Вакцина от бешенства штамм внуково

Бешенство – смертельно опасная инфекционная патология, заразиться которой человек может от больных животных. В условиях города ими являются собаки и кошки, а в сельской местности – лисы, еноты или волки.

Возбудитель патологии – вирус бешенства (или Rabies virus), который со слюной больного животного попадает в кровь человека. Достигая коры головного мозга, зоонозная инфекция вызывает его воспаление. Без своевременной помощи возможен летальный исход. Прививка от бешенства – единственный верный способ спасти жизнь.

Состав и механизм действия культуральной концентрированной очищенной инактивированной сухой антирабической вакцины

Данный препарат не включен в прививочный календарь как обязательный. Его применяют планово или экстренно, когда пострадавший человек сам обращается за медицинской помощью. Антирабическая вакцина – сухая пористая масса беловатого цвета – лиофилизат.

Нужно сказать, что метод лиофилизации – настоящий прорыв в фармацевтике. Его суть в высушивании биоматериала путём замораживания с последующим обезвоживанием.

У лиофилизации есть неоспоримые плюсы:

медицинский материал подвергается минимальной химической обработке, а значит, сохраняются его полезные характеристики;
структура и форма исходного вещества практически не меняются;
увеличенный срок хранения.

Вирус бешенства – первый препарат, который удалось получить таким способом.

У вакцины длинное название, но если разобраться, то всё не так сложно:

антирабическая – буквально значит: «против бешенства»;
культуральная – то есть выращенная на культуре клеток, полученных от животных. В данном случае ими стали сирийские хомячки;
концентрированная – применён метод ультрафильтрации;
очищенная. Базовым компонентом данной вакцины является антиген Rabies virus. В результате высокой очистки он избавляется от инфекционных примесей. Таким образом, препарат становится более безопасным при использовании. В данном случае очистка идёт методом гельхроматографии;
инактивированная. Это значит, что убит целый микроорганизм (а не его фрагмент) с помощью ультрафиолета и формалина.

Вакцина выпускается в ампулах, рассчитанных на одну дозу (1,0 мл). Главный компонент – антиген Rabies virus специфический (штамм «Внуково-32») объёмом 2,5 МЕ. Дополнительные вещества: альбумин, сахароза и желатин. В упаковке имеется 5 ампул с вакциной + 5 ампул с растворителем. Консерванты отсутствуют.

Как действует вакцина? Её задача – вызвать у организма иммунный ответ. Это происходит, когда в кровь проникают чужеродные микроорганизмы. В нашем случае – антигены вируса бешенства. Их попадание в организм создаёт «мнимую» инфекцию.

Мнимую, поскольку вирус в вакцине убит и вызвать настоящее заболевание не способен. Но он побуждает иммунитет вырабатывать защитные антитела. Так начинается борьба с инфекцией.

Организму необходимо несколько дней, чтобы справиться с вирусом. В этот период прививаемый может испытывать лёгкие симптомы заболевания. Когда инфекция побеждена, иммунитет сохраняет так называемые клетки «памяти» (Т и В-лейкоциты).

Если впоследствии в организм проникнут «знакомые» антигены, эти клетки моментально выработают антитела для уничтожения инфекции, а болезнь не разовьётся.

Вакцине от бешенства более ста лет. Но и по сей день – это единственно эффективный способ защиты от смертельной патологии.

Врачи настоятельно рекомендуют обязательную лечебно-профилактическую вакцинацию для:

людей, которые в силу своей профессии постоянно находятся на природе. Это егеря и охотники, рыболовы и лесники;
работников скотобоен;
ветеринарных врачей и лабораторных диагностов, исследующих мозг инфицированного животного;
работников по отлову безнадзорных животных;
владельцев зооприютов;
путешественников, отправляющихся в страны повышенного риска.

Для этих лиц рекомендована плановая вакцинация – раз в 2-3 года.

Показания к профилактической иммунизации зависят от вида контакта с возможно инфицированным животным:

1 категория – прикасание к животным или ослюнение ими неповреждённой кожи. Здесь профилактика не предусмотрена;
2 категория – имеются незначительные царапины или укусы без кровотечения. В этом случае следует незамедлительно и тщательно (10-15 мин.) промыть повреждения, обильно смачивая кожу водой с использованием моющих средств. Требуется срочная вакцинация;
3 категория – множественные и значительные укусы и царапины. Здесь также необходима тщательная обработка ран (желательно йодом) и незамедлительная вакцинация.

Первичной профилактической иммунизации подлежат дети:

проживающие в районах, где риск бешенства высок;
отдыхающие в лагерях;
находящиеся в областях, где антирабические препараты трудно найти или они отсутствуют.

Вакцинация обязательна, если:

состояние животного нельзя отследить;
укус или царапину нанес домашний питомец (непривитый) или дикое животное. В этом случае оно изолируются на 10 дней с целью выяснения наличия инфекции (забор крови на уровень антител), а пациент в это время получает курс из 3-х вакцин. Профилактическую иммунизацию прекращают, когда будет установлено, что животное не инфицировано. Если нет – проводят полный курс;
укус летучей мыши, лисы или волка – условие обязательной вакцинации;
возраст пациента – меньше 10 лет;
укусы в области шеи или головы.

Антирабическую вакцину нужно вводить как можно быстрее – желательно в 1-3 сутки с момента контакта с инфицированным животным. Период инкубации бешенства – 10-90 дней. Жизненно необходимо успеть привиться в этот период. Когда заболевание разовьётся, иммунизация бесполезна.

Непосредственно перед инъекцией медперсонал готовит вакцину. Для этого в ампулу с лиофилизатом (1,0 мл) вводят растворитель (1,1 мл). Готовая инъекция должна быть однородной (без посторонних включений), прозрачной или чуть желтоватой.

Вводится вакцина внутримышечно (1 доза – 1 мл) взрослым и малышам от 2-х лет в дельтовидную мышцу, а детям до 2-х лет – в верхнюю область бедра. Допустимо и внутрикожное введение (1,0 мл/доза). Инъекции в ягодичную область запрещены.

Вакцина считается непригодной к использованию, если:

на ампуле имеются повреждения (её целостность нарушена);
маркировка не просматривается;
цвет и прозрачность изменены;
срок годности истёк.

Прививание ведётся с соблюдением правил асептики. Готовая вакцина «живёт» 5 минут. Её хранение сверх этого времени не допускается.

Перед процедурой пострадавшему оказывают обязательную антирабическую помощь. Раны, царапины и прочие повреждения обрабатывают: обильно промывают водой. Края ранки протирают спиртом (70%) или йодом.

Затем вводят саму вакцину и (если есть показания) антирабический иммуноглобулин. Между инъекциями выдерживают интервал 15-29 мин. Наложение швов на раны стараются не делать.

После процедуры рекомендуется остаться под врачебным наблюдением минут 30. Действие сыворотки от бешенства для человека не слишком длительное и составляет обычно 1-3 года. Далее проводится ревакцинация.

График прививания отличается в случае обычного (планового) курса и при экстренной (безусловной) вакцинации.

Сроки 3-х этапной плановой иммунизации (по 1,0 мл):

первая инъекция. День назначается по ситуации;
7 сутки – вторая прививка;
через 30 дней – третья инъекция.

Ревакцинация показана через 3 года разово по 1,0 мл.

Безусловная вакцинация предполагает 5-ти кратное прививание (1,0 мл/доза):

1 – в день укуса (как можно раньше);
2 – на 3-ий день;
3 – 7-е сутки;
4 – через 14 дней;
5 – на 30-е сутки.

Это стандартный график экстренной иммунизации. В отдельных случаях (для закрепления эффекта) проводят 6-ю инъекцию: в конце 3-го месяца (относительно 1-го прививания).

Помните, что современная вакцинация от бешенства – это уже не 40 уколов в живот, как было раньше (и так многие думают сейчас), а всего 5-6 безболезненных прививок в плечо. Вся вакцинопрофилактика от бешенства в нашей стране бесплатная, даже при отсутствии полиса ОМС.

Любая вакцина (живая или мёртвая) имеет нежелательные последствия. Антирабический препарат – не исключение.

Согласно инструкции, прививаться в профилактических целях не стоит:

беременным;
лицам с обострением хронических патологий. Иммунизация здесь проводится через месяц после ремиссии;
в случае системных аллергических проявлений на предыдущее введение антирабического иммуноглобулина: отёка Квинке, эритродермии и др.;
при ОРВИ и неинфекционных патологиях.

