Добрый день! Опишу ситуацию. Содержу коз в количестве 15гол, на участке, безвыпасно, траву не кошу, животные только на сене, контактов у моих животных с другими МРС не было, мои животные доступ за пределы участка не имеют. При проведении планового исследования на бруцеллез в 2014г все результаты отрицательные, после этого ввоза животных в мое хозяйство не было. Весной 2015 года планового исследования не было, а провели его в октябре 2015г(возможно это был эпизоотический мониторинг) При этом в нашем населенном пункте выявлено четыре положительнореагирующих животных МРС. В том числе мое животное, козочка, рожденная в моем хозяйстве в 2014 г. Мать ее отр, козел, ее крывший — отр, пятеро коз, живших с ней в одной стайке на протяжении более 1 года, — отр. Результаты РА 1:200, Рид положит. Мы с муже уже тоже сдали на бруцеллез — отриц. В нашей местности до этого ни разу за обозримые года не было выявлено ни одного случая заболевания бруцеллезом. Козочка на момент исследования была беременна со сроком 2 мес. Помимо этого до беременности была обезрожена, но пошло инфицирование пазух, после проведения антибиотикотерапии состояние улучшилось. Но возможно очаг инфекции в пазухах остался., так как коза опять стала пугливой и голову трогать не дает. После выявления, козочка была изолирована. Все оставшееся поголовье повторно исследовано, все отрицательно, вчера сделали уже второй забор крови. Провести повторное исследование положительно среагировавщего животного мне отказали. Выписали предписание на убой. Я за свои средства провела исследование цельной крови в ПЦР, результат отрицательный. Имели ли право мне отказать в повторном исследовании животного? При этом, диагноз установила лаборатория. Никто из врачей не выезжал в мое хозяйство, не проводил исследование ситуации. Все мои попытки провести повторное исследование встретили категорический отказ. Более того передать всю ругань, что я услышала в свой адрес, невозможно, врач эпизоотолог совершенно неадекватна.
Других положительно реагирующих животных уже забили, вскрытие ветсанэкспертом никаких изменений не выявило, пат материал на исследование, естесственно, никто не отправлял. При этом все замалчивается, скрывается, никто ничего не знает. Даже о том, что пришли результаты повторных анализов мне не сообщили.
Может ли это быть ложноположительная реакция в связи с беременностью, с воспалительным процессом?
Какие действия мне можно предпринять для установления диагноза?
Аннв М. wrote: Добрый день! Опишу ситуацию. Содержу коз в количестве 15гол, на участке, безвыпасно, траву не кошу, животные только на сене, контактов у моих животных с другими МРС не было, мои животные доступ за пределы участка не имеют. При проведении планового исследования на бруцеллез в 2014г все результаты отрицательные, после этого ввоза животных в мое хозяйство не было. Весной 2015 года планового исследования не было, а провели его в октябре 2015г(возможно это был эпизоотический мониторинг) При этом в нашем населенном пункте выявлено четыре положительнореагирующих животных МРС. В том числе мое животное, козочка, рожденная в моем хозяйстве в 2014 г. Мать ее отр, козел, ее крывший — отр, пятеро коз, живших с ней в одной стайке на протяжении более 1 года, — отр. Результаты РА 1:200, Рид положит. Мы с муже уже тоже сдали на бруцеллез — отриц. В нашей местности до этого ни разу за обозримые года не было выявлено ни одного случая заболевания бруцеллезом. Козочка на момент исследования была беременна со сроком 2 мес. Помимо этого до беременности была обезрожена, но пошло инфицирование пазух, после проведения антибиотикотерапии состояние улучшилось. Но возможно очаг инфекции в пазухах остался., так как коза опять стала пугливой и голову трогать не дает. После выявления, козочка была изолирована. Все оставшееся поголовье повторно исследовано, все отрицательно, вчера сделали уже второй забор крови. Провести повторное исследование положительно среагировавщего животного мне отказали. Выписали предписание на убой. Я за свои средства провела исследование цельной крови в ПЦР, результат отрицательный. Имели ли право мне отказать в повторном исследовании животного? При этом, диагноз установила лаборатория. Никто из врачей не выезжал в мое хозяйство, не проводил исследование ситуации. Все мои попытки провести повторное исследование встретили категорический отказ. Более того передать всю ругань, что я услышала в свой адрес, невозможно, врач эпизоотолог совершенно неадекватна.
Других положительно реагирующих животных уже забили, вскрытие ветсанэкспертом никаких изменений не выявило, пат материал на исследование, естесственно, никто не отправлял. При этом все замалчивается, скрывается, никто ничего не знает. Даже о том, что пришли результаты повторных анализов мне не сообщили.
Может ли это быть ложноположительная реакция в связи с беременностью, с воспалительным процессом?
Какие действия мне можно предпринять для установления диагноза?
Добрый день. Могу Вам только посочувствовать. Но, боюсь, ваша козочка инфицирована. У коз положительным считается РА 1:100, а тут еще и РИД положительный. Что касается ПЦР крови, то это бессмысленный анализ, так как бруцелла находится в крови очень короткое время, в момент острой фазы. Далее она локализуется в суставах, половых органах. Поэтому, как правило, ПЦР крови всегда отрицательный. Показательным он будет при исследовании смывов с влагалища или абортированных плодов. Так что, советую, поплакать и быстро забить и утилизировать . И радоваться, что остальное стадо здорово. Я ж правильно понял, что повторные анализы тоже отрицательны? И люди здоровы! Бруцелла мелитензис очень вирулентна, заболеть можно на раз. Не лечится. Человек сразу получает инвалидность. Что касается повторного исследования положительно реагирующего животного, то инструкциями и руководствами это не предусмотрено, опять же из-за опасности заражения. На счет замалчивания — это вряд ли. У Вас должен быть наложен карантин на весь поселок.
И есть вопрос — а почему Вы не вакцинируете свое стадо?
Во-первых, забор крови провели в нарушение Ветеринарных правил ВП 13.3.1302-963. 2.2.3. Коров (нетелей), буйволиц и верблюдиц исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов — с 4-месячного возраста. Хотя были предупреждены, что животные беременны. А в инструкции О МЕРОПРИЯТИЯХ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛИКВИДАЦИИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ в разделе диагностика бруцеллеза есть пункт 2.6. В случае, когда в благополучном по бруцеллезу стаде (на ферме) при плановом исследовании от отдельных животных сывороток крови в РА (в том числе при переисследовании проб, положительных по РБП, но отрицательных по РСК) получен положительный результат — у крупного рогатого скота и лошадей в титре не более 200 международных единиц (МЕ), у буйволов, овец, коз и свиней — 100 МЕ, таких животных немедленно изолируют и через 15 — 20 дней дополнительно исследуют на бруцеллез комплексно серологическими (РА и РСК или РДСК) и аллергическим (кроме лошадей) методами. Одновременно этими же методами исследуют остальных животных стада (фермы).
