Выявление ДНК возбудителя бруцеллеза (микроорганизмов рода Род Brucella: Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis, Brucella ovis, Brucella canis методом ПЦР в реальном времени.
Чувствительность набора: до 103 мл геном эквивалентов вируса на 1 мл пробы.
Материал для исследовнаия: Материал НЕ требующий оформления пробоподготовки: — сперма, — молоко от абортировавших животных — содержимое бурс и гигром — выделения из половых путей, взятые в первые 5 дней после аборта Материал требующий оформления дополнительной пробоподготовки. — Абортированный плод целиком или пат материал от него (содержимое брюшной полости и желудка, околоплодная жидкость или слизь между оболочками и плодом), парензиматозные органы (селезенка, печень, сердце, почки)). — плацента и плодовые оболочки от абортировавших животных; — в случае диагностического убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы (не менее 7 пар) подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); — от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками. Для пат органов и абортированных плодов необходимо дополнительная утилизация отходов по весу на момент поступления в лабораторию Правила отбора проб для исследования: 1) Лимфоузлы берут целиком. 2) Жидкости для исследования, кроме молока, отбирают в объеме 5 — 10 мл в стерильные контейнеры. 3) Из органов и тканей вырезают кусочки не более 5 х 5 х 5 см, каждый орган помещается в отдельный герметичный пакет, подписывается. Органы, расфасованные в пакеты, от одного животного складываются в общий пакет и маркируются идентификатором животного. Доставляются в лабораторию в течение 2-х часов после отбора. При не возможности соблюсти данное требование, отобранный пат материал замораживается и через 1 сутки в замороженном виде доставляется в лабораторию, размораживание при транспортировке не допускается. 4) Взятие содержимого гигром, бурс. В области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с плотной пробкой. 5) Молоко. Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10 — 15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.У собак при взятии проб молока соски обмывают теплой водой и обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждого соска сцеживают около 0,5-1 мл молока в стерильнуюпробирку с крышкой без консервантов, без активаторов свертывания. У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с крышкой без консервантов, без активаторов свертывания. Молоко должно быть доставлено в лабораторию в день взятия пробы. 6) Абортированные плоды весом до 1 кг берется целиком. Плод помещается в отдельный чистый пакет, маркируется. Если вес плода более 1 кг, то необходимо провести вскрытие плода и взятие органов для исследования. Хранение: в холодильнике не более 2 -х суток при температуре +2-+8⁰С более длительное хранение при температуре не выше -16⁰С, кроме крови. Молоко должно быть доставлено в лабораторию в день взятия пробы.
источник
Поиск Последние темы Горячие темы Список участников На главную страницу Регистрация / Вход
Добрый день! Опишу ситуацию. Содержу коз в количестве 15гол, на участке, безвыпасно, траву не кошу, животные только на сене, контактов у моих животных с другими МРС не было, мои животные доступ за пределы участка не имеют. При проведении планового исследования на бруцеллез в 2014г все результаты отрицательные, после этого ввоза животных в мое хозяйство не было. Весной 2015 года планового исследования не было, а провели его в октябре 2015г(возможно это был эпизоотический мониторинг) При этом в нашем населенном пункте выявлено четыре положительнореагирующих животных МРС. В том числе мое животное, козочка, рожденная в моем хозяйстве в 2014 г. Мать ее отр, козел, ее крывший — отр, пятеро коз, живших с ней в одной стайке на протяжении более 1 года, — отр. Результаты РА 1:200, Рид положит. Мы с муже уже тоже сдали на бруцеллез — отриц. В нашей местности до этого ни разу за обозримые года не было выявлено ни одного случая заболевания бруцеллезом. Козочка на момент исследования была беременна со сроком 2 мес. Помимо этого до беременности была обезрожена, но пошло инфицирование пазух, после проведения антибиотикотерапии состояние улучшилось. Но возможно очаг инфекции в пазухах остался., так как коза опять стала пугливой и голову трогать не дает. После выявления, козочка была изолирована. Все оставшееся поголовье повторно исследовано, все отрицательно, вчера сделали уже второй забор крови. Провести повторное исследование положительно среагировавщего животного мне отказали. Выписали предписание на убой. Я за свои средства провела исследование цельной крови в ПЦР, результат отрицательный. Имели ли право мне отказать в повторном исследовании животного? При этом, диагноз установила лаборатория. Никто из врачей не выезжал в мое хозяйство, не проводил исследование ситуации. Все мои попытки провести повторное исследование встретили категорический отказ. Более того передать всю ругань, что я услышала в свой адрес, невозможно, врач эпизоотолог совершенно неадекватна.
Других положительно реагирующих животных уже забили, вскрытие ветсанэкспертом никаких изменений не выявило, пат материал на исследование, естесственно, никто не отправлял. При этом все замалчивается, скрывается, никто ничего не знает. Даже о том, что пришли результаты повторных анализов мне не сообщили.
Может ли это быть ложноположительная реакция в связи с беременностью, с воспалительным процессом?
Какие действия мне можно предпринять для установления диагноза?
Аннв М. wrote: Добрый день! Опишу ситуацию. Содержу коз в количестве 15гол, на участке, безвыпасно, траву не кошу, животные только на сене, контактов у моих животных с другими МРС не было, мои животные доступ за пределы участка не имеют. При проведении планового исследования на бруцеллез в 2014г все результаты отрицательные, после этого ввоза животных в мое хозяйство не было. Весной 2015 года планового исследования не было, а провели его в октябре 2015г(возможно это был эпизоотический мониторинг) При этом в нашем населенном пункте выявлено четыре положительнореагирующих животных МРС. В том числе мое животное, козочка, рожденная в моем хозяйстве в 2014 г. Мать ее отр, козел, ее крывший — отр, пятеро коз, живших с ней в одной стайке на протяжении более 1 года, — отр. Результаты РА 1:200, Рид положит. Мы с муже уже тоже сдали на бруцеллез — отриц. В нашей местности до этого ни разу за обозримые года не было выявлено ни одного случая заболевания бруцеллезом. Козочка на момент исследования была беременна со сроком 2 мес. Помимо этого до беременности была обезрожена, но пошло инфицирование пазух, после проведения антибиотикотерапии состояние улучшилось. Но возможно очаг инфекции в пазухах остался., так как коза опять стала пугливой и голову трогать не дает. После выявления, козочка была изолирована. Все оставшееся поголовье повторно исследовано, все отрицательно, вчера сделали уже второй забор крови. Провести повторное исследование положительно среагировавщего животного мне отказали. Выписали предписание на убой. Я за свои средства провела исследование цельной крови в ПЦР, результат отрицательный. Имели ли право мне отказать в повторном исследовании животного? При этом, диагноз установила лаборатория. Никто из врачей не выезжал в мое хозяйство, не проводил исследование ситуации. Все мои попытки провести повторное исследование встретили категорический отказ. Более того передать всю ругань, что я услышала в свой адрес, невозможно, врач эпизоотолог совершенно неадекватна.