Следует знать, что данные противопоказания справедливы только для плановой иммунизации (до контакта с заражённым животным). Прививка от бешенства – единственная процедура во всём мире, которую проводят независимо от противопоказаний, ведь на кону человеческая жизнь. И это несмотря на то, что препарат даёт побочные проявления.

Вакцинируются даже будущие мамы. Это спасёт и женщину, и малыша. Противопоказанием к плановой иммунопрофилактике является ещё и возраст пациента – до 16-ти лет. Однако и здесь, в случае угрозы заражения, прививание обязательно.

Поскольку антирабическая вакцина – высокоочищенный препарат, осложнений он практически не даёт. Нежелательные проявления обычно носят локальный характер.

Место инъекции может:

Воспаление регионарных лимфоузлов – редкий случай.

Общая реакция проявляется в виде:

тошноты и рвоты;
боли в мышцах;
перепадов температуры и слабости;
крапивницы и головокружения.

Подобная симптоматика не должна вызывать панику. Как правило, эти неприятные проявления не требуют лечения и самостоятельно исчезают через несколько дней.

Побочные действия препарата возрастают при комбинированной вакцинации, когда к основной прививке добавляют антирабический иммуноглобулин.

Более тяжёлая симптоматика проявляется как:

лихорадка;
анафилактический шок;
суставная боль.

Если такие негативные проявления всё же случились, следует немедленно обратиться к врачу. Сообщите ему о своём состоянии, уточните, когда началось осложнение.

Тяжёлых пациентов экстренно госпитализируют.

Когда речь идёт об антирабической прививке пациент и врач понимают, что это не безобидный препарат. Поскольку вакцина создавалась для борьбы со смертельным вирусом, её состав основан на сильных компонентах, ухудшающих состояние прививаемого. Но это временно.

Антирабическую вакцину (5 ампул по 1,0 мл) можно приобрести в аптеке за 2220-2300 руб/упак. Отпускается по рецепту. Стоимость процедуры в платной клинике составит 1000-1100 руб.

Препараты со схожим составом есть как среди отечественных, так и импортных вакцин.

Наиболее популярными признаны ( расчёт за дозу):

Кокав (Россия). Цена: 1720-2300 руб.;
Рабипур. Немецкий препарат. Цена: 2700-3400 руб.;
Индираб (Индия). Цена: 7000-8000 руб.;
Верораб (Франция). Цена: 1100 руб.;
Speeda (Китай) в России не зарегистрирована.

Антирабическая помощь в нашей стране – бесплатная процедура.

Наиболее активны (в плане иммунопрофилактики от бешенства) жители глубинки, где получить своевременную помощь проблематично.

Много положительных откликов и от мам, которые решили вакцинировать своих малышей. Детишки переносят уколы легко, ведь они безболезненны.

Практикующий врач аллерголог-иммунолог о прививке от бешенства человеку:

Вакцинация от бешенства – единственно верный способ сохранить свою жизнь, если произошёл контакт с возможно инфицированным животным или в целях профилактики. При любом подозрении на заражение нужно прививаться, не раздумывая и не оглядываясь на противопоказания.

источник

Инактивированная вакцина для профилактики бешенства (штамм Внуково−32, выращенный в первичной культуре клеток почек сирийских хомяков), иммуногенная активность не менее 0,5 МЕ/мл. Стабилизаторы: желатин — в конечной концентрации до 1%, сахароза — в конечной концентрации до 7,5%, альбумин — в конечной концентрации 0,5%; консервант — канамицина моносульфат (150 мкг/мл). Порошок для приготовления инъекционного раствора в ампулах по 3 мл в комплекте с растворителем (дистиллированная вода) в ампулах по 3 мл, в упаковке 5 комплектов.

Формирует иммунитет к вирусу бешенства.

Показания препарата Рабивак-Внуково-32 Вакцина антирабическая культуральная инактивированная для иммунизации человека

Бешенство (лечебно-профилактическая и профилактическая иммунизация).

Для лечебно-профилактической иммунизации, проводимой по жизненным показаниям, противопоказаний нет. Для профилактической иммунизации: гиперчувствительность, острые инфекционные и общие заболевания, застойная сердечная недостаточность, хронические заболевания почек и эндокринной системы, коллагенозы, бронхиальная астма, беременность, лактация.

Отек в месте введения, краснота, зуд, увеличение регионарных лимфоузлов, недомогание, головная боль, тошнота, незначительное повышение температуры.

П/к, в клетчатку живота вводят немедленно после растворения (растворенная вакцина хранению не подлежит), в исключительных случаях вакцина может быть введена в подкожную клетчатку межлопаточной области). Дозировка и схема иммунизации зависят от показаний.

После введения необходимо наблюдение за привитыми в течение 30 мин (возможность развития аллергических реакций). Не пригоден к применению препарат в ампулах с нарушенной целостностью и маркировкой, при изменении физических свойств (мутность, интенсивное окрашивание, наличие неразбивающихся хлопьев), при истекшем сроке годности, неправильном хранении.

Условия хранения препарата Рабивак-Внуково-32 Вакцина антирабическая культуральная инактивированная для иммунизации человека

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности препарата Рабивак-Внуково-32 Вакцина антирабическая культуральная инактивированная для иммунизации человека

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

Рубрика МКБ-10	Синонимы заболеваний по МКБ-10
A82 Бешенство	Бешенство
	Водобоязнь (гидрофобия)
	Подозрение на бешенство

Оставьте свой комментарий

Текущий индекс информационного спроса, ‰

Регистрационные удостоверения Рабивак-Внуково-32 Вакцина антирабическая культуральная инактивированная для иммунизации человека

Официальный сайт компании РЛС ® . Главная энциклопедия лекарств и товаров аптечного ассортимента российского интернета. Справочник лекарственных препаратов Rlsnet.ru предоставляет пользователям доступ к инструкциям, ценам и описаниям лекарственных средств, БАДов, медицинских изделий, медицинских приборов и других товаров. Фармакологический справочник включает информацию о составе и форме выпуска, фармакологическом действии, показаниях к применению, противопоказаниях, побочных действиях, взаимодействии лекарств, способе применения лекарственных препаратов, фармацевтических компаниях. Лекарственный справочник содержит цены на лекарства и товары фармацевтического рынка в Москве и других городах России.

Запрещена передача, копирование, распространение информации без разрешения ООО «РЛС-Патент».
При цитировании информационных материалов, опубликованных на страницах сайта www.rlsnet.ru, ссылка на источник информации обязательна.

Не разрешается коммерческое использование материалов.

Информация предназначена для медицинских специалистов.

источник

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

ИНСТИТУТ ПОЛИОМИЕЛИТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ им. М.П.ЧУМАКОВА

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВИРУСА БЕШЕНСТВА. ШТАММА ВНУКОВО-32 В КУЛЬТУРЕ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Работа выполнена в Уфимском научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова Государственного предприятия НПО «Иммунопрепарат».

Научный руководитель: кандидат медицинских наук, вед.н.сотр. Р.С.Шафеева

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор, чл.-корр. РАЕН ТА.Бектимиров

Ведущая организация: Институт вирусологии имени Д.И.Ивановского РАМН

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, ст.н.сотр., В.В.Хозинсюш; доктор биологических наук, профессор В.В.Гуненков

Защита состоится: » М » /¿Л1! 1997 г. в ^ час. на заседании диссертационного совета Д.001.27.01 при Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН по адресу: 142782, Московская область, Ленинский район, п/о Институт полиомиелита.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П.Чумакова РАМН.

Автореферат разослан » ^» ¡уСс^с-^^и^^ 1997 г

Ученый секретарь специализированного совета

кандидат биологических наук О.А.Медведкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуалыгость проблемы. Бешенство остается постоянной угрозой для человечества во многих частях света. Ежегодно регистрируется более 30000 случаев смерти от бешенства и 4 млн. человек требуется постэкспозиционное лечение более чем в 80 странах, где болезнь существует в наиболее опасном резервуаре инфекции среди собак (М.А. Селимов, 1965-1975; Vodopija Ivan, 1988; WHO, 1994).

По сводным данным ВОЗ в 1989 г. в мире отмечено 1670 вирусологически подтвержденных случаев бешенства у людей. За период с 1977 по 1990 г.т. в Европе зарегистрировано 108 случаев бешенства людей в 14 странах (Dtsch. Artebl., 1994). Заболеваемость этой инфекцией на 100 тыс. населения в России возросла с 1981 г. по 1991 г. в 2 раза. Ежегодно в стране прививается от бешенства около 200 тыс. человек (обращаемость составляет около 130 на 100 тыс. населения в год) (М.А.Величко, 1994).

