Розбенгал проба при бруцеллезе

Your browser does not support iframes.

Непрозрачная жидкость малиново-розового цвета.

Препарат для экспресс-диагностики in vitro методом пластинчатой реакции агглютинации.

Применяется в лабораториях ветеринарной медицины для исследования сывороток крови при диагностике бруцеллеза у сельскохозяйственных животных: крупный и мелкий рогатый скот, лошади, свиньи, верблюды, северные олени.

Кровь для исследования на бруцеллез берут из яремной вены животных с соблюдением правил асептики.

Противопоказания
Запрещается применять препарат после окончания срока годности или при
несоблюдение температурного режима хранения.

Сыворотки крови, которые исследуются, должны быть прозрачные, без примесей и эритроцитов; взяты не позднее 4-х суток хранения при температуре от (4 до 8) ° С.

Консервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 14 дней. Не прозрачные, подозрительные сыворотки исследованию не подлежат.

Постановка Роз-Бенгал пробы .

Оборудование, необходимое для постановки Роз-Бенгал пробы .

— белые металлические эмалированные, фарфоровые или глазурованные керамические пластинки с лунками;

— шприц полуавтомат ( дозатор, капельница) для дозирования сыворотки;
— калиброванные пипетки, дозатор ( капельница) для дозирования антигена;
— ручной смеситель для 25 лунок диагностических пластин;
— автоматический прибор для покачивания диагностических пластин;
— сигнальные часы.

Компоненты для Роз-Бенгал пробы.

— бруцеллезный антиген, окрашенный бенгальских розовым ( антиген для Роз-Бенгал пробы);
— исследуемые сыворотки крови животных;

-положительная бруцеллезная и отрицательная сыворотки;
— 0,5% фенолизированый физиологический раствор.

Техника постановки Роз-Бенгал пробы.

Перед использованием антиген выдерживают 30-40 минут при комнатной температуре, а затем тщательно встряхивают.

Перед началом работы ставят контроль антигена с положительной бруцеллезной и отрицательной сыворотками, а также контроль антигена на спонтанную агглютинацию с физраствором. Для этого описанным ниже способом смешивают по 0,03 см 3 антигена отдельно с обеими сыворотками и физиологическим раствором.

Реакцию проводят на чистых, сухих эмалированных, фарфоровых или глазурованных керамических пластинках с лунками при температуре не ниже 18 ° С. На бортиках пластин против каждой лунки записывают номер исследуемой сыворотки.

Исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 см 3 (1 капля) вносят на дно лунки с помощью шприца полуавтомата ( ШПРБ-1), дозатора или микропипетки. После внесения каждой сыворотки шприц-полуавтомат ( ШПРБ-1) или микропипетку трижды промывают фенолизированным физраствором и подсушивают фильтровальной бумагой, наконечник дозатора используют один раз.

При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов, свиней в каждую лунку, рядом с сывороткой с помощью пипетки-капельницы вносят 0,03 см 3 ( две капли) антигена, а при исследовании сывороток крови овец, коз, северных оленей 0,015 см 3 ( одну каплю) антигена. Затем антиген тщательно смешивают с каждой каплей сыворотки крови с помощью ручного смесителя до получения однородной смеси, распределяя ее при этом по всей поверхности лунки. После смешивания сывороток каждого ряда лунок смеситель ополаскивают в фенолизированном физиологическом растворе и просушивают с помощью марлевой салфетки или фильтровальной бумаги.

Пластинку с сыворотками и антигенами покачивают в течение 4 минут осторожными круговыми движениями вручную или с помощью автоматического прибора, который предназначен для этого. При положительной реакции в смеси в течение 4 минут возникают различной величины хлопья аглютината розового цвета.

Учет реакции проводят визуально при достаточном естественном или искусственном освещении, слегка наклоняя пластинки. Учет агглютинации проводят в течение 4-х минут после смешивания сыворотки с антигеном.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной агглютинации окрашенных бруцелл антигена в виде мелких или крупных хлопьев розового цвета, четко выделяются на белом фоне лунки.

При отсутствии агглютинации ( смесь гомогенная, равномерно прокрашена) реакцию считают отрицательной.
Реакцию, которая начинается позже, чем через 4 минуты с момента смешивания, не учитывают. При нечетко выраженной агглютинации проводят повторное исследование этой сыворотки. По результатам повторного исследования дают заключительную оценку реакции ( положительная или отрицательная). После учета реакции пластинки дезинфицируют погружением на 5 минут в 2,5-5% раствор хлорамина, затем тщательно моют водопроводной водой, высушивают.

18 месяцев со дня изготовления. Использовать в течение 12 часов после вскрытия флакона.

Условия хранения и транспортировки

В сухом темном месте при температуре от 4 ° С до 12 ° С. Не замораживать. Хранить в недоступном для детей месте. Транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с требованиями ГОСТ 17768 и « Правил транспортировки и хранения ветеринарных препаратов, субстанций, готовых кормов, кормовых добавок и средств ветеринарной медицины в ветеринарных аптеках, их структурных подразделениях, на базах, складах и т.д.», утвержденных приказом Государственного департамента ветеринарной медицины Украины № 44 от 13.08.2002 и зарегистрированы в Министерстве юстиции Украины № 719/7007 от 30.08.2002 года.

Упаковка
Флаконы из нейтрального стекла емкостью 10 см 3 , 15 см 3 , 20 см 3 , плотно закрыты резиновыми пробками и обкатаны алюминиевыми колпачками.

Особые меры безопасности при обращении с неиспользованным ВИП, способы его обезвреживания и утилизации

Упаковку и остатки неиспользованного продукта следует утилизировать в соответствии с действующим законодательством.

Название, местонахождение и место осуществления деятельности владельца регистрационного свидетельства и производителя

Херсонское государственное предприятие — биологическая фабрика, Украина, 73011, г. Херсон, ул. Адмирала Макарова, 9.

Если препарат не отвечает требованиям листка-вкладыша или возникли осложнения, применение этой серии прекращают и сообщают Государственный научно-контрольный институт биотехнологии и штаммов микроорганизмов ( ГНКИБШМ) и поставщика ( производителя). Одновременно с нарочным в ГНКИБШМ направляют, согласно « Инструкции о порядке предъявления рекламаций на биологические препараты, предназначенные для применения в ветеринарной медицине» от 03.06.98 № 2 три нераскрытых флакона этой серии препарата по адресу: 03151, г. Киев, ул. Донецкая, 30, ГНКИБШМ.

источник

Реакция Хеддльсона (пластинчатый метод)

Преимущество этого метода заключается в простоте постановки реакции, быстром получении результатов и чувствительности реакции. В качестве антигена для постановки реакции Хеддлсона и Райта применяют единый бруцеллезный диагностикум. Реакцию ставят на обычном оконном, тщательно вымытом, обезжиренном стекле, расчерченном на квадраты величиной 4 x 4 см каждый, по горизонтали должно быть 5 квадратов. На первом квадрате с левой стороны записывается номер испытуемой сыворотки, в последующие квадраты слева направо разливают (микропипеткой или 1 мл градуированной пипеткой) испытуемую сыворотку в следующих дозах: 0,04, 0,02, 0,01 и 0,03 (контроль сыворотки). К первым трем дозам сыворотки добавляют по 0,03 мл антигена. К последней дозе сыворотки (0,03) добавляют 0,03 мл физиологического раствора. Сыворотку осторожно смешивают с антигеном палочкой, начиная с минимальной дозы сыворотки. Контроль антигена ставят, добавляя 0,03 мл физиологического раствора к 0,03 мл антигена. Затем стекло слегка подогревают над пламенем спиртовки так, чтобы происходило равномерное нагревание всей поверхности стекла.

В случае положительной реакции в первые же минуты в каплях сыворотки с антигеном появляются хлопья (агглютинат). Максимальный срок наблюдения 8 минут. Контроль сыворотки ставят с каждой испытуемой сывороткой для исключения спонтанной агглютинации; контроль антигена ставят один (при любом числе испытуемых сывороток) для исключения спонтанной агглютинации применяемого антигена. Учет реакции проводят невооруженным глазом по следующей схеме: а) полное просветление жидкости с крупными и мелкими хлопьями, т.е. 100 % агглютинации (4+); б) почти полное просветление жидкости с ясно заметными хлопьями, т.е. 75 % агглютинации (3+); в) незначительное просветление жидкости с заметными хлопьями, т.е. 50 % агглютинации (2+); г) мутная жидкость с едва заметной зернистостью (+); д) равномерная мутная жидкость (-).

Для оценки результатов рекомендуется следующая схема: а) агглютинация на 4+ во всех дозах сыворотки — результат «резко положительный»; б) агглютинация не менее 2+ во всех дозах сыворотки — результат «положительный»; в) агглютинация только в первой или в первой и второй дозах сыворотки — результат «сомнительный»; г) отсутствие агглютинации во всех дозах сыворотки — реакция «отрицательная».

Для диагностики бруцеллеза имеет значение только положительный результат реакции. При сомнительном или отрицательном результатах реакции и наличии эпидемических и эпизоотических показаний, а также в стационаре и при обследовании доноров, где необходимо определение титра агглютининов и их динамики, следует применять реакции Райта и Кумбса, РПГА и ИФА.

Роз-Бенгал проба (РБП)

Роз-Бенгал проба, по сравнению с другими методами серологической диаг­ностики бруцеллеза, обладает следующими преимуществами: большой чувстви­тельностью, способностью в короткие сроки после заражения выявлять специ­фические бруцеллезные антитела и, благодаря кислой реакции антигена, ингибировать проявления неспецифических антител, а также стабильностью показаний, технической простотой постановки, требующей небольшой затраты труда и времени, четкостью и быстротой получаемых результатов.

Сыворотки крови, подлежащие исследованию, должны быть прозрачные, без примеси эритроцитов. Их исследуют не позднее, чем через 4 дня хранения при температуре плюс 4-8 °С.

Допускается исследовать сыворотки, консервированные сухой борной кис­лотой (2 % борной кислоты к объему сыворотки). Консервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 14 дней.

