Катаральная лихорадка овец (febris catarrhalis ovium) («Синий язык», блутанг) — инфекционная болезнь, проявляющаяся лихорадочным состоянием, воспалительно-некротическими поражениями пищеварительного тракта, языка и дегенеративными изменениями скелетных мышц.
Этиология. Возбудитель — РНК-геномный вирус — относится к семейству Reoviridae, роду Orbivirus.
Диаметр частиц очищенного культурального вируса составляет 50-65 нм. Вирион имеет однослойный капсид, состоящий из 32 капсомеров. Вирусные частицы содержат 80 % белка и 20 % рибонуклеиновой кислоты. Последняя двухспиральная, фрагментированная (состоит из 10 фрагментов), не обладает инфекционностью и не чувствительна к РНК-азе.
Эпизоотологические данные. К катаральной лихорадке наиболее восприимчивы овцы, особенно молодые. Чувствительность их к вирусу зависит от породы. Мериносы и их помеси более чувствительны, каракульские и курдючные овцы малочувствительны. В стационарных очагах болезни чаще поражаются овцы привозных пород; местные более устойчивы.
В лабораторных условиях удается заразить новорожденных мышей и хомячков, которым вводят вирус в мозг. К заболеванию восприимчивы крупный рогатый скот и козы, но у них болезнь протекает без клинических симптомов. Однако они могут выполнять роль резервуара вируса в межэпизоотический период. Для болезни характерна сезонность. Она проявляется в начале лета, обычно при высокой влажности, и исчезает с наступлением холодов; зимой не регистрируется. Самая высокая заболеваемость овец отмечается в жаркие дождливые месяцы. Болезнь регистрируется в болотистой местности, в районах, где выпадает много осадков. Обычно овцы заражаются во время пребывания на пастбищах ночью.
Неполноценное кормление, большая скученность в помещении, хронические инфекции, гельминтозы, солнечное облучение отягощают течение болезни.
Течение и симптомы. Инкубационный период болезни – 7-10 дней, при экспериментальном заражении – 2-18 дней.
У овец различают острое, подострое, хроническое течения и абортивную форму болезни. Острое течение характеризуется внезапным или постепенным повышением температуры тела до 40,5-42°С. Через 1-2 дня после этого появляются гиперемия слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, слюнотечение, истечения из носовой полости серозного или гнойного экссудата, засыхающего впоследствии корочкой. Развиваются отеки в области ушей, губ, иногда языка, межчелюстной области, распространяющиеся на шею и грудь. Губы становятся болезненными, нижняя губа сильно отвисает. На слизистой оболочке ротовой полости, имеются кровоизлияния, кровоточащие эрозии, язвы; вследствие некроза ткани исходит ихорозный запах изо рта. Опухший и воспаленный язык приобретает багровый или грязно-синий цвет и высовывается из ротовой полости. По этому признаку болезнь раньше называли синим языком. Нередко у больных животных искривляется шея выпадает шерсть, в тяжелых случаях появляется кровавый понос. Отсутствие аппетита, специфические мышечные поражения приводят к резкому истощению, слабости, глубокой астении.
При подостром и хроническом течениях болезни все симптомы развиваются медленно и выражены слабее. Характерно истощение животных, сухость и выпадение шерсти, поражение конечностей, сопровождающееся хромотой. Иногда отмечают спадение рогового башмака и бронхопневмонию, вызванные вторичной инфекцией. Длительность болезни при подостром течении 30-40 дней, при хроническом – до года. Выздоравливают животные медленно. Иногда после кажущегося выздоровления наступает смерть. Абортивная форма проявляется незначительным повышением температуры тела, быстро проходящей гиперемией слизистых оболочек ротовой полости. Другие симптомы болезни не развиваются. Такое течение болезни наблюдают у овец более устойчивых пород, У крупного рогатого скота и коз после вакцинации.
Диагноз. Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований.
Выделение вируса (из крови, селезенки, лимфоузлов) проводят в культуре клеток почек ягнят или хомячков, в куриных эмбрионах, которых заражают внутривенно, а также на мышах при интрацеребральной инъекции.
Биопробу ставят на двух овцах, предварительно проверенных серологически на отсутствие комплементсвязывающих антител к вирусу катаральной лихорадки; им вводят внутривенно по 10 мл крови больного животного, суспензию, приготовленную из органов павших овец, или выделенный на культуре клеток или в куриных эмбрионах вирус, Характерным для катаральной лихорадки овец считается повышение температуры до 41 °С и выше на шестой — восьмой день после заражения с последующим развитием клинических признаков болезни. Во всех случаях выделение вируса подтверждают серологическими методами (РДП, ИФА, МФА, РСК, РН, РНГА).
Дифференциальный диагноз. Необходимо исключить ящур, контагиозный пустулезный дерматит (эктима), оспу, везикулярный стоматит, злокачественную катаральную лихорадку, некробактериоз
Профилактика и меры борьбы. Переболевшие овцы приобретают пожизненный иммунитет к тому типу вируса, который вызвал болезнь. Возможна реинфекция другим типом вируса в течение того же сезона или на следующий год. Для профилактики применяют культуральную вакцину, в результате введения которой животное иммунно в течение года.
Ягнята, родившиеся от иммунных овец, обладают пассивным колостральным иммунитетом продолжительностью до трех месяцев.
источник
ИНФЕКЦИОННАЯ КАТАРАЛЬНАЯ ЛИХОРАДКА ОВЕЦ FEBRIS INFECTIOSA CATARRHALIS OVIUM
(Эпизоотический катар, болезнь морды, гангренозный ринит, псевдоящур. Bluetongue, malarial catarrhal fever of sheep; fievre catarrhale du mouton; Lengua azul)
Инфекционная катаральная лихорадка овец — вирусная трансмиссивная болезнь жвачных, передающаяся кровососущими насекомыми из рода Culicoides. Характеризуется лихорадочным состоянием, воспалительно-некротическими поражениями ротовой полости, особенно языка, пищеварительного тракта, эпителия венчика и основы кожи копыт, а также дегенеративными изменениями скелетной мускулатуры. Поражает овец, реже крупный рогатый скот и коз. Впервые зарегистрирована в Южной Африке в 1876 г. комиссией по болезням крупного рогатого скота и овец.
География болезни. Катаральная лихорадка овец распространена на юге, востоке, северо-востоке Африки, где она является стационарной болезнью. За последние 25-30 лет болезнь широко распространилась за пределами Африканского континента и зарегистрирована на Кипре (1943), в Палестине (1943), Сирии (1943), Турции (1944), Португалии (1956), Испании (1956), Пакистане (1959), Индии (1963), США (1948), Перу (1962), Чили (1963-1964). В СССР катаральная лихорадка овец не регистрируется, однако неблагополучие в соседних государствах (Турция, Пакистан) делает реальной угрозу проникновения болезни в нашу страну.
Возбудитель болезни, открытый в 1906 г. Тейлером (Theiler), является РНК-содержащим вирусом. По своим экологическим свойствам он относится к многочисленной группе арбови-русов, входящих в состав шести родов (групп). Возбудитель катаральной лихорадки овец, согласно классификации, принятой на 10-м Международном конгрессе в Мехико в 1970 г., включен в группу реовирусов.
По последним данным, полученным методом электронной микроскопии, диаметр частиц очищенного культурального вируса составляет 53-60 нм. Капсиды имеют гексагональную форму. Относительно количества капсомеров единого мнения нет. Студерт (Sluddert), Оувен (Owen), Мунц (Munz) и другие исследователи указывают на наличие 92 капсомеров, а Еле (Els) и Верворд (Ver-woerd) насчитывают только 32. Вирусные частицы не имеют оболочки. Вирус содержит 80% белка и 20% рибонуклеиновой кислоты, имеет константу седиментации 650 S. Рибонуклеиновая кислота вируса двуспиральна, не обладает инфекционностью и не чувствительна к РНК-азе.
В настоящее время различают 16 серотипов вируса катаральной лихорадки овец, антигенную классификацию которых проводят при помощи перекрестной реакции нейтрализации (Хоуел, 1960). Каждый тип создает прочный и длительный иммунитет только против гомологичного типа. Степень выраженности иммунитета против гетерологичных типов различна (Neitz, 1948). Некоторое иммунологическое родство между типами указывает на существование общего антигенного компонента у всех штаммов данного вируса. Вирус имеет два группоспецифических неинфекционных растворимых антигена: комплементсвязывающий и преципити-рующий. Комплементсвязывающий антиген представлен частицами диаметром 8 нм и входит в состав вириона, а преципитирующий антиген может быть компонентом самой вирусной частицы или продуктом размножения вируса в инфицированных клетках.
