Анализы на антитела дифтерии коклюша столбняка

Врач говорит, что по анализу будет видно, есть ли иммунитет к тем или иным заболеваниям. Кстати, летом ребенок болел с сильным кашлем, доктор под вопросом ставила коклюш, поэтому не исключено что мы им уже переболели. А анализ вроде как обещает «приоткрыть завесу истины».

Вопрос в том, кто делал такой анализ, где делали, сколько примерно стоит?

И самое главное, помог ли вам этот анализ, ведь взятие крови из вены для ребенка всё-таки психологически тяжелое мероприятие, стоит ли мучать его. Заранее благодарю.

Но потом решила, что прививки я все равно делать ребенку не буду, так а зачем мне тогда мучать его ? Так что, не делала, а просто писала отказ и все.

Извиняюсь, я забыла написать, что мы действительно хотим сделать некоторые прививки, поэтому и хочу сдать на анализ.

Спасибо, нии детских инфекций буду иметь ввиду.

Извените что тема не об этом.

В нашем случае мазок ничего не дал. Ребенок сильно кашлял, назначили курс антибиотиков, а после них( если это был коклюш) мазок из носоглотки ничего не показывает, информативен только анализ крови. Так что то, что это коклюш мы поняли достаточно поздно, только на 3-ей неделе болезни.:005:

Дааа, очень интересненько! Вот интересно, а мазок из носоглотки на дифтерию тоже можно сдать. Никто не знает случайно?

А где вы делали мазок? Просто лаборатории разные и везде смотрят по-разному. У нас один раз в мазке из носоглотки ничего не высеялось, а так как горло у ребенка болело сильно, то при пересдаче в другой лаборатории высеялся стрептококк, и в таком колличестве, что странно как в другой-то не заметили.

Инфекция столбняка является острым токсическим заболеванием, где преимущественно поражается нервная система человека. Болезнь вызывается анаэробной клостридией столбняка.

Клостридийная палочка попадает извне в человеческий организм благодаря повреждённым кожным покровам либо слизистым, зачастую из почвенной среды, где в споровом состоянии сохраняется длительный период. Если человек поцарапался, обжёгся, порезался, то для клостридийных микроорганизмов эти микротравмы являются входными путями, ещё в зоне риска находится глазная и ротовая слизистые.

Попав в человеческий организм столбнячные палочки могут преобразоваться в виде вегетативных форм, если среда для них будет благоприятной. Далее происходит их активное размножение и экзотоксиновая тетанолизиновая тетаноспазминовая и выработка, воздействующая нейротоксично, симптомами общей интоксикации. Из-за тетаноспазмина, попадающего в нервную ткань, блокируется прохождение импульса к мышечным тканям, тетанолизином повреждаются клеточные элементы крови, сердечная и сосудистая оболочки.

Патология проявляется подрагиванием с болевыми ощущениями в зоне проникновения возбудителя. Спустя некоторый временной период спазмируются мышечные волокна головной, шейной, туловищной зон с руками и ногами. При высокой степени возбуждённости, когда больному уже становится страшно, двигательная активность его ограничивается, появляются судорожные припадки, интенсивно болит всё тело. Спастика идёт в сопровождении с выраженной тахикардией, гипергидрозом, нарушенной дыхательной функцией.

Воспринимается столбняк высоко, 75-80% заканчиваются смертельным исходом. Поскольку эта инфекционная патология скоротечна, то иммунная система к ней не формируется. Профилактические меры направлены на иммунизационные активные и пассивные мероприятия вакцинированием, использованием сывороток. Вакцинируют по прививочному календарю с раннего детства.

Проводят анализы крови на наличие столбняка для того, чтобы определить специфичность иммунной системы перед прививочными мероприятиями, антитела к столбняку после проведения вакцинирования.

Исследовательские мероприятия назначаются:

хирургическими;
травматологическими;
инфекционными;
терапевтическими;
педиатрическими;
акушеро-гинекологическими специалистами;
также докторами, занимающимися общей практикой.

Сдавать анализ требуется в лабораториях иммунологии, центрах диагностики, других учреждениях, оказывающих медицинские услуги.

Для диагностического исследования иммунной системы к столбняку необходим венозный тип крови. Особых приготовлений не требуется.

Сдача крови происходит перед едой, лучше с утра. До этого мероприятия исключаются физическая нагрузка, следует избегать стрессовых ситуаций.

Противостолбнячный вакцинальный процесс проводится по календарным прививочным дням в раннем детском возрасте. Спустя определённый временной период ревакцинируют снова. В нормальном состоянии защитные антитела в крови человека уже присутствуют.

Для диагностических мероприятий состояния иммунной системы к столбнячному токсину определяют иммуноглобулиновые компоненты крови, имеющие класс G:

Если их содержится от 0 до 0.01 МЕ/мл, то считается что иммунитета нет совсем, надо человека вакцинировать либо ревакцинировать.
Когда их больше 0.01, но значение не доходит до 0.1 МЕ/мл, то иммунная система к столбняку ослаблена, нужно ревакцинировать исследуемого.
Кратковременные защитные функции выражены при показателе от 0.1 до 0.5 МЕ/мл, здесь также надо ревакцинирование.
Защита, являющейся пограничной, без проведения вакцинационных мер считается при показателе 0.5 МЕ/мл.
От 0.5 до 1 МЕ/мл защитные функции иммунитета являются достаточными, через 3 года контролируют снова.
Спустя 5 лет выполняют повтор анализа при долгой защите, где показатель от 1 до 5 МЕ/мл.
По прошествии 8 лет ─ если защита высокая, это свыше 5 МЕ/мл.

анатоксина адсорбированного столбнячного;
дифтерийно-столбнячного адсорбированного анатоксина, в котором низкое антигеновое содержание;
противостолбнячной очищенной лошадиной жидкой сыворотки с высокой концентрацией;
противостолбнячного человеческого иммуноглобулина.

Выбирая препарат обоснованно, целесообразным является одновременно определять антитоксин дифтерийный в том же сывороточном материале, где оценивался иммунитет против столбняка.

3.1. ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

Организация и проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета к инфекциям, управляемым средствами специфической профилактики (дифтерия, столбняк, коклюш, корь, краснуха, эпидемический паротит, полиомиелит, гепатит В)

1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения (Е.Б.Ежлова, А.А.Мельникова, Г.Ф.Лазикова, Н.А.Кошкина); ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (Н.Я.Жилина, О.П.Чернявская); ФГУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского» Роспотребнадзора (Н.М.Максимова, С.С.Маркина, Т.Н.Якимова, Н.Т.Тихонова, А.Г.Герасимова, О.В.Цвиркун, Н.В.Тураева, Н.С.Кущ); ФГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора (В.П.Чуланов, Н.Н.Пименов, Т.С.Селезнева, А.И.Заргарьянц, И.В.Михеева); ГУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова» РАМН (В.Б.Сейбиль, О.Е.Иванова), ГУ «Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН (Н.В.Юминова, Р.Г.Десятскова); Омской Государственной Медицинской академией (В.В.Далматов); Управлением Роспотребнадзора по Новосибирской области (Н.И.Шульгина); Управлением Роспотребнадзора по г.Москве (И.Н.Лыткина, В.С.Петина, Н.И.Шулакова).

2. РАЗРАБОТАНЫ взамен методических указаний МУ 3.1.1760-03 «Организация и проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета против управляемых инфекций (дифтерия, столбняк, корь, краснуха, эпидемический паротит, полиомиелит)».

3. УТВЕРЖДЕНЫ 15 июля 2011 г. и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко.

