Прививки от бруцеллеза для скота

Автор: Шубина Е. А., технолог, кандидат биологических наук, ФГУП «Щелковский биокомбинат»

Опубликовано: 14 февраля 2011

Бруцеллез (Brucellosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечения, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства.

Сообщение об этом заболевании, по данным Хаджеса (1897), встречается уже у древнегреческого врача Гиппократа. Первое научное описание бруцеллеза было сделано в 1861 году английским военным врачом Мэрстоном. Широкое распространение среди людей отмечалось в 18 и 19 веках в странах, расположенных в бассейне Средиземного моря.

Изучая причины мальтийской лихорадки, английский врач Д. Брюс в 1886 – 1887 гг. установил, что виновником ее является специфический микрококк, названный им Micrococcus melitensis. Дальнейшие исследования показали, что источником возбудителя мальтийской лихорадки являются козы, пораженные инфекцией, а причиной заражения людей — потребление молока от таких коз. Несколько позже Micrococcus melitensis был выделен у овец.

В1897 г. датские ученые Банг и Стриболд установили, что массовые аборты у коров вызывает микроорганизм, названные B. abortus bovis. В 1914 г. Траум обнаружил очень сходный микроорганизм, названный Br. abortus suis, при массовых абортах у свиней.

Для диагностики бруцеллеза в 1897 г. Райтом была предложена серологическая реакция агглютинации, а в 1922 г. Берне разработал внутрикожную аллергическую пробу, облегчающую распознавание болезни.

Долгое время мальтийская лихорадка у людей и массовые аборты у домашних животных считались самостоятельными заболеваниями. В 1918 – 1920 гг. Ивенс, Мейер и Фезье, изучая биологические свойства возбудителя мальтийской лихорадки и массовых абортов у крупного рогатого скота, обнаружили их чрезвычайную близость. Эти исследования явились основанием объединить указанных возбудителей, в том числе и возбудителя массовых абортов у свиней, в одну родовую группу под наименованием Brucella (в честь Брюса), а вызываемые ими заболевания именовать бруцеллезом.

В России начало изучения бруцеллеза было положено работами Е. И. Марциновского (1911), но детальному изучению заболевание подверглось в различных местностях СССР лишь с 1935 г. Большой вклад в изучение бруцеллеза сельскохозяйственных животных внесли отечественные ученые: С. Н. Вышелесский, П. Ф. Здродовский, П. А. Вершилова, М. К. Юсковец, Е. С. Орлов, Р. А. Цион, А. П. Бессонов и др. Были всесторонне изучены биологические свойства возбудителя, усовершенствованы методы диагностики, показаны значение в борьбе с бруцеллезом вакцинальной профилактики и пути ее совершенствования.

Клинические признаки бруцеллеза у крупного рогатого скота

Длительность инкубационного периода 2 – 3 недели. Первым показателем развившегося инфекционного процесса служит появление в крови инфицированных животных агглютининов в постепенно нарастающих титрах.

У коров основным клиническим признаком бруцеллеза является аборт и реже рождение нежизнеспособного приплода. Коровы, заразившиеся до покрытия, в большинстве случаев приносят нормальный приплод. Аборт чаще всего происходит на 5 – 8-м месяце. За 1 – 2 дня до наступления аборта у коров отмечается припухание наружных половых органов, выделение из влагалища бесцветной или буроватой жидкости и набухание вымени. После аборта происходит задержка последа и развивается эндометрит, сопровождающийся обильными слизисто-гнойными или гнойно-фибринозными выделениями. При тяжело протекающем эндометрите повышается температура тела, снижаются удои, отмечается потеря веса, убыстряется СОЭ; умеренный лейкоцитоз. Эндометритам нередко сопутствуют серозные или серозно-катаральные маститы. В процессе могут вовлекаться яичники и фаллопиевы трубы, что приводит к нарушению полового цикла и временному или стойкому бесплодию.

У отдельных животных в связи с абортом или независимо от него можно наблюдать развитие серозных бурситов или серофибринозных артритов. Последние в большинстве случаев возникают в суставах передних конечностей — запястном, путовом, коленном, локтевом. У быков бруцеллез, хотя и редко, сопровождается развитием орхитов и эпидидимитов.

Лабораторная диагностика бруцеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований. Бактериологическое исследование в основном применяют при первичной постановке диагноза на бруцеллез в ранее благополучных хозяйствах.

В лабораторию направляются пробы крови (сыворотки) для серологического исследования, абортивный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей или желудок плода, кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое животных берут паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пораженные суставы, у самцов — семенники. Объектом исследования могут быть молочные продукты (брынза, сыр, масло), объекты внешней среды.

