Иммуноглобулин а при бруцеллезе

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

В норме антитела к возбудителю бруцеллёза в крови отсутствуют. Диагностический титр при реакции агглютинации — 1:160 и выше.

Возбудители бруцеллёза — бруцеллы, мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии. При постановке диагноза бруцеллёза полученные клинико-эпидемиологические данные необходимо подтверждать лабораторно. С этой целью используют бактериологический и серологический методы исследования. При остром бруцеллёзе положительный результат исследования гемокультуры получают в 10-30% случаев (в 62-90%, если возбудитель — Brucella melitensis, в 5-15%, если — Brucella abortus). Культура ликвора бывает положительной у 45% пациентов с менингитом. При посевах крови, костного мозга, мочи культуру бруцелл можно получить через 5-10 сут, а в части случаев — через 20-30 сут. В связи с этим для диагностики бруцеллёза широкое распространение получили серологические методы.

Самым надёжным серологическим тестом определения антител к возбудителю бруцеллёза в сыворотке крои служит стандартный тест пробирочной агглютинации (реакция Райта), с помощью него определяют содержание антител, реагирующих главным образом с липополисахаридными антигенами бруцелл. Увеличение титров антител в 4 раза и более в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1-4 нед, позволяет идентифицировать этиологический фактор заболевания. У большинства больных титры специфических антител повышаются на 3-5-й день от начала заболевания. Достоверным считают титр антител не менее 1:160 с последующим его нарастанием. Повышенный титр антител выявляют у 97% больных в первые 3 нед заболевания. Наиболее высокий титр антител отмечают обычно через 1-2 мес от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться. Стандартный тест пробирочной агглютинации выявляет антитела к B. abortus, B. suis, B. melitensis, но не к B. canis. Повышенный титр антител может сохраняться у 5-7% пациентов в течение 2 лет после перенесённой инфекции. Поэтому реакцию Райта нельзя использовать для дифференциальной диагностики бруцеллёза с другими инфекционными заболеваниями при наличии в анамнезе бруцеллёза в течение 2 последних лет. Причиной ложноположительных результатов могут быть проведение кожной пробы на бруцеллёз, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, иерсиниями, Francisella tularensis. В части случаев возможны ложноотрицательные результаты реакции агглютинации у больных бруцеллёзом, что объясняется эффектом прозоны, или так называемым блокированием антител. При хронических локализованных формах бруцеллёза титры могут быть отрицательными или ниже 1:160. На фоне проводимого лечения титры антител класса IgG быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. При рецидивах уровень антител IgG снова повышается. Наличие однократного повышения титра антител IgG более 1:160 — надёжное объективное указание на текущую или недавно перенесённую инфекцию. После лечения и выписки больного из стационара рекомендуют проведение серологических исследований в течение первого года через 1, 2, 3, 6, 9 и 12 мес, а в течение второго года — ежеквартально.

РПГА более чувствительна и специфична для обнаружения бруцеллёзных антител в сыворотке крови. Нередко гемагглютинины выявляют в тех случаях, когда реакция агглютинации даёт отрицательный или сомнительный результат.

РСК позволяет выявлять комплементсвязывающие антитела к бруцеллам, появляющиеся в крови позже агглютининов. Максимальные титры антител в РСК регистрируют к 4-му месяцу заболевания, в дальнейшем их титр снижается, но в небольшом количестве их обнаруживают в течение 1 года. Существенных преимуществ РСК по сравнению с реакцией агглютинации не имеет.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9]

источник

Серологическое исследование антител IgG к бруцелле определяет наличие в организме бактерий рода Brucella. Иммуноглобулины класса G вырабатываются к антигенам, расположенным на поверхности микроорганизмов. Положительный результат позволяет поставить пациенту диагноз «бруцеллёз».

Бактерии рода Brucella вызывают развитие бруцеллёз. Люди заражаются от больных коров, коз, овец, которые являются основным источником и природным резервуаром инфекции. Заражение происходит при употреблении в пищу недостаточно термически обработанного мяса или молочных продуктов. Инкубационный период длится около трех недель. Заболевание может иметь острое, подострое или хроническое течение. Поражаются суставы, сердце, нервная, пищеварительная и другие системы организма.

Для диагностики бруцеллёза используют культуральный, бактериологический методы и серологические реакции. К последним относится определение иммуноглобулинов G в сыворотке крови больного человека.

Полученные результаты анализа показывают титр антител к бруцелле. Возможны такие варианты:

Отрицательный результат (R = 1,1) говорит о наличии острой или хронической формы инфекции (для уточнения необходимо провести определения иммуноглобулинов других классов).

Однако высокий титр IgG не всегда говорит о наличии бруцеллёза. Он может свидетельствовать о перенесённой острой инфекции или вакцинации. В таком случае уровень иммуноглобулинов не отображает активности процесса.

анализы Вопрос: Доктор назначила ребенку: 1. Анализ крови на органические и аминокислоты методом тандемной масспектрометрии 2. Анализ мочи на органические и аминокислоты методом газовой спектрометрии (разовая порция). Мы можем сделать такие анализы в вашей лаборатории в Адлере? стоимость и сроки, а так же как подготовиться к анализу написшите, пожалуйста.

Ответ: Здравствуйте! Да, Вы можете сдать кровь и мочу на исследование в Адлере. Комплексное определение концентрации ненасыщенных жирных кислот семейства Омега-6 в крови методом тандемной масс-спектрометрии — 8250 руб. Срок выполнения до 10 рабочих дней. Комплексное определение концентрации на аминокислоты в крови (32 показателя) — 8140 руб., 10 р.дней., Комплексное определение содержания органических кислот в моче — 5000 руб., 10 р. дней. Сдавать утром после 8 часового ночного голодания.

Какой анализ крови нужно сдать Вопрос: Добрый день,хотел бы у вас уточнить один вопрос.Был на приеме у невролога, т.к. в последнее время немеет лобная часть головы,он установил диагноз,прописал лекарства и сказал,что надо бы сделать общий анализ крови для проверки.Какой-то отдельный анализ крови надо еще делать или хватит только общего?

Ответ: Здравствуйте! Если доктор Вам назначил общий анализ крови, значит его следует выполнить. Общий клинический анализ крови является комплексным исследованием, который поможет врачу провести скрининг. Данный анализ отражает текущее состояние человека и дает такие показатели крови, как эритроциты, гемоглобин, лейкоциты, лейкоцитарная формула и еще до 18 показателей.

источник

Бруцеллез (лихорадка мальтийская, средиземноморская, гибралтарская, кипрская, ундулирующая, тифомалярийная, болезнь Банга) – инфекционное заболевание из группы бактериальных зоонозов, возбудителем которого являются микроорганизмы рода Brucella. Патогенными для человека являются В. melitensis, Br. abortus, Br. suis. Инфицирование человека происходит преимущественно алиментарным путем, реже контактным или аэрогенным. Представляет собой системное инфекционно-аллергическое заболевание со склонностью к хроническому рецидивирующему течению с преимущественным поражением опорно-двигательной, нервной и мочеполовой систем организма. В зависимости от клинической картины выделяют острую, подострую, хроническую и резидуальную форму бруцеллеза. Наиболее чувствительным в настоящее время является иммуноферментный анализ (ИФА), который рекомендуют в качестве экспресс-метода при массовых обследованиях.

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Бруцеллез — зоонозная инфекция, характеризующаяся полиорганным поражением и склонностью к хронизации. Значимым патогенетическим компонентом бруцеллеза является аллергическая реактивность. Передача бруцелл происходит в основном пищевым и водным путем, наиболее часто через молоко и мясо зараженных животных. У скотоводов может реализоваться воздушный и контактный путь передачи бруцеллеза. Диагноз устанавливается при выявлении возбудителя в крови, пунктате лимфатического узла или цереброспинальной жидкости.