1.1. В методических указаниях изложены основные принципы организации и осуществления серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета к инфекциям, управляемым средствами специфической профилактики (дифтерия, столбняк, коклюш, корь, краснуха, эпидемический паротит, полиомиелит, гепатит В).

1.2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, и специалистов лечебно-профилактических организаций.

2.1. Проведение серологического мониторинга позволяет обеспечить непрерывный процесс объективной оценки состояния специфического поствакцинального иммунитета к возбудителям инфекций, управляемых средствами специфической профилактики, в «индикаторных» группах населения и группах риска и является обязательным элементом эпидемиологического надзора за дифтерией, столбняком, коклюшем, корью, краснухой, эпидемическим паротитом, полиомиелитом и гепатитом В, поскольку эпидемиологическое благополучие в отношении указанных инфекций определяется состоянием поствакцинального иммунитета.

2.2. Целью серологического мониторинга является оценка уровня фактической защищенности от инфекций отдельных лиц, коллективов и населения в целом, а также оценка качества прививочной работы на конкретной территории и в конкретной организации здравоохранения.

2.3. Серологический мониторинг включает:

2.4. «Индикаторные» группы населения включают лиц, имеющих документально подтвержденный прививочный анамнез. При этом срок, прошедший от последней прививки до обследования на наличие дифтерийных и столбнячных антител, коклюшных агглютининов, антител к вирусам кори, краснухи, эпидемического паротита, полиомиелита, гепатита В должен составлять не менее 3 месяцев.

2.5. Организация и проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета населения осуществляется организациями здравоохранения и органами, осуществляющими государственный санитарно-эпидемиологический надзор.

2.6. Проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета оформляется постановлением Главного государственного санитарного врача по субъекту Российской Федерации, в котором по согласованию с органами управления здравоохранением определяются территории, время (график), контингенты и численность групп населения, подлежащих обследованию, определяются микробиологические лаборатории для проведения исследований, а также лица, ответственные за организацию и проведение этой работы.

3.1. Материалом для исследования служит сыворотка крови, выявленные антитела в которой являются источником информации об уровне иммунитета к возбудителям инфекций, управляемым средствами специфической профилактики.

3.2. Используемые методы исследования сывороток должны быть безвредными, специфичными, чувствительными, стандартными и доступными для массовых обследований.

3.3. Для проведения серологических исследований сывороток крови в Российской Федерации применяются:

3.4. Для проведения серологических исследований должны использоваться зарегистрированные в Российской Федерации диагностикумы и тест-системы.

4.1. При формировании «индикаторных» групп населения, подлежащих серологическому обследованию, следует придерживаться следующих принципов.

4.1.1. Единство места получения прививки (организация здравоохранения, детское дошкольное учреждение, школа и другие организации, где проводились прививки).

4.1.2. Единство прививочного анамнеза.

4.1.3. Сходство эпидемиологической ситуации, в условиях которой формируются обследуемые группы.

4.2. Отбор контингентов для обследования начинается с определения территорий.

4.3. Серологический мониторинг целесообразно проводить в первую очередь на крупных административных территориях субъектов Российской Федерации (в городах, районных центрах) — ежегодно. Каждый год в обследование должны включаться разные районы и поликлиники города (районного центра). Периодичность их обследования должна составлять 6-7 лет (по графику).

4.4. Для формирования «индикаторной» группы следует выбрать 4 коллектива обследуемых одного возраста (по 2 коллектива от 2 организаций здравоохранения), не менее 25 человек в каждом коллективе, то есть в каждой «индикаторной» группе должно быть не менее 100 человек.

4.5. Перед проведением серологического обследования отобранных в «индикаторную» группу лиц (детей и взрослых) медицинские работники должны провести разъяснительную работу, в том числе с родителями обследуемых детей, о целях проверки у них напряженности поствакцинального иммунитета к инфекциям, управляемым средствами специфической профилактики.

4.6. Сыворотки крови взрослых для исследования могут быть взяты на станциях переливания крови.

5.1. Серологический мониторинг состояния коллективного иммунитета предусматривает многоцелевое серологическое обследование на каждой территории «индикаторных» групп населения.

5.2. В «индикаторные» группы не включают:

5.3. Состояние коллективного иммунитета к дифтерии, столбняку, эпидемическому паротиту, полиомиелиту, гепатиту В у взрослых определяется без учета данных о прививках. Состояние иммунитета к кори и краснухе — без учета данных о прививках определяется у взрослых только в возрастной группе 40 лет и старше.

5.6. Корь, эпидемический паротит, краснуха.

5.9. По усмотрению специалистов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, серологическое обследование при рассматриваемых инфекциях может быть проведено и в других возрастных и профессиональных группах.

6.1. Оценка состояния специфического иммунитета населения к дифтерии, столбняку, коклюшу, кори, краснухе, эпидемическому паротиту, полиомиелиту и гепатиту В осуществляется по результатам серологического обследования «индикаторных» групп населения.

6.2. Для оценки фактической привитости и защищенности детей и взрослых от дифтерии и столбняка сыворотку крови исследуют параллельно с дифтерийным и столбнячным антигенными диагностикумами. Защищенными от этих инфекций являются лица, в сыворотках крови которых определяются антитоксические антитела в титре 1:20 и выше.

6.3. При оценке уровня поствакцинального противококлюшного иммунитета, защищенными от коклюша являются лица, в сыворотках крови которых определяются агглютинины в титре 1:160 и выше.

6.4. Серопозитивными к вирусам кори, краснухи и эпидемического паротита являются лица, в сыворотках крови которых определяются специфические антитела на уровне, указанном в соответствующих инструкциях к тест-системам.

6.5. При оценке уровня поствакцинального иммунитета к вирусу гепатита В защищенными являются лица, в сыворотке крови которых определяются антитела к HBsAg в концентрации 10 МЕ/л и более.

6.6. О напряженности коллективного иммунитета к полиомиелиту и качестве вакцинопрофилактики можно судить на основании трех показателей:

6.7. Результаты серологического обследования контингентов фиксируются в рабочих журналах лабораторий с указанием населенного пункта, организации, фамилии, инициалов, возраста обследуемого и титра антител. Результаты также вносятся в учетные формы (историю развития ребенка (ф. N 112/у), амбулаторную карту больного (ф. N 025/у), карту профилактических прививок (ф. N 063/у), прививочный сертификат и иные учетные формы.

6.8. Выявление в каждой обследуемой группе детей и подростков не более 5% лиц с титром дифтерийных и столбнячных антител менее 1:20 и не более 10% лиц с отсутствием защитных титров дифтерийных и столбнячных антител в группе взрослых служит показателем достаточной защищенности от дифтерии и столбняка.

6.9. Критерием эпидемиологического благополучия при коклюше следует считать выявление не более 10% лиц в обследуемой группе детей с уровнем антител менее 1:160.

6.10. Критериями эпидемиологического благополучия при кори и краснухе принято считать выявление в каждой «индикаторной» группе не более 7% серонегативных лиц.

6.11. Среди привитых против эпидемического паротита доля серонегативных не должна превышать 10%.

6.12. Выявление в каждой обследуемой группе не более 10% серонегативных к каждому из трех серотипов вируса полиомиелита служит показателем достаточной защищенности от полиомиелита.

6.13. Среди привитых против гепатита В процент лиц с концентрацией антител менее 10 МЕ/л не должен превышать 10%.

6.14. При выявлении в какой-либо «индикаторной» группе ниже указанных показателей:

6.15. Если после дополнительного обследования количество незащищенных к этим инфекциям будет превышать приведенные критерии, следует провести проверку наличия прививок у лиц тех же возрастных групп с высокой долей серонегативных, медицинское обслуживание которых осуществляется данной организацией здравоохранения с целью установления фальсификации прививок. Выявленных непривитых лиц привить в соответствии с действующими нормативными документами.