Вирус содержится в крови, сыворотке крови, плазме и кроветворных органах больных животных. Его выделяли также из крови плода овец и коров. Вирус не связан с эритроцитами. Он может присутствовать в сыворотке одновременно с антителами. В высоком титре он содержится в крови со 2-3-го по 9-11-й день после заражения. Однако в отдельных случаях его удавалось обнаруживать в крови овец в течение 3-4 месяцев, а в крови крупного рогатого скота — до года.
Культивирование. Вирус культивируют в куриных эмбрионах 6-8-дневного возраста, в организме новорожденных мышей и в различных культурах клеток. Эмбрионы заражают в желточный мешок, на хориоаллантоисную оболочку или внутривенно. В последнем случае используют эмбрионы 11-13-дневного возраста. Зараженные эмбрионы инкубируют при 33,6°. Вирус достигает максимального титра между 36 и 72 часами после заражения (105 8-108 ЕЛД50 мл). Эмбрионы погибают через 3-6 дней. Они характерного вишнево-красного цвета. Последовательное пассирование вируса в куриных эмбрионах приводит к его ат-тенуации, что легло в основу приготовления вакцины против катаральной лихорадки овец (метод Александера).
Вирус размножается в мозге новорожденных мышей при интрацеребральном заражении и вызывает их гибель через 3-5 дней с симптомами энцефалита. Наиболее восприимчивы мыши 1-3-дневного возраста. У взрослых мышей вирус размножается, но инфекция протекает инапарантно. Концентрация вируса в мозге мышей достигает 10е-108 LD50 r ткани. Ткань мозга инфицированных мышей используют для приготовления комплементсвязывающего антигена для РСК.
К вирусу чувствительны культуры клеток почек ягнят, эмбрионов крупного рогатого скота, молодых хомяков, перевиваемые линии клеток HeLa, ВНК-21, синовиальные клетки Мак Коя, амниотические клетки человека, клетки мышиных фибробластов и др. Культуры клеток почек ягнят и эмбрионов крупного рогатого скота в настоящее время широко используют при изготовлении вакцины против катаральной лихорадки овец для размножения аттенуированных штаммов вируса.
В культуре клеток почек ягнят цитопатические изменения появляются через 48-72 часа после заражения и характеризуются округлением клеток, появлением зернистости в цитоплазме, пикнозом и фрагментацией ядра и, наконец, их распадом. Вирус формирует в культуре клеток включения двух типов: внутриплаз-матические (РНК-положительные) и внутриядерные (ДНК-положительные). Предполагают, что синтез вируса осуществляется в цитоплазме (Bowne et al., 1967).
Изучение цикла репродукции в клетках мышиных фибробластов показало, что вирус начинает размножаться через 4 часа после заражения и достигает максимального титра к 12 часам. Цитопатические изменения появляются лишь через 24 часа культивирования, полное разрушение клеток наступает через 72-96 часов. Таким образом, цитопатогенное действие вируса значительно отстает от его формирования. Все штаммы вируса катаральной лихорадки овец образуют бляшки (Howell et al., 1967).
Устойчивость. Вирус довольно устойчив и сохраняется в крови, консервированной раствором Эдингтона (5 г щавелевокислого калия, 5 г фенола, 500 мл глицерина и 500 мл дистиллированной воды), в течение 25 лет при комнатной температуре. Гниение не влияет на вирус. При медленном замораживании до минус 10 или минус 20° он разрушается, но хорошо сохраняется при более низких температурах. Например, при минус 60° титр вируса не изменяется в течение шести месяцев. В лиофилизованных препаратах, хранящихся при 2-4°, вирус не теряет активность в течение нескольких лет. Нагревание при 60° инактивирует его за 5 минут. Вирус устойчив к эфиру, дезоксихолату натрия, хлороформу, антибиотикам, но чувствителен к трипсину. 3%-ный раствор формалина инактивирует вирус в течение 48-72 часов, хинозол в соотнощении 1 :2000-через 30 минут, 3%-ный раствор едкого натра и 70%-ный этиловый спирт — в течение 5 минут. При рН раствора ниже 6,3 вирус инактивируется. В растворе с рН 9,0 и с низкой концентрацией солей он очень стабилен. В бараньих тушах при 4°, если рН мяса не снижается ниже 6,3, вирус сохраняется до 30 дней.
Эпизоотология болезни. В естественных условиях к катаральной лихорадке наиболее восприимчивы овцы, особенно в молодом возрасте. Чувствительность их к вирусу зависит от породы. Овцы европейских пород (английские мериносы, дорсетхорны и др.) более чувствительны, чем овцы африканских и азиатских пород. Алжирские мериносы, суданские, арабские, персидские, каракульские и курдючные овцы малочувствительны. В стационарных очагах болезни чаще заболевают овцы привозных пород, а овцы местных пород более устойчивы.
К катаральной лихорадке восприимчивы также крупный рогатый скот и козы, но в меньшей степени, чем овцы. Клинические симптомы болезни у них, как правило, слабо выражены. Клинически выраженное проявление болезни у крупного рогатого скота наблюдали во время эпизоотии катаральной лихорадки среди овец в Израиле (1951), Испании (1956), США .(1952). Экспериментально доказано, что крупный рогатый скот, не проявляя видимых симптомов болезни, может выполнять роль резервуара вируса в межэпизоотический период, оставаясь длительное время вирусо-носителем (Боун и др., 1966, 1968).
Из дикой фауны к катаральной лихорадке восприимчивы белохвостые олени и снежные бараны, у которых болезнь нередко заканчивается летально, а также некоторые породы антилоп, лоси, большерогие бараны. В условиях эксперимента вирус выделен из крови антилоп через 17 дней после заражения при отсутствии клинической картины болезни. Во время эпизоотии катаральной лихорадки среди овец вирус удалось также выделить из организма диких грызунов. Предполагают, что существенную роль в эпизоотоло-гии болезни могут играть дикие жвачные и грызуны, являясь резервуарами вируса в природе.
В лабораторных условиях удается заразить новорожденных мышей и хомячков при введении вируса в мозг. Однокопытные, собаки, кошки, хорьки, кролики и морские свинки не чувствительны к вирусу катаральной лихорадки овец.
В условиях эксперимента заражение овец удается при подкож-: ном, внутрикожном, внутривенном, внутримышечном, внутрибрю-шинном, интраназальном, интрацеребральном и пероральном введении крови и суспензии органов больных животных. При пероральном заражении необходимы большие дозы вируссодержащего материала. При внутривенной инъекции достаточно 0,01 мл вирулентной крови, чтобы вызвать заболевание. Контактным путем вирус не передается.
Эпизоотологической особенностью катаральной лихорадки овец является сезонность. Болезнь появляется в начале лета и исчезает с наступлением холодов. Зимой она не регистрируется. Самая высокая заболеваемость овец наблюдается в жаркие дождливые месяцы. Болезнь распространена в болотистой местности, в районах, где выпадает много осадков. Обычно овцы заражаются во время пребывания на пастбищах ночью. Очаги болезни возникают в районах, далеко отстоящих друг от друга. В местностях, где болезнь приобрела стационарный характер, продолжительное время циркулируют постоянные антигенные типы вируса.
Сезонный характер болезни, совпадающий с периодом наибольшей активности насекомых, связь болезни с выпасом овец на низкорасположенных, сырых пастбищах, где имеется наибольшая численность насекомых, а также отсутствие контагиозное™ указывают на трансмиссивный путь передачи инфекции кровососущими насекомыми. Косвенным подтверждением этому является тот факт, что применение инсектицидов и репеллентов снижает заболеваемость овец катаральной лихорадкой.
Основным биологическим переносчиком, в организме которого вирус размножается, считают мокрецов Culicoides variipennis (du Toit, 1944; Price et Hardy, 1954; Foster et Jones, 1968).