Антиген представляет собой суспензию инактивированных нагреванием и фенолом бруцелл в буферном растворе, окрашенных бенгальским розовым в розовый цвет. Расфасован во флаконы из темного стекла, подлежит хранению в темном сухом месте при температуре плюс 4-12 °С. Срок годности антигена при соблюдении условий хранения 18 месяцев со дня его изготовления.

Антиген во флаконах без этикетки (надписи) или с трещинами, содержащий постороннюю примесь, неразвивающиеся хлопья, плесень, с истекшим сроком годности или подвергавшиеся замораживанию, для применения не годен.

Перед употреблением антиген выдерживают 30-40 мин. при комнатной температуре и затем тщательно встряхивают.

Техника постановки Роз-Бенгал пробы: реакцию проводят на чистых сухих металлических эмалированных пластинках или изразцовых плитках с лунками при комнатной температуре (плюс 18-30 °С).

Исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 мл вносят на дно лунки шприцем-полуавтоматом или микропипеткой, которые трижды промывают фенолизированным (карболизированным) физиологическим раствором и подсушивают фильтро­вальной бумагой.

В каждую лунку рядом с сывороткой пипеткой-капельницей вносят равное количество (0,03 мл антигена) и тщательно смешивают активным движением ручного полисмесителя на 5 или 25 проб для получения однородной смеси, рас­пределяя ее при этом по всей поверхности лунки.

Пластину с внесенными на нее сыворотками и антигеном покачивают в течение 4 мин осторожными вращательными движениями вручную или при помощи автоматического прибора, предназначенного для этой цели. При положительной реакции появляются хлопья агглютината розового цвета.

В начале работы ставят контроль антигена с нормальной (отрицательной) и положительной агглютинирующей сыворотками в тех же дозах, а также контроль антигена на спонтанную агглютинацию (к 0,03 мл антигена добавляют 0,03 мл физиологического раствора).

Учет реакции проводят невооруженным глазом в течение 4 мин. после смеши­вания сыворотки с антигеном при слегка наклонном положении пластинки.

Агглютинацию, которая наступает позже, чем через 4 мин — не учитывают.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной агглютинации в виде мелких или крупных хлопьев розового цвета.

При отсутствии агглютинации (смесь гомогенна, равномерно окрашена) реакцию считают отрицательной.

После учета реакции пластинки дезинфицируют погружением на 5 мин в 3 % раствор фенола или 1 %-ный раствор хлорамина, затем тщательно промывают водопроводной водой, высушивают и используют повторно. Для этих целей можно применять кассеты и штативы сушилки.

При нечетко выраженной агглютинации проводят повторное исследование.

По результатам повторного исследования дают окончательную оценку реакции (положительная или отрицательная).

Сыворотки, с которыми получена положительная РБП, исследуют в РА и РСК (РДСК) для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител. Сыворотки, с которыми получена отрицательная РБП, дополнительно в РА и РСК (РДСК) не исследуют.

Кольцевая реакция с молоком

Кольцевая реакция применяется с целью ориентировочной проверки благо­получных по бруцеллезу молочных стад и для проверки молока на рынках.

Сущность кольцевой реакции заключается в том, что в молоке бруцеллезных животных при добавлении антигена образуется комплекс антитела с антигеном, который адсорбируется жировыми частицами молока. Жировые частицы вслед­ствие своего малого удельного веса поднимаются наверх, увлекая адсорбиро­ванный агглютинат, который в зависимости от цвета антигена образует на по­верхности жидкости окрашенное кольцо.

Для кольцевой реакции применяют цветной антиген Триленко, представ­ляющий взвесь убитых, окрашенных бруцеллезных микробов.

Для исследования необходимо брать цельное, лучше свежее, молоко или консервированное формалином (из расчета 0,1 мл 10 % раствора формалина на 10 мл молока).

В пробирку берут 2 мл молока и добавляют 0,1 мл (2 капли) концентрирован­ного антигена, тщательно встряхивают и помещают в водяную баню или термостат на 45-50 мин при температуре 37-39 °С.

Учет реакции: а) если в верхней части столбика молока (в слое сливок) четко выражено синее кольцо, а остальная часть молока белая, реакция оценивается положительной — 100 или 75 % агглютинации (+ + + + и + + +); б) при наличии достаточно выраженного синего кольца в слое сливок, а ос­тальная часть молока синеватого цвета, реакция оценивается положительной – 50 % агглютинации (+ +); в) если синее кольцо в слое сливок слабо выражено и весь столбик молока имеет синий цвет, реакция считается сомнительной — 25 % агглютинации (+ и ±); г) если столбик молока равномерно окрашен в синий цвет, а слой сливок ос­тается белым или слегка желтоватым, реакция отрицательная (-).

Молоко от коров с сомнительной реакцией исследуют повторно через 10-15 суток. При получении отрицательного или снова сомнительного результата животных считают благополучными по бруцеллезу.

Пластинчатая реакция агглютинации (исследование молока)

Данная реакция применяется для исследования только свежего молока и молочной сыворотки. Не подлежит исследованию пастеризованное, кипяченое и замороженное молоко (в таком молоке антибруцеллезные агглютинины раз­рушаются), а также молоко, имеющее кислотность выше 30 °С по Тернеру (во избежание получения неспецифических результатов).

Реакцией агглютинации можно исследовать молоко жирное (цельное), обез­жиренное (снятое) и молозиво. Жирное молоко предварительно обезжиривают отстаиванием или центри­фугированием, затем из-под слоя сливок забирают молоко для исследования. Обезжиренное молоко и молозиво исследуют без предварительной подго­товки, но так, чтобы сливок попало минимальное количество.

Обезжиренное молоко наносят на стекло (чашку Петри) в коли­честве 0,1 мл (или двух капель) и 0,05 мл (или одной капли). К каждой дозе испытуемого молока добавляют по одной капле бруцеллезного диагностикума. Реакция сопровождается двумя контролями: к 0,05 мл диагностикума добавляют 0,1 мл физиологического раствора и 0,1 мл испытуемого молока смешивают с 0,05 мл 12 % раствора хлористого натрия. Путем покачивания стекла смеши­вают ингредиенты. Учет реакции производят в первые 3-5 мин.

Положительная реакция агглютинации характеризуется выпадением хлопьев с большим или меньшим обесцвечиванием молока. При отрицательном резуль­тате молоко остается равномерно окрашенным в голубой цвет (цвет антигена).

Исследование молочной сыворотки

Перед получением молочной сыворотки жирное молоко обезжиривают путем центрифугирования или отстаивания. Молочную сыворотку получают при ство­раживании молока сычужным ферментом. Для этого к 5 мл молока добавляют 1-2 капли 10 % сычужного фермента на физиологическом растворе хлористого натрия. Пробирки помещают при температуре 37 °С на 20-30 мин (до свертывания молока). Молочную сыворотку можно получить также путем помещения молока при 37 °С на сутки. Молочную сыворотку сразу отделяют путем фильтрования через бумажный фильтр. Дальнейшие манипуляции: постановка реакции и учет результатов анало­гично постановке и учету реакции агглютинации с цельным молоком.

При оценке результатов исследования молока на бруцеллез при помощи пластинчатой реакции агглютинации необходимо учесть возможность образования мелкохлопчатого агглютината, который из-за мутности молока может быть не отмечен и результаты реакции могут быть приняты за отрицательные. В отри­цательных реакциях рекомендуется молоко исследовать в реакции агглютинации с молочной сывороткой.

Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; Нарушение авторского права страницы

источник

Основными тестами при массовых диагностических исследованиях явля­ются пробирочная РА, РА на стекле (Роз-бенгал проба), РСК и РДСК, коль­цевая реакция с молоком, реакция диффузионной преципитации.

Пробирочная реакция агглютинации.Используют при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота, шец, коз, лошадей, буйволов, верблюдов, оленей, собак, пушных зверей И т.д. Реакцию проводят в объеме
1 мл. Сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов исследуют в разведениях 1:50-1:400; онец, коз, свиней, буйволов, оленей и собак — 1:25 -1:200; пушных зве­рей и морских свинок — 1:10-1:80. При массовых исследованиях до­пускается постановка РА в двух первых разведениях, но при этом надо иметь в виду возможность феномена «прозоны». Сыворотки крови круп­ного рогатого скота, лошадей, собак, пушных зверей, верблюдов разво­дят 0,85%-ным раствором натрия хлорида с 0,5% фенола; сыворотки кро­ви овец, коз и буйволов разводят 5%-ным, а сыворотки крови оленей — 10%-ным фенолизированным раствором натрия хлорида. Разведения сы­воротки крови делают в объеме 0,5 мл, затем в каждую пробирку вносят 0,5 мл единого бруцеллезного антигена, разведенного 1:10, при этом раз­ведения сыворотки крови удваиваются. Компоненты перемешивают Встряхиванием и штатив с пробирками помещают в термостат при 37-38° С на 18-20 часов, затем выдерживают несколько часов при комнат­ной температуре и учитывают результат общепринятым способом (техни­ку постановки и учета результатов РА см. в разделе «Серологические ре­акции»). В качестве контролей параллельно исследуют заведомо положи­тельную и отрицательную сыворотки. РА при бруцеллезе крупного рога­того скота, лошадей и верблюдов считают положительной при титре 1:100 и более (1:50 — сомнительный результат), у овец, коз, оленей, буйволов и собак — 1:50 (1:25 — сомнительный результат). При получении сомни­тельных результатов сыворотки крови от этих животных исследуют через три-четыре недели повторно.