6.16. Материалы серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета обобщаются по организациям разного типа, поликлиникам, району, городу (районному центру) и субъекту Российской Федерации в целом (прилож.2, табл.3, 4, 5, 6). Далее по каждой инфекции результаты серологического обследования сопоставляют с показателями заболеваемости и уровнем охвата прививками, что позволит подтвердить официальные данные об иммунизации населения или выявить несоответствие охвата прививками уровню коллективного иммунитета.

6.17. Динамическое слежение за состоянием иммунитета населения к инфекциям, управляемым средствами специфической профилактики, позволяет своевременно установить признаки эпидемиологического неблагополучия. Прогноз эпидемиологической ситуации по каждой из наблюдаемых инфекций считается неудовлетворительным, если выявляется тенденция к увеличению доли серонегативных.

6.18. При выявлении на какой-либо территории первых прогностических признаков, свидетельствующих о приближении ухудшения эпид-ситуации по любой из рассматриваемых инфекций, принимаются управленческие решения, направленные на увеличение уровня иммунной прослойки среди населения.

1. Техника взятия и первичная обработка крови

Капиллярную кровь берут из пальца в асептических условиях. Перед взятием крови кисть руки пациента согревают горячей водой, затем насухо вытирают чистым полотенцем. Палец, протерев 70°-м спиртом, прокалывают стерильным скарификатором одноразового пользования. Кровь в объеме 1,0-1,5 мл собирают непосредственно через край стерильной одноразовой центрифужной пробирки с пробкой (или в специальные микропробирки для взятия капиллярной крови). После взятия крови место укола смазывают 5%-м раствором йода.

2. Транспортирование образцов сыворотки (крови)

Перед транспортированием собранного материала из района обследования очень важно принять меры предосторожности: проверить наличие собранной информации, прочно закрыть пробирки пробкой, расположить пробы согласно их номерам и пр. На месте сбора следует хранить списки обследованных лиц. Для транспортирования сыворотки крови используют термоконтейнеры (сумки холодильники). При транспортировании и хранении крови в зимнее время года необходимо создать условия, при которых не происходит её замораживание.

«Индикаторные» группы для серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета к дифтерии, столбняку, коклюшу, кори, краснухе, эпидемическому паротиту, полиомиелиту и гепатиту В

источник

Прививки от коклюша, дифтерии и столбняка — за и против. Возможные осложнения в случае заболевания и экстренная профилактика.

Коклюш, дифтерия и столбняк — тяжелейшие инфекции с большим количеством смертельных исходов. Очень важно знать их «в лицо», чтобы, столкнувшись, не запаниковать, не пытаться лечить самим, а срочно госпитализировать ребенка. Ну и, естественно, нет ничего лучше профилактики. Современные импортные вакцины (особенно «Инфанрикс») практически не дают побочных реакций, зато ваш малыш будет надежно защищен. Инфекционисты считают эту прививку самой важной и необходимой. Если вы противник прививок, подумайте еще раз — может быть, вы все-таки решите сделать эту прививку и тем самым спасете малыша, ведь от этих инфекций никто не застрахован. А ответственность за жизнь и здоровье крохи лежит прежде всего на вас.

Коклюш — инфекционное заболевание, вызываемое бактерией бордетелла (коклюшная палочка, палочка Борде-Жангу). Наиболее характерным признаком коклюша является затяжной приступообразный спазматический кашель.

Источником инфекции является больной человек. Период заразности длится начиная с 1 недели до появления кашля и продолжается 3 недели после появления кашля. Поскольку до появления характерного кашля отличить коклюш от других инфекций тяжело, в течение этой самой одной недели инфицированные дети как раз и успевают заразить свое окружение (воздушно-капельным путем при непосредственном общении). Инкубационный период (в этот период в организме уже развивается инфекционный процесс, но нет никаких признаков) составляет от 3 до 14 дней.

После заболевания развивается практически пожизненный иммунитет. Особенно опасен коклюш для новорожденных. До 1 года ребенок не имеет собственных антител, а материнские не поступают (даже если у матери есть иммунитет против коклюша). В этом возрасте коклюш протекает тяжело, высока частота смертельных исходов — в случае отсутствия прививки смертность среди детей 1 года жизни составляет 50-60%, детей других возрастов — 8%.

Выделяемый коклюшной палочкой токсин раздражает нервные окончания (рецепторы) в слизистых оболочках дыхательных путей, в результате чего от них в кашлевой нервный центр (находится в головном мозге) постоянно поступает информация об этом (в виде нервных импульсов). Импульсы возбуждают кашлевой центр, что и обусловливает появление характерных приступов кашля. А так как у нас в головном мозге все клеточки расположены очень близко, в процесс «возбуждения» могут вовлекаться соседние нервные центры. Поэтому может возникать рвота (характерна для окончания кашлевого приступа), сосудистые расстройства (падение артериального давления, сосудистый спазм — проявляется бледностью кожи), нервные расстройства (судороги).

Помимо кашлевых спазмов, коклюш проявляется умеренным повышением температуры тела, недомоганием и воспалением верхних дыхательных путей (фарингит, ларингит). Кашель сухой, имеет характер приступов, не снимается приемом лекарств. Приступы наступают от любых внешних раздражений — света, движений и др. Характерно, что приступ начинается с «предвестников» — царапанья за грудиной, першения в горле. Затем один за другим следуют кашлевые толчки, не дающие больному вдохнуть. А после вдоха кашель начинается снова. Таких приступов может быть до 15 в сутки (в среднем по 4 минуты).

Лечение больных проводится в стационаре. Палата должна хорошо проветриваться и увлажняться. Для лечения используются антибиотики (в начале заболевания), противорвотные и противокашлевые препараты. Длительность лечения составляет 7-10 дней.

В случаях контакта с больным коклюшем проводится экстренная профилактика. Она заключается в введении нормального человеческого иммуноглобулина и применении антибиотиков, относящихся к классу макролидов (эритромицин, азитромицин, рокситромицин, спирамицин, джозамицин, мидекамицин). Вакцинация среди непривитых по экстренным показаниям не проводится, поскольку для выработки иммунитета требуется как минимум 3-кратная вакцинация. Однако у детей, которые получили третью прививку АКДС 6 и более месяцев назад и не получили при этом ревакцинацию, ее можно провести досрочно.

Единственным надежным средством специфической профилактики коклюша является вакцина.

Осложнения: примерно у каждого десятого ребенка, заболевшего коклюшем, развивается воспаление легких, у каждого 50-го возникают судороги (у 3% грудных детей). В 1 на 250 случаев (у 1% грудных детей) поражается головной мозг (энцефалопатия). Коклюш и его осложнения могут привести к смерти ребенка, пик смертности от коклюша приходится на возраст до 1 года.

Дифтерия (от греч. diphthera — пленка, перепонка) известна со времен Гиппократа и Галена под названием «смертельная язва глотки», «удушающая болезнь». В XX веке дифтерия послужила причиной эпидемии (1943 г.), поразившей 1 млн человек и ставшей причиной примерно 50 тыс. смертей.

Из-за низкого охвата прививками в 90-х годах XX века снова возникла эпидемия. Дифтерией заболело около 120 тыс. человек, погибло около 6 тыс. человек. Начиная с 2002 года, в России вновь увеличивается рост заболеваемости, причем каждый четвертый случай имеет тяжелейшее течение.

Дифтерия — инфекционное заболевание, вызываемое коринебактерией (дифтерийная палочка). Инфекция проявляется интоксикацией и образованием характерных пленок на слизистых оболочках верхних дыхательных путей (реже — на конъюнктивах, в ранах, половых органах и др.), поражением нервной и сердечно-сосудистой систем.