Других положительно реагирующих животных уже забили, вскрытие ветсанэкспертом никаких изменений не выявило, пат материал на исследование, естесственно, никто не отправлял. При этом все замалчивается, скрывается, никто ничего не знает. Даже о том, что пришли результаты повторных анализов мне не сообщили.
Может ли это быть ложноположительная реакция в связи с беременностью, с воспалительным процессом?
Какие действия мне можно предпринять для установления диагноза?
Добрый день. Могу Вам только посочувствовать. Но, боюсь, ваша козочка инфицирована. У коз положительным считается РА 1:100, а тут еще и РИД положительный. Что касается ПЦР крови, то это бессмысленный анализ, так как бруцелла находится в крови очень короткое время, в момент острой фазы. Далее она локализуется в суставах, половых органах. Поэтому, как правило, ПЦР крови всегда отрицательный. Показательным он будет при исследовании смывов с влагалища или абортированных плодов. Так что, советую, поплакать и быстро забить и утилизировать . И радоваться, что остальное стадо здорово. Я ж правильно понял, что повторные анализы тоже отрицательны? И люди здоровы! Бруцелла мелитензис очень вирулентна, заболеть можно на раз. Не лечится. Человек сразу получает инвалидность. Что касается повторного исследования положительно реагирующего животного, то инструкциями и руководствами это не предусмотрено, опять же из-за опасности заражения. На счет замалчивания — это вряд ли. У Вас должен быть наложен карантин на весь поселок.
И есть вопрос — а почему Вы не вакцинируете свое стадо?
Во-первых, забор крови провели в нарушение Ветеринарных правил ВП 13.3.1302-963. 2.2.3. Коров (нетелей), буйволиц и верблюдиц исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов — с 4-месячного возраста. Хотя были предупреждены, что животные беременны. А в инструкции О МЕРОПРИЯТИЯХ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛИКВИДАЦИИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ в разделе диагностика бруцеллеза есть пункт 2.6. В случае, когда в благополучном по бруцеллезу стаде (на ферме) при плановом исследовании от отдельных животных сывороток крови в РА (в том числе при переисследовании проб, положительных по РБП, но отрицательных по РСК) получен положительный результат — у крупного рогатого скота и лошадей в титре не более 200 международных единиц (МЕ), у буйволов, овец, коз и свиней — 100 МЕ, таких животных немедленно изолируют и через 15 — 20 дней дополнительно исследуют на бруцеллез комплексно серологическими (РА и РСК или РДСК) и аллергическим (кроме лошадей) методами. Одновременно этими же методами исследуют остальных животных стада (фермы).
Если при повторном исследовании в стаде (отаре) не выявлено реагирующих и отсутствуют другие признаки, вызывающие подозрение на заболевание животных бруцеллезом (аборты и проч.), а у исследованных ранее животных титр антител в РА не повысился, РСК (РДСК) и аллергическая проба окажутся отрицательными, то стадо считают благополучным в отношении бруцеллеза.
Более того в этой же главе написано, что даже если произошли аборты, делается бакисследование, животные полож реагируют, то их исследуют повторно!
Но ветеринары, сказали,что это не действующая(!) инструкция.
Почему такая перестраховка? Когда брали кровь на ПЦР, я покупала вакуумные прбирки, ни капли крови не было. Да и когда первично брали кровь, что не было угрозы, когда еще не знали о результатах?
У нас местность БЛАГОПОЛУЧНА и до этого скрининга не было НИ ОДНОГО положительного животного, более того даже сомнительного. Почему я должна прививать животных от того, чего отродясь у нас не было. У нас Ханты-Мансийский округ, не сельхоз район, не было бруцеллеза. И откуда он мог взятся лично в моем хозяйстве — это загадка. А доводы врачей, что типа с ногами занесли, я в сарай в уличной обуви не бегаю, да и три другие положительные головы живут за чертой города, а я в черие на другом конце от их всех. Общих стад у нас нет, пастбищ нет. Да и мои вообще за калитку не выходят.
На данный момент на мое хозяйство наложено ограничение. Так как они нарушили правила и взяли кровь у беременной козы, то мне ветинспектор написал письмо, что я должна содержать животное изолированно и через 2 мес после окота провести анализ. Я предложила во время родов, соблюдая осторожность, собрать околоплодные воды и оболочки плодов для исследования ПЦР или бак исследования. Мне заявили, что делать не будут и эти анализы не являются для них показательными.
Я бы именно так себя и повела, если бы изначально они соблюдали инструкции. И не несли ахинеи по поводу недействующих инструкции. И вообще, пошли бы со мной на контакт и рассмотрели мою ситуацию. И не начали орать и везде заявлять, что я взятки сую и тому подобное, а также кричать, что я лаборатории не доверяю. А на мой вопрос о дополнительном исследовании, заявили, что я не имею права проводить анализы в других лабораториях, а только в той которая выявила положит. реакцию. Эти заявления как мне расценивать?! Идти на поводу их безграмотности и попоприкрывательстве я не хочу. И тянуть с исследованиями и гадать на кофейной гуще тоже не хочу. Я предложила за свой счет доставить и сделать любые исследования, которые необходимы для уточнения диагноза. В ответ, только , что они отказываются мне помогать, кровь не возьмут, сопроводительную не напишут(без нее сами понимаете, лаборатория не примет).