При массовых диагностических исследованиях ставят пробирочную РА, роз бенгал пробу (РА на стекле), РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком (КР). Диагностикумы для этих исследований, а также бруцеллин ВИЭВ для аллергической диагностики готовятся на Щелковском биокомбинате.

Для специфической профилактики бруцеллеза ФГУП «Щелковский биокомбинат» выпускает живые сухие вакцины из штамма B. abortus 19, 82 и 75/79-АВ; инактивированную адъювант — вакцину из штамма B. abortus КВ 17/100.

По данным К. В. Шумилова до 1952 года борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота в нашей стране сводилась к проведению диагностических исследований и удалению из стад больных животных, без применения противобруцеллезных вакцин. В связи с осложнением эпизоотической ситуации в 1953 году в систему противобруцеллезных мероприятий была включена иммунизация животных вакциной из штамма B. abortus 19.

Вакцину из штамма B. abortus 19 применяли до 1970 года. За 20 лет применения вакцины многие хозяйства, даже области, были оздоровлены от болезни. Однако в регионах с широким распространением бруцеллеза эффективность оздоровительных мероприятий оказалась низкой. В первую очередь, это было обусловлено высокой агглютиногенностью вакцины. Агглютинины и комплементсвязывающие антитела, вырабатывающиеся в ответ на введение вакцины, сохраняются в организме животных до 5 – 8 лет и затрудняют дифференциацию иммунизированных животных от больных бруцеллезом.

С 1971 по 1974 год вакцину из штамма B. abortus 19 использовали только на телках 5 – 8 месячного возраста. С 1974 года и по настоящее время в России в комплексе противобруцеллезных мероприятий применяются вакцины из штаммов B. abortus 82 и 19. Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма № 82 отличается от вакцины из штамма 19 слабым серологическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологических реакций дифференцировать вакцинированных животных.

За 30 лет работы с применением вакцины из штамма B. abortus 82 и смены пяти поколений коров к 2004 году (К. В. Шумилов) количество неблагополучных по бруцеллезу пунктов и заболевших животных значительно сократилось.

Сухая живая вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B. abortus 75/79-АВ разработана сотрудниками ВГНКИ и Алтайской НИВС с использованием культуры штамма 75/79, выделенного от коровы, ранее иммунизированной вакциной из штамма B. abortus 82. После многократных пассажей выделенного штамма через организм морских свинок и телок и целенаправленной селекции на питательных средах, был получен новый вакцинный штамм 75/79-АВ. Вакцины не обладает абортогенными свойствами, что дает возможность проводить иммунизацию маточного поголовья независимо от сроков стельности. Вакцина является слабоагглютиногенной; агглютинины и комплементсвязывающие антитела регистрируются у привитых животных в течение трех месяцев после иммунизации, что делает возможным их исследование по истечении указанного срока. У животных, иммунизированных вакциной, выраженный иммунитет сохраняется в течение года, что позволяет за указанный срок оздоравливать неблагополучные хозяйства от бруцеллеза.

Значительный интерес для практики представляет адъювант-вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, сконструированная во ВГНКИ. Вакцина представляет собой эмульсию типа «вода в масле», состоящую из инактивированной культуры штамма B. abortus КВ 17/100 и масляного адъюванта.

Штамм B. abortus КВ 17/100, находящийся в R-форме, получен путем целенаправленной селекции по культуральным, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам из вакцинного штамма B. abortus 104М, находящегося в S-форме. Адъювант-вакцина не индуцирует синтез S-бруцеллезных антител в диагностических титрах у животных, не сенсибилизированных бруцеллами. Адъювант-вакцина индуцирует синтез S-бруцеллезных антител у крупного рогатого скота с латентной формой бруцеллеза, что позволяет за счет быстрого удаления из стад таких животных, ускорить оздоровление хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу.

Адъювант-вакцина не абортогенна и может быть использована для иммунизации маточного поголовья крупного рогатого скота независимо от сроков стельности.

источник

Бруцеллез животных представляет собой серьезную проблему для здравоохранения из-за его высокой патогенности для человека и является одним из самых важных зоонозных заболеваний в мире.

Бруцеллез — это заболевание, которое вызывает значительные экономические потери в секторе животноводства, ока­зывает серьезные последствия для международной торговли животными и продуктами животного происхождения, и согласно Международному эпизоо­тическому бюро подлежит обязательному декларированию.