Заболевание вызывается неподвижными полиморфными грамположительными микроорганизмами рода Brucella. Вид бруцелл, вызывающих инфекцию, оказывает влияние на тяжесть течения, наиболее тяжело протекает бруцеллез, обусловленный заражением Brucella melitensis. Бруцеллы высокоинвазивны, размножаются внутри клеток организма хозяина, но способны сохранять активность и вне клетки. В окружающей среде устойчивы, сохраняются в воде более двух месяцев, три месяца — в сыром мясе (30 дней — в засоленном), около двух месяцев — в брынзе и до четырех — в шерсти животных. Губительно для бруцелл кипячение, нагревание до 60 °С убивает их через 30 минут.

Резервуаром бруцеллеза являются животные, источником заражения для человека преимущественно являются козы, овцы, коровы и свиньи. В некоторых случаях возможна передача от лошадей, верблюдов, некоторых других животных. Выделение возбудителя больными животными происходит с испражнениями (кал, моча), молоком, амниотической жидкостью. Передача инфекции осуществляется преимущественно фекально-оральным механизмом, чаще всего пищевым и водным путем, в некоторых случаях возможна реализация контактно-бытового (при внедрении возбудителя через микротравмы кожи и слизистых оболочек) и аэрогенного (при вдыхании инфицированной пыли) пути.

Значительную эпидемиологическую опасность представляют собой молоко, полученное от больных животных, и молочные продукты (брынза, кумыс, сыры), мясо, изделия из животного сырья (шерсть, кожа). Животные загрязняют испражнениями почву, воду, корм, что также может способствовать заражению человека непищевым путем. Контактно-бытовой и воздушно-пылевой пути реализуются при уходе за животными и обработке животного сырья.

При бруцеллезе у беременных существует вероятность внутриутробной передачи инфекции, кроме того, возможна постнатальная передача при лактации. Люди обладают высокой восприимчивостью к бруцеллезу, после перенесения инфекции в течение 6-9 месяцев сохраняется иммунитет. Повторное инфицирование бруцеллами отмечается в 2-7 % случаев.

Инкубационный период бруцеллеза в среднем составляет 1-4 недели, но при формировании латентного носительства удлиняется до 2-3 месяцев. Острый бруцеллез обычно развивается быстро, у пожилых лиц начало может быть постепенным (в этом случае больные отмечают продромальные явления в виде общего недомогания, бессонницы, разбитости, артралгий и миалгий с постепенным нарастанием интоксикации на протяжении нескольких дней). Температура тела резко поднимается, сильный озноб чередуется с потом, развивается интоксикация, чаще всего умеренная, несмотря на выраженную температурную реакцию.

Хронический бруцеллез протекает волнообразно, с проявлением симптоматики полиорганных поражений. При этом симптомы общей инфекционной интоксикации обычно выражены умеренно, температура редко превышает субфебрильные значения. Промежутки между обострениями заболевания могут продолжаться 1-2 месяца. В случае формирования нового инфекционного очага внутри организма общее состояние ухудшается. Симптоматика хронического бруцеллеза зависит от преимущественного поражения той или иной функциональной системы возбудителем и выраженности аллергического компонента.

Достаточным для подтверждения диагноза является определение антигенов бруцелл и антител к ним в крови пациента при помощи серологических методов. Исследованию подвергается обычно сыворотка крови, но возможно обнаружение антигенов и в спинномозговой жидкости. Положительный результат серологического исследования не менее чем в 3-4 различных тестах, с характерной соответствующей динамикой показателей, является достаточным основанием для подтверждения этиологии заболевания. Начиная с 20-25-го дня болезни и в течение длительного периода (несколько лет) после выздоровления отмечается положительная реакция на кожную пробу Бюрне (подкожное введение бруцеллина).

Серологические методы также могут быть полезны для дифференцировки острой и хронической формы бруцеллеза. С этой целью может выполняться определение отдельных классов иммуноглобулинов.

Для чего используется исследование?

• Для выявления инфекции (острой и хронической).

Когда назначается исследование?

• При симптомах бруцеллеза (остросептической формы): высокая температура 39-40 °С и выше, озноб, потливость, слабость, миалгия, артралгия, артрит;
• при обследовании пациентов с изолированным поражением мочеполовой системы и суставов при наличии в анамнезе указаний на употребление сырого козьего молока, особенно в эндемичных по бруцеллезу районах, и профессиональных особенностей (ветеринары, работники молочной и мясной промышленности);
• при эпидемиологическом обследовании населения и при отборе лиц для вакцинации против бруцеллезной инфекции;
• дифференциальная диагностика с гриппом, брюшным тифом, малярией, инфекционным мононуклеозом, лептоспирозом, лимфогранулематозом, ревматоидным полиартритом.

Референсные значения: антитела не обнаружены.

Коэффициент позитивности (КП):

1,1 – положительный результат (антитела обнаружены).

КП – концентрация специфических антител в единице объема. Чем выше КП пробы, тем выше концентрация антител.

• отсутствие инфекции;
• слабая иммунная реакция пациента;
• низкий уровень антител.

• острая инфекция;
• рецидив заболевания;
• хроническая форма инфекции.

В случае получения сомнительного результата рекомендуется повторить исследование через 10-14 дней. При повторном результате «Сомнительно» результат следует рассматривать как отрицательный.

В случае заражения бактерией Brucella сначала появляются антитела IgM, затем через некоторое время антитела IgG. Диагноз «острый бруцеллез» подтверждается выявлением антител при острой симптоматике заболевания, совместным выявлением антител IgG, IgA, IgM или только IgM. Если было применено лечение, в течение 2-4 месяцев концентрация IgG, как правило, значительно уменьшается.

В случае хронического бруцеллеза особое значение имеют антитела IgG и IgA. Они свидетельствуют также о давно перенесенном заражении.

Наличие IgA, IgG при отсутствии IgM говорит о хронической инфекции или реинфекции бруцеллой.

[40-063] Клинический и биохимический анализы крови — основные показатели [07-056] Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест/микрореакция преципитации), титр

источник

Бруцеллез может протекать бессимптомно и выявляться только по положительным результатам серологических реакций. Выраженные формы инфекции можно разделить на три группы — острый, локализованный и хронический бруцеллез.

Острый бруцеллез. Инкубационный период при этой форме инфекции обычно колеблется от 7 до 21 дня, но иногда продолжается и несколько месяцев. Начало может быть острым с выраженными явлениями интоксикации, особенно в случае инфекции, вызванной В. melitensis. Однако чаще болезнь развивается постепенно с небольшим подъемом температуры тела. Больные жалуются на недомогание, утомляемость, головную боль, слабость, повышенное потоотделение, озноб, боли в области поясницы, кашель, артралгии и миалгии при отсутствии признаков локальных поражений; возможна анорсксия и потеря массы тела.

Типичным является обилие жалоб при немногочисленности объективных данных. Из числа последних наиболее выраженными можно считать спленомегалию (у 10—20% больных), лимфаденопатию (у 15% больных) и гепатомегалию (менее чем у 10%).

Локализованный бруцеллез. Патологический процесс может локализоваться почти в любой анатомической области, однако наиболее часто отмечаются следующие формы заболевания — остеомиелит, абсцесс селезенки, поражение мочеполовых органов, изменения в легких, эндокардит. Остеомиелит, как правило, поражает позвоночник, чаще пояснично-крестцовый отдел, с вовлечением в патологический процесс межпозвоночных дисков и прилежащих к ним позвонков. Ранние изменения в костях выявляются сканированием, в дальнейшем при рентгенографии обнаруживаются признаки остеопороза, эрозия передней пластинки позвонка и формирование остеофитов в виде клюва попугая. Значительно реже наблюдаются артриты, в основном поражающие коленные суставы. В селезенке возможно развитие абсцессов, на месте которых впоследствии формируются участки обызвествления. Бруцеллы могут вызывать эпидидимоорхиты и реже клинически выраженные поражения предстательной железы или почек. К неврологическим осложнениям бруцеллеза относят менингоэнцефалит, миелит, радикулит или невропатию. Редкими клиническими проявлениями бруцеллеза являются экссудативный плеврит и пневмония.

Наиболее частая причина смерти больных при бруцеллезе — бактериальный эндокардит. Регистрируется он главным образом у мужчин, характеризуется вялым течением, часто сопровождается недостаточностью кровообращения и артериальной эмболией. Для полного излечения этой формы бруцеллеза требуется как хирургическая замена пораженных клапанов, так и терапия противомикробными средствами.