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РСФСР
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА И ИЕРСИНИОЗА И МЕРЫ ПО ИХ ПРОФИЛАКТИКЕ. РЕКОМЕНДАЦИИ.
При проведении плановых диагностических исследований животных на бруцеллез в благополучных по этой болезни зонах обычно применяют реакцию агглютинации (РА) или Роз бенгал пробу (РБП). При этом, особенно в весеннее время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакциро- ванных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть получены неспецифические результаты реакций. Обычно появление таких реакций обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.), а также рядом других причин. Как правило, уровень выявляемых при этом агглютининов не превышает 100 МЕ у свиней и овец и 200 МЕ у крупного рогатого скота, за исключением случаев, когда животные являются носителям микроорганизмов из группы иерсиний, в частности иерсинии энтероколитика серовара 0:9. Оценка подобных показаний РА в ранее благополучных по бруцеллезу хозяйстах, учитывая возможность заноса инфекции и длительного бессимптомного болезни, затруднена и требует дополнительной расшифровки. В этих целях рекомендуется использовать комплекс показателей, предусмотренных Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных, утвержденной бывшим Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 10.11.88 г., в том числе: эпизоотологические данные, проявление клинических признаков болезни, сроки иммунизации против других болезней, результаты исследований другими методами (бактериологическим, РДСК, РСК, реакцией аллергии) и повторного (через 15-20 дней) исследования сывороток крови этих и остальных животных данного стада (отары). Практический опыт показыват, что комплекс дополнительных исследований в большинстве случаев позволяет подтвердить или исключить наличие бруцеллезной инфекции в хозяйстве (на ферме). Однако при этом нередко требуются значительные затраты рабочей силы, времени и материальных средств на проведение ограничительных мероприятий и для окончательного уточнения диагноза. В связи с этим быстрое выявление и искоренение возникшего очага бруцеллезной инфекции, а также недопущение неоправданного убоя скомпрометированных групп скота при выявлении гетероспецифических серологических реакций с бруцеллезными диагностикумами имеют большую эпизоотологическую и экономическую значимость.
Я, правда, на вашей стороне. Но обращу Ваше внимание на следующее. Ветеринары правы, инструкция есть уже давно другая. Можете посмотреть ее на этом же сайте http://www.fsvps.ru/fsvps/laws/168.html#5
Повторные анализы проводятся при получении условно-положительного результата (сомнительного). Да и в «рекомендациях», которые Вы приводите, указано, что титр не должен превышать 1:100. А у Вас 1:200. Это много, для возможной ошибки. Криворуких в лабораториях много, но не все же? Вы можете обратиться лично в любую другую лабораторию и сделать у них независимый анализ (РА, РИД). Втихаря. Никто запретить не сможет. Если ничего не случится. Что касается околоплодных вод и т.п., то тут, мне видится так: если коза больна, то родов не будет. Будет аборт. А если родит, то — здорова. Плоды и прочее, по условиям карантина Вы никуда вывезти не сможете. Это уже подсудное дело. Почему перестраховка? Почитайте внимательно про энту болячку, встаньте на их место и ответьте — будете ли вы рисковать своим (и чужим) здоровьем и работой ради какой-то чужой козы? Или даже не ради козы, а просто?
Что касается источника болезни, то тут много путей. Я ж не знаю всей истории Вашей козы и стада. Кто крыл, кто роги пилил и чем. Вам должно быть видней. Но, как правило, когда садишься и спокойно анализируешь, находится причина, о которой даже подумать бывает странно. Увы. Ну не спроста ж Вы не единственный случай оказался.
Кровь можно взять в вакуумные пробирки, сыворотку тоже можно отделить, соблюдая правила. А по поводу плодных оболочек. После убоя все равно ветсанэксперт будет разделывать тушу, брать пат материал, ту же матку, плоды для бак исследования. И также я их повезу для исследования и за свои деньги. А так я еще б и ПЦР сделала. В чем разница? Почему нельзя сделать при жизни? А насчет риска, ветеринар — это такая работа. Знаешь на что идешь.
Вот как то, так. Не подумайте, что нападаю, просто вопросов больше чем ответов. Все очень неоднозначно.
Тест-системы должны быть чистыми. А что касается «бактериологических исследований», то, как мне известно, их нигде не делают! Ввиду большой опасности для персонала. Исключением, видимо, являются НИИ.
Да все можно. Согласен. Найдите ветеринара, любого, скажите ему про диагноз (обязательно!!) и попросите взять анализы Никаких проблем. Ветсанэксперт — это не Вы, он имеет на это полномочия. Ну и сделайте ПЦР. Кстати, исследования на бруцеллез при возникновении очага проводятся за счет государства. И ПЦР они могут сами сделать.
Да, на всякий случай, есть еще Наставления по бруцеллезу от 2003 года (вроде). Там ПЦР считается абсолютно достоверной при однократном исследовании. Правда, есть оговорка, что ее используют для уточнения серологии. И, опять же, не по крови! Хотя, вру, там кажется не уточняется.
А в целом так — если Вы абсолютно уверены, что коза здорова, то делайте независимый анализ. Если будет отрицательным — то бейтесь с управлением.
Это сообщение было редактировано 1 раз. Последнее обновление произошло в 17/12/2015 15:34:25
Наверное,я сделаю запрос в Департамент ветеринарии, о том какие нормативные документы действительны. Если инструкция недействительна, почему ее мне зачитывал заместитель в департаменте ветеринарии? Чтоб не быть голословной и не основываться на том, чего нет. А бак исследования делают во всех лаборатория, сколько обзвонила, никто не отказал. Не имею права самостоятельно взять, кровь должен брать вет врач, составить сопроводительную., подтвердить этим, что взято от конкретного животного. Может я совсем от другого могу взять. Это типа защита от подлога.
Они от забитых животных патматериал не взяли, не то что ПЦР сделали.