Эта болезнь свойственна многим регионам мира и отличается высокой степенью заболеваемости, особенно среди незараженного ранее поголовья. Смертность обычно низкая, но распространение происходит очень быстро в тех стадах и регионах, где присутствует это заболевание.

Источниками заражения человека главным образом являются прямой контакт с зараженными животными (заражение оральным или конъюктивальным путем) и употребление молочных продуктов без термической ообработки.

Профилактика и снижение заболеваемости людей бруцеллезом тесно связаны с распространением бруцеллеза среди животных, поэтому очень важно бороться с заболеванием животных для снижения количества инфицированных людей. Наилучшим способом борьбы с проблемой бруцеллеза у животных является профилактика заболевания при использовании живых аттенуированных вакцин.

Род Бруцелла включает в себя несколько видов с различным сродством по отношению к хозяину. Бруцелла — это грамотрицательная коккобактерия и факультативный внутриклеточный патоген, что создает определенные противоречия при создании иммунитета.

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ПОРАЖЕНИЯ

Оральная и конъюктивальная передача являются основными путями заражения, которое в основном происходит после облизывания абортированного плода и после контакта с выделениями или зараженной средой.

Передача половым и дыхательным способом также является одним из путей попадания патогенов в организм животного.

Основными источниками заражения для человека являются прямой контакт с зараженными животными и употребление продуктов питания, особенно молочных, которые не прошли термическую обработку.

Основным признаком бруцеллеза является аборт, который обычно происходит во второй половине беременности животного. Также может иметь место рождение мертвых и ослабленных животных.

Среди других нарушений можно отметить поражения половых органов (удержание плаценты, эпидидимит, метрит, везикулит и т.д.) и суставов (артрит).

АНТИГЕННАЯ СТРУКТУРА И ИММУ­НИТЕТ

Антигенная структура микроорганизма напрямую связана с распознаванием иммунной системой животного и, таким образом, с установлением иммунитета. Помимо прочих компонентов, внеш­няя мембрана бруцеллы имеет липо-полисахариды, состоящие из 2 частей:

• Гликолипидная часть (липид А)
• Полисахаридная часть: содержит ядро и О-боковую цепь (место соединения антител).

Таблица: Виды бруцелл у домашних и продуктивных животных (Библиографический источник: Бруцеллез у животных и людей. WHO-OIE-FAO, 2006)

Штамм, который содержит гликолипидную часть (липид А) и полисахаридную часть (ядро+О-боковая цепь), называется гладким штаммом. И наоборот, если штамм не имеет боковой цепи, то он классифицируется как шероховатый штамм.
Данный аспект является важным для понимания того, что антитела, образованные после вакцинации животных вакциной с шероховатым штаммом (RB51 CZV) без О-боковой цепи, не смогут присоединиться к антигену и, таким образом, не произойдет агглютинации, которая анализируется путем общепринятых серологических тестов.
Заражение бруцеллой вызывает гуморальную реакцию с образованием антител, которая не обеспечивает достаточной защиты против заболевания, но служит для диагностики бруцеллеза при помощи серологических анализов.
Бруцелла — это внутриклеточный патоген, и поэтому для его устранения очень важно вызвать реакцию клеточного типа.

ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ

Из диагностических испытаний, рекомендованных руководством Международного эпизоотического бюро, наилучшим способом массового скрининга является тест Розы бенгала. Тест связывания комплемента рекомендуется для подтверждения заболевания у животных, положительных на Розу бенгала.

Эти серологические методы не позволяют отличать вакцинированных животных от зараженных, поэтому очень важно использовать вакцины-маркеры, которые позволяют избежать обнаружения при помощи этих методов, или же применять вакцины, которые вызывают минимальную стимуляцию гуморального отклика (антитела).
Специфическое лечение животных не рассматривается как способ борьбы с заболеванием по нескольким причинам, среди прочих из-за их стоимости и не недостаточной эффективности.
Полностью доказано, что наилучшим способом борьбы против заболевания является профилактика с помощью вакцинации.

Вакцинация считается наиболее экономичным методом контроля бруцеллеза, главным образом в странах с высокой распространенностью.
Вакцинация является незаменимым инструментом для контроля бруцеллеза и первым шагом для предотвращения распространения и передачи заболевания.

Доступные вакцины против бруцеллеза:
Живые аттенуированные вакцины яв-ляются единственными, получившими международное признание, рекомен-дованными для контроля и искоренения заболевания. Эти вакцины вызывают интенсивный и продолжительный клеточ¬ный иммуннологический ответ, что позволяет осуществлять профилактику бруцеллеза.
Рекомендуемые и общепризнанные вакцины:

• Brucella abortus: CZV B19 и RB51 CZV.
• Brucella melitensis: CZV Rev-1 и Ocurev.