Возбудитель дифтерии выделяет сильнейший токсин, обладающий нейропаралитическим (разрушает оболочку нервов), гемолизирующим (повреждение эритроцитов и попадание гемоглобина в кровь) и останавливающим клеточное дыхание свойствами.

Инфекция передается воздушно-капельным путем от больных или внешне здоровых детей-носителей. Причем носительство может длиться до 1 месяца. А в детском коллективе во время вспышки заболевания носителями являются 10% малышей! Возможно заражение дифтерией через предметы и продукты питания.

Инкубационный период длится 2-10 дней. Болезнь начинается с недомогания, повышения температуры до 38-39ºС, появления пленок беловатого цвета на миндалинах и зеве (боль в горле). В случае токсической формы характерен токсический отек лица и шеи, отек слизистой оболочки верхних дыхательных путей, приводящий к невозможности дыхания. Смерть наступает от удушья и остановки сердца.

Помимо классической дифтерии зева (92% случаев), имеют место и другие формы инфекции — дифтерия ран, слизистой глаз, кожи (язвы), носа.

Лечение проводится в стационаре сывороткой, содержащей антитоксические антитела и антибиотиками. Несмотря на адекватное лечение, 5-10% случаев заканчиваются смертью больного, риск летального исхода инфекции выше у детей младше 5 лет.

Профилактика осуществляется с помощью вакцинации , эффективность составляет 95-100%.

Осложнения: миокардит (воспаление сердечной мышцы), полиневрит (множественное воспаление нервов), параличи, нарушение зрения (двоение), поражение почек.

Столбняк (tetanus) — инфекционное заболевание, вызываемое бактерией клостридиум, поражающее как людей, так и животных. Впервые описан Гиппократом, у которого от столбняка умер сын.

Источником инфекции являются травоядные животные, у которых столбнячная палочка является частью микрофлоры кишечника. С калом животных микроб попадает в почву и сохраняется там длительное время в виде спор. Человек заражается через загрязненные (обычно почвой) раны кожи и слизистых оболочек. Инкубационный период в среднем 5-14 дней.

Симптомы столбняка связаны с воздействием на нервную систему токсина (яда), вырабатываемого бактерией. Сначала возникают местные, а впоследствии и генерализованные (распространенные по всему телу) спазмы (тонические судороги) мышц.

Характерные симптомы столбняка: «сардоническая улыбка» — спазм мышц лица (рот растянут, углы рта опущены), а также характерная поза (опистотонус), когда из-за спазма мышц спина человека дугообразно выгибается. Тонус мышц настолько силен, что приводит к переломам костей и отрывам мышц от костей. Из-за резкого напряжения мышц живота и диафрагмы дыхание поверхностное и учащенное. Из-за сокращения мышц промежности затруднены мочеиспускание и дефекация. Появляются общие судороги продолжительностью от нескольких секунд до минуты, провоцируемые часто внешними раздражителями (прикосновение к кровати и т. п.). Лицо больного синеет и выражает страдание. Вследствие судорог может наступить асфиксия, паралич сердечной деятельности и дыхания.

Прогноз начавшегося заболевания неблагоприятный. Несмотря на экстренную реанимацию, смертность достигает 25-80%. Смерть, как правило, наступает в результате спазма дыхательной мускулатуры и паралича сердечной мышцы.

При положительном исходе клинические проявления заболевания продолжаются 3-4 недели и более, но обычно на 10-12 день самочувствие значительно улучшается. У перенесших столбняк долгое время может наблюдаться общая слабость, скованность мышц.

Широкая вакцинация позволила значительно уменьшить заболеваемость, но столбняк не исчез окончательно. В России ежегодно регистрируется несколько десятков случаев, главным образом среди непривитых или не полностью привитых. В развивающихся странах столбняк особенно широко распространен среди новорожденных, у которых отсутствуют материнские антитела вследствие того, что мать не была привита или по причине искусственного вскармливания. По оценкам ВОЗ ежегодно в мире регистрируется 400 000 летальных исходов среди новорожденных.

Лечение столбняка включает хирургическую обработку раны, обеспечение полного покоя больному, нейтрализацию циркулирующего в крови токсина, уменьшение или снятие судорожного синдрома (применяют нейролептики — аминазин, пролазил, дроперидол; транквилизаторы или миорелаксанты — тубарин, диплацин), с профилактической целью назначаются антибиотики (бензилпенициллин, окситетрациклин). Непривитым проводят профилактику путем введения в разные участки тела столбнячного анатоксина и противостолбнячной сыворотки. Привитым лицам вводится только столбнячный анатоксин. В последнее время используют специфический гамма-глобулин, полученный от доноров. Все перечисленные препараты служат средствами воздействия на циркулирующий в крови токсин.

Единственным средством профилактики является прививка, эффективность которой составляет 95-100%.

Осложнения: пневмония, разрыв мышц, компрессионный перелом позвоночника.

источник

А чем он может помочь? Могу понять желание сдать на антитела, если вы созрели все же сделать прививки. А так просто для чего? Тем более, незаметно вряд ли можно перенести столбняк или полиомиелит.:001:Ну на краснуху можно сдать перед планированием беременности. 🙂 В общем, я бы не таскала ребенка на эти анализы, потому что не вижу смысла. Хотя я, конечно, могу просто не понимать чего-то.

я согласна. Я как то перед садом тоже задалась этим. Узнала где что берут — , кстати,анализов много , они не все в одном месте делаются. Когда я звонила и разговаривала, то мне сказали, что надо много крови набрать , так как анализов много . Я хотела почти на все , начто делают прививки.
Но потом решила, что прививки я все равно делать ребенку не буду, так а зачем мне тогда мучать его ? Так что, не делала, а просто писала отказ и все.

Не знаю про антитела, но я своего ребенка сама повела сдавать мазок из носоглотки на коклюш и он к сожалению подтвердился.Вот так наши врачи лечат, что сами мамы ставят диагнозы своим детям и лечат кстати тоже сами.У нас коклюшные дети гуляют повсюду, им просто ставят диагноз ОРВИ и тп., как нам поставили.
Извените что тема не об этом.

А на счет всех этих болячек сдайте анализы которые вам нужны в любой платной лаборатории вот и все, вам уж там точно скажут что есть, а чего нет.

А на счет всех этих болячек сдайте анализы которые вам нужны в любой платной лаборатории вот и все, вам уж там точно скажут что есть, а чего нет.
а по-подробнее можно ?
как заподозрили коклюш ?
где сдавали ?

Не знаю про антитела, но я своего ребенка сама повела сдавать мазок из носоглотки на коклюш и он к сожалению подтвердился.
В нашем случае мазок ничего не дал. Ребенок сильно кашлял, назначили курс антибиотиков, а после них( если это был коклюш) мазок из носоглотки ничего не показывает, информативен только анализ крови. Так что то, что это коклюш мы поняли достаточно поздно, только на 3-ей неделе болезни.:005:

Автор, вы это тоже учтите, если анализ будете делать.

ЗЫ:про то, как у нас ставят диагноз коклюш — вообще отдельная тема.:015:

Автор, вы это тоже учтите, если анализ будете делать.

ЗЫ:про то, как у нас ставят диагноз коклюш — вообще отдельная тема.:015:
Дааа, очень интересненько! Вот интересно, а мазок из носоглотки на дифтерию тоже можно сдать. Никто не знает случайно?
А где вы делали мазок? Просто лаборатории разные и везде смотрят по-разному. У нас один раз в мазке из носоглотки ничего не высеялось, а так как горло у ребенка болело сильно, то при пересдаче в другой лаборатории высеялся стрептококк, и в таком колличестве, что странно как в другой-то не заметили.

