным формам относят рудиментарную, буллёзную, геморрагическую, гангренозную и генерализованную ветряные оспы.

Рудиментарную форму чаще наблюдают у детей, получавших иммуноглобулины, плазму в период инкубации. Сыпь необильная, розеолёзно-папулёзная с единичными очень мелкими везикулами. Общее состояние не нарушается.

Геморрагическая форма ветряной оспы встречается очень редко у резко ослабленных больных, страдающих гемабластозом или геморрагическими диатезами, на фоне приёма глюкокортикоидов и цитостатиков. На 2–3-й день высыпания содержимое пузырьков приобретает геморрагический характер. Появляются кровоизлияния в кожу и слизистые оболочки, носовые кровотечения и другие проявления геморрагического синдрома. Возможен летальный исход.

Очень редко встречается гангренозная форма ветряной оспы. Она развивается у истощённых больных, при плохом уходе, создающем возможность возникновения вторичной инфекции. Вначале отдельные пузырьки принимают геморрагический характер, затем в окружении их возникает значительная воспалительная реакция.

В последующем образуется геморрагический струп, после отпадения которого обнажаются глубокие язвы с грязным дном и крутыми или подрытыми краями. Язвы, вследствие прогрессирующего гангренозного распада ткани, увеличиваются, сливаются, принимая значительные размеры. Нередко возникают осложнения гнойно-септического характера. Общее состояние больного тяжёлое, течение болезни длительное.

Генерализованная (висцеральная) форма. Встречается главным образом у новорождённых, иногда у взрослых с иммунодефицитом. Характерна гипертермия, интоксикация, поражение внутренних органов. Летальность высокая. На вскрытии обнаруживают мелкие очаги некроза в печени, лёгких, поджелудочной железе, надпочечниках, тимусе, селезёнке, костном мозге.

Ветряная оспа представляет опасность для плода и новорождённого. Если заболевание у женщины возникло в конце беременности, возможны преждевременные роды и мертворождения. При заболевании ветряной оспой в ранние сроки беременности может произойти внутриутробное заражение плода с развитием у него различных пороков развития. Вероятность заболевания новорождённых составляет 17%, их гибели — 30%. Врождённая ветряная оспа протекает тяжело, сопровождаясь тяжёлыми висцеральными поражениями.

Самое частое осложнение — бактериальная суперинфекция, вызванная Streptococcus pyogenes и Staphylococcus aureus. При этом содержимое везикул нагнаивается, формируя пустулы. Возможно развитие импетиго или буллёзной пиодермии. Описаны случаи «ветряночной» (вирусной) пневмонии, которая развивается в первые 3–4 дня болезни. Больные жалуются на одышку, боль в грудной клетке при дыхании, кашель с кровянистой мокротой, высокую температуру. Объективно отмечают цианоз кожного покрова, признаки бронхита, бронхиолита, а в некоторых случаях может развиться отёк лёгких. Патологическая картина в лёгких может напоминать милиарный туберкулёз (так как в лёгких выявляют множественные милиарные узелки). Из специфических осложнений наиболее серьёзными считают поражения нервной системы различной локализации — энцефалиты, менингоэнцефалиты, оптикомиелиты и миелиты, полирадикулоневриты, серозные менингиты. Наиболее характерен ветряночный энцефалит, на долю которого приходится около 90% неврологических осложнений.

Частота развития энцефалита не зависит от тяжести течения болезни. Чаще всего осложнения возникают на 5–8-й дни болезни. Описаны случаи развития энцефалита во время высыпания и даже до появления сыпи. Отмечено, что чем раньше начинается энцефалит, тем тяжелее он протекает. Энцефалит манифестирует остро с нарушения сознания, судорогами лишь у 15–20% больных. В остальных случаях доминирует очаговая симптоматика, которая нарастает в течение нескольких дней. Наиболее характерны мозжечковые и вестибулярные нарушения. Отмечают атаксию, тремор головы, нистагм, скандированную речь, интенционный тремор, дискоординацию. Возможны пирамидные знаки, гемипарезы, парезы черепных нервов. Редко наблюдают спинальную симптоматику, в частности, тазовые расстройства. Менингеальный синдром выражен слабо или отсутствует. У части больных в СМЖ обнаруживают лимфоцитарный плеоцитоз, увеличение количества белка и глюкозы. Течение болезни доброкачественное так как нейроциты страдают редко, лишь при развитии энцефалита в ранние сроки. Неблагоприятные отдалённые последствия редки.

Диагностика ветряной оспы в типичных случаях не представляет затруднений. Диагноз устанавливают, главным образом, на основании клинических данных, при этом учитывают эпидемиологический анамнез (рис. 18-1).

При необходимости и в диагностически неясных случаях используют вирусоскопический, вирусологический, серологический и молекулярно-биологический методы. Вирусоскопический метод заключается в окрашивании содержимого пузырька серебрением (по М.А. Морозову) для выявления вируса с помощью обычного светового микроскопа. Вирусологический метод практически не используют. Из серологических методов применяют РСК, РИМФ, ИФА. Основной метод лабораторной диагностики — молекулярно-биологический метод (ПЦР).

Дифференцировать ветряную оспу необходимо от герпетической сыпи при простом герпесе, опоясывающего герпеса, везикулёзного риккетсиоза, импетиго и натуральной оспы (табл. 18-26). Необходимо исключать герпетическую экзему Капоши, а также инфекции, вызванные вирусами Коксаки и ЕСНО.

Рис. 18-1. Алгоритм диагностики ветряной оспы.