Помимо титра результаты пробирочной РА выражают в международ­ных единицах (ME). В разных странах готовят антигены, различающиеся по агглютинабилыюсти, что приводит к несопоставимости титров РА. По­этому была предложена международная стандартная бруцеллезная сыво­ротка, по отношению к которой определяют активность национальных ан­тигенов. Активность стандартной сыворотки определена в 1000 МЕ/мл. Например, при исследовании этой сыворотки с определенным нацио­нальным антигеном она показывает в РА титр 1:500. Следовательно, если в РА с этим антигеном исследуют сыворотку крови от животного из хозяй­ства и получают титр РА 1:500, то она также содержит 1000 ME бруцеллез­ных антител, а вторая сыворотка, давшая титр 1:400, содержит 1000 х 400 : 500 = 800 ME и т.д. В настоящее время в странах разработаны национальные стандартные бруцеллезные сыворотки, соответствующие по активности международной сыворотке. В РФ в соответствии с «Наставлением по диаг­ностике бруцеллеза животных» (2000) приняты следующие критери оценки РА в ME. Реакцию считают положительной у невакцинироваппого крупного рогатого скота, верблюдов, лошадей, а также иммунизированных неаг-глютиногенными вакцинами при наличии 200 ME антител (сомнительной — 50-100 ME); у овец и коз — 100 ME; оленей и собак — 50 ME; пушных зверей и морских свинок —10 ME. PA считают сомнительной у овец, коз, оленей, собак этой группы на уровне 25-50 ME. При сомнительных пока­заниях РА животных повторно исследуют через 15-30 суток. В случае повышения уровня антител животных признают больными, при отсутствии динамики — здоровыми. Выявление в стадах крупного рогатого скота, иммунизированного ра­нее агглютиногенными вакцинами, животных с уровнем антител не более 200 ME предполагает через 15-30 суток их повторное исследование. Если при повторном исследовании наблюдают повышение уровня антител, то животных признают больными. При отсутствии повышения дополнитель­ными методами уточняют специфичность результатов РА.

При обнаружении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота (ранее иммунизированного или не иммунизированного) жи­вотных с уровнем антител 100 ME и более их признают больными,
50 ME — результат РА сомнительный. В случае сомнительной РА животных исследу­ют через 15-30 суток повторно и при вторичном сомнительном результате животных признают больными.

При исследовании в РА невакцинированных баранов-производителей, пробников, ярок, козлов, содержащихся в благополучных отарах, где про­водилась иммунизация, РА оценивают как положительную при уровне ан­тител 100 ME и более, сомнительной — 50 ME. В последнем случае живот­ных через 15-30 суток исследуют повторно, и, если содержание антител не увеличилось, их признают здоровыми.

Роз-бенгал проба (РБП).РА на стекле с корпускулярным антигеном, окрашенным розовым бен­гальским, используют для диагностики бруцеллеза крупного рогатого ско­та, овец, коз, лошадей, свиней, буйволов, верблюдов и северных оленей. Реакцию проводят на чистых, сухих эмалированных пластинках с лунками при температуре не ниже 18°С. Исследуемые сыворотки в дозе 0,03 мл вно­сят на дно лунки, затем в лунку рядом с сывороткой помещают при исследо­вании крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов и свиней 0,03 мл ан­тигена, сывороток овец, коз, буйволов и северных оленей — 0,015 мл анти­гена. Компоненты должны иметь температуру не ниже 18°С.

Затем компоненты перемешивают в течение 4 минут, одновременно учи­тывая результат. В положительных случаях в течение указанного времени появляются розовые хлопья агглютината. В РБП исследуют неразведен-ные сыворотки, влияние нормальных антител нивелируется использовани­ем кислого антигена со значениями рН, при которых нормальные антитела с низкой авидностыо не реагируют с антигеном, что обеспечивает специ­фичность результата реакции. Перед началом исследований антиген проверяют в РБП на активность, специфичность и на спонтанную агглютинацию соответственно с позитивной, негативной сыворотками и в последнем случае — с физиологическим раствором. В соответствии с «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных» в РФ результат РБП считают положительным при наличии четко выраженной агглютинации. В благополучных по бруцеллезу хозяйствах в случае позитивной РБП сыворотки крови исследуют в РА и РСК (РДСК) или РА и РИД. Если при этом получают отрицательные результаты, то животных с позитивной РБП повторно исследуют через 15-30 дней в этих же серологических реакциях. В неблагополучном по бруцеллезу хозяйствах овец, коз, северных оленей с позитивной РБП признают больными. Сыворотку крови крупного рогатого скота, вер­блюдов и лошадей дополнительно исследуют в РА, РСК (РДСК) или РА и РИД, животных с положительными результатами этих серологических ре­акций признают больными, сомнительно реагирующих исследуют повторно через 15-30 суток в РА, РСК (РДСК) или РА и РИД. При получении положительных или сомнительных результатов животных признают больными бруцеллезом.

Кольцевая реакция с молоком (КР).Реакцию применяют для проверки благополучных по бруцеллезу стад крупного рогатого скота и молока на рынках.

В РФ, в соответствии с «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных», реакцию и оценку результатов проводят следующим образом. В уленгутовские пробирки наливают 0,05 мл антигена (клетки бруцелл, окрашенные гематоксилином) и 1 мл исследуемого молока. Если используют пробирки Флоринского — 2 мл молока и 0,1 мл антигена, компоненты пе­ремешивают, пробирки помещают в водяную баню (37-38° С) на 1 час, затем учитывают результат по нижеследующим критериям:

КР на 2-3 креста считают положительной, 1 крест — сомнительной. При положительной КР от всех животных стада берут кровь для исследо­вания в РА или РСК (РДСК) или РА и РИД. Если получают их отрицатель­ный результат, то независимо от позитивной КР животных признают здоро­выми.

Реакция связывания комплемента (РСК, РДСК). Данную серологическую реакцию применяют для диагностики бруцел­леза практически у всех видов животных. Согласно «Наставлению по ди­агностике бруцеллеза животных» исследуемые сыворотки крови крупного рогатого скота для РСК инактивируют разведенными 1:5 в водяной бане в течение 30 минут при 60-62°С; сыворотки крови ослов, мулов при 64-65°С; буйволов — 62-64° С; свиней — 60-62° С 50 минут; при постанов­ке РДСК 30 минут при 62-64° С. Используют единый бруцеллезный анти­ген в рабочем титре, гемолизин для РСК в удвоеном титре, для РДСК — в утроенном, 2,5%-ную взвесь эритроцитов барана для РСК и 3%-ную для РДСК. Комплемент в количестве 1,2 единицы (титр комплемента принима­ется за 1 единицу). Реакцию проводят в объеме 1 мл с сыворотками, разве­денными 1:5 или 1:10 (технику постановки и учета результатов см. в разде­ле «Серологические реакции»).

При исследовании сывороток в одном разведении (1:5) и задержке гемо­лиза на один крест эти сыворотки повторно исследуют в двух разведениях (1:5, 1:10). В случае сомнительной РСК животных повторно исследуют че­рез 15-30 суток. Если при повторном исследовании животных из благопо­лучного по бруцеллезу хозяйства вновь получена сомнительная РСК — жи­вотных признают здоровыми. Если аналогичный результат получен у жи­вотных неблагополучного хозяйства, их рассматривают как больных. По­лучение только позитивной РСК в разведении 1:10 в благополучных по бруцеллезу стадах ранее вакцинированного крупного рогатого скота пред­полагает повторное исследование через 15-30 суток. При нарастании титров РСК диагноз на бруцеллез считают установленным, в обратном слу­чае результат исследования считают отрицательным («Наставление по ди­агностике бруцеллеза животных», 2000).

Реакция иммунодиффузии (РИД). Согласно «Наставлению по диагностике бруцеллеза животных» (2000) в РФ РИД используют при плановых исследованиях в благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах, где не применяются вак­цины, одновременно с РА, а также при проверке сомнительно реагирую­щих в РА или РСК (РДСК) животных для дифференциации неспецифичес­ких реакций; в благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах, где проводится иммунизация крупного рогатого скота аг-глютиногенными вакцинами при контроле эпизоотического состояния (не ранее 1,5 месяца после вакцинации); для дифференциации реакций, полу­ченных в РА (не более
200 ME) или РСК (РДСК) в разведениях не выше 1:10; при плановых исследованиях животных одновременно с РА; в не­благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах через 1,5 месяца после иммунизации; среди телок и нетелей в течение первых шести месяцев после иммунизации (реиммунизации) 2-4-кратно; через месяцев после иммунизации (реиммунизации) животных для оздоровления стада от бруцеллеза в комплексе предусмотренных реакций; при постановке хозяйства на контроль и снятии ограничений одновременно с РА и РСК (РДСК).

При диагностике бруцеллеза северных оленей для оценки эпизоотического состояния стад, благополучных по бруцеллезу, вакцинированных против бруцеллеза; для исследования на бруцеллез не ранее чем через два месяца после применения вакцин; для дифференциации неспецифических реакций.

Техника проведения РИД. Расплавленный агар разливают по 2,5 мл на предметные стекла, пластинки размером 6×9 см —12 мл, стандартные чашки Петри слоем не менее 2 мм, которые предварительно размещают на строго горизонтальной поверхности. В застывшем агаровом геле штампом делают лунки: центральную диаметром 5 мм и шесть переферических по 3 мм.

В центральную лунку вносят 20 мкл О-полисахаридного антигена, в пе­риферические — 40 мкл исследуемых сывороток крови. Одновременно на каждой пластинке (чашке Петри) ставят контроль с позитивной сывороткой крови. Затем стекла (чашки Петри) выдерживают во влажной камере при температуре не ниже 18° С и учитывают результат в косопроходящем свете через 24 и 48 часов. Как положительный результат оценивают наличие ли­нии преципитации, появившейся через 24 часа. Сыворотки крови, давшие реакцию преципитации через 48 часов, исследуют повторно и при получении линии преципитации через 24 или 48 часов результат реакции признают по­ложительным.

