Меню Рубрики

Для бактериологического исследования на дифтерию берут

Лечение простуды и гриппа

Диагностика дифтерии часто вызывает затруднения. Это связано с тем, что заболевание имеет разнообразные формы проявления. Мазок на дифтерию – это бактериологический метод исследования, который является основным в лабораторной диагностике. Анализ позволяет выделить дифтерийную палочку (Corinebacterium diphtheriae) из очага поражения, определить ее тип и токсигенность (свойство палочки продуцировать экзотоксины в окружающую среду).

Независимо от выявленного очага поражения при подозрении на дифтерию мазок берется из зева и носа. Это необходимо для того, чтобы выявить комбинированные формы заболевания. Для бактериологического анализа берут слизь и пленки.

Нельзя допускать попадание крови в исследуемый биоматериал, так как она обладает бактерицидными свойствами. Это может исказить результаты анализов.

Бактериологический метод – это выделение в чистом виде дифтерийной палочки путем посева материала, взятого у пациента, на специальные питательные среды. В лаборатории изучают свойства патогенного микроорганизма и дают заключение. До того как забирать материал, нельзя проводить лечение антибактериальными препаратами.

Бактериологическое исследование имеет один недостаток. Он связан с тем, сколько делается анализ. Продолжительность исследования на дифтерию в среднем составляет 2-3 суток. Для того, чтобы результативность метода была максимальной, материал после взятия необходимо доставить в лабораторию как можно быстрее.

Для бактериологического анализа собирают слизь из стенок слизистой горла, а также пленки. Важным условием является взятие материала натощак. Лучше всего его сдавать с утра после сна. Если пациент поел, то ротовую полость следует прополоскать от остатков пищи, а анализы брать спустя 2 часа.

Мазок из зева на дифтерию нужно брать аккуратно. Во время забора материала нельзя касаться слизистых оболочек ротовой полости, языка, зубов. В этих местах часто находятся ложнодифтерийные палочки. По своему строению и биохимическим свойствам они очень схожи с настоящим возбудителем дифтерии. Если в области горла и миндалин есть налет, то мазок нужно брать по его краям.

Алгоритм взятия мазка на дифтерию из зева:

Перед тем как взять мазок из носа на дифтерию, носовые ходы необходимо тщательно прочистить путем высмаркивания или применяя сухие ватные палочки (специальные фитили). Если в носу есть корочки, то их необходимо удалить с осторожностью, чтобы не повредить слизистую и не вызвать капиллярное кровотечение.

Тампон для взятия материала из носа готовится по такому же принципу, как и тампон для зева, только он меньшего размера. Вводить его нужно медленно и аккуратно, так, чтобы каждая сторона тампона касалась всех стенок носового хода.

У пациентов мазок из зева и носа на дифтерию берут вместе и отправляют в лабораторию. Для более точного диагноза посевы проводят незамедлительно и сразу на нескольких питательных средах.

Для культивирования дифтерийной палочки посев производят на среды Костюковой (жидкая) и Клауберга (плотная). В их состав входит гелурит натрия и калия, а в плотной среде также содержится гемолизированная кровь и эритроцитарная масса.

На среде Костюковой рост дифтерийной палочки выглядит в виде повсеместного потемнения, на среде Клауберга возбудитель заболевания растет в виде темных или черных полосок.

Если в ходе лабораторных исследований токсигенность выделенной палочки подтверждена, то диагноз на дифтерию положительный. Если выделенный возбудитель оказался нетоксигенный, то окончательный диагноз выносится на основе клинических симптомов болезни.

В норме у здорового человека дифтерийная палочка не присутствует в слизистой зева и не обнаруживается при бактериологическом исследовании.

Анализ на дифтерию не всегда может быть точным. На его результативность влияют такие факторы:

  • несоблюдение правил взятия мазков из носа и зева;
  • прием антибактериальных средств, сульфаниламидных препаратов;
  • несвоевременная доставка взятого материала в лабораторию (с момента взятия прошло более 2-3 часов), после истечения этого срока в биоматериале начинает размножаться сапрофитная (сопутствующая) микрофлора, постепенно развиваются аутолитические процессы, что губительно отражается на дифтерийной палочке.

Мазки на выявление дифтерии берут не только у пациентов с клиническими проявлениями заболевания. Анализы также проводят людям, контактировавшим с больным для своевременного выявления инфекции. Бактериологическое исследование в обязательно порядке назначают пациентам после проведенного лечения для контроля эффективности медикаментозной терапии.

© 2017 pulmono.ru · Копирование материалов разрешено только при указании источника в виде активной индексируемой ссылки.
Вся информация на сайте pulmono.ru предназначена только для ознакомления и не является инструкцией к действию.
Для получения медицинской помощи настоятельно рекомендуем обратиться к врачу.

Простудные заболевания часто сопровождаются покраснением горла, отеком, болью и пр. симптомами, характерными для инфекционных заболеваний, поэтому врач может назначить мазок на дифтерию – специальный анализ, который позволит обнаружить наличие опасных бацилл Леффлера.

Эти бактерии передаются от человека к человеку воздушно-капельным путем и являются возбудителями опасного инфекционного заболевания, дифтерии, которое без должного лечения может привести к серьезным отклонениям в работе различных органов и даже летальному исходу.

Мазок на дифтерию – самый быстрый и безопасный способ диагностировать заболевание и начать правильную антибактериальную терапию.

Биоматериал для проведения лабораторных исследований берет врач, хотя процедура забора мазка достаточно проста и безболезненна.

Мазок берут из зева и носа. Для обеих процедур используются специальные петли из проволоки, обмотанные стерильной ватой, или тонкие деревянные палочки со стерильной ватой на конце.

Для забора мазка из носа врач вводит палочку или петлю на 1-2 см в каждую ноздрю поочередно и аккуратно проводит ватой по слизистой.

Для забора мазка из зева врач сначала фиксирует язык пациента одноразовым шпателем, а затем аккуратно проводит палочкой по небным дужкам, гортани, миндалинам.

Наиболее достоверные результаты дает мазок, взятый ближе к воспаленным тканям, рядом с пленками или в области наибольшей гиперемии. Важно, чтобы в процессе забора материала вата не касалась слизистой ротовой полости, языка или неба.

Палочку с биоматериалом помещают в сухую стерильную пробирку, маркируют фамилией и именем пациента, областью, из которой был взят мазок (нос или ротоглотка).

Сохраненный таким образом материал должен быть доставлен в лабораторию в течение трех часов, а затем храниться в холодильнике.

Если врач считает, что в ближайшие часы не сможет доставить материалы в лабораторию, то мазок помещают в специальный консервант, раствор глицерина. Результаты лабораторных исследований в последнем случае придется ждать немного дольше (3-4 дня).

Чтобы мазок из зева на дифтерию показал максимально точные и достоверные результаты, к процедуре необходимо подготовиться.

Мазок из носовой области берут после того, как пациент прочистит пазухи (высморкается), и особых требований к соблюдению режима перед анализом нет.

Хотя врачи рекомендуют избегать применения капель и спреев против насморка в течение 2-3 часов перед процедурой.

Для получения достоверных результатов анализа мазка из зева важно, чтобы пациент не находился на антибактериальном лечении, не принимал антибиотики. За 2-3 часа до проведения процедуры рекомендуется воздержаться от еды и питья, не принимать антибактериальных пастилок, спреев и других медикаментов, не полоскать горло.

Наиболее достоверными считаются мазки, взятые у пациента натощак. Если по каким-либо причинам пациент не соблюдал перечисленных рекомендаций, то важно сообщить об этом врачу, чтобы в лаборатории мазок исследовали с учетом возможных искажений.

Мазок на дифтерию исследует наличие бацилл Леффлера на слизистой пациента, поэтому результаты анализа достаточно очевидны: бактерии либо обнаружены, либо нет.

Если у пациента диагностируют дифтерию, то его необходимо срочно изолировать, а всех членов семьи, имевших контакт с больным, осмотреть на наличие признаков заболевания.

Если дифтерию обнаруживают у ребенка, посещавшего детский сад или школу, то рекомендуется сообщить об этом в учреждение, чтобы родители других детей могли проявить бдительность к состоянию здоровья своих малышей.