Хронический бруцеллез. К данной форме инфекции относят случаи заболевания, длящиеся более года после заражения. В эту группу включают больных с рецидивирующим течением болезни без признаков очаговой инфекции, в случае локализации инфекционного процесса в одном или нескольких органах, а также больных, у которых не наблюдается объективных признаков болезни (например, отсутствует лихорадка) и нет указаний на активный бруцеллез (согласно результатам серологических реакций и посевов на наличие бруцелл). Весьма вероятно, что у лиц, относящихся к этой группе, в основе жалоб на утомляемость и общую слабость лежат цсихоневротические нарушения, а не активный бруцеллез.

У ветеринарных врачей, занимающихся удалением плаценты у инфицированных животных, встречается необычное проявление инфекции — появление на кистях рук эритематозных, папулезных или пустулезных высыпаний, происхождение которых, возможно, связано с реакциями повышенной чувствительности к антигенам бруцелл.

Диагноз. Бруцелле з- -относительно редкое заболевание, и имеется ряд болезней, имеющих сходные с ним клинические признаки: например, грипп, инфекционный мононуклеоз, токсоплазмоз, вирусный гепатит, генерализованная гонококковая инфекция, ревматизм, системная красная волчанка, туберкулез, лептоспироз и брюшной тиф. При наличии соответствующей клинической картины есть больше оснований предположить инфицированность бруцеллами у фермеров, работников скотобоен, а также у других лиц, имеющих контакты с контаминированным сырьем и продуктами животного происхождения.

Основное доказательство наличия бруцеллезной инфекции заключается в выделении возбудителя. Следует помнить о том, что проведение посевов инфицированного материала может представлять опасность для персонала лабораторий. Весь посевной материал должен быть четко маркирован возможен бруцеллез, и все манипуляции с ним должны проводиться в стерильных условиях в специальном вытяжном шкафу, соответствующем требованиям для работы с инфекциониыми агентами III класса. В лабораториях, не имеющих указанных условий, выделение и культивирование бруцелл проводить не рекомендуется.

Культивирование бруцелл. Примерно в 50% случаев при посевах крови, взятой на ранних стадиях болезни от не получавших антибиотики больных, в триптиказный соевый бульон и культивировании их в присутствии 5—10% двуокиси углерода через 1—3 нед удается получить чистую культуру бруцелл. Однако во многих лабораториях посевы крови уничтожаются после 10-дневной инкубации. Поэтому лечащий врач должен сообщить в лабораторию и подозрении на бруцеллез и убедить врача-лаборанта наблюдать за подобными посевами не менее 4 нед. При остром течении болезни в ряде случаев при посевах крови получают отрицательный результат, а при посевах костного мозга — положительный. На более поздних стадия х- болезни бактериемия отмечается реже, и в этом случае возбудитель может быть выделен из инфицированных лимфатических узлов или из гранулем н селезенке, печени и костной ткани. В целом диагноз бруцеллеза подтверждается результатами посевов только в 15—20% случаев. При установлении диагноза локализованных форм инфекции может возникнуть необходимость в проведении биопсии для выделения возбудителя. В большинстве случаев заболевания диагноз ставят на основании результатов серологических исследований.

Серологические исследования. Повышение титров антител начинается в течение 1-й недели болезни, достигая пика к 3-му месяцу, и затем в течение нескольких месяцев снижаются. Иммуноглобулины этого класса способны сохраняться в организме сроком до нескольких лет. Антитела IgG появляются на 2—3-й неделе от начала заболевания, титры их достигают максимума примерно через 8 нед и сохраняются весь период активной инфекции, благодаря чему они свидетельствуют о продолжающемся активном инфекционном процессе. На фоне проводимого лечения титры антител IgG быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. В случае рецидивов уровни антител IgM и IgG повышаются. Самым надежным серологическим тестом является реакция агглютинации (РА) с бруцеллами в пробирке, посредством которой определяют уровень антител, реагирующих главным образом с липополисахаридными антигенами бруцелл. Увеличение титров антител в 4 и более раз в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1—4 нед, свидетельствует о недавнем контакте с антигенами бруцелл или сходных с ними микроорганизмов. Реакции должны проводиться с обеими пробами одновременно в одной и той же лаборатории при одинаковых условиях. По данным реакции агглютинации, у большинства больных повышение титров специфических антител отмечается на I—2-й неделе заболевания, а на 3-й неделе фактически у всех происходит сероконверсия. Причиной ложноположительных результатов могут служить проведение кожной пробы на бруцеллез, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, Francisella tularensis или Yersinia enterocolitica. Причины указанных перекрестных реакций обычно легко выявляются.

Значение результатов серологических исследований. Повышение титров антител в РА до 1: 160 и выше свидетельствует о контакте с антигенами бруцелл или перекрестно реагирующих с ними возбудителей в прошлом или настоящем времени. При достаточно обоснованном подозрении на бруцеллез реакцию следует ставить сывороткой, разведенной до 1:1280, поскольку при наличии блокирующих антител в титрах 1: 640 отмечаются ложноотрицательные результаты. Фактически все больные с бруцеллезом имеют положительные результаты в РА в титре ^1: 160. Более низкие титры не имеют диагностического значения.

Агглютинирующие антитела IgG можно определить в РА путем экстрагирования с 2-меркаптоэтанолом (2-МЭ). При этом агглютинирующие антитела IgM разрушаются, что позволяет определить активность только агглютинирующих антител IgG. Наличие однократного повышения титра (>1:160) в РА с бруцеллами с использованием 2-МЭ является надежным объективным указанием на текущую или имевшую недавно место инфекцию и необходимость проведения лечения. В большинстве случаев даже после предполагаемого полного излечения в течение нескольких лет сохраняется повышенный уровень агглютинирующих антител IgM. Благодаря этому РА с бруцеллами с использованием 2-МЭ, позволяющая определять уровень только антител IgG, является самым надежным индикатором излечения больного.

Другие серологические реакции не имеют каких-либо преимуществ. Кожная проба на бруцеллез имеет не большее значение, чем положительный туберкулиновый тест у больных с подозрением на туберкулез. Более того, она может повлиять на интерпретацию результатов серологических реакций, повышая их титр. Поэтому постановка кожной пробы нецелесообразна.

При проведении реакции агглютинации на бруцеллез используются антигены В. abortus. Антитела к В. melitensis и В. suis перекрестно реагируют с В. abortus, но не с B..canis. Для обнаружения антител к В. canis следует использовать антигены, приготовленные из возбудителя этого вида, коммерческий выпуск которых не налажен.

Другие лабораторные исследования. Иногда у больных отмечается анемия. Количество лейкоцитов в пределах нормы или понижено, СОЭ в пределах нормы или повышена .

источник

В хронической стадии бруцеллеза все 3 класса иммуноглобулинов – IgG, IgM, IgА чаще определялись при вторично-хронической форме (47,1±2,8%), что подтверждало более выраженный инфекционный процесс у данных лиц, перенесших острую форму заболевания. Одновременное выявление антител IgG и IgA, наоборот, чаще регистрировалось при первично-хроническом бруцеллезе. Отличительным для хронических форм являлась совместная циркуляция IgG и IgM антител, а также отдельно – IgG, IgA и IgM. Такое разнообразие сочетаний иммуноглобулинов различных классов у больных хроническим бруцеллезом связано с возможностью реинфицирования людей, находящихся в очагах инфекции. Важно отметить, что выявление IgM, отражающих свежее инфицирование, чаще регистрировалось в сочетании как с IgG, так и отдельно у больных первично-хроническим бруцеллезом, что наводит на мысль о большей вероятноти повторного заражения у этой категории лиц.

Ведущее место в клинике бруцеллеза занимает поражение опорно-двигательного аппарата. Сравнительное изучение содержания IgG, IgM, IgA у 119 больных хроническим бруцеллезом с поражениями костно-суставной системы, показало, что у больных с выраженными очаговыми поражениями островоспалительного характера (артриты, остеоартриты, спондилиты), уровень специфических иммуноглобулинов всех трех классов был значительно выше по сравнению с другими группами больных (с артралгиями или дегенеративными изменениями).