Мокрецы из рода Culicoides распространены почти повсеместно. Только в Южной Африке насчитывают 22 вида, среди которых, возможно, имеются потенциальные переносчики болезни. Роль мокрецов Culicoides variipennis в передаче вируса катаральной лихорадки овец неоднократно была подтверждена в эксперименте. Так, Боун с сотр. удалось воспроизвести 14 передач вируса через мокрецов этого вида от овцы к овце, от крупного рогатого скота к крупному рогатому скоту, от крупного рогатого скота к овцам.
Установлено, что мокрецы воспринимают любой антигенный тип вируса, а передают только тот, к которому в данный момент животное оказывается наиболее восприимчивым. В организме переносчика один штамм, размножаясь, может подавлять размножение других (Хоуел, 1966).
Распространению болезни могут способствовать некоторые виды комаров Aedes lineatopennis, кровососки Melophagus ovinus и, возможно, птицы, перенося кровососущих членистоногих, ранее кормившихся на больных животных. Перелетные птицы, таким образом, могут быть промежуточным звеном, через которое осуществляется непрямая трансмиссия вируса от вирусоносителей (овец, крупного рогатого скота, диких жвачных и грызунов) к восприимчивым животным. Этим, возможно, объясняется нередко внезапное начало некоторых эпизоотии.
Катаральная лихорадка овец проявляется в виде энзоотии (в таком виде она существует в Африке, США) и в виде эпизоотии с охватом значительного поголовья восприимчивых животных. Течение болезни может быть различным в зависимости от индивидуальной устойчивости животных и вирулентности штамма. Фактор же передачи не оказывает существенного влияния на реакцию организма. Такие же факторы, как неполноценное кормление, большая скученность в помещении, хронические инфекции, гельминтозы, солнечное облучение, отягощают течение болезни.
Заболевает от 10 до 100% овец. Летальность в некоторых случаях достигает 90-100%, но обычно погибает от 2 до 30% овец.
Патогенез. В основе развития патологических изменений при катаральной лихорадке овец лежит нарушение обменных процессов в организме, обусловленное локализацией и размножением вируса в стенках кровеносных сосудов. В наибольшей концентрации вирус накапливается в мелких сосудах слизистой оболочки ротовой полости, кожи и эпителия венчика копыт, а также в ретикуло-эндотелиальных клетках лимфатических узлов (Stair, 1968). Вирус вызывает глубокое изменение эндотелия сосудов, что сопровождается нарушением кровообращения в эпителиальной и мышечной ткани с последующим развитием обширных отеков в подкожной и межмышечной соединительной ткани, появлением многочисленных кровоизлияний во внутренних органах, дегенеративными изменениями скелетной мускулатуры. Нарушение питания кожи приводит к сухости шерсти. Последняя становится ломкой и выпадает клочьями. Дегенеративно-некротические поражения мышечных волокон и слизистой оболочки пищеварительного тракта ведут к резкому истощению и слабости животных, что обусловливает их медленное выздоровление.
Симптоматика. Инкубационный период болезни в естественных условиях точно не установлен. Предполагают, что он длится 6- 9 дней. При экспериментальном заражении он варьирует от 2 до 18 дней.
У овец различают острое, подострое, хроническое и абортивное течение болезни.
Первым симптомом является внезапное или постепенное повышение температуры тела до 40,6-42°. Лихорадочный период продолжается 2-3, иногда 6-10 дней. Высота температурной реакции не коррелирует с выраженностью клинических признаков. Слабо выраженная температурная реакция может сопровождаться сильно выраженными признаками и даже гибелью животных и, наоборот, за внезапным подъемом температуры до 42° могут развиваться слабые симптомы и наступает быстрое выздоровление.
При остром течении болезни через 1-2 дня после подъема темпе-, ратуры появляются гиперемия слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, слюнотечение, истечения из носовой полости серозного или гнойного характера, засыхающие впоследствии корочкой. Развиваются отеки в области головы (ушей, губ, иногда языка), межчелюстного пространства, распространяющиеся на шею и грудь. Губы становятся чувствительными и болезненными на ощупь, нижняя губа сильно отвисает. На слизистой оболочке ротовой полости появляются кровоизлияния, кровоточащие эрозии, язвы и вследствие некроза ткани ихорозный запах изо рта. Опухший и воспаленный язык приобретает багровый или грязно-синий цвет и высовывается из ротовой полости. Однако последний симптом, по которому болезнь получила свое название, встречается редко.
Через 3-5 дней после заживления повреждений на слизистой оболочке ротовой полости и нормализации температуры тела развиваются пододерматиты (рис. 1). Нередко у больных животных отмечают искривление шеи, выпадение шерсти, а в тяжелых случаях болезни кровавый понос. Отсутствие аппетита, специфические мышечные поражения приводят к резкому истощению, слабости, глубокой астении. При остром течении болезнь продолжается от 6 до 20 дней. Через 2-8 дней после появления первых симптомов болезни может наступить смерть.
При подостром и хроническом течении болезни все симптомы развиваются медленно и выражены слабее. Характерно истощение животных, сухость и выпадение шерсти, поражение конечностей, сопровождающееся хромотой. Иногда отмечают спадение рогового башмака и бронхопневмонию, вызванные вторичной инфекцией. Длительность болезни при подостром течении 30-40 дней, при хроническом- до года. Выздоравливают животные медленно. Иногда после кажущегося выздоровления наступает смерть.
Абортивное течение характеризуется незначительным повышением температуры тела, быстро проходящей гиперемией слизистых оболочек ротовой полости. Другие симптомы болезни не развиваются. Такое течение болезни наблюдают у овец более устойчивых пород, у крупного рогатого скота и коз после вакцинации. У крупного рогатого скота болезнь иногда сопровождается некрозом слизистой оболочки ротовой полости и снижением удоев при удовлетворительном общем состоянии организма.
При исследовании крови у овец отмечают пойкилоцитоз, лейкопению, а в тяжелых случаях болезни — анемию. В крови заметно увеличение содержания сахара, остаточного азота и азота мочевины (Graff, 1933), повышается уровень некоторых ферментов плазмы — глютамин оксалацетат трансаминазы, лактдегидроге-назы и альдолазы (Clark et Wagner, 1967).
Прогноз при легком течении катаральной лихорадки овец благоприятный, при тяжелом — неблагоприятный даже при незначительной летальности. Замедление процесса выздоровления животных отражается на их общем состоянии, на качестве шерсти и приводит к большому экономическому ущербу. Шерсть от таких овец плохого качества и практически непригодна для промышленного использования в течение длительного времени. Возможны аномалии плодов у беременных овцематок.
Патологоанатомические изменения. Трупы истощены. При вскрытии трупов павших животных обнаруживают обширные студневидные отеки подкожной клетчатки в области головы, шеи, подгрудка, конечностей; гиперемию, отек и цианоз слизистых оболочек головы. Основные изменения локализуются в органах пищеварения, скелетной мускулатуре и сердце. Слизистая оболочка ротовой полости, рубца, сетки, сычуга, тонкого отдела кишечника отечна, гиперемирована, с кровоизлияниями. На кончике, спинке и боковых поверхностях языка, а также на внутренней поверхности щек видны изъязвления и некрозы.
Наиболее постоянны изменения в скелетной мускулатуре и мышце сердца: дегенерация и очаговые некрозы скелетных мышц с инфильтрацией межмышечной соединительной ткани красноватой жидкостью. Некоторые исследователи находили очаги некроза в сосочковых мышцах миокарда и считают этот признак па-тогномоничным для катаральной лихорадки овец.
Кровоизлияния встречаются в эпикарде, эндокарде и миокарде, скелетной мускулатуре, у основания легочной артерии, реже в трахее, плевре, мочевом пузыре и мочеточнике. Изменения в легких чаще всего носят вторичный характер и проявляются в виде бронхопневмонии. Изменения в других органах (в печени, почках, селезенке), в лимфатических узлах и толстом отделе кишечника, как правило, слабо выражены или отсутствуют. Характерными для катаральной лихорадки овец считают изменения на коже — гиперемию, экзематозную сыпь, сливающуюся в корочки. Покраснение нередко обнаруживают на венчике копыт задних конечностей.
При гистологическом исследовании обнаруживают изменения слизистой оболочки пищеварительного тракта, скелетной мускулатуры и сосудистой системы. Находят дистрофию и некроз эпителия языка, сычуга, тонкого отдела кишечника; дегенерацию мышечных волокон, отек и кровоизлияния в межмышечную соединительную ткань; глубокие изменения эндотелия сосудов: некроз, кариорексис, образование вакуолей в цитоплазме, набухание ядер и цитоплазмы.