Таблица 18-26. Дифференциальная диагностика ветряной оспы

При развитии осложнений, связанных с поражением нервной системы, показана консультация невролога (энцефалиты, менингоэнцефалиты, оптикомиелиты и миелиты, полирадикулоневриты, серозные менингиты). Консультация хирурга при глубоком поражении кожи и подкожной клетчатки.

В.02. Ветряная оспа средней тяжести, неосложнённая.

Госпитализируют больных при тяжёлом, осложнённом течении болезни и по эпидемиологическим показаниям.

У больных с нормальным иммунитетом ветряная оспа требует только профилактики осложнений. Тщательный уход за кожей помогает избежать бактериальной суперинфекции. В качестве этиотропной терапии подросткам и взрослым рекомендуют с первых суток заболевания назначать ацикловир (800 мг внутрь 5 раз в сутки в течение 5–7 дней). У детей младше 12 лет ацикловир (20 мг/кг внутрь 4 раза в сутки) тоже эффективен, если противовирусная терапия начата в первые 24 ч заболевания. Больным с ослабленным иммунитетом при ветряной оспе ацикловир вводят внутривенно в дозе 10–12,5 мг/кг каждые 8 ч в течение 7 дней.

При развитии ветряночной пневмонии показаны ингаляции интерферона лейкоцитарного человеческого (лейкинферон).

Местно используют 5–10% раствор калия перманганата или 1% спиртовой раствор бриллиантового зелёного с целью предотвращения присоединения вторичной инфекции и более быстрого подсыхания пузырьков. Для уменьшения зуда кожу смазывают глицеролом или обтирают водой с уксусом или спиртом. Назначают антигистаминные препараты (клемастин, дифенгидрамин, цетиризин, акривастин). При геморрагических формах показаны викасол, рутин, кальция хлорид.

Из физиотерапевтических процедур используют УФ-облучение в течение 2–3 дней для ускорения отпадения корочек.

Диспансерное наблюдение в течение месяца.

Следует ограничивать физическую нагрузку, избегать переохлаждений, питаться сбалансированно.

Больных изолируют дома до 5-го дня со времени появления последнего свежего элемента сыпи, обычно не госпитализируют. Дети до 3 лет, ранее не болевшие, подлежат разобщению и наблюдению с 11 до 21-го дня с момента контакта.

Контактным детям с отягощённым фоном рекомендовано введение иммуноглобулина. Вирус нестойкий, поэтому дезинфекцию не проводят. Изоляции подлежат больные опоясывающим герпесом. Описаны попытки применения активной иммунизации. Разработаны живые аттенуированные вакцины, которые, по наблюдениям их авторов, обеспечивают хороший эффект. Однако большинство специалистов считает проведение массовой вакцинации нецелесообразным.

источник

Основной задачей клинико-диагностических микробиоло­гических исследований является установление этиологического агента инфекционного заболевания — микроорганизма-возбу­дителя. Для решения этой задачи используют различные диа­гностические методы, которые можно подразделить на две группы в зависимости от подхода к определению возбудителя. Первая группа включает методы, направленные на обнаруже­ние присутствия в материале от больного самого возбудителя, а также его антигенов, нуклеиновых кислот (НК), характерных продуктов его жизнедеятельности или органических соедине­ний, входящих в его состав.

Для обнаружения возбудителя применяют традиционные методы: микроскопические, микробиологические и биологи­ческие. Для выявления микробных антигенов используют им-мунохимические методы. Обнаружение НК и других биомоле­кул возбудителя осуществляют с помощью биохимических и молекулярно-биологических методов. Иммунологические, био­химические и молекулярно-биологические методы относятся к числу экспресс-методов диагностики инфекционных заболева­ний, поскольку позволяют получить результат в течение не­скольких часов.

Вторая группа диагностических методов основана на выяв­лении специфической иммунной реакции на данного возбуди­теля со стороны макроорганизма: гуморальной — антител про­тив возбудителя (серодиагностика) или клеточной — ГЗТ (ал-лергодиагностика).

Существующие методы диагностики отличаются друг от Друга трудоемкостью, сроками проведения исследований, чув­ствительностью и специфичностью, а также информативнос­тью полученных данных. Выбор методов исследования зависит от предварительного клинического диагноза заболевания, его сроков и определяется биологическими свойствами микроор-

ганизма-возбудителя и особенностями его взаимодействия с макроорганизмом в ходе инфекционного процесса.

Тема 11.1. МЕТОДЫ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОЦЕНКА ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Выбор, взятие и транспортировка исследуемого мате­риала.

2. Оформление документации.

3. Анализ результатов лабораторных исследований.

1. Образцы исследуемого материала (гной, экссудат, кровь, спинномозговая жидкость, моча и др.).

1. Заполнить типовые бланки для направления материа­ла в лабораторию.

2. Изучить схемы и методы микробиологической диа­гностики основных групп микроорганизмов. При оценке результатов лабораторных исследований опре­делить патогенные и условно-патогенные микроорга­низмы.

■ ОСНОВНЫЕ ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ И НАПРАВЛЕНИЯ МАТЕ­РИАЛА В КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКУЮ МИКРОБИО­ЛОГИЧЕСКУЮ ЛАБОРАТОРИЮ

Результаты микробиологических исследований во многом зависят от правильного выбора материала для исследования, соблюдения всех правил его получения и направления в лабо­раторию. Выбор материала определяется клинической карти­ной заболевания, предполагаемой локализацией возбудителя в организме на данном этапе инфекционного процесса и путями его выделения в окружающую среду.