А про Наставление они вообще слышать не хотят, это для лабораторий типа только. А там.
1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных. Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. (Я писала об этом ветврачам, им пофиг, они не руководствуются наставлением)
4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации
Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сывороткой крови крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов и лошадей, не иммунизированных или иммунизированных неагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), содержащей 200 ME антител и выше; овец и коз — 100 ME и выше; оленей (маралов) и собак — 50 ME и выше; пушных зверей и морских свинок — 10 ME и выше.
При выявлении среди не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, а также иммунизированных неагглютиногенными вакцинами крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей, животных, реагирующих только в РА с содержанием антител 50-100 ME, а среди овец, коз, оленей (маралов), собак — 25 ME, считают сомнительно реагирующими и исследуют повторно через 15-30 сут. При повышении титров заболевание считают установленным. При сохранении титров на прежнем уровне проводят дополнительные исследования по дифференциации, согласно утвержденным методам.
При выявлении в стадах крупного рогатого скота, ранее иммунизированного против бруцеллеза агглютиногенными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), животных, реагирующих только в РА с содержанием не выше 200 ME антител и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1:10, их повторно исследуют через 15-30 сут в РА, РСК и РИД. При повышении содержания антител в исследуемых сыворотках в РА и (или) РСК или положительной РИД заболевание считают установленным. При выявлении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, ранее не иммунизированных или иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, животных, положительно реагирующих в РА с содержанием 100 ME антител и выше, признают больными. Реакцию считают сомнительной при содержании 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительного результата животных признают больными бруцеллезом.
При исследовании в РА неиммунизированных баранов-производителей, козлов, пробников и ярок, содержащихся в благополучных по бруцеллезу отарах, где овцы (козы) иммунизированы против бруцеллеза, реакцию считают положительной, а заболевание установленным при содержании в сыворотке крови животных 100 ME антител и выше. Реакцию считают сомнительной при наличии 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительных результатов животных признают здоровыми, а отару — благополучной по бруцеллезу.
ВИдите, есть понятие положительное и больное. Под какой пункт подпадает мой случай и написано диагноз считают установленным? По реакции РА в благополучном хозяйстве нельзя поставить диагноз бруцеллез.
5.1. Тест-система предназначена для выявления ДНК бактерий рода Brucella (B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis) в биологическом материале от животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, в случае аборта или проявления у них других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты), вызывающих подозрение на бруцеллез, и (или) при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования. (Ага, вуаля?) 5.2.3. Для исследования используют следующий патматериал: — содержимое брюшной полости и желудка, селезенку, печень абортированного плода или весь плод; — плаценту и плодовые оболочки от абортировавших животных; — содержимое бурс, гигром; — кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных,в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела; — сперму от самцов с признаками орхита и эпидидимита и (или) при получении сомнительных или положительных результатов аллергического или серологического исследования на бруцеллез или инфекционный эпидидимит баранов; — в случае убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками. 5.6. Оценка результатов При положительном результате ПЦР, зарегистрированном при исследовании хотя бы одной пробы материала, животное считают больным бруцеллезом.
Нигде не написано, что ПЦР является неинформативной.
Я не знаю каков механизм этого независимого анализа. К кому обратится? Что делать? Вот и предлагаю в качестве анализа взять патматериал во время родов, а они Я ж не понимаю каков механизм этого всего. Вот сюда и написала, может что подскажут. Спасибо, за проявленный Вами интерес.
Сделайте, конечно, запрос. Посмотрим, что ответят дней через 30. В данном случае, не так важна последовательность действий по инструкции, как полученный результат. Уверен, там все объяснят. Я б тоже мог, времени нет Да и не так это важно. Про бак исследования — вы уверены, что именно бактериологические, а не бактериоскопические на бруцеллез? Имеете ВЫ ПРАВО, если хотите, уверены в своей правоте и не боитесь!! Я взял, отвез в другую лабораторию, получил отрицательный результат. УБЕДИЛСЯ, что я прав!! И после этого, заставил провести повторные официальные исследования. Чуть до драки не дошло. Но я победил. Они ошиблись. Но у вас тут немного другая ситуация.
И, еще раз, Вы имеете дело не с ветврачами, а с ветинспекторами Департамента. Наверняка. Это уже не дело ветврачей СББЖ. От них уже ничего не зависит.
Аннв М. wrote: А про Наставление они вообще слышать не хотят, это для лабораторий типа только. А там.
1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных. Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию. (Я писала об этом ветврачам, им пофиг, они не руководствуются наставлением)
А тут, что не понятно? Я ж Вам уже пояснил, что в крови бруцелла находится только во время острой фазы — аборт и др. клинические признаки!!
Аннв М. wrote: 4.2.5. Диагностическая оценка реакции агглютинации
Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сывороткой крови крупного рогатого скота (буйволов, яков, зебу), верблюдов и лошадей, не иммунизированных или иммунизированных неагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), содержащей 200 ME антител и выше; овец и коз — 100 ME и выше; оленей (маралов) и собак — 50 ME и выше; пушных зверей и морских свинок — 10 ME и выше.
При выявлении среди не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, а также иммунизированных неагглютиногенными вакцинами крупного рогатого скота, верблюдов и лошадей, животных, реагирующих только в РА с содержанием антител 50-100 ME, а среди овец, коз, оленей (маралов), собак — 25 ME, считают сомнительно реагирующими и исследуют повторно через 15-30 сут. При повышении титров заболевание считают установленным. При сохранении титров на прежнем уровне проводят дополнительные исследования по дифференциации, согласно утвержденным методам.
При выявлении в стадах крупного рогатого скота, ранее иммунизированного против бруцеллеза агглютиногенными вакцинами (см. Прил. N 2, п.7), животных, реагирующих только в РА с содержанием не выше 200 ME антител и РСК в разведении сыворотки крови не выше 1:10, их повторно исследуют через 15-30 сут в РА, РСК и РИД. При повышении содержания антител в исследуемых сыворотках в РА и (или) РСК или положительной РИД заболевание считают установленным. При выявлении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, ранее не иммунизированных или иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, животных, положительно реагирующих в РА с содержанием 100 ME антител и выше, признают больными. Реакцию считают сомнительной при содержании 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительного результата животных признают больными бруцеллезом.