Диагноз основывается на клинико-эпизоотологических данных, патоморфологических изменениях и результатах лабораторных исследований.
Результаты клинических, эпизоотологических и патоморфологических исследований, например наличие характерных клинических симптомов (лихорадка, угнетение, цианоз языка, губ, десен, отек морды, искривление шеи, хромота) и патологоанатомических изменений (истощение, отеки подкожной и межмышечной соединительной ткани, дегенеративные изменения скелетных мышц, некрозы слизистой оболочки рта и языка и др.), а также появление болезни в жаркий дождливый период одновременно с увеличением численности насекомых-переносчиков и положительные данные серологических исследований (РСК) позволяют поставить предварительный диагноз.
Окончательный диагноз основывается на выделении вируса, его идентификации и постановке биопробы.
Выделение вируса (из крови, селезенки, лимфатических узлов) проводят в культуре клеток почек ягнят или хомячков, а также в куриных эмбрионах заражением их в желточный мешок или внутривенно. Выделенный вирус идентифицируют в реакции нейтрализации, применяя типоспецифические сыворотки.
При постановке биопробы двум овцам, предварительно проверенным серологически на отсутствие комплементсвязывающих антител к вирусу катаральной лихорадки, вводят внутривенно в объеме 10 мл кровь больных, суспензию органов павших овец или вирус, выделенный в культуре клеток или в куриных эмбрионах. Проводят 2-3 пассажа. Для последующих пассажей используют кровь, полученную от овец предыдущего пассажа на 5, 6, 7-й день после заражения. Характерным для катаральной лихорадки овец считается повышение температуры до 41° и выше на 6-8-й день после заражения с последующим развитием клинических признаков болезни.
Для быстрого обнаружения вируса (через 26 часов) рекомендуется использовать метод флуоресцирующих антител в культуре клеток.
Дифференциальный диагноз. При установлении диагноза катаральную лихорадку овец необходимо дифференцировать от ящура, контагиозного пустулезного дерматита (эктимы), оспы, везикулярного стоматита, злокачественной катаральной лихорадки, сердечной водянки, болезни Найроби, лихорадки долины Рифт, некробациллеза.
Злокачественная катаральная лихорадка. Наблюдаются лишь спорадические случаи болезни. Клинически обе болезни очень сходны.
Для сердечной водянки характерны клинические симптомы поражения нервной системы и хороший терапевтический эффект при лечении тетрациклином.
Для некробациллеза характерны язвенно-некротические поражения на слизистой оболочке рта, на языке, в межкопытной щели в которых обнаруживают Bact. necrophorum.
При болезни Найроби наблюдают тяжелые гастроэнтериты без1 поражения конечностей.
При лихорадке долины Рифт типичны дистрофия печени и очаговые некрозы.
Лечение. Специфических методов лечения овец, больных катаральной лихорадкой, нет. Общее состояние больных животных улучшается при применении препаратов, содержащих мышьяк. Необходимо создать для больных животных спокойную обстановку, защищать от солнечного облучения и улучшить кормление.
Иммунитет. Переболевшие овцы приобретают пожизненный иммунитет к тому типу вируса, который вызвал заболевание. Возможна реинфекция другим типом вируса в течение того же сезона или на следующий год (Хоуел, 1966).
Активный иммунитет после переболевания сопровождается образованием нейтрализующих и комплементсвя-зывающих антител. Нейтрализующие антитела достигают наивысшего титра к 30-му дню и сохраняются у овец более 12 месяцев. Комплемент-связывающие антитела могут быть обнаружены через 10 дней после подъема температуры, достигают пика к 30-му дню и присутствуют в крови в течение 6-8 недель. Через 12 месяцев они обнаруживаются в едва уловимых концентрациях.
Ягнята, родившиеся от иммунных овцематок, обладают пассивным коллостральным иммунитетом продолжительностью до 3-6 месяцев.
Для иммунизации овец в Южной Африке в течение 40 лет применяли вирус, ослабленный пассированием через овец (вакцина Тейлора). В 1947 г. Александер (Alexander) предложил поливакцину из четырех штаммов вируса, аттенуированного путем серийных пассажей в куриных эмбрионах при пониженной температуре. В состав вакцины вошли штаммы: Кипрский (101-й пассаж), Эстанция (60-й пассаж), Блоукоп (56-й пассаж) и Тейлоровский (30-й пассаж).
Вакцину Алексаидера успешно применяли для ликвидации эпизоотии болезни в 1956 г. в Португалии и Испании. Время от времени эту вакцину изменяют, стремясь улучшить ее поливалентный состав. В последние годы в Южно-Африканской Республике изготовлена вакцина из 14 антигенно различных типов вируса. Усовершенствованием вакцины явилось также использование культур клеток почек ягнят и почек эмбрионов крупного рогатого скота для размножения вируса. Вакцину вводят подкожно в дозе 1 — 2 мл. Иммунитет продолжительностью до одного года наступает через 10 дней.
Вакцинацию проводят в начале лета, после стрижки овец. Вакцинированных овец нужно защищать от интенсивной солнечной радиации и насекомых — переносчиков вируса. Рекомендуется втечение двух недель содержать овец в затемненном помещении, не Тыгоняя на пастбища. Не рекомендуется вакцинировать суягных вен в начальной стадии беременности, баранов-производителей в период случки и ягнят до 6-месячного возраста. Имеются сооб- щения о возможной реверсибельности коммерческих вакцин че- рез насекомых-переносчиков (Фостер и др., 1968). Инакти- вированные вакцины при катаральной лихорадке овец не разработаны.
Профилактика и меры борьбы. Согласно рекомендациям в благополучных по заболеванию странах:
осуществлять строгий контроль над ввозом животных с запрещением ввоза восприимчивых животных из неблагополучных по катаральной лихорадке стран;
проводить карантинирование сроком на 30 дней домашних и диких жвачных в местах ввоза. В период карантинирования клинически обследовать животных с обязательным исследованием сывороток в РСК на наличие антител к вирусу катаральной лихорадки овец;
проводить обязательную дезинфекцию (3%-ный раствор щелочи) и дезинсекцию всех видов транспорта, прибывающего из стран, неблагополучных по данной болезни.
В угрожаемых зонах и стационарных очагах инфекции:
систематически бороться с переносчиками путем использования инсектицидов, репеллентов, осушения болотистых мест;
запретить пастьбу вечером, особенно на пастбищах, расположенных в сырых болотистых местах;
регулярно проводить ежегодную иммунизацию овец вирусвак-циной.
При новой эпизоотии в ранее благополучной по катаральной лихорадке овец стране рекомендуется обязательная вакцинация всех овец по испанско-португальскому методу в два этапа: вакцинация в очагах инфекции и в угрожаемых зонах и массовая профилактическая вакцинация овец по всей стране.
Указатель литературы
Коваленко Я Р. Катаральная лихорадка овец (синий язык). — Ветери- нария , 1963, № 3. ,
Лактионов А. М. Вирус катаральной лихорадки овец (библ. 41 название) — в кн. Руководство по ветеринарной вирусологии. Под ред. проф. В. Н. Сюрина. М„ 1966. , ,_
Материалы конференции ФАО-МЭБ, состоявшейся в Анкаре (Турция) 19- 24 июня 1961 г. Bull, off internation. Epiz., 1961, 55, (7-8). XXXVII Генеральная сессия Международного эпизоотического бюро. — Ветеринария , 1970, № 9, с. 113-116.
Строгов А. К. Катаральная лихорадка (синий язык) овец. — В кн.: Вирусные болезни животных. Сост. Ф. М. Орлов. М., 1963, с. 246-264.
Сюрин В. Н. Инфекционная катаральная лихорадка овец. — В кн.: БолезмИ овец. М., 1963; с. 225-232.
В е с k е г С. Н. Bluetongue. — In Handbuch der Virusinfektionen bei Tieren. Bfl 111 2. Spez. Teil 2. Jena, 1968, S. 1167-1197.
Bluetongue disease in cattle. By J. G. В о w n e, A. J. L u e d к e, M. M. J ofl с him, H. E. Metcalf. — J. Amer. vet. med. Assoc., 1968, v. 153, № яИ p. 662-668.