Дааа, очень интересненько! Вот интересно, а мазок из носоглотки на дифтерию тоже можно сдать. Никто не знает случайно?
А где вы делали мазок? Просто лаборатории разные и везде смотрят по-разному. У нас один раз в мазке из носоглотки ничего не высеялось, а так как горло у ребенка болело сильно, то при пересдаче в другой лаборатории высеялся стрептококк, и в таком колличестве, что странно как в другой-то не заметили.

источник

Одним из самых эффективных средств для вакцинации, отвечающим требованиям ВОЗ, является дифтерийный анатоксин. Препараты на его основе используются для формирования специфического иммунитета против дифтерии – опасного заболевания верхних дыхательных путей бактериальной природы с риском распространения на ткани нервной системы, сердца, почек.

Названия прививок складываются из обозначения действующего компонента вводимого средства, в некоторых случаях добавляется информация о их концентрации или форме.

Аббревиатура АД-М используется для обозначения противодифтерийной вакцины, побуквенная ее расшифровка – адсорбированный дифтерийный анатоксин малого (уменьшенного) содержания.

Анатоксин – это вещество, полученное из соответствующих болезнетворных бактерий, вводимое в организм для формирования специфического иммунитета.

Адсорбированным он называется из-за применяемого при изготовлении препарата процесса адсорбции, когда деактивированный токсин собирается на поверхности раздела двух фаз (в данном случае на гидроксиде алюминия).

Средство для вакцинации АД-М выпускается в виде раствора в ампулах для инъекции. Действующий компонент – анатоксин – полученное из бактерий (дифтерийной палочки Corynebacterium) токсическое вещество, обезвреженное для безопасного введения в организм.

Токсины, выделяемые микроорганизмами – это основной фактор патогенности, действие которого на ткани вызывает патологические сдвиги, приводящие к развитию определенного заболевания.

В то же время токсины вызывают запуск иммунных реакций, так как распознаются в качестве чужеродного соединения (антигена). При заражении бактерией токсин нарушает проницаемость тканей, белковый синтез и ряд важных клеточных реакций. Анатоксин, вводимый при вакцинации – это обезвреженный токсин, не способный оказывать губительное влияние на клетки, и, соответственно, вызывать развитие заболевания.

Кроме основного действующего соединения вакцина содержит вспомогательные компоненты, используемый для увеличения срока хранения средства, и гидроксид алюминия.

Инъекционным введением препарата создают депо анатоксина (подкожное или внутримышечное), который начинает действовать на иммунную систему. В месте введения возникает воспалительный процесс, активирующий иммунокомпетентные клетки, некоторые из которых способны поглощать анатоксин (фагоцитировать).

Это естественная реакция организма на внедрение генетически чужеродного агента, направленная на создание важнейших элементов специфического иммунитета – антитител. Антитела необходимы для распознавания в тканях и нейтрализации микроорганизмов и их токсинов, предотвращая этим развитие заболевания.

Под воздействием анатоксина дифтерии в ходе сложных иммунных реакций формируются антитела именно к данному виду токсина, поэтому попавшая в вакцинированный организм дифтерийная палочка и ее токсин (например, при контакте с носителем инфекции) сразу же распознается, нейтрализуется, и человек не заболевает.

На этом механизме воздействия основываются практически все виды вакцинирования при помощи анатоксинов, среди которых прививки против столбняка, ботулизма, коклюша.

После прививки АД-М формируется искусственный активный специфический иммунитет. Он называется активным, так как сформирован в результате активации каскада иммунных реакции с образованием собственных антител (пассивный тип формируется с введением готовых антител).

Искусственным он является, так как приобретается организмом в ходе вакцинации, а не по причине заражения и перенесения заболевания.

Дифтерийный анатоксин может использоваться для:

профилактики дифтерии в виде плановой вакцинации у детей с 6-лет, привитых против столбняка;
иммунизации взрослых (ревакцинация каждые 10 лет);
экстренной профилактики дифтерии.

Препарат для вакцинации от дифтерии имеет сложное системное действие, поэтому имеет определенные ограничения применения.

Противопоказано использование в случае:

гиперчувствительности к компонентам вакцины;
злокачественных новообразований;
выраженной реакции на предыдущее применение;
иммунодефицита.

Существуют относительные противопоказания, которые, как правило, имеют временный характер – после нормализации состояния и одобрения процедуры врачом можно производить вакцинацию дифтерийным анатоксином.

Ограничениями являются:

вирусные или инфекционные заболевания;
обострившиеся хронические болезни;
прием иммунодепрессивных средств;
беременность;
острые аллергические заболевания;
химиотерапия.

В случае острых заболеваний инфекционного или вирусного генеза (например, ОРВИ) вакцинацию производят спустя 2-4 недели после выздоровления.

Инъекция препарата может производиться внутримышечно (в верхний квадрант ягодицы или переднюю область бедра), а также глубоко подкожно (в область под лопаткой). Перед вакцинацией ампулу необходимо тщательно встряхнуть. Необходимая дозировка – 0,5 мл однократно, если содержимое ампулы использовалось частично остатки препарата не подлежат хранению.

Определение антител (иммуноглобулина G) к анатоксину дифтерийной палочки используется чаще всего для оценки качества проведенной вакцинации или выявления лиц с отсутствием иммунитета к дифтерии. Целью процедуры также может быть микробиологическая и серологическая диагностика при подозрении у пациента признаков дифтерии.

В ходе анализа венозной крови определяют, присутствуют ли в организме антитела, способные распознать и нейтрализовать токсин дифтерийной палочки, измеряют его содержание. Для этого используют реакцию гемагглютинации – высокочувствительный серологический метод.

Результат анализа обозначается как положительный или отрицательный. Титр менее 1/200 (отрицательно) говорит об отсутствии дифтерии. Если перед анализом проводилась вакцинация, такой результат свидетельствует о ее неэффективности.

Также отрицательное значение выявляется у пациентов, никогда не получавших прививки от дифтерии или в случае, если после вакцинации прошло более 10 лет. Титр более 1/200 (положительно) при наличии клинических признаков подтверждает диагноз дифтерии.

Если анализ проводится после вакцинации такой результат говорит о ее эффективности: в организме в достаточном количестве образовались антитела, обеспечивающие стойкий иммунитет к дифтерии.

Также положительный результат на антитела может быть у людей, недавно перенесших дифтерию. Перед сдачей анализа рекомендуется проконсультироваться у специалиста.

Врачу необходимо сообщить о всех принимаемых препаратах, так как некоторые средства могут влиять на результат процедуры (например, антибиотики). В течении 30 минут перед забором крови следует воздержаться от курения.

В единичных случаях развивается реакция непереносимости или аллергия (отек Квинке, крапивница). У особо чувствительных лиц есть риск развития аллергических реакций немедленного типа на какой-либо из компонентов вакцины, поэтому места проведения прививок оснащаются средствами противошоковой терапии.

В течении 30 минут после инъекции за такими пациентами осуществляется наблюдение.

Препарат для прививок АД-М имеет частичные аналоги – средства, применяемые для формирования комплексного иммунитета против нескольких заболеваний.

В ветеринарии для иммунизации используется препарат Боприва, содержащий гонадолиберин (синтетический гормон), конъюгированный с дифтерийным анатоксином.

Средняя цена анатоксина АД-М – от 110 рублей за упаковку с 10 ампулами. Поставка из аптек осуществляется только в специализированные медицинские учреждения.