1. Материал берут в ранние сроки заболевания, до начала антимикробной терапии. Это повышает вероятность выделения возбудителя. Следует исключить попадание в образец антибио­тиков, антисептиков, дезинфектантов, а также частиц ваты, содержащей свободные жирные кислоты. Важным условием является достаточное количество материала для исследования (например, не менее 5—10 мл крови, 3—5 мл мочи и т.д.).

2. Любой клинический материал для микробиологических исследований рассматривается как потенциально опасный для человека. Поэтому при получении, хранении и транспортиров-

ке материала в лабораторию строго соблюдают правила техни­ки бактериологической безопасности.

3. Материал собирают, соблюдая правила асептики, для предупреждения его возможной контаминации нормальной микрофлорой организма больного и микроорганизмами окру­жающей среды. Используют стерильные инструменты и сте­рильную посуду, закрывающуюся пробками. После взятия ма­териала его в максимально короткие сроки доставляют в лабо­раторию. При отсутствии такой возможности материал со­храняют непродолжительное время, соблюдая определенные правила.

Способ сохранения материала определяется свойствами предполагаемого возбудителя и самого материала. В большин­стве случаев возможно непродолжительное хранение в холо­дильнике при температуре 4 °С. Низкая температура препятст­вует размножению микробов нормальной микрофлоры, при­сутствующих в нестерильном материале (раневое отделяемое, мазки и смывы со слизистых оболочек, мокрота, моча, испраж­нения), а также способствует снижению активности микроби-цидных факторов организма (лизоцима, дефенсинов, компле­мента, клеток иммунной системы). При необходимости дли­тельного хранения материал можно подвергнуть глубокому за­мораживанию при температуре —20 °С и ниже.

Если предполагаемый микроб-возбудитель чувствителен к действию низких температур, материал необходимо сохранять в термостате при 37 «С. Для подавления размножения сопутст­вующей микрофлоры можно использовать антимикробные препараты.

Для предохранения микробов от высыхания материал реко­мендуется помещать в специальные транспортные среды, не содержащие питательных веществ, но обеспечивающие опти­мальные условия влажности, рН, осмолярности, ионной силы и т.д., необходимые для сохранения жизнеспособности возбу­дителя.

При подозрении на анаэробную инфекцию необходимо со­здать бескислородные условия: поместить материал в электив­ные транспортные среды для анаэробов или в емкость, запол­ненную газовой смесью, не содержащей 0₂.

4. Материал транспортируют в специальных биксах, пеналах или металлических контейнерах, которые после использования подвергают дезинфекции.

5. Для серологического исследования у больного натощак берут кровь в количестве 5—6 мл из локтевой вены при соблю­дении правил асептики. Кровь ставят в термостат на 30—60 мин; образовавшийся кровяной сгусток отделяют от стенки стериль­ной стеклянной палочкой и оставляют материал в холодиль­нике на 18—20 ч. Отстоявшуюся сыворотку осторожно сливают в стерильную пробирку; в случае примеси эритроцитов ее

центрифугируют. Сыворотка может храниться в стерильных условиях в холодильнике до 1 мес. Для более длительного хранения ее замораживают при температуре от —20 до -70 «С.

6. В микробиологической лаборатории все остатки патоло­гического материала подлежат уничтожению (путем автоклави-рования).

7. Все материалы, направленные в лабораторию, должны иметь сопроводительный документ — направление на специ­альном бланке, где указаны фамилия, имя, отчество больного, возраст, вид материала, дата взятия, предполагаемый клини­ческий диагноз и другие сведения.

МЕТОДЫ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИО­ЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

• Методы обнаружения возбудителя в материале от больного

Для обнаружения возбудителя в материале от больного с диагностической целью применяют:

1) микроскопические (бактериоскопические, микоскопичес-кие, вирусоскопические) методы;

2) микробиологические (бактериологические, микологичес­кие, вирусологические) методы;

3) биологические методы, или биопробы.

1. Микроскопические методы.Микроскопические методы применяют для обнаружения возбудителей (бактерий, грибов, простейших, вирусов) непосредственно в исследуемом мате­риале.

Для выявления бактерий (бактериоскопические ис­следования), а также грибов и простейших применяют све­товые методы микроскопии окрашенных или нативных пре­паратов, приготовленных из материала, полученного от боль­ного (см. тему 1.1 иглаву 2).

Преимущество микроскопических исследований состоит в быстроте (осуществление требует не более 30—60 мин), про­стоте и дешевизне. Основным недостатком метода является низкая специфичность — невозможность видовой идентифика­ции обнаруженных микроорганизмов, а в ряде случаев — их дифференциации между собой (например, эшерихий, сальмо­нелл и шигелл). Чувствительность также невысока: микроско­пический метод позволяет обнаружить возбудителя при его концентрации не менее 10 б микробных клеток в 1 мл или 1 г исследуемого материала.

В большинстве случаев микроскопический метод имеет ори­ентировочное значение и позволяет получить предварительные данные о микробах, присутствующих в материале, и наметить пути дальнейших исследований. Вместе с тем при некоторых бактериальных инфекциях, а также при микозах и протозой-

ных инфекциях диагностическая ценность микроскопического исследования весьма велика и является основанием для поста­новки окончательного диагноза заболевания, например воз­вратного тифа, гонореи, дерматомикозов и др.

Необходимо помнить, что некоторые бактерии (хламидии, микоплазмы) имеют малые размеры, лежащие за пределами разрешающей способности световой микроскопии, и не могут быть выявлены с помощью этих методов.