Если при повторном исследовании в стаде (отаре) не выявлено реагирующих и отсутствуют другие признаки, вызывающие подозрение на заболевание животных бруцеллезом (аборты и проч.), а у исследованных ранее животных титр антител в РА не повысился, РСК (РДСК) и аллергическая проба окажутся отрицательными, то стадо считают благополучным в отношении бруцеллеза.
Более того в этой же главе написано, что даже если произошли аборты, делается бакисследование, животные полож реагируют, то их исследуют повторно!
Но ветеринары, сказали,что это не действующая(!) инструкция.
Почему такая перестраховка? Когда брали кровь на ПЦР, я покупала вакуумные прбирки, ни капли крови не было. Да и когда первично брали кровь, что не было угрозы, когда еще не знали о результатах?
У нас местность БЛАГОПОЛУЧНА и до этого скрининга не было НИ ОДНОГО положительного животного, более того даже сомнительного. Почему я должна прививать животных от того, чего отродясь у нас не было. У нас Ханты-Мансийский округ, не сельхоз район, не было бруцеллеза. И откуда он мог взятся лично в моем хозяйстве — это загадка. А доводы врачей, что типа с ногами занесли, я в сарай в уличной обуви не бегаю, да и три другие положительные головы живут за чертой города, а я в черие на другом конце от их всех. Общих стад у нас нет, пастбищ нет. Да и мои вообще за калитку не выходят.
На данный момент на мое хозяйство наложено ограничение. Так как они нарушили правила и взяли кровь у беременной козы, то мне ветинспектор написал письмо, что я должна содержать животное изолированно и через 2 мес после окота провести анализ. Я предложила во время родов, соблюдая осторожность, собрать околоплодные воды и оболочки плодов для исследования ПЦР или бак исследования. Мне заявили, что делать не будут и эти анализы не являются для них показательными.
Я бы именно так себя и повела, если бы изначально они соблюдали инструкции. И не несли ахинеи по поводу недействующих инструкции. И вообще, пошли бы со мной на контакт и рассмотрели мою ситуацию. И не начали орать и везде заявлять, что я взятки сую и тому подобное, а также кричать, что я лаборатории не доверяю. А на мой вопрос о дополнительном исследовании, заявили, что я не имею права проводить анализы в других лабораториях, а только в той которая выявила положит. реакцию. Эти заявления как мне расценивать?! Идти на поводу их безграмотности и попоприкрывательстве я не хочу. И тянуть с исследованиями и гадать на кофейной гуще тоже не хочу. Я предложила за свой счет доставить и сделать любые исследования, которые необходимы для уточнения диагноза. В ответ, только , что они отказываются мне помогать, кровь не возьмут, сопроводительную не напишут(без нее сами понимаете, лаборатория не примет).
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РСФСР
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА И ИЕРСИНИОЗА И МЕРЫ ПО ИХ ПРОФИЛАКТИКЕ. РЕКОМЕНДАЦИИ.
При проведении плановых диагностических исследований животных на бруцеллез в благополучных по этой болезни зонах обычно применяют реакцию агглютинации (РА) или Роз бенгал пробу (РБП). При этом, особенно в весеннее время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакциро- ванных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть получены неспецифические результаты реакций. Обычно появление таких реакций обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.), а также рядом других причин. Как правило, уровень выявляемых при этом агглютининов не превышает 100 МЕ у свиней и овец и 200 МЕ у крупного рогатого скота, за исключением случаев, когда животные являются носителям микроорганизмов из группы иерсиний, в частности иерсинии энтероколитика серовара 0:9. Оценка подобных показаний РА в ранее благополучных по бруцеллезу хозяйстах, учитывая возможность заноса инфекции и длительного бессимптомного болезни, затруднена и требует дополнительной расшифровки. В этих целях рекомендуется использовать комплекс показателей, предусмотренных Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных, утвержденной бывшим Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 10.11.88 г., в том числе: эпизоотологические данные, проявление клинических признаков болезни, сроки иммунизации против других болезней, результаты исследований другими методами (бактериологическим, РДСК, РСК, реакцией аллергии) и повторного (через 15-20 дней) исследования сывороток крови этих и остальных животных данного стада (отары). Практический опыт показыват, что комплекс дополнительных исследований в большинстве случаев позволяет подтвердить или исключить наличие бруцеллезной инфекции в хозяйстве (на ферме). Однако при этом нередко требуются значительные затраты рабочей силы, времени и материальных средств на проведение ограничительных мероприятий и для окончательного уточнения диагноза. В связи с этим быстрое выявление и искоренение возникшего очага бруцеллезной инфекции, а также недопущение неоправданного убоя скомпрометированных групп скота при выявлении гетероспецифических серологических реакций с бруцеллезными диагностикумами имеют большую эпизоотологическую и экономическую значимость.
Я, правда, на вашей стороне. Но обращу Ваше внимание на следующее. Ветеринары правы, инструкция есть уже давно другая. Можете посмотреть ее на этом же сайте http://www.fsvps.ru/fsvps/laws/168.html#5
Повторные анализы проводятся при получении условно-положительного результата (сомнительного). Да и в «рекомендациях», которые Вы приводите, указано, что титр не должен превышать 1:100. А у Вас 1:200. Это много, для возможной ошибки. Криворуких в лабораториях много, но не все же? Вы можете обратиться лично в любую другую лабораторию и сделать у них независимый анализ (РА, РИД). Втихаря. Никто запретить не сможет. Если ничего не случится. Что касается околоплодных вод и т.п., то тут, мне видится так: если коза больна, то родов не будет. Будет аборт. А если родит, то — здорова. Плоды и прочее, по условиям карантина Вы никуда вывезти не сможете. Это уже подсудное дело. Почему перестраховка? Почитайте внимательно про энту болячку, встаньте на их место и ответьте — будете ли вы рисковать своим (и чужим) здоровьем и работой ради какой-то чужой козы? Или даже не ради козы, а просто?
Что касается источника болезни, то тут много путей. Я ж не знаю всей истории Вашей козы и стада. Кто крыл, кто роги пилил и чем. Вам должно быть видней. Но, как правило, когда садишься и спокойно анализируешь, находится причина, о которой даже подумать бывает странно. Увы. Ну не спроста ж Вы не единственный случай оказался.
Кровь можно взять в вакуумные пробирки, сыворотку тоже можно отделить, соблюдая правила. А по поводу плодных оболочек. После убоя все равно ветсанэксперт будет разделывать тушу, брать пат материал, ту же матку, плоды для бак исследования. И также я их повезу для исследования и за свои деньги. А так я еще б и ПЦР сделала. В чем разница? Почему нельзя сделать при жизни? А насчет риска, ветеринар — это такая работа. Знаешь на что идешь.
Вот как то, так. Не подумайте, что нападаю, просто вопросов больше чем ответов. Все очень неоднозначно.
Тест-системы должны быть чистыми. А что касается «бактериологических исследований», то, как мне известно, их нигде не делают! Ввиду большой опасности для персонала. Исключением, видимо, являются НИИ.