Такие вакцины, как B. melitensis H38, B. melitensis 5 (M5), B abortus 45/20, штамм 82 B. abortus и штамм 2 (S2) B. suis, не рекомендуются Международным эпизоотическим бюро из-за недостаточной эффективности.

Многие исследователи пытались разработать новые виды вакцин (аттенуированные вакцины, субклеточные, вакцины нового поколения и т.д.), но на сегодняшний день единственными вакцинами, способными обеспечить защиту против бруцеллеза, являются живые аттенуированные вакцины.

Обе вакцины, как CZV B19, так и RB51 CZV, рекомендованы Международным эпизоотическим бюро для профилактики бруцеллеза у крупного рогатого скота.

Иммунитет, достигнутый обеими вакцинами, является достаточным для предотвращения заболевания, но отличительной характеристикой является их серологическая реакция. Вакцинация животных вакциной CZV B19 приводит к интенсивной стимуляции гуморального отклика и поэтому вызывает помехи при выполнении общепринятых серологических тестов (Роза бенгала и тест связывания комплемента).

Как было отмечено ранее, вакцина RB51 CZV — это шероховатая вакцина без О-боковой цепи внешней мембраны. Эта модификация позволяет достичь соответствующего уровня защиты и избежать помех при выполнении серологических анализов.

Благодаря этой характеристике, в странах, особенно страдающих от бремени этого заболевания, рекомендуется вакцинация взрослых животных вакциной RB51 CZV, поскольку она не взаимодействует с серологическими тестами. Это позволит обеспечить высокую защиту животных и ускорить контроль бруцеллеза КРС.

Вакцинация для профилактики Brucella melitensis: CZV Rev-1 (подкожное введение) и Ocurev (конъюктивальное введение).

Подкожное введение вызывает стойкую серологическую реакцию, поэтому этот тип введения желательно не использовать в программах по уничтожению, основанных на серологической диагностике. Но в случае конъюктивального введения (вакцина Ocurev) гуморальная реакция получается слабая, что позволяет ускорить программы контроля.

Эти лиофилизированные вакцины имеют одинаковую концентрацию и обеспечивают сильный и продолжительный иммунитет, предотвращающий заражение.

Не рекомендуется использовать зани-женные дозы вакцины Rev-1 в качестве альтернативы стандартной дозе, в первую очередь из-за недостаточной эффективности.
Программы вакцинации:
Программы, основанные исключительно на диагностике и уничтожении, не позволили установить контроль над заболеванием и поэтому в регионах и странах, в которых распространенность заболевания высо¬кая, вакцинация животных является обязательной.
Вакцинация является важным, но не единственным фактором, который необходимо принимать во внимание.

Для того, чтобы программа вакцинации имела успех, необходимо также принимать во внимание следующие факторы

• Происхождение и качество вакцины
• Охват вакцинацией и период вакцинации
• Идентификация животного и контроль за передвижениями.
• Уничтожение позитивных животных и компенсация.
• Система эпидемиологического наблю¬дения.
• Обучение ветеринаров и животноводов.
• Повышение сознательности официальных служб, ветеринаров, животноводов и потребителей.
• Организация государственных вете-ринарных услуг.
• Лаборатории и диагностические методы.
• Меры биобезопасности: контроль поступления животных, карантин, уничтожение источников заражения, уборка, дезинфекция и т.д.

В течение последних лет были разработаны многочисленные стратегии по вакцинации животных, но государственные ветеринарные службы каждой страны должны выбрать именно ту стратегию, которая больше всего подходит к особенностям своей страны, принимая во внимание эпидемиологические факторы, социально-экономические условия, вид животноводства, распространенность и т.д.

Программы вакцинации мелкого рога-того скота против Brucella melitensis:

Применение вакцины Rev-1 является единственным практическим методом для контроля инфекции у мелкого рогатого скота в зонах с высокой распространенностью и экстенсивным методом ведения хозяйства.

Во многих странах были разработаны стратегии вакцинации только лишь молодых животных, но которые, к сожалению, не помогли контролировать бруцеллез. В то же время, введение массовой вакцинации показало быстрое снижение заболеваемости у животных и, как следствие, снижение распространенности бруцеллеза у людей.

В местах с высокой распространенностью рекомендуется массовая вакцинация молодых и взрослых животных, по крайней мере в течение первого года, и последующая вакцинация ремонтного молодняка. Лучше всего, если программа будет рассчитана на 10 лет и, кроме начальной массовой вакцинации, будет предусматривать новые массовые вакцинации в течение этого периода.