Анализ на дифтерию может дать положительный результат и у внешне здоровых людей. В таком случае решение о проведении дальнейших исследований или назначении терапии принимает врач.

Положительный результат на дифтерийную палочку без других симптомов может свидетельствовать о том, что заболевание протекает скрыто, или о том, что человек является носителем бактерий, но сам не подвержен заболеванию.

Такой результат нередко бывает у взрослых, ухаживающих за больными дифтерией: бактерии присутствуют, но иммунная система предотвращает развитие болезни.

Отрицательный результат анализа («нет роста») в большинстве случаев означает, что пациент дифтерией не болеет, а воспаление в горле вызвано другими микроорганизмами.

Исключение составляют отрицательные результаты мазка на дифтерию, взятые у человека, находящегося на или недавно завершившего бактериальную терапию. В таком случае мазок придется дать повторно через 1 – 3 недели.

Если у пациента присутствуют все признаки развития заболевания, но мазок дает отрицательный результат, то диагноз «дифтерия» все равно считается подтвержденным, поскольку вывод о наличии заболевания врач выносит в первую очередь по внешним признакам.

В таких случаях может быть назначена повторная сдача анализа с соблюдением всех правил подготовки к мазку либо сразу назначено соответствующее лечение.

Дифтерия – это острое инфекционное заболевание. Несмотря на то, что заболевание провоцируют особого рода бактерии, основные негативные последствия вызывают не сами микроорганизмы, а токсичные продукты их жизнедеятельности.

Дифтерия передается от человека к человеку воздушно-капельным путем, т. е. при разговоре, чихании, поцелуе и пр.

В некоторых случаях заболевание может передаваться через третьих лиц, посуду, предметы обихода.

Поэтому при вспышке заболевания в детских учреждениях могут объявить дифтерийный карантин, чтобы продезинфицировать помещение и игрушки.

Чаще всего дифтерия проявляется схожими с ангиной симптомами: болью в горле, покраснением, отеком, появлением белых или зеленоватых гнойных пятен или пленок, повышением температуры.

Но существуют и скрытые формы заболевания, когда заподозрить заболевание по внешним признакам сможет только врач.

Вопреки распространенному мнению дифтерия поражает не только ротоглотку и носовую полость: заболеванию подвержены кожные покровы, глаза, уши, половые органы.

Дифтерия – инфекционное заболевание, возбудителем которого стали бактерии, локализующиеся на ротоглотке, носовых проходах. Реже болезнь поражает глаза и ушную раковину. Внешним признаком патологии, является налет в виде пленки на очаге поражения. Для определения клинической картины необходим мазок на дифтерию.

Определить наличие палочки Леффлера, которая является возбудителем дифтерии, можно по симптомокомплексу. Такие проявления станут побудительной причиной для сдачи мазка на дифтерию:

  • резкий скачок температуры, гипертермия достигает отметки 38 градусов и выше;
  • сильные головные боли, общее недомогание;
  • при дифтерии сильные приступы тахикардии;
  • увеличение и уплотнение лимфатических узлов, расположенных около очага поражения, при пальпации они болезненные.

Резкий скачок температуры признак сдачи мазка на дифтерию

Если дифтерия не токсической формы, через три дня нормализуется температура, пленка приобретает мутно-белый цвет. При токсической форме дифтерии к симптомам прибавляется лихорадка, синюшный цвет носогубного треугольника, снижение артериального давления. При интоксикации появляются галлюцинации, отек и уплотнение в области шеи.

Патология входит в список заболеваний, против которых проводится вакцинация в детском возрасте. При несвоевременном обнаружении и лечении дифтерия способна вызвать:

  • асфиксию (удушье);
  • токсический шок;
  • почечную недостаточность;
  • поражение нервной системы;
  • аномалии сердечной мышцы (миокардит).

При несвоевременном лечении дифтерия способна вызвать токсический шок

В частых случаях мазок на флору и наличие палочки Леффлера, проводится не только для постановки диагноза и подбора терапии, но и для профилактики:

  • при трудоустройстве в детское заведение, сферу питания, медицинское учреждение, берется мазок на дифтерию;
  • перед началом учебного года;
  • во время беременности, чтобы исключить риск осложнений;
  • после контакта с инфицированным дифтерией.

С помощью профилактических мероприятий удается предотвратить распространение эпидемии, связанной с бактериальным возбудителем.

Для достоверности анализа на дифтерийную палочку, необходимо соблюдать ряд рекомендаций. С учетом того, что мазок берется с ротовой полости и носовых проходов перед забором необходимо отказаться:

Отказ за несколько дней до сдачи мазка сосудосуживающих назальных препаратов

  • от сосудосуживающих назальных препаратов за два дня до процедуры;
  • от применения мазей на основе антибиотиков;
  • в день сдачи мазка из носоглотки от приема пищи;
  • непосредственно перед анализом от чистки зубов.

Если применяются препараты местного действия, в составе которых антибиотики, то их исключают из терапии за 2 дня до сдачи мазка на дифтерию. Прием перорально антибиотиков прекращается за две недели до анализа. При нарушении рекомендаций результат бактериологического исследования может быть неточным, что повлияет на дальнейшее лечение дифтерии.

Процедура проведения мазка на флору несложная, здесь нет необходимости в оборудовании, основное требование – стерильность инструментов.

Как правильно взять мазок из зева

Для исследования на предмет дифтерии собирается слизь или фрагменты пленки со стенок горла. Предварительно пациент предупреждается о нежелательности приема пищи перед процедурой. Если он поел, тщательно полощется ротовая полость, забор анализа на дифтерию проводится по истечении 2 часов.

Мазок из зева делается специалистом, условия для забора – нельзя касаться слизистой горла или языка, избегать контакта с зубами. На данных участках локализуются ложнодифтерийные палочки, по своему строению они схожи с оригиналом, но возбудителем заболевания не являются. Если в полости есть очаги пленочного налета, мазок берется по краю.

Последовательность процедуры:

  • пациентом принимается позиция, лежа или сидя;
  • максимально широко открывается рот, при помощи шпателя фиксируется язык, для предотвращения рвотного и глотательного рефлексов;
    спиртом обрабатывается зона забора;
  • для процедуры берутся стерильные ватные или марлевые тампоны;
  • их наматывают на деревянную или металлическую палочку;
  • помещается конструкция в 9% физиологический раствор;
  • осторожно, не касаясь стенок ротовой полости, берут мазок из зева с места наибольшей концентрации палочки Леффлера, по краю пленочного налета.

Палочка с биологическим материалом помещается в стерильную пробирку для дальнейшего микроскопического исследования.

Алгоритм проведения процедуры мазка из носа не отличается от анализа из зева

После получения мазка из носоглотки и носовых проходов, материал поступает в лабораторию для высевания флоры. Тампоны со слизью помещают в специальную среду, стимулирующую их рост. Лаборант отмечает, какие из них являются доминантами. Процесс роста бактерий занимает 48 часов. Меняя состав питательной среды до тех пор, пока колония перестает расти. Затем приступают к анализу колониеобразующей микрофлоры.

Исследованием результата мазка из носа и зева занимаются врачи-микробиологи, занося результаты в специальный бланк. Нормальное содержание сапрофитов и условных патогенов: или колониеобразующих микроорганизмов на 1 миллиметр. Болезнетворные бактерии должны отсутствовать полностью.

Исследованием результата мазка из носа и зева

После определения рода и вида, тестируют чувствительность к антибиотикам, противомикробным и антибактериальным препаратам. Лечение дифтерии назначается с учетом медикаментозного препарата, к которому менее устойчив патогенный микроорганизм.

Синдром тонзиллита – распространенное явление при заболеваниях инфекционной природы. Небные миндалины поражаются и при такой грозной патологии, как дифтерия. И хотя она возникает преимущественно в детском возрасте, но болеют и взрослые. Поэтому для подтверждения диагноза крайне необходимо провести лабораторное исследование слизи из носоглотки. Анализ на дифтерию часто назначают ЛОР-врачи и инфекционисты.

Читайте также:  Дифтерия прививка реакция на нее

Трудно найти человека, который бы не слышал о дифтерии. Это инфекционное заболевание, характеризующееся фибринозным воспалением слизистой оболочки носоглотки. Возбудителем является микроб под названием Corynebacterium diphtheriae (бацилла Леффлера). Это небольшие грамположительные палочки, которые имеют утолщения на концах и в мазке располагаются под углом друг к другу. Они вырабатывают очень сильный токсин и ферменты, разрушающие клетки (нейраминидаза, гиалуронидаза, цистиназа).