При исследовании в РА неиммунизированных баранов-производителей, козлов, пробников и ярок, содержащихся в благополучных по бруцеллезу отарах, где овцы (козы) иммунизированы против бруцеллеза, реакцию считают положительной, а заболевание установленным при содержании в сыворотке крови животных 100 ME антител и выше. Реакцию считают сомнительной при наличии 50 ME антител. Сыворотки крови от таких животных через 15-30 сут исследуют повторно. При получении вновь сомнительных результатов животных признают здоровыми, а отару — благополучной по бруцеллезу.
ВИдите, есть понятие положительное и больное. Под какой пункт подпадает мой случай и написано диагноз считают установленным? По реакции РА в благополучном хозяйстве нельзя поставить диагноз бруцеллез.
А что с такими животными делают?
Есть понятие сомнительное и положительное. А вот положительное=больное. Увы. По РА ставится всегда.
Аннв М. wrote: 5. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА
5.1. Тест-система предназначена для выявления ДНК бактерий рода Brucella (B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis) в биологическом материале от животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, в случае аборта или проявления у них других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты), вызывающих подозрение на бруцеллез, и (или) при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования. (Ага, вуаля?) 5.2.3. Для исследования используют следующий патматериал: — содержимое брюшной полости и желудка, селезенку, печень абортированного плода или весь плод; — плаценту и плодовые оболочки от абортировавших животных; — содержимое бурс, гигром; — кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных,в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела; — сперму от самцов с признаками орхита и эпидидимита и (или) при получении сомнительных или положительных результатов аллергического или серологического исследования на бруцеллез или инфекционный эпидидимит баранов; — в случае убоя животных для исследования отбирают парные лимфатические узлы подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые и кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенка); от самцов с признаками орхита или эпидидимита отбирают семенники с придатками. 5.6. Оценка результатов При положительном результате ПЦР, зарегистрированном при исследовании хотя бы одной пробы материала, животное считают больным бруцеллезом.
Нигде не написано, что ПЦР является неинформативной.
А где я утверждал обратное? Она очень даже информативна. Но Вы еще раз внимательно прочтите, на чем она делается.
— кровь и молоко от абортировавших
И еще, она информативна, только при положительном результате. Отрицательный, по указанным причинам, нет.
Я не знаю каков механизм этого независимого анализа. К кому обратится? Что делать? Вот и предлагаю в качестве анализа взять патматериал во время родов, а они Я ж не понимаю каков механизм этого всего. Вот сюда и написала, может что подскажут. Спасибо, за проявленный Вами интерес.
У вас, что частных ветклиник и других лабораторий нет? Паспорт там не спрашивают.
Проблема не только в ветврачах, ближайшая лаборатория, поставившая диагноз в 500км, другая -филиал- отказалась, они поддерживают старших, 250 км. Другая ближайшая уже в 1200км. Я возила на ПЦР в Новосиб на самолете, влетело в 20тыс., куда пробы не пронесешь без гарантийного письма, на офиц. бланке. А сыворотку на серологию наши тогда отказались взять. А я, дурочка, думала все официально через них решить.
Вот что-то все так передергивают, дословно «кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных, в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела; » Нигде ни в одной инструкции не написано, что животное положительно прореагировавшее в РА считается больным, кроме как в неблагополучном хозяйстве, где уже выделен возбудитель бруцеллеза или есть клин признаки. Все документы достаточно вольно трактуются, а на вопрос покажите конкретный документ, никто ничего не может.
Ветинспекторы пока приостановили мои все документы, до выяснения всего ветврачами. Ограничения, естественно пока остаются. Как они сказали, что всего лишь надзорный орган, чтоб я и ветслужба выполнили свои обязанности.
Проблема не только в ветврачах, ближайшая лаборатория, поставившая диагноз в 500км, другая -филиал- отказалась, они поддерживают старших, 250 км. Другая ближайшая уже в 1200км. Я возила на ПЦР в Новосиб на самолете, влетело в 20тыс., куда пробы не пронесешь без гарантийного письма, на офиц. бланке. А сыворотку на серологию наши тогда отказались взять. А я, дурочка, думала все официально через них решить.
Вот что-то все так передергивают, дословно «кровь и молоко от абортировавших животных и (или) от животных, в сыворотке которых обнаружены агглютинины и (или) комплементсвязывающие антитела; » Нигде ни в одной инструкции не написано, что животное положительно прореагировавшее в РА считается больным, кроме как в неблагополучном хозяйстве, где уже выделен возбудитель бруцеллеза или есть клин признаки. Все документы достаточно вольно трактуются, а на вопрос покажите конкретный документ, никто ничего не может.
Ветинспекторы пока приостановили мои все документы, до выяснения всего ветврачами. Ограничения, естественно пока остаются. Как они сказали, что всего лишь надзорный орган, чтоб я и ветслужба выполнили свои обязанности.
Запомните, к сожалению, Вы одни со своим горем. Им всем глубоко наср. Они не понимают весь ужас, шок и растерянность, которую испытывают люди, случайно, впервые столкнувшиеся со страшным диагнозом. И никогда не сталкивавшиеся с этой системой! Вам повезло, что они еще и не все стадо захотели умертвить, включая хозяев. А общаться с Вами они будут так, как будто это Вы специально заразили и собираетесь еще и весь регион! Они не понимают, что Вы потерпевшие. Еще и штраф на вас попытаются наложить. Они будут действовать в соответствии с инструкциями по оздоровлению очага. И защищать свои тохес. К сожалению, все это переписанное с предыдущего старья. Ничего нового, в нашей стране, за последние 25 лет не придумали. Придумка — требует вложений в науку. А это очень много денег при очень не близком результате. А у нас все надо здесь и сейчас. Поэтому, по старинке, считают, что лучше все уничтожить и точка! Это ж еще и дешевле. И зарубежный опыт не нужен, он не соответствует действующему законодательству. Они еще, при любых раскладах, к вам с дезинфекцией придут. Не мытьем, так катаньем. Ошибка — сразу со своей стороны все делать официально. Инструкции — против этого. Но, надо признать, что мелитензис — это действительно опасно! Расстояния впечатляют. Но, повторю, если Вы уверены в правоте и чистоте — требуйте. Резко взять и нагнуть Вас без суда и полиции они не смогут. Частная собственность, однака! Как ни смешно. Про трактовки — какое законодательство, такие и трактовки. Но, фиг с ним, с законодательством, посмотрите просто про биологию болячки. И примите решение. Ошибки в лабораториях бывают. Но, меня смущает титр. Мы, в нашей ситуации (она немного другая была) просмотрели все, даже с Аргентиной связались (штаты и европа само собой) и потом приняли решение. И победили.