В зонах с более низкой распространен-ностью или после снижения уровней начальной распространенности возможна разработка программы, рассчитанной только на вакцинацию новых животных.

Рекомендуется конъюктивальное введение стандартной дозы в качестве единственного метода, обоснованного с точки зрения безопасности и эффективности, для вакцинации всего стада. Конъюктивальное применение является более безопасным, чем подкожная вакцинация, но все равно не до такой степени, чтобы использовать его для беременных самок.

Вакцина Оcurev для конъюктивального введения применяется во многих странах с высокой распространенностью бруцеллеза, в которых идет постепенное вытеснение вакцины Rev-1 для подкожного введения.

Программы вакцинации КРС против Bru-cella abortus:

Как и в случае с Brucella melitensis, стратегия должна разрабатываться государственными ветеринарными службами согласно их требованиям. Полностью продемонстрировано, что вакцинация препаратом CZV B19 и/ или RB51 CZV является единственным способом борьбы с инфекцией, вызванной Brucella abortus, у коров.

На протяжении многих лет вакцина CZV B19 успешно использовалась в программах контроля для вакцинации молодых животных. Главной проблемой применения штамма В19 являются поствакцинные помехи при серологических анализах и случаи ложных позитивных животных. Ревакцинация взрослых животных данной вакциной для укрепления иммунного ответа не допускается.

Разработка вакцины RB51 CZV позволила использовать программы вакцинации, основанные на выявлении и уничтожении (диагностика и убой). В странах или регионах, особенно страдающих от бремени этого заболевания, рекомендуется вакцинация молодых и взрослых животных вакциной RB51 CZV, поскольку она не вызывает помех при серологических анализах.

Программа, основанная на вакцинации молодых животных с помощью RB51 CZV, и ревакцинация взрослых животных позволяет обеспечить оптимальный рост защиты против заболевания и ускоряет контроль бруцеллеза КРС.

Вакцина RB51 CZV рекомендована в США и Европе, она вытесняет вакцину S19 там, где применяются программы, основанные на вакцинации, диагностике и уничтожении.

Вакцинация является одним из наиболее важных шагов для контроля бруцеллеза у животных. Как уже было сказано, вакцинация — это не единственный фактор, который необходимо принимать во внимание во время разработки программы контроля за заболеванием.

Государственные ветеринарные службы каждой страны имеют в своем распоряжении механизмы (вакцины), которые позволяют им бороться с заболеванием, но любая программа контроля должна выполняться в соответствии с особенностями каждого региона.

Существующие в настоящее время вакцины и диагностикумы в большинстве случаев показывают, что их вполне достаточно для контроля заболевания, включая зоны, где начальная распространенность заболевания очень высокая.

Необходимым условием для успешного осуществления контрольной программы является выбор надежной, стабильной и высококачественной вакцины. Использование вакцин, произведенных с соблюдением европейских стандартов надлежащей производственной практики (GMP), будут служить гарантией успеха.

Компания CZV специализируется на производстве высококачественных вакцин и диагностикумов, которые завоевали прочную репутацию и позволяют контролировать заболевание в различной обстановке. Компания CZV на протяжении последних 40 лет участвует в программах по борьбе с бруцеллезом у животных в различных странах во всем мире.

Aton, G.G. 1987. Control of Brucella melitensis infection in sheep and goats. A review. Trop. Anm. Hlth. Prod., 19:65-74.

Basco, J.M. 1997. A review of the use of B. melitensis Rev 1 vaccine in adult sheep and goats. Prev. Vet. Med., 31: 275-283.

Garin-Bastuji, B., Blasco,J.M., Grayon, M. and Verger, J.M. (1998). Brucella melitensis infection in sheep: present and future. Res. 29:255-274

Neto, F., Vaz, Y.C. 2002.Conjunctival REV 1 vaccination of adult sheep and goats in Tras-os-Montes, Portugal. Epidemiologie et Sante Animab, Volume 42, Pages 99-107

1. Minas, M. Minas, A. Stournara, S. Tsebpidis. 2004. The «effects» of Rev-1 vaccination of sheep and goats on human brucelbsis in Greece Preventive Veterinary Medicine, Volume 64, Issue 1, Pages 41-4.

J.M. Bksco. 2006. Existing and future vaccines against brucellosis in small ruminants

Small Ruminant Research, Volume 62, Issues 1-2, Pages 33-37.