Дифтерия передается воздушно-капельным путем. Болезнь начинается остро, спустя 3–5 суток после контакта с инфицированным человеком. Повышается температура тела, возникают явления интоксикации: слабость, вялость, бледность кожи. Боль в горле умеренная. При осмотре обращает на себя внимание наиболее специфический признак дифтерии – фибринозные пленки. Они имеют такие характеристики:

  • Цвет серовато-белый, с перламутровым оттенком.
  • Возвышаются над окружающей поверхностью (эффект плюс-ткань).
  • Прочно прикреплены к подлежащим тканям (трудно снимаются).
  • Обнажают кровоточащую поверхность.
  • Консистенция плотная.
  • Не растираются на предметных стеклах.
  • Тонут в воде.

Вокруг пленок выявляется неяркая гиперемия застойного типа. Токсические формы дифтерии сопровождаются выраженным отеком мягких тканей, который распространяется на шею. Пленки могут стать механическим препятствием для прохождения воздуха по верхним отделам респираторного тракта (истинный круп). А токсины оказывают повреждающее действие на нервную систему, сердце, почки.

Мазок из зева и носа на бациллу Леффлера проводится пациентам, у которых есть подозрение на дифтерию. То есть врач при осмотре мог увидеть специфические признаки болезни или человек, как стало известно из анамнеза, контактировал с источником инфекции. Анализ необходимо делать еще и в динамике, для оценки эффективности специфической терапии. Но наряду с этим, показаниями для выполнения мазков могут служить другие заболевания, протекающие с синдромом тонзиллита:

  • Банальные ангины (фолликулярная, лакунарная).
  • Инфекционный мононуклеоз.
  • Ангина Симановского-Венсана.
  • Паратонзиллярный абсцесс.

С дифтерией гортани приходится дифференцировать ларинготрахеит, ложный круп, эпиглоттит. Эти заболевания также могут быть причиной для проведения исследования на коринебактерии. Поэтому спектр показаний для мазков из носа и зева очень широкий.

Анализ выполняется в тех случаях, когда необходимо подтвердить диагноз дифтерии или исключить его.

Чтобы результат анализа оказался достоверным, необходимо качественно подготовиться к взятию носоглоточной слизи. Поэтому перед тем, как сдавать анализ, необходимо учесть следующие моменты:

  1. Не принимать антибиотики (на протяжении 10 суток).
  2. Не использовать антисептики в любом виде – полоскания, орошения, аппликации (в течение 5 дней).
  3. Не чистить зубы (в день исследования).
  4. Прийти натощак (8–10 часов голодания).
  5. Высморкаться (непосредственно перед анализом).

Пациент приходит в лабораторию или кабинет инфекционных заболеваний с направлением лечащего врача. Все остальное выполнит медицинский работник.

Мазок из зева на дифтерию берется стерильным тупфером – палочкой с ватным тампоном на конце. Сначала пациента просят широко открыть рот и немного запрокинуть голову назад. Берут материал из мест с наибольшими воспалительными изменениями: около пленок или в участке гиперемии. Затем вторым тупфером проводят по слизистой оболочке носа, заводя его в каждую ноздрю на 2 см и проворачивая там. Каждую палочку опускают в отдельную пробирку, закрывают ее и маркируют: пишут фамилию пациента и место взятия (зев или нос). В лабораторию необходимо доставить биоматериал на протяжении двух часов. Хранится он в холодильнике.

Слизь из носоглотки можно исследовать несколькими путями. Сначала анализируют цитологический состав биоматериала, а затем засевают его на питательные среды. И каждая процедура имеет свои особенности.

Полученный мазок из носа и зева исследуют под микроскопом. Для этого слизь наносят на предметное стекло, фиксируют в пламени горелки и окрашивают по Грамму. После этого рассматривают, какие клетки присутствуют в материале и идентифицируют возбудителя. Обнаружив палочки, схожие по строению с дифтерийными, переходят ко второму этапу исследования.

Более трудоемким и длительным считается посев на дифтерию. Но он крайне важен в плане определения токсигенности и других биохимических свойств выявленных штаммов. Сначала слизь из носоглотки наносят на теллуритовый агар. При выявлении роста колонии отсевают на другие питательные среды (жидкие или твердые). Особенно важно выявить у чистой культуры признаки токсического действия и цистиназную активность, что позволит дифференцировать палочки Леффлера от непатогенных коринебактерий.

Посев слизи из зева и носа на дифтерию – процесс не такой быстрый, как хотелось бы. Но он позволяет точно идентифицировать возбудителя по его культуральным свойствам.

источник

Диагностика дифтерии – непростая задача, так как заболевание часто проявляет себя по-разному. Мазок на дифтерию из зева и носа – бактериологический способ проверки, являющийся основным при лабораторном исследовании ЛОР-заболеваний. Такой анализ не дает возможность обнаружить палочку дифтерии из пораженного места, выявить ее свойство выделять экзотоксины во внешнюю среду.

Если имеется подозрение на дифтерию, то мазок всегда проводится из носа и зева. При этом не важно, в каком месте выявлено заражение. Это нужно, чтобы обнаружить комбинированные виды болезни. Для исследования бактерий производится забор пленки и слизи.

Внимание! Категорически запрещается проникновение крови в материал анализа. Кровь может изменить результаты исследования, она является бактерицидом.

Бактериологический способ – выделение исследуемой палочки посредством посева, взятого у больного материала на особые питательные среды. В лабораторных условиях проводится изучение патогенного микроба, и делается заключение. До забора мазка лечение антибиотиками не проводится.

Недостатком бактериологического анализа является его длительность проведения. Оно может достигать трех суток, а иногда больше. Для достижения высоких результатов, бактериологический материал нужно доставлять в лабораторию за короткое время.

Определение дифтерии осуществляется по целому набору симптомов.

Показаниями для мазка являются следующие симптомы:

  • резкое повышение температуры тела, которая может быть 38 градусов и более;
  • выраженные признаки тахикардии с приступами;
  • общая слабость, сильная боль в голове;
  • плотные лимфатические узлы возле очага поражения, их увеличение, болезненность лимфоузлов при пальпации.

Внимание! При нетоксической дифтерии температура тела приходит в норму, а пленка становится матово-белой. Если дифтерия имеет токсическую форму, то носогубный треугольник приобретает синюшный цвет, давление уменьшается, появляется лихорадка. Во время интоксикации организма могут появиться уплотнения и отек шеи, галлюцинации.

Дифтерия входит в перечень заболеваний, которые предупреждаются введением специальных вакцин детям.

Если дифтерия обнаружена поздно, то она может вызвать:

  • токсическое шоковое состояние;
  • почечную недостаточность;
  • признаки удушья;
  • миокардит – изменения сердца;
  • угнетение нервной системы.

Мазок на дифтерию из носа производится не только для выбора правильного лечения, но и для профилактики.

Это делается в следующих случаях:

  • при устройстве на работу в детский сад, школу, медицинское учреждение или на предприятие общественного питания;
  • перед учебным сезоном;
  • в период беременности, чтобы не допустить возникновения осложнений;
  • после общения с человеком, больным дифтерией.

Распространение дифтерии предотвращается путем принятия профилактических мер.

Чтобы исследование было достоверным, необходимо выполнение некоторых правил. Если учесть, что мазок делается в носовом проходе и полости рта, то перед процедурой забора материала запрещается:

  • за 2 дня до проведения мазка прием сосудосуживающих препаратов для носа;
  • использовать мази, в составе которых присутствуют антибактериальные вещества;
  • прием пищи;
  • чистка зубов перед исследованием.

При применении препаратов с содержанием антибиотиков для местного действия, за 2 дня до мазка их исключают. При пероральном приеме антибиотиков, их прием прекращают за 2 недели до исследования. Если условия не соблюдаются, результат исследования будет неточным, что скажется на результате лечения.

Пациент заблаговременно предупреждается о сдаче мазка. Перед процедурой нельзя принимать пищу. Если пациент принимал пищу, то необходимо тщательно прополоскать рот. Мазок забирается через 2 часа.