О вакцинации против дифтерии в видео:

источник

Эффективность вакцинации (дети 1-14 лет) 4680 руб. Программа включает в себя лабораторные тесты по оценке эффективности вакцинации: гепатита В, кори, краснухи, коклюша, дифтерии, столбняка, эпидпаротита (свинка); для уточнения наличия иммунитета (как постпрививочного так и после перенесенного заболевания) . Заказать
Подросток (расширенная, 15-18 лет) 8210 руб. Программа расширенного обследования для подростков включает в себя, как общеклинические исследования, биохимические тесты, так и определение поствакцинального иммунитета к заболеваниям. Общий анализ крови и общий анализ мочи используются в диагностике самых . Заказать

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Столбняк – острое инфекционное, часто смертельное заболевание, которое вызывается нейротоксином, продуцируемым Clostridium tetani. Токсин, поражая нервную систему, приводит к развитию тонического напряжения скелетной мускулатуры и генерализованным судорогам. В случае, если существует опасность проникновения возбудителя столбняка через поврежденные кожные покровы, рекомендуется иммунизация столбнячным анатоксином или противостолбнячными антителами. Даже если пациент в младенчестве или детстве был привит против столбняка, необходимо подтверждать защитный титр антител в крови, так как существует возможность неверно проведенной иммунизации или снижения титра антител с возрастом.

Оценка напряженности иммунитета;
Оценка эффективности вакцинации против столбняка после введения вакцины (через 4-8 недель).

Референсные значения (вариант нормы):

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

» [«serv_cost»]=> string(3) «845» [«cito_price»]=> NULL [«parent»]=> string(2) «25» [10]=> string(1) «1» [«limit»]=> NULL [«bmats»]=> array(1) array(3) string(1) «N» [«own_bmat»]=> string(2) «12» [«name»]=> string(31) «Кровь (сыворотка)» > > [«within»]=> array(2) array(5) string(44) «effektivnost-vakcinacii-deti-1-14-let-300117» [«name»]=> string(70) «Эффективность вакцинации (дети 1-14 лет)» [«serv_cost»]=> string(4) «4680» [«opisanie»]=> string(1417) «

Программа включает в себя лабораторные тесты по оценке эффективности вакцинации: гепатита В, кори, краснухи, коклюша, дифтерии, столбняка, эпидпаротита (свинка); для уточнения наличия иммунитета (как постпрививочного так и после перенесенного заболевания) к данным заболеваниям и решения вопроса о целесообразности повторной вакцинации.

Показания к назначению исследования:

оценка эффективности вакцинации.

» [«catalog_code»]=> string(6) «300117» > [1]=> array(5) string(54) «podrostok-rasshirennoje-obsledovanije-15-18-let-300121» [«name»]=> string(57) «Подросток (расширенная, 15-18 лет)» [«serv_cost»]=> string(4) «8210» [«opisanie»]=> string(4872) «

Программа расширенного обследования для подростков включает в себя, как общеклинические исследования, биохимические тесты, так и определение поствакцинального иммунитета к заболеваниям.

Общий анализ крови и общий анализ мочи используются в диагностике самых разных заболеваний как первичные скрининговые исследования.

Клиническое значение СОЭ в настоящее время утратило свою значимость в качестве первичного скринингового исследования, особенно при отсутствии каких-либо симптомов, т.к. он является неспецифическим показателем воспаления, на результаты которого влияют многие факторы (как патологические так и физиологические), возможны колебания значений в течение дня. Для скрининга применяют более надежный показатель — С-реактивный белок, классический белок острой фазы воспаления и тканевого повреждения.

Обменные процессы в организме подростка происходят более интенсивно. В этот период жизни пластические процессы значительно преобладают над процессами разрушения, тогда как у взрослого человека устанавливается их динамическое равновесие. Поэтому особенно важно оценить их состояние в этот период жизни. Глюкоза является одним из главных веществ, участвующих в обменных процессах, она играет важнейшую роль в обеспечении энергией тканей организма и в клеточном дыхании. Железо участвует в кроветворении (входит в состав гемоглобина и миоглобина), присутствует в составе ферментов, необходимых для обменных процессов, влияет на состояние иммунитета. Дефицит железа в подростковом возрасте значительно чаще наблюдается у девушек, что обусловлено становлением менструальной функции.

Биохимические и общеклинические показатели позволяют оценить функциональное состояние внутренних органов и систем организма: сердечно-сосудистой системы, печени, почек, поджелудочной, щитовидной железы.

Программа включает в себя лабораторные тесты по оценке эффективности вакцинации: гепатита В, кори, краснухи, дифтерии, столбняка, для уточнения наличия иммунитета (как постпрививочного так и после перенесенного заболевания) к данным заболеваниям и решения вопроса о целесообразности повторной вакцинации. А также включает скрининговые тесты на выявление вирусных гепатитов В и С.

Показания к назначению исследования:

углубленное обследование подростков.

» [«catalog_code»]=> string(6) «300121» > > >

Параметр

Референсные значения

Ед. Изм.

Антитела к столбнячному анатоксину (аnti-Tetanus toxoid), IgG

Биоматериал и доступные способы взятия:

Тип	В офисе
Кровь (сыворотка)

Подготовка к исследованию:

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Оценка напряженности иммунитета;
Оценка эффективности вакцинации против столбняка после введения вакцины (через 4-8 недель).

Референсные значения (вариант нормы):

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро «Шоссе Энтузиастов», «Перово»
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

источник

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционной иммунологии и клинической лабораторной диагностике, и касается разработки тест-системы, предназначенной для единовременной полуколичественной оценки напряженности гуморального поствакцинального иммунитета к коклюшу, дифтерии и столбняку на основе определения уровня антител к коклюшному цельноклеточному антигену, а также дифтерийному и столбнячному анатоксинам, как результат профилактической вакцинации соответствующими вакцинными препаратами.

Массовая иммунизация населения коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной (КДСВ) является основным инструментом профилактики коклюша, дифтерии и столбняка в РФ. Заболеваемость дифтерией и столбняком в РФ благодаря этой мере находится на спорадическом уровне, в то время как реальные цифры заболеваемостью коклюшем достаточно сложно оценить, они, очевидно, значительно ниже приводимых в отраслевых отчетах. Все перечисленные заболевания представляют серьезную опасность для здоровья людей, прежде всего детского населения. Мониторинг успешности иммунизации населения является необходимой мерой для контроля над заболеваемостью инфекциями, оценки состояния иммунитета в группах риска (прежде всего для детей) и оперативного выявления и устранения случаев низкой реактивности иммунной системы в ответ на введение вакцины среди населения. Подобные случаи могут быть вызваны рядом факторов: воздействием техногенного загрязнения, нарушениями в системе транспортировки и хранения вакцин, систематического нарушения техники введения вакцин.

Для мониторинга эффективности вакцинации используется целый ряд серологических методов.

Реакция агглютинации является классическим методом полуколичественной оценки противококлюшного иммунитета. Метод базируется на визуальной детекции осадка иммунных комплексов, образующихся при смешивании позитивной сыворотки крови и диагностикума. Диагностикум представляет собой инактивированные клетки коклюшного микроба вакцинных штаммов Bordetella pertussis (1.2.0, 1.0.3, 1.2.3). Полуколичественный вариант метода позволяет определить титр противококлюшных антител. Титр образца определяют по наибольшему разведению исследуемой сыворотки крови, которое дает при взаимодействии с диагностикумом осадок определенной плотности. Плотность осадка оценивается визуально. Реакция агглютинации является неинструментальным методом, его постановка не требует наличия считывающей аппаратуры. Между тем полуколичественная оценка противококлюшного иммунитета требует приготовления кратных разведений сыворотки, что усложняет процесс анализа. Длительность инкубации диагностикума с образцом происходит в течение суток, что существенно отдаляет получение результатов теста, а также ограничивает возможность проведения анализа в рамках жесткого временного регламента работы лабораторий.