Единственным методом предупреждения и лечения этого заболевания по-прежнему являются антирабическая вакцина и рабический иммуноглобулин. Поэтому необходимость усовершенствования и разработки новых эффективных и безопасных антирабических вакцин является наиболее реальным путем улучшения антирабической помощи.

Многочисленными исследованиями подтверждено, что в сравнении с мозговой вакциной и вакциной, приготовленной на куриных или утиных эмбрионах, культуральная вакцина на первичных клетках почек сирийского хомяка или диплоидных клетках человека является более безопасным препаратом (М.А.Селимов с соавт., 1965-1974; В.М.Морогова с соавт., 1980, 1981; P.Fenje, 1960; Y.Crick, F.Brown, 1970; S.Sehgal, 1992).

Культуральная вакцина на первичных клетках почек сирийского хомяка, впервые лицензированная в нашей стране для лечебной иммунизации человека, изготавливается с 1974 г. в ИПВЭ АМН СССР и с 1976 г. в НПО «Иммунопрепарат» (г.Уфа). Многолетними наблюдениями подтверждена ее высокая эффективность и хорошая переносимость при

профилактическом лечении многих тысяч людей, укушенных явно бешеными животными (М.А.Селимов, 1986).

Однако в свете последних практических достижений в области биотехнологии клеток животных, в качестве субстрата для изготовления противовирусных инактивированных вакцин приоритет отдается перевиваемым гетероплоидным клеткам. Их применение позволяет накапливать вируссодержащий материал с большим инфекционным титром и в больших количествах, а приготовленная вакцина, как правило, является более безопасной и имеет более низкую себестоимость (B.Y.Montagnon et al., 1981, 1983; R.E.Spier,1992; WHO, 1994).

Целью нашего исследования являлось изучение возможностей культивирования вируса бешенства штамма Внуково-32 в культуре перевиваемых клеток Vero для производства антирабической вакцины. Задачи исследования:

1. Подбор субстрата перевиваемой клеточной линии для успешной репродукции вируса бешенства штамма Внуково-32.

2. Адаптация штамма Внуково-32 к культуре гетероплоидных клеток зеленой африканской мартышки Vero.

3. Изучение репродукции штамма Внуково-32 при различных методах культивирования в культуре клеток Vero.

4. Поиск оптимальных условий суспензионного метода культивирования штамма Внуково-32 в культуре клеток на отечественных микроносителях.

5. Масштабирование процессов культивирования вируса бешенства, штамм Внуково-32, в культуре клеток Vero.

6. Получение экспериментальных серий антирабической вакцины в культуре клеток Vero на отечественных микроносителях.

Научная новизна и практическая значимость: — впервые изучена репродуктивная активность штамма Внуково-32 в перевиваемых клетках Vero, культивируемых различными методами (стационарным, роллерным, псевдосуспензионным);

впервые определены оптимальные параметры культивирования клеток Vero и вируса Внуково-32 на отечественных микроносителях;

впервые определены оптимальные условия крупномасштабного культивирования вируса бешенства Внуково-32 в псевдосуспензионной культуре;

— разработана технология получения антирабической вакцины из штамма Внуково-32 на псевдосуспензионной культуре клеток Vero.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены в докладах на конференции «Культивирование клеток животных и человека» в г.Пущшю. Результаты. исследований были доложены на. международном симпозиуме «Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине» (Уфа, 1995) и международной конференции «Настоящее и будущее вакцинологии» (Уфа, 1996).

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Уфимского НИИВС им.И.И.Мечникова. По материалам работы составлена и утверждена Инструкция по изготовлению и контролю препарата «Вакцина антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная сухая на перевиваемых клетках».

Дисссертация апробирована на заседании Ученого Совета Уфимского НИИ ВС им. И.И.Мечникова.

Публикация результатов исследований. Материалы исследований отражены в 9 публикациях. По способу получения вирусного материала подана заявка ГР № 94043360 и получено положительное решение о выдаче патента РФ от 22.01.96.

Объем и структура работы. Работа состоит из введения, обзора литературы (3 главы), описания материалов и методов (1 глава), раздела собственных исследований (4 главы), обсуждения полученных результатов и выводов. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 таблицами, 5 рисунками и 14 фотографиями. Библиографический указатель содержит 77 отечественных и 100 иностранных литературных источников.

КЛЕТКИ И СРЕДА. В работе использовали гетеро-плоидные перевиваемые клетки почек зеленой африканской мартышки Vero, полученные из Российской коллекции клеточных культур (Институт цитологии РАН, г. Санкт-Петербург) на уровне 153 пассажа. В качестве ростовой среды использовали среду Игла MEM с 7% инакгивированной гыворотки крупного рогатого скота (СКРС) и добавлением канамицина в концентрации ЮОмкг/мл. Культивирование клеток на микроносителях проводили при 37° С в силиконизи-рованных ферментерах фирмы Techne вместимостью Зл и Юл, а также в ферментерах вместимостью 50л, изготовленных в Институте медицинской биотехнологии МЗ СССР. Жизнеспособность клеток определяли методом включения трипанового синего (Р.Адамс, 1983).

МИКРОНОСИТЕЛИ. В качестве микроносителей использовали Цитолар-1 и Цитолар-2 производства НПО «Биолар» (г.Олайнс, Латвия). Микроносители применяли в концентрации 3-5 мг/мл.

ВИРУС. Использовали вакцинный штамм культурального вируса бешенства Внуково-32, применяемый в производстве культуральной антирабической вакцины на первичных клетках почек сирийского хомяка. Заражение клеток проводили в монослой и во взвесь. Контакт клеток с вирусом составлял 1,5 ч при (20 + 2)° С. Множественность инфекции составляла 0,001-0,1 ЛДзо/клетку. На 3-й день проводили смену ростовой среды на поддерживающую, в качестве которой использовали среду 199 с добавлением 0,1% человеческого сывороточного альбумина (ЧСА). Сборы вируссодержащей жидкости проводили каждый день. Перед сбором контролировали качество монослоя на микроносителях.

ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ. Работа проведена совместно с И.Б.Ишкильдиным в лаборатории физических методов исследований Уфимского НИИВС им. И.И.Мечникова. Препараты исследовали с помощью электронного микроскопа JEM-100B фирмы JEOL (Япония)

при инструментальном увеличении 20000-25000Х, просматривали не менее 5-6 ячеек предметной сетки. Для фотографирования объектов применяли фотопластинки для ядерных исследований типа «МК» и «MP».

ЖИВОТНЫЕ. Использовали в работе кроликов породы шиншилла массой 2,0-2,5 кг, беспородных белых мышей для титрования вирусного материала массой 6-8 г, контроля имму-ногенности и антигенности массой 10-12 г, безвредности -16 г. Животных получали из питомника лабораторных животных Уфимского НИИВС им, И.И.Мечникова.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОГО ТИТРА. Инфекционный титр вирусного материала на всех этапах работы проверяли путем интрацеребрального заражения мышей десятикратными разведениями вируса в объеме 0,03 мл. За мышами наблюдали 21 день. Гибель мышей учитывали с 5 дня. ЛД50 вируса определяли по Reed и Muench (1938).

Контроли экспериментальных серий проводили в соответствии с ФС на культуральную антирабическую вакцину инактивированную сухую и приказом Минздрава СССР N31 от 13.01.83 г.

Определение глюкозы проводили О-толуидиновым методом согласно приказу МЗ СССР № 290 от 11.04.72.

ИНАКТИВАЦИЯ ВИРУСА. Инактивацию концентрированного очищенного культурального вируса бешенства, после добавления к нему стабилизатора — 1% желатозы и 7,5% сахарозы, проводили на аппарате-иррадиаторе УФ-лучей конструкции Уфимского НИИВС им. И.И.Мечникова.

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ. Изучение иммуногенной активности проводили на мышах по методу национальных институтов здоровья, США (Методы лабораторных исследований бешенства, Женева, 1975, с.275). В качестве референс-препарата использовали отраслевой стандартный образец, полученный из НИИСК медицинских биологических препаратов им. ЛЛ.Тарасевича, приготовленный на основе штамма Внуково-32 фиксированного вируса бешенства.