Для исследования с горла собираются частицы слизи. Мазок проводится только медицинским работником. При заборе материала запрещается касаться зубов, языка и слизи горла. На этих местах концентрируется ложная дифтерийная палочка, похожая на настоящую. Однако она не является возбудителем. Если во рту имеется налет, то мазок проводится по краю рта.

Порядок проведения мазка:

  • принять позицию сидя или лежа;
  • широко открыть рот, закрепить язык шпателем, чтобы не допустить возникновение рвотного рефлекса;
  • место взятия материала обработать спиртом;
  • взять стерильные тампоны, намотать на металлическую палочку;
  • поместить приготовленную палочку в 9-процентный физиологический раствор;
  • взять мазок из зева в том месте, где наибольшая вероятность скопления палочки Леффлера. При этом нельзя касаться полости рта.

После процедуры необходимо поместить палочку в стерильную стеклянную пробирку.

Внимание! Вместо марлевых тампонов, можно использовать ватные, а палочку для мазка можно использовать деревянную.

Порядок взятия мазка у пациента аналогичен тому, который действовал для зева. Перед началом процедуры нужно очистить проходы в носу ватными палочками. Их можно смочить водой. Вместо ватных палочек можно использовать марлевые жгуты.

Очистка проходов носа должна проводиться осторожно, не повреждая капиллярные сосуды. Выделения крови могут сделать результат исследования неточным. Тампон для носа необходим меньшего размера, по сравнению с зевом. Материал берется с поверхности проходов носа, а затем кладется в стерильную пробирку.

После проведения забора мазка, материал отправляется в лабораторные условия для посева микрофлоры. Исследуемые тампоны размещают в особую среду, которая повышает скорость роста. Весь процесс происходит в течение 2-х суток, пока рост колонии не прекращается.

Полученный материал лаборант изучает под микроскопом, предварительно разместив на специальном стекле. Далее используются специальные красители, для анализа состава клеток вещества.

Признаки палочки дифтерии сильно отличаются. Поэтому микроскопический анализ применяется в качестве предварительного, перед проведением посева. Микроскопия позволяет изучить, из чего состоит флора. Палочки дифтерии расположены в мазках по форме римской цифры «V». Окраска проводится разными методами: по Нейссеру, Граму. Но самой популярной стала окраска по Леффлеру.

Чтобы создать наилучшие условия размножения бактериологического материала, требуется подбор особой среды для их питания. Посев на дифтерию выполняется в условиях стерильного бокса на один из вариантов сред:

  • теллуритовый агар;
  • свернутую сыворотку Ру;
  • среда Клауберга;
  • теллуритовые дифсреды;
  • среда Костюковой.

Изъятый у пациента материал размещают в среде, после этого делают посев по поверхности. Чтобы правильно произвести посев, пользуются чашкой Петри. Инкубационный период проходит под строгим контролем температурного режима. Каждый день лаборант осуществляет контроль роста и вида растущих колоний бактерий. Чтобы выделить чистую культуру, колонии бактерий пересеивают на отдельные среды питания.

С помощью бактериального посева и вспомогательных диагностических исследований происходит подтверждение инфекционной болезни. Это позволяет вовремя назначить лечение, предупредить распространение опасной инфекции на окружающих людей.

В среде Костюковой палочки дифтерии растут в форме общего затемнения. В среде Клауберга рост бактерий проявляется черными полосками. Диагноз заболевания положительный, если при лабораторном анализе подтверждается токсигенность дифтерийной палочки. Если дифтерийная палочка нетоксигенная, то диагноз ставится по симптомам заболевания.

Важно знать! У здорового пациента палочка дифтерии отсутствует, и при исследовании не выявляется.

Исследование на дифтерию нередко дает неточные результаты.

Это объясняется несоблюдением правил исследования на бактерии:

  • прием сульфаниламидных лекарств, антибиотиков;
  • неправильно забран мазок на дифтерию из зева и носа;
  • взятый бактериологический материал не вовремя доставлен в лабораторные условия. После взятия пробы прошло больше двух часов, что способствовало размножению сапрофитной микрофлоры, и развитию аутолитических процессов. Это отрицательно влияет на палочку дифтерии.

Пробу на дифтерию проводят не только у людей с симптомами данной болезни. Исследование также делают людям, которые были в контакте с заболевшим пациентом. Это позволяет вовремя обнаружить опасную инфекцию. Анализ на бактерии дифтерии обязательно назначают людям, которые прошли назначенное лечение. Эффективность терапии медикаментами должна контролироваться врачом.

Чтобы правильно диагностировать дифтерию, проводится два вида исследования крови:

  • анализ на наличие антител;
  • общий анализ.

Иммунные комплексы, созданные иммунной системой человека, называют антителами. Они проявляют активность только против возбудителя, для борьбы с которым созданы. На другие бактерии антитела действовать не будут. Если анализ крови при дифтерии выявил наличие антител, количество которых со временем повышается, то высока вероятность заболевания дифтерией. Если их число снижается, значит пациент выздоравливает.

Существует несколько способов обнаружения антител в крови. Популярным методом стала реакция пассивной гемаглютинации. На поверхности эритроцитов помещается анатоксин. К эритроцитам добавляют пробу заболевшего пациента. Если антитела присутствуют, то они будут провоцировать склеивание эритроцитов. В противном случае такой реакции не будет.

Общий анализ крови при дифтерии не опровергает и не подтверждает заболевание. С помощью общего исследования крови выявляются воспалительные процессы. Это важно для назначения лечения и определения состояния больного.

О воспалительном процессе в организме свидетельствуют следующие факторы:

  1. Повышение количества лейкоцитов. Это клетки, действующие против инфекции. При попадании в организм чужеродных тел, количество лейкоцитов возрастает. После выздоровления их число приходит в норму.
  2. Увеличение скорости оседания эритроцитов. Она зависит от количества эритроцитов и наличия чужеродных веществ в крови. Во время воспаления в крови образуется много белков. Они склеивают эритроциты между собой, что вызывает увеличение СОЭ.

Анализ на дифтерию должен проводиться комплексно, с соблюдением всех условий и правил. Это позволит поставить своевременный правильный диагноз, и назначить эффективные препараты для лечения.

источник

Показания. Бактериологическому исследованию подлежат: 1) с диагностической целью больные с подозрением на дифтерию ежедневно в течение 3-х дней с момента обращения; больные с налетом на миндалинах, дужках, язычке, с подозрением на паратонзиллит, паратонзилярный абсцесс, инфекционный мононуклеоз, стенозирующий ларинготрахеит – однократно; 2) по эпидемическим показаниям все контактные – однократно; 3) с профилактической целью вновь поступающие в детские дома, школы-интернаты, специализированные учреждения для детей с поражением центральной нервной системы, санатории для детей с туберкулезной интоксикацией, психоневрологические санатории – однократно. Исследование направлено на выделение возбудителя и идентификацию его патогенных признаков, включая токсигеннность.

Аппаратура, инструментарий, медикаменты:

· исследуемый материал (слизь и пленки с миндалин, ротоглотки, носа, глаза, уха, раны, кожи, влагалища, пупочной ранки);

· стерильные ватные сухие тампоны или стерильные тампоны, смоченные 5 % раствором глицерина в физиологическом растворе с рН 7,6;

· среды обогащения, питательные среды;

· стерильные шпатели, проволочки, деревянные палочки, пробирки, предметные стекла;

· биксы, теплая грелка или сумка-«термос».

Техника выполнения

Для взятия материала используют стерильные сухие ватные тампоны, а при транспортировке в жаркое время – тампоны, смоченные 5 % раствором глицерина на физиологическом растворе. Материал с миндалин и носа берут отдельными тампонами, натощак или не ранее, чем через 2 ч после еды, при хорошем освещении с использованием шпателя, не касаясь тампоном языка, слизистой щек и зубов.

При наличии налетов материал берут с границы пораженной и здоровой ткани, слегка нажимая на них тампоном. Исследуют пленки с миндалин, гортани и других участков. При редких локализациях дифтерии – поражениях глаза, уха, раны и т.д. – берут материал из мест поражения, а также из зева и носа.

Читайте также:  В очаге инфекции дифтерии у контактных пациентов необходимо взять

После забора материала на посев его необходимо немедленно доставить в лабораторию. Эффективность бактериологического метода зависит от длительности периода между забором материала и посевом. Положительные результаты высоки при посеве у постели больного и маловероятны при посеве через 2-3 ч после забора материала.