Альтернативным методом оценки напряженности противококлюшного иммунитета является иммуноферментный анализ (ИФА). Принцип метода заключается в детекции антител класса IgG, специфичных к антигенам коклюшного микроба (прежде всего коклюшному токсину и гемагглютинину), при помощи антивидовых антител, меченных ферментом, в частности пероксидазой хрена. Фермент обеспечивает протекание цветной реакции, субстратом которой является хромоген. Интенсивность цветной реакции тем выше, чем больше концентрация в реакционной среде фермента, количество которого в свою очередь пропорционально концентрации противомикробных антител. Интенсивность цветной реакции оценивается спектрофотометрически, как правило, количественно. Иммуноферментный анализ позволяет осуществлять количественную детекцию антител класса IgG, которые делают наибольший вклад в защиту организма от инфекции, хотя в отношении коклюша не стоит недооценивать роль IgA, основного иммуноглобулина слизистых оболочек дыхательных путей. Иммуноферментный анализ более оперативен, чем реакция агглютинации, лучше приспособлен для автоматизации, не требует приготовления кратных разведений исследуемой сыворотки крови. В настоящее время именно ИФА является основным методом оценки противококлюшного иммунитета в мире. Однако оценка агглютининов не утрачивает своей актуальности, поскольку до настоящего времени не подтверждена роль IgG против отдельных антигенов коклюшного микроба или их смесей (ссылка ВОЗ), в то время как ряд исследований, проведенных в 40-50-х годах прошлого столетия, продемонстрировали роль агглютининов в защите от коклюшной инфекции.

Иммуноферментный анализ является основным методом детекции противостолбнячных и противодифтерийных антител. Для этих двух инфекций показана четкая протективная роль иммуноглобулинов класса G, специфичных к дифтерийному и столбнячному анатоксину, установлены защитные уровни антител.

Помимо ИФА в клинической практике существенна роль реакции пассивной гемагглютинации для оценки защищенности от дифтерии и столбняка. Принцип реакции агглютинации заключается в визуальной детекции осадка, образующегося при смешивании исследуемого образца сыворотки крови с эритроцитарным диагностикумом. Эритроцитарный диагностикум представляет собой инактивированные танизированные эритроциты барана, конъюгированные с антигеном: дифтерийным или столбнячным анатоксином. Наличие в исследуемом образце антител против инфекций приводит к агглютинации эритроцитов и выпадению их в осадок. Реакцию проводят в лунках полистирольных планшетов. Реакция гемагглютинации позволяет осуществлять полуколичественную оценку содержания антител в сыворотке крови, титр антител определяют по наибольшему разведению образца, которое приводит к формированию осадка определенной плотности. Постановка метода примерно аналогична таковой ИФА, однако пробоподготовка занимает значительное время: исследуемую сыворотку необходимо титровать, а также подвергнуть истощению в отношении неспецифических агглютининов при помощи инкубации с формалинизированными эритроцитами барана в течение нескольких часов. Метод может быть автоматизирован, возможен приборный учет степени агглютинации в лунках.

«Золотым стандартом» при оценке напряженности противодифтерийного и противостолбнячного иммунитета является реакция нейтрализации. Для оценки концентрации антител к столбнячному токсину используется мышиная модель, количественную детекцию антител к дифтерийному токсину проводят при помощи клеток линии Vero. Реакция нейтрализации является чувствительным, специфичным и, что немаловажно, функциональным тестом, позволяющим оценить концентрацию «полезных» антител, способных не просто связывать токсин, а подавлять его негативное воздействие на организм или отдельные клетки. Тем не менее, применение реакции нейтрализации на практике сильно ограничено ввиду длительности и дороговизны анализа.

Основным и наиболее близким по технической сущности к разработанному методу является метод иммуноферментного анализа. Сущность метода заключается в следующем.

Диагностикум представляет собой конъюгат моноклональных антител против IgG человека с ферментом, в частности пероксидазой хрена. Реакция проводится в лунках прозрачного 96-луночного планшета из полистирола, стенки и дно которого сенсибилизированы антилигандом (дифтерийным анатоксином, столбнячным анатоксином, антигеном возбудителя коклюша). В лунки вносят исследуемую сыворотку крови, разведенную до необходимого титра. В ходе инкубации происходит связывание антител, содержащихся в образце с антилигандом иммуносорбента. Детекция антител производится при помощи ферментного конъюгата. Количество связываемого конъюгата прямо пропорционально концентрации искомых антител, оно оценивается по интенсивности ферментативной реакции в каждой лунке планшета. Для этого в лунки вносят хромогенный субстрат, например тетраметилбензидин, а затем одновременно останавливают ферментативную реакцию во всех лунках. Концентрация цветного продукта тем выше, чем больше концентрация целевых антител в образце сыворотки крови. Интенсивность цветной реакции оценивают, как правило, спектрофотометрически.

Основными недостатками метода является необходимость использования считывающего оборудования для оценки результатов, дорогостоящего и требующего участия высоко квалифицированных специалистов, что ограничивает возможность повсеместного использования метода. Кроме того, использование метода не удобно в ходе оценки поствакцинального иммунитета, индуцируемого комплексной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной, поскольку требует проведения трех отдельных анализов для каждого пациента.

Предлагаемое изобретение решает задачу по созданию более простой диагностической системы, позволяющей осуществлять оценку наличия протективного титра антител одновременно к антигенам коклюшного, дифтерийного и столбнячного возбудителей.

Решение задачи возможно благодаря тому, что предлагаемая тест-система выполнена в формате дот-иммуноанализа, причем на каждую твердую фазу сорбированы антигены возбудителей коклюша, дифтерии и столбняка одновременно. Оценка результатов анализа производится при помощи сканирования тест-полосок с последующей обработкой полученных изображений при помощи специализированной программы, в частности ImageJ (NIH, США) или иной программы, позволяющей оценивать интенсивность окрашивания отдельных пикселов.

Новизна используемого метода заключается в использовании иммуносорбента, представляющего собой белый пористый материал, в частности нитроцеллюлозу, сенсибилизированный антигенами коклюша, дифтерии и столбняка, а также диагностикума, представляющего собой конъюгат частиц коллоидного углерода с G белком стрептококка. Идентичность антигенов, используемых для иммуноанализа с теми, которые входят в состав цельноклеточной трехкомпонентной вакцины против коклюша, дифтерии и столбняка, позволяет использовать метод для мониторинга напряженности поствакцинального иммунитета.

Описание разработанного способа.

В качестве твердой фазы использовали нитроцеллюлозную мембрану, приготовленную в виде полосок. На твердую фазу сорбировали антигены возбудителей коклюша, дифтерии и столбняка, разведенные до конечной концентрации в физиологическом растворе, забуференном натрий-фосфатами до рН 7,25 (ЗФР). В качестве внутреннего положительного контроля на полоски сорбировали IgG мыши.

После высушивания стрипы помещали в блокирующий буфер, ЗФР с 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) и с 0,1% твина-20 (ЗФРТ), для исключения возможного неспецифического взаимодействия компонентов аналитической системы. Далее стрипы инкубировали с контрольными сыворотками крови, а также сыворотками вакцинированных детей, разведенными в блокирующем буфере в 40 раз.

Детекцию связанных антител производили при помощи углеродного диагностикума, представляющего собой конъюгат углеродных наночастиц с G белком стрептококка. Диагностикум готовили по оригинальному методу (Раев М.Б. Нанобиотехнологии в неинструментальной иммуноаналитике. Монография. РИО УрО РАН. Екатеринбург, 2012, С. 140).