Да все можно. Согласен. Найдите ветеринара, любого, скажите ему про диагноз (обязательно!!) и попросите взять анализы Никаких проблем. Ветсанэксперт — это не Вы, он имеет на это полномочия. Ну и сделайте ПЦР. Кстати, исследования на бруцеллез при возникновении очага проводятся за счет государства. И ПЦР они могут сами сделать.
Да, на всякий случай, есть еще Наставления по бруцеллезу от 2003 года (вроде). Там ПЦР считается абсолютно достоверной при однократном исследовании. Правда, есть оговорка, что ее используют для уточнения серологии. И, опять же, не по крови! Хотя, вру, там кажется не уточняется.
А в целом так — если Вы абсолютно уверены, что коза здорова, то делайте независимый анализ. Если будет отрицательным — то бейтесь с управлением.
Это сообщение было редактировано 1 раз. Последнее обновление произошло в 17/12/2015 15:34:25
Наверное,я сделаю запрос в Департамент ветеринарии, о том какие нормативные документы действительны. Если инструкция недействительна, почему ее мне зачитывал заместитель в департаменте ветеринарии? Чтоб не быть голословной и не основываться на том, чего нет. А бак исследования делают во всех лаборатория, сколько обзвонила, никто не отказал. Не имею права самостоятельно взять, кровь должен брать вет врач, составить сопроводительную., подтвердить этим, что взято от конкретного животного. Может я совсем от другого могу взять. Это типа защита от подлога.
Они от забитых животных патматериал не взяли, не то что ПЦР сделали.
А про Наставление они вообще слышать не хотят, это для лабораторий типа только. А там.
1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных. Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. (Я писала об этом ветврачам, им пофиг, они не руководствуются наставлением)
4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации
Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сывороткой крови крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов и лошадей, не иммунизированных или иммунизированных неагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), содержащей 200 ME антител и выше; овец и коз — 100 ME и выше; оленей (маралов) и собак — 50 ME и выше; пушных зверей и морских свинок — 10 ME и выше.
При выявлении среди не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, а также иммунизированных неагглютиногенными вакцинами крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей, животных, реагирующих только в РА с содержанием антител 50-100 ME, а среди овец, коз, оленей (маралов), собак — 25 ME, считают сомнительно реагирующими и исследуют повторно через 15-30 сут. При повышении титров заболевание считают установленным. При сохранении титров на прежнем уровне проводят дополнительные исследования по дифференциации, согласно утвержденным методам.
При выявлении в стадах крупного рогатого скота, ранее иммунизированного против бруцеллеза агглютиногенными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), животных, реагирующих только в РА с содержанием не выше 200 ME антител и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1:10, их повторно исследуют через 15-30 сут в РА, РСК и РИД. При повышении содержания антител в исследуемых сыворотках в РА и (или) РСК или положительной РИД заболевание считают установленным. При выявлении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, ранее не иммунизированных или иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, животных, положительно реагирующих в РА с содержанием 100 ME антител и выше, признают больными. Реакцию считают сомнительной при содержании 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительного результата животных признают больными бруцеллезом.
При исследовании в РА неиммунизированных баранов-производителей, козлов, пробников и ярок, содержащихся в благополучных по бруцеллезу отарах, где овцы (козы) иммунизированы против бруцеллеза, реакцию считают положительной, а заболевание установленным при содержании в сыворотке крови животных 100 ME антител и выше. Реакцию считают сомнительной при наличии 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительных результатов животных признают здоровыми, а отару — благополучной по бруцеллезу.
ВИдите, есть понятие положительное и больное. Под какой пункт подпадает мой случай и написано диагноз считают установленным? По реакции РА в благополучном хозяйстве нельзя поставить диагноз бруцеллез.
5.1. Тест-система предназначена для выявления ДНК бактерий рода Brucella (B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis) в биологическом материале от животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, в случае аборта или проявления у них других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты), вызывающих подозрение на бруцеллез, и (или) при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования. (Ага, вуаля?) 5.2.3. Для исследования используют следующий патматериал: — содержимое брюшной полости и желудка, селезенку, печень абортированного плода или весь плод; — плаценту и плодовые оболочки от абортировавших животных; — содержимое бурс, гигром; — кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных,в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела; — сперму от самцов с признаками орхита и эпидидимита и (или) при получении сомнительных или положительных результатов аллергического или серологического исследования на бруцеллез или инфекционный эпидидимит баранов; — в случае убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками. 5.6. Оценка результатов При положительном результате ПЦР, зарегистрированном при исследовании хотя бы одной пробы материала, животное считают больным бруцеллезом.
Нигде не написано, что ПЦР является неинформативной.
Я не знаю каков механизм этого независимого анализа. К кому обратится? Что делать? Вот и предлагаю в качестве анализа взять патматериал во время родов, а они Я ж не понимаю каков механизм этого всего. Вот сюда и написала, может что подскажут. Спасибо, за проявленный Вами интерес.
Сделайте, конечно, запрос. Посмотрим, что ответят дней через 30. В данном случае, не так важна последовательность действий по инструкции, как полученный результат. Уверен, там все объяснят. Я б тоже мог, времени нет Да и не так это важно. Про бак исследования — вы уверены, что именно бактериологические, а не бактериоскопические на бруцеллез? Имеете ВЫ ПРАВО, если хотите, уверены в своей правоте и не боитесь!! Я взял, отвез в другую лабораторию, получил отрицательный результат. УБЕДИЛСЯ, что я прав!! И после этого, заставил провести повторные официальные исследования. Чуть до драки не дошло. Но я победил. Они ошиблись. Но у вас тут немного другая ситуация.
И, еще раз, Вы имеете дело не с ветврачами, а с ветинспекторами Департамента. Наверняка. Это уже не дело ветврачей СББЖ. От них уже ничего не зависит.
Аннв М. wrote: А про Наставление они вообще слышать не хотят, это для лабораторий типа только. А там.
1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных. Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. (Я писала об этом ветврачам, им пофиг, они не руководствуются наставлением)
А тут, что не понятно? Я ж Вам уже пояснил, что в крови бруцелла находится только во время острой фазы — аборт и др. клинические признаки!!
Аннв М. wrote: 4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации
Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сывороткой крови крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов и лошадей, не иммунизированных или иммунизированных неагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), содержащей 200 ME антител и выше; овец и коз — 100 ME и выше; оленей (маралов) и собак — 50 ME и выше; пушных зверей и морских свинок — 10 ME и выше.
При выявлении среди не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, а также иммунизированных неагглютиногенными вакцинами крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей, животных, реагирующих только в РА с содержанием антител 50-100 ME, а среди овец, коз, оленей (маралов), собак — 25 ME, считают сомнительно реагирующими и исследуют повторно через 15-30 сут. При повышении титров заболевание считают установленным. При сохранении титров на прежнем уровне проводят дополнительные исследования по дифференциации, согласно утвержденным методам.