Собранный из мест поражения материал засевают на элективные среды (Леффлера, Клауберга) и помещают в термостат при 37 о С. Предварительный ответ об обнаружении бактерий, подозрительных на дифтерию, выдают через 24-48 ч, а окончательный – через 48 ч (культура токсигенная) или через 72 ч (культура нетоксигенная). Токсигенность коринебактерий дифтерии определяют на плотных питательных средах методом преципитации в геле по Оухтерлони.

Для предварительной ориентации можно проводить микроскопию мазков с целью получения немедленного ответа. Для приготовления мазка-отпечатка необходимо приготовить чистое, обезжиренное эфиром предметное стекло. Ватный тампон, укрепленный на деревянной палочке или металлической проволочке, увлажняют изотоническим раствором хлорида натрия и вводят в носовой ход (или со слизистой небных миндалин), делают несколько вращательных движений. После этого тампон помещают на предметное стекло и производят отпечатки. В мазках при микроскопии обнаруживают попарно под углом друг к другу расположенные палочки-возбу­дители заболевания.

Дата добавления: 2016-01-07 ; просмотров: 2895 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ

источник

Цель: собрать материал для бактериологического ис­следования.

— стерильные пробирки с сухими ватными тампона­ми (2 шт.),

— стерильный шпатель в лотке,

— бланк-направление в лабораторию,

Обязательное условие: забор материала из зева про­водить натощак, до орошения или полоскания горла

.Подготовка к процедуре

1. Объяснить маме (ребенку) цель и ход проведения процедуры, полу­чить согласие. Обеспечение права на инфор­мацию, участие в процедуре. 2. Подготовить необходимое осна­щение. Выписать направление в лабора­торию. Обеспечение четкости выполне­ния процедуры. 3. Вымыть и осушить руки, надеть маску, перчатки Обеспечение инфекционной безопасности. 4. Поставить на инструментальный столик необходимое оснащение (расположив по правую руку). Стеклографом промаркировать пробирки «Н» , «3» (нос, зев). Создание удобства при прове­дении процедуры. 5. Усадить ребенка лицом к источ­нику света и при необходимости зафиксировать его с помощью по­мощника: а) ноги ребенка помощник обхва­тывает своими ногами; б) руки и туловище фиксирует од­ной рукой; в) голову держит, положив ладонь другой руки на лоб ребенку. Необходимое условие для про­ведения процедуры.

Выполнение процедуры

6. Извлечь ватный тампон из пробир­ки, маркированной знаком «Н», взяв его правой рукой за пробку, в кото­рую он вмонтирован. Маркировка «Н» означает — нос . 7. Большим пальцем левой руки при­поднять кончик носа ребенка Обеспечение доступа к слизис­той оболочке носовых ходов. 8. Осторожно ввести тампон враща­тельными движениями в один но­совой ход, затем в другой, плотно прикасаясь к их стенкам. Условие, обеспечивающее эф­фективность проведения проце­дуры. 9. Собрав материал, поместить там­пон в пробирку, не касаясь ее кра­ев. Обеспечение достоверности результата исследования. 10. Попросить ребенка широко от­крыть рот и шпателем нажать на корень языка Примечание: ребенку младшего возраста открыть рот с помощью шпателя, взяв его как писчее перо левой рукой, ввести в ротовую по­лость до зубов, повернуть ребром и провести по боковой поверхнос­ти десен до места окончания зу­бов, после чего перевернуть его плашмя, поместить на корень язы­ка и резко нажать на него. Обеспечение доступа к зеву . 11. Извлечь ватный тампон из про­бирки, маркированной знаком «3», взяв его правой рукой за пробку, в которую он вмонтирован. Маркировка «3» означает – зев. 12. Осторожно, не касаясь языка и щек, ввести тампон в полость рта. 13. Снять тампоном слизь с нёбных дужек и миндалин в следующей последовательности: дужка — мин­далина — язычок — дужка — мин­далина Примечание: при наличии плен­ки в зеве и подозрении на дифте­рию — материал собирать на гра­нице здоровой и пораженной тка­ни. Максимальное скопление диф­терийных палочек отмечается в данных участках. 14. Извлечь тампон из ротовой по­лости и поместить в пробирку, не касаясь ее краев. Обеспечение достоверности результата.

Завершение процедуры

15. Вымыть и обработать антисепти­ческим материалом руки в перчат­ках. Снять маску, перчатки. Вымыть и осушить руки. Обеспечение инфекционной бе­зопасности. 16. Отправить материал в бактерио­логическую лабораторию в сопро­вождении направления (не позднее 3 часов после забора при условии хранения в термостате или в сумке с грелками). Обеспечение достоверности ис­следования.

Забор материала на коклюш

( метод кашлевых пластинок)

Цель:собрать материал для бактериологического исследования

чашка Петри с питательной средой КУА;

стерильный шпатель в лотке;

— бланк — направление в баклабораторию;

Обязательное условие: забор материала производится натощак или через 2-3 часа после еды.

Подготовка к процедуре

Выполнение процедуры

Завершение процедуры

Этапы проведения: Обоснование
1. Объяснить ребёнку/маме цель и ход процедуры, установить доброжелательные отношения. 2. Подготовить необходимое оснащение. 3. Выписать направление в баклабораторию. 4. Поставить стеклографом номер на чашке Петри, соответствующий номеру в направлении. 5. Вымыть и осушить руки, надеть маску, перчатки. 6. Усадить ребёнка лицом к источнику света, при необходимости зафиксировать его при помощи помощника: А – усадить ребёнка на колени к помощнику, помощник охватывает ноги ребёнка своими ногами. Б – руки и туловище ребёнка помощник фиксирует, обхватив правой рукой. В – голову помощник держит, положив ладонь левой руки на голову ребёнка. Психологическая подготовка, осознанное участие в исследовании. Обеспечение чёткости проведения процедуры. Обеспечение инфекционной безопасности. Необходимое условие для проведения процедуры.
1.Взять чашку Петри и при появлении кашля открыть её, поднести ко рту ребёнка вертикально на расстоянии 5-10 см ото рта, улавливая 5-6 кашлевых толчков. Примечание: при отсутствии кашля вызвать кашлевой рефлекс, надавив шпателем на корень языка 2. Быстро закрыть чашку Петри и поставить в термостат с температурой 36-37 0 С Во время кашля во внешнюю среду выделяется большое количество возбудителя коклюша. Возбудитель не летуч. Возбудитель не устойчив во внешней среде.
1. Вымыть и обработать антисептическим раствором руки в перчатках. 2. Снять маску, перчатки, вымыть и осушить руки. 3. Записать результат 4. Немедленно отправить материал с направлением в баклабораторию Обеспечение инфекционной безопасности. Документирование результатов исследования. Обеспечение достоверности исследования

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студента самое главное не сдать экзамен, а вовремя вспомнить про него. 9746 — | 7375 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

источник

Диагностика дифтерии часто вызывает затруднения. Это связано с тем, что заболевание имеет разнообразные формы проявления. Мазок на дифтерию – это бактериологический метод исследования, который является основным в лабораторной диагностике. Анализ позволяет выделить дифтерийную палочку (Corinebacterium diphtheriae) из очага поражения, определить ее тип и токсигенность (свойство палочки продуцировать экзотоксины в окружающую среду).

Независимо от выявленного очага поражения при подозрении на дифтерию мазок берется из зева и носа. Это необходимо для того, чтобы выявить комбинированные формы заболевания. Для бактериологического анализа берут слизь и пленки.

Нельзя допускать попадание крови в исследуемый биоматериал, так как она обладает бактерицидными свойствами. Это может исказить результаты анализов.

Бактериологический метод – это выделение в чистом виде дифтерийной палочки путем посева материала, взятого у пациента, на специальные питательные среды. В лаборатории изучают свойства патогенного микроорганизма и дают заключение. До того как забирать материал, нельзя проводить лечение антибактериальными препаратами.

Бактериологическое исследование имеет один недостаток. Он связан с тем, сколько делается анализ. Продолжительность исследования на дифтерию в среднем составляет 2-3 суток. Для того, чтобы результативность метода была максимальной, материал после взятия необходимо доставить в лабораторию как можно быстрее.

