КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ВЕТЕРИНАРНОЙ ДЕЗИНФЕКЦИИ ОБЪЕКТОВ ЖИВОТНОВОДСТВА
Контроль качества проведенной дезинфекции проводят в три этапа: контроль подготовки объекта к дезинфекции, контроль за соблюдением установленных режимов дезинфекции, бактериологический контроль качества дезинфекции.
1. Контроль подготовки объектов к дезинфекции (проверяют степень очистки поверхностей, их увлажненность, защиту электрооборудования и приборов, герметизацию помещений) осуществляет ветеринарный специалист, ответственный за ее проведение.
2. Контроль за соблюдением установленных режимов дезинфекции (выбор препарата и метода дезинфекции, концентрация, температура раствора, равномерность увлажнения поверхностей дезинфицирующим раствором, соблюдение параметров производительности используемых машин и аппаратов, качество распыления раствора) проводит ответственный ветеринарный специалист.
3. Бактериологический контроль качества дезинфекции осуществляют специалисты ветеринарных лабораторий периодически или в сроки, установленные с учетом эпизоотической обстановки, технологии производства, целей дезинфекции и других конкретных особенностей.
При бактериологическом контроле качества дезинфекции определяют наличие на поверхностях обеззараживаемых объектов жизнеспособных клеток санитарно-показательных микроорганизмов — бактерий группы кишечной палочки (Escherichia, Citrobacter, Enterobacter), стафилококков (aureus, epidermatis,Saprophiticus), микобактерий или спорообразующих аэробов рода Bacillus.
По наличию или отсутствию бактерий группы кишечной палочки определяют качество профилактической и вынужденной (текущей и заключительной) дезинфекции при бруцеллезе, колибактериозе, лептоспирозе, листериозе, болезни Ауески, лейкозе, пастереллезе, сальмонеллезах, трихомонозе, кампилобактериозе, трипанозомозе, токсоплазмозе, инфекционном ринотрахеите, парагриппе и вирусной диарее крупного рогатого скота, инфекционной агалактии и контагиозной плевропневмонииовец и коз, отечной болезни, инфекционном атрофическом рините, дизентерии, трансмиссионном гастроэнтерите, балантидиозе, гемофилезной плевропневмонии и роже свиней, (кроме туберкулеза, споровых и экзотических инфекций).
По наличию или отсутствию стафилококков контролируют качество текущей дезинфекции при туберкулезе, болезнях, вызываемых спорообразующими микроорганизмами, и экзотических инфекциях; заключительной дезинфекции при туберкулезе, аденовирусных инфекциях, ящуре, оспе, туляремии, диплококкозе, стафилококкозе, стрептококкозе, некробактериозе, катаральной лихорадке, бешенстве, чуме всех видов животных, злокачественной катаральной горячке, ринопневмонии и паратуберкулезном энтерите крупного, рогатого скота, везикулярной болезни свиней, хламидиозах, риккетсиозах, энтеровирусных инфекциях, гриппе сельскохозяйственных животных, трихофитии, микроспории, других микозах животных, актиномикозе крупного рогатого скота, а также болезнях, вызываемых неклассифицированными вирусами
Качество заключительной дезинфекции при микозах контролируют также по выделению соответствующих возбудителей.
Качество заключительной дезинфекции при туберкулезе контролируют по выделению стафилококков и микобактерий, при сибирской язве, эмфизематозном карбункуле, брадзоте, злокачественном отеке, других споровых инфекциях и экзотических инфекциях, по наличию или отсутствию спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus.
Отбор проб для исследования
Отбирают пробы для бактериологического контроля и доставляют их в лабораторию лица, ненесущие ответственности за качество дезинфекции и не находящиеся в подчинении работников, ответственных за ее проведение. Отбор проб проводят по истечении срока экспозиции, до начала проветривания помещений.
Пробы (смывы, отпечатки, соскобы) для исследования берут с 10-20 различных участков поверхности животноводческого помещения (полов, стойл, проходов, стен, перегородок, столбов, кормушек, поилок и т. д.). При наличии на объекте участков поверхности с механическими загрязнениями пробы материала для исследования берут методом соскобов.
Для контроля качества дезинфекции при туберкулезе с каждого вида поверхности берут по пять смывов, которые объединяют в одну пробу. Из каждого помещения отбирают не менее 10 объединенных проб, в том числе по три пробы с пола и кормушек.
При заключительной дезинфекции одновременно берут пробы с территории фермы в разных направлениях от углов здания и от центра каждой стены на расстоянии 5, 10 и 15 метров (с учетом рельефа местности). Всего с прилегающей территории отбирают не менее 24 проб. Поверхностный слой грунта разрыхляют стерильным скальпелем или ножом на глубину 3-5 см и отбирают в стерильную посуду 10-20 г исследуемого материала. Если прилегающая территория имеет твердое покрытие, пробы отбирают методом смывов.
После проведения дезинфекции и последующей экспозиции с участков, подвергаемых контролю, отбирают пробы стерильными ватно-марлевыми тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе или воде. Участки площадью 10×10 см тщательно протирают до полного снятия с поверхности всех имеющихся на ней загрязнений, после чего тампоны помещают в пробирку с нейтрализующей жидкостью. Плотные загрязнения (корочки) снимают с помощью стерильного скальпеля и переносят в эту же пробирку.
Для нейтрализации хлорсодержащих дезинфицирующих средств служит раствор тиосульфата натрия (гипосульфита); щелочных растворов — раствор уксусной кислоты; формалина — раствор аммиака (нашатырный спирт); кислот и ее производных, пероксида водорода — раствор бикарбоната натрия. При использовании для дезинфекции щелочного раствора формальдегида участки сначала увлажняют раствором аммиака, затем дополнительно раствором уксусной кислоты. При дезинфекции дезонолом, лизолом, феносмолином, фенолятами натрия и другими средствами, для которых нет нейтрализаторов, применяют стерильную водопроводную воду.
Предметные стекла с нанесенной средой извлекают корнцангом из ванн или пробирок, не касаясь застывшей питательной среды, и накладывают на исследуемый объект таким образом, чтобы питательная среда соприкасалась с его поверхностью. Через 2 мин пробы-отпечатки отделяют от контролируемого объекта и помещают в ванны или пробирки, в которых их транспортировали. При взятии проб с труднодоступных или вертикальных поверхностей время контакта слоя питательной среды с объектом сокращают до 30оС. Смывы должны быть доставлены в лабораторию в течение 3-6 ч с момента взятия, отпечатка не позднее 2ч.
Контроль качества дезинфекции помещений методом бактериологического исследования смывов
Пробы, каждую в отдельности, отмывают в той же пробирке путем нескольких погружений и отжатий тампона. Последний удаляют, а жидкость центрифугируют 20-30 минут при частоте вращения 3000-3500 оборотов в минуту. Затем надосадочную жидкость сливают, в пробирку наливают такое же количество стерильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а из центрифугата делают посевы. При наличии в смыве грубых механических примесей их растирают в пробирке стеклянной палочкой, после чего смыв переносят в центрифужную пробирку.
Для индикации кишечной палочки 0,5 мл центрифугата высеивают в пробирки с модифицированной средой Хейфеца или КОДА. Посевы выдерживают 12-18 часов в термостате при 37-38°С. Изменение сиренево-красного цвета сред (в зеленый или салатовый) с помутнением их и образованием газа свидетельствует о наличии роста кишечной палочки. Другие изменения цвета (желтоватый, розовый, сероватый), наблюдаемые приросте микроорганизмов других видов, не учитывают.В сомнительных случаях делают подтверждающий посев с жидких сред на агар Эндо. Посевы инкубируют 12-16 ч при 37-38°С.
Для индикации стафилококков (0,5 мл центрифугата высеивают в 5 мл мясопептонного бульона с 6,5% хлорида натрия. Через 22-24 часа инкубирования посевов при 37-38°С делают пересевы бактериологической петлей на 8,5%-ный солевой мясопептонный агар. Посевы выдерживают в термостате 22-24 часа при температуре 37-38°С. Из выросших культур для подтверждения роста стафилококков готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.
Для индикации спорообразующих аэробов смывы обрабатывают, как указано выше, но перед центрифугированием их прогревают 30 минут на водяной бане при 65°С, затем центрифугируют. Из центрифугата каждой пробы делают посевы в одну пробирку с мясо-пептонным бульоном (МПБ) и на две чашки с мясопептонным агаром (МПА). Для контроля качества дезинфекции при сибирской язве МПА может быть заменен дифференциально-диагностической средой. Посевы инкубируют 24-28 ч в термостате при 37оС.
При наличии роста на МПА подсчитывают колонии и изучают морфологию их при малом увеличении микроскопа. В случае возникновения подозрения на выделение возбудителя сибирской язвы проводят идентификацию культуры.
При наличии роста на дифференциально-диагностической среде в крышку чашки Петри вносят 1-2 мл культуры при 20±2°С в течение 1 мин, после чего визуально или под малым увеличением микроскопа учитывают тест. Под действием паров аммиака происходит порозовение колоний микроорганизмов, обладающих фосфатазной активностью. Вас. anthracis фосфатазной активностью не обладают, и его колонии остаются бесцветными.
При отсутствии роста или характерных колоний на плотных средах и наличии роста в МПБ делают дробные посевы из МПБ на плотную питательную среду. При просмотре посевов учитывают общее число проб, в которых обнаружен рост санитарно-показательных микроорганизмов, а при споровой инфекции — и колонии непатогенных спорообразующих аэробов рода Bacillus.
Контроль качества дезинфекции методом отпечатков на тонкий слой плотной питательной среды
Метод отпечатков наиболее приемлем в условиях промышленного ведения животноводства на комплексах, где имеются лаборатории.
Ванны и пробирки с пробами-отпечатками, доставленные в лабораторию, помещают на 16-18 ч в термостат при 37°С. После инкубирования пробы просматривают невооруженным глазом на наличие роста. При отсутствии макроколоний и изменении среды пробы дальнейшим исследованиям не подвергают. В сомнительных случаях, когда отсутствует рост макроколоний, но изменены цвет или прозрачность среды, пробы-отпечатки высушивают на воздухе до полного подсыхания среды, фиксируют над пламенем, окрашивают по Муромцеву и микроскопируют с целью обнаружения микроколоний. Учитывают общее число отпечатков, в которых обнаружен рост микроорганизмов.
Исследование с целью выделения микобактерий
Контроль качества заключительной дезинфекции при туберкулезе проводят параллельно двумя методами по выделению стафилококка и микобактерий.
Смывы обрабатывают, как указано выше. Из центрифугата каждой объединенной пробы делают высев на среды для выделения стафилококков, готовят по шесть мазков на узких (1,2×7,5 см) предметных стеклах. Мазки высушивают при комнатной температуре или в термостате 2-3 ч, складывают их по два тыльной стороной и погружают в 8-12%-ный раствор серной кислоты на 15 минут. После этого стекла-мазки берут пинцетом и погружают на 5-10 секунд в стерильную дистиллированную воду, а затем переносят в пробирки со средой Сотона и помещают в термостат при 37-38°С.
Пробы почвы с прилегающей территории и соскобы с поверхности помещений (каждую в отдельности) помещают в колбу, заливают двух-трехкратным количеством дистиллированной воды, взбалтывают и фильтруют через двойной слой марли в узкогорлую колбу вместимостью 200-250 мл. К фильтрату добавляют 2-3 мл ксилола или авиационного бензина, встряхивают 1520 минут и доливают дистиллированную воду до горлышка. Содержимое отстаивают, 30 мин с целью получения флотата, из которого готовят мазки на узких предметных стеклах.
При наличии роста стафилококков хотя бы в одной исследованной пробе качество дезинфекции признают неудовлетворительным и дальнейшее исследование по выделению микобактерий не проводят. Стекла с мазками извлекают из пробирок на 6-й, 8-й и 12-й день инкубирования, высушивают, фиксируют над пламенем горелки, окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют для обнаружения микроколоний.
Оценка качества дезинфекции
Качество профилактической дезинфекции помещений для получения и содержания молодняка скота и текущей дезинфекции изолированных секций (боксов, скотных дворов) с автономной системой жизнеобеспечения животных признают удовлетворительным при отсутствии роста санитарно-показательных микроорганизмов в 90% исследованных проб.
При профилактической дезинфекции помещений для содержания взрослого поголовья и текущей дезинфекции частично освобожденных от животных или неизолированных помещений допускается выделение санитарно-показательных микроорганизмов из 20% исследованных проб.
Качество заключительной дезинфекции при ее контроле по выделению бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, грибов и микобактерий признают удовлетворительным при отсутствии выделения названных культур во всех исследованных пробах.
При споровых инфекциях качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста Вас. anthracis. При прямом посеве на МПА допускают рост единичных (не более трех а смыве) колоний непатогённых спорообразующих аэробов рода Bacillus.
Контроль качества профилактической аэрозольной дезинфекции, проводимой формалином
Метод предназначен для быстрого (непосредственно после окончания экспозиции дезинфекции) контроля качества аэрозольной дезинфекции животноводческих помещений, проводимой формалином. Метод основан на окрашивании индикаторной среды под воздействием газовой и капельной фаз аэрозоля фомальдегида. В качестве индикатора используют среду Эндо, которая под воздействием формальдегида в процессе аэрозольной дезинфекции приобретает резко очерченное красное окрашивание.
Перед проведением дезинфекции индикаторные пробирки размещают на полу, стенах и потолке помещения и на находящемся в нем оборудовании. Особо важно прикрепить индикаторные пробирки с помощью пластилина, липкой ленты или других средств в труднодоступных местах (внутри оборудования, у щелей и т.д.). На одно помещение требуется в среднем 10-15 пробирок.
Качество дезинфекции оценивают непосредственно после окончания экспозиции (12 или 24 ч). Линейкой с миллиметровой шкалой измеряют длину окрашенного столбика индикаторной среды, начиная с обреза пробирки. Дезинфекцию считают удовлетворительной, если глубина окрашивания среды после экспозиции 12 ч составляет не менее 18 мм, а после экспозиции 24 часа — 30 мм.
При контроле качества дезинфекции в очагах бактериальных (кроме туберкулеза) и вирусных инфекций в качестве тест-культуры используют музейные штаммы кишечной палочки, в очагах туберкулеза и малоизученных вирусных инфекций — золотистого стафилококка, в очагах споровых инфекций — антракоида.
Приготовление нейтрализующих растворов
Нейтрализующие растворы готовят в концентрации в 10 раз меньше, чем концентрация использованного дезинфицирующего средства. Раствор делают на стерильной воде в стерильной посуде и разливают в пробирки или флаконы с соблюдением правил стерильности (растворы уксусной кислоты и бикарбоната натрия можно стерилизовать автоклавированием). Раствор аммиака стерилизации не подлежит. Готовые пробирки (флаконы) можно хранить в течение пяти дней при комнатной температуре.
Подготовка предметных стекол
Для исследования используют предметные стекла (размером 2,5×7,5 см) или стекла, разрезанные вдоль на две половинки (1,2×7,5 см). Стекла предварительно кипятят 10-15 мин в 2-5%-ном растворе моющего порошка («Лотос», «Новость» и т. и.). Затем поверхность предметных стекол с двух сторон натирают с помощью зубной щетки или ерша этим же порошком, слегка увлажненным водой, после чего тщательно промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Подготовленные стекла хранят в банке с притертой крышкой в сухом виде.
Подготовка предметных стекол со средой
В стерильном боксе на предметные стекла наносят тонкий слой расплавленной питательной среды: для выделения группы бактерии кишечной палочки используют агар Эндо, стафилококков — 8,5%-ный солевой мясопептонный агар (рН 7,2-7,4). Количество нанесенной среды должно соответствовать 0,15 мл (четыре капли) для узкого предметного стекла и 0,33 мл (восемь капель) — для широкого. Перед нанесением на стекло, среду, находящуюся в пробирках, ставят на водяную баню и расплавляют. Затем в нее погружают стерильную пастеровскую пипетку. Температуру воды в бане поддерживают в пределах 80-90оС.
Прогретые над пламенем горелки предметные стекла (берут корнцангом) раскладывают на ровной, строго горизонтальной поверхности стола. На них пипеткой наносят указанное количество питательной среды, отступив на 2-2,5 см от поперечного края стекла. Затем, расположив горизонтально пастеровскую пипетку, питательную среду быстро распределяют по средней трети поверхности стекла и подсушивают при комнатной температуре до появления вокруг питательной среды высушенной полосы шириной 0,5-1 мм. Широкие стекла со средой помещают в пластмассовые ванны, узкие — в пробирки. Ванны и пробирки предварительно увлажняют путем внесения на дно 1 мл и 0,1 мл стерильной водопроводной воды. Подготовленные предметные стекла с солевым агаром хранят при температуре 4°С до 10 суток, со средой Эндо — 2-3 суток (если нет видимого изменения цвета среды).
Подготовка стекол для микрокультивирования микобактерий
Предметные стекла разрезают вдоль на узкие полоски размером 1,2×7,5 см, моют и помещают на 2 часа в хромпик (40 г дихромата калия высыпают в фарфоровую кружку или эксикатор и растворяют в небольшом количестве воды, затем осторожно добавляют концентрированную серную кислоту до общего объема 1 л). После хромпика стекла вновь моют дистиллированной водой, протирают чистой льняной тканью, стерилизуют сухим жаром (160 гр.) 2 ч и хранят в закрытых сосудах (эксикаторах).
Приготовление диагностических сред
Модифицированная среда Хейфеца. К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют рН, который должен быть 7,4-7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикатора 1 мл 5%-ного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1%-ного водного раствора метиленовой сини. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,05 МПа 15 мин. Исходный цвет среды— красновато-сиреневый.
Питательная среда КОДА сухая. Состав и способ приготовления приведены в этикетке на упаковке среды.
Солевой мясопептонный бульон. К обычному МПБ с рН 7,2-7,4 добавляют 6% натрия хлорида, перемешивают до полного растворения соли, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 0,1 МПа 20-30 минут.
Солевой мясопептонный агар. К расплавленному МПА добавляют 8% хлорида натрия, перемешивают до полного растворения соли, разливают в колбы и стерилизуют при 0,1 МПа 20-30 мин. Перед использованием солевой агар разливают в стерильные бактериологические чашки по 10-15 мл. После застывания среду подсушивают в термостате 1 ч.
Дифференциально — диагностическая среда для индикации Вас. Anthracis. При приготовление дифференциально — диагностической среды. 100 мл питательного агара (в колбах) расплавляют на кипящей водяной бане и охлаждают до 45-50°С. Затем в агар добавляют 0,5 мл полимиксина М сульфата, столько же невиграмона, гризеофульвина (добавляют в среду при подозрении на загрязнение материала грибами.), такое же количество моющего средства и 0,1 мл фенолфталеинфосфата натрия. После перемешивания среду разливают в чашки Петри (крышки открыты) и подсушивают 1,5-2 ч. Дифференциально-диагностическую среду после разлива можно хранить в холодильнике в течение 1 -2 суток.
Полимиксин М сульфат во флаконе растворяют в стерильной дистиллированной воде, а затем последовательными разведениями стерильным 0,9%-ным раствором хлорида натрия доводят до концентрации 10000 ед/мл.
Невиграмон переносят в стеклянный флакон или пробирку и растворяют в 25%-ном водном растворе аммиака при тщательном перемешивании стеклянной палочкой. Затем последовательно разводят стерильным 0,9%-ным раствором хлорида натрия до концентрации 100 мкг/мл.
Гризеофульвин (в таблетках) тщательно растирают в ступке, затем растворяют в стерильной дистиллированной воде до содержания 100 мкг препарата в 1 мл.
Фенолфталеинфосфат натрия (заводской 10%-ный раствор) стерилизуют 30 мин на водяной бане при 56°С.
Среда Сотона для выделения микобактерий. В 940 мл дистиллированной воды растворяют 4 г аспарагина, 2 г лимонной кислоты, 0,5 г дифосфата калия, 0,5 г сернокислой магнезии и 0,05 г аммиачного цитрата железа. Затем добавляют 60 мл нейтрального глицерина. После полного растворения аспарагина и солей рН среды должен быть 7,4. Среду разливают по 200 мл в колбы вместимостью 250 мл и стерилизуют 30 мин в автоклаве при 0,15 МПа. Перед использованием в колбу со средой Сотона добавляют 30 мл стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота и разливают в стерильные пробирки по 7-8 мл.
Приготовление индикаторных пробирок для контроля качества дезинфекции аэрозолями формальдегида. Индикаторные пробирки — это стеклянные трубки диаметром 4-8 мм и длиной 40-50 мм. В качестве таких пробирок могут быть использованы пробирки Уленгута или отрезки пастеровских пипеток, запаянные с одного конца. Пробирки заливают расплавленной индикаторной средой до уровня обреза пробирок, запечатывают парафином и хранят 1 месяц (со дня изготовления) при 0-5°С. Для учета результатов без линейки на индикаторные пробирки при их изготовлении можно нанести две риски на расстоянии 18 и 30 мм от среза пробирки.
Для экспресс-метода контроля качества аэрозольной дезинфекции помещений используют среду Эндо, выпускаемую биологической промышленностью в сухом виде: 2%-ную взвесь сухой среды в дистиллированной воде доводят до кипения и пропускают через ватный фильтр, после чего среду заливают в пробирки при помощи пипеток.
источник
Дезинфекция
Дизинфекция понятие и ее задачи.
Дезинфекция (от франц. des – устраняю и лат. infectio – заражение) – способ обеззараживания объектов внешней среды, направленный на уничтожение в них патогенных микроорганизмов. Воздействуя на возбудителей инфекционных болезней, дезинфекция ограничивает или полностью исключает из эпизоотического процесса его вторую биологическую движущую силу – механизм передачи возбудителя инфекции. Поэтому в комплексе противоэпизоотических мероприятийдезинфекция является обязательной мерой в профилактике, оздоровлении хозяйств и ликвидации любой инфекционной болезни.
Понятие дезинфекции (обеззараживание) следует отличать от обезвреживания – уничтожения не только патогенных микробов, но и продуктов их жизнедеятельности – токсинов, а также от стерилизации, при которой наряду с патогенными уничтожаются и все другие микроорганизмы. Однако иногда нет четкой грани между патогенными микробами (паразитами) и сапрофитами, считавшимися непатогенными: некоторые из них в определенных условиях (стресс, неполноценное кормление, хронический микотоксикоз и т. д.) могут стать причиной массового заболевания животных. Такие условия особенно часто возникают в крупных промышленных хозяйствах при интенсивном разведении животных. Поэтому в практике промышленного животноводства понятия «дезинфекция» и «стерилизация» особенно сближаются, поскольку в таких условиях необходимо уничтожать не только патогенных, но и условно-патогенных микроорганизмов.
Передача возбудителя от зараженного животного здоровому может осуществляться как инфицированными объектами неживой природы (факторы передачи), так и живыми посредниками – переносчиками (насекомые, клещи, мышевидные грызуны и др.). Поэтому в систему мер по дезинфекции входят дезинсекция (Des – устраняю и insectum – насекомое) и дератизация (от лат. Rattus – крыса), направленные на уничтожение членистоногих (насекомые и клещи) и грызунов – носителей и распространителей возбудителей многих инфекционных болезней. Роль и значение каждого мероприятия при дезинфекции определяются эпизоотологическими особенностями конкретной инфекционной болезни, а выбор того или иного воздействия – в основном специфичностью механизма передачи возбудителя, его факторами и путями распространения. Например,
При респираторных инфекциях, возбудители которых передаются преимущественно воздушным путем (пастереллез, грипп свиней, орнитоз, ринопневмония лошадей и др.), ведущее значение имеет дезинфекция; при трансмиссивных болезнях (чума и инфекционная анемия лошадей, катаральная лихорадка овец и др.) проводят дезинфекцию и дезинсекцию; при ряде зооантропонозных болезней (туляремия, листериоз, чума и др.) необходимо осуществлять дезинфекцию, дезинсекцию и дератизацию.
Дезинфекция, дезинсекция и дератизация как меры, направленные против распространения заразных болезней, имеют исключительно важное значение в профилактике и ликвидации инфекционных болезней животных и человека. Поэтому их проводят не только в животноводческих хозяйствах, но и на предприятиях по убою животных и переработке сырья животного происхождения (мясокомбинаты, бойни, кожзаводы и т. д.), на транспорте и пр.
Существенно возросла роль дезинфекции в условиях концентрации и специализации животноводства. В крупных хозяйствах промышленного типа дезинфекция стала основной частью ветеринарных мероприятий, включенных в общий технологический процесс производства животноводческой продукции.
Уничтожая патогенные микроорганизмы во внешней среде, дезинфекция не устраняет источники и резервуар возбудителя, не повышает устойчивость восприимчивых животных. Поэтому дезинфекцию следует проводить не изолированно, а в общем комплексе мероприятий, предусматривающих воздействие на все звенья эпизоотической цепи. Только при соблюдении принципа комплексности дезинфекция как целенаправленная противоэпизоотическая мера может сыграть значительную роль в профилактике болезней и оздоровлении неблагополучных хозяйств.
Виды дезинфекции.
С учетом эпизоотологического значения дезинфекция может быть профилактической (предупредительной) и вынужденной, которая, в свою очередь, делится на текущую и заключительную.
Профилактическую дезинфекцию проводят в благополучных хозяйствах с целью предупреждения инфекционных болезней. Такая дезинфекция снижает общую микробную обсемененность помещений и препятствует накоплению и распространению возбудителей инфекций в окружающей животных внешней среде, на предприятиях по переработке и хранению продуктов и сырья животного происхождения.
При проведении профилактической дезинфекции учитывают не только возможность заноса и накопления в хозяйстве возбудителей отдельных заразных болезней, но и опасность возникновения болезней, вызываемых ассоциациями бактерий и вирусов, а также убиква-торными (вездесущие) микробами из группы условнопатогенных. Такие микроорганизмы обусловливают важную эпизоотологическую проблему в промышленном
Животноводстве – массовые смешанные алиментарные и респираторные инфекции с участием ассоциаций эшерихий, сальмонелл, пастерелл, вульгарного протея, микоплазм, синегнойной палочки и ряда вирусов.
В современном животноводстве в профилактической дезинфекции различают: предпусковую и технологическую – в процессе эксплуатации фермы. Предпусковую дезинфекцию проводят после завершения строительства животноводческих объектов или их первой очереди, накануне ввода в помещения животных или завоза кормов. Дезинфицируют все здания и сооружения, обращая особое внимание на помещения для содержания животных, хранения кормов и кормоприготовления. Технологическая дезинфекция зависит от размера хозяйства и особенностей технологии производства животноводческой продукции. Она может быть подразделена на профилактическую дезинфекцию мелких животноводческих ферм с экстенсивной системой животноводства и крупных специализированных хозяйств и комплексов, производящих животноводческую продукцию на промышленной основе. Технологические приемы дезинфекции в этих хозяйствах различные.
На мелких животноводческих фермах профилактическую дезинфекцию, как правило, проводят не реже двух раз в год: весной, после выгона скота на пастбище, и осенью, перед постановкой его на стойловое содержание; в откормочных хозяйствах – после каждого съема группы животных на убой; в родильных отделениях, свинарниках-маточниках, телятниках-профилакториях – не реже одного раза в месяц; стойла (станки) родильных отделений, клетки для телят дезинфицируют перед постановкой в них животных, а также после их освобождения. Профилактическую дезинфекцию также необходимо проводить после массовых противоэпизоотических мероприятий (туберкулинизация, взятие крови, вакцинация и др.) и в местах временного массового скопления животных и птицы (выставки, ярмарки, базары и т. п.). Ее проводят также не менее двух раз в год на предприятиях по заготовке, хранению и переработке животного сырья, перед началом и после окончания переработки животных на скотоубойных предприятиях, перед и после загрузки холодильников.
В крупных хозяйствах промышленного типа сроки и кратность проведения профилактической технологической дезинфекции отдельных объектов и секторов в процессе эксплуатации определяются циклограммой их использования. Программирование и плановое выполнение санитарных работ по очистке, дезинфекции и дезинсекции в таких хозяйствах являются строго обязательными, так как от этого зависит успех самого производства. В комплексах по выращиванию и откорму молодняка крупного рогатого скота перед приемом телят каждую секцию механически очищают и дезинфицируют. После 115-дневного пребывания (первый период) телят переводят в секции второго периода для откорма. В это время секции первого периода в течение двух суток оставляют свободными и до заполнения новым поголовьем их очищают и дезинфицируют. В секциях второго периода откорма дезинфекцию проводят через 277 дней, т. е. после отгрузки
Откормленных животных на мясокомбинат. Коридоры и галереи дезинфицируют ежедневно в конце смены, а пол промывают водой каждый раз после прогона партии животных. Помещения для поступающих телят дезинфицируют после каждого поступления животных из хозяйств-поставщиков.
Дезинфекцию помещений на комплексах по выращиванию телок и нетелей проводят по схеме, принятой, в комплексах по выращиванию и откорму молодняка крупного рогатого скота с учетом некоторых особенностей технологии выращивания племенных животных.
Технологическую дезинфекцию на молочных комплексах выполняют с учетом системы содержания коров, конструкции полов, кратности дойки, планирования растелов и других особенностей.
В секциях помещения для содержания дойных и сухостойных коров, кормовые проходы и боксы дезинфицируют через каждые 2 мес. В родильном отделении стойла дезинфицируют после освобождения и перед постановкой в них коров для отела; навозные решетки и проходы дезинфицируют ежедневно. Центральную галерею (проход), преддоильные и последоильные площадки очищают от навоза и моют ежедневно, а дезинфицируют через каждые две недели.
В свиноводческих комплексах с законченным циклом воспроизводства, выращивания и откорма свиней и работающих на завозном поголовье сроки и кратность дезинфекции отдельных объектов и секторов в процессе эксплуатации также определяются циклограммой их использования. В помещениях для содержания холостых и супоросных свиноматок ежедневно дезинфицируют отдельные группы станков по мере их освобождения и нового заполнения вновь поступивших технологических групп животных. В остальных производственных помещениях комплекса дезинфекцию проводят посекционно, соблюдая принцип «пусто-занято».
В крупных птицеводческих хозяйствах один раз в месяц устраивают санитарный день, в который проводят текущий санитарный ремонт, удаляют помет и остатки корма. Все объекты промывают горячим 1-2 %-ным р-ром кальцинированной соды и дополнительно дезинфицируют по установленному графику с учетом технологии производства и комплектования хозяйства птицей.
В крупных овцеводческих хозяйствах ежегодно весной после перевода овец на летние пастбища проводят тщательную механическую очистку кошар и дезинфекцию, обязательно сочетающуюся с дезинсекцией.
Осенью, перед постановкой овец на стойловое содержание, кошары вновь дезинфицируют и дезинсицируют, что обеспечивает надежную гарантию полного освобождения помещений от патогенной микрофлоры и накожных паразитов – клещей и насекомых.
Вынужденную дезинфекцию проводят в хозяйствах при возникновении инфекционных болезней среди животных. Такая дезинфекция делится на текущую и заключительную.
Текущую дезинфекцию проводят систематически (в определенные для каждой болезни сроки) со времени появления в хозяйстве первого случая заболевания и всякий раз при обнаружении и выделении вновь заболевшего животного, а также при очередном обследовании неблагополучного скота в сроки, предусмотренные инструкциями по борьбе с заразными болезнями. Текущая дезинфекция направлена на своевременное уничтожение возбудителя конкретной болезни, выделяемого больными животными и микробоносителями в течение всего неблагополучия хозяйства. Ее проводят в помещениях с подозреваемыми в заражении животными, а также в изоляторах (ежедневно при утренней уборке) с животными, явно больными или подозрительными по заболеванию. При наличии больных животных дезинфицирующие средства, наносимые на поверхности стен, пола и инвентаря, не проникают в подполье, навозные каналы и другие труднодоступные пространства, и они остаются необеззараженными. С учетом всего этого в комплекс мер, направленных на полную ликвидацию эпизоотического очага, входит также и заключительная дезинфекция.
Заключительную дезинфекцию проводят перед снятием карантина (или ограничительных мероприятий) после оздоровления хозяйства. Эта заключительная оздоровительная мера направлена на полное уничтожение возбудителя во внешней среде эпизоотического очага. При заключительной дезинфекции обязательно ббеззараживают все помещения и территорию вокруг, транспортные средства, инвентарь, одежду, навоз и т. д. Особое внимание уделяют дезинфекции пола и почвы под ним. Деревянный настил пола полностью снимают, непригодные доски сжигают, а остальные обильно 2-3 раза орошают дезраствором, высушивают на открытом воздухе, снова дезинфицируют, высушивают и обстругивают. Верхний слой почвы под полом на глубину пропитывания его мочой снимают и обеззараживают. Оставшийся грунт орошают 2 %-ным р-ром формальдегида (2 л/м2) и перекапывают на глубину 20-25 см, прикатывают и засыпают до первоначального уровня свежей землей и утрамбовывают. Таким же образом обеззараживают и глинобитные полы.
Объекты дезинфекции.
Ими являются животноводческие помещения и территория вокруг ферм; предприятия по переработке и склады для хранения продуктов и сырья животного происхождения; оборудование и все предметы, с которыми соприкасались животные, навоз, жижа и прочие выделения животных; используемые для перевозки животных или трупов транспортные средства; места временного скопления животных; животное сырье; спецодежда, инструменты, перевязочный материал и т. д.
Контроль качества дезинфекции.
О качестве профилактической и вынужденной дезинфекции при сальмонеллезе, роже свиней, бруцеллезе, чуме свиней, чуме птиц, при ящуре (текущая дезинфекция) принято судить по наличию или отсутствию на поверхности объектов после их дезинфекции кишечной палочки лактозопозитивной группы, а при туберкулезе, ящуре (заключительная дезинфекция), оспе овец, оспе птиц, лептоспирозе и вирусном гепатите утят – стафилококков.
Бактериологический контроль качества дезинфекции проводят следующим образом. Через 2 – 3 ч после дезинфекции берут 10 – 20 проб с пола, стен, углов, кормушек. Для этого намечают квадраты 10 х 10 см и протирают их в течение 1 – 2 мин стерильным ватным тампоном, пропитанным (и хорошо отжатым) в колбе с нейтрализующим дезинфектант раствором. Каждый в отдельности тампон помещают в стерильный нейтрализующий раствор или в стерильную воду и направляют в лабораторию. Концентрация нейтрализующего раствора должна быть в 10 раз меньше концентрации дезинфектанта. Для нейтрализации хлорной извести используют гипосульфит, щелочных растворов – уксусную кислоту, формалина – нашатырный спирт.
В лаборатории пробы исследуют в тот же день. Тампоны отжимают и удаляют, а жидкость дважды центрифугируют (второй раз разводят стерильной водой), недосадочную жидкость удаляют, а осадок используют для бактериологического исследования на элективных питательных средах. Дезинфекция признается удовлетворительной, если нет роста тестмикробов при профилактической и заключительной дезинфекциях во всех пробах, а при текущей – не менее чем в 90 % проб.
источник
1.1. Настоящие методические указания определяют порядок и методы контроля качества профилактической и вынужденной (текущей и заключительной) дезинфекции объектов, подлежащих ветеринарному надзору.
1.2. Методические указания предназначены для специалистов ветеринарных лабораторий, а также лабораторий хозяйств, ДПС и предприятий по производству и переработке мяса и сырья животного происхождения.
1.3. Контроль качества проводят в три этапа.
1.3.1. Контроль подготовки объектов к дезинфекции (проверяют степень очистки поверхностей, их увлажненность, защиту электрооборудования и приборов, герметизацию помещений) осуществляет ветеринарный специалист, ответственный за проведение дезинфекции.
1.3.2. Контроль за соблюдением установленных режимов дезинфекции (выбор препарата и метода дезинфекции, концентрация, температура раствора, равномерность увлажнения поверхностей дезраствором, соблюдение параметров производительности используемых машин и аппаратов, качество распыла раствора) осуществляет ветеринарный специалист, ответственный за выполнение дезинфекции.
1.3.3. Бактериологический контроль качества дезинфекции осуществляют специалисты ветеринарных лабораторий периодически или в сроки, установленные с учетом эпизоотической обстановки, технологии производства, целей дезинфекции и других конкретных особенностей.
1.3.3.1. Бактериологический контроль качества дезинфекции должен быть неожиданным, без предварительного уведомления работников, ответственных за проведение дезинфекции, и исполнителей этих работ о времени и месте отбора проб для исследования.
1.3.3.2. При бактериологическом контроле качества дезинфекции определяют наличие на поверхностях обеззараживаемых объектов жизнеспособных клеток санитарно-показательных микроорганизмов — бактерий группы кишечной палочки (Eschezichia, Citrobacter, Enterobacter), стафилококков (aureus, epidermatis, Saprophiticus), микобактерий или спорообразующих аэробов рода Bacillus.
Качество обеззараживания спецодежды контролируют по выделению тестмикроорганизмов из искусственно контаминированных кусочков тканей, закладываемых в подлежащий обеззараживанию материал.
1.3.3.3. По наличию или отсутствию бактерий группы кишечной палочки контролируют качество профилактической дезинфекции, вынужденной (текущей и заключительной) дезинфекции при бруцеллезе, колибактериозе, лептоспирозе, листериозе, болезни Ауески, лейкозе, пастереллезе, сальмонеллезах, трихомонозе, кампилобактериозе, трипанозомозах, токсоплазмозе, инфекционном ринотрахеите, парагриппе и вирусной диарее крупного рогатого скота, контагиозной эктиме, инфекционной агалактии и контагиозной плевропневмонии овец и коз, отечной болезни, инфекционном атрофическом рините, дизентерии, трансмиссивном гастроэнтерите, балантидиозе, гемофилезной плевропневмонии и роже свиней, ринопневмонии лошадей, пуллорозе-тифе птиц, миксоматозе кроликов, микоплазмозе птиц, а также текущей дезинфекции при болезнях, указанных в п. 1.3.3.4. (кроме туберкулеза, споровых и экзотических инфекций).
1.3.3.4. По наличию или отсутствию стафилококков контролируют качество текущей дезинфекции при туберкулезе, болезнях, вызываемых спорообразующими микроорганизмами и экзотических инфекциях; заключительной дезинфекции при туберкулезе, аденовирусных инфекциях, ящуре, оспе, туляремии, орнитозе (пситтакозе), диплококкозе, стафилококкозе, стрептококкозе, некробактериозе, катаральной лихорадке, бешенстве, чуме всех видов животных, злокачественной катаральной горячке, перипневмонии и паратуберкулезном энтерите крупного рогатого скота, инфекционной катаральной лихорадке, копытной гнили и инфекционном мастите овец, везикулярной болезни свиней, инфекционной анемии, инфекционном энцефаломиелите, эпизоотическом лимфангоите, сапе и мыте лошадей, гепатите утят, вирусном энтерите гусят, инфекционном бронхите, ларинготрахетие, болезни Марека, болезни Гамборо, инфекционном энцефаломиелите, Ньюкаслской болезни, вирусном энтерите, алеутской болезни, псевдомонозе и инфекционном гепатите плотоядных, хламидиозах, риккетсиозах, энтеровирусных инфекциях, гриппе сельскохозяйственных животных и птиц, трихофитии, микроспории, других микозах животных и птиц, актиномикозе крупного рогатого скота, а также болезнях, вызываемых неклассифицированными вирусами.
Качество заключительной дезинфекции при микозах контролируют также по выделению соответствующих возбудителей.
1.3.3.5. Качество заключительной дезинфекции при туберкулезе контролируют по выделению стафилококков и микобактерий, при сибирской язве, эмфизематозном карбункуле, брадзоте, злокачественном отеке, других споровых инфекциях и экзотических инфекциях — по наличию или отсутствию спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus.
2.1. Отбор проб для бактериологического контроля и доставку их в лабораторию осуществляют лица, не несущие личной ответственности за качество дезинфекции и не находящиеся в подчинении работников, ответственных за ее проведение.
2.2. Отбор проб проводят по истечении срока экспозиции, указанной в соответствующих разделах действующих инструкций, до начала проветривания помещений; при дезинфекции спецодежды — по окончании цикла обработки (обеззараживания, стирки, ополаскивания и отжима).
2.3. Пробы (смывы, отпечатки, соскобы) для исследования берут с 10 — 20 различных участков поверхности животноводческого помещения (полов, стойл и проходов, стен, перегородок, столбов, кормушек, поилок и т.д.). При наличии на объекте участков поверхности с механическими загрязнениями, пробы материала для исследования берут методом соскобов.
При контроле качества дезинфекции других объектов ветеринарного надзора пробы берут с 10 — 20 различных участков поверхностей каждого помещения, выбирая наименее доступные для дезинфекции.
2.3.1. Для контроля качества дезинфекции при туберкулезе с каждого вида поверхности берут по 5 смывов, которые объединяют в одну пробу. Из каждого помещения отбирают не менее 10 объединенных проб, в т.ч. по 3 пробы с пола и кормушек.
При заключительной дезинфекции одновременно берут пробы с территории фермы в разных направлениях от углов здания и от центра каждой стены на расстоянии 5, 10 и 15 м (с учетом рельефа местности). Всего с прилегающей территории отбирают не менее 24 проб. Поверхностный слой грунта разрыхляют стерильным скальпелем или ножом на глубину до 3 — 5 см и отбирают в стерильную посуду 10 — 20 г исследуемого материала. Если прилегающая территория имеет твердое покрытие, пробы отбирают методом смывов, как указано выше.
2.4. После проведения дезинфекции и последующей экспозиции с участков, подвергаемых контролю, отбирают пробы стерильными ватно-марлевыми тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе или воде (см. приложение п. 2).
Участки площадью 10×10 см, тщательно протирают до полного снятия с поверхности всех имеющихся на ней загрязнений. После чего тампоны помещают в пробирку с нейтрализующей жидкостью.
Плотные загрязнения (корочки) снимают с помощью стерильного скальпеля и переносят в эту же пробирку.
2.5. Для нейтрализации действия дезинфицирующих средств готовят специальные растворы в концентрации в 10 раз меньшей, чем концентрация применяемого дезинфектанта (см. приложение п. 1).
Для нейтрализации хлоросодержащих дезинфицирующих средств используют раствор тиосульфата натрия (гипосульфита), щелочных растворов — раствор уксусной кислоты; формалина — раствор аммиака (нашатырный спирт); кислот, перекиси водорода и ее производных — раствор бикарбоната натрия.
При использовании для дезинфекции щелочного раствора формальдегида, участки сначала увлажняют раствором аммиака, затем дополнительно раствором уксусной кислоты.
При дезинфекции дезонолом, лизолом, феносмолином, фенолятом натрия и другими средствами, для которых нет нейтрализаторов, применяют стерильную водопроводную воду.
2.6. Взятие отпечатков на тонкий слой плотной питательной среды проводят лица, прошедшие подготовку по данному вопросу.
Предметные стекла с нанесенной средой (см. приложение п. 3) извлекают корнцангом из ванн или пробирок, не касаясь застывшей питательной среды, и накладывают на исследуемый объект таким образом, чтобы питательная среда соприкасалась с его поверхностью. Через 2 мин. пробы-отпечатки отделяют от контролируемого объекта и помещают в ванны или пробирки, в которых они транспортировались. При взятии проб с труднодоступных или вертикальных поверхностей время контакта слоя питательной среды с объектом сокращают до 30 с.
2.7. Смывы должны быть доставлены в лабораторию в течение 3 — 6 ч с момента взятия, отпечатка — не позднее 2 ч.
3.1. Метод бактериологического исследования смывов.
3.1.1. Пробы, каждую в отдельности, отмывают в той же пробирке путем нескольких погружений и отжатий тампона.
Отжатые тампоны удаляют, а жидкость центрифугируют при 3000 — 3500 об/мин в течение 20 — 30 мин. Затем надосадочную жидкость сливают, в пробирку наливают такое же количество стерильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а из центрифугата делают посевы.
При наличии в смыве грубых механических примесей их растирают в пробирке стеклянной палочкой, после чего смыв переносят в центрифужную пробирку.
3.1.2. Для индикации кишечной палочки 0,5 мл центрифугата высевают в пробирки с модифицированной средой Хейфеца или КОДА (см. приложение п. 5.1.). Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 — 38 °С в течение 12 — 18 ч. Изменение сиренево-красного цвета среды в зеленый или салатовый цвет с помутнением сред и газообразованием свидетельствует о наличии роста кишечной палочки.
Другие изменения цвета ( желтоватый, розовый, сероватый), наблюдаемые при росте микроорганизмов других видов, не учитывают.
В сомнительных случаях делают подтверждающий посев с жидких сред на агар Эндо. Посевы инкубируют при температуре 37 — 38 °С в течение 12 — 16 ч.
3.1.3. Для индикации стафилококков 0,5 мл центрифугата высевают в 5 мл мясопептонного бульона с 6,5 % хлористого натрия. Через 22 — 24 ч инкубирования посевов при температуре 37 — 38 °С делают пересевы бактериологической петлей на 8,5 %-ный солевой мясопептонный агар. Посевы выдерживают в термостате 22 — 24 ч при температуре 37 — 38 °С. Из выросших культур для подтверждения роста стафилококков готовят мазки, окрашивают их простым методом и микроскопируют.
3.1.4. Для индикации спорообразующих аэробов смывы обрабатывают как указано в пп. 3.1.1., но перед центрифугированием их прогревают на водяной бане при 65 °С в течение 30 мин, затем центрифугируют. Из центрифугата каждой пробы делают посевы в одну пробирку с МПБ и на 2 чашки с МПА (для контроля качества дезинфекции при сибирской язве МПА может быть заменен дифференциально-диагностической средой — см. приложение п. 5.3). Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 — 48 ч.
При наличии роста на МПА подсчитывают количество колоний, а также изучают их морфологию при малом увеличении микроскопа. В случае возникновения подозрения на выделение возбудителя сибирской язвы, идентификацию такой культуры проводят в порядке, предусмотренном действующими Методическими указаниями по данному вопросу.
При наличии роста на дифференциально-диагностической среде в крышку чашки Петри вносят 1 — 2 мл 25 %-ного водного раствора аммиака, чашку (крышкой вниз) выдерживают при 20 ± 2 °С в течение 1 мин, после чего визуально или под малым увеличением микроскопа проводят учет теста.
Под действием паров аммиака происходит порозовение колоний микроорганизмов, обладающих фосфатазной активностью.
Вас. anthracis фосфатазной активностью не обладает и его колонии остаются бесцветными.
При отсутствии роста или характерных колоний на плотных средах и наличии роста в МПБ, делают дробные посевы из МПБ на плотную питательную среду, с которыми поступают как указано выше.
3.1.5. При просмотре посевов учитывают общее количество проб, в которых обнаружен рост санитарно-показательных микроорганизмов, а при споровой инфекции — и количество колоний непатогенных споро-образующих аэробов рода Bacillus.
3.2. Метод отпечатков на тонкий слой плотной питательной среды.
3.2.1. Метод отпечатков является ускоренным методом выделения санитарно-показательных микроорганизмов с поверхностей животноводческих объектов и наиболее приемлем в условиях промышленного ведения животноводства на комплексах, птицефабриках и других объектах, где имеются лаборатории.
3.2.2. Ванны и пробирки с пробами-отпечатками, доставленные в лабораторию, помещают в термостате при температуре 37 °С на 16 — 18 ч.
3.2.3. После инкубирования пробы просматривают невооруженным глазом на наличие роста.
При отсутствии макроколоний и изменения среды пробы дальнейшим исследованиям не подвергают. В сомнительных случаях, когда отсутствует рост макроколоний, но произошло изменение цвета или прозрачности среды, пробы-отпечатки высушивают на воздухе до полного подсыхания среды, фиксируют над пламенем, окрашивают по Муромцеву и микроскопируют с целью обнаружения микроколоний.
3.2.4. Учитывают общее количество отпечатков, в которых обнаружен рост микроорганизмов.
3.3. Исследование с целью выделения микобактерий.
3.3.1. Контроль качества заключительной дезинфекции при туберкулезе проводят параллельно двумя методами по выделению стафилококка и микобактерий.
3.3.2. Смывы обрабатывают как указано в пп. 3.1.1. Из центрифугата каждой объединенной пробы делают высев на среды для выделения стафилококков, с которыми поступают как указано в пп. 3.1.3., и готовят по 6 мазков на узких (1,2×7,5 см) предметных стеклах (см. приложение п. 4). Мазки высушивают при комнатной температуре или в термостате в течение 2 — 3 ч., складывают их по два тыльной стороной и погружают в 8 — 12 %-ный раствор серной кислоты на 15 мин. После этого стекла-мазки берут пинцетом и погружают на 5 — 10 секунд в стерильную дистиллированную воду, а затем переносят в пробирки со средой Сотона и помещают в термостат при 37 — 38 °С на 12 суток.
3.3.3. Пробы почвы с прилегающей территории и соскобов с поверхности помещений, каждую в отдельности, помещают в колбу, заливают 2 — 3-кратным количеством дистиллированной воды, взбалтывают и фильтруют через двойной слой марли в узкогорлую колбу емкостью 200 — 250 мл. К фильтрату добавляют 2 — 3 мл ксилола или авиационного бензина, встряхивают 15 — 20 мин и доливают дистиллированной воды до горлышка. Содержимое отстаивают 30 мин с целью получения флотата, из которого готовят мазки на узких предметных стеклах. В дальнейшем с мазками поступают как указано в пп. 3.3.2.
3.3.4. При наличии роста стафилококков хотя бы в одной исследованной пробе качество дезинфекции признают неудовлетворительным и дальнейшее исследование по выделению микобактерий не проводят.
3.3.5. Стекла с мазками извлекают из пробирок на 6, 8, 12 день инкубирования, высушивают, фиксируют над пламенем горелки, окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют для обнаружения микроколоний.
3.4. Оценка результатов исследования.
3.4.1. Качество профилактической дезинфекции помещений для получения и содержания молодняка животных (птицы) и текущей дезинфекции изолированных секций (боксов, скотных дворов) с автономной системой жизнеобеспечения животных признают удовлетворительным при отсутствии роста санитарно-показательных микроорганизмов в 90 % исследованных проб.
При профилактической дезинфекции помещений для содержания взрослого поголовья и текущей дезинфекции частично освобожденных от животных или неизолированных помещений допускается выделение санитарно-показательных микроорганизмов из 20 % исследованных проб.
3.4.2. Качество заключительной дезинфекции при ее контроле по выделению бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, грибов и микобактерий признают удовлетворительным при отсутствии выделения названных культур во всех исследованных пробах.
При споровых инфекциях качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста Вас. anthracis при этом допускают рост в прямом посеве на МПА единичных (не более трех в смыве) колоний непатогенных спорообразующих аэробов рода Bacillus.
4.1. Настоящая методика предназначена для быстрого (непосредственно после окончания экспозиции дезинфекции) контроля качества аэрозольной дезинфекции животноводческих помещений, проводимой формалином.
4.2. Метод основан на окрашивании индикаторной среды под воздействием газовой и капельной фаз аэрозоля формальдегида. В качестве индикаторной среды используют среду Эндо, которая под воздействием формальдегида в процессе аэрозольной дезинфекции приобретает резко очерченное красное окрашивание.
4.3. Перед проведением дезинфекции индикаторные пробирки (см. приложение п. 6) размещают на полу, стенах и потолке помещения и находящемся в помещении оборудовании. Особо важно разместить пробирки в труднодоступных местах помещения: (внутри оборудования, у щелей и т.д.). На одно помещение требуется в среднем 10 — 15 пробирок. Индикаторные пробирки прикрепляют к поверхностям помещения с помощью пластилина, липкой ленты или других средств.
Перед размещением пробирок с последних снимают парафиновые колпачки. На полу помещения пробирки устанавливают открытым концом вверх, на стенах — срез пробирки должен находиться в вертикальной плоскости, на потолке — открытым концом вниз.
4.4. Оценку качества дезинфекции проводят непосредственно после окончания экспозиции (12 или 24 ч). Линейкой с миллиметровой шкалой измеряют длину окрашенного столбика индикаторной среды, начиная с обреза пробирки. Дезинфекция считается удовлетворительной, если глубина окрашивания среды после экспозиции 12 ч будет не меньше 18 мм, а после экспозиции 24 ч — 30 мм.
5.1. Качество дезинфекции спецодежды, мешкотары и прочих изделий из тканевых материалов, подвергаемых обеззараживанию в камерах, методом замачивания в дезинфицирующем растворе, кипячением или по режимам одновременной стирки и дезинфекции, контролируют по выделению тест-культур микроорганизмов из тест-объектов, закладываемых в подлежащий обеззараживанию материал.
5.2. При контроле качества дезинфекции в очагах бактериальных (кроме туберкулеза) и вирусных инфекций в качестве тест-культуры используют музейные штаммы кишечной палочки, в очагах туберкулеза и мало изученных вирусных инфекций — золотистого стафилококка, в очагах споровых инфекций — антракоида.
5.3. В качестве тест-объектов используют кусочки батистовой ткани, импрегнированные соответствующей тест-культурой (см. приложение п. 7).
5.4. Тест-объекты закладывают по 2 шт. в стерильные мешочки размером 5×8 см, изготовленные в виде конверта из той же ткани, что и подлежащие обеззараживанию изделия, мешочки с вложенными в них тест-объектами помещают в карман спецодежды или пришивают нитками к подлежащим обеззараживанию изделиям.
При дезинфекции методом замачивания в дезрастворах или кипячения изделия с заложенными в них тест-объектами размещают послойно (внизу, в середине и в верхней части емкости), а при дезинфекции в камерах — в разных местах камеры.
5.5. По истечении экспозиции дезинфекции или цикла «стирка-отполаскивание-отжим» при использовании метода одновременного обеззараживания и стирки мешочки с тест-объектами извлекают, помещают в стерильные чашки Петри и доставляют в лабораторию для исследования.
В лаборатории тест-объекты извлекают из мешочков, промывают по 5 мин в растворе соответствующего нейтрализатора (см. п. 2.5) и стерильной водопроводной воде (или дважды в воде, если нейтрализатор не известен), и помещают каждый в отдельности в пробирки с соответствующими питательными средами. Если дезинфекцию проводили методом кипячения без добавления кальцинированной соды, дополнительного промывания тест-объектов не требуется.
5.6. При контроле качества дезинфекции по выделению кишечной палочки посев проводят в модифицированную среду Хейфеца или КОДА, для выделения золотистого стафилококка — в 6,5 %-ный солевой МПБ, для выделения антракоида — в МПБ, с которыми поступают как указано в пп. 3.1.2 — 3.1.4.
5.7. Качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста тест-культуры во всех пробах.
6.1. Определение массовой доли едкого натра в препарате и его растворах.
6.1.1. Аппаратура, реактивы и растворы.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80 с наибольшим пределом взвешивания 500 г, 3-го класса точности.
Колба по ГОСТ 1770-74, исполнения 1 или 3, вместимостью 500 см 3 .
Бюретка по ГОСТ 20292-74, вместимостью 50 см 3 с ценой деления 0,1 см 3 .
Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, х.ч. или ч.д.а. раствор (HCl) = 1 моль/дм 3 .
Барий хлористый по ГОСТ 4108-72, х.ч. или ч.д.а., 10 %-ный раствор, предварительно нейтрализованный по фенолфталеину.
6.1.2.1. Приготовление анализируемого раствора твердого препарата.
Перед взятием навески с пробы препарата удаляют верхний выветрившийся слой, в стаканчик для взвешивания быстро отбирают около 20 г препарата и взвешивают. Навеску количественно переносят в мерную колбу, приливают 300 — 400 см 3 воды, растворяют, охлаждают, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают — раствор А.
6.1.2.2. Приготовление анализируемого раствора жидкого препарата.
25 см 3 препарата отбирают в предварительно взвешенный стакан вместимостью 100 см 3 , взвешивают, количественно переносят в мерную колбу, разбавляют водой до метки и перемешивают — раствор Б.
Растворы А и Б готовят из двух параллельных навесок.
25 см 3 раствора А и Б помещают в коническую колбу вместимостью 250 см 3 , добавляют 20 см 3 раствора хлористого бария, перемешивают и закрывают пробкой. Через 5 мин вводят 2 — 3 капли раствора фенолфталеина и титруют раствором соляной кислоты концентрации 1 моль/дм 3 до обесцвечивания индикатора.
6.1.4. Обработка результатов.
Массовую долю едкого натра (X) в процентах вычисляют по формуле
V — объем раствора соляной кислоты концентрации 1 моль/дм 3 , израсходованный на титрование, см 3 ;
m — масса навески, взятой для приготовления растворов А или Б, г;
0,04 — масса едкого натра, соответствующая 1 см 3 раствора соляной кислоты концентрации точно 1 моль/дм 3 , г.
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,2 % при доверительной вероятности Р = 0,95.
6.2. Определение содержания формальдегида в формалине техническом, параформе и их растворах.
Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, ч.д.а., или кислота серная по ГОСТ 4204-77, ч.д.а., растворы концентрации 1 и 0,1 моль/дм 3 ;
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, ч.д.а., раствор концентрации 0,1 моль/дм 3 .
Натрий сернокислый (сульфит натрия) по ГОСТ 195-77 или ГОСТ 429-76, ч.д.а., раствор, 126 г безводного сульфита натрия или 252 г кристаллического растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 дм 3 с последующим тщательным перемешиванием;
1,5 — 1,8 г формалина или 0,5 — 0,6 г параформа взвешивают в колбе с пробкой, содержащей 10 см 3 дистиллированной воды, результат взвешивания в граммах записывают до четвертого десятичного знака. При определении содержания формальдегида в рабочих растворах формалина или параформа для исследования берут 5 — 25 см 3 в зависимости от предполагаемой концентрации. К полученному раствору прибавляют две капли тимолфталеина и нейтрализуют раствором гидроокиси натрия до бледно-голубой окраски.
В другую колбу помещают 50 см 3 раствора сульфита натрия, добавляют две капли тимолфталеина и нейтрализуют раствором соляной или серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм 3 до исчезновения голубой окраски или раствором гидроокиси натрия до появления бледно-голубой окраски.
Нейтральный раствор сульфита натрия переливают в колбу с навеской, перемешивают в течение 2 мин и титруют раствором соляной или серной кислоты концентрации 1 моль/дм 3 до исчезновения голубой окраски.
6.2.3. Обработка результатов.
Массовую долю формальдегида (X) в процентах вычисляют по формуле:
V — объем раствора соляной или серной кислоты концентрации точно 1 моль/дм 3 , израсходованный на титрование, см 3 ;
0,03003 — масса формальдегида, соответствующая 1 см 3 раствора соляной или серной кислоты концентрации точно 1 моль/дм 3 , г;
m — масса анализируемой пробы, г.
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,2 % при доверительной вероятности Р = 0,95.
Результат округляют до первого десятичного знака.
6.3. Определение массовой доли углекислого натрия в кальцинированной соде технической.
Кислота серная по ГОСТ 4204-77, раствор с (1/2 H2SO4 = 1 моль/дм 3 )
Метиловый оранжевый (индикатор), 0,1 %-ный водный раствор.
Взвешивают от 2,3 до 2,5 г кальцинированной соды прокаленной при 270 — 300 °С до постоянной