E 1 s H. J.. Verwoerd D. W. Morphology of bluetongue virus. — Virolocnj B 1969, v. 38, № 2, p. 213-219.
Foster N. M., Johes R. H., Luedke A. J. Transmission of attenuated and virulent bluetongue virus with Culicoides variipennis infected orally via sheep. — Amer. J. vet. Res., 1968, v. 29, № 2, p. 275-279.
Howell P. J. Bluetongue. — In: Emerging diseases of animals. 1963, vol. 61;fl p. 111-153.
Howell P. J. Some aspect of the epizootology of bluetongue. — Bull. Off. int. щ Epiz., 1966, v. 66, № 1, p. 341-352.
Jochim M. M., Chow T. Z. Immunodiffusion of bluetongue virus. — AmerJB J. vet. Res. 1969, v. 30, № 1, p. 33-41.
Bluetongue in sheep: viral assay and viremia. — Amer. J.fl vet. Res., 1969, v. 30, № 4, p. 499-509.
Kennedy P. C. Some aspects of bluetongue in the United States. Austral. I vet. J., 1968, v. 44, № 4, p. 191-194.
Observations on latent bluetongue virus infection in cattle. By A. J. L u e d ke., ч M. J о с li i ni, J. G. Bowne, R. II Jones .1. Amer. vet med. Assoc., 197GJH v. 156, № 12, p. 1871-1879.
S t a i r E. L. The pathogenesis of bluetongue in sheep: a study by immunoflu-Я orescence and histopathology. — Diss. Abstr., 1969, v. 29—B, № 12, p. 4465.
Studdert M. J., Pangborn J., Addison R. B. Bluetongue virus struc-И ture. — Virology, 1966, v. 29, № 3, p. 509-511.
Thomas F. C, Trainer D. O. Bluetongue virus in whitelailed deer — Щ Amer. J. vet. Res., 1970, 31, № 2, p. 271-278.
Verwoerd D. W. Purification and characterization of bluetongue virus. — Virology, 1969, v. 38, № 2, p. 203-212.
источник
Злокачественная горячка кр.р.ск. (ЗКГ, повальный дифтерит слизистой оболочки носовой полости, злокачественный катар кр.рог. скота.)-острое, спорадическое, инфекционное неконтагиозное заболевание, сопровождающееся крупозным воспалением слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта,носа, гортани, бронхов, придаточных полостей черепа, поражением глаз и центральной нервной системы.
Историческая справка. Впервые данную болезнь под названием тиф крупного рогатого скота описал Анкар в 1832г. В России злокачественную горячку подробно описал в 1832г И.И. Равинович. Болезнь регистрируется во всем мире. Заболевание проявляется спорадическими случаями и ограниченными энзоотическими вспышками.
Экономический ущерб от болезни в целом по стране незначительный из-за малого поражения крупного рогатого скота (в пределах 1тыс. гол). Однако в отдельных хозяйствах, особенно в ЛПХ и КФХ ущерб может быть значительным, так как смертность при ЗКГ доходит до 50-90%.
Этиология. Возбудитель болезни — ДНК содержащий вирус из семейства герпес вирусов, размером в диаметре 140-220нм. Вирус в организме животного находится в крови, мозгу, паренхиматозных органах, особенно его много в лимфатических узлах больных животных.
Устойчивость вируса незначительная, в естественных условиях — в кошаре — вирус сохраняет свою активность в течение 30-35 дней.
Эпизоотологические данные. К злокачественной катаральной горячке наиболее восприимчивы крупный рогатый скот и буйволы, не зависимо от породы, пола, и возраста. Крупный рогатый скот чаще болеет в возрасте от одного года до четырех лет; овцы и козы болеют очень редко.
Источником возбудителя инфекции при ЗКГ является больное животное и скрытые вирусносители (овцы и козы). Способствующим фактором являются: сырая, холодная погода при высокой влажности воздуха, из-за чего болезнь чаще регистрируется весной и осенью, а также факторы, снижающие общую резистентность организма (недостаточное и несбалансированное кормление, скармливание испорченных кормов), совместное содержание крупного и мелкого рогатого скота.
ЗКГ в ЛПХ и КФХ, как правило, проявляется спорадическими случаями, редко бывают энзоотические вспышки (при стойловом содержании). Длительность такой вспышки обычно не превышает 40-50 дней, когда ежедневно выделяется по 1-2 больных животных. Наиболее тяжело болеют животные в начале вспышки – летальность составляет 100%. К концу вспышки болезнь у заразившихся животных протекает легче.
Патогенез. Механизм развития болезни до конца не выяснен. В то же время экспериментальные данные, результаты клинических наблюдений и данные патологоанатомических исследований позволяют предположить, что вирус, попав в организм, какое-то время находится в крови, а затем проникает в различные органы и ткани. Изменения в паренхиматозных органах, слизистых оболочках и головном мозге в виде васкулярных инфильтратов, по-видимому, возникают в ответ на действие вируса ЗКГ. Вирус, развиваясь на слизистых оболочках, вызывает в них очаги некроза с дальнейшим образованием язв и эрозий. Множественные воспалительные процессы в большинстве органов и систем приводят к серьезным морфологическим повреждениям и функциональным расстройствам, что в итоге приводит к летальному исходу.
Инкубационный (скрытый) период в среднем от двух до восьми недель, однако в отдельных случаях он может сокращаться до 12 часов или же наоборот растягивается до 3-4месяцев. У злокачественной катаральной горячки различают острое и подострое течение болезни; длительность от 4 дней до 2-3недель.
В продромальном периоде, который продолжается один день, у животного, имеющего возбудимый тип нервной деятельности, отмечаем настороженность, пугливость, доходящую до буйства. У спокойных животных отмечаем угнетение. В дальнейшем вышеуказанные признаки переходят в озноб, резкое повышение температуры тела до 41-42 градусов, лихорадку.
С самого начала болезни больные животные отказываются от корма, но испытывают сильную жажду; у животного отсутствует жвачка, появляется атония преджелудков и прекращается молокоотдача. При сильно выраженном угнетении больное животное обычно стоит опустив голову или упирается ею в кормушку. Появляется мышечная дрожь. При движении — слабость, шаткость, спина изгибается вверх. У возбудимых животных наблюдаются признаки возбуждения: корова стремиться вперед, при этом мычит, появляется скрежет зубами, дело доходит иногда до эпилептических судорог и своеобразного выворачивания глаз.
Характерным симптомом для злокачественной катаральной горячки является воспаление слизистых оболочек головы. У больной коровы появляется светобоязнь и слезотечение. При осмотре коровы конъюнктива резко гиперемирована, веки припухшие, часто на 2-3день болезни, в течение буквально нескольких часов, развивается диффузное помутнение роговицы. У отдельных животных на роговице образуются пузырьки величиной с просяное зерно. В дальнейшем, когда эти пузырьки лопаются, на их месте образуются язвы, нередко приводящие к прободению, в результате чего может произойти выпадение радужной оболочки. Часто происходит сращение радужной оболочки с капсулой хрусталика, иногда возникает серая катаракта. При злокачественной катаральной горячке больное животное может ослепнуть на один или оба глаза. При ЗКГ степень поражения глаз пропорциональна тяжести течения болезни. В редких случаях роговица не поражается.
Воспаление слизистых рта и носа по мере развития процесса приобретает крупозно-дифтеритический характер. На слизистой оболочке носового зеркальца отмечаем появление некротических очагов и изъязвлений. Из ноздрей идет слизисто-гнойное истечение с примесью крови и фибрина, выделение обрывков мертвых тканей, которые имеют гнилостный запах. Дыхание становится затрудненным и хриплым. Если в воспалительный процесс вовлекается гортань, то у больного животного наблюдаем приступы удушья. При злокачественной катаральной горячке воспаление с ротовой полости часто переходит на глотку, что вызывает затруднение глотания. Выделяющаяся из ротовой полости слюна содержит обрывки мертвых тканей и издает неприятный запах. Некротические поражения могут быть и на слизистой влагалища.
При ЗКГ у больного животного происходит неравномерное распределение тепла по поверхности тела. Особенно горяча на ощупь область у основания рогов. В воспалительный процесс могут вовлекаться придаточные полости головы, а переход воспаления с лобной полости на костное основание рогов приводит иногда к их отпаданию или легко снимаются рукой при малейшем прикосновении, поэтому больных ЗКГ животных нельзя привязывать за рога.