Вирусоскопические исследования осуществляют с использованием электронной микроскопии (по причине малых размеров вирусов, см. тему 5.1). В сочетании с компьютерными системами анализа изображений эти методы позволяют осу­ществлять предварительную идентификацию вирусов по мор­фологии. К числу достоинств метода относится также возмож­ность обнаружения ранее неизвестных вирусов. Чувствитель­ность метода аналогична бактериоскопическому.

Для диагностики инфекций, вызванных облигатными внут­риклеточными паразитами, применяют также цитологичес­кие методы, направленные на выявление характерного ЦПД в зараженных клетках, например внутриклеточных включе­ний — телец Бабеша—Негри при бешенстве, телец Пашена и Гварниери при оспе или цитомегалических клеток при заболе­ваниях, вызванных цитомегаловирусом (см. тему 5.2).

2. Микробиологические методы.Основаны на выделении чистой культуры возбудителя из материала, полученного от больного, и ее последующей идентификации (см. главу 3). Микробиологические методы отличаются высокой чувстви­тельностью и специфичностью. Располагая чистой культурой возбудителя, можно определить его родовую ивидовую при­надлежность иосуществить внутривидовое типирование, обна­ружить факторы вирулентности, а также определить чувстви­тельность к антибиотикам, что необходимо для рационального выбора этиотропной терапии.

Для эпидемиологического анализа вспышек инфекционных заболеваний проводят типирование культур возбудителей, вы­деленных от разных больных и из внешних объектов — веро­ятных источников заражения (вода, пищевые продукты ит.д.), т.е. определение их биовара: серовара (серотипирование, см. тему 10.1), фаговара (фаготипирование, см. тему 5.3) ит.д. Кроме того, микробиологические исследования проводят для выявления носительства патогенных микробов среди детей и взрослых, а также среди работников медицинских учреждений, предприятий пищевой промышленности и общественного пи­тания.

Бактериологическое исследование является ведущим в диагностике большинства бактериальных инфекций. Труд­ности метода могут быть связаны с низкой скоростью размно­жения бактерий-возбудителей, сложными ростовыми потреб-

ностями и требовательностью к условиям культивирования (га­зовому составу атмосферы и т.д.)- Однако только выделение чистой культуры возбудителя из материала от больного при исключении контаминации имеет абсолютное диагностическое

Микологические исследования осуществляют реже, чем бактериологические, поскольку микроскопическая диа­гностика микозов достаточно надежна. Микологические иссле­дования являются обязательными при диагностике кандидозов, а также глубоких микозов.

Вирусологический метод является наиболее достовер­ным для диагностики вирусных инфекций. Однако его приме­нение ограничивается трудоемкостью, что связано с особен­ностями хранения, транспортировки и обработки исследуемого материала, использованием культур клеток, сложностью и дли­тельностью культивирования многих вирусов, а также со срав­нительно частым получением отрицательных результатов. Идентификацию чистой культуры выделенного вируса осу­ществляют иммунологическими методами на основании его антигенной структуры, а также в ряде случаев спомощью биохимических и молекулярно-биологических методов (гибри­дизация НК, рестрикционный анализ и др., см. тему 3.2). Особое значение вирусологический метод приобретает в случае необходимости оценки чувствительности возбудителя к проти­вовирусным препаратам. В ряде случаев вирусологический ме­тод используют для ретроспективной диагностики вирусных

Все микробиологические методы имеют определяющее зна­чение в лабораторной диагностике инфекционных заболева­ний, являются наиболее информативными и достоверными. К числу недостатков можно отнести длительность (см. главу 3) и отсутствие методов культивирования некоторых микробов (например, возбудителей сифилиса и лепры).

3. Биологические методы (биопробы).Биопробу осуществля­ют путем заражения лабораторных животных материалом, по­лученным от больного. Этот метод применяют для выделения чистой культуры возбудителя в тех случаях, когда микроорга­низмы не растут или плохо культивируются, когда микробио­логические методы не дают однозначно положительного ре­зультата, а также для дифференциации патогенных микроор­ганизмов и определения их вирулентности. Дифференциация возбудителей основана на неодинаковой чувствительности раз­ных лабораторных животных к определенным микроорганиз­мам. В настоящее время биопробы применяют только в случае крайней необходимости, что определяется в первую очередь гуманным отношением к животным, а также связано с повы­шенным риском заражения персонала диагностической лабо­ратории.

• Иммунохимические методы диагностики: (методы обнару­жения антигенов возбудителя в материале от больного)

1. Метод иммунофлюоресценции (ИФ).Дает возможность
обнаружить в материале от больного антигены микроба с по­
мощью специфических антител, меченных флюорохромами
(см. тему 10.1). Этот метод позволяет выявлять и идентифици­
ровать по антигенной структуре возбудителей в материале,
содержащем разнообразную микрофлору (например, в испраж­
нениях), а также обнаруживать вирусные антигены в заражен­
ных клетках. В настоящее время иммунофлюоресцентный ме­
тод широко применяют для обнаружения разнообразных мик­
роорганизмов в патологическом материале.