Проведенные исследования показали, что определение специфических иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM c использованием ИФА позволяет судить об активности инфекционного процесса, вероятности повторного заражения, характере местных воспалительных изменений со стороны костно-суставной системы, что, в конечном итоге, способствует улучшению диагностики и качества лечения.

Особенности персистенции бруцелл при инфекционном и вакцинальном процессах.

Развитие инфекционного процесса при бруцеллезе характеризуется диссеминацией бруцелл и их размножением в макрофагах хозяина. Хроническое течение инфекционного процесса у людей и животных связано со способностью бруцелл противостоять защитным антимикробным механизмам хозяина.

При персистенции возбудителя бруцеллеза в макроорганизме непрерывно происходят процессы адаптации, размножения, гибели, разрушения с последующей циркуляцией освободившихся растворимых антигенов. В этой связи особое значение имеет выбор методов, позволяющих следить за течением инфекционного процесса путем регистрации маркеров возбудителя (растворимый антиген, ДНК) бруцеллеза в крови больных людей и животных.

Нами была оценена возможность изучения персистенции бруцелл в организме экспериментально зараженных животных и людей с помощью бактериологического метода, а также ИФА и ПЦР.

Изучение антигенемии в динамике инфекционного и вакцинального процессов при бруцеллезе.

В работе использованы 83 морские свинки массой 300-350 г. Животных заражали подкожно вирулентным штаммом B.melitensis 565 в дозе 1х102 м.кл/мл и вакцинным B.abortus 19-BA -1х109 м.кл/мл. Количество колоний бруцелл, выделенных из внутренних органов животных (лимфатические узлы, печень, селезенка, легкие) выражали в процентах индекса инфицированности (ИИ). Сыворотки крови исследовали до заражения и в динамике инфекционного (в течение 23 месяцев) и вакцинного (18 месяцев) процессов. Бруцеллезный антиген выявляли с помощью прямого ИФА. Полистироловые планшеты сенсибилизировали IgG-фракцией бруцеллезной кроличьей сыворотеи в концентрации 10 мкг/мл. В качестве коньюгата использовали ту же иммуноглобулиновую фракцию меенную пероксидазой хрена в разведении 1:400. Оптимальные концентрации IgG-фракции и коньюгата подбирали путем «шахматного» титрования. Количественное содержание антигена выражали в нг/мл, определяя его по калибровочной кривой, построенной по растворимому антигену (ЛПС), выделенному из B. abortus 99.

Использование ИФА позволило проследить динамику антигенемии у зараженных животных (рис.10). В фазе «адаптации» (начальные 15 суток), когда бактериологическим методом возбудитель бруцеллеза удается выделить в единичных случаях из внутренних органов (ИИ=10,2±5,4), тогда как специфический антиген выявлялся в сыворотке крови в количестве 4,57 нг/мл. В период от 15 до 60 суток возбудитель выделялся из внутренних органов животных ИИ= 86,7±10,0%. В тот же период («регионарная и генерализованная» фазы) специфический антиген выявлялся у 60,0±15,0 – 70,0±15,3% зараженных животных соответственно, а количество антигена колебалось от 4,5± 1,8 до 5,9± 1,98 нг/мл. Спустя 3 месяца после заражения ИИ постепенно уменьшался и к 12 месяцу возбудитель не выделялся. По мере снижения ИИ с 3-го месяца начинал возрастать уровень специфического антигена, достигая максимума к 12-14 месяцам в концентрации 18,3±3,2 и 18,5±3,8 нг/мл у 71,4±15,6 и 80,0±15,1 % инфицированных животных соответственно. В более отдаленные сроки (23 месяц предельный срок наблюдения) уровень антигена снизился в 3-4 раза и составил 4,7±3,5 нг/мл у всех обследованных животных.

Рисунок10. Уровень антигенемии в динамике инфекционного процесса.

По оси абсцисс — сроки исследования, фазы инфекционного процесса. По оси ординат – количество антигена (нг/мл); индекс инфицированности (%).Штриховка-развитие инфекционного процесса по индексу инфицированности.

Таким образом, периоду повышения уровня антигена в крови предшествует интенсивное внутриклеточное размножение бруцелл, сопровождающееся выраженной пролиферацией клеток ретикулоэндотелия. Первичный очаг воспаления в ответ на введение бруцелл характеризуется выраженной макрофагальной реакцией и частичной деструкцией бруцелл в макро- и микрофагах (П.А.Вершилова,1974). Возможно, этот первичный воспалительный очаг и является ранним источником поступления специфического антигена в кровяное русло.

Параллельно нами был изучен антительный ответ в РА, РПГА, РК как при наличии возбудителя в организме животных, так и в период, когда выявлялся только растворимый антиген (рис. 11).

Рисунок11. Результаты сравнительного изучения антигенемии и антителообразования в динамике инфекционного процесса. По оси абсцисс – сроки исследования, по оси ординат – столбики – количество антигена (нг/мл); — lg титра специфических антител ( 1- реакция агглютинации, 2- реакция Кумбса, 3- РПГА).

В начальной фазе инфекционного процесса выявляются агглютинины, гемаглютинины и неполные антитела, синтез которых мог быть обусловлен как наличием возбудителя, так и растворимого бруцеллезного антигена. В период выраженной антигенемии (7-16 месяцев после заражения) титры антител в РА и РПГА были такими же, как и в ранние сроки, в то время как уровень неполных антител (РК) повышался и сохранялся высоким в течение всего периода наблюдения. Эти данные позволяют предположить, что синтез неполных антител обусловлен наличием в организме животных растворимого бруцеллезного антигена.

При изучении вакцинального процесса, созданного с использованием живой вакцины B.abortus 19BA, выявлены те же закономерности, что и при инфекционном., а именно – увеличению количества циркулирующего антигена предшествует диссеминация вакцинного штамма бруцелл в организме животных. Так, в нестерильной фазе количество антигена в сыворотках крови колебалось от 8,5±2,8 до 4,3±1,6 нг/мл. В стерильной фазе, когда вакцинный штамм не выделяется, уровень специфического антигена возрастал до 11,7±7,6 – 10,1±3,0 нг/мл у 87,6% животных с последующим снижением к 18 месяцам (предельный срок наблюдения) до 6,3±4,9 нг/мл у 56.2% вакцинированных животных.

Учитывая тот факт, что длительная антигенемия, по-видимому, обусловлена персистенцией вакцинного штамма в организме животных, можно сделать заключение об отсутствии стерильной фазы иммунитета при вакцинальном процессе. Однако для окончательного решения этого вопроса необходимо проведение дополнительных исследований.

С помощью прямого ИФА уровень циркулирующего антигена был изучен у 21 больного острой и подострой и 43 больных хронической формами бруцеллеза (табл. 8). Специфический антиген выявлялся у большинства больных острой, подострой и хронической формами заболевания, при этом концентрация антигена у больных острой, подострой формами бруцеллеза составила 2,3±0,7, а при хронической 2,98±0,5 нг/мл.

Выявление специфического антигена в сыворотках крови людей больных бруцеллезом с помощью ИФА

источник

Диагностическое значение иммуноглобулинов как носителей антител при серологической диагностике бруцеллеза

Серологическая диагностика бруцеллеза является самой распространенной в ветеринарной практике.

В продолжение всей истории борьбы с бруцеллезом сельскохозяйственных животных серологические методы диагностики заболевания находятся в состоянии совершенствования старых методов и разработки новых. К настоящему времени широко экспериментируется или уже регламентируется в инструкциях некоторых стран ряд новых методов.

Поиски более совершенных методов обусловливаются необходимостью полного выявления в неблагополучных стадах и отарах всех инфицированных животных, так как до настоящего времени, как правило, не удается серологическая дифференциация здоровых животных от больных.

Скрытое бруцеллоносительство, при котором не бывает антител в крови животных, сильно выраженное количественное и качественное колебание бруцеллезных антител в крови животных в период инфекционного процесса и после него, появление у животных поствакцинальных антител, возникающих после вакцинации вакциной из штамма № 19 или другими агглютиногенными или слабоагглютиногенными вакцинами, а также влияние на образование антител возраста, физиологического состояния животных и другие факторы вызывают необходимость в повторном применении на практике методов прямой и дифференциальной диагностики бруцеллезных антител.