При выявлении в стадах крупного рогатого скота, ранее иммунизированного против бруцеллеза агглютиногенными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), животных, реагирующих только в РА с содержанием не выше 200 ME антител и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1:10, их повторно исследуют через 15-30 сут в РА, РСК и РИД. При повышении содержания антител в исследуемых сыворотках в РА и (или) РСК или положительной РИД заболевание считают установленным. При выявлении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, ранее не иммунизированных или иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, животных, положительно реагирующих в РА с содержанием 100 ME антител и выше, признают больными. Реакцию считают сомнительной при содержании 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительного результата животных признают больными бруцеллезом.
При исследовании в РА неиммунизированных баранов-производителей, козлов, пробников и ярок, содержащихся в благополучных по бруцеллезу отарах, где овцы (козы) иммунизированы против бруцеллеза, реакцию считают положительной, а заболевание установленным при содержании в сыворотке крови животных 100 ME антител и выше. Реакцию считают сомнительной при наличии 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительных результатов животных признают здоровыми, а отару — благополучной по бруцеллезу.
ВИдите, есть понятие положительное и больное. Под какой пункт подпадает мой случай и написано диагноз считают установленным? По реакции РА в благополучном хозяйстве нельзя поставить диагноз бруцеллез.
А что с такими животными делают?
Есть понятие сомнительное и положительное. А вот положительное=больное. Увы. По РА ставится всегда.
Аннв М. wrote: 5. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА
5.1. Тест-система предназначена для выявления ДНК бактерий рода Brucella (B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis) в биологическом материале от животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, в случае аборта или проявления у них других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты), вызывающих подозрение на бруцеллез, и (или) при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования. (Ага, вуаля?) 5.2.3. Для исследования используют следующий патматериал: — содержимое брюшной полости и желудка, селезенку, печень абортированного плода или весь плод; — плаценту и плодовые оболочки от абортировавших животных; — содержимое бурс, гигром; — кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных,в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела; — сперму от самцов с признаками орхита и эпидидимита и (или) при получении сомнительных или положительных результатов аллергического или серологического исследования на бруцеллез или инфекционный эпидидимит баранов; — в случае убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками. 5.6. Оценка результатов При положительном результате ПЦР, зарегистрированном при исследовании хотя бы одной пробы материала, животное считают больным бруцеллезом.
Нигде не написано, что ПЦР является неинформативной.
А где я утверждал обратное? Она очень даже информативна. Но Вы еще раз внимательно прочтите, на чем она делается.
— кровь и молоко от абортировавших
И еще, она информативна, только при положительном результате. Отрицательный, по указанным причинам, нет.
Я не знаю каков механизм этого независимого анализа. К кому обратится? Что делать? Вот и предлагаю в качестве анализа взять патматериал во время родов, а они Я ж не понимаю каков механизм этого всего. Вот сюда и написала, может что подскажут. Спасибо, за проявленный Вами интерес.
У вас, что частных ветклиник и других лабораторий нет? Паспорт там не спрашивают.
Проблема не только в ветврачах, ближайшая лаборатория, поставившая диагноз в 500км, другая -филиал- отказалась, они поддерживают старших, 250 км. Другая ближайшая уже в 1200км. Я возила на ПЦР в Новосиб на самолете, влетело в 20тыс., куда пробы не пронесешь без гарантийного письма, на офиц. бланке. А сыворотку на серологию наши тогда отказались взять. А я, дурочка, думала все официально через них решить.
Вот что-то все так передергивают, дословно «кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных, в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела; » Нигде ни в одной инструкции не написано, что животное положительно прореагировавшее в РА считается больным, кроме как в неблагополучном хозяйстве, где уже выделен возбудитель бруцеллеза или есть клин признаки. Все документы достаточно вольно трактуются, а на вопрос покажите конкретный документ, никто ничего не может.
Ветинспекторы пока приостановили мои все документы, до выяснения всего ветврачами. Ограничения, естественно пока остаются. Как они сказали, что всего лишь надзорный орган, чтоб я и ветслужба выполнили свои обязанности.
Проблема не только в ветврачах, ближайшая лаборатория, поставившая диагноз в 500км, другая -филиал- отказалась, они поддерживают старших, 250 км. Другая ближайшая уже в 1200км. Я возила на ПЦР в Новосиб на самолете, влетело в 20тыс., куда пробы не пронесешь без гарантийного письма, на офиц. бланке. А сыворотку на серологию наши тогда отказались взять. А я, дурочка, думала все официально через них решить.
Вот что-то все так передергивают, дословно «кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных, в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела; » Нигде ни в одной инструкции не написано, что животное положительно прореагировавшее в РА считается больным, кроме как в неблагополучном хозяйстве, где уже выделен возбудитель бруцеллеза или есть клин признаки. Все документы достаточно вольно трактуются, а на вопрос покажите конкретный документ, никто ничего не может.
Ветинспекторы пока приостановили мои все документы, до выяснения всего ветврачами. Ограничения, естественно пока остаются. Как они сказали, что всего лишь надзорный орган, чтоб я и ветслужба выполнили свои обязанности.
Запомните, к сожалению, Вы одни со своим горем. Им всем глубоко наср. Они не понимают весь ужас, шок и растерянность, которую испытывают люди, случайно, впервые столкнувшиеся со страшным диагнозом. И никогда не сталкивавшиеся с этой системой! Вам повезло, что они еще и не все стадо захотели умертвить, включая хозяев. А общаться с Вами они будут так, как будто это Вы специально заразили и собираетесь еще и весь регион! Они не понимают, что Вы потерпевшие. Еще и штраф на вас попытаются наложить. Они будут действовать в соответствии с инструкциями по оздоровлению очага. И защищать свои тохес. К сожалению, все это переписанное с предыдущего старья. Ничего нового, в нашей стране, за последние 25 лет не придумали. Придумка — требует вложений в науку. А это очень много денег при очень не близком результате. А у нас все надо здесь и сейчас. Поэтому, по старинке, считают, что лучше все уничтожить и точка! Это ж еще и дешевле. И зарубежный опыт не нужен, он не соответствует действующему законодательству. Они еще, при любых раскладах, к вам с дезинфекцией придут. Не мытьем, так катаньем. Ошибка — сразу со своей стороны все делать официально. Инструкции — против этого. Но, надо признать, что мелитензис — это действительно опасно! Расстояния впечатляют. Но, повторю, если Вы уверены в правоте и чистоте — требуйте. Резко взять и нагнуть Вас без суда и полиции они не смогут. Частная собственность, однака! Как ни смешно. Про трактовки — какое законодательство, такие и трактовки. Но, фиг с ним, с законодательством, посмотрите просто про биологию болячки. И примите решение. Ошибки в лабораториях бывают. Но, меня смущает титр. Мы, в нашей ситуации (она немного другая была) просмотрели все, даже с Аргентиной связались (штаты и европа само собой) и потом приняли решение. И победили.
Это сообщение было редактировано 1 раз. Последнее обновление произошло в 17/12/2015 22:04:00
источник
Разведение крупного рогатого скота (КРС) – выгодный и прибыльный вид деятельности, благодаря которому можно получить свежее молоко и мясо. К сожалению, содержание коров и быков может принести немало проблем. У этих животных могут развиться различные инфекционные заболевания, одно из которых – бруцеллез КРС. Ему подвержены не только коровы и быки, но и другие представители фауны, в том числе и человек.