2. Иммуноэлектронная микроскопия (ИЭМ).Позволяет зна­чительно повысить чувствительность и специфичность вирусо-скопического метода. Исследуемый материал, содержащий свободные вирусные частицы, обрабатывают специфическими антителами. Образовавшиеся иммунные комплексы осаждают высокоскоростным центрифугированием и агрегаты вирусных частиц выявляют с помощью электронной микроскопии. Су­ществуют также твердофазные методы ИЭМ: специфические антитела фиксируют на специальных сетках для ЭМ, которые затем обрабатывают исследуемым материалом. Вирусные час­тицы специфически связываются сантителами, после чего их выявляют с помощью электронной микроскопии. В ряде слу­чаев применяют антитела, меченные частицами золота (см. тему 10.1).

3. Другие серологические реакции.Растворимые антигены различных возбудителей (компоненты микробных клеток, ви-рионов, неструктурные вирусные белки, секретируемые зара­женными клетками, бактериальные экзотоксины и ферменты и т.д.) могут быть обнаружены в различных биологических жидкостях больного с помощью серологических реакций. Наи­более часто применяют иммуноферментный (ИФА) и радио­иммунный (РИА) анализ в связи с их высокой чувствительнос­тью, реже используют методы преципитации в геле и непрямой агглютинации (см. тему 10.1).

• Биохимические и молекулярно-биологические методы диа­гностики

1. Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ).Позволяет разделять сложные смеси органических соединений. Метод используют для обнаружения продуктов жизнедеятельности микроорганизмов в исследуемом материале (летучих жирных кислот, спиртов, нелетучих органических кислот ит.д.). Прин­цип метода основан на различной скорости движения соеди­нений, растворенных в инертном газе (подвижной фазе), через разогретую колонку, заполненную жидкими смолами (непо-

движная фаза). На выходе колонки имеется детектор, регистри­рующий присутствие соединения. Идентификацию веществ производят путем сравнения со стандартами.

2. Методы обнаружения нуклеиновых кислот возбудителя.Ну­клеиновые кислоты (НК) возбудителя можно обнаружить в исследуемом материале от больного с помощью методов гиб­ридизации НК (ДНК-зондов) и полимеразной цепной реак­ции — ПЦР (см. тему 3.2). Эти методы применяют преимуще­ственно для обнаружения плохо- или некультивируемых воз­будителей, присутствующих в материале в малых количествах (ВИЧ, вирус гепатита В, М.tuberculosis и др.) в связи с их высокой чувствительностью: метод нуклеиновых «зондов» позволяет обнаруживать НК возбудителя в концентрации Ю -10 г/мл; ПЦР теоретически позволяет обнаружить единич­ные копии НК. Метод «зондов» является высокоспецифич­ным. При использовании ПЦРсуществует высокая вероят­ность получения ложноположительной реакции, что требует квалифицированной интерпретации полученных результатов. Не­обходимо также помнить о возможности контаминации материа­ла посторонними НК. ПЦР рационально использовать в качестве экспресс-метода для постановки предварительного диагноза, нуждающегося в обязательном подтверждении с помощью других более достоверных диагностических исследований.

• Серодиагностика и аллергодиагностика

1. Серодиагностика.Метод основан на обнаружении антител в сыворотке крови больного и определении динамики их на­растания в ходе заболевания. Для серодиагностики применяют различные иммунологические реакции (агглютинации, связы­вания комплемента, непрямой гемагглютинации и др., см. тему 10.2). В качестве стандартных антигенов используют живые культуры микроорганизмов (бактерий, вирусов, грибов) или диагностикумы — убитые взвеси микроорганизмов или экстра­кты из них, полученные химическим путем.

Серодиагностические исследования часто проводят и для эпидемиологического анализа инфекционной заболеваемости. С этой целью определяют наличие специфических антител у здоровых лиц, что свидетельствует о перенесении ими инфек­ции или о контакте с соответствующим возбудителем. Кроме того, серологические реакции используют наряду с другими иммунологическими показателями для оценки эффективности вакцинопрофилактики.

При серодиагностических исследованиях необходимо учи­тывать диагностический титр обнаруженных антител, т.е. такое разведение исследуемой сыворотки, начиная с которого поло­жительная реакция имеет диагностическое значение. Более вы­сокую информативность дают серологические исследования парных сывороток крови больного, взятых в начале болезни и

через разные промежутки времени в ходе ее развития. Диагнос­тическое значение имеет нарастание титра в 4 раза и более в динамике заболевания.

2. Аллергодиагностика.Кожно-аллергические пробы приме­няют для выявления гиперчувствительности к различного рода антигенам (аллергенам) при диагностике ряда инфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез, туляремия и др.), а также различных неинфекционных аллергических состояний (атопии и др.).

Кроме того, используют методы аллергодиагностики in vitro, позволяющие оценить состояние специфической сенсибилиза­ции лейкоцитов крови в отношении определенного антигена, например реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в присутствии специфического антигена (см. тему 10.4).

■ ПРАВИЛА БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РА­БОТЕ С ПАТОГЕННЫМИ МИКРОБАМИ

При работе с патологическим материалом, содержащим микробы, и особенно при культивировании патогенных мик­робов во избежание заражения персонала лаборатории необхо­димо соблюдать правила техники биологической безопасности. В зависимости от степени патогенности и контагиозности воз­будителей принято выделять четыре уровня биологической опасности и соответствующих мероприятий, необходимых для предупреждения заражения в лаборатории.

Первый уровень(работа с непатогенными микроорганиз­мами). Необходимо соблюдение стандартных правил (см. тему 1.1).

Второй уровень(работа с низковирулентными микроорга­низмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование лабораторной одежды и защитных перчаток; обязательное обеззараживание всех загрязненных от­ходов; ограничение доступа в лабораторию. Для предотвраще­ния попадания микробов в воздух рабочего помещения выпол­нение механических манипуляций, сопряженных с высокой вероятностью распыления микроорганизмов, необходимо осу­ществлять вспециализированных закрытых легкодезинфици-руемых настольных боксах.