Печеночно-сывороточный или печеночно-аминопептидный агар.Готовят печеночный отвар: 500 г свежего фарша говяжьей печени смешивают с 500 мл воды, кипятят 1 час, фильтруют через ватный фильтр, стерилизуют в автоклаве, смешивают равные объемы печеночного отвара и водопроводной воды, добавляют 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 2% агар-агара. На 1000 мл смеси вносят 17 мл 10%-ной двууглекислой соды, автоклавируют 20-25 минут при 115° С, фильтруют через ватный фильтр, ус­танавливают рН 7,0-7,2, добавляют 1% глюкозы и 2% глицерина, разливают по колбам и стерилизуют 20-25 минут при 110° С. Перед использо­ванием агар расплавляют, остужают до 50° С, добавляют 10-20% сыво­ротки крови лошади или крупного рогатого скота (печеночно-сывороточ-иый агар) или 10-15% аминопептида (печеночно-аминопептидный агар) и разливают по чашкам или пробиркам. Также готовят полужидкие агары, внося 0,15-0,2% агар-агара. Рекомендуют среды данного типа для культивирования В. ovis.

Печеночный агар Хеддльсона.В 500 мл воды вносят 10 г пентона,
5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара, автоклавируют 30 минут, добавляют 500 мл печеночного отвара, охлаж­дают до 60° С, устанавливают рН 7,0. К 1 л среды добавляют один яичный белок, автоклавируют 30 минут при 120° С, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН 7,0, разливают по емкостям и стерилизуют 30 минут при 115° С.

Плотный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (ППГГА). 400 г свежей говяжьей печени освобождают от жира и пленок, измель­чают, добавляют 500 мл водопроводной воды, кипятят 1 час, фильтруют через ватный фильтр. Полученный печеночный отвар разводят водопро­водной водой 1:1, добавляют 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 2,5% ага­ра и
17 мл 10%-ного раствора гидрокарбоната натрия на 1000 мл. Среду автоклавируют 20 минут при 115° С, отстаивают в автоклаве 3-4 часа, фильтруют через ватный фильтр, устанавливают рН 7,2. Затем в среду вно­сят 1% глюкозы и 2-3% глицерина, разливают по пробиркам, колбам, сте­рилизуют 20-25 минут при 110° С. Данную среду рекомендуется приме­нять для культивирования В. abortus, В. melitensis и В. suis, при бактериостатическом методе дифференциации бруцелл. ППГГБ готовят так же, но агар не добавляют.

Сывороточно-декстрозиый агар.К 835 мл дистиллированной воды добавляют 15г агар-агара, 10г пептона, 5 г химически чистого натрия хлорида и 165 мл мягкой воды. Прогре­вают 1 час текучим паром, устанавливают рН 7,8, автоклавируют 30 мин при 127° С, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,4. Среду разливают по сосудам и стерилизуют при 116° С 15 минут. Перед использованием среду расплавляют, охлаждают до 50° С, добавляют сте­рилизованные фильтрованием сыворотку крови лошади или крупного ро­гатого скота до концентрации 5% и раствор декстрозы до уровня 1%. Сре­да рекомендуется для первичного выделения бруцелл.

Сывороточно-декстрозный бульон.Готовят так же, как сывороточно-декстрозный агар, но без добавления агар-агара.

Альбими-агар.В 1000 мл дистиллированной воды добавляют 20 г сухого пептона, 20 мл дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,3, все компоненты растворяют в аппарате Коха, фильтруют через ватный фильтр. Вносят 1 г глюкозы, 0,2 г бисульфита натрия, устанавливают рН 7,2 0-7,3, разливают по колбам и стерилизуют 40 минут текучим паром, затем 20 минут в автоклаве при 110° С. Дрожжевую воду получают путем кипячения 1 кг хлебных дрожжей в 1000 мл дистиллированной воды, затем фильтруют через полотно и хранят под флороформом в темноте (не более 15 дней).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

4.1. Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических

антител в сыворотке крови животных с помощью реакции агглютинации в пробирках (РА), реакции

связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК),

пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба — РБП) и в молоке

коров — кольцевой реакции (КР).

4.2. Постановка и учет результатов реакции агглютинации в пробирках (РА).

4.2.1. Реакцию агглютинации в пробирках с бруцеллезным антигеном применяют при

диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей, буйволов, верблюдов, оленей,

собак, пушных зверей и животных других видов.

4.2.2. Компоненты реакции агглютинации:

испытуемые сыворотки крови (см. подпункт 2.3.1);

позитивная бруцеллезная сыворотка, изготовленная биопредприятием или полученная от

больного бруцеллезом животного. На этикетке флакона с такими сыворотками указывают титры в РА

и РСК и дату изготовления;

негативная сыворотка (сыворотка крови здоровых животных), изготовленная биопредприятием

или полученная в лаборатории;

антиген бруцеллезный единый для РА, РСК и РДСК (см. Приложение N 2, п. 6);

раствор хлорида натрия. При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, лошадей,

верблюдов, собак, пушных зверей и морских свинок для разведения испытуемых сывороток и

антигена используют фенолизированный (0,5-процентный) физиологический раствор хлорида

натрия (0,85-процентный), при исследовании сывороток крови овец, коз, буйволов — 5-процентный

и оленей — 10-процентный фенолизированный раствор хлорида натрия (см. Приложение N 2, п. 1).

4.2.3. Постановка реакции агглютинации.

Реакцию агглютинации проводят в объеме 1 мл в четырех разведениях:

при исследовании сывороток крови овец, коз, буйволов, оленей и собак — 1:25, 1:50, 1:100 и

крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов — 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400;

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

пушных зверей и морских свинок — 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80.

При массовых исследованиях допускается постановка реакции в первых двух разведениях.

Разлив компонентов реакции проводят индивидуальными мерными пипетками или

групповыми дозаторами Флоринского.

Для исследования каждой испытуемой сыворотки крови требуется 5 пробирок. В пробирках

первого ряда делают основное разведение. Для этого сыворотку крови крупного рогатого скота,

лошадей и верблюдов берут в дозе 0,1 мл, вносят в пробирки и добавляют к ней 2,4 мл

соответствующего раствора хлорида натрия, получают разведение сыворотки 1:25. Сыворотку крови

овец, коз, буйволов, оленей и собак берут в дозе 0,2 мл и добавляют 2,3 мл соответствующего

раствора хлорида натрия (разведение 1:12,5), а сыворотку крови пушных зверей и морских свинок

берут в дозе 0,3 мл и добавляют 1,2 мл соответствующего раствора хлорида натрия (разведение 1:5).

Таким образом делают основное разведение испытуемых сывороток в пробирках первого ряда

штатива (по 10 проб в ряду).

После приготовления основного разведения сывороток в первом ряду в пробирки третьего,

четвертого и пятого рядов вливают по 0,5 мл соответствующего раствора хлорида натрия. Затем из

пробирок первого ряда при помощи группового дозатора Флоринского переносят в пробирки второго

и третьего рядов по 0,5 мл основного разведения сывороток (1:25, 1:12,5 или 1:5). В пробирках

третьего ряда сыворотки смешивают с раствором хлорида натрия, по 0,5 мл этого разбавления

переносят в пробирки четвертого ряда и так же из пробирок четвертого ряда — в пятый. Из пробирок

пятого ряда по 0,5 мл жидкости удаляют. Таким образом делают последовательные двукратные

разведения одновременно 10 сывороток.

После этого в каждую пробирку второго, третьего, четвертого и пятого рядов с разведенными

сыворотками вносят при помощи группового дозатора Флоринского или другого дозирующего

устройства по 0,5 мл антигена, предварительно разбавленного в соотношении 1:10 соответствующим

раствором хлорида натрия. После добавления антигена разведение сывороток в каждой пробирке

удваивается и в зависимости от вида исследуемых животных будет составлять соотношения: 1:50,

1:100, 1:200 и 1:400; 1:25, 1:50, 1:100 и 1:200 или 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80.

В пробирки первого ряда бруцеллезный антиген не вносят, и они служат контролем качества

сыворотки. При наличии хлопьев, фибрина, эритроцитов и посторонних примесей результаты

реакции агглютинации не учитывают.

При массовых исследованиях сыворотки разливают индивидуальной микропипеткой (с грушей)

или групповыми дозаторами Флоринского в две пробирки в дозах 0,02 и 0,01 мл (сыворотки

крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов) или 0,04 и 0,02 мл (при исследовании сывороток

овец, коз, буйволов, оленей и собак). Затем в каждую пробирку добавляют по 1,0 мл антигена,

разведенного соответствующим раствором хлорида натрия в соотношении 1:20. При этом разведения

сывороток будут соответствовать соотношениям 1:50 и 1:100 или 1:25 и 1:50.

При постановке реакции агглютинации одновременно с испытуемыми сыворотками ставят

с негативной сывороткой в тех же разведениях, как с испытуемыми;

с позитивной бруцеллезной сывороткой в разведениях до ее предельного титра.

После добавления к испытуемым и контрольным сывороткам антигена штативы с пробирками

осторожно встряхивают и помещают в термостат при 37 — 38 °С на 16 — 20 часов, затем выдерживают

при комнатной температуре в течение 1 часа, после чего проводят учет реакции.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

4.2.4. Учет реакции агглютинации. Результаты реакции учитывают визуально и определяют в

крестах по следующей схеме:

++++ (4 креста) — полное просветление жидкости, микробные тела

осели на дно пробирки в виде «зонтика», при легком

встряхивании «зонтик» разбивается на хлопья и

а жидкость остается прозрачной (100% агглютинации);

+++ (3 креста) — неполное просветление жидкости и хорошо выраженный

++ (2 креста) — просветление жидкости, «зонтик» умеренно выражен

+ (1 крест) — едва заметное просветление жидкости, «зонтик»

слабо, при встряхивании заметно небольшое

хлопьев или комочков (25% агглютинации);

— (знак минус) — просветления жидкости и образования «зонтика» не

наступило, на дне пробирки виден «пунктик» осевших

микробов антигена, при легком встряхивании

За титр антител принимают последнее разведение сыворотки, в котором произошла

агглютинация не менее чем на 2 креста (++), что соответствует количеству международных единиц

(ME) антител в 1 мл сыворотки (например, сыворотка с конечным титром РА 1:100 содержит 100 ME,

Для более объективной оценки результатов РА в крестах готовят стандарты мутности,

соответствующие 0 (нулю), 25, 50 и 75% просветления жидкости.