Первое упоминание заболевания появилось около 2 тысяч лет назад, сделано оно было знаменитым древнегреческим целителем Гиппократом. В 19 веке бруцеллез был научно описан английским врачом, а вскоре ученые нашли микроорганизм, который вызывал недуг. В то время заболевание называлось средиземноморской или мальтийской лихорадкой. На протяжении долгого времени постоянные аборты у скота считались отдельным заболеванием, но в итоге была найдена связь недуга и биологических признаков возбудителей.
Бруцеллез у крупного рогатого скота – серьезное бактериальное заболевание, которое вызывается микроорганизмами рода Бруцелла (Brucella). Характеризуется патологиями в половой структуре у КРС, а также поражениями нервной системы, сердца, сосудов, костей и суставов. Проникая в организм коровы, инфекция перемещается в молочные железы, селезенку, печень и матку, в итоге стимулируя аборт. Выделяют несколько форм недуга, описанных в таблице ниже.
Форма
Длительность
Острая
Сопровождается симптомами на протяжении 1-2 месяцев
Подострая
Недуг развивается в течение 3 месяцев
Хроническая
Крупный рогатый скот страдает от недуга больше 3 месяцев
Бактерия Бруцелла, вызывающая бруцеллез
Бактерия очень устойчива к внешней среде. Она отлично выживает в условиях отрицательной температуры. До пяти месяцев Бруцелла живет в водных условиях, в земле – три месяца и больше. В молоке она присутствует до 46 дней, в брынзе – до двух месяцев. Остальные молочные продукты содержат бактерию на протяжении всего срока их пищевой ценности. Бактерия погибает, если прокипятить молоко и произвести его пастеризацию. Препараты же дезинфекции способны избавиться от Бруцеллы за несколько минут.
Заражение может осуществляться разными способами, но чаще всего инфекция проникает в организм животных фекально-оральным методом. Распространяется инфекция очень быстро, передаваясь от зараженных коров к здоровым особям. Также бактерии могут попасть бытовым способом, когда на пораженную слизистую животного попадает возбудитель недуга.
Самые частые случаи заражения – через корм, воду, предметы ухода, подстилку и другие вещи, с которыми чаще всего контактирует скот.
Микробы так же могут попасть в организм через трещины на коже, органы пищеварения и дыхательные пути.
Чаще всего бруцеллез развивается у скота, который проживает на частных фермерских и приусадебных предприятиях. Происходит это преимущественно в пастбищный период, во время контакта с другими животными. Многие фермеры не понимают, насколько опасна болезнь (не только для животных, но и для человека). Вспышки заболевания могут наблюдаться после завоза новых особей на ферму, а также при несоблюдении правил карантина и отсутствии правильных лабораторных мероприятий и вакцинации.
Главный признак бруцеллеза у КРС – это выкидыш или появление на свет нежизнеспособной особи. Развитие тех или иных симптомов зависит от индивидуальных особенностей каждого отдельно взятого животного. Если есть подозрение на заболевание, следует обратить внимание и на другие симптомы болезни.
Пошаговая инструкция по осмотру и выявлению бруцеллеза у КРС.
Шаг 1. Проверьте, появились ли на задних конечностях коровы/быка/теленка абсцессы (нарывы, гнойники, которые появляются из-за воспалительного процесса) или гугромы (кисты, образующиеся в тканях). Часто у животного развивается бурсит – воспаление суставов на передних конечностях;
Шаг 2. Понаблюдайте за тем, как питается животное. Если скот болен, то аппетит у него упадет, он станет малоподвижным и слабо активным. Корова/бык/теленок становятся угнетенными, их походка может быть неуверенной. Вес начнет снижаться. Иногда может наблюдаться повышенная температура тела;
Шаг 3. Проверьте, нет ли у животного слизистых выделений из половых органов. Они бурого или коричневого цвета, совсем не имеют запаха;
Шаг 4. Участвуйте в родах скота. У коров, которые пережили выкидыш, может наблюдаться задержка последа (плаценты). Иногда развивается эндометрит, вызванный воспалительными процессами, он сопровождается обильным выделением гноя;
Шаг 5. Внимательно следите за количеством молока. Удой коровы снижается, если она больна бруцеллезом. Ее вымя может отекать, воспаляются молочные железы.
Симптомы бруцеллеза у КРС: поражение конечностей
У быков также можно диагностировать болезнь. У них наблюдаются признаки воспаления препуции (крайней плоти), а также орхит (воспаление тканей яичек). Помните о том, что некоторые симптомы могут оказаться двоякими: например, выкидыши могут происходить из-за туберкулезного заболевания. Если даже корова получила заражение через открытую ранку, в ее области не наблюдается никаких признаков недуга.Симптоматика бруцеллеза слабовыраженная, и реальный диагноз может определить только специалист.
Установить диагноз самостоятельно очень сложно. Если вы не являетесь опытным фермером и не можете самостоятельно диагностировать заболевание, обратитесь к специалисту (ветеринару). Он осмотрит животное, получит от вас всю необходимую информацию. Если у врача появится подозрение на заражение, он назначает исследование в лаборатории. В зависимости от формы диагностики используется абортированный плод, а также проводится анализ молока или крови коровы. Лабораторные методы диагностики бруцеллеза:
Реакция аллергии. Самке вводится абортин, ответ будет получен примерно через сутки (но не позднее 72 часов). По величине опухоли можно судить о наличии заболевания. Следует насторожиться, если образование достигло величины фасоли. Есть отрицательная сторона у этого метода: перенесшие бруцеллез, но полностью здоровые животные также дают положительную реакцию;
Реакция агглютинации Райта. Иногда невозможно найти причину заражения в крови животного. Чаще всего в диагностике болезни используется анализ на реакцию агглютинации, специалисты оценивают ее и исследуют. Это самый надежный метод определения возбудителя. Для его применения необходимо приготовить антиген, затем оценить и исследовать реакцию. У заболевших животных она положительная.
Шаг 1. Привяжите корову, зафиксируйте ее голову за рога или недоузок;
Шаг 2. У самого начала шеи наложите жгут из резины или плотный ремешок, затяните его. Если вы все сделали правильно, яремная вена должна налиться кровью. Попробуйте ее прощупать;
Шаг 3. Возьмите острую иглу (предварительно прокипяченную), вколите ее в яремную венку, двигаясь снизу вверх (глубина – около 4 сантиметров). Каждой корове – своя, индивидуальная иголка;
Шаг 4. Кровь должна вытечь из иглы, поэтому предварительно подставьте чистую пробирку. Если жидкость не идет, поверните иглу вокруг оси и подвигайте ее то вперед, то назад;
Шаг 5. Когда пробирка наполнится на 2/3 от объема, ослабьте ремешок, зажмите венку пальцами и резко выньте иглу;
Шаг 6. Закройте пробирку специальной пробкой, кожу в месте укола смажьте настойкой йода.