Третий уровень(работа с высоковирулентными микроорга­низмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование специальной защитной лабораторной одежды; контроль доступа в лабораторию. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в спе­циализированных боксах.

Четвертый уровень(работа с возбудителями ООИ). Работа с возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) разрешена ис­ключительно в специализированных режимных лабораториях,

имеющих оборудование, необходимое для эффективной защи­ты от патогенных микробов, их контроля и уничтожения. К числу дополнительных правил и мероприятий относятся наличие отдельных помещений для смены лабораторной одеж­ды и душевых, обязательное обеззараживание всех отходов лаборатории. Все манипуляции с патологическим материа­лом необходимо осуществлять в специализированных на­стольных боксах, снабженных системами стерилизации возду­ха (см. тему 7.1).

■ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Обнаружение патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями заболеваний (например, микобактерии туберку­леза, гонококки и др.), имеет решающее значение для поста­новки диагноза.

Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний должно быть основано на строгой аргументации. Обязательным условием является кли­ническое, эпидемиологическое, микробиологическое и сероло­гическое исключение возбудителей инфекционных болезней (например, возбудителей кишечных инфекций, венерических болезней и др.). Для оценки роли условно-патогенных микро­организмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.

1. Выделение микроорганизмов из крови, спинномозговой жидкости или других жидкостей организма, которые в норме у здоровых людей являются стерильными.

2. Обнаружение в исследуемом материале, особенно при дисбактериозах, условно-патогенных микроорганизмов в до­статочно больших количествах (например, 10 5 —10 7 микробных клеток в 1 мл). Для этого проводят количественное определе­ние микроорганизмов по числу КОЕ в 1 г или 1 мл испытуе­мого образца. Эти количественные показатели могут варьиро­вать в зависимости от вида микроорганизмов, типа исследуе­мого материала, характера и стадии заболевания.

3. Повторное, многократное (в течение суток или через сутки) выделение одного и того же микроорганизма из одного и того же материала от больного (например, из крови при сепсисе и т.д.).

4. Обнаружение идентичных условно-патогенных микроор­ганизмов в разных образцах материала (например, при пище­вых токсикоинфекциях — в промывных водах желудка, рвот­ных массах, испражнениях, пищевых продуктах).

5. Нарастание титра антител в 4 раза и более в парных сыворотках крови больного в отношении условно-патогенного микроорганизма, который предполагается как возбудитель дан-

ного патологического процесса. В ряде случаев рекомендуется использовать в качестве антигенов аутоштаммы микроорганиз­мов, выделенные от больных.

6. Положительные кожно-аллергические реакции у больных с аллергенами, приготовленными из условно-патогенных мик­роорганизмов.

7. В случае внутрибольничных (нозокомиальных) инфек­ций — выделение идентичных культур микроорганизмов от группы больных.

8. Совпадение данных лабораторного определения чувстви­тельности микроорганизмов к антибиотикам с эффективнос­тью антимикробной терапии в клинических условиях, под­тверждаемое улучшением состояния больного и уменьшением количества или элиминацией соответствующих микроорганиз­мов.

9. Условно-патогенные микроорганизмы (синоним: оппор­тунистические) представляют собой большую группу микроор­ганизмов, занимающих различное систематическое положение. Они встречаются среди аэробных и анаэробных бактерий, гри­бов, простейших. В клинической микробиологии наиболее час­то встречаются условно-патогенные микроорганизмы, относя­щиеся к родам Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Klebsiel­la, Proteus, Entewbacter, Citrobacter, Serratia, Pseudomonas, Haemo­philus, Bacteroides, Veillonella, Vibrio, Peptococcus, Peptostreptococ-cus, Mycobacterium, Mycoplasma, Candida и др.

■ ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛАБОРАТОРНЫХ МИКРО­БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты лабораторных исследований оформляют на спе­циальных бланках, которые передают лечащему врачу.

1. В ответе прежде всего указывают наличие патогенных, а также условно-патогенных микроорганизмов, обнаруженных при микробиологическом исследовании. Сообщают также дан­ные лабораторного определения чувствительности микроорга­низмов к антибиотикам.

2. При обнаружении микробных ассоциаций перечисляют все микроорганизмы, указывают доминирующие виды и коли­чественные микробиологические показатели.

3. В соответствии с правилами международной номенкла­туры в ответах приводят видовые названия микроорганиз­мов, например: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и т.д.

4. С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, на­пример Proteus sp., Candida sp. и т.д.

Аэробные бактерииГрамположительные бактерии

Chryseobacterium indologenes Chryseobacterium meningosepticum Enterococcus faecalis и другие виды Enterococcus Erysipelothrix rhusiopathiae Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophiticus и другие виды Staphylococcus Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae

Burkholderia cepacia Citrobacter koseri Edwardsiella tarda Eikenella corrodens Enterobacter spp. Escherichia coli Haemophilus influenzae Klebsiella spp. Listeria monocytogenes Moraxella catarrhalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Pseudomonas fluorescens Salmonella enterica

подвид enterica биовар typhimurium Serratia spp. Spirillum minus Streptobacillus moniliformis Vibrio vulnificus

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Как то на паре, один преподаватель сказал, когда лекция заканчивалась — это был конец пары: «Что-то тут концом пахнет». 8181 — | 7873 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из вы­сыпных элементов (везикул, пустул), мазки, соскобы, биоптаты из пораженных участков кожи и слизистых оболочек полости рта, кровь.