В четыре пробирки последовательно наливают 1, 2, 3 и 4 мл антигена, разведенного 1:10. Затем

в том же порядке в три первые пробирки добавляют 3, 2 и 1 мл фенолизированного

физиологического раствора. В четвертую пробирку раствор не добавляют. После встряхивания

пробирок жидкость из каждой из них переносят по 0,5 мл в серологические пробирки и добавляют по

0,5 мл фенолизированного физиологического раствора. Полученные стандарты соответствуют 75, 50

и 25% просветления жидкости. В последней, четвертой пробирке просветление отсутствует.

Стандарты мутности готовят каждый раз при постановке РА и выдерживают в термостате

одновременно с основной реакцией.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

Степень просветления в пробирках с исследуемыми сыворотками определяют визуально путем

сравнения со стандартами и результаты реакции выражают в крестах.

При массовых исследованиях сывороток в двух разведениях все сыворотки, давшие

агглютинацию с оценкой не менее чем на 2 креста (++) в каком-либо из указанных разведений,

исследуют повторно в четырех разведениях.

4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации.

Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сыворотками крови крупного

рогатого скота, лошадей и верблюдов начиная с разведения 1:100 (100 ME — международных единиц

антител), коз, овец, буйволов, оленей и собак — с разведения 1:50 (50 ME), пушных зверей и морских

свинок — с разведения 1:10 (10 ME) с оценкой не менее чем на 2 креста.

Реакцию считают сомнительной при наличии агглютинации только в разведении 1:50 (50 ME) с

сыворотками крови крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов и в разведении 1:25 (25 ME) с

сыворотками овец, коз, буйволов, оленей и собак с оценкой не менее чем на 2 креста.

При получении сомнительного результата реакции сыворотку крови данного животного

исследуют повторно через 3 — 4 недели.

На неблагополучных по бруцеллезу фермах животных, при исследовании которых будет

получена дважды сомнительная РА, относят к положительно реагирующим.

В заключении лаборатории о результатах исследования должна быть сообщена диагностическая

оценка каждой пробы (положительная, сомнительная, отрицательная) и конечное разведение (титр)

сыворотки, в котором получен соответствующий результат, выраженное в международных единицах

(например: конечный титр сыворотки крови крупного рогатого скота 1:100 с оценкой 2 креста или

более — «положительная 100 ME»; конечный титр сыворотки 1:50 с оценкой 2 креста или более —

Суммарные результаты исследования испытуемых сывороток, серию антигена, срок его

годности, а также предельный титр позитивной сыворотки записывают в журнал серологических

4.3. Постановка и учет реакции связывания комплемента (РСК) и реакция длительного

связывания комплемента на холоде (РДСК).

4.3.1. Реакцию связывания комплемента применяют при диагностике бруцеллеза у крупного

рогатого скота, овец, коз, свиней, лошадей, оленей, собак, пушных зверей и животных других видов.

Реакцию длительного связывания комплемента, как более чувствительную, применяют вместо

РСК при исследовании на бруцеллез сывороток животных указанных видов, а также при диагностике

инфекционного эпидидимита баранов.

4.3.2. Компоненты реакций и их подготовка к работе:

испытуемые сыворотки крови (см. подпункт 2.3.1);

позитивная бруцеллезная или овисная сыворотка, изготовленная на биофабрике или полученная

от больного животного. На этикетках флаконов с сыворотками указывают титр в РСК (РДСК) и дату

негативная сыворотка (сыворотка крови здоровых животных), изготовленная на биофабрике

или полученная в лаборатории.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

Испытуемые и контрольные (позитивную и негативную) сыворотки инактивируют в водяной

бане в день постановки реакции: для РСК — при 60 — 62 °С в течение 30 мин. (сыворотки крови ослов

и мулов — при 64 — 65 °С, буйволов — при 62 — 64 °С в течение 30 мин., свиней — при 60 — 62° в течение

50 мин.); для РДСК сыворотки крови животных всех видов — при 63 — 64 °С в течение 30 мин.;

антиген бруцеллезный единый для РА, РСК и РДСК или овисный для РДСК в рабочем титре,

указанном предприятием, его изготовившим (см. Приложение N 2, п. 6);

комплемент — сыворотка крови морской свинки (свежая, консервированная добавлением 4%

борной кислоты или лиофильно высушенная). При использовании в качестве комплемента свежей

или консервированной сыворотки и при получении каждой новой серии сухого комплемента

проводят титрование его в гемолитической системе для определения активности (см. Приложение N

Сухой биофабричный комплемент растворяют в физиологическом растворе, как указано на

этикетке. Берут такое количество ампул (флаконов), в которых содержится необходимое для

проведения всего опыта количество комплемента. Содержимое ампул (флаконов) сливают в одну

пробирку, осторожно смешивают, берут 0,5 мл и разводят физиологическим раствором 1:20 для

титрования. Остальное количество комплемента хранят в холодильнике при плюс 2 — 4 °С;

гемолитическая сыворотка (гемолизин) — для РСК в удвоенном титре, для РДСК — в утроенном.

Титрование гемолизина проводят периодически один раз в 3 месяца и при использовании каждой

новой серии (см. Приложение N 2, п. 5);

эритроциты барана — 2,5-процентная от осадка взвесь эритроцитов в физиологическом растворе

для РСК и 3-процентная для РДСК (см. Приложение N 2, п. 3).

Для приготовления гемолитической системы соответствующую взвесь эритроцитов и

гемолитическую сыворотку в рабочем разведении смешивают в равных объемах и выдерживают в

термостате при 37 °С в течение 15 — 20 мин. При смешивании гемолизин вливают во взвесь

физиологический раствор — 0,85-процентный раствор химически чистого хлорида натрия в

дистиллированной воде рН = 7,3 — 7,4 или физиологический раствор, содержащий ионы магния и

кальция (см. Приложение N 2, п. 2).

Рабочие разведения всех компонентов для РСК или РДСК готовят перед постановкой реакции

и проверяют их на антикомплементарность и гемотоксичность по следующей схеме:

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

¦ Комплемент в разведении ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ — ¦ — ¦ —

¦ Гемолизин в рабочем титре ¦ 0,2 ¦ — ¦ 0,2 ¦ — ¦ —

¦ Антиген в рабочем титре ¦ 0,4 ¦ — ¦ — ¦ 0,4 ¦ —

¦ Эритроциты (2,5% или 3%) ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2

¦ Физиологический раствор ¦ — ¦ 0,6 ¦ 0,6 ¦ 0,2

¦ водяная баня 10 минут при 37 —

¦ Результат: гемолиз полная задержка

В реакциях используют компоненты, не обладающие антикомплементарными и

4.3.3. Постановка реакции связывания комплемента.

Реакцию проводят в водяной бане при 37 — 38 °С в объеме 1 мл (по 0,2 мл каждого компонента —

сыворотки, антигена, комплемента, гемолизина и эритроцитов).

Перед постановкой главного опыта проводят титрование комплемента в бактериолитической

системе на позитивной (бруцеллезной) сыворотке, негативной сыворотке крови того вида животных,

которых исследуют, и одной сыворотке, взятой из исследуемой партии.

Каждую сыворотку разводят 1:5 физиологическим раствором (1 мл сыворотки + 4 мл

физиологического раствора), инактивируют, как указано в подпункте 4.3.2, и разливают по 0,2 мл в

два ряда по 10 пробирок. Затем в пробирки каждого ряда вносят комплемент (разведенный 1:20) в

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

возрастающих дозах от 0,02 мл до 0,2 мл с интервалом 0,02 мл и недостающее до 0,2 мл (в каждой

пробирке) количество физиологического раствора.

После разлива комплемента в первый ряд пробирок с каждой сывороткой вносят по 0,2 мл

антигена в рабочем разведении, а во второй ряд — по 0,2 мл физиологического раствора. Пробирки

ставят в водяную баню при 37 — 38 °С на 20 мин. Затем во все пробирки добавляют по 0,4 мл

гемолитической системы, встряхивают их и вновь ставят в водяную баню на 20 мин., после чего

Схема титрования комплемента в бактериолитической системе (на примере негативной

источник

Бруцеллез (Brucellosis) – инфекционная, преимущественно хронически протекающая болезнь. В связи с социальной опасностью бруцеллез включен в список карантинных болезней.

Историческая справка. Симптомы бруцеллеза у людей описал Гиппократ. Болезнь детально изучена в ХVШ – ХIХ вв. Ф. Марстон (1861) описал бруцеллез как самостоятельную болезнь людей на о. Мальта, а Д. Брюс, выясняя причины заболевания людей, выделил (1387) возбудителя этой болезни. А. Райт и Д. Семпл (1897) установили способность сыворотки больных людей агглютинировать культуру мальтийского микрококка, что легло в основу диагностики бруцеллеза. Несколько позже Заммит (1904 – 1907) обнаружил противобруцеллезные антитела в молоке коз, что позволило выявить источник и факторы передачи возбудителя у людей. В. Банг и Стибольт (1897) выделили от абортировавшей коровы, а Траум (1914) от абортировавшей свиноматки 6лизкородственных возбудителей, несколько отличающихся друг от друга, и микроба, выделенного ранее Брюсом. Их позднее (1918 – 1920) объединили в один род и назвали в честь Брюса бруцеллами.

Значительный вклад в изучение бруцеллеза внесли советские ученые С. Н. Вышелесский, П. Ф. Здродовский, П. А. Вершилова, М. К. Юсковец, Е. С. Орлов, П. С. Уласевич, П. А. Триленко и др. Были изучены свойства культур бруцелл, предложены сочетания диагностических приемов для оптимального выявления больных животных в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией, разработаны научно обоснованные методы борьбы с бруцеллезом и определена роль специфической профилактики в комплексе противобруцеллезных мероприятий. Внедрение в ветеринарную практику научных рекомендаций по борьбе с бруцеллезом позволило резко сократить число неблагополучных по бруцеллезу хозяйств, провести успешное оздоровление животноводства на значительной территории страны и поставить задачу полной ликвидации болезни в ближайшие годы.