Существенное значение для совершенствования серологической диагностики вообще и серологической диагностики бруцеллеза в частности имеет разрабатываемая в последнее десятилетие иммунологическая классификация сывороточных глобулинов — носителей антител. По этой классификации иммунные глобулины человека делятся на 5 классов, различающихся в зависимости от их химической структуры. Обозначение этих классов следующее: IgG, IgM, IgA, IgD и IgE (Ig — это сокращенное название иммуноглобулина). Указанные классы иммуноглобулинов могут также обозначаться G, М, А, D и Е. Иммунные белки, различающиеся по константам седиментации Свеберга, получаемые на ультрацентрифуге в искусственном гравитационном поле, имеют разную степень иммунной активности. По современной классификации гамма-глобулины, обозначаемые 7S, преимущественно входят в класс IgG, кроме того, в класс IgA и IgD. Иммунные белки, обозначаемые 19S, входят в класс IgM, а иммуноглобулин 9S—в класс IgE.

Иммуноглобулины домашних животных, по данным Герберта (1974), изучены недостаточно по сравнению с иммуноглобулинами человека. Некоторые иммуноглобулины у животных, как и у человека, представлены различными классами, имеющими одинаковое название с человеческими, например IgG, IgM. Эти иммуноглобулины характерны для сельскохозяйственных животных и птиц.

Сравнение других иммуноглобулинов животных с иммуноглобулинами человека является весьма приблизительным, так как идентификация их проводится по признаку электрофоретической подвижности, а однозначное название иммуноглобулинов может быть тогда, когда они сравнимы еще и по другим признакам, например по константе седиментации, содержанию углеводов, месту синтеза, характеру реакции как антитела и др. Иммуноглобулины, имеющие наименьшую подвижность в электрическом поле, обозначаются у2_а, в некоторых случаях они подразделяются на у2 а , у2 b , 72 c , где буква а соответствует компоненту с меньшей подвижностью, чем компонент, обозначенный буквой в и т. д. Глобулины с большей подвижностью, чем у2, обозначаются yI. Их также подразделяют на подгруппы. Наиболее подвижными являются глобулины, обозначаемые 19S; их относят к макроглобулинам и обозначают буквой М.

До настоящего времени подробно изучались указанные первые 2 класса иммуноглобулинов, имеющих довольно подробную характеристику. Иммуноглобулин G, по общему признанию, является наиболее активным антителом. Так, по данным Бойда (1969), гаммаглобулины, обозначаемые 7S, проявляют до 85—90% всей активности антител. Иммуноглобулины класса IgG имеют относительно небольшого размера молекулы (микроглобулины) и по 2 активных центра, способных присоединяться к детерминантному участку антигена. Эти антитела обнаруживаются не только в крови, но и в тканевых жидкостях, так как проходят через стенки сосудов. IgG вместе с тем возникают несколько медленнее по сравнению с IgM, но более длительно удерживаются в организме. Есть предположение (Бойд, 1969), что IgG ингибируют биосинтез IgM-антител. Так, например, если в первые дни (7 дней) возникают IgM-антитела, то к 25-му дню количество их постепенно уменьшается вплоть до полного исчезновения и нарастает количество IgG-антител. Важно отметить, что по современному представлению иммуноглобулины класса IgG (7S гаммаглобулин) синтезируются одним из двух типов плазматических клеток, принимающих участие в образовании антител, а другой тип тех же клеток синтезирует иммуноглобулины класса IgM (19S гаммаглобулин). Поэтому антитела обоих классов можно обнаружить в различных тканях иммунных животных.

IgG-антитела участвуют во всех серологических реакциях, которые основаны на соединении антигена с антителом. Однако требуется сравнительно большее количество тысяч молекул IgG-антител, чтобы осуществился феномен реакции агглютинации или реакции связывания комплемента, тогда как IgM-антител для тех же самых показателей требуются единицы молекул. Считается, что IgM-антитела более активны при их анализе в серологических реакциях с микробными антигенами, а IgG-антитела слабее проявляются с микробными антигенами, но более интенсивно с токсинами и другими подобными антигенами.

IgG-антитела имеют 75% тяжелых (относительная молекулярная масса 500 тыс.) аминокислотных цепей и 25% легких (относительная молекулярная масса 200 тыс.) цепей, соединенных между собой в молекулу днсульфиднымн связями. Эти цепи не разрываются при воздействии на них 2-меркаптоэтанолом. Иммунологическая активность этих антител в основном происходит за счет тяжелых цепей, следовательно, в особенности последних могут варьировать показания серологических реакции в зависимости от антигена и методики опыта. Каждый класс иммуноглобулинов имеет различающиеся тяжелые цепи. Например, показана большая разница между тяжелыми цепями иммуноглобулинов классов IgG и IgM.

IgM-антитела представляют собой крупные (относительная молекулярная масса 900 тыс.) молекулы и имеют значительно больше (до 10) активных центров взаимодействия с антигеном. Локализуются они преимущественно внутри сосудов крови. Эти антитела не проходят через плаценту. Поэтому в плодах животных могут быть обнаружены только IgG-антитела.

Практическое значение имеет свойство химического вещества 2-меркаптоэтаиола инактивировать IgM-антитела за счет разрыва дисульфитных связей, соединяющих части молекул. При аналогичной обработке IgG-антител их молекулы не изменяются. На этой основе считают возможным дифференцировать при помощи серологических реакций острую бруцеллезную инфекцию от хронической.

IgM-антитела стимулируются в организме животных только под влиянием грамнегативных бактерий.

По данным Герберта (1974), у крупного рогатого скота обнаруживаются в сыворотке крови 3 класса иммуноглобулинов — IgG, IgM, IgA. Иммуноглобулины класса IgG представлены и двумя подклассами — 1 gG₁ и IgG₂, различающимися по электрофоретической подвижности. Иммуноглобулины второго подкласса более подвижны, чем первого. Тяжелые цени обоих подклассов иммуноглобулинов класса IgG одинаковы. В молозиве обнаруживаются только иммуноглобулины подкласса IgG₁ которые участвуют в реакции связывания комплемента, тогда как иммуноглобулины подкласса IgG₂ в РСК не участвуют. У других животных (лошадей, овец и коз, свиней, а также собак, кошек и птиц) обнаружены иммуноглобулины разных классов и подклассов. Однако для серологии имеют реальное значение в основном иммуноглобулины с константой седиментации 7S (IgG) и 19S (IgM).

Рекомендации Комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ (1971 г.) ограничиваются только двумя вышеуказанными классами иммуноглобулинов для исследований и обозначения в ветеринарной практике. Вместе с тем экспертами отмечено, что у телок после вакцинации их вакциной из штамма № 19 IgM-антитела появляются примерно на 5-й день после иммунизации и достигают максимального значения через 13 дней, в то время как IgG-антитела появляются одновременно с первыми или несколько позднее и достигают максимального значения на 28—42-й день после вакцинации. Напряжение IgM-антител уменьшается, но не всегда исчезает из сыворотки крови вакцинированных животных. Вместе с тем IgG-антитела исчезают из организма скорее, чем IgM-антитела.

После естественного инфицирования в организме появляются IgM — и IgG-антитела, но они резко различаются после вакцинации. Так, например, при бруцеллезе человека IgM-антитела являются основными агглютинирующими антителами, а IgG-антитела — фиксирующими комплемент, но часто не вызывают агглютинации корпускулярного антигена. В крови же крупного рогатого скота и IgM — и IgG — антитела вызывают агглютинацию, т. е. оба антитела агглютинируют корпускулярный антиген РА и способны фиксировать комплемент, т. е. соединяться с экстрактантигеном бруцелл. В крови свиней после их иммунизации вакциной из штамма № 19 IgM-антитела не фиксировали комплемент.