Цитологическое исследование. Впрепаратах из исследуемого материала (мазки, соскобы, биоптаты) в положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД вируса: наличие базофиль-ных включений (телец Гварниери), имеющих округлую или серповидную форму и располагающихся в околоядерной зоне цитоплазмы.

Вирусоскопическое исследование.Вирусы в исследуемом ма­териале (отделяемом высыпных элементов, мазках, соскобах, биоптатах) могут быть обнаружены методом электронной мик­роскопии. Методом негативного контрастирования в препаратах выявляют крупные (до 300 нм) вирионы овальной или прямо­угольной формы, покрытые внешней оболочкой. На поверхности вирусной частицы отчетливо видны непараллельно расположен­ные микротубулы. Необходимо помнить, что метод не позволяет дифференцировать вирус натуральной оспы от других предста­вителей рода (вирус коровьей оспы, оспы обезьян и др.).

Вирусологическое исследование.Для выделения чистой куль­туры вируса натуральной оспы из исследуемого материала при-

меняют различные типы однослойных клеточных культур при­матов (Vero, эмбриональные диплоидные клетки человека, пер­вичные культуры клеток почки обезьян и др.), а также куриные эмбрионы. Индикацию вируса производят по ЦПД, которое обычно развивается на 2—3-й день. Характерно появление очагов избыточного роста клеток, приводящего к образованию бляшек диаметром 1—3 мм, изменение формы (округление) клеток с последующей дегенерацией и слущиванием монослоя. В зараженных клетках выявляются характерные включения (см. выше). Для индикации применяют также реакцию гемад-сорбции. При заражении куриных эмбрионов материал нано­сят на поверхность хорион-аллантоисной оболочки. В положи­тельном случае через 72 ч наблюдается появление характерных беловатых непрозрачных выпуклых бляшек (оспин), имеющих диаметр 1 мм, правильную округлую форму, ровные края и гладкую поверхность, без кровоизлияний. Для идентификации используют методы ИФ, РТГА, ИФА, РИА, РН и др., позво­ляющие обнаружить вирусные антигены в зараженной куль­туре.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические имолеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках маз­ков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом ма­териале может быть выявлено с помощью чувствительных се­рологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные НК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика.Обнаружение специфических противови­русных антител в крови используется для подтверждения диа­гноза натуральной оспы. Наличие антител в крови определяют с помощью различных серологических реакций, включая РТГА, РН, ИФА, РИА и др. Необходимо иметь в виду, что методы серодиагностики не позволяют дифференцировать вирус нату­ральной оспы от других представителей рода (вирус коровьей оспы, оспы обезьян и др.) по причине их антигенного сходства.

• Микробиологическая диагностика оспы обезьян МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из вы­сыпных элементов (везикул, пустул), мазки, соскобы, биоптаты из пораженных участков кожи и слизистых оболочек полости рта, кровь.

Лабораторная диагностика оспы обезьян проводится анало­гично диагностике натуральной оспы (см. выше). Главным методом, позволяющим дифференцировать возбудителей, яв-

ляется вирусологическое исследование. Основой является ха­рактер ЦПД: типично образование бляшек более крупных раз­меров (2—6 мм), наличие цитоплазматических мостиков между зараженными клетками, присутствие особых эозинофильных включений в цитоплазме, представляющих собой скопления вирусных белков, быстрая дегенерация клеточного пласта. • Микробиологическая диагностика контагиозногомоллюска

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты из пора­женных участков кожи.

Гистологическое исследование. Вгистологических препара­тах из исследуемого материала в положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД вируса: наличие характерных эо­зинофильных включений (телец моллюска) в цитоплазме эпи­телиальных клеток.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Вирусные НК в исследуе­мом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных ви­русами простого герпеса 1-го и 2-го типов(HSV-\, HSV-2)

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: материал из высып­ных элементов (соскоб со дна везикулы или язвы, отделяемое), мазки, смывы, отделяемое с пораженных слизистых оболочек, конъюнктивы; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС); кровь, моча (при висцеральной игенерализованной формах).

Цитологическое исследование.Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В поло­жительном случае удается обнаружить признаки ЦПД в эпи­телиальных клетках — наличие гигантских многоядерных кле­ток, вакуолизация цитоплазмы, изменения ядра — увеличение и слияние ядер между собой, фрагментация и агрегация хро­матина, уплотнение кариолеммы, часто присутствуют внутри­ядерные включения (тельца Каудри). Метод обладает сравни­тельно низкой специфичностью и используется как ориенти­ровочный.

Вирусологическое исследование.Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики герпетической инфекции. Вирусы простого гер­песа легко удается культивировать в клеточных культурах при­матов эмбриональные фибробласты человека, клетки почек кролика и др.), а также в куриных эмбрионах. Индика-

цию вируса производят по характерному ЦПД (см. выше), которое обычно развивается на 1—3-й день и впоследствии приводит к дегенерации и слущиванию монослоя. Для иден­тификации используют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в клетках зараженной культу­ры. Основным методом, дающим возможность дифференциро­вать вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типа между собой, является рестрикционный анализ ДНК-фрагментов генома, а также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические и биохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (анти­генов) в исследуемом материале может быть выявлено с помо­щью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др. Присутствие вирусспецифических ферментов (тимидин-кина-зы и др.) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью соответствующих биохимических реакций.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика.Является информативной только при первичной герпетической инфекции, поскольку даже суще­ственное нарастание титра антител в крови не всегда сопро­вождается развитием рецидива заболевания. Метод применя­ют преимущественно для эпидемиологического анализа. Ис­ключение составляют случаи герпетического энцефалита, когда высокие титры противовирусных антител в спинномозговой жидкости являются косвенным признаком инфекции ЦНС. Наличие антител в крови испинномозговой жидкости (при поражениях ЦНС) определяют с помощью различных сероло­гических реакций, включая РСК, РН, ИФА, РИА, непрямой ИФ идр.