Бруцеллез распространен во многих странах мира, но наиболее широко – в Африке, Центральной и Южной Америке, некоторых странах Азии и Европы.

Возбудитель – бруцеллы из рода Brucella, имеющего б видов: Вr. abortus, включающий 9 биовариантов: Вr. melitensis – 3; Вr. suis – 4; Вr. neotomae, Вr. ovis и Вr. canis – по одному. Все бруцеллы полиморфны, встречаются кокковидные, овоидные и палочковидные формы (0,6 – 1,5х0,5 – 0,7 мкм). Микробы неподвижны, хорошо красятся анилиновыми красками, грамотрицательны. Некоторые штаммы образуют капсулу.

Для видовой дифференциации бруцелл учитывают потребности в росте первых генераций их культур в углекислоте, способность к образованию сероводорода, рост на средах с некоторыми анилиновыми красками, агглютинацию моноспецифическими сыворотками, устойчивость к фагу «Тб», а при определении биоварианта – биохимическую активность и некоторые другие показатели.

Возбудители бруцеллеза культивируют на сывороточных средах и Хоттингера, МПА, в МПБ. Лучший рост наблюдают в печеночных средах с добавлением глицерина и глюкозы, в среде Д, в состав которой входит рыбный и дрожжевой гидролизат, и др. По характеру роста на плотных питательных средах различают: S – типичные гладкие, R – измененные шероховатые и М – слизистые варианты колоний. Установлена L -форма бруцелл.

Бруцеллы имеют глубинный O — и поверхностный S -антигены. Последний существует в двух вариантах – А и М. Штаммы Вr. abortus содержат больше А-антигена, Вr. melitensis – М-антигена. Возбудитель из колоний R-формы в той или иной степени утрачивает S-антиген. Минус-варианты бруцелл по S -антигену полностью утратили его.

Устойчивость. К физическим и химическим факторам устойчивость бруцелл невысока. При 60 С они погибают за ЗО мин, при 70 С – за 5 – 10 мин, при 90 – 100 С – моментально. В закисающем и охлажденном молоке, сливках микроб сохраняется до 4 – 7 сут, на одежде – до 14 дней; в сырах, масле, брынзе, соленых шкурах – до 67 дней, в соленом мясе – до 3 мес, в замороженном мясе и на шерсти – до 5 мес. В почве, воде, навозе, грубых кормах возбудитель может оставаться жизнеспособным до 4 мес. В гниющих материалах микроб быстро теряет жизнеспособность. Прямые солнечные лучи убивают за 3 – 4 ч, растворы креолина, фенола, формальдегида (1 %-ные) за 1 ч, 5 %-ная свежегашеная известь – за 2 ч. Хорошо обезвреживают возбудителя 0,5 %-ный раствор глутарового альдегида, 5 %-ный технического фенолята натрия.

Эпизоотологические данные. К бруцеллезу восприимчивы крупный рогатый скот, овцы, козы, свиньи, олени, маралы, яки, буйволы, лошади, верблюды, собаки, кошки, зайцы, сайгаки, лисицы, грызуны, дикие кабаны. У крупном рогатого скота, яков, буйволов, верблюдов, лошадей бруцеллез вызывают Вr. abortus; у свиней, северных оленей – Вr. suis; у коз, овец – Вr. melitensis; у собак – Вr. canis (возможно, Вr. melitensis, Вr. suis, Вr. abortus). Определенное эпизоотологическое значение имеет возможность миграции различных видов бруцелл от одних животных к другим. Доказана миграция Вr. melitensis от коз и овец на коров и свиней, Вr. suis – от свиней на коз и овец. От больных бруцеллезом животных могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз.

Среди крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, северных оленей бруцеллез протекает в виде эпизоотических вспышек, а лошадей, собак, буйволов и других животных – спорадических случаев.

Источник возбудителя инфекции – больные бруцеллезом животные. Особенно опасны они в период выраженных симптомов болезни. Чрезвычайно большое количество возбудителя выделяют животные с околоплодными водами, плодными оболочками, абортированным плодом, истечениями из половых органов. Выделяется возбудитель также с молоком, спермой, мочой, калом. У коров бруцеллы могут сохраняться в вымени до 7 – 9 лет, у овец – до 2 – 3, у самцов в семенниках – до 9 лет.

Продукты, инфицированные бруцеллами, и сырье животного происхождения, предметы ухода, корма, подстилка, вода, почва, одежда людей относятся к ведущим факторам передачи возбудителя. Молодняк животных в основном заражается бруцеллезом алиментарно, взрослые – алиментарно и контактно половым путем, через слизистые оболочки и кожу. Особую опасность для молодняка представляют инфицированные молочные продукты (молоко, обрат, сыворотка).

Болезнь в хозяйстве может возникнуть после ввода в стадо животных, закупаемых у населения, из неблагополучных ферм или при несоблюдении основных правил карантинирования поголовья; при совместном выпасе здоровом и больном скота, использовании инфицированных водоисточников и скотопрогонных трасс. Возбудитель может быть занесен в хозяйство собаками, грызунами, крысами, особенно если они имели доступ к последам и абортированным плодам, а также с молодняком из неблагополучных стад, где нет клинического проявления болезни.

В свежих эпизоотических очагах бруцеллеза в течение нескольких месяцев может быть инфицировано до 60% и более восприимчивого поголовья. В стаде вначале появляются единичные, а затем массовые аборты. В дальнейшем (через 2 – 3 года) в таких стадах аборты могут не регистрироваться, но при поступлении в них новой партии животных эпизоотический процесс активизируется и болезнь обостряется, поражая как введенных, так и ранее переболевших животных. Перегруппировка животных в хозяйстве приводит к появлению вспышек бруцеллеза.

Возникновению бруцеллеза способствуют неудовлетворительные ветеринарно-санитарные условия содержания и выращивания поголовья, снижающие резистентность организма животных, несвоевременная уборка последов, абортированных плодов, навоза, несоблюдение режима дезинфекции.

Патогенез. Развитие болезни во многом зависит от физиологического состояния и общей иммунореактивности животном, вирулентности и количества возбудителя при заражении, условий, в которых находится больное животное. При любых способах попадания в организм бруцеллы по лимфатическим путям проникают в регионарные лимфоузлы и паренхиматозные органы.

В развитии бруцеллеза принято различать три фазы: первичная латенция (регионарная инфекция), генерализация и вторичная латенция.

В фазу регионарной инфекции возбудитель, адаптируясь к определенным тканям, не вызывает клинического проявления болезни, но тем не менее такие животные могут являться выделителями бруцелл. В этой фазе морфологические изменения характеризуются гиперплазией в синусах лимфоузлов, лейкоцитарной ин фильтрацией и образованием микрогранулем из лимфоидных клеток и гистиоцитов, набуханием ретикулоэндотелия в паренхиматозных органах. Более продолжительная фаза регионарной инфекции у телят, значительно короче – у взрослых животных. Серологические показатели чаще отрицательные, так как накопление антител в сыворотках крови в этой фазе не достигает диагностического уровня.

Фаза генерализации развивается под влиянием беременности, снижения общей резистентности при ухудшении условий содержания, кормления. Она чаще отмечается во второй половине беременности и характеризуется бактериемией, развитием ярких клинических признаков болезни. У беременных животных возбудитель проникает в слизистые оболочки матки, плодные оболочки и плод, вызывая воспалительные процессы и нарушение его питания. Воспалительный процесс с явлением некроза может развиваться в различных тканях и органах и клинически проявляться у животных в виде орхитов, бурситов, абсцессов под кожей и другими признаками. Наряду с персистенцией возбудителя в крови в этой фазе выявляются сывороточные специфические антитела, уровень которых высок в течение 2 – 3 мес. Но в ряде случаев даже в первые дни после аборта в сыворотках крови у животных антитела могут не выявляться, что необходимо учитывать при диагностике бруцеллеза.

Генерализация процесса сменяется третьей фазой – вторичной латенции, характеризующейся клиническим выздоровлением животного с сохранением возможности длительное время выделять возбудителя во внешнюю среду. При наличии выраженной аллергической перестройки у многих больных в этот период антитела в крови могут не выявляться, что скорее характеризует их бывший контакт с возбудителем. Наличие антител у животных при положительных показаниях аллергической пробы свидетельствует об их повышенной опасности, а также о том, что антитела не обладают губительным действием по отношению бруцелл.

В зависимости от фазы развития болезни неодинаковой оказывается и диагностическая ценность серологических тестов и аллергического метода.

Течение и симптомы. Инкубационный период длится 2 – 4 нед. Если среди восприимчивого поголовья нет беременных животных, заболевание протекает бессимптомно (латентная форма). Распознать болезнь у таких животных можно лишь с помощью серологического или аллергического методов исследования.

У беременных животных всех видов бруцеллез характеризуется абортами во второй половине беременности. Коровы абортируют чаще на 5 – 8-м месяце, овцы и козы,– на 3 – 5-м месяце беременности. Свиноматки могут абортировать как в первой, так и во второй половине супоросности, собаки – на 40 – 50-й день. У крупного рогатого скота и овец повторные аборты наблюдаются редко, у свиней они могут быть многократными. За 1 – 2 дня до аборта у самки набухает вымя, припухают наружные половые органы, отмечают незначительное выделение из влагалища буровато-красной слизистой жидкости. Аборты, как правило, сопровождаются задержанием последа и развитием слизисто-гнойного, а позже гнойно-фибринозного эндометрита. У отдельных животных на фоне выраженного эндометрита нередко появляются мастит, поражения яичников и фаллопиевых труб. При тяжело протекающих процессах у животных поднимается температура, снижаются удои, они теряют массу. Поражение половых путей влечет за собой нарушение воспроизводительной функции, что приводит к яловости, а порой и бесплодию.