Правильная фиксация коровы для взятия анализа
Необходимо четко следовать инструкции и учитывать все меры безопасности при заборе крови. Чтобы не заразиться бруцеллезом, рекомендуется проводить забор крови и прочих жидкостей в специально оборудованных лабораториях.
Болезнь может иметь острое, хроническое или бессимптомное течение. Больше всего предрасположены к болезни взрослые особи. Когда возбудитель проникает в организм, он начинает размножаться у ворот инфекции, после чего воспаление доставляется в кровеносные и лимфатические пути и проникает в весь организм. Инфекция заполняет тело животного, местом дислокации выбирая определенные органы и системы.
Основные органы поражения – печень, молочные железы, селезенка и матка.
Локализируясь в плаценте, инфекция вызывает нарушения в развитии эмбриона, оно останавливается, происходит аборт. Это может случиться на четвертом или пятом месяце беременности. Телята, которые родились своевременно, могут оказаться нежизнеспособными. Обычно такие особи умирают в первые несколько дней жизни. Инкубационный период заболевания – от 2 до 4 недель.
Если в стаде нет беременных особей, определить недуг поможет только лабораторное исследование.
То, как проходит бруцеллез в стае, зависит от количества беременных самок. В некоторых стадах выкидыш происходит у половины самок и более. Как правило, аборт случается один раз, гораздо реже – два раза. Если инфекция была занесена в здоровое стадо, выкидыш может произойти у 60% самок. От бруцеллеза взрослые особи не умирают. При вскрытии могут быть найдены поражения в половой структуре, некрозы в суставах, воспаления в печени, почках и селезенке.
Метод лечения выбирается исходя из тяжести бруцеллеза. На первой стадии эффективны антибиотики, которые избавляют организм от возбудителя недуга: рифампицин, левомицетин, стрептомицин, тетрациклин. Время лечения и необходимую дозу назначает ветеринар. При хроническом течении болезни антибиотики бесполезны – в этом случае назначается вакцинация, снимающая симптомы и останавливающая дальнейшее развитие бактерий.
В некоторых случаях при лечении болезни используют комплексную терапию. К антибиотикам добавляются иммуностимулирующие медикаменты либо противовоспалительные средства. Если у животного появляются боли, ему назначают болеутоляющие препараты. Назначенные врачом уколы можно производить самостоятельно.
Инструкция по правильному введению лекарства.
Шаг
Действие
1.
Ограничьте движения коровы, поместив ее в узкий загон. Голова коровы должна придерживаться специальным фиксатором.
2.
Выберите область для укола. Обычно ей является шея, часто – место между основанием хвоста и костью бедра. Конкретные указания можно получить у специалиста.
3.
Введите медикамент в соответствии с указаниями. Продолжайте до тех пор, пока не будет введено нужное количество лекарства.
4.
Выньте иглу из места инъекции, отпустите корову.
Методы лечения бруцеллеза КРС: укол корове
В группу риска заражения бруцеллезом попадают люди, которые работают с животными. Чтобы не допустить развитие у крупного рогатого скота заражения, необходимо придерживаться четких правил ухода, содержания и разведения КРС:
Памятка по профилактике бруцеллеза КРС
Содержание крупного рогатого скота в плохих, некомфортных условиях значительно снижает их иммунитет, увеличивая риск заражения инфекциями, в частности, ею может оказаться бруцеллез КРС.
Соблюдайте все профилактические меры по предотвращению заболевания, ухаживайте за скотом, тщательно обрабатывайте молочную и мясную пищу, при появлении первых признаков болезни животного обратитесь к ветеринару. Эти несложные правила помогут вам сохранить здоровье и благополучие всего поголовья крупного рогатого скота и будущего молодняка.
Человек может заразиться бруцеллезом при потреблении молока, которое было получено от зараженных животных (в том числе продуктов молочного происхождения). Если плохо обрабатывать мясо, также есть шанс получить заболевание. Часто заражение происходит на производстве, связанном с обработкой шерсти и кожи. Заболеть можно любым путем, даже во время контакта с больной коровой. Бывали случаи, когда человек заражался бруцеллезом во время уборки навоза. Скрытый период протекания болезни может продолжаться от недели до нескольких месяцев.
Внимательно следите за своим здоровьем, если ваша работа заключается в уходе за крупным рогатым скотом.
Симптомы бруцеллеза у человека разнообразны:
общее недомогание;
нервозность, стрессы;
боль в голове, неприятные ощущения в мышцах и суставах;
медлительность, слабая подвижность;
сниженный аппетит;
повышение температуры (до 37 градусов и больше);
озноб.
Симптомы могут не проявлять себя вообще, и не обязательно, что они будут присутствовать одновременно. Во время болезни поражаются сосуды, нервные клетки и костно-суставный аппарат. Нередко появление расстройств в психике. Заболевание длится примерно 3 месяца, но может затянуться и на 2-3 года. Остаточные явления, которыми сопровождается заболевание, могут стать причиной развития инвалидности. У беременных женщин может случиться выкидыш.
Чтобы избежать появления болезни, не используйте в пищу сырое молоко, невыдержанные сыры и брынзу, а также не ешьте мясо, которое не прошло необходимую обработку.
Употребление молока от больного животного
Многие врачи не сразу могут определить наличие этого заболевания у человека. Из отрывка телепередачи «Жить здорово» с Еленой Малышевой вы узнаете, как диагностировать бруцеллез у человека, какие органы поражает недуг и что с этим делать.
источник
Основными тестами при массовых диагностических исследованиях являются пробирочная РА, РА на стекле (Роз-бенгал проба), РСК и РДСК, кольцевая реакция с молоком, реакция диффузионной преципитации.
Пробирочная реакция агглютинации.Используют при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота, шец, коз, лошадей, буйволов, верблюдов, оленей, собак, пушных зверей И т.д. Реакцию проводят в объеме 1 мл. Сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов исследуют в разведениях 1:50-1:400; онец, коз, свиней, буйволов, оленей и собак — 1:25 -1:200; пушных зверей и морских свинок — 1:10-1:80. При массовых исследованиях допускается постановка РА в двух первых разведениях, но при этом надо иметь в виду возможность феномена «прозоны». Сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей, собак, пушных зверей, верблюдов разводят 0,85%-ным раствором натрия хлорида с 0,5% фенола; сыворотки крови овец, коз и буйволов разводят 5%-ным, а сыворотки крови оленей — 10%-ным фенолизированным раствором натрия хлорида. Разведения сыворотки крови делают в объеме 0,5 мл, затем в каждую пробирку вносят 0,5 мл единого бруцеллезного антигена, разведенного 1:10, при этом разведения сыворотки крови удваиваются. Компоненты перемешивают Встряхиванием и штатив с пробирками помещают в термостат при 37-38° С на 18-20 часов, затем выдерживают несколько часов при комнатной температуре и учитывают результат общепринятым способом (технику постановки и учета результатов РА см. в разделе «Серологические реакции»). В качестве контролей параллельно исследуют заведомо положительную и отрицательную сыворотки. РА при бруцеллезе крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов считают положительной при титре 1:100 и более (1:50 — сомнительный результат), у овец, коз, оленей, буйволов и собак — 1:50 (1:25 — сомнительный результат). При получении сомнительных результатов сыворотки крови от этих животных исследуют через три-четыре недели повторно.