Оценку антигенных свойств вакцины осуществляли с помощью реакции нейтрализации (РН) на мышах по общепринятой методике (А.К.Шубладзе, С.Я.Гайдамович, 1954)

я реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритроцитарным диагностикумом, полученным в нашей таборатории Р.Г.Латыповой, Р.С.Шафеевой, В.М.Мороговой ;1980).

Антигенную активность вируссодержащего материала эпределяли с помощью иммуноферменной тест-системы для выявления антигена вируса бешенства, выпускаемой малым предприятием «Диагност» при Омском НИИ природноочаговых 1шфекш1Й.

Статистическую достоверность разницы между сравниваемыми результатами средними индексами имму-ногенности и титрами вируссодержащей жидкости проводили путем вычисления показателя t Стьюдента-Фишера. При оценке достоверности результатов пользовались руководством И.П.Ашмарина и А.А.Воробьева ( 1962 ).

Общеизвестно, что одним из нежелательных контаминатов вакцин, полученных в клеточных культурах, является сыворотка, добавляемая в ростовую, а иногда и в поддерживающую среду. Поэтому усилия разработчиков направлены либо на снижение концентрации сыворотки в среде, либо замены ее на ростовые факторы.

На первых этапах нашей работы мы провели исследования, направленные на снижение содержания сыворотки крупного рогатого скота (КРС) в среде культивирования клеток Vero. Для этого мы постепенно снижали содержание сыворотки КРС с 10% до 7%. Коэффициент прироста клеток при этом не изменился и составил 6,2-6,4. Кроме того, мы изучили возможность культивирования клеток Vero в среде с 1% сыворотки КРС с одновременным добавлением панкреатического гидролизата казеина-14 (ПГК-14) в комплексе с поливинилпирролидоном (ПВП). В результате 10 серийных пассажей, проведенных различными способами культивирования клеток Vero, индексы пролиферации клеток не изменились по сравнению с контролем. Использование ПГК-14 в комплексе с ПВП позволяет снизить содержание сыворотки КРС в питательной

среде в 10 раз, что дает большие преимущества в производстве иммунобиологических препаратов.

Пролиферация клеток Vero при культивировании в среде с 1% СКРС и ростовыми добавками

Способ культивирования клеток Индексы пролиферации клеток

Игла МЕМ+1%СКРС+ ПВП+ПГК-14+ХХ Игла МЕМ+10%СКРС

С целью удаления высокомолекулярных белков сыворотки, не связанных с ростовыми свойствами, мы провели фильтрацию ее через мембрану с порогом отсечения по молекулярной массе 300 кД и затем культивировали клетки Vero в среде с добавлением 7% фильтрата сыворотки КРС. Результаты, полученные после 10 серийных пассажей, свидетельствуют о возможности использования фильтрата сыворотки КРС с сохранением ростовой активности для клеток Vero.

Изучение ростовых свойств различных фильтратов сыворотки КРС при культивировании клеток Vero

Среда количество коэффициент

1. Игла МЕМ+фильтрат-25 (мембрана с порогом отсечения 25 кД) 1 —

2. Игла МЕМ+фильтрат-100 2 2,0-3,0

3. Игла МЕМ+фильтрат-300 10 6,0-6,2

Таким образом, нами показана возможность культивирования клеток Vero в среде с уменьшенным

количеством сыворотки КРС в питательной среде или фильтрата сыворотки КРС.

В процессе исследования мы провели опыты по адаптации культурального вируса бешенства Внуково-32 на уровне 35 пассажа на клетках почек сирийского хомяка с титром 5,0 lg ЛД50/о,оз мл к культуре гетероплодных клеток Vero. После 20 серийных пассажей в процессе адаптации инфекционный титр вируса повысился с 4,5 lg ЛД50/МЛ до 8,0 lg ЛД50/МЛ. Определение специфической активности вируса в тесте связывания антител на мышах показало увеличение ее в 3-4 раза. Индексы антигенности при этом на уровне 10, 20 и 30 пассажей составили соответственно 0,5, 1,6 и 1,9 против 150 ЛД50 фиксировано«) вируса бешенства CVS.

При выращивании вируса бешенства Внуково-32 в линии клеток Vero ни в одном из опытов не было обнаружено цитопатического действия вируса. Следовательно, размножение вируса в клетках Vero проходило по типу хронической инфекции. При исследовании культуры клеток Vero методом флуоресцирующих антител в цитоплазме клеток обнаруживался специфический антиген в виде ярких желтовато-зеленых включений.

Результаты электронномикроскопического контроля адаптированного к клеткам Vero вируса бешенства Внуково-32 показали, что в процессе адаптации не происходит морфологических изменений вирионов бешенства. Размножение вируса происходит без задержки зрелого вируса в клетках. Формирование вирионов происходит в основном в матриксе.

С целью повышения титра штамма Внуково-32 в культуре клеток Vero определяли оптимальные значения температуры и времени адсорбции. Наиболее высокое накопление вируса было отмечено при продолжительности адсорбции до 120 мин и температуре +22° С. Понижение температуры до +4° С или повышение до +37° С и сокращение времени адсорбции приводили к удлинению сроков накопления вируса и снижению урожая вируса.

Накопление вируса бешенства Внуково-32 в клетках Vero при различных условиях адсорбции

Температура адсорбции Время адсорбции, мии Тптр вируса, lg ЛД50 /мл День с момента заражения

Изучение размножения вируса бешенства Внуково-32 при различной температуре инкубации показало, что наиболее активно вирус размножался при +32° С и +37° С. Существенных различий в накоплении вируса при +32° С и +37° С нами не выявлено. Снижение температуры инкубации до +22° С приводило к удлинению сроков максимального выхода вируса.

Изучение размножения вируса бешенства Внуково-32 в культуре клеток Vero в зависимости от неличины его заражающей дозы показало, что наибольшее накопление вируса в культуральной жидкости достигается, когда заражающая доза вируса составляет 0,001-0,1 ЛД50 на клетку. Инфекционный титр вируса при этом достигал 8,0 Ig ЛД50/МЛ- Использование высокой концентрации вируса (до 10 ЛД50) не способствовало более интенсивному накоплению вируса в среде, что, видимо, объясняется превышением в популяции количества интерферирующих частиц над инфекционными и в целом приводит к снижению инфекционного титра. Влияние множественности инфекции 0,001-0,1 ЛД50 на клетку на динамику и сроки максимального накопления вируса бешенства в линии клеток Vero нами не обнаружено.

Рост требований к качеству вирусных вакцин предполагает усовершенствование методов культивирования клеток, подразумевающее более жесткий контроль процесса культивирования (van Wezel A.L., 1978; Грачев В.П. с соавт., 1983,1985). Принципиальный шаг в этом направлении был связан с переходом к суспензионному культивированию. Согласно литературным и экспериментальным данным (D.W.Levine et al., 1978; BJ.Montagnon et al., 1981,1983; Nilsson Kjell, 1988; Leist C.H. et al., 1990) этот метод имеет наиболее высокие характеристики использования питательной среды, продуктивности клеток в накоплении вируса и наиболее реальные перспективы усовершенствования.

Мы провели серию исследований по изучению размножения вируса бешенства Внуково-32 в клетках Vero, культивируемых различными методами (стационарный, роллерный и псевдосуспензионный). Сравнительное изучение накопления вируса показало, что при роллерном и псевдосуспензионном методах максимальный титр вируса был выше и составил 8,0 lg ЛД50/МЛ.

Инфекционный ТИТр, Ig ЛД50/МЛ

(По оси ординат: инфекционный титр вируса в ДД50/МЛ. а-культивирование в монослое; Ь-культивирование в роллере;

с-культивирование на микроносителях в биореакгоре.)

Установлено, что динамика накопления вируса бешенства Внуково-32 не отличалась при культивировании клеток Vero различными способами и графически представляет собой кривую, имеющую два максимума накопления вируса. Наши данные подтверждаются работами других авторов на культурах клеток 455, Vero, 4647 (Аксенова Т.А. с соавт,, 1991).

Изучение способа заражения клеток Vero (в монослой и во взвесь) для различных методов культивирован™ не выявило преимущества какого-либо из них. Антигенная активность вирусного материала, полученного разными методами культивирования, не отличалась. Индексы антигешюсти составили в среднем 2,0 против 158 ЛД50 стандартного вируса С VS.