Заболевание бруцеллезом у отдельных особей может сопровождаться серозными бурситами, гигромами, артритами, тендовагинитами, а у мужских особей – орхитами и эпидидимитами со значительным увеличением семенников и опуханием мошонки. У свиней бруцеллез, кроме того, характеризуется появлением абсцессов в подкожной клетчатке и паренхиматозных органах, параличами мышц таза и конечностей, а у лошадей – бурситами в области затылка и холки. Характерным клиническим признаком бруцеллеза у северных оленей и маралов считают бурситы конечностей. Отмечено более легкое переболевание бруцеллезом буйволов и зебувидного скота.

У собак и кошек заболевание протекает бессимптомно и выявляется только серологическим методом. Птицы устойчивы к бруцеллезу даже при экспериментальном заражении.

Патологоанатомические изменения. У абортировавших животных плодные оболочки набухшие, покрыты хлопьями фибрина и гноя. Возможны признаки гнойно-катарального метрита, поражение почек, селезенки, печени (абсцессы). У самцов отмечают развитие гнойно-некротических орхитов, у самок – маститов, оофаритов, выявляют кисты в яичниках, нередки поражения суставов, бурситы. У абортированных плодов находят отеки подкожной клетчатки и пупочного канатика, скопление жидкости буро-красного цвета с хлопьями фибрина в грудной и брюшной полостях, кровоизлияния на серозных и слизистых оболочках, катаральное воспаление слизистых оболочек желудочно-кишечною тракта, легких; некротические участки в печени.

При гистологическом исследовании выявляют очаги некробиоза и некроза в различных органах и тканях, развитие в них микрогранулем, представленных скоплениями лимфоидных элементов и гистоцитов, наличие в междольковой ткани полиморфноклеточных инфильтратов.

Диагноз. Ставят его комплексным методом с учетом результатов эпизоотологического, клинического, аллергическом и лабораторного исследований. Из эпизоотологических данных учитывают благополучие местности по бруцеллезу по результатам лабораторных и аллергических исследований животных за прошлые годы. Обращают особое внимание на порядок комплектования и профилактическое карантинирование вновь введенных животных, тщательность учета в стаде приплода, анализируют причины недополучения молодняка от маточного поголовья за последний год.

При клиническом обследовании животных обращают внимание на наличие бурситов, орхитов (у самцов), эндометритов, абортов (чаще во второй половине беременности), задержание последов. В случае аборта обязательно проводят лабораторное исследование материала. Для бактериологического исследования в лабораторию направляют абортированный плод с плодными оболочками (от свиноматок берут не менее трех плодов) или желудок плода с содержимым (желудок перевязывают со стороны пищевода и двенадцатиперстной кишки), кусочки печени, селезенки, семенники с придатками, измененные участки рогов матки и лимфоузлы. Эти материалы берут от каждого больного животного в отдельности сразу же после аборта или убоя животного и отправляют в лабораторию в неконсервированном виде. Если доставить патологический материал на исследования в течение суток нельзя, его консервируют (за исключением плодов) стерильным 30 %-ным водным раствором глицерина. Одновременно в лабораторию направляют для серологического исследования молоко, сыворотку крови или кровь от абортировавшего или убитого с диагностической целью животного. Сыворотку крови консервируют 5 %-ным раствором фенола, сухой борной кислотой до получения насыщенного раствора, замораживанием. Неконсервированная сыворотка пригодна для исследования б дней со дня взятия крови при условии хранения ее при температуре 4 – 8 С, консервированная – 30 дней, замороженная – 3 дня. При направлении молока на исследование каждую пробу консервируют добавлением одной капли 10 %-ного раствора формалина на 5 – 10 мл молока. Эти пробы можно исследовать в течение 2 – 3 сут.

При взятии проб и патологическом материала для лабораторного исследования необходимо соблюдать меры предосторожности, исключая заражение людей и инфицирование объектов внешней среды.

Бактериологическая диагностика заключается в микроскопии мазков, получении чистых культур возбудителя и при необходимости проведении биологической пробы на морских свинках. Мазки отпечатки из патологическою материала окрашивают по Граму и специальными методами (по Козловскому, Шуляку – Шину, Кюстену, Стампу, модифицированному методу Циля – Нилъсона), позволяющими дифференцировать бруцелл от сходных бактерий. При всех способах окраски бруцеллы красные, фон препарата и другие микроорганизмы в зависимости от метода зеленою или синею цвета. Выделение чистой культуры при посеве патматериала на специальной питательной среде является убедительным подтверждением диагноза.

Для постановки биопробы используют морских свинок массой 350 – 400 г, предварительно исследованных на бруцеллез по РА. Заражают их подкожно в область паха или внутрибрюшинно. На 10, 20 и 30-й дни у них берут кровь для серологического исследования. Наличие у зараженных животных противобруцеллезных антител в титрах 1:10 и выше указывает на заболевание их бруцеллезом. Независимо от результатов серологического исследования животных на 30-й день убивают, вскрывают и из их внутренних органов (лимфоузлы, кровь, костный мозг, печень, почки, селезенка) делают посевы с целью выделения культур, при необходимости проводят гистологическое исследование. Биопроба – ценный метод диагностики бруцеллеза. Разработан и используется при бруцеллезе метод иммунофлюоресценции.

Серологические исследования. Для массовых профилактических и диагностических обследований скота на бруцеллез широко используют РА, РСК и РДСК. Кроме этих реакций применяют РБП (роз бенгал пробу) и кольцевую реакцию (КР) с молоком коров.

На ранних стадиях бруцеллезном процесса наиболее чувствительна РА. Агглютинины в сыворотках крови больных животных в низких титрах можно выявить уже с 10 – 15-м дня, а затем в течение 1 – 3 мес после инфицирования. В более поздние сроки диагностическая ценность РА снижается. Но четкость и чувствительность ее можно повысить путем использования при постановке 5 – 10 %-ного раствора поваренной соли. Ставят РА пробирочным и пластинчатым (на стекле) методами в разведениях сыворотки от 1:25 до 1:200 для свиней, овец, коз, оленей, собак и от 1:50 до 1:400 для крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов, зебу и буйволов; от 1:10 до 1:80 для пушных зверей и морских свинок.

Наличие среди обследуемого поголовья животных, реагирующих по РА в разведениях 1:50 для мелких, 1:100 для крупных и 1:10 для пушных зверей и морских свинок с оценкой более чем в два креста, указывает на заболевание животных бруцеллезом. Обнаружение антител в более низких титрах оценивается как сомнительный результат. Такие животные подлежат повторному исследованию через 15 – 30 дней. Если титры РА нарастают, то животные признаются больными, если же уровень их не изменяется или снижается – животные считаются здоровыми.

Роз бенгал пробу (РБП) применяют при плановых профилактических исследованиях животных на бруцеллез. Сыворотки крови животных благополучных хозяйств, дающие положительную РБП, сразу же исследуют в РА и РСК для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител.

РСК и РДСК по времени выявления зараженных животных несколько отстают от показаний РА у крупного рогатого скота, но являются более ценными и чувствительными при диагностике бруцеллеза у овец и свиней. Обе реакции стабильны, специфичны и существенно дополняют показания РА у всех видов животных.

Для контроля за благополучием стад по бруцеллезу за рубежом широко применяют кольцевую реакцию (КР) с молоком. В некоторых странах эту реакцию используют и при оздоровлении скота от бруцеллеза. В России эта проба рекомендуется для контроля эпизоотического состояния животных по бруцеллезу в зонах, стабильно благополучных по этой болезни. Но ценность КР снижается в связи с тем, что она может давать положительные реакции при исследовании молока коров, больных маститами и другими болезнями, сопровождающимися лихорадкой, а также в первые 2 нед после отела. Поэтому всех животных, реагирующих по КР в свободных от бруцеллеза стадах, необходимо перепроверять по РА и РСК (РДСК).

Для диагностики бруцеллеза разрабатываются реакции Кумбса, РНГА, связывания конглютинирующего комплекса (РСКК) и другие серологические тесты.

Аллергические исследования. Наибольшую диагностическую ценность они имеют в поздних стадиях развития болезни. Для аллергических исследований применяют бруцеллин ВИЭВ. Препарат вводят пальпебрально под кожу нижнего века овцам, козам и оленям в дозе 0,5 мл, крупному рогатому скоту и буйволам – в дозе 1 мл, свиньям – внутрикожно с наружной стороны основания уха в дозе 0,2 мл. Реакцию учитывают через 36 – 48 ч. Воспаление на месте введения аллергена расценивается как положительная реакция, животные признаются больными и подлежат убою. Повторно животных исследуют аллергическим методом через 25 – 30 дней. Не разрешается вводить бруцеллин под кожу века животным, имеющим травматические повреждения, абсцессы и другие поражения глаз. Животных с заболеванием глаз или с густым шерстным покровом в области век метят и вводят им бруцеллин в середину одной из подхвостовых складок, внутрикожно в дозах: овцам и козам 0,2 мл и крупному рогатому скоту 0,3 мл (внутрикожная проба).

Дифференциальный диагноз. Бруцеллез дифференцируют от других инфекционных болезней, которые сопровождаются абортами, – кампилобактериоза, трихомоноза, инфекционного эпидидимита, сальмонеллеза, хламидиозного аборта и лептоспироза, а также от незаразных болезней с симптомами аборта.

Лечение. Животные, больные бруцеллезом, подлежат убою.

Иммунитет. Переболевание бруцеллезом ведет к образованию специфических бруцеллезных антител, выявляемых при серологических исследованиях. Однако наличие антител в сыворотках крови животных не предохраняет их от повторного заражения. В защите животных определенное значение отводится клеточному иммунитету. У переболевших животных макрофаги обладают более выраженной фагоцитарной активностью, чем у здоровых. Полное выздоровление, сопровождающееся освобождением организма от возбудителя, довольно редкое явление среди животных. Иммунитет относительный.