1. Minas. 2006. Control and eradication of brucellosis in small ruminants. Small Ruminant Research, Volume 62, Issues 1-2, Pages 101-107

Oben, S. C., D. Evans, S. G. Hennager, N. F. Cheville, and M. G. Ste-vens.1996. Serologic responses of Brucella abortus strain 19 calfhood-vaccinated cattle following adult vaccination with strain RB51. J Vet Diagn Invest 8:451-4

Schurig, G. G., R. M. Roop, 2nd, T. Bagchi, S. Boyle, D. Buhrman, and N. Sriranganathan. 1991. Biological properties of RB51; a stable rough strain of Brucella abortus. Vet Microbiol 28:171-88.

Brucellosis in humans and animals (WHO/CDS/EPR/2006).

Brucellosis in sheep and goats (Brucelb melitensis). Scientific Committee on Animal Health and Animal Welfare. SANCO, European Commission. 2001.

Bovine Brucellosis and Caprine Brucellosis. OIE Terrestrial Manual. 2010

источник

Вакцина предназначена для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота. Вакцина содержит в качестве антигена инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100. Вакцина содержит также неполный адьювант Фрейнда и физиологический раствор. Использование новой вакцины в ветеринарной практике позволяет в 1,5 — 2 раза повысить эффективность противобруцеллезных мероприятий за счет повышения иммуногености и снижения агглютиногенности вакцины. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к вакцине для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.

Бруцеллез крупного рогатого скота — хроническое зооантропонозное заболевание, распространенное во многих странах мира, наносящее большой экономический ущерб скотоводству и представляющее серьезную опасность здоровью людей.

Основным средством борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота, особенно в зонах его широкого распространения, является вакцинация всего поголовья и своевременное удаление из стада больных животных.

Известна вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая антиген из штамма Brucella abortus 19 и сахарозо-желатиновый стабилизатор [1].

Недостатками данной вакцины являются высокая агглютиногенность, так как в крови животных, иммунизированных данной вакциной в течение нескольких месяцев, а иногда и нескольких лет обнаруживают антитела в принятых для диагностики бруцеллеза серологических реакциях, что препятствует выявлению больных животных в вакцинированном стаде. Вакцину нельзя применять для иммунизации стельных коров, так как она вызывает аборты у отдельных животных.

Известна также вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных, преимущественно крупного рогатого скота, содержащая инактивированный антиген из штамма Brucella melitensis N «Невский-13», неполный адъювант Фрейнда и физиологический раствор [2].

Недостатком данной вакцины является то, что в крови иммунизированных животных до 90-120 дней сохраняются агглютинирующие и комплеменсвязывающие антитела, улавливаемые в принятых для диагностики бруцеллеза серологических реакциях, которые препятствуют своевременному выявлению и удалению из стада больных бруцеллезом коров.

Целью изобретения является разработка высокоиммуногенной вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота с низкой антигенной активностью.

Цель достигается тем, что вакцина в качестве антигена содержит инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300-400х10 9 бактерий в 1 см 3 , при следующем соотношении компонентов вакцины, об.%: инактивированная с гидратом окиси алюминия бактериальная масса штамма B.abortus N КВ 17/100 с концентрацией 300х10 9 -400х10 9 микробных клеток в 1 см 3 40-45,0; неполный адъювант Фрейда 50,0-55,0; физиологический раствор остальное.

Для изготовления вакцины используют штамм Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100.

Штамм B. abortus N КВ 17/100 получен путем целенаправленной селекции по антигенности и иммуногенной активности.

Штамм B. abortus депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, регистрационный номер КВ 17/100 ДЕП.

Штамм B. abortus N КВ 17/100 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Бруцеллы штамма — короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные изолированно, попарно и реже в виде коротких цепочек. Без капсулы, спор не образуют. Размер 1,3-1,5 х 0,6-0,8 мкм.

Культура штамма хорошо растет в аэробных условиях на плотных и жидких питательных средах, предназначенных для культивирования бруцелл. На плотных питательных средах (4-5 сут инкубирования при 37-38 o С) растет в виде круглых, плоских, с нечетко контурированным краем, матовых колоний с диаметром 2,5-3,0 мм. При окрашивании раствором кристаллического фиолетового 1/2000 (по Уайт-Вилсону) 100% колоний окрашиваются как R-форма: фиолетовый центр и светлофиолетовый широкий ободок.

На жидких питательных средах на 2-4 сут инкубирования: легкая опалесценция и узкое пристеночное голубоватое кольцо на границе среды.