Отмечено, что на показания реакции связывания комплемента влияли следующие факторы: температура фиксации антигена (на холоде или при 37° С), структура антигена, виды сыворотки и класс антигена. Следовательно, при постановке РДСК на холоде можно получить лучшие результаты с одним и тем же классом иммуноглобулинов, чем при связывании комплемента при 37° С (см. РДСК при инфекционном заболевании, вызываемым Br. ovis, и при бруцеллезе).

Имеются сообщения о том, что неполные антитела у животных, вначале вакцинированных вакциной из штамма № 19 или 45/20, а затем инфицированных, обнаруживались дольше, чем агглютинирующие и фиксирующие комплемент антитела. Однако о наличии связи между инфекцией и неполными антителами не сообщается.

У собак, естественно инфицированных Br. canis, в сыворотке крови вначале появлялись IgM-антитела, а затем, через 7—13 дней, появлялись 4 подгруппы IgGS-антител и первые три IgGS-антител агглютинировали корпускулярный антиген.

В борьбе с бруцеллезом сельскохозяйственных животных имеет большое значение ранняя диагностика заболевания. Чем быстрее будут выявлены больные животные, тем раньше можно принять меры по ликвидации заболевания. Серологические реакции отвечают этому требованию более удовлетворительно по сравнению с методами аллергической, биологической и бактериологической диагностики. Диагноз на бруцеллез по реакции агглютинации и реакции связывания комплемента и другим реакциям, основанным на выявлении антител в крови, может быть установлен в близкие и отдаленные сроки после заражения животного бруцеллезом. После внедрения в организм заражающей дозы возбудителя через разные сроки у животных появляются в крови антитела. У крупного рогатого скота, овец, свиней антитела в крови появляются иногда на 5—8-й день после аборта, возникающего на почве генерализованного бруцеллеза. В других случаях в неблагополучном стаде молодняк заражается бруцеллезом в молочном периоде, а антитела в крови появляются через несколько месяцев или уже в период беременности (скрытое бруцеллоносительство). После наступившей бактериемии в крови животных могут быть обнаружены антитела методом РА раньше на 1-2 сут. чем по РСК. При параллельной постановке РА и РДСК эта разница не обнаруживается. Обычно такие случаи бывают на 5—8-е сут после наступившей бактериемии. Следовательно, ранний серологически и диагноз открывает для исследователя только тех зараженных животных, у которых инфекция уже приобретает активную форму. Животные, у которых инфекция находится в состоянии первичной латенции, не обнаруживаются серологическими методами, так как в крови таких животных еще не образовались бруцеллезные антитела. Поэтому важно, чтобы метод диагностики наиболее полно охватывал различные состояния инфекционного процесса, на этапах которого антитела могут быть разными. Например, в период начального развития инфекции обнаруживаются главным образом IgM-антитела, а в последующем — преимущественно IgG-антитела.

Бруцеллез протекает своеобразно почти у каждого в отдельности взятого животного, в зависимости от возраста, пола, беременности, физиологического состояния, вирулентности возбудителя, суперинфицирования и др. Поэтому в одном и том же неблагополучном стаде при возникновении инфекции наблюдаются индивидуумы, резко отличающиеся по времени и напряжению продукции антител. Кроме того, показания одной и тон же реакции выражение колеблются в зависимости от давности течения болезни и степени ее патологического проявления. Так, свежеинфицированные животные реагируют по РА в большем проценте, чем длительно болеющие; истощенные животные могут не реагировать либо реагировать очень слабо по всем реакциям.

Очень большое значение для своевременного распознавания болезнен имеет применяемый метод диагностики. Так, например, бараны, зараженные Br. ovis, в очень большом проценте реагируют по РДСК с экстракт-антигеном Br. ovis (до 95), но по РА они реагируют с корпускулярным антигеном Br. ovis слабо и в очень небольшом проценте (10—15), Эта разница объясняется тем, что клетки Br. ovis не имеют поверхностного бруцеллезного липополисахаридного S-антигена, следовательно, больные животные не имеют IgM-антител. Это положение в известной степени касается и бруцеллезной инфекции, поскольку поверхностно-оболочечный S-антиген сильно подвижен и резко снижается в клетках при диссоциации, происходящей в организме животных после начала бактериемии. Подвижность S-антигена немедленно отражается на степени эффективности отдельных реакций. Так, при параллельном исследовании по РА, РСК, РФ (реакции флокуляции) и КР (кольцевой реакции) сывороток крови крупного рогатого скота мы наблюдали несоответствие показаний от 0,5 до 8%. При этом меньше несовпадающих показаний отдельных реакций было с сыворотками свежеинфицировапных животных. Поэтому является общепризнанным, что при постановке двух, трех, четырех или большего количества реакций выявляется больных животных больше, чем при одной какой-либо реакции.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

источник

Ранее нами была изучена физико-химическая природа специфических антител у людей, больных бруцеллезом, в различные фазы инфекционного процесса с помощью 2 МЭ-теста. Синтез IgM и IgG антител определяли в динамике заболевания (в течение 48 недель). Показано, что в первые недели развития инфекционного процесса выявляются, главным образом, агглютинины класса IgM. Неполные антитела синтезируются уже в ранние сроки и относятся к IgG-антителам. Выраженная клиническая картина у обследованных больных позволяет сделать заключение, что неполные антитела в большей мере, чем агглютинины и гемагглютинины, отражают продолжающийся инфекционный процесс (165).

У людей в острой стадии заболевания с бактериологически подтвержденным диагнозом в сыворотке крови, как правило, выявляются специфические IgG антитела (55,298). Выявление IgG антител авторы связывают с наличием в организме живого возбудителя и, как следствие этого, с усиленной антигенной стимуляцией. У выздоравливающих и у лиц, имевших лишь контакт с возбудителем, по мнению авторов, преобладают IgM антитела. Следовательно, наличие IgG антител в сыворотке крови, по-видимому, может указывать на наличие активности инфекционного процесса (200). Это положение было подтверждено данными других авторов (55,80). У больных острым бруцеллезом в 100% случаев были обнаружены цистеинрезистентные IgG антитела. При хронической форме с давностью заболевания от 3 до 20 лет IgG антитела выявляли в пределах 10% случаев, главным образом, с тяжелым клиническим течением острого бруцеллеза и при декомпенсации хронического (55). В сыворотках крови больных с резидуальным бруцеллезом, а также у лиц со стойким клиническим излечением после острой формы бруцеллеза, IgG антитела, как правило, не выявлялись (53,55,79,177).

Таким образом, острая и подострая форма заболевания характеризуются наличием специфических IgG антител, что может явиться показателем активности инфекционного процесса и косвенно свидетельствовать о наличии возбудителя или его растворимых антигенов в организме. Обнаружение IgG антител в сыворотках больных хронической формой бруцеллеза может быть связано с рецидивом заболевания или суперинфицированием.

Анализируя результаты изучения физико-химической природы специфических антител, выявляемых с помощью обработки сывороток редуцирующими веществами с последующим исследованием их в серологических реакциях, следует отметить, что этот метод позволяет конкретно судить только о синтезе IgG и косвенно — IgM антител. Данный тест не позволяет выявить специфические антитела, относящиеся к IgA и в связи с этим долгое время функция этого класса иммуноглобулинов оставалась не изученной, автоматически считалось, что специфические IgA антитела не играют какой-либо роли при бруцеллезной инфекции (255).

Наиболее информативным методом выявления специфических антител разных классов является метод адсорбции сыворотками (анти- IgG, IgA, IgM) с последующим исследованием в серологических тестах. Используя этот метод удалось выявить не только специфические антитела классов IgM и IgG, но и IgA (328). Однако этот тест технически сложный и оказался непригодным для массовых исследований в системе эпидемиологического надзора за бруцеллезом.

В последние годы большое внимание уделялось иммуноферментному анализу (ИФА) и возможности его использования для диагностики бруцеллеза у животных и людей (119,186,290), а также выявления с его помощью специфических иммуноглобулинов разных классов (IgG,IgA,IgM,IgE). В первую очередь нами были отработаны оптимальные условия ИФА для выявления специфических антител при бруцеллезе у людей и изучена его чувствительность и специфичность.