В начале болезни часто регистрируется атония преджелудков и запор, которые затем переходят в понос с примесью крови и пленок фибрина.
У коров опухают половые губы, слизистая оболочка влагалища при осмотре отечная, покрыта дифтеритическими пленками и язвам. У больных бывает поражение мочевых путей (нефрит, цистит), сопровождающееся болезненностью в области поясницы и частыми мочеиспусканиями. Стельные коровы абортируют. На коже в области носового зеркальца, шеи, спины, вымени наблюдаем экзематозные поражения и некроз отдельных участков.
Сердечная деятельность в начале болезни усилена, потом ослабляется; пульс при этом становится частым, нитевидным, до 80-100 ударов в минуту.
Заболевание, чаще всего у молодняка, может протекать доброкачественно, с кратковременной лихорадкой, слабо выраженными клиническими признаками и заканчивающееся выздоровлением. Часто у выздоровевших животных остаются тяжелые осложнения: слепота, хронический гайморит, фронтит, нарушения органов пищеварения и, как итог, длительное снижение молочной продуктивности. У отдельных животных бывает очень тяжелое течение болезни, сопровождающееся повышением температуры тела до 42,5оС, резким угнетением, сердечной слабостью и незначительно выраженным воспалением слизистых оболочек головы. При этом на первый план выступают явления гастроэнтерита: понос, когда в фекальных массах обнаруживаем кровь и пленки слизи, спазматическое сокращение стенок живота. Такие животные в течение 2-3дней погибают.
Патологоанатомические изменения. Труп животного, павшего от ЗКГ, обычно бывает истощенным, окоченение выражено хорошо. Кровь темная, густая. Слизистая оболочка пищеварительного и дыхательного тракта в состоянии фибринозно-некротического воспаления. Некротические участки обнаруживаются на коже туловища, вымени (его сосков) и слизистых оболочках рта и носа.
Селезенка не увеличена, но в пульпе, так же как и в других паренхиматозных органах, на серозных покровах и в слизистой оболочке кровоизлияния. Лимфоузлы (брыжеечные, портальные, заглоточные и др.) увеличены в объеме, в состоянии острого серозного воспаления, на разрезе сочные, с кровоизлияниями.
Печень, почки, миокард гиперемированы. Легкие отечные. Головной мозг и его оболочки гиперемированы и сильно отечны, с корочками засохшего экссудата, роговица помутневшая, конъюнктива с мелкими кровоизлияниями. При проведении гистологического исследования-острый негнойный менингоэнцефалит диссеминированного типа.
Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, характерной клинической картины (воспаление слизистых оболочек головы, помутнение роговицы и др.), патоморфологических изменений и результатов лабораторного исследования. При постановке диагноза ветспециалист должен обратить внимание, на наличие контакта крупного рогатого скота с овцами, спорадичность заболевания.
Дифференциальный диагноз. Исключаем ящур, чуму крупного рогатого скота, бешенство, лептоспироз, листериоз, вирусную диарею а также микотоксины. Для первых двух заболеваний характерна высокая контагиозность и быстрое распространение, чего не наблюдаем при ЗКГ. Бешенство исключаем на основании анамнеза и отсутствия у больной ЗКГ признаков агрессии; лептоспироз и листериоз — по результатам бактериологического и серологического исследования.
Лечение. Специфическая терапия ЗКГ не разработана. Больных ЗКГ животных изолируем и обеспечиваем хороший уход и содержание. Животным даем мягкий удобоваримый корм: (свежее сено, зеленую траву, корнеплоды, болтушку из отрубей), чистую свежую воду.
Больным животным проводим симптоматическое лечение, которое должно быть своевременным и энергичным. Больным вводим 2 раза в день сердечные средства (кофеин). Пораженные слизистые оболочки промываем раствором марганцовокислого калия (1 :1000), отваром ромашки и другими слабыми растворами асептических средств с последующим смазыванием эрозий и язв йод-глицерином. Конъюнктиву промывают 1%-ным раствором борной кислоты.
При поносах назначают дезинфицирующие и вяжущие средства в виде препаратов танина, ихтиола, лизола, с последующим применением слизистых обволакивающих отваров в общепринятых дозах.
Для подавления секундарной микрофлоры применяют антибиотики и сульфаниламидные препараты, в том числе современные цефалоспоринового ряда, Драксин, Эксид, Кламоксил ЛА, Террамицин ЛА, Террамицин Аэрозоль спрей. С целью предупреждения отеков применяют растворы хлористого кальция внутривенно (10%-ного раствора 100-200мл). Для предупреждения развития самых разнообразных патологических процессов при ЗКГ возникает необходимость ослабить патогенное действие на центральную нервную систему, перераздражение которой усиливает развитие патологических процессов в организме животного. С этой целью практикующие ветврачи рекомендуют, особенно владельцам ЛПХ и КФХ, задавать больным животным внутрь алкоголь (40град) по 500мл в течение четырех дней. С этой же целью И.И. Ермаченков предлагает ставить больное животное в темное помещение и вводить им внутривенно алкоголь по следующей прописи: спирта винного 96 град 200мл, глюкозы 25г, воды дистиллированной 300мл. После данной инъекции животное засыпает на 40-50минут. Курс такого лечения-4инъекции с промежутками в 12 часов. При этом хорошие результаты бывают, если лечение начато не позднее второго дня болезни.
При наличии поноса и обезвоживания организма вводят интравенозно 4-6 л физиологического раствора натрия хлорида. Если процесс затянулся, можно применить аутогемотерапию (80-100мл крови внутримышечно двукратно, через 48часов).При поражении глаз (кератит и пр.) неплохие результаты дает подкожное введение в область нижнего века 5мл сыворотки крови лошади или противорожистой сыворотки. Исходя из результатов, сыворотку можно применять повторно через 48 часов.
Иммунитет и иммунизация. При переболевании ЗКГ у животных иммунитета не образуется. Животные, переболевшие ЗКГ, через несколько месяцев вновь могут заболеть этой инфекцией, причем болезнь может протекать гораздо более тяжелей чем в первый раз.
Профилактика и меры борьбы. При установлении диагноза ЗКГ в соответствии с Приказом Министерства сельского хозяйства РФ от 19 декабря 2011г №476»Об утверждении перечня заразных, в том числе особо опасных, болезней животных, по которым могут устанавливаться ограничительные мероприятия (карантин) на ЛПХ, КФХ и сельхоз предприятие Постановлением губернатора области накладывается карантин. Мероприятия по борьбе со злокачественной катаральной горячкой крупного рогатого скота проводятся на основании временной инструкции, Утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР от 29 апреля 1958г. Где в частности говорится, что по условиям карантина запрещается:
- вывод и вывоз крупного и мелкого рогатого скота для производственных и племенных целей до снятия с хозяйства, населенного пункта ограничений;
- совместное содержание, выпас и водопой крупного рогатого скота с овцами и козами;
- вывоз из хозяйства и использование сырого молока от животных, больных и подозрительных по заболеванию ЗКГ. Молоко может быть использовано в пищу людям и в корм животным только на месте и только после обезвреживания его кипячением.
В хозяйстве, неблагополучном по заболеванию скота ЗКГ, все животные подлежат ежедневному клиническому осмотру с измерением у них температуры тела, все заболевшие и подозрительные по заболеванию животные должны быть немедленно изолированы в другое помещение (изолятор), где их подвергают симптоматическому лечению.
При входе в помещения, где содержатся больные животные, а также при входе во все другие помещения, где содержатся животные, должны быть установлены дезматы, обильно смоченные дезинфицирующими растворами.
Дезинфекция помещений, в которых среди животных установлено заболевание, должна проводиться после каждого случая выделения больного животного и, кроме того, периодически, вплоть до ликвидации заболевания.
Для дезинфекции необходимо применять горячие (при температуре 70-80 град) растворы следующих дезинфицирующих средств: 2%-ный раствор едкого натра, 5%-ный раствор серно-карболовой смеси, 10%-ный раствор хлорной извести, а также современные дезинфицирующие препараты (смотри в статье применение дезсредств при отечной болезни поросят).