Накопление вируса бешенства, штамм Внуково-32, при различном способе заражения клеток

Способ заражения Инфекционный титр, lg ЛДед/мл

стационарный метод роллерный метод на микроносителях в ферментере

в монослой 5,7 ±0,3 7,2 + 0,5 7,0 ± 0,6

во взвесь ‘ 6,0 ± 0,5 7,1 ±0,4 7,5 ±0,5

Таким образом, при прочих равных условиях псевдосуспензиониый метод получения вирусного материала выгодно отличается от стационарного и роллерного. Этот метод позволяет значительно увеличить поверхность для роста клеточного монослоя, обеспечить постоянство условий культивирования системы вирус-клетка, снизить расход питательных сред и сывороток, повысить производительность труда. Так, на одной частице микроносителя диаметром 160-280 мкм могут поместиться 350-630 клеток. При этом в 1 мл среды можно суспендировать несколько тысяч частиц микроносителей, общая ростовая поверхность которых составляет от нескольких квадратных сантиметров до 48 см2/мл. В 1 л культуры на микроносителях можно получить такое же количество клеток, как в 100-150 матрасных колбах объемом 1,5 л или 400-

530 чашках Петри диаметром 100 мм (Грачев В.П.. Завальный М.А., 1983).

Результаты работы, проведенной в нашей лаборатории, свидетельствуют о возможности накопления вируса бешенства в 3, 10 и 50 л биореакторах на клетках Vero псевдосуспензионным методом для приготовления антирабической вакцины.

Сравнительное изучение репродукции вируса бешенства Внуково-32 в культуре клеток Vero при использовании трех типов микроносителей (Cytodex 1, Цитолар 1 и Цитолар 2) показало, что отечественные микроносители Цитолар могут применяться с той же степенью эффективности, как и зарубежные микроносители Cytodex 1. Нами установлено наличие прямой пропорциональной зависимости между исходной концентрацией клеток во взвеси, временем генерации и инфекционным титром вируса.

Наиболее оптимальными условиями для накопления вируса в псевдосуспензионной культуре клеток Vero явились: посевная доза клеток-2,0х105 кл/мл, множественность инфекции-0,01 ЛД50/КЛ, концентрация микроносителей Цитолар 2-3 мг/мл. Инфекционный титр вируса при этом варьировал от 7,1 lg ЛД50/МЛ до 8,0 lg ЛД50/мл.

Для наилучшего прикрепления клеток к микроносителям и увеличения урожая вируса в процессе культивирования важен режим перемешивания суспензии. Мы отработали оптимальные режимы вращения магнитной мешалки для 3, 10 и 50 л биореакторов. Интенсивность и время перемешивания взвеси зависели от объемов биореакторов. Для 3 л биореактора оптимальным режимом работы являлось периодическое перемешивание со скоростью вращения мешалки 25 об/мин в течение 1 мин, остановка — 30 мин в первые 4-5 суток с последующим постоянным перемешиванием со скоростью 30 об/мин. Для 10 и 50 л биореакторов перемешивание проводили 5 мин со скоростью 25 об/мин, остановка — 90 мин и далее время покоя уменьшали ежесуточно на 30 мин.

Динамика репродукции вируса при переходе объема биореакторов от 3 л к 50 л сохранялась. С целью оптимизации процесса получения вирусного материала в большом объеме и с высоким инфекционным титром мы производили подсев в

биореактор свежей порции зараженных вирусом клеток. По данному способу подана заявка ГР №94043360 с решением о выдаче патента РФ от 22.01.96.

Полученный псевдосуспензмонным методом вирусный материал обладал высокой антигенной и иммуногенной активностью. Индексы антигенности в тесте ИФА и в тесте связывания антител на мышах соответственно были 1,8 и 2,0 против 158 ЛДзо вируса CVS. Индексы иммуногенности колебались от 3,6 до 15,0 против 50-100 ЛД50 вируса CVS при контроле общепринятым тестом NIH США.

Специфическая активность вируса бешенства Внуково-32 при суспензионном культивировании в клетках Vero на микроносителях (тест связывания антител — па мышах)

культи- ный титр, тво анти- Тест связывания антител

ния МЕ/мл индекс антигенности доза вируса, лд™

Одним из требований, предъявляемых к инактиви-рованным вакцинам, приготовленным на перевиваемых клеточных линиях, является отсутствие биологически активных макромолекул в препарате, в том числе и клеточной ДНК. По данным A.L.Weze] el al. (1982) и B.J.Montagnon et al. (1985) количество клеточной ДНК в неочищенной культур альной жидкости после разрушения зараженных вирусом полиомиелита клеток Vero составляло 0,28 мкг/мл и от 5 до 100 мкг/мл соответственно. Контроль на содержание остаточной

клеточной ДНК вирусных проб, приготовленных псевдосуспензионным методом, проведен нами совместно с В.В.Блохой в НИИСК медицинских биологических препаратов 1Ш.Л.А.Тарасевича. Количество клеточной ДНК в пробах колебалось в пределах 800-4000 пг/мл. С помощью гель-фильтрации на сефарозе 4В и протамин сульфата очищали суспензию вируса бешенства и снизили концентрацию остаточной ДНК до 32-64 пг/мл.

Очистка суспензии вируса бешенства Внуково-32 гелъ-филътрацией на сефарозе 4В

Вирусный материал Методы очистки Степень очистки Концентрация остаточной ДНК, пг/мл

концентрат вируса Уф+Дф 2 320-800

концентрат вируса Гх.сеф. 12-25 32-64

концентрат вируса Уф+Дф+Сеф. 25-50 32

Очистка концентрата вируса Внуково-32 от клеточной ДНК обработкой протамин сульфатом

Вирусный материал Содержание клеточной ДНК в пг/мл при концентрации протамин сульфата

до обработки 1мг/мл 5мг/мл 10мг/мл

концентрат вируса 800-4000 128 64 32-64

инфекционный титр вируса, Ы ДД^/мл 8,0-8,5 8,0 8,0 8,0

В процессе исследований мы показали возможность масштабирования псевдосуспензионного метода накопления вируса бешенства Внуково-32 в клетках Vero при переходе от Зл к 50 л биореактору. В процессе масштабирования проводили последовательное наращивание клеточной массы в 3, 10 и 50 л биореакторах путем снятия клеток с частиц микроносителей Цитолар 2 аналогично процедуре снятия клеток для монослойных культур. Снятые с микроносителей клетки со свежей порцией носителей загружали- в биореактор и проводили дальнейшее субкультивирование. Визуальный контроль проб и подсчет клеток в камере Горяева показали сохранение ростовой активности последних и хороший уровень формирования монослоя на носителях ( до 80% ).

Таким образом, в нашей работе мы показали возможность получения эффективного препарата КОКАВ да вирусного материала, полученного псевдосуспензионным методом на отечественных микроносителях Цитолар 2, используя фиксированный вирус бешенства Внуково-32 и культуру перевиваемых клеток Vero.

1. Установлена возможность выращивания перевиваемой клеточной линии Vero в малосывороточной среде, что достигается в результате:

a) снижения содержания СКРС (сыворотки крупного рогатого скота) до 7% в ростовой среде;

b) снижения содержания СКРС до 1% в среде при добавлении в качестве ростовых добавок 5% ПГК-14 (панкреатического гидролизата казеина-14), 2% ПВП (поливинилпирролидона) и 50 мг/л XX (холинхлорида);

c) использование фильтрата СКРС (мембрана с порогом отсечения по молекулярной массе 200-300 кД ).

2. Получен вариант фиксированного вируса бешенства Внуково-32, адаптированный к гетероплоидной перевиваемой линии клеток Vero и сохраняющий морфологию и специфическую активность исходного штамма.

3. При сравнительном изучении репродукции вируса бешенства Внуково-32 в культуре клеток Vero при разных способах их культивирования установлено преимущество псевдосуспензионного метода.

4. Установлены оптимальные условия получения вирусного материала при псевдосуспензионном культивировании зараженных вирусом клеток в биореакторах объемом 3, 10 и 50 л на микроносителях Цитолар 2: посевная концентрация клеток — 2x10s кл/мл, концентрация микроносителей — 3 мг/мл, множественность инфекции — 0,001-0,1 ЛДзо/кл.

5. Изучение специфической активности вируссодержащей жидкости, полученной в биореакторах на микроносителях, показало высокую антигенную и иммуногенную активность • вируса. Индексы антигенности в тесте ИФА и связывания антител соответственно были 1,8 и 2,0 против 158 ЛД50 вируса CVS. Индексы иммуногенности колебались от 3,6 до 15,0 против 50-100 ЛД5о вируса CVS при контроле общепринятым тестом NIH США.