Пример. В качестве твердой фазы использовали полоски (стрипы) из нитроцеллюлозной мембраны с диаметром пор 0,45 мкм размером 0,5×2 см.

На стрипы сорбировали по 3,5 мкл дифтерийного анатоксина (0,1 мг/мл), столбнячного анатоксина (0,05 мг/мл), суспензии клеток коклюшного микроба (20 МОЕ) и IgG мыши (положительный контроль, 0,1 мг/мл), разведенных в ЗФР. Стрипы высушивали и помещали в лунки пластикового планшета. Затем в лунки вносили блокирующий буфер (ЗФРТ) и размещали планшеты на шейкере в термостате при температуре +37°С на 60 мин. На следующем этапе стрипы трехкратно промывали ЗФРТ (длительность одного цикла промывки 5 минут) и в лунки вносили:

1. Образцы сывороток крови детей, вакцинированных цельноклеточной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакциной, разведенные 1:40 в ЗФРТ.

A. Пулы сывороток крови детей, содержащих коклюшные агглютинины в титрах 1:40 (слабоположительный образец) и 1:640 (сильноположительный образец), разведенные в блокирующем буфере в 40 раз;

Б. Международный стандарт ВОЗ (10/262, 1-й Международный стандарт) дифтерийного антитоксина, разведенный блокирующим буфером до концентраций 0,025 МЕ/мл и 0,0025 МЕ/мл (что соответствует концентрации антитоксинов в цельной сыворотке 1 и 0,1 МЕ/мл соответственно);

B. Международный стандарт ВОЗ (ТЕ-3, 1-й Международный стандарт) столбнячного антитоксина, разведенный блокирующим буфером до концентраций 0,025 МЕ/мл и 0,0025 МЕ/мл (что соответствует концентрации антитоксинов в цельной сыворотке 1 и 0,1 МЕ/мл соответственно).

После получасовой инкубации при +37°С стрипы промывали и в лунки вносили диагностикум в разведении 1:45 в ЗФРТ, что соответствует массовой доле углеродных частиц 0,02%. Спустя 60 минут диагностикум из лунок удаляли, стрипы промывали, высушивали и сканировали (сканер Canon Canoscan Lide 600f, программа CanoScan Toolbox v. 5.0, режим сканирования оттенки серого, разрешение 300 точек на дюйм). Полученные изображения обрабатывали при помощи программы ImageJ, оценивая интенсивность окрашивания твердой фазы в виде темных пятен в зонах нанесения антилигандов.

Полученные результаты для дифтерийных и столбнячных антител сравнивали с контрольными образцами, в результате чего сыворотки относили к одной из трех групп, в зависимости от концентрации антитоксинов: 1 МЕ/мл. Принадлежность к определенной группе определяла заключение, касающееся наличия протективного титра антитоксинов и длительности защиты (на основании данных работ J. et al. Knowledge-based approach to clinical decision-support system, with an application in tetanus serology // Clinica Chimica Acta. 1993. V. 222. P. 79-83, Scheibel I. et al. Duration of Immunity to Diphtheria and Tetanus after Active Immunization // Acta pathologica et microbiologica Scandinavica. 1966. V. 67. P. 380; Pietsch M. Impfserologie zur Erganzung von Impfungen // Der Allgemeinarzt. 1993. V. 18.):

Наличие протективного титра противококлюшных антител оценивали, сравнивая интенсивность окрашивания образца с пороговым значением. Величину порогового значения рассчитывали следующим образом:

где X — пороговое значение оптической плотности, А — оптическая плотность сильноположителъного образца, В — оптическая плотность слабоположительного образца

Числовой коэффициент 0,128 был выведен экспериментально на основании сопоставления данных дот-иммуноанализа и агглютинационного теста методом ROC-анализа. Если полученное значение оптической плотности образца выше порогового значения, то он содержит защитный уровень противококлюшных антител.

В результате исследования 135 сывороток крови детей с различным прививочным анамнезом в отношении коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины в параллельном сравнении сконструированной тест-системы с традиционными методами детекции антител (ИФА на антитела к дифтерийному и столбнячному анатоксинам, реакция агглютинации на антитела к коклюшному микробу) было продемонстрировано, что чувствительность и специфичность метода в отношении детекции антител к коклюшу равны 88%, чувствительность выявления антител к столбняку составила 93,5%, специфичность — 90,9%, чувствительность выявления антител к дифтерийному анатоксину составила 92,4%, специфичность — 85%.

Таким образом, разработанный метод позволяет упростить и ускорить оценку напряженности поствакцинального иммунитета к коклюшу, дифтерии и столбняку. Он предоставляет возможность использовать одну процедуру для оценки иммунного ответа одновременно к антигенам трех различных инфекций и фактически является альтернативой существующим методам серодиагностики коклюша, дифтерии и столбняка. Разработанный метод не требует применения дорогостоящего регистрирующего оборудования, вместо которого для регистрации результатов предполагается использовать доступное и простое сканирующее оборудование с последующей компьютерной обработкой полученных сканированных изображений.

Таким образом, технический результат от использования изобретения заключается в упрощении, ускорении и унификации процедуры оценки напряженности поствакцинального иммунитета к коклюшу, дифтерии и столбняку, а также возможности длительного сохранения результатов анализа.

Заявляемое техническое решение соответствует критерию «промышленное применение», так как применяемые реагенты доступны, а исследования легко выполняемы.

Способ оценки эффективности вакцинации против коклюша, дифтерии и столбняка, заключающийся в полуколичественном определении напряженности поствакцинального иммунитета к антигенам возбудителей коклюша, дифтерии и столбняка, отличающийся тем, что твердую фазу, представляющую собой тест-полоски из нитроцеллюлозной мембраны с диаметром пор 0,45 мкм и размером 0,5×2 см, сенсибилизируют путем нанесения дифтерийного 3,5 мкл с концентрацией 0,1 мг/мл и столбнячного 3,5 мкл с концентрацией 0,05 мг/мл анатоксинов, цельноклеточного коклюшного антигена 3,5 мкл, 20 МОЕ, а также 3,5 мкл раствора IgG мыши с концентрацией 0,1 мг/мл в качестве положительного контроля и после подсушивания тест-полосок, инкубации их с блокирующим раствором ЗФРТ в лунках планшета, размещенного на шейкере в термостате при температуре +37°С в течение 60 мин, после чего твердую фазу трехкратно по 5 минут отмывают ЗФРТ, инкубируют с тестируемыми образцами сыворотки крови и контрольными образцами сывороток в течение 30 минут при температуре 37°С, вновь отмывают и «проявляют» антитела, связавшиеся с твердой фазой, при помощи диагностикума, представляющего собой конъюгат углеродных наночастиц с G белком стрептококка в разведении 1/45 в течение 60 минут, оценивая результат при помощи программы для анализа сканированных изображений после сканирования тест-полосок в обычном планшетном сканере, при содержании противостолбнячных и противодифтерийных антител менее 0,1 МЕ/мл оценивают недостаточную защиту, при которой требуется иммунизация, при 0,1-1,0 МЕ/мл — достаточный уровень защиты, при которой необходима бустерная доза вакцины, а при значениях более 1,0 МЕ/мл — как высокий уровень защиты, и иммунизация необходима через 5 лет и более, наличие протективного титра противококлюшных антител оценивают, рассчитывая пороговое значение: Х=0,128(А-В)+В, где X — пороговое значение оптической плотности, А — оптическая плотность сильно положительного образца, В — оптическая плотность слабоположительного образца, и если полученное значение оптической плотности образца выше порогового значения, то он содержит защитный уровень противококлюшных антител.

источник

Параметр	Референсные значения	Ед. Изм.
Антитела к столбнячному анатоксину (аnti-Tetanus toxoid), IgG