Это сообщение было редактировано 1 раз. Последнее обновление произошло в 17/12/2015 22:04:00
источник
Определить это заболевание – непростая задача. Очень часто при вяло протекающих симптомах врачи могут спутать бруцеллез с раком, лейкозом, различными инфекциями. Большое значение имеют эпидемиологический анамнез и клиническая картина.
Анализ на обнаружение бруцеллеза.
Когда человек сталкивается с домашним рогатым скотом, то возникает большая вероятность заболевания бруцеллезом.
Основываясь на симптомах, нельзя с точностью подтвердить правдивость диагноза. Для того чтобы наверняка удостовериться в диагнозе, используются аллергологический, бактериологический и серологический анализы. Также актуальны стандартные анализы на бруцеллез, с использованием крови, мочи, пункции лимфатических узлов, суставной жидкости.
Бактериальное исследование имеет значительную отрицательную сторону – очень медленный рост бруцелл на питательных средах. Колонии вызревают лишь через 20–30 дней, что осложняет и замедляет диагностирование бруцеллеза. Такой анализ делать очень долго, поэтому сейчас актуально использовать серологические методы.
Для того чтобы убедиться, что у вас бруцеллез, необходимо провести следующие анализы. Важную информацию дает анализ крови на бруцеллез. Ее можно сдать практически в любом медицинском учреждении.
Биохимический анализ крови.
Сначала делают стандартный набор исследований:
Общий анализ крови. В ней нужно определить содержание лейкоцитов. Если показатель повышен, это означает, что в организме присутствует воспалительный процесс. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) ускоряется, но не намного. Запущенная стадия заболевания приводит к понижению показателей всех элементов крови.
Общий анализ мочи. Здесь необходимо определить, присутствует ли белок в моче, и в каких количествах. Для этого следует повторять такой анализ мочи несколько раз.
Биохимический анализ крови. Здесь анализируют уровни печеночного цитолиза (АлАТ, АсАТ), если эти показатели становятся выше нормы, то это говорит о гипербилирубинемии, снижается уровень альбуминов (гипоальбуминемия), при этом общий белок остается на нормальном уровне.
Чтобы определить возбудителя заболевания, применяют следующие методы.
Он дает практически 100% достоверный результат.
Однако этот метод отличается сложностью и длительностью. В качестве биологического материала используются кровь, моча, спинномозговая, внутрисуставная жидкость, желчь, а также проба из лимфатических узлов. Эти жидкости засевают на питательные среды и ждут роста микроорганизмов. Длительность этого метода составляет чуть меньше месяца, а порой и целый месяц, все зависит от роста колониальных бруцелл.
Это самый популярный анализ для определения бруцеллеза. Результаты можно узнать уже через неделю. Принцип заключается в нахождении иммуноглобулинов (антител) в сыворотке к бруцеллезным антигенам. По их классу можно определить продолжительность и скорость процесса. Для определения используют реакции Райта и Хеддельсона.
Бруцеллы убивают при помощи нагревания, и эта взвесь реагирует с сывороткой крови пациента. Если в процессе реакции бруцеллы склеиваются в маленькие шарики и оседают – это означает, что в сыворотке содержатся антитела и, значит, человек действительно болеет бруцеллезом. При отрицательной реакции заболевание не диагностируется. Этот метод хорош тем, что уже на ранних стадиях заболевания он может дать положительный результат. При помощи такой реакции находят бруцеллез не только у человека, но и у животных.
Она не дает такого достоверного результата. Здесь агглютинация делается на стекле. Часто эта реакция дает ложный результат.
Его проводят для обнаружения антител, которые атакуют эритроциты.
Для обнаружения бруцеллеза используется прямая реакция. Эта реакция различает антитела, которые напрямую связаны с эритроцитами. Если антиглобулиновый тест показывает отрицательный результат, значит, кровь чистая, и антител нет. Положительный результат означает появление антител, которые активно борются с эритроцитами.
ПЦР-диагностика основывается на обнаружении ДНК-цепей бруцелл из биологического материла пациента. Для этого материал обеззараживают, добавляя метиолят натрия в концентрации 0,01% с дальнейшим прогреванием в течение получаса. Когда завершится инкубирование в лизирующем растворе, который содержит все необходимые реагенты для экстракции ДНК при поддержании температуры 66 °С на протяжении 10–15 минут, биологическая ткань обезвреживается.
ПЦР-диагностика на обнаружении ДНК-цепей бруцелл.
Этот анализ особенно приемлем в том плане, что можно использовать абсолютно любую биологическую ткань пациента.
К одним из популярных методов относится реакция Бюрне. Она основана на введении внутрикожно бруцеллина. Если есть бруцеллез, то на месте укола начинается покраснение и небольшая пастозность. Именно этот участок и оценивается как аллергологическая проба Бюрне. Пятно измеряют и делают заключение: если пятно превышает 6 сантиметров, то реакция считается положительной.
Такая проба действительна, когда бруцеллез в хронической форме. Также необходимо учитывать и тот факт, что положительная реакция может возникнуть у людей, которые проходили вакцинирование по профилактике бруцеллеза.