6. Показана возможность получения эффективной концентрированной очищенной культуральной инакгивированной антирабической вакцины из вирусного материала, при использовании нового клеточного субстрата перевиваемой гетероплоидной линии Vero и фиксированного вируса бешенства Внуково-32.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

источник

Бешенство – опасный смертельный недуг из группы зоонозов, который развивается при ослюнении или укусе больным животным. Болезнь проявляется возбуждением, судорогами, боязнью воды, нарушением работы нервной системы и дыхания, обильным слюноотделением. Основным источником заболевания выступают дикие (лисы, ежи, волки, кабаны) или домашние (собаки, кошки, овцы) животные.

После укуса рекомендуется срочно обратиться в больницу, для получения первой медицинской помощи и введения профилактической антирабической вакцины из инактивированной культуры штамма вируса бешенства — Рабивак-Внуково-32.

Прививка выпускается в форме лиофилизата для приготовления раствора для подкожного введения в область живота или межлопаточный промежуток. Форма выпуска: флакон с белым порошком.

Состав одной дозы (0,5 МЕ – международные единицы) следующий:

Инактивированный штамм вируса «Внуково-32».
Желатин.
Альбумин.
Канамицина моносульфат.

В упаковке находится 5 комплектов: пять флаконов (по 3 мл каждый) с растворителем (дистиллированная вода) в ампулах по 3 мл.

Перед введением препарата рекомендуется провести первичную хирургическую обработку раны.

Благодаря наличию в составе вакцины инактивированной культуры штамма вируса бешенства, формируется стойкий и специфический иммунитет. При попадании в организм человека вакцина запускает каскад реакций, направленный на формирование защитных сил организма. Активируется, как клеточная (группа активных лейкоцитов), так и гуморальная (в виде антител) цепочка. Максимальная концентрация защитных клеток наблюдается на 45 день после применения и сохраняется на протяжении года. На территории с широким распространением бешенства прививку осуществляют ежегодно.

Экстренная профилактика обеспечивает быстрое нарастание количества лимфоцитов и антител, благодаря частому введению препарата.

Бешенство поражает людей всех возрастных категорий. Но выделяют лиц, которым показано введение Рабивак-Внуково-32:

Жители эндемических территорий по гидрофобии.
При подозрении болезни у человека.
Людям после укуса больного животного (экстренная профилактика).
Работники лабораторий, ветеринары, зоотехники, охотники, егеря – профессиональная деятельность сопряжена с риском заболевания.
Контакт с больным животным (при ослюнении человека носителем).

Специальная подготовка перед введением препарата не требуется.

Совет врача! После укуса животного необходимо провести экстренную профилактику в кратчайшие сроки. При соблюдении схемы введения, формируется стойкий иммунитет и вирус обезвреживается. В данном случае обязательное присутствие врача-инфекциониста. Он назначит схему и сроки прививания вакциной, которые индивидуальны и специфичны в каждом случае. Не стоит откладывать визит к специалисту

Флакон, в котором содержится 0,5 МЕ, растворяют в 3 миллилитрах воды для инъекций. Готовый раствор сохраняют не больше 20 минут после приготовления при комнатной температуре. Вводят подкожно в жировую прослойку живота или межлопаточную область (при наличии повреждений или травм на передней брюшной стенке). Запрещено вводить в область ягодиц и местах прохождения крупных сосудов.

Схема проведения вакцинации (совместно с введением антирабического иммуноглобулина) изображена в таблице:

Характер контакта (видимые укусы или ослюнения)

Данные о больном животном

Отсутствует повреждение кожи и слизистых оболочек, нет ослюнений

Не применяется ни введение иммуноглобулинов, ни Кокава

Наличие ослюнений и неповрежденных слизистых оболочек и кожи, поверхностные укусы (исключая область головы, шеи, лица, кистей и стоп)

В течение 10 дней наблюдения животное без признаков бешенства – лечение прекращают (проведено 3 инъекции).

При наличии лабораторного подтверждения отсутствия заболевания – лечение прекращают с момента подтверждения.

Во всех случаях, когда невозможно установить десятидневное наблюдение (животное умерло или убежало) – продолжать весь курс лечения по стандартной схеме

Немедленно начать лечение: Кокав 1 мл в 0; 3; 7; 14; 30; 90 день заболевания

При ослюнении слизистых оболочек; укусах головы, шеи, стоп и кистей; глубоких и рваных ранениях; повреждения и ослюнения, нанесенные дикими животными

В течение 10 дней наблюдений животное без признаков гидрофобии – лечение прекращают (проведено 3 инъекции).

Во всех случаях, когда невозможно установить десятидневное наблюдение (животное умерло или убежало) – продолжать весь курс лечения по схеме

Комбинированное лечение антирабическим иммуноглобулином с дня заболевания и Кокав по одному миллилитру в 0; 3; 7; 14; 30; 90 день болезни

Людям, которым была проведена иммунизация менее года назад, назначается курс профилактики с введением трех доз по 3 мл на 1-й; 3-й и 7-й день после обращения в медицинское учреждение.

Важно! Иммунизация проводится со строгим соблюдением правил и сроков введения. При применении схемы организм человека формирует стойкий иммунитет и обезвреживает вирус бешенства в кратчайшие сроки. Каждый случай – индивидуальный и особенный. Врач сумеет распознать риск болезни и принять верное решение в короткие термины

Препарат вводится подкожно в область передней брюшной стенки или межлопаточное пространство. Первичная иммунизация проводится в 0; 7 и 30 дни по 3 мл. Через год повторно – 3 миллилитра разово. Далее вводить по одной дозе каждые 3 года.

До того как вводить препарат, рекомендуется осмотреть упаковку и ампулу с вакциной. При обнаружении дефектов запрещено проводить иммунизацию. Место введения осмотреть на наличие повреждений и обработать раствором спирта.

Прививка Рабивак-Внуково-32 используется, как для экстренной, так и для плановой профилактики бешенства. Введение препарата при неотложных ситуациях сопровождается не только применением вакцины, но и первичной хирургической обработкой места укуса. Плановое использование препарата требует сдачи общеклинических анализов и консультации врача перед введением. Данные меры предупреждают возникновение побочных реакций и осложнений.

Прививание – процесс, который проводится в специально отведенных кабинетах в школах, детских садах, поликлиниках и больницах. Помещение оснащено кушеткой, стульями, столом, холодильником для хранения вакцин, шкафчиком для оказания первой медицинской помощи.

Упаковка, флакон или шприц осматриваются врачом. Он оценивает наличие повреждений, цвет и консистенцию препарата, наличие физиологического раствора для инъекций. При обнаружении отклонений от нормы – сообщить главному врачу и перенести иммунизацию и повторно ознакомиться с инструкцией.

При экстренной профилактике абсолютные противопоказания отсутствуют, так как основной целью служит сохранение жизни человека.

При плановой иммунизации выделяют некоторые противопоказания:

Тяжелые дефекты иммунной системы человека (СПИД).
Беременность.
Наличие осложнений и побочных реакций при предыдущих введениях.
Острые инфекционные заболевания.
Активизация хронического процесса.

Пренебрегать противопоказаниями не стоит, так как они приводят к необратимым последствиям и тяжелым осложнениям.

Возникают вследствие неправильного хранения препарата или индивидуальной непереносимости компонентов.

Реакция на вакцинирование проявляется в виде системных и местных реакций:

Первая группа – повышение температуры, слабость, сыпь на теле, недомогание, головная боль, потеря сознания или анафилактический шок.

Совет врача! Возникновение побочных реакций свидетельствует о чрезмерной активации иммунной системы и ее составляющих. Но не стоит беспокоиться. Нужно обратиться к врачу за помощью. Также возникновение подобных реакций может быть обусловлено погрешностями по уходу места укола. Не забывайте о локальном осмотре следа после инъекции. Он должен быть сухим, чистым, без изменения цвета

Как при срочной, так и плановой профилактике беременность и кормление грудью являются абсолютным противопоказанием для введения прививки Рабивак-Внуково-32. Но иногда в экстренных случаях и при отсутствии других вакцинальных препаратов разрешено использование данной вакцины. Только врач принимает решение о применении вакцины.

Запрещено использование других иммунных препаратов: вакцины, глюкокортикоидные средства и цитостатики. Допускается введение лекарств данной группы после 2-х месяцев с момента применения Рабивак-Внуково-32.