Навоз, остатки кормов и подстилку необходимо убирать из помещения ежедневно и складировать в отдельное изолированное место для биотермического обеззараживания.
Убой больных и подозрительных по заболеванию ЗКГ животных разрешается (при отсутствии у них высокой температуры и истощения) на санитарной бойне под контролем ветврача.
Мясо от таких животных выпускается как условно годное, в порядке, предусмотренном «Правилами ветеринарно-санитарного осмотра убойных животных и ветсанэкспертизы мяса и мясопродуктов». Головы, языки и пораженные органы подлежат технической утилизации или уничтожению.
Шкуры, снятые с убитых или павших животных, подлежат дезинфекции 5%-ным раствором кальцинированной соды в насыщенном растворе поваренной соли (из расчета 4 весовые части раствора на 1 весовую часть шкуры), при температуре раствора 17-20 градусов. В таком растворе шкуры подлежат выдерживанию в течение 24 часов при периодическом помешивании.
Хозяйство, населенный пункт, объявляется благополучным по заболеванию ЗКГ через 2 месяца после последнего случая выделения больного животного.
Перед объявлением хозяйства благополучным по этому заболеванию и снятием с него ограничений в нем производят заключительную дезинфекцию.
источник
1. БОЛЕЗНИ, ОБЩИЕ ДЛЯ ВСЕХ ИЛИ НЕСКОЛЬКИХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ
КАТАРАЛЬНАЯ ЛИХОРАДКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ОВЕЦ И КОЗ
1.7. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ КАТАРАЛЬНОЙ ЛИХОРАДКИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ОВЕЦ И КОЗ
УТВЕРЖДЕНЫ 11 июня 1986 г., N 432-5
1.1. Лабораторные методы исследования на катаральную лихорадку крупного рогатого скота, овец и коз включают в себя следующие:
— патогистологическое исследование;
— выделение вируса на культуре клеток и куриных эмбрионах с последующей идентификацией в реакции иммунофлуоресценции (ИФ);
— выявление группоспецифических антител в сыворотках крови больных или переболевших животных в РДСК, РДП;
— постановку биологической пробы на овцах (в сомнительных случаях).
Выделение и идентификацию вируса, исследования сывороток крови животных ветеринарные лаборатории проводят группоспецифическими методами. Окончательное титрование вируса по 23 серологическим вариантам в реакции нейтрализации проводят во Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии (ВНИИВВиМ).
1.2. В лабораторию для исследования на катаральную лихорадку направляют:
— кусочки селезенки и лимфатические узлы от павших или убитых животных в свежем виде или консервированные 30%-ным раствором глицерина, приготовленным на фосфатно-буферном растворе (рН 7,2. 7,4);
— пробы крови от больных животных, взятые в период температурной реакции во флаконы в количестве 10 мл, пробы стабилизируют равным объемом антикоагулянта — раствором Эдингтона следующего состава: щавелевокислый калий — 5 г, карболовая кислота — 5 г, глицерин — 500 мл, дистиллированная вода — 500 мл;
— кусочки скелетных мышц, сердца, языка, губ, стенок книжки и рубца, фиксированные 10%-ным раствором формалина для патологогистологического исследования, а также нефиксированные кусочки лимфатических узлов, селезенки, легких, печени и почек с надпочечниками;
— сыворотку крови для серологических исследований от больных или переболевших животных в количестве 2. 3 мл.
Патологический материал для вирусологических исследований отбирают не позднее, чем через два часа после гибели животных, в стерильные флаконы или пробирки и доставляют в лабораторию в термосе со льдом.
Сыворотку крови для серологических исследований можно сохранять при температуре -20°С и ниже. Консервирование сывороток химическими реактивами не допускается.
2.1. Для гистологического исследования готовят парафиновые срезы из фиксированных 10%-ным раствором формалина кусочков скелетных мышц, сердца, языка, губ, стенок книжки и рубца и окрашивают гематоксилин-эозином.
Для выявления внутриклеточных цитоплазматических включений берут кусочки лимфатических узлов, селезенки, легких и почек с надпочечниками, фиксируют их в жидкости Карнуа (спирт этиловый — 60 мл, хлороформ — 30 мл, ледяная уксусная кислота — 10 мл) и заливают в парафин. Срезы окрашивают метиловым зеленым — пиронином или ШИК-реакцией.
При исследовании гистологических препаратов необходимо иметь в виду, что в случае заболевания животных катаральной лихорадкой обнаруживают резко выраженные поражения микроциркуляторного русла в скелетных мышцах и мышечных волокнах сердца, языка, губ — колбовидное набухание, гомогенизацию, губчатый распад, лизис и некроз; в межмышечной соединительной ткани — сильный отек, кровоизлияния и лимфоидно-гистиоцитарный инфильтрат; в стенках книжки и рубца — некроз покровного эпителия и основы слизистой оболочки, а также отек, диффузные кровоизлияния и лимфоидный инфильтрат в соединительной ткани подслизистого слоя.
При окраске специальными методами срезы просматривают под микроскопом с иммерсионной системой, причем в цитоплазме ретикулярных клеток и макрофагов лимфатических узлов и селезенки, в клетках легких, печени, почках и надпочечников могут быть найдены цитоплазматические включения округлой или овальной формы красного цвета (метод Браше), пурпурного или лилово-красного (ШИК-реакция). Часто обнаруживают значительное уменьшение количества лимфоцитов в селезенке и лимфатических узлах (опустошение).
2.2. По обнаруженным характерным патологогистологическим изменениям и тельцам-включениям ставят предварительный диагноз на катаральную лихорадку овец.
3.1. Подготовка материала к исследованию
3.1.1. Для проведения исследований из патологического материала (селезенки, лимфатических узлов) готовят 10%-ную суспензию на фосфатном буферном растворе (рН 7,4. 7,6) или на питательной среде с 0,5% гидролизата лактальбумина, к которой добавляют 1000 ЕД пенициллина и 500 мкг стрептомицина на 1 мл. Патологический материал, консервированный глицерином, предварительно отмывают в фосфатном буферном растворе (рН 7,4. 7,6).
Приготовленную суспензию центрифугируют 30 мин при 2000. 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную пробирку, помещают в холодильник и выдерживают при 2. 4°С в течение 3. 4 ч. Затем делают высевы на питательные среды (МПБ, МПА) для исключения бактериального загрязнения.
Через сутки, при отсутствии роста микрофлоры на питательных средах, надосадочную жидкость используют для заражения клеточных культур и куриных эмбрионов.
3.1.2. Пробы крови с антикоагулянтом центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин. Осадок эритроцитов трижды промывают стерильным физиологическим раствором (рН 7,2. 7,4), затем готовят 20%-ную суспензию эритроцитов на фосфатном буферном растворе (рН 7,4. 7,6) для заражения культур клеток и куриных эмбрионов.
3.2. Выделение вируса на культуре клеток
3.2.1. Выделяют вирус на первично-трипсинизированной культуре клеток почки ягнят (ПЯ) или перевиваемой линии клеток ВНК-21.
3.2.2. В матрасы на 100 мл (не менее 5) с культурой клеток ПЯ или ВНК-21 после удаления ростовой среды вносят 2. 3 мл суспензии исследуемого материала и равномерно распределяют ее по монослою клеток.
Матрасы помещают в термостат на 1 ч при 37°С, после чего вносят поддерживающую среду в количестве 10. 15 мл (для культуры клеток ВНК-21 — среду Игла с двойной концентрацией аминокислот; для ПЯ — 0,5%-ный раствор гидролизата лактальбумина без сыворотки).
Контролем служат матрасы с незараженной культурой клеток, в которых ростовая среда заменена поддерживающей.
3.2.3. Матрасы, зараженные исследуемым материалом, и контрольные помещают в термостат при 37°С. Для учета цитопатического действия вируса (ЦПД) проводят ежедневно микроскопическое исследование клеточных культур в течение 7 дней.
3.2.4. Цитопатическое действие вируса в культуре клеток ВНК-21 можно обнаружить через 36. 40 ч по наличию округлых клеток, с последующим разрушением всего монослоя. ЦПД вируса в культуре клеток ПЯ проявляется на 6. 7-й день зернистостью, округлением клеток, образованием тяжей, отслоением клеток от стекла.
В контрольных незараженных культурах цитопатические изменения должны отсутствовать.