источник
Выявление возбудителей бруцеллёза (Brucella spp), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в моче, синовиальной жидкости, грудном молоке или образце ткани.
Brucella spp, DNA [Polymerase chain reaction] (urine, synovial fluid, breast milk, tissue sample), B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. canis.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Биоптат, грудное молоко, первую порцию утренней мочи, синовиальную жидкость.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Brucella spp – это грамотрицательные аэробные коккобациллы, являющиеся внутриклеточными паразитами человека и животных и вызывающие бруцеллёз. Они попадают в организм при употреблении сырого козьего молока и при непосредственном контакте с инфицированными тканями животных (как у ветеринаров, работников мясной промышленности, сотрудников микробиологических лабораторий). Наибольшее значение в клинике инфекционных болезней человека имеет 4 вида Brucella: B. melitensis, B. abortus, B. suis и B. canis, при этом на долю B. melitensis приходится подавляющее большинство случаев заражения. Бруцеллёз, вызванный различными видами Brucella, протекает и лечится одинаково, поэтому с клинической точки зрения нет необходимости определять видовую принадлежность возбудителя.
Бруцеллёз представляет собой системный инфекционный процесс, при котором поражаются практически все органы. Наиболее часто микроорганизм удаётся обнаружить в крови, однако другие биологические среды (моча, синовиальная жидкость) и фрагменты тканей (биоптат) также могут быть использованы для диагностики бруцеллёза. Несмотря на то что бруцеллёз считается зоонозной инфекцией, описаны случаи передачи микроорганизма от человека к человеку, в том числе случаи заражения младенцев при употреблении грудного молока больной матери. Его могут исследовать на бруцеллёз, чтобы установить источник заражения и не допустить реинфекции.
Диагностика бруцеллёза – достаточно сложная задача. Заболевание не имеет каких-либо специфических признаков, а также может протекать в бессимптомной, хронической и локализованной форме. Поэтому диагностика основана на лабораторном выявлении микроорганизма. Существует несколько способов идентификации Brucella: посев на питательную среду, серологические методы и исследование с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР – это метод молекулярной диагностики, позволяющий обнаруживать в биологическом материале (например, в моче) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. Для диагностики бруцеллёза исследование с помощью ПЦР используют сравнительно недавно, однако, благодаря его преимуществам, метод находит всё большее применение в клинической практике.
Около 20-40 % случаев бруцеллёза – это локализованные формы заболевания, характеризующиеся изолированным поражением какого-либо органа, наиболее часто это орган мочеполовой, нервной системы, сердце, а также поражение сустава. Как правило, локализованный бруцеллёз – это последствие нераспознанной ранее остросептической формы. Чувствительность бактериологического метода («золотого стандарта» идентификации Brucella) при исследовании большинства биологических жидкостей не превышает 40 %. В такой ситуации ПЦР является хорошей альтернативой посеву на питательную среду: её чувствительность составляет 97-98 %. В некоторых случаях положительный результат исследования с помощью ПЦР может оказаться достаточным диагностическим критерием даже при отрицательном результате бактериологического посева и серологических тестов.
ПЦР основана на выявлении уникального для представителей рода Brucella фрагмента ДНК (гена bcsp31) и поэтому характеризуется очень высокой специфичностью. Для сравнения: большинство серологических методов выявляют антитела к общему для многих микроорганизмов липоолигосахариду, и их результаты могут быть ложноположительными при наличии инфекции Yersinia enterocolitica O:9, Salmonella urbana group N, Francisellatularensis, EscherichiacoliO:157, Stenotrophomonas maltophilia и некоторых других микроорганизмов.
Благодаря высокой специфичности положительный результат исследования с помощью ПЦР у пациента с признаками заболевания позволяет подтвердить диагноз. С другой стороны, случайно выявленный положительный результат у пациента без каких-либо жалоб и симптомов требует дальнейшего, более полного клинического и лабораторного обследования.
Для чего используется исследование?
Для диагностики остросептической, хронической и локализованных форм бруцеллёза, а также рецидива заболевания.
Когда назначается исследование?
При симптомах бруцеллёза (остросептической формы): высокой лихорадке с температурой 39-40 °С и выше (особенно при колебаниях температуры), ознобе, потливости, слабости, миалгии, артралгии или артрите.
При обследовании пациента с изолированным поражением мочеполовой системы и суставов при наличии в анамнезе указаний на употребление сырого козьего молока, особенно в эндемичных по бруцеллёзу районах, и профессиональных особенностей (как у ветеринаров, работников молочной и мясной промышленности).
При подозрении на бруцеллёз у новорождённого.
Референсные значения: отрицательно.
Причины положительного результата:
бруцеллёз;
туберкулёз с поражением костно-суставной системы.
Причины отрицательного результата:
отсутствие бруцеллёза;
неправильное взятие биоматериала на исследование.
Что может влиять на результат?
Туберкулёз костно-суставной системы может приводить к ложноположительному результату.
Применение доксициклина, рифампицина, ципрофлоксацина и других фторхинолонов способствует ложноотрицательному результату.
Результат исследования следует оценивать с учётом дополнительных анамнестических, лабораторных и инструментальных данных.
Кто назначает исследование?
Инфекционист, уролог, хирург, невролог, врач общей практики.
Al Dahouk S, Nöckler K. Implications of laboratory diagnosis on brucellosis therapy. Expert Rev Anti Infect Ther. 2011 Jul;9(7):833-45.
Yu WL, Nielsen K. Review of detection of Brucella spp. by polymerase chain reaction. Croat Med J. 2010 Aug;51(4):306-13. Review.
Morata P, Queipo-Ortuño MI, Reguera JM, Miralles F, Lopez-Gonzalez JJ, Colmenero JD. Diagnostic yield of a PCR assay in focal complications of brucellosis. J Clin Microbiol. 2001 Oct;39(10):3743-6.
Nimri LF. Diagnosis of recent and relapsed cases of human brucellosis by PCR assay. BMC Infect Dis. 2003 Apr 28;3:5.
Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed
источник
Бруцеллы (род Brucella) – возбудители бруцеллеза человека и животных. В. melitensis, В. abortus и В. suis – вызывают заболевание у человека; B. ovis, B. canis, B. neotomae заболевания человека не вызывают.
Морфология, физиология. Мелкие Гр– коккобактерии размером 0,5-0,7х0,6-1,5 мкм. Также могут быть палочковидной формы; в мазках обычно расположены беспорядочно. Жгутиков не имеют. Спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу при культивировании на средах, содержащих 10% иммунной сыворотки барана или лошади, а также при выращивании на куриных эмбрионах.
Требовательны к питательным средам. Для выращивания обычно применяют триптозный, триптозо-казеиново-соевый и кровяной (5% овечьей крови) агары; оптимальная среда для культивирования — печёночный агар Хеддльсона. Выделяемые из организма больных они размножаются очень медленно, рост может быть обнаружен только через 1–3 недели после посева исходного материала. Многократное пересевание в лабораторных условиях делает культуры способными расти в течение 1–2 дней. На плотных питательных средах образуют мелкие, выпуклые, бесцветные с перламутровым блеском колонии S-формы (жемчужины), легко переходят в мукоидную и шероховатую. В жидких средах возникает равномерное помутнение. Под влиянием антибиотиков образуют L-формы.
Бруцеллы строгие аэробы, а В. abortus в первых поколениях требует увеличенной концентрации (5–10%) СО2.
БХ: расщепляют глюкозу и некоторые другие углеводы, разлагать мочевину и аспарагин, гидролизовать белок, пептоны, аминокислоты, выделять каталазу, гиалуронидазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу и другие ферменты. Внутри видов бруцелл различают биовары. Их дифференциация основана как на биохимических различиях, так и на способности расти на средах с фуксином и тионином, лизабельности фагом Т6, агглютинабельности моноспецифическими сыворотками.
АГ. Содержат поверхностно расположенный Vi-АГ и соматические видоспецифические АГ А и М, количественное соотношение которых различно у разных видов. У В.melitensis преобладают М-АГы. у В. abortus и В. suis – А-АГ. Для идентификации бруцелл по антигенным свойствам используют реакцию адсорбции агглютининов или монорецепторные сыворотки.
Экология и распространение. Зоонозная инфекция. Возбудители разных видов циркулируют среди животных, от которых заражаются и люди. В.melitensis вызывает заболевания мелкого рогатого скота, В. abortus – КРС, В.suis – свиней. Непатогенные для человека
Бруцеллы устойчивы к действию факторов окружающей среды. Они длительно сохраняют жизнеспособность при низкой температуре. В почве, моче, испражнениях животных, больных бруцеллезом, в навозе, сенной трухе возбудители выживают 4–5 мес., в шерсти– 3– 4 мес., в пыли – 1 мес., в замороженном мясе – до 5 мес. К высокой температуре и дезинфицирующим веществам бруцеллы высокочувствительны: при 60°С погибают за 30 мин, при кипячении – мгновенно. Все дезинфектанты губят бруцелл в течение нескольких минут.
Патогенность и патогенез. Проникновение – алиментарным, контактным и воздушно-капельным путями. Алиментарный путь заражения связан с употреблением в пищу продуктов животноводства (масла, молока, мяса), полученных от больных животных. Контактным путем заражаются чаще ветеринары, зоотехники, работники мясокомбинатов при уходе за больными животными, обработке сырья. Заражение возможно при работе с инфицированной шерстью, ветошью, когда имеет место распыление, попадание бруцелл в воздух. Для человека наиболее патогенными являются В.melitensis – возбудитель болезни мелкого рогатого скота (овец, коз).
Выраженные инвазивные и агрессивные свойства бруцелл обусловливают способность возбудителя проникать в организм через неповрежденные слизистые оболочки. После проникновения в организм распространяются лимфогенным путем, попадают в кровь, а из крови – в селезенку, костный мозг, лимфоузлы, где, локализуясь внутриклеточно, могут длительно сохраняться.
Болезнетворность бруцелл определяется действием эндотоксина. Выделяющиеся ферменты (гиалуронидаза и др.) способствуют распространению микробов в тканях. В патогенезе бруцеллеза имеет значение способность возбудителя размножаться в клетках лимфоидно-макрофагальной системы.
С первых дней болезни возникает реакций ГЗТ, которая сохраняется в течение всей болезни и длительное время после выздоровления.
Иммунитет. В основе иммунитета при бруцеллезе лежит активность системы Т-лимфоцитов. Важную роль играет фагоцитоз и состояние аллергии. Обезвреживание бруцелл происходит при участии антител – опсонинов, агглютининов.
Лабораторная диагностика. Проводится бактериологическим и серологическим методами. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, испражнения и моча больных, иногда – спинномозговая жидкость. Выделением возбудителя занимается специальная режимная лаборатория.
Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО. Через 4-5 сут наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина; среда остаётся слегка мутной или прозрачной. После пересева на твёрдые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации.
Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) — один из основных методов диагностики бруцеллёза. Динамика реакции может быть различной, для неё характерно колебание титров в течение суток; положительная реакция с первого дня заболевания; наиболее высокие титры отмечают через 1-2 мес. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя); в эндемичных очагах, вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг. Следует помнить, что для реакции Райта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и чёткое её проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона). В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного. Выявление неполных AT (реакция Кумбса) с применением антиглобулиновой сыворотки. Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 мес заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) — протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований; бывает положительной после вакцинации.
Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.
Профилактика и лечение. Общие и специфические мероприятия ветеринарной службы. Выявляют и ликвидируют бруцеллез среди сельскохозяйственных животных, обезвреживают продукты и сырье животного происхождения. Людей, подвергающихся опасности заражения, вакцинируют живой бруцеллезной вакциной. Лечение бруцеллёза затруднено внутриклеточным паразитизмом бруцелл, что защищает их от действия антимикробных препаратов и AT. Препаратами выбора считают тетрациклин и стрептомицин. В тяжёлых и упорных случаях можно назначить рифампин (рифамицин). Смертность без лечения может достигать 5-10%.
Анализ на обнаружение бруцеллеза.