Разрешено вводить на фоне использования базисной терапии при лечении болезней сердца, дыхательных путей и пищеварительной системы.

Плюс 2-8 градусов по Цельсию – оптимальная температура хранения прививки. Обязательное хранение в холодильной установке, недоступной для детей и прямых солнечных лучей.

Срок хранения вакцины полтора года.

Условия транспортировки идентичны таковым при хранении.

После вакцинации привитый человек находится в месте прививания некоторое время (30 минут). Это способствует исключению и предотвращению побочных реакций и осложнений. При возникновении нежелательных последствий врач окажет медицинскую помощь.

Существует разнообразное количество прививок для плановой и экстренной профилактики бешенства. Наиболее распространенные:

Рабипур (Индия).
Верораб (Франция).
Индираб (Индия).

Вышеперечисленные препараты имеют в своем составе инактивированный штамм вируса бешенства, но различаются страной производителем.

Бешенство – заболевание, которое приводит к смертельным последствиям. Исключительно прививка обеспечит наличие стойкого и специфического иммунитета против гидрофобии. Благодаря препарату некоторые страны полностью искоренили бешенство из списка болезней, распространенных на территории государства.

На территории нашей страны существует традиция тесного взаимодействия человека и дикого или домашнего животного. Охота, домашнее хозяйство или наличие в доме любимых питомцев повышают риск заболевания бешенством.

источник

Концентрированный вариант вакцины в настоящее время в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН изготовляется в экспериментальных условиях с использованием культуры первичных клеток ПСХ, зараженных более антигенным и глубокоаттенуированным вариантом штамма Внуково. Штамм апатогенен для кроликов при интрацеребральном введении. Полуфабрикат вакцины после инактивации УФЛ по обычной методике концентрируется и очищается.

Готовая вакцина представляет собой препарат, концентрированный по объему до 30 раз и очищенный в среднем в 6 раз, т. е. если в исходном вируссодержа-щем материале содержание белка по Лоури составляло 1175—1182 мкг/мл, то в готовой вакцине его менее 200 мкг/мл.

Серии концентрированной вакцины были в 12—52 раза иммуногеннее мозговой референс-вакцины ГИСК (методика NIH) и в 12—23 раза сильнее той же вакцины при определении иммуногенной активности с уличным вирусом бешенства (методика ИПВЭ АМН). Показана высокая антигенная активность концентрированной вакцины при иммунизации лабораторных животных, обезьян и добровольцев. При однократной иммунизации морских свинок (по 2 мл внутримышечно) на 2-й, 30-й и 40-й день от начала прививок концентрированная вакцина вызывала нарастание титров вируспейтрализующих антител до 1:3125, нативная же культуральная вакцина — от 1 : 52 до 1:920.

У кроликов, иммунизированных также однократно в дозе 5 мл внутримышечно, максимальные титры антител достигли 1:6250 на 14-й и 24-й день, тогда как нативная культуральная вакцина вызывала продукцию антител до титра 1:309. В опытах на обезьянах (Масаса rhesus) при сравнительном изучении антигенной активности концентрированной вакцины из штамма Внуково-32-107, концентрированной вакцины Института Мерье, серия 0312 (приготовлена на диплоидных клетках человека), а также производственной серии нативной культуральной антирабической вакцины выявлена более высокая специфическая активность первой вакцины.

Концентрированная вакцина из штамма Внуково-32 после двукратного введения с интервалом в 20 дней при внутримышечной аппликации вызывала продукцию антител до 1 : 1927 и 1:7679 на 36-й и 52-й день, при внутрикожной аппликации — 1:558 и 1:706, тогда как максимальные титры антител при иммунизации обезьян концентрированной вакциной Института Мерье были 1 :656 и 1:729 при внутримышечной аппликации и 1 :92 и 1:62 при внутрикожной аппликации. Нативная культуральная вакцина (серия 245) вызвала сероконверсию до титров 1:36 и 1:68 при внутримышечной апликации и 1:16 и 1:30—при внутрикожной применении соответственно, несмотря на то что эта вакцина вводилась в течение 6 дней.

Кроме того, в сравнительном опыте на 40 добровольцах подтверждена высокая антигенная активность концентрированной вакцины из штамма Внуково-32-107. При 2- и 3-кратном введении концентрированных вакцин внутримышечно в дозе 1,5 мл по схеме 0 и 20-й день или 0—1-й и 20-й день у некоторых прививаемых людей обнаружено чрезвычайно высокое накопление вируснейтрализующих антител — от 1:3273 до 1:6250 против 40 и 126 LD50 вируса бешенства (штамм CVS). По программе, утвержденной Комитетом вакцин и сывороток от 31 марта 1977 г., в настоящее время в Москве, Ленинграде, Владимире и других городах проводится изучение специфической активности и реактогенности 5 экспериментальных серий концентрированной и очищенной культуральной вакцины.

Обычный курс прививок состоит из 2—3 инъекций, при укусах опасной локализации предусмотрено введение антирабического гамма-глобулина (0,25 мг на 1 кг массы тела) и 4—5 доз концентрированной вакцины с интервалами. Предварительные данные иммунизации 80 человек показали хорошую переносимость и выраженную специфическую активность новой вакцины. Сокращенный курс прививок концентрированной вакциной вызывает такое же нарастание титра вирусиеитрализующих антител, как 15—27-дпевный курс лечения некоицеитрированиой культуральпой вакциной или вакциной типа Ферми.

С полным основанием можно надеяться, что будущее специфической профилактики бешенства связано с применением в практике здравоохранения концентрированной культуральной антирабической вакцины по резко сокращенной схеме. Исследования по очищенной и концентрированной вакцине выполнялись нами совместно с Л. Б. Эльбертом, Т. А. Аксеновой, Е. В. Клюевой, Л. Ф. Грибенча и другими сотрудниками лаборатории.

источник

Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН, Россия

Форма выпуска: 1 амп / 1 доза / 1 мл №5 в комплекте с растворителем
Схема вакцинации: (зависит от тяжести укуса):
1) 0 день — 3 день — 7 день — 14 день — 30 день — 90 день.
2) 0 день (АИГ + вакцина) — 3 день — 7 день — 14 день — 30 день — 90 день.

Инструкция по применению: форма выпуска, показания, фармокологическое действие, схема иммунизации, побочное действие, противопоказания к применению.

создано в 2014 году на основании инструкции, размещенной на официальном сайте Минздрава РФ

Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН ФГУП (Россия)

Код ATX: J07BG01 (Rabies, inactivated, whole virus)

ВАКЦИНА АНТИРАБИЧЕСКАЯ КУЛЬТУРАЛЬНАЯ КОНЦЕНТРИРОВАННАЯ ОЧИЩЕННАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ СУХАЯ лиофилизат д/приг. р-ра д/в/м введения 2.5 МЕ/доза: 1 мл амп. 5 шт. в компл. с растворителем

рег. №: Р N002816/01 от 04.10.13 — Бессрочно

Лиофилизат для приготовления раствора для в/м введения в виде пористой массы белого цвета, гигроскопичной.

1 доза (1 мл) — 2.5 МЕ — вакцина для профилактики бешенства (специфический антиген вируса бешенства, штамм «Внуково-32»)

Вспомогательные вещества: альбумин человека 5 мг, сахароза 75 мг, желатин 10 мг.

2.5 МЕ (1 доза) — ампулы (5) в комлекте с растворителем 1 мл амп. (5) — пачки картонные.

Клинико-фармакологическая группа: Вакцина для профилактики бешенства

Фармако-терапевтическая группа: МИБП-вакцина

Вакцина индуцирует выработку иммунитета против бешенства.

Лечебно-профилактическая и профилактическая иммунизация человека против бешенства.

— контакт и укусы людей больными бешенством животными, животными с подозрением на заболевание бешенством, дикими или неизвестными животными.

— лицам, имеющим высокий риск заражения бешенством (сотрудники лабораторий, работающие с уличным вирусом бешенства; ветеринарные работники; егеря, охотники, лесники; лица, выполняющие работы по отлову и содержанию животных и другие профессиональные группы).

Содержимое ампулы с вакциной должно быть растворено в 1,0 мл воды для инъекций. Время растворения не должно превышать 5 мин. Растворенная вакцина представляет собой прозрачную или слабо опалесцирующую жидкость от бесцветного до светло-желтого цвета.

Растворенную вакцину вводят медленно внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча, детям до 5 лет — в верхнюю часть переднебоковой поверхности бедра.