Культура штамма растет на средах содержащих фуксин, тионин в концентрации 1: 50000, бис-трифенилангидрокарбинола оксалат в концентрации 1:100000 (маркер), пенициллин 5ЕД/см 3 и не растет на среде, содержащей стрептомицина сульфат 5 мкг/см 3 . Продуцирует Н₂S (6-8 мм). Лизируется фагом Тб.

Культура штамма агглютинируется R-антибруцеллезной сывороткой и не агглютинируется S-антибруцеллезной сывороткой. Штамм не обладает типоспецифической агглютинабельностью и не агглютинируется А и М монорецепторными сыворотками.

Штамм безвреден для человека и сельскохозяйственных животных.

Остаточная вирулентность: ИД для мышей линии С₅₇ — Блек/6 — 5500 микробных клеток, что соответствует уровню аттенуированных вакцинных штаммов.

Культура штамма защищает от заражения не менее 50% иммунизированных животных.

Пример 1. Штамм Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 культивируют на плотной питательной среде или в ферментере на жидкой питательной среде при 37-38 o С в течение 72 ч.

Выращенную культуру с плотной питательной среды смывают физиологическим раствором, добавляют 0,3-0,5% формалина и 0,3-0,5% гидрата окиси алюминия, формалин и гидрат окиси алюминия вносят в ферментер сразу после окончания культивирования.

После инактивации бактериальную массу отстаивают, декантируют надосадочную жидкость и устанавливают концентрацию бактериальной массы, равную 300-400х10 9 микробных клеток в 1 см 3 . Инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 в количестве 40-45% от объема смешивают с неполным адъювантом Фрейнда в количестве 45-55% от объема с доведением до 100% физиологическим раствором.

Вакцину расфасовывают во флаконы при включенной мешалке. Флаконы закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют.

Расфасованную вакцину проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность.

Готовая вакцина представляет собой однородную водно-масляную эмульсию белого цвета с коричневым или серым оттенком. При длительном хранении возможно незначительное отслоение адъюванта над эмульсией, что не влияет на качество вакцины.

Получают 3 серии вакцины, приведенные в табл. 1.

Пример 2. Определяют антигенную активность адъювант-вакцины.

Морских свинок (10-14 голов в группе) иммунизируют адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серии N 1, 2, 3), полученной по примеру 1; адъювант-вакциной из штамма B.melitensis N Н-13, экспериментальной адъювант-вакциной из штамма B.abortus N 16/4 (штамм в R-форме) и живой противобруцеллезной вакциной из штамма B.abortus N 19.

Адъювант-вакцины вводят в дозе 0,2 см 3 , живую — 1 млрд. микробных клеток в объеме 1 см 3 под кожу в область паха. Через 15, 30 и 60 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют в РА с единым бруцеллезным антигеном (S-антиген). Результаты исследований приведены в табл. 2.

Из табл. 2 следует, что все серии предложенной адъювантвакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 не индуцируют образования агглютининов в сыворотке крови животных и в отличие от адъювант-вакцин из штаммов B.melitensis N «Невский-13», В. abortus N 16/4 и живой вакцины из штамма В.abortus N 19 являются неагглютиногенными, что дает возможность быстро и своевременно выявлять больных вакцинированных животных в случае их заражения. В то же время среднее количество агглютининов в сыворотке крови морских свинок через 15 дней после иммунизации адъювант-вакцинами из штаммов B.melitensis N «Невский-13» — 83,0, B. abortus N 16/4 — 38,3 МЕ/см 3 , а живой вакциной из штамма B. abortus N 19 — 160,0 ME/cм 3 , и в случае заражения больные бруцеллезом животные не могут быть дифференцированы по крайней мере в течение 60 дней от иммунных — незаразившихся, создавая угрозу перезаражения.

Таким образом установлено, что адъювант-вакцина из штамма В.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 не индуцирует синтез S-антител в количестве, улавливаемом реакцией агглютинации с единым бруцеллезным антигеном.

Пример 3. Иммуногенную активность новой адъювант-вакцины, полученной по примеру 1 из штамма B.abortus ВГНКИ N 17/100, сравнивают с вакцинами из штаммов B.melitensis N «Невский-13», B.abortus N 16/4 и живой вакциной из штамма B. abortus N 19. Опыт проводят на морских свинках, привитых аналогично примеру 2.