Для бактериологического анализа собирают слизь из стенок слизистой горла, а также пленки. Важным условием является взятие материала натощак. Лучше всего его сдавать с утра после сна. Если пациент поел, то ротовую полость следует прополоскать от остатков пищи, а анализы брать спустя 2 часа.

Мазок из зева на дифтерию нужно брать аккуратно. Во время забора материала нельзя касаться слизистых оболочек ротовой полости, языка, зубов. В этих местах часто находятся ложнодифтерийные палочки. По своему строению и биохимическим свойствам они очень схожи с настоящим возбудителем дифтерии. Если в области горла и миндалин есть налет, то мазок нужно брать по его краям.

Алгоритм взятия мазка на дифтерию из зева:

  1. Для забора слизи из горла используют сухие стерилизованные тампоны из ваты или марли. Их наматывают на палочку из нержавеющей стали или дерева и помещают в стерильную пробирку.
  2. Перед тем как собрать материал, тампон увлажняют с помощью физиологического раствора (NaCl 0,9%).
  3. Забор слизи осуществляется в положении сидя или лежа.
  4. Пациента просят максимально широко открыть рот. Для фиксации языка его зажимают шпателем, придавливая книзу и кпереди.
  5. С осторожностью, не касаясь стенок рта, вводят тампон и собирают весь интересующий для исследования материал. Налет собирают на границе с пораженными участками слизистой, так как там наибольшая концентрация дифтерийной палочки.

Перед тем как взять мазок из носа на дифтерию, носовые ходы необходимо тщательно прочистить путем высмаркивания или применяя сухие ватные палочки (специальные фитили). Если в носу есть корочки, то их необходимо удалить с осторожностью, чтобы не повредить слизистую и не вызвать капиллярное кровотечение.

Тампон для взятия материала из носа готовится по такому же принципу, как и тампон для зева, только он меньшего размера. Вводить его нужно медленно и аккуратно, так, чтобы каждая сторона тампона касалась всех стенок носового хода.

У пациентов мазок из зева и носа на дифтерию берут вместе и отправляют в лабораторию. Для более точного диагноза посевы проводят незамедлительно и сразу на нескольких питательных средах.

Для культивирования дифтерийной палочки посев производят на среды Костюковой (жидкая) и Клауберга (плотная). В их состав входит гелурит натрия и калия, а в плотной среде также содержится гемолизированная кровь и эритроцитарная масса.

На среде Костюковой рост дифтерийной палочки выглядит в виде повсеместного потемнения, на среде Клауберга возбудитель заболевания растет в виде темных или черных полосок.

Если в ходе лабораторных исследований токсигенность выделенной палочки подтверждена, то диагноз на дифтерию положительный. Если выделенный возбудитель оказался нетоксигенный, то окончательный диагноз выносится на основе клинических симптомов болезни.

В норме у здорового человека дифтерийная палочка не присутствует в слизистой зева и не обнаруживается при бактериологическом исследовании.

Анализ на дифтерию не всегда может быть точным. На его результативность влияют такие факторы:

  • несоблюдение правил взятия мазков из носа и зева;
  • прием антибактериальных средств, сульфаниламидных препаратов;
  • несвоевременная доставка взятого материала в лабораторию (с момента взятия прошло более 2-3 часов), после истечения этого срока в биоматериале начинает размножаться сапрофитная (сопутствующая) микрофлора, постепенно развиваются аутолитические процессы, что губительно отражается на дифтерийной палочке.

Мазки на выявление дифтерии берут не только у пациентов с клиническими проявлениями заболевания. Анализы также проводят людям, контактировавшим с больным для своевременного выявления инфекции. Бактериологическое исследование в обязательно порядке назначают пациентам после проведенного лечения для контроля эффективности медикаментозной терапии.

источник

Для диагностики дифтерии разработаны различные методы: бактериологический, биологический, иммунохимический (РПГА, ИФА, РКоА, РЛА), также проводятся молекулярно-биологические исследования (ПЦР, риботипирование, энзимотипирование, секвенирование ДНК).

Крайне важны правильное взятие и своевременная доставка материала, а также четкий учет результатов.

Современная лабораторная диагностика дифтерийной инфекции имеет большое значение для установления диагноза, принятия решения о проведении специфической терапии, оценки и прогнозирования эпидемиологической ситуации.

Бактериологический или культуральный метод является основным и используется с диагностической, профилактической и эпидемиологической целями.

Проведение бактериологического исследования на обнаружение возбудителя дифтерии регламентировано и осуществляется в соответствии с методическими указаниями «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции».

Результаты бактериологического исследования в значительной степени зависят от своевременного и правильного забора материала, качества питательных сред, четкого и профессионального выполнения.

С диагностической целью в стационаре обследуют больных с острыми воспалительными заболеваниями в ротоглотке и дыхательных путях при подозрении на дифтерию ежедневно в течение 3 дней; при амбулаторном обследовании — больных ангинами, имеющих патологические выпоты на миндалинах, больных с подозрением на паратонзиллит, заглоточный абсцесс, стенозирующий ларинготрахеит, инфекционный мононуклеоз. Материал берут однократно.

По эпидемиологическим показаниям обследуются лица, бывшие в контакте с источником инфекции. Забор материала у них проводится однократно.

С профилактической целью обследуют лиц, поступающих в детские дома, специальные учреждения для детей с поражением ЦНС, санатории для детей с туберкулезной интоксикацией, в психоневрологические стационары — однократно.

Бактериологическое обследование бактерионосителей токсигенных штаммов С. diphtheriae проводят двукратно.

В период реконвалесценции после завершения антибактериальной терапии обследование проводят через 3 дня после окончания лечения, дважды с интервалом в одни сутки.

Материалом для исследования служат слизь, отделяемое и пленки из ротоглотки и носа. При наличии налета взятие материал производится с границы пораженной и здоровой ткани.

При подозрении на экстрабуккальные формы дифтерии проводят забор из очагов поражения (глаз, ухо, кожа, влагалище и др.), также следует брать материал из носа и зева. От больных материал должен быть взят в течение 3-4 ч (не позднее 12 ч) с момента поступления в стационар до назначения антибактериальной терапии.

При обследовании здоровых лиц на дифтерийное бактерионосительство исследуют слизь из зева (миндалины, дужки) и носа (нижние носовые ходы).

Для взятия проб используют стерильные ватные сухие тампоны. Исследуемый материал из каждого локуса забирают отдельным тампоном. Фибринозную пленку можно снять пинцетом.

Доставка материал в лабораторию осуществляется в течение 3 часов, в холодное время года, предохраняя от охлаждения.

При проведении обследования контингентов в отдаленных от бактериологических лабораторий районах, когда посев не может быть проведен в течение 3 ч, материал засевают у постели больного на транспортную полужидкую среду с теллуритом калия.

При использовании транспортной среды тампоны с материалом погружают в среду. Допускается инкубация посевов на транспортной среде до 18-20 ч, после чего делают высев на плотные питательные среды.

Культивирование материала на тампоне в транспортной среде, используемой в качестве среды обогащения, позволяет повысить показатель высеваеваемости коринебактерий дифтерии и применять иммунохимические методы для выявления токсина, использование которых сокращает сроки выдачи предварительного ответа.

Читайте также:  Чем лечат дифтерию зева

С другой стороны, культивирование исследуемого материала на транспортной среде свыше 8 ч может способствовать размножению не только коринебактерий, но и сопутствующей микрофлоры, в частности S. aureus и S. epidermidis, соответственно более 90 и 10 % штаммов которых обладают теллуритредуктазой.

Для выделения возбудителя дифтерии проводят прямой посев материала, взятого сухим ватным тампоном или тампоном после культивирования в транспортной среде, на одну из элективноселективных сред для коринебактерий дифтерии.

В настоящее время предпочтение отдается кровяным теллуритовым средам. Все среды, используемые для первичного посева и последующей дифференциации выделенной культуры, подлежат предварительному контролю.

Через 24 часа инкубации на кровяных теллуритовых средах формируются колонии, окрашенные в черный или темно-серый цвет. Замедленное формирование подозрительных колоний (через 48 ч) в основном выявляется при исследовании материала, взятого у бактерионосителей.