Введение вакцины в ягодичную область не допускается.

Не пригоден к применению препарат в ампулах с нарушенной целостностью, маркировкой, а также при изменении цвета и прозрачности, при истекшем сроке годности, неправильном хранении.

Вскрытие ампул и процедуру вакцинации осуществляют при строгом выполнении правил асептики.

Хранение растворенной вакцины более 5 мин не допускается.

Вакцинированный должен находиться под медицинским наблюдением не менее 30 мин.

Места для проведения прививок должны быть оснащены средствами противошоковой терапии.

Антирабическая помощь состоит из местной обработки ран, царапин, ссадин, мест ослюнений и последующего введения антирабической вакцины или, при наличии показаний, комбинированного введения антирабического иммуноглобулина (АИГ) и антирабической вакцины. Интервал между введением АИГ и антирабической вакцины — не более 30 мин.

Местная обработка ран (укусов, царапин, ссадин) и мест ослюнений, должна начинаться немедленно или как можно раньше после укуса или повреждения. Она заключается в обильном промывании в течение нескольких минут (до 15 минут) раневой поверхности водой с мылом или другим моющим средством (детергентом) или в случае отсутствия мыла или детергента место повреждения промывается струей воды. После этого края раны следует обработать 70 % спиртом или 5 % водно-спиртовым раствором йода.

По возможности следует избегать наложения швов на раны. Наложение швов показано исключительно в следующих случаях:

при обширных ранах — несколько наводящих кожных швов после предварительной обработки раны;
по косметическим показаниям (наложение кожных швов на раны лица);
прошивание кровоточащих сосудов в целях остановки наружного кровотечения.

При наличии показаний к применению антирабического иммуноглобулина, его используют непосредственно перед наложением швов (см. раздел Доза антирабического иммуноглобулина (АИГ)).

После местной обработки ран (повреждений) немедленно начинают лечебно-профилактическую иммунизацию.

Показания. Контакт и укусы людей больными бешенством животными, животными с подозрением на заболевание бешенством, дикими или неизвестными животными.

Противопоказания. Отсутствуют. Беременность не является противопоказанием.

Подробная схема лечебно-профилактической иммунизации и примечания к схеме представлена в таблице (Схема лечебно-профилактических прививок антирабической вакциной и антирабическим иммуноглобулином (АИГ).

Лечебно-профилактической иммунизации подлежат все лица, подвергшиеся риску заражения бешенством. Если имеются показания к комбинированному лечению, то сначала вводится АИГ и, не более чем через 30 мин после него вводится антирабическая вакцина.

Антирабический иммуноглобулин (АИГ) назначают как можно раньше после контакта с бешенным животным или животным с подозрением на заболевание бешенством, диким или неизвестным животным.

Перед введением гетерологичного (лошадиного) антирабического иммуноглобулина необходимо проверить индивидуальную чувствительность пациента к лошадиному белку (см. «Инструкцию по применению иммуноглобулина антирабического из сыворотки крови лошади, жидкого»). Перед введением гомологичного (человеческого) антирабического иммуноглобулина индивидуальная чувствительность не проверяется.

Гетерологичный антирабический иммуноглобулинвводят не позднее 3 суток после укуса, гомологичный антирабический иммуноглобулин вводят не позднее 7 суток после укуса.

Доза антирабического иммуноглобулина (АИГ). Гетерологичный (лошадиный) антирабический иммуноглобулин назначается в дозе 40 MEна 1 кг массы тела. Гомологичный (человеческий) антирабический иммуноглобулин назначается в дозе 20 MEна 1 кг массы тела. Объем вводимого гетерологичного антирабического иммуноглобулина не должен превышать 20 мл.

Введение антирабического иммуноглобулина (АИГ). Как можно большую часть рекомендованной дозы АИГ следует инфильтрировать в ткани вокруг раны и в глубине раны. Неиспользованная часть дозы препарата вводится глубоко внутримышечно в место отличное от введения антирабической вакцины.

Показания. С профилактической целью иммунизируют лиц, имеющих высокий риск заражения бешенством (сотрудники лабораторий, работающие с уличным вирусом бешенства; ветеринарные работники; егеря, охотники, лесники; лица, выполняющие работы по отлову и содержанию животных и другие профессиональные группы).

Вакцина вводится внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча по 1,0 мл в 0, 7 и 30 день. Ревакцинацию проводят однократно, в дозе 1,0 мл через год и далее каждые три года.

Первичная иммунизация	Три инъекции в 0,7 и 30 день по 1,0 мл
Первая ревакцинация через 1 год	Одна инъекция, 1,0 мл
Последующие ревакцинации через каждые 3 года	Одна инъекция, 1,0 мл

Профилактическая иммунизация контингентов повышенного риска заражения бешенством осуществляется в прививочных кабинетах лечебно-профилактических учреждений, где заполняют и выдают «Сертификат о профилактических прививках», куда вносят все необходимые сведения (названия, серии, дозы, кратности и даты получения препаратов).

Введение вакцины может сопровождаться местной или общей реакцией. Местная реакция характеризуется незначительной припухлостью, краснотой, зудом, болезненностью в месте инъекции, увеличением регионарных лимфоузлов. Общая реакция может проявиться в виде недомогания, головной боли, слабости, повышения температуры тела. Рекомендуется симптоматическая терапия, применение гипосенсибилизирующих средств и антигистаминных средств.

В редких случаях могут развиться неврологические симптомы, такой больной должен быть сочно госпитализирован.

После введения антирабического иммуноглобулина из сыворотки крови лошади могут наблюдаться осложнения: местная аллергическая реакция, наступающая на 1-2 день после введения; сывороточная болезнь, которая наступает чаще всего на 6-8 день; анафилактический шок. В случае развития анафилактоидной реакции вводят подкожно раствор адреналина или норадреналина в возрастной дозировке и 0,2-1,0 мл эфедрина 5 %.

При появлении симптомов сывороточной болезни рекомендуется парентеральное введение антигистаминных лекарственных средств, кортикостероидов, препаратов кальция.

Лечебно-профилактическая иммунизация — отсутствуют.

острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения или декомпенсации — прививки проводят не ранее одного месяца после выздоровления (ремиссии);
системные аллергические реакции на предшествующее введение антирабического иммуноглобулина (генерализованная сыпь, отек Квинке и др.);
аллергические реакции на антибиотики;
беременность.

Беременность не является противопоказанием только при лечебно-профилактической иммунизации.

Во время проведения курса лечебно-профилактической вакцинации проведение вакцинации другими препаратами запрещается. После окончания вакцинации против бешенства проведение прививок другими вакцинами допускается не ранее, чем через 2 месяца.

Профилактическую вакцинацию проводят не ранее, чем через 1 месяц после вакцинации против другого инфекционного заболевания.

Вакцину хранят и транспортируют при температуре от 2 до 8°С. Допускается транспортирование вакцины при температуре 25°С в течение не более 2-х суток. Хранят в недоступном для детей месте. Срок годности вакцины — 2 года.

Для лечебно-профилактических учреждений.

Существует несколько типов вируса, но патогенными для человека являются серотипы А, В, С, а наиболее распространен тип А. Этот вирус поражает не только человека, но и разные виды млекопитающих и птиц. Ротавирус группы А считается одной из наиболее частых причин возникновения инфекционных диарей у детей.

Полиомиелит – это острое инфекционное заболевание человека, которое сопровождается поражением нервной системы, развитием парезов и параличей. Полиомиелит в основном поражает детей в возрасте до 5 лет. 1 из 200 инфекций приводит к необратимому параличу. Среди тех парализованных, от 5% до 10% умирают, когда их дыхательные мышцы становятся неподвижными.

Многие родители паникуют, путая ротавирус, дизентерию и отравление. Врачи предупреждают, что одно из главных отличий – характер стула.

В последние годы в мире складывается неоднозначное отношение к прививкам. Несмотря на то, что поголовная вакцинация против некоторых заболеваний привела к практически полному их исчезновению, ряды противников обязательных прививок растут. Этому способствует широкое распространение заблуждений, касающихся вакцинации.

В организме здорового человека насчитывается триллион полезных (85%) и сто пятьдесят миллиардов болезнетворных (15%) микроорганизмов. На протяжении жизни они конкурируют между собой. Если равновесие смещается в сторону патогенных бактерий, микрофлора разрушается, возникает дисбактериоз, ухудшается самочувствие человека, возникает вопрос «как вернуть здоровье».

источник