Профилактика и меры борьбы. Профилактика бруцеллеза основана на выполнении основных ветеринарно-санитарных правил по охране благополучных хозяйств от заноса в них возбудителя инфекции. Для этого комплектование поголовья проводят заведомо здоровыми животными из благополучных хозяйств, исключают возможности контакта различных групп скота на пастбищах, водопоях, скотопрогонных трассах и в других местах массового скопления животных, проводят плановые профилактические диагностические обследования скота на бруцеллез. Животных, поступающих в хозяйство для комплектования, карантинируют на 30 дней и в этот период исследуют на бруцеллез; только после отрицательных результатов РА и РСК переводят в общее стадо. В случае абортов плод вместе с кровью абортировавших животных направляют для лабораторного исследования.

В комплексе мер по профилактике бруцеллеза у животных определенное место принадлежит вакцинации. Предпочтение отдается живым вакцинам, приготовленным из слабовирулентных, но иммуногенных штаммов. Из такого рода вакцин мировое признание получила вакцина из штамма Вr. abortus 19. Она безвредна для крупного рогатого скота. У телят, привитых в возрасте 4 – 9 мес, формируется иммунитет продолжительностью до 5 лет. Отрицательный момент введения крупному рогатому скоту вакцины из штамма 19 – накопление в крови привитых животных противобруцеллезных антител, которые невозможно отличить от антител, образующихся после заражения скота вирулентными штаммами бруцелл. Такие антитела у отдельных привитых взрослых животных могут сохраняться длительное время, что препятствует в последующем проведению диагностических исследований поголовья и оценке благополучия животных по бруцеллезу. Многолетний опыт применения вакцины из штамма 19 показал, что препарат является эффективным только в случае, когда ем используют в борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота в комплексе с ветеринарно-санитарными и административно-хозяйственными мерами.

В настоящее время для профилактики бруцеллеза у крупном рогатом скота широко используют вакцину из штамма Вr. abortus 82 (К. М. Салмаков). Вакцина безвредна, обладает слабыми агглютиногенными свойствами и используется как в угрожаемых, так и в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах. Рекомендованы схемы иммунизации животных с применением вакцин из штаммов 19 и 82.

Для профилактики болезни у овец и коз рекомендована противобруцеллезная вакцина из штамма Рев-1. Вакциной прививают ярок в возрасте 3 – 5 мес и старше, но не позднее чем за 2 мес до осеменения. Применение противобруцеллезных вакцин в республиках, краях, областях и отдельных районах допускается только с разрешения соответствующих ветеринарных органов. Порядок вакцинации и исследования животных до и после иммунизации регламентируется наставлениями по применению соответствующих вакцин.

При установлении у животных бруцеллеза на хозяйство (ферму) накладывают карантин и разрабатывают план оздоровительных мероприятий, в котором предусматривают:

строгий учет поголовья и клинических признаков, свойственных бруцеллезу; запрещение передвижения скота без разрешения ветеринарных специалистов; систему обеззараживания продуктов животноводства, текущую дезинфекцию, проведение специальных мер в неблагополучном пункте и профилактической работы в угрожаемой зоне.

Для угрожаемой зоны определяют периодичность массовых обследований восприимчивого поголовья, обязательно осуществляют учет и лабораторное исследование всех абортированных плодов и абортировавших животных, намечают сроки и другие меры по недопущению заноса возбудителя инфекции. С целью определения комплекса профилактических и оздоровительных мероприятий разделяют стада животных, ферм, хозяйств, населенные пункты и административные территории в зависимости от эпизоотического состояния на благополучные и неблагополучные по бруцеллезу. Степень неблагополучия определяют по характеру эпизоотических очагов и клиническому проявлению болезни, уровню заболеваемости. С учетом этого отдельные районы, области, края и республики относят к категориям территорий с ограниченным или значительным распространением бруцеллеза. В зависимости от этого оздоровление неблагополучных хозяйств проводят путем: единовременной полной замены поголовья неблагополучного стада с последующим проведением мероприятий, обеспечивающих санацию территории фермы. Такой путь борьбы эффективен в случаях установления бруцеллеза в ранее благополучных районах (областях), в зонах с незначительным его распространением, при остром течении болезни или массовом поражении животных в стаде; диагностическом исследования с последующим немедленным выделением из стад больных животных, их убоем и своевременной вакцинацией остального условно здорового поголовья против бруцеллеза. Эти меры рекомендуется проводить на территориях со значительным распространением болезни; систематических диагностических исследований животных, выделения из стад больных и их убоя; серологическое исследование животных неблагополучной группы проводят через каждые 15 – 30 дней до получения двукратных отрицательных результатов и по следующих контрольных исследований через 3 и б мес. Путем диагностических исследований достигается оздоровление крупного рогатого скота, принадлежащего индивидуальным владельцам.

В районах, неблагополучных по заболеванию крупного рогатого скота бруцеллезом, запрещается организовывать межхозяйственные комплексы, фермы и другие предприятия по выращиванию телок. Во всех хозяйствах таких районов создают внутрихозяйственные фермы (отделения, бригады) для изолированного выращивания молодняка животных.

При возникновении бруцеллеза среди овец, коз и свиней борьбу с заболеванием осуществляют путем убоя всего поголовья неблагополучных ферм. Исключение составляют районы с отгонным ведением овцеводства, где в комплексе противобруцеллезных мероприятий для профилактики заражения молодняка используют вакцину из штамма Рев-1.

Для оперативного решения вопросов, связанных с оздоровлением животноводства от бруцеллеза, в неблагополучных по этой болезни местностях создают в установленном порядке специальные комиссии из числа ответственных работников сельскохозяйственных, планирующих органов, органов здравоохранения, мясной и молочной промышленности и других организаций.

Местные органы здравоохранения и ветеринарии организуют комиссионные проверки полноты и качества проведения профилактических и оздоровительных мероприятий на животноводческих фермах и перерабатывающих предприятиях и дают их руководителям и специалистам официальные предписания о принятии неотложных организационно-хозяйственных, ограничительных и предупредительных мер; являющихся обязательными для исполнения.

В хозяйствах, неблагополучных по бруцеллезу, запрещают содержать больных животных в стадах и общих животноводческих помещениях, не допускают создания временных пунктов и ферм изоляторов для передержки такого скота. Животных, реагирующих на бруцеллез, или поголовье стада с острым течением болезни немедленно изолируют от другого скота и в течение 30 дней обязательно сдают на убой; независимо от их племенной или производственной ценности. Для временной передержки бруцеллезного скота (до сдачи ем на убой) используют типовой изолятор или обору дуют специальное помещение, которое должно быть удалено от мест содержания животных не менее чем на 200 м.

Животных, реагирующих на бруцеллез, разрешается перевозить на мясокомбинаты по железной дороге, водным транспортом и на автомашинах с непроницаемым кузовом при строгом соблюдении ветеринарно-санитарных правил и под контролем ветеринарного специалиста, руководствуясь при этом ветеринарно-санитарными требованиями при перевозках животных на особых условиях. Убой больных бруцеллезом животных на месте (в хозяйстве) не допускается.

Животных неблагополучного по бруцеллезу стада (отары) содержат обособленно от здорового поголовья. Ведут учет всех случаев абортов, преждевременных родов, задержания последа. На фермах оборудуют родильное помещение, устанавливают специальные устройства для обеззараживания молока, создают необходимые условия для защиты работников животноводства от заражения бруцеллезом. Молоко, полученное от коров, имеющих клинические признаки бруцеллеза, запрещается использовать на пищевые цели и в корм животным. Такое молоко обеззараживают путем добавления в него 5% формальдегида, креолина или другого дезинфицирующего вещества. В связи с этим больных коров лучше не доить.

Запрещается доение овец и коз, обработка (сушка, чистка и пр.) недезинфицированных смушковых шкурок, а также заготовка сычугов и тушек ягнят, изготовление брынзы и сыров из овечьего (козьего) молока на фермах, неблагополучных по бруцеллезу. Смушковые шкурки сразу после снятия их с тушек подвергают дезинфекции и консервированию в соответствии с инструкцией по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке, а тушки перерабатывают на мясокостную муку или сжигают. Шерсть, полученную от овец (коз) неблагополучных по бруцеллезу отар (стад), подвергают в хозяйстве обеззараживанию бромистым метилом под пленкой, после чего ее вывозят для промышленной переработки.

В животноводческих помещениях и на территории вокруг них, где содержится неблагополучное поголовье, необходимо поддерживать должный санитарный порядок, строго выполнять правила по недопущению распространения заболевания как внутри, так и за пределы фермы, проводить в установленные сроки дезинфекцию, дезинсекцию, санитарный ремонт и другие ветеринарно-санитарные мероприятия.

Для дезинфекции применяют 20 %-ную взвесь свежегашеной извести; взвесь или осветленный раствор извести, содержащий 2% активного хлора; препарат ДП-2; 2 %-ный горячий раствор гидроокиси натрия; 3 %-ный раствор каустифицированной содопоташной смеси,» 2 %-ный раствор формальдегида; 5 %-ный горячий раствор кальцинированной соды; 0,5 %-ный раствор глутарового альдегида; 5 %-ный раствор технического фенолята натрия; растворы нейтрального гипохлорита кальция, тексаната, содержащие 3% активного хлора.

Для аэрозольной дезинфекции очищенных и герметически закрытых помещений в отсутствие животных применяют 40 %-ный водный раствор формальдегида.

Особое внимание уделяют уборке и своевременному обеззараживанию навоза и животноводческих стоков. С этой целью применяют биотермический и химический способы обезвреживания животноводческих отходов, а также термическую обработку их с по мощью пароструйных установок.

Перед снятием карантина с неблагополучного по бруцеллезу пункта весь крупный рогатый скот хозяйства, а также животных других видов (включая собак), имевших контакт с неблагополучным поголовьем, исследуют на бруцеллез серологическими методами. Карантин снимают только при получении отрицательных результатов исследований и выполнении всех мероприятий, предусмотренных инструкцией. Полноту и качество проведенных противобруцеллезных мероприятий проверяют специальные комиссии, состоящие из медицинских, ветеринарных работников и представителей хозяйств. После снятия карантина и признания поголовья благополучным по бруцеллезу оздоровленные хозяйства в течение одного года не имеют права заниматься племенной продажей и вывозом животных для производственных целей, показа их на выставках и выводках.

источник