Помимо титра результаты пробирочной РА выражают в международных единицах (ME). В разных странах готовят антигены, различающиеся по агглютинабилыюсти, что приводит к несопоставимости титров РА. Поэтому была предложена международная стандартная бруцеллезная сыворотка, по отношению к которой определяют активность национальных антигенов. Активность стандартной сыворотки определена в 1000 МЕ/мл. Например, при исследовании этой сыворотки с определенным национальным антигеном она показывает в РА титр 1:500. Следовательно, если в РА с этим антигеном исследуют сыворотку крови от животного из хозяйства и получают титр РА 1:500, то она также содержит 1000 ME бруцеллезных антител, а вторая сыворотка, давшая титр 1:400, содержит 1000 х 400 : 500 = 800 ME и т.д. В настоящее время в странах разработаны национальные стандартные бруцеллезные сыворотки, соответствующие по активности международной сыворотке. В РФ в соответствии с «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных» (2000) приняты следующие критери оценки РА в ME. Реакцию считают положительной у невакцинироваппого крупного рогатого скота, верблюдов, лошадей, а также иммунизированных неаг-глютиногенными вакцинами при наличии 200 ME антител (сомнительной — 50-100 ME); у овец и коз — 100 ME; оленей и собак — 50 ME; пушных зверей и морских свинок —10 ME. PA считают сомнительной у овец, коз, оленей, собак этой группы на уровне 25-50 ME. При сомнительных показаниях РА животных повторно исследуют через 15-30 суток. В случае повышения уровня антител животных признают больными, при отсутствии динамики — здоровыми. Выявление в стадах крупного рогатого скота, иммунизированного ранее агглютиногенными вакцинами, животных с уровнем антител не более 200 ME предполагает через 15-30 суток их повторное исследование. Если при повторном исследовании наблюдают повышение уровня антител, то животных признают больными. При отсутствии повышения дополнительными методами уточняют специфичность результатов РА.
При обнаружении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота (ранее иммунизированного или не иммунизированного) животных с уровнем антител 100 ME и более их признают больными, 50 ME — результат РА сомнительный. В случае сомнительной РА животных исследуют через 15-30 суток повторно и при вторичном сомнительном результате животных признают больными.
При исследовании в РА невакцинированных баранов-производителей, пробников, ярок, козлов, содержащихся в благополучных отарах, где проводилась иммунизация, РА оценивают как положительную при уровне антител 100 ME и более, сомнительной — 50 ME. В последнем случае животных через 15-30 суток исследуют повторно, и, если содержание антител не увеличилось, их признают здоровыми.
Роз-бенгал проба (РБП).РА на стекле с корпускулярным антигеном, окрашенным розовым бенгальским, используют для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей, свиней, буйволов, верблюдов и северных оленей. Реакцию проводят на чистых, сухих эмалированных пластинках с лунками при температуре не ниже 18°С. Исследуемые сыворотки в дозе 0,03 мл вносят на дно лунки, затем в лунку рядом с сывороткой помещают при исследовании крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов и свиней 0,03 мл антигена, сывороток овец, коз, буйволов и северных оленей — 0,015 мл антигена. Компоненты должны иметь температуру не ниже 18°С.
Затем компоненты перемешивают в течение 4 минут, одновременно учитывая результат. В положительных случаях в течение указанного времени появляются розовые хлопья агглютината. В РБП исследуют неразведен-ные сыворотки, влияние нормальных антител нивелируется использованием кислого антигена со значениями рН, при которых нормальные антитела с низкой авидностыо не реагируют с антигеном, что обеспечивает специфичность результата реакции. Перед началом исследований антиген проверяют в РБП на активность, специфичность и на спонтанную агглютинацию соответственно с позитивной, негативной сыворотками и в последнем случае — с физиологическим раствором. В соответствии с «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных» в РФ результат РБП считают положительным при наличии четко выраженной агглютинации. В благополучных по бруцеллезу хозяйствах в случае позитивной РБП сыворотки крови исследуют в РА и РСК (РДСК) или РА и РИД. Если при этом получают отрицательные результаты, то животных с позитивной РБП повторно исследуют через 15-30 дней в этих же серологических реакциях. В неблагополучном по бруцеллезу хозяйствах овец, коз, северных оленей с позитивной РБП признают больными. Сыворотку крови крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей дополнительно исследуют в РА, РСК (РДСК) или РА и РИД, животных с положительными результатами этих серологических реакций признают больными, сомнительно реагирующих исследуют повторно через 15-30 суток в РА, РСК (РДСК) или РА и РИД. При получении положительных или сомнительных результатов животных признают больными бруцеллезом.
Кольцевая реакция с молоком (КР).Реакцию применяют для проверки благополучных по бруцеллезу стад крупного рогатого скота и молока на рынках.
В РФ, в соответствии с «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных», реакцию и оценку результатов проводят следующим образом. В уленгутовские пробирки наливают 0,05 мл антигена (клетки бруцелл, окрашенные гематоксилином) и 1 мл исследуемого молока. Если используют пробирки Флоринского — 2 мл молока и 0,1 мл антигена, компоненты перемешивают, пробирки помещают в водяную баню (37-38° С) на 1 час, затем учитывают результат по нижеследующим критериям:
«+++»
Четко выраженное синее кольцо в верхней части столбика молока в слое сливок, молоко белое
Результат положительный
«++»
Достаточно выраженное синее кольцо в слое сливок, остальная часть молока имеет синеватый цвет
Результат положительный
«+»
Синее кольцо в слое сливок выражено слабо, столбик молока имеет синий цвет
Результат сомнительный
«-»
Столбик молока равномерно окрашен в синий цвет, слой сливок белого или желтоватого цвета
Результат отрицательный
КР на 2-3 креста считают положительной, 1 крест — сомнительной. При положительной КР от всех животных стада берут кровь для исследования в РА или РСК (РДСК) или РА и РИД. Если получают их отрицательный результат, то независимо от позитивной КР животных признают здоровыми.
Реакция связывания комплемента (РСК, РДСК). Данную серологическую реакцию применяют для диагностики бруцеллеза практически у всех видов животных. Согласно «Наставлению по диагностике бруцеллеза животных» исследуемые сыворотки крови крупного рогатого скота для РСК инактивируют разведенными 1:5 в водяной бане в течение 30 минут при 60-62°С; сыворотки крови ослов, мулов при 64-65°С; буйволов — 62-64° С; свиней — 60-62° С 50 минут; при постановке РДСК 30 минут при 62-64° С. Используют единый бруцеллезный антиген в рабочем титре, гемолизин для РСК в удвоеном титре, для РДСК — в утроенном, 2,5%-ную взвесь эритроцитов барана для РСК и 3%-ную для РДСК. Комплемент в количестве 1,2 единицы (титр комплемента принимается за 1 единицу). Реакцию проводят в объеме 1 мл с сыворотками, разведенными 1:5 или 1:10 (технику постановки и учета результатов см. в разделе «Серологические реакции»).