В данном разделе работы проведены исследования по отработке оптимальных условий ИФА и сравнительное изучение специфичности и чувствительности при различных клинических формах бруцеллеза.

В качестве твердофазного носителя применяли отечественные планшеты для иммунологических реакций (ТУ-64-2-278-79). Для сенсибилизации полистирола испытывали следующие растворимые антигены: 1 — антиген Буавена из штамма В. abortus 19 — ВА; 2 — ЛПС из штамма В. abortus 99; 3 -солевой антиген из штамма В. abortus 99, полученный по методу М. Jones (250).

Для получения пероксидазного конъюгата использовали кроличьи сыворотки против IgG (Н + L) человека с титром реакции преципитации в геле 1:32. Иммуноглобулиновую фракцию, полученную по методу A. Poison с соавт. (293), конъюгировали с пероксидазой хрена типа A, Rz 3,0 (НПО «Биохимреактив», г. Олайне) методом периодатном окислении по М. В. Wilson и соавт. (329) с очисткой конъюгата от свободной пероксидазы на колонке с сефарозой 6В. Концентрация белка в конъюгате 1,2 мг/кг, Rz — отношение оптических плотностей при длинах волн 403 и 280 нм-0,5. Конъюгаты стабилизировали добавлением бычьего сывороточного альбумина (БСА) до концентрации 10 мг/мл, разливали в ампулы и лиофилизировали.

Оптимальную концентрацию антигена, обеспечивающую наибольшую чувствительность реакции, и рабочее разведение конъюгата определяли опытным путем — титрованием положительных и отрицательных сывороток с разными дозами антигена на сорбенте и при разных разведениях конъюгата в шахматном порядке.

Для постановки реакции растворы антигенов в 0,1 М фосфатно-солевом буфере (ФСБ) рН 7,4 и в 0,05 М карбонат-бикарбонатном буфере рН 9,5 в разных концентрации (0,1-100 мкл) вносили в лунки полистироловых пластин в объеме 200мкл. Иммобилизацию проводили 2 ч при 37С или 16 ч при 4 С.

Несвязавшийся антиген удаляли и после 3-4 кратной промывки ФСБ с 0,05% твин-20 в лунки вносили 2-кратные разведения опытных и контрольных сывороток в том же буфере начиная с разведения 1:50. Реакцию взаимодействия антиген-антитело проводили 1ч при 37С с последующей промывкой.

Конъюгат разводили в 50% нормальной бычьей сыворотке в ФСБ. Инкубация с конъюгатом 1ч при 37С. После 4-5 — кратной промывки ФСБ с 0,05%о твин-20 вносили субстрат-индикаторный раствор (0,04%о 0-фенилен-диамина в 0,05М цитратно-фосфатном буфере рН 6,0 с 0,04% Н2Ог) в том же объеме. Через 30 мин реакцию останавливали добавлением 100 мкл Ш. раствора серной кислоты.

При постановке реакции ставили контроли субстрата, сорбции коньюгата на сенсибилизированный антигеном полистирол, реакции с положительной контрольной сывороткой, реакции с отрицательной контрольной сывороткой, специфичности — реакция торможения специфическим антигеном. Результаты учитывали на фотометре фирмы «Flow Laboratories» при длине волны 492 нм. Положительным считали результат, более чем в 2 раза превышающий оптическую плотность (ОП) в лунках с отрицательными контролями, но не ниже 0,2.

При изучении зависимости чувствительности иммуноферментной тест-системы от природы антигена и физико-химических условий его адсорбции принципиальных различий выявлено не было. Все исследуемые антигены полнее адсорбировались в ФСБ рН 7,4, но при одинаковом времени адсорбции оптимальная концентрация для солевого антигена составляла 1-10 мкг/мл, а для антигена Буавена-не менее 10 мкг/мл.

источник

Бруцеллез – это заразно и хроническая бактериальная болезнь, который также известен как болезнь Банга, каменная лихорадка, мальтийская лихорадка, лихорадка Рио-гранде.

Подтверждение бруцеллеза выполняется с помощью определения уровня специфических антител IgG, IgM и IgA. Наличие соответствующего класса антител позволяет дифференцировать свежую или давно перенесенную инфекцию бактерией Brucella.

Brucella – это грамотрицательные неподвижные бактерии, которые являются внутриклеточными паразитами животных. Люди заражаются ими через контакт с инфицированными животными, с их фекалиями, а также через пищу.

Бруцеллез начинается с лихорадки, затем появляется увеличение печени и селезенки, а также лимфатических узлов. Некоторые больные излечиваются силами иммунитета, но и у других болезнь становится хронической. Тогда нападению бактерий подвергся различные внутренние органы.

Для постановки диагноза необходимо обнаружение возбудителя или реакции антител в спинномозговой жидкости или сыворотке крови.

Метод ИФА используется для дифференциации острой и хронической формы бруцеллеза. Исследование также полезно при поиске антител в плазме и сыворотке крови. Также выполнить определение отдельных классов иммуноглобулинов, чтобы определить наличие антигена и определить степень тяжести заболевания. Исследование можно выполнить также в образце спинномозговой жидкости, но это используется реже.

Микротитрационный планшет, покрытый антигенами, добавляют в пробу крови испытуемого. Если в ней есть антитела бруцеллеза для данного антигена, загруженный материал соединяется с антигеном. Затем жидкий материал, а антитела IgG, IgA или IgM бруцеллеза, связанные с ферментом, вступают в реакцию с комплексом антигена.

Избыток конъюгата промывают и добавляют соответствующий субстрат, который вступает в реакцию с сопряженным ферментом. В результате создается красочный продукт. Концентрация антитела пропорциональна интенсивности окраски.

• Антитела IgM. Положительный результат составляет более 20 ед/мл. Результат пограничный – 15-20 ед/мл. Отрицательный результат в случае IgM-антител составляет менее 15 ед/мл.
• Антитела IgG. Положительный результат составляет более 30 ед/мл. Результат пограничный – 20-30 ед/мл. Отрицательный результат составляет менее 20 ед/мл.
• Антитела IgA. Положительный результат составляет более 15 ед/мл. Результат пограничный – 10-15 ед/мл. А отрицательный результат составляет менее 10 ед/мл.

В случае пограничных результатов, исследование должно быть повторено через неделю или две недели позже.

В случае заражения бактерией Brucella сначала появляются антитела IgM бруцеллеза, а только через некоторое время антитела IgG.

Диагноз острого бруцеллеза имеет место, когда исследование выявило антитела IgM, IgG и IgA или только IgM.

Если было применено лечение, в течение 2 — 4 месяцев концентрация IgG, как правило, значительно уменьшается.

Аналогично, концентрация IgM заметно снижается в течение 2-3 месяцев после заражения. В случае хронического бруцеллеза особое значение имеют антитела IgG и IgA. Они свидетельствуют также о давно перенесенном заражении.

Бруцеллез — инфекционно-аллергическое заболевание, возбудителями которого являются бруцеллы. Заболевание имеет довольно обширную симптоматику, но особенно часто оно сопровождается нарушением функций опорно-двигательной, нервной систем, сбоями в работе сердца, развивающихся на фоне общей интоксикации организма.

Пути заражения бруцеллёзом

Возбудителями бруцеллеза являются многоклеточные организмы, для развития которых необходим постоянный доступ кислорода и при этом большая концентрация углекислого газа. Заражение происходит независимо от возраста и пола, попадание хотя бы десяти микробных тел способно вызвать бруцеллез.

Заразиться человек может от домашних животных (коз, свиней, коров, собак). Бруцеллы проникают организм бруцеллы при попадании на слизистые или пораженные участки тела околоплодной жидкости при ягнении или контакте с новорожденными. Также бруцеллезом часто заражаются при работе с инфицированным мясом или при употреблении продуктов из непастеризованного молока.

Бруцеллез у человека – симптомы

На начальном этапе заболевания в период первично-латентной формы бруцеллез протекает практически бессимптомно. Изменения в организме наблюдаются после истечения инкубационного периода, чья продолжительность может составлять от одной недели до пяти. После чего инфекция переходит в остросептическую форму. На этой стадии бруцеллез можно распознать по следующим симптомам:

• лихорадка, сопровождающаяся высокой температурой тела, которая иногда доходит до 40 градусов,
• озноб с повышенным потоотделением,
• усталость, разбитость, головная боль, боль в мышцах.