Признаки, характерные для колоний биоваров gravis, mitis и intermedius, проявляются через 48 ч. Просмотр колоний осуществляют с помощью микроскопа бинокулярного стереоскопического (МБС).

В случае обнаружения подозрительных на коринебактерии дифтерии колоний их сразу же исследуют на токсигенные свойства. Необходимо изучать токсигенные свойства у нескольких колоний, т. к. из исследуемого материала могут быть выделены одновременно токсигенные и нетоксигенные клоны клеток коринебактерий дифтерии.

Для определения токсигенности используют тест Элека (традиционный или модификационный), основанный на методе встречной иммунодиффузии токсина и антитоксических антител (антитоксина) в специальных питательных средах (среда для определения токсина дифтерийного микроба или коринетоксагар) и являющийся одним из вариантов постановки реакции преципитации в геле.

При постановке теста Элека делают посев по 1\2 каждой из 2 изолированных колоний на среду для определения токсигенности и необожженной петлей — уколом в столбик среды Пизу; другую половину колонии отсевают в пробирку со скошенным 10% сывороточным агаром, из оставшихся нескольких 5-7 колоний формируют бляшки.

В случае множественного роста подозрительных колоний проводят определение уреазной активности в пробе Заксе. При обнаружении только одной колонии ее засевают на среду для определения токсигенности и, не обжигая петлю, в среду Пизу для определения цистиназы.

После учета результатов для дальнейшей идентификации используют культуру со среды Пизу или из бляшки.

У выросшей на сывороточном агаре культуры изучают морфологию, используя метод окраски по Леффлеру, биохимические свойства (глюкоза, сахароза, мальтоза, крахмал, декстрин), определяют уреазную активность.

При необходимости идентифицировать С. ulcerans используют тесты на уреазу и восстановление нитратов в нитриты.

Определение токсина является основным дифференциально-диагностическим тестом при бактериологическом исследовании на дифтерию.

Клиническое и эпидемиологическое значение токсигенных и нетоксигенных штаммов различно, поэтому чрезвычайно важно как можно быстрее получить точные данные о токсигенности штаммов, чтобы подтвердить диагноз дифтерии и воспрепятствовать распространению инфекции путем выявления бактерионосителей среди контактных лиц.

Критерием оценки специфичности преципитатов служит время появления и расположение линий преципитации испытуемого штамма по отношению к линиям преципитации контрольного токсигенного штамма. Специфические линии преципитации появляются через 24-48 ч, сливаются или направлены на слияние с линиями контрольного штамма.

Метод преципитации является высокоспецифичным, но его чувствительность составляет 0,5-1,0 мкг/мл по белку антигена. В связи с этим у штаммов коринебактерий дифтерии с низким уровнем продукции токсина специфические линии преципитации могут формироваться гораздо позже.

В практических лабораториях возможна гиподиагностика при определении токсигенности дифтерийных бактерий, что в основном обусловлено нестандартными питательными средами, повышенным содержанием железа в сыворотке, добавляемой в среду, недостаточными посевными дозами и малым содержанием антитоксина на бумажных носителях, а также другими отклонениями от методики постановки теста.

Одной из причин гиподиагностики при определении токсина методом иммунодиффузии является повышенное содержание железа в сыворотке лошади или крупного рогатого скота, которая является обязательным компонентом, добавляемым в среду для определения токсина дифтерийного микроба или коринетоксагар.

У токсигенных штаммов С. diphtheriae способность экспрессировать ДТ, а также интенсивность роста и размножения наблюдаются при малых концентрациях железа, что объясняется снижением потребности в источнике железа у токсиген-ных штаммов С. diphtheriae.

Экспрессия структурного tox-гена, носителем которого является профаг, находится под контролем хромосомного регуляторного гена dtxR. Ген dtxR является ответственным за синтез железо-зависимого белка-репрессо-ра dtxR.

В операторе гена tox имеется участок ДНК, с которым взаимодействует белок-репрессор, препятствуя транскрипции tox-мРНК и, следовательно, продукции дифтерийного токсина. При дефиците железа белок-репрессор инактивируется и начинается синтез токсина.

Неспецифические линии преципитации при определении токсина могут быть выявлены в основном при использовании лечебной антитоксической сыворотки или препаратов нестандартного антитоксина, содержащих антитела к клеточным антигенам С. diphtheriae.

Выявление цистиназной активности, способности окислять глюкозу и мальтозу, отношение к крахмалу, декстрину и отсутствие фермента уреазы наряду с характерными морфокультуральными признаками (полиморфизм, метахроматичное окрашивание, формирование колоний черного или серого цвета на кровяных теллуритовых средах) позволяют отнести выделенный микроорганизм к С. diphtheriae и одному из биоваров.

Выделенный в результате бактериологического исследования штамм C.diphtheriae является возбудителем дифтерии, если он обладает токсигенными свойствами.

Бактериологический метод диф-диагностики дифтерии позволяет в случае выделения токсигенного штамма, обладающего цистиназной активностью, дать окончательный документированный ответ через 48-72-96 часов, нетоксигенного штамма — через 72-96 часов.

Использование высококачественных питательных сред для первичного посева, определения токсигенности, биохимических свойств и микроскопа бинокулярного стереоскопического (МБС) для отбора колоний позволяет ускорить проведение бактериологического исследования и, соответственно, сократить сроки выдачи ответа до 48 часов.

Определение токсина у возбудителя дифтерии является основным дифференциальным тестом при диагностике дифтерии.

Для определения токсигенных свойств коринебактерий дифтерии разработаны и могут быть использованы разные методы, которые значительно различаются по специфичности, чувствительности и времени проведения исследования.

Основной метод определения токсина — иммунодиффузия в агаре — является высокоспецифичным, но позволяет выявлять ДТ только у 84,0 и 80,4 % штаммов, выделенных от больных и бактерионосителей соответственно.

Это связано с наличием у положительных в ПЦР и отрицательных в тесте Элека штаммов «молчащего» гена токсигенности. Роль таких штаммов в патологии пока неясна.

Биологические методы определения токсигенности, основанные на использовании 9-дневных куриных эмбрионов, перевиваемых культур клеток, пробах на вирулентность на морских свинках или кроликах, являются высокочувствительными, но трудоемкими и дорогостоящими.

Наиболее надежным тестом для определения токсина in vivo является подкожный тест на вирулентность на морских свинках.

При диагностике дифтерии комплексное микробиологическое исследование с использованием иммунохимических (РЛА, РКоА, РПГА, ИФА) методов позволяет значительно повысить эффективность лабораторной диагностики дифтерийной инфекции, ускорить обнаружение токсина.

Методы не являются обязательными при проведении диагностики дифтерии, но, по сравнению с традиционным (метод Элека), имеют преимущества по чувствительности и времени проведения анализа.

Современные варианты иммунохимического анализа, использование моноклональных антител к эпитопам дифтерийного токсина гарантируют и их высокую специфичность. Результаты, полученные этими методами, позволяют дать только предварительный ответ о наличии токсина.

Реакция пассивной гемагглютинации (РИГА) и иммуноферментный анализ (ИФА) могут быть использованы для выявления слаботоксигенных штаммов C.diphtheriae, определения уровня токсинопродукции, а также с целью сокращения сроков выявления ДТ.

Токсин обнаруживается в РИГА через 18 часов после посева культуры в жидкую питательную среду, содержащую сыворотку и теллурит калия, и через 3 ч при использовании бульона на основе сред 199 или «Игла» с 20 % сыворотки крупного рогатого скота.

Для проведения ИФА можно использовать культуру и непосредственно надосадок среды культивирования исходного клинического материала. Реакции являются высокочувствительными, и при их использовании токсин определяется в 98 % случаев.

Постановка РИГА основана на использовании эритроцитарного дифтерийного диагностикума, сенсибилизированного поликлональными антитоксическими антителами (антитоксином), способными взаимодействовать только с дифтерийным токсином.

При наличии в исследуемом образце токсина образуется специфический комплекс (ДТ—АТ), который выявляется в виде агглю-тината эритроцитов. Для постановки РПГА необходимо использовать стабильные стандартные диагностикумы, чувствительность которых не ниже 0,003 Lf/мл.

Метод позволяет определять относительное содержание токсина, умножая значение чувствительности диагностикума, выраженного в единицах Lf/мл, на обратное значение титра исследуемой пробы.