При исследовании сывороток в одном разведении (1:5) и задержке гемолиза на один крест эти сыворотки повторно исследуют в двух разведениях (1:5, 1:10). В случае сомнительной РСК животных повторно исследуют через 15-30 суток. Если при повторном исследовании животных из благополучного по бруцеллезу хозяйства вновь получена сомнительная РСК — животных признают здоровыми. Если аналогичный результат получен у животных неблагополучного хозяйства, их рассматривают как больных. Получение только позитивной РСК в разведении 1:10 в благополучных по бруцеллезу стадах ранее вакцинированного крупного рогатого скота предполагает повторное исследование через 15-30 суток. При нарастании титров РСК диагноз на бруцеллез считают установленным, в обратном случае результат исследования считают отрицательным («Наставление по диагностике бруцеллеза животных», 2000).
Реакция иммунодиффузии (РИД). Согласно «Наставлению по диагностике бруцеллеза животных» (2000) в РФ РИД используют при плановых исследованиях в благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах, где не применяются вакцины, одновременно с РА, а также при проверке сомнительно реагирующих в РА или РСК (РДСК) животных для дифференциации неспецифических реакций; в благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах, где проводится иммунизация крупного рогатого скота аг-глютиногенными вакцинами при контроле эпизоотического состояния (не ранее 1,5 месяца после вакцинации); для дифференциации реакций, полученных в РА (не более 200 ME) или РСК (РДСК) в разведениях не выше 1:10; при плановых исследованиях животных одновременно с РА; в неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах через 1,5 месяца после иммунизации; среди телок и нетелей в течение первых шести месяцев после иммунизации (реиммунизации) 2-4-кратно; через месяцев после иммунизации (реиммунизации) животных для оздоровления стада от бруцеллеза в комплексе предусмотренных реакций; при постановке хозяйства на контроль и снятии ограничений одновременно с РА и РСК (РДСК).
При диагностике бруцеллеза северных оленей для оценки эпизоотического состояния стад, благополучных по бруцеллезу, вакцинированных против бруцеллеза; для исследования на бруцеллез не ранее чем через два месяца после применения вакцин; для дифференциации неспецифических реакций.
Техника проведения РИД. Расплавленный агар разливают по 2,5 мл на предметные стекла, пластинки размером 6×9 см —12 мл, стандартные чашки Петри слоем не менее 2 мм, которые предварительно размещают на строго горизонтальной поверхности. В застывшем агаровом геле штампом делают лунки: центральную диаметром 5 мм и шесть переферических по 3 мм.
В центральную лунку вносят 20 мкл О-полисахаридного антигена, в периферические — 40 мкл исследуемых сывороток крови. Одновременно на каждой пластинке (чашке Петри) ставят контроль с позитивной сывороткой крови. Затем стекла (чашки Петри) выдерживают во влажной камере при температуре не ниже 18° С и учитывают результат в косопроходящем свете через 24 и 48 часов. Как положительный результат оценивают наличие линии преципитации, появившейся через 24 часа. Сыворотки крови, давшие реакцию преципитации через 48 часов, исследуют повторно и при получении линии преципитации через 24 или 48 часов результат реакции признают положительным.
Печеночно-сывороточный или печеночно-аминопептидный агар.Готовят печеночный отвар: 500 г свежего фарша говяжьей печени смешивают с 500 мл воды, кипятят 1 час, фильтруют через ватный фильтр, стерилизуют в автоклаве, смешивают равные объемы печеночного отвара и водопроводной воды, добавляют 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 2% агар-агара. На 1000 мл смеси вносят 17 мл 10%-ной двууглекислой соды, автоклавируют 20-25 минут при 115° С, фильтруют через ватный фильтр, устанавливают рН 7,0-7,2, добавляют 1% глюкозы и 2% глицерина, разливают по колбам и стерилизуют 20-25 минут при 110° С. Перед использованием агар расплавляют, остужают до 50° С, добавляют 10-20% сыворотки крови лошади или крупного рогатого скота (печеночно-сывороточ-иый агар) или 10-15% аминопептида (печеночно-аминопептидный агар) и разливают по чашкам или пробиркам. Также готовят полужидкие агары, внося 0,15-0,2% агар-агара. Рекомендуют среды данного типа для культивирования В. ovis.
Печеночный агар Хеддльсона.В 500 мл воды вносят 10 г пентона, 5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара, автоклавируют 30 минут, добавляют 500 мл печеночного отвара, охлаждают до 60° С, устанавливают рН 7,0. К 1 л среды добавляют один яичный белок, автоклавируют 30 минут при 120° С, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН 7,0, разливают по емкостям и стерилизуют 30 минут при 115° С.
Плотный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (ППГГА). 400 г свежей говяжьей печени освобождают от жира и пленок, измельчают, добавляют 500 мл водопроводной воды, кипятят 1 час, фильтруют через ватный фильтр. Полученный печеночный отвар разводят водопроводной водой 1:1, добавляют 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 2,5% агара и 17 мл 10%-ного раствора гидрокарбоната натрия на 1000 мл. Среду автоклавируют 20 минут при 115° С, отстаивают в автоклаве 3-4 часа, фильтруют через ватный фильтр, устанавливают рН 7,2. Затем в среду вносят 1% глюкозы и 2-3% глицерина, разливают по пробиркам, колбам, стерилизуют 20-25 минут при 110° С. Данную среду рекомендуется применять для культивирования В. abortus, В. melitensis и В. suis, при бактериостатическом методе дифференциации бруцелл. ППГГБ готовят так же, но агар не добавляют.
Сывороточно-декстрозиый агар.К 835 мл дистиллированной воды добавляют 15г агар-агара, 10г пептона, 5 г химически чистого натрия хлорида и 165 мл мягкой воды. Прогревают 1 час текучим паром, устанавливают рН 7,8, автоклавируют 30 мин при 127° С, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,4. Среду разливают по сосудам и стерилизуют при 116° С 15 минут. Перед использованием среду расплавляют, охлаждают до 50° С, добавляют стерилизованные фильтрованием сыворотку крови лошади или крупного рогатого скота до концентрации 5% и раствор декстрозы до уровня 1%. Среда рекомендуется для первичного выделения бруцелл.
Сывороточно-декстрозный бульон.Готовят так же, как сывороточно-декстрозный агар, но без добавления агар-агара.
Альбими-агар.В 1000 мл дистиллированной воды добавляют 20 г сухого пептона, 20 мл дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,3, все компоненты растворяют в аппарате Коха, фильтруют через ватный фильтр. Вносят 1 г глюкозы, 0,2 г бисульфита натрия, устанавливают рН 7,2 0-7,3, разливают по колбам и стерилизуют 40 минут текучим паром, затем 20 минут в автоклаве при 110° С. Дрожжевую воду получают путем кипячения 1 кг хлебных дрожжей в 1000 мл дистиллированной воды, затем фильтруют через полотно и хранят под флороформом в темноте (не более 15 дней).