Поскольку интоксикация организма умеренна, то состояние больного человека считается вполне удовлетворительным. Серьезных изменений в работе внутренних органов не происходит, потому это часто затрудняет диагностику бруцеллеза.

Хронический бруцеллез характеризуется рецидивирующим течением. Проявления интоксикации (температура и озноб) становятся менее выраженными. Обострения болезни чередуются с ремиссиями, которые могут длиться от одного до двух месяцев. Главными симптомами бруцеллеза являются поражения внутренних органов:

• нарушение работы функций нервной системы происходит в виде межреберной невралгии, радикулитов, вегетативно-сосудистая дистония, развитие неврозов,
• наблюдаются урогенитальные патологии, проявляющиеся у мужчин в виде сальпингитов, орхитов, эндометритов, а у женщин в виде сбоя менструального цикла, развитие бесплодия, преждевременные роды.

Спустя какое-то время инфекция теряет свою активность, однако оставляет непоправимые изменения в опорно-двигательной системе.

При обнаружении признаков заболевания для постановки диагноза, кроме анамнеза, необходимо провести некоторые лабораторные исследования. Для этого человеку необходимо сдать анализы на бруцеллез, включающие три вида исследования:

• бактериологическое,
• серологическое,
• аллергологическое.

При бактериологическом анализе на бруцеллез кровь больного изучается на наличие в нем бруцелл. Серологическое исследование изучает кровь на реакцию Райта-Семпла. При аллергологическом методе под кожу вводят бруциллин, и по размерам отека оценивают результат.

Лечение инфекции на латентной стадии состоит в общеукрепляющих процедурах в назначении отдыха и соответствующего режима труда. При легкой степени заболевания больных не изолируют.

Лечение антибиотиками назначают больным при остросептической форме бруцеллеза. При устранении выраженных проявлений проводят вакцинацию.

На хронической стадии лечение имеет общеукрепляющее направление, которое сочетают с вакцинотерапией. Дополнительно больным назначают прохождение физиотерапии.

Биоматериал: Сыворотка крови

Срок выполнения (в лаборатории): 3 р.д. *

Бруцеллез — инфекционное заболевание, склонное к хроническому течению, характеризуется поражением опорно-двигательного аппарата, нервной, половой и других систем. Относится к группе зоонозов. Возбудитель бруцеллеза — бруцеллы — мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии. При постановке диагноза бруцеллеза полученные клинико-эпидемиологические данные должны быть подтверждены лабораторно. С этой целью используются бактериологический и серологический методы исследования. При остром бруцеллезе положительный результат исследования гемокультуры получают в 10-30% случаев (в 62-90%, если возбудитель B. melitensis и в 5-15%, если B. abortus). Культура СМЖ бывает положительной у 45% пациентов с менингитом. При посевах крови, костного мозга, мочи рост чистой культуры бруцелл можно получить через 5-10 суток, а в ряде случаев через 20-30 суток. В связи с этим для диагностики бруцеллеза широкое распространение получили серологические методы.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую не минеральную и не газированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются.

Результат исследования – качественный.

Референсные значения: не обнаружено

Оценка результатов исследования

Для определения антител к возбудителю бруцеллеза в сыворотке крови используется РПГА, посредством которой определяют уровень антител, реагирующих главным образом с липополисахаридными антигенами бруцелл. У большинства больных титры специфических антител в крови повышаются на 3-5-й день от начала заболевания.

При однократном исследовании диагностически значимым титром является 1:160 и выше. Если в первом анализе титр ниже, то необходимо через 7-12 дней взять повторную пробу. Увеличение титров антител в четыре и более раз в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1-4 недели, позволяет идентифицировать этиологический фактор заболевания. Повышенный титр антител выявляется у 97 % больных в первые 3 недели заболевания. Наиболее высокий титр антител наблюдают обычно через 1-2 месяца от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться.

РПГА выявляет антитела к B. abortus, B. suis, B. melitensis, но не к B. canis. Повышенный титр антител может сохраняться у 5-7 % пациентов в течение 2-х лет после перенесенной инфекции. Поэтому метод РПГА не может быть использован для дифференциальной диагностики бруцеллеза с другими инфекционными заболеваниями, при наличии в анамнезе бруцеллеза в течение 2-х последних лет.

Причиной ложноположительных результатов могут служить проведение кожной пробы на бруцеллез, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, иерсиниями, Francisella tularensis. В ряде случаев могут отмечаться ложноотрицательные результаты РПГА у больных бруцеллезом, что объясняется эффектом прозоны или так называемым блокированием антител. При хронических локализованных формах бруцеллеза титры могут быть отрицательными или ниже 1:160. На фоне проводимого лечения титры антител быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. При рецидивах уровень антител снова повышается. Наличие однократного повышения титра антител > 1:160 является надежным объективным указанием на текущую или имевшую недавно место инфекцию. После лечения и выписки больного из стационара рекомендуется проведение серологических исследований в течение первого года через 1, 2, 3, 6, 9, 12 месяцев, а в течение второго года – ежеквартально.

Если при первом исследовании уровень антител ниже или антитела не определяются необходимо исследовать парные сыворотки. При исследовании в парных сыворотках для подтверждения диагноза необходимо исследовать кровь с интервалом в 10-14 дней.

• Brucella melitensis, которая паразитирует в организме мелкого рогатого скота,
• B. Abortus, которая поражает крупный рогатый скот,
• B. Sui, которая вызывает болезнь у свиней, северных оленей, зайцев.

• контактно-бытовой (через повреждения на коже и слизистой),
• фекально-оральный (через зараженные продукты, например, молоко, сыр, мясо),
• аэрогенный.

Источниками инфекции являются зараженные козы, коровы, овцы, свиньи. Это заболевание наиболее распространено в животноводческих регионах, особенно в среднеазиатских странах. Инфекция проникает в организм через ссадины на коже, слизистую оболочку дыхательной и пищеварительной системы, не вызывая изменений в области входных ворот. Далее микроорганизмы разносятся в органы, где много ретикулоэндотелиальной ткани, образуя там гранулемы. Болезнь имеет длительное течение и тенденцию к хронизации процесса.

Выделяют основные клинические формы бруцеллеза

• острая (длится 1,5 месяца),
• подострая (от 1,5 до 3 месяцев),
• хроническая (более 3 месяцев).

Однако больные предъявляют такие основные жалобы

• Сильная боль в суставах ног перемежающегося характера.
• Выраженная слабость.
• Повышенная потливость, иногда в ночное время.
• Температура увеличивается до субфебрильных цифр на длительный промежуток времени, или ее подъемы и падения чередуются (волнообразное течение).
• Микраденопатия – периферические лимфатические узлы слегка увеличиваются в размерах, отмечается незначительная болезненность их при пальпации.
• В мышцах и сухожилиях появляются болезненные плотные узлы (фиброзиты, целлюлиты).

Проводят бактериологическое исследование путем посева пунктата лимфатических узлов, костного мозга, крови на питательные среды. Широко применяется серологическая диагностика, направленная на выявление специфических антител в крови больных.

Реакция Кумбса применяется при хроническом бруцеллезе и направлена на выявление неполных антител. Реакция Райта положительная на 10-е сутки болезни при острой форме недуга.

Широко используется проба Бюрне. Этот анализ на бруцеллез представляет собой внутрикожную аллергическую пробу для оценки сенсибилизации организма к бруцеллам.

• Антибактериальное лечение комбинациями антибиотиков.
• Дезинтоксикационная терапия, иммуностимуляторы.
• Противовоспалительные вещества: стероидные и нестероидные.
• При болях применяют новокаиновые блокады
• Вакцина против бруцеллеза (эффективность низкая).
• При хронической форме: ЛФК, физиотерапия, санаторно-курортное лечение.

Так как бруцеллез имеет тенденцию к переходу в хроническую форму, наблюдение за больными ведется еще 2 года после выздоровления.

источник