Для определения дифтерийного токсина методом ИФА разработан твердофазный вариант «сэндвич». В микробиологии тест-системы ИФА пдля диагностики дифтерии используют моноклональные антитоксические противодифтерийные антитела (МкАт) к концевому участку В-фрагмента дифтерийного токсина, адсорбированные на поверхности полистироловых планшет.

Адсорбированные на поверхности полистирола МкАт взаимодействуют с эпитопами В-фрагмента ДТ, если он присутствует в исследуемой пробе. К комплексу МкАт—ДТ добавляют конъюгат (К), представляющий собой поликлональные антитоксические антитела, конъюгированные с ферментом (пероксидаза хрена).

Свободные эпитопы ДТ взаимодействуют с поликлональными антитоксическими антителами, входящими в состав конъюгата, образуется комплекс МкАт—ДТ—К, который обнаруживают, добавляя смесь перекиси водорода с индикатором.

Результаты реакции учитывают визуально или с использованием спектрофотометра. Использование Fab-фрагментов МкАт гарантирует высокую чувствительность тест-системы. Метод позволяет определять токсин в концентрации 0,8-1,5 нг/мл или 0,0002 Lf/мл анатоксина и используется как в варианте «скрининг», так и для количественного определения ДТ.

Разработан метод определения ДТ на мембранах эпителиоцитов слизистой оболочки больных с помощью ИФА. С этой целью используют тест-систему «Дифтерия-монозим», в которую входят моноклональные антитела к СООН-концевой части В-фрагмента молекулы ДТ.

Данный метод позволяет выявить в течение 5-6 ч даже незначительное количество токсина, адсорбированного на мембранах клеток слизистой оболочки больных в 100 % случаев, провести раннюю дифференциальную диагностику дифтерии с клинически схожими заболеваниями.

РЛА и РКоА являются экспресс-методами обнаружения ДТ в культуральной жидкости.

Разработана аналитическая система для реализации экспресс-способа диагностики токсигенных штаммов, в которую входит дифтерийный латексный диагностикум и микроридер со сменными чипами.

Дифтерийный антительный диагностикум получен путем химической сорбции на поверхности полиакриламидных латексных частиц высокоавидных антитоксических антител с индексом авидности не менее 90 %.

Постановку РЛА осуществляют на чипах, результаты фиксируют в заданном или произвольном режиме в памяти компьютера в виде фотоизображений. Разработанный способ обладает высокой эффективностью, количественная оценка чувствительности метода составляет 0,001 Lf/мл.

В настоящее время большинство иммунохимических методов определения дифтерийного токсина могут применяться только в лабораториях научно-исследовательских учреждений, в которых они разработаны, т. к. соответствующих тест-систем производственного выпуска не существует.

Основным показателем напряженности противодифтерийного иммунитета является уровень дифтерийного антитоксина в сыворотке крови.

Для определения уровня антитоксина в сыворотке крови вакцинированных и больных используют иммунологические методы (РПГА, ИФА, методы Ремера и Йенсена, реакция нейтрализации токсина в клеточной культуре Vero).

Реакцию нейтрализации in vivo на морских свинках по Ремеру или на кроликах по Йенсену считают универсальными методами, или «золотым стандартом» определения антитоксических антител в сыворотке крови человека. Результаты реакции нейтрализации по Йенсену в 100 % случаев совпадают с результатами теста Элека.

Иммунологические методы могут быть полезными при необходимости дифференциации стертых и атипичных форм дифтерии и неспецифических ангин с сопутствующим носительством токсигенных штаммов.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) отличается высокой специфичностью и чувствительностью и является регламентированным методом для изучения напряженности противодифтерийного иммунитета.

Это двухкомпонентная сложная реакция, при которой противодифтерийные антитела, находящиеся в исследуемой сыворотке, взаимодействуют с дифтерийным анатоксином, который адсорбирован на эритроцитах.

В результате специфического взаимодействия антитоксических антител с анатоксином образуется комплекс, выявляемый в виде агглютината эритроцитов. За условно-защитный титр противодифтерийных антитоксических антител принимается титр 1:20. Существует и мнение, что нет четко определенного «защитного титра» антител, определяемого в этой реакции.

Результат РПГА подтверждается в реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА), реакция оценивается специфичной при снижении титра антител в РТПГА в 4-8 раз и более.

Реакцию нейтрализации (PH) на кроликах по Йенсену проводят с целью количественного определения антитоксина в крови больного. Метод основан на способности ДТ вызывать воспалительную реакцию и некроз при внутрикожном его введении кроликам.

In vitro исследуемую сыворотку смешивают с различными дозами стандартного токсина и затем вводят кроликам. Отсутствие или степень выраженности внутрикожной реакции зависит от количества антитоксина, содержащегося в крови больного.

С помощью метода Йенсена можно дифференцировать стертые и атипичные формы дифтерии от ангины другой этиологии с сопутствующим носительством токсигенных штаммов. Исследование крови проводят в первые 3-5 дней от начала заболевания.

Отсутствие антитоксина или его низкий уровень (менее 0,01 МЕ/мл) является доводом в пользу заболевания. Уровень антитоксина 0,5-1,0 МЕ/мл свидетельствует в пользу бактерионосительства.

Резкий подъем антитоксина у больных может быть обусловлен вторичным иммунным ответом в случае, если больной вакцинирован, что необходимо учитывать при оценке реакции. Определение титра антитоксина с диагностической целью проводят только до введения лечебной сыворотки. Метод Йенсена применяют редко, т. к. он остается трудоемким и дорогостоящим.

Соответственно рекомендациям ВОЗ для определения уровня антитоксина в сыворотке используют и реакцию нейтрализации токсина в культуре клеток Vero (перевиваемая культура клеток почек обезьян).

Дифтерийный токсин подавляет метаболическую активность и рост культуры клеток Vero. Тест основан на нейтрализации цитотоксического действия ДТ антитоксином, который содержится в сыворотке крови.

Реакцию нейтрализации проводят в микропланшете, в лунки которого с последовательно разведенной исследуемой сывороткой крови вносят ДТ в рабочей дозе и культуру клеток Vero, инкубируют в течение 5-6 дней при 37 °С.

Определение титра антител к дифтерийному токсину проводят по выявлению живых клеток культуры Vero или спектрофотометрически по снижению степени окрашиваемости субстрата митохондриальной дегидрогеназой.

При иммунном ответе на дифтерийный токсин или анатоксин в крови обнаруживаются лимфоциты (1,00-5,71 %), специфически связывающие эти антигены. Определение лимфоцитов, специфически связывающих дифтерийный токсин или анатоксин, проводят в реакции смешанного розеткообразования.

С этой целью в качестве контроля используют эритроциты, сенсибилизированные столбнячным анатоксином, что позволяет дифференцировать антигенсвязывающие лимфоциты (АСЛ) дифтерийной специфичности, обусловленной дифтерийной инфекцией или вакцинацией.

Обнаружение АСЛ дифтерийной специфичности и отсутствие АСЛ столбнячной специфичности является основным критерием для постановки диагноза дифтерийной инфекции.

Вакцинация дифтерийным анатоксином практически всегда осуществляется в комплексе со столбнячным, а иммуногенная активность последнего в АКДС и АДС больше, чем дифтерийного, поэтому в случаях, когда выявление АСЛ дифтерийной специфичности обусловлено вакцинацией, всегда будут обнаружены АСЛ и столбнячной специфичности.

В случае дифтерийной инфекции (заболевание или носительство), наоборот, выявляются АСЛ только дифтерийной специфичности.

Метод количественного определения токсина в составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) разработан для ранней диагностики дифтерии и иммунологического мониторинга в процессе лечения.

Для постановки метода используют сыворотку крови больного, из которой с помощью полиэтиленгликоля осаждают ЦИК и исследуют в иммуноферментной реакции согласно инструкции по применению «Дифтерия-монозим». ДТ в составе ЦИК обнаруживается в широком диапазоне концентраций: 0,45-22,3 Lf/мл.

Сроки обнаружения ДТ в ЦИК и его уровень имеют корреляцию с длительностью симптомов интоксикации и развитием осложнений дифтерийного процесса, что является важным для прогнозирования тяжести течения дифтерии и оценки эффективности терапевтических мероприятий.

источник