3.2.5. При выявлении в культурах ЦПД отбирают из матрасов культуральную жидкость в объеме 0,4 мл для заражения монослоя клеток аналогичной культуры, выращенных на стеклянных пластинках (стеклышках), в пробирках или пенициллиновых флаконах. После выдерживания зараженных культур в термостате при 37°С в течение 72 ч стеклышки извлекают, высушивают на воздухе, фиксируют 10 мин в охлажденном при температуре -20°С ацетоне и используют для идентификации вируса в иммунофлуоресценции.
3.2.6. При отсутствии цитопатического действия вируса (ЦПД) проводят два последовательных пассажа в аналогичной клеточной культуре.
3.3. Выделение вируса на куриных эмбрионах
3.3.1. Для выделения вируса на куриных эмбрионах (КЭ) суспензию исследуемого материала (см. п.3.1) вводят 8. 9-дневным КЭ в желточный мешок в дозе 0,2. 0,3 мл или 13. 14-дневным КЭ внутривенно в дозе 0,1. 0,2 мл. Каждым материалом заражают не менее 5 эмбрионов.
3.3.2. Зараженные куриные эмбрионы помещают в термостат при 33,5°С и выдерживают в течение 5 дней. В этот период эмбрионы овоскопируют два раза в сутки. Куриные эмбрионы, погибшие в течение первых 24 ч, уничтожают (неспецифическая гибель), остальные эмбрионы после гибели и все оставшиеся живыми на 5-е сутки после заражения охлаждают в холодильнике 2. 4 ч при 2. 4°С, затем их вскрывают и исследуют зародыш на наличие макроскопических изменений. Характерными для возбудителя катаральной лихорадки является вишнево-красная окраска погибших куриных эмбрионов с многочисленными кровоизлияниями на голове и туловище.
3.3.3. Для идентификации выделенного вируса готовят 10%-ную суспензию из эмбрионов (без головы) и заражают клеточные культуры (см. п.3.2.5).
3.3.4. При сохранении жизнеспособности эмбрионов или отсутствии характерных изменений у погибших проводят два последовательных пассажа на КЭ, используя 10%-ную суспензию (см. п.3.3.3).
3.4.1. Для идентификации вируса пользуются прямым и непрямым методом иммунофлуоресценции.
3.4.2. При прямом методе на стеклянные пластинки (стеклышки) с зараженной культурой клеток наносят специфическую флуоресцирующую сыворотку в рабочем разведении. Препараты помещают во влажную камеру на 30 мин при 37°С, затем их промывают в двух сменах фосфатного буферного раствора по 10 мин.
В качестве контроля окрашивают стеклышки с незараженной культурой клеток.
3.4.3. При непрямом методе на стеклышки с зараженной культурой клеток наносят специфическую (немеченую) сыворотку катаральной лихорадки в рабочем разведении. Для контроля на часть препаратов наносят нормальную сыворотку овцы.
Препараты помещают во влажную камеру и выдерживают в термостате 30 мин при 37°С, затем дважды их промывают физиологическим раствором (рН 7,2. 7,4) по 10 мин и после подсушивания наносят антивидовую флуоресцирующую сыворотку в рабочем разведении. Окрашивают их во влажной камере 30 мин при 37°С. После промывания препаратов в двух сменах фосфатного буферного раствора (рН 7,2. 7,4) их подсушивают и просматривают в люминесцентном микроскопе.
3.4.4. При положительном результате в препаратах обнаруживают ярко светящиеся зелено-желтым цветом гранулы, конгломераты в цитоплазме и перинуклеарной зоне или такой же интенсивности диффузное свечение всей или большей части цитоплазмы.
В контрольных препаратах аналогичное свечение должно отсутствовать.
3.4.5. Метод иммунофлуоресценции является группоспецифическим и им может быть идентифицирован любой возбудитель из 23 серологических антигенных вариантов.
Для окончательного установления типа возбудителя применяют реакцию нейтрализации (во ВНИИВВиМ).
4.1. Для постановки биологической пробы используют овец породы «прекос» 6. 8-месячного возраста из хозяйства, благополучного по инфекционным болезням.
Перед заражением исследуют сыворотку крови овец на наличие антител к вирусу катаральной лихорадки в РДСК и РДП.
4.2. Биопробу ставят на двух овцах, которым вводят суспензию исследуемого материала внутривенно в дозе 10 мл.
4.3. Результаты биологического исследования считают положительными в случае повышения температуры (до 41. 42°С) у овец на 5. 7-й день после заражения; появления гиперемии слизистых оболочек рта и носа, отека губ, языка; эрозии в уголках губ, на деснах, языке; угнетения; поражения конечностей; цианоза слизистых оболочек и языка у отдельных овец, выпадения шерсти.
4.4. При отсутствии характерных клинических симптомов заболевания катаральной лихорадкой от зараженных овец берут пробу крови в период температурной реакции (или на 5. 7-е сутки после заражения) для выделения вируса на культуре клеток (см. п.3.2) и через 2. 3 недели после заражения исследуют сыворотки крови в РДСК, РДП для обнаружения специфических антител.
5.1. Реакция длительного связывания комплемента (РДСК) и реакция диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП) — групповые специфические методы, применяемые для обнаружения антител к вирусу катаральной лихорадки в сыворотке крови овец, коз и крупного рогатого скота, переболевших данной болезнью (ретроспективная диагностика).
У крупного рогатого скота серологическая реакция на вирус может быть слабой, поэтому при постановке РДСК антиген берут в меньшем разведении.
5.2. Реакция длительного связывания комплемента
5.2.1. Компоненты реакции:
— сыворотки испытуемые и контрольные (специфическая и контрольная);
— антигены — специфический и нормальный;
— эритроциты барана — 2%-ная взвесь;
— гемолитическая сыворотка (гемолизин) биофабричного производства;
— комплемент — биофабричного производства или свежая сыворотка морской свинки;
— 0,85%-ный раствор химически чистого хлорида натрия на дистиллированной воде, рН 7,2. 7,4.
5.2.2. Подготовка компонентов реакции
Испытуемые сыворотки разводят физиологическим раствором в отношении 1:8, контрольные — до рабочего разведения, указанного на этикетке. Разведенные сыворотки мелкого рогатого скота инактивируют 30 мин при 60°С, крупного рогатого скота — при 58°С.
Проросшие и гемолизированные сыворотки для исследования непригодны.
Специфический и нормальный антигены разводят физиологическим раствором до объема, указанного на этикетке. При исследовании сывороток крупного рогатого скота рабочее разведение антигенов в два раза ниже указанного на этикетке.
Эритроциты барана отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500. 3000 об/мин в течение 10 мин до полной прозрачности надосадочной жидкости и готовят 2%-ную взвесь из осадка.
Гемолизин используют в четырехкратном титре. Так, при титре гемолизина 1:3000 его рабочее разведение 1:750.
Для приготовления гемолитической системы гемолизин в рабочем разведении смешивают с равным объемом 2%-ной взвеси эритроцитов и выдерживают 20. 30 мин при комнатной температуре.
Комплемент титруют в гемолитической системе перед каждой постановкой реакции. Для этого берут 10 пробирок. В первую вносят 5,4 мл, а в остальные по 1 мл физиологического раствора. Затем в первую пробирку добавляют 0,6 мл разведенного до первоначального объема комплемента, хорошо перемешивают и переносят 5 мл во вторую пробирку, из второй — 5 мл в третью и т.д. Получают ряд последовательных разведений комплемента от 1:10 до 1:51,5. Для определения титра комплемента из каждого его разведения переносят по 0,1 мл в соответствующую пробирку основного ряда.
Схема приготовления разведений и титрования комплемента дана в таблице 12*.
________________
* Нумерация рисунков и таблиц сквозная по всему тексту Сборника. — Примечание изготовителя базы данных.
Титром комплемента считают наибольшее его разведение, дающее полный гемолиз эритроцитов. Рабочее разведение соответствует разведению комплемента в четвертой пробирке влево от последней пробирки с полным гемолизом. В приведенном примере титр комплемента — 1:29,8; рабочее разведение для главного опыта — 1:14,4.
Расчет количества чистого комплемента, необходимого дли постановки главного опыта, делают по формуле
где А — доза комплемента для главного опыта; В — количество пробирок главного опыта; С — рабочее разведение комплемента.
Схема разведения и титрования комплемента
источник