• Микробиологическая диагностика ветряной оспы и опоясы­вающего лишая

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: материал из высып­ных элементов (соскоб со дна везикулы или язвы, отделяемое), мазки, смывы из носоглотки; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС).

Цитологическое исследование.Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В поло­жительном случае удается обнаружить признаки ЦПД в эпи­телиальных клетках, аналогичные ЦПД вирусов простого гер-

песа (см. выше). Метод обладает сравнительно низкой специ­фичностью и используется как ориентировочный.

Вирусологическое исследование.Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала применяется редко, что оп­ределяется его нестабильностью (легко инактивируется при транспортировке) и низкой скоростью репродукции in vitro. Вирус удается культивировать в культурах эмбриональных фиб-робластов человека. Признаки ЦПД появляются не ранее чем через 10 дней и сходны с ЦПД вирусов простого герпеса (см. выше). Для идентификации используют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в заражен­ной культуре, а также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические ис­следования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. При­сутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материа­ле может быть выявлено с помощью чувствительных сероло­гических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнару­живают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика.Антитела в крови обычно присутствуют в низком титре. Для их выявления применяют чувствительные серологические реакции, в первую очередь ИФА. Диагноз ста­вят на основании выявления специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об ак­тивной инфекции. Присутствие последних в крови новорож­денных является показателем внутриутробного заражения. Че­тырехкратное нарастание титра специфических антител, выяв­ляемое методом парных сывороток, свидетельствует о рецидиве (опоясывающем лишае).

• Микробиологическая диагностика цитомегаловирусной ин­фекции

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, моча, слюна и другие секреты, испражнения, мокрота, биоптат пораженного органа; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС).

Цитологическое исследование.Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы, Папани-колау или гематоксилин-эозином. В положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД — присутствие увеличен­ных «цитомегалических клеток», имеющих гигантские размеры (до 30 мм), содержащих плотное базофильное внутриядерное включение («совиный глаз»).

Вирусологическое исследование.Выделение чистой культуры

вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики цитомегаловирусной инфекции. Вирус удается культивировать в культурах диплоидных эмбриональных фиб-робластов человека. При низком содержании возбудителя в материале признаки ЦПД (см. выше) могут появляться только через 4—6 нед. Поэтому для заражения обычно применяют метод «амплификации в культуре»: исследуемый материал центрифугируют совместно с клетками культуры. При этом вирусные частицы оседают на поверхность клеточных мем­бран, и заражение происходит более эффективно. На 3-й день после заражения в клетках культуры определяют присутствие сверхранних и ранних вирусных антигенов методом ИФ. Для идентификации используют также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку­лярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках ис­следуемого материала может быть выявлено методом ИФ. При­сутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материа­ле может быть выявлено с помощью чувствительных сероло­гических реакций: ИФА, РИА идр.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика.Является информативной только при пер­вичной цитомегаловирусной инфекции, поскольку даже суще­ственное нарастание титра антител в крови не всегда сопро­вождается развитием рецидива заболевания.

• Микробиологическая диагностика внезапной экзантемы

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, слюна.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку­лярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Присутствие белков (антигенов) вирусов-возбудителей (HHV-6, HHV-1) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических ре­акций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика.Наличие специфических противовирусных IgM, выявляемых методом ИФА, свидетельствует об активной инфекции.

• Микробиологическая диагностика инфекционного мононук-
леоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, слюна.

МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Вмазках крови при инфекци­онном мононуклеозе обнаруживают атипичные лимфоциты (не менее 10 %), которые являются наиболее ранними маркерами этой инфекции. Атипичные лимфоциты могут присутствовать в крови ипри других заболеваниях, но в значительно меньшем количестве.

Вирусологическое исследование.Применяют редко в связи со сложностью культивирования. Чистую культуру вируса Эпш-тейна—Барр выделяют из исследуемого материала путем зара­жения первичных культур В-лимфоцитов, полученных из пу­почного канатика. С целью идентификации в клетках культуры определяют присутствие вирусспецифических антигенов мето­дом ИФ. Для идентификации используют также рестрикцион-ный анализ, ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса Эпштейна— Барр в клетках крови может быть выявлено методом ИФ.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика.Для инфекционного мононуклеоза харак­терно появление «гетерофильных» антител. Наиболее часто с диагностической целью определяют наличие антител к антиге­нам бычьих и бараньих эритроцитов (диагностический титр в РА 1:64). Для выявления противовирусных антител к антигенам капсида (УСА) и неструктурным раннему (ЕА) иядерному (EBNA) антигенам применяют чувствительные серологические реакции, в первую очередь ИФА. Для острой инфекции харак­терно наличие антител к УСА (IgM). Антитела к EBNA свиде­тельствуют о перенесенной и хронической латентной инфек­ции. В период реактивации вируса в крови присутствуют анти­тела всех трех типов.

Дата добавления: 2016-03-27 ; просмотров: 683 | Нарушение авторских прав

источник