Через 3 мес после прививки морских свинок заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма В.abortus N 54М/ВГНКИ в дозе 80 микробных клеток (15 ИД₅₀). Спустя 32-35 дней животных убивают и проводят бактериологическое исследование селезенки, печени, костного мозга и лимфатических узлов (всего 10 объектов). Определяют наличие бруцелл вирулентного штамма в лимфатических узлах и внутренних органах животных. Рассчитывают процент защиты (количество незаразившихся животных в процентах от общего их количества в группе) и индекс инфицированности (процентное отношение количества объектов, из которых выделена культура вирулентного штамма, к общему количеству исследованных объектов по группе животных). Результаты исследований приведены в табл. 3.

Таким образом установлено, что адъювант-вакцина из штамма B.abortus ВГНКИ N RD 17/100 всех серий превосходит по иммуногенной активности адъювант-вакцины из штаммов B. melitensis N «Невский-13», B.abortus N 16/4 и не уступает живой вакцине из штамма B.abortus N 19.

Пример 4. Определяют реактогенность адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия N 1) в опыте на телках трех-четырех месячного возраста в сравнении с адъювант-вакциной из штамма B.meliitensis N «Невский-13». Каждую вакцину вводят 10 телкам под кожу в область подгрудка в дозе 3 см 3 . У вакцинированных животных ежедневно в течение 10 дней измеряют температуру тела и площадь припухлости в месте введения вакцины.

У животных, иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100, температура тела повышается на 0,8-1,0 o С и нормализуется к 5-6 дню после вакцинации, отек в месте введения вакцины не превышает 80 см 2 и начинает уменьшаться с 8-10 дня. В группе животных, иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.melitensis N «Невский-13», температура тела повышалась в среднем на 1,2-1,5 o С и приходила в норму к 7-9 дню. Отек тканей в месте введения вакцины в среднем 100-120 см 3 . Заметное уменьшение величины отека отмечают через 15-20 дней после иммунизации.

Таким образом, испытанную вакцину из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 можно отнести к слабореактогенным масляным адъювантвакцинам.

Пример 5. Определяют антигенные свойства адъювант-вакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия 2) в опыте на телках трех-четырех месячного возраста. Вакцину вводят под кожу в область подгрудка в дозе 3 см 3 42 телкам. Через 15 и 30 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном (S-антиген).

Все животные иммунизированные адъювант-вакциной не реагируют на бруцеллез. Пример 6. Определяют антигенные свойства адъювант-вакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия 3) в опыте на телках 14-17-месячного возраста, ранее иммунизированных живой слабоагглютиногенной вакциной из штамма B.abortus N 82. Адъювант-вакцину в дозе 3 см 3 вводят под кожу в область подгрудка 70 телкам. Через 15 и 30 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют на бруцеллез в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.

Все животные ревакцинированные адъювант-вакциной не реагируют на бруцеллез.

Пример 7. Определяют эффективность адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота в условиях контролируемого эпизоотологического опыта.

Телок трех-четырех месячного возраста (пример 5) и 14-17-месячного возраста (пример 6), иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100, содержат в условиях хозяйства неблагополучного по бруцеллезу рогатого скота, обеспечивающих контакт с 21 коровой больной бруцеллезом.

Иммунизированные адъювант-вакциной животные не заболевают бруцеллезом в течение шести месяцев, что указывает на высокую эффективность препарата.

Пример 8. Определяют возможность использования адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 для провокации синтеза специфических антител у больных бруцеллезом коров, не реагирующих в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза. Коров, ранее реагировавших на бруцеллез (в РА и РСК) и утративших титры в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза, иммунизируют адъювант-вакциной из штамма B.abortus КВ 17/100 в дозе 3 см 3 . Вакцину вводят под кожу в область подгрудка. Через 15 и 3 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследую сыворотку в РА и РСК.

После иммунизации животные с хронической формой бруцеллеза положительно реагируют в серологических реакциях в диагностических титрах и идентифицируются как больные.

Таким образом, адъювант-вакцина из штамма B.abortus КВ 17/100 провоцирует появление положительных серологических реакций у нереагирующих на бруцеллез больных животных, что способствует скорейшему выздоровлению больных бруцеллезом животных.

Использование адъювант-вакцины на основе нового штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/00 в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота.

Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая инактивированный антиген бруцелл, неполный адъювант Фрейнда и физиологический раствор, отличающаяся тем, что она в качестве инактивированного антигена бруцелл содержит инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300 — 400 10 9 микробных клеток в 1 см 3 при следующем соотношении компонентов, об.%: Инактивированная с гидратом окиси алюминия бактериальная масса штамма Вrucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300 — 400 10 9 микробных клеток в 1 см 3 — 40 — 50 Неполный адъювант Фрейнда — 45 — 55 Физиологический раствор — Остальноел

источник

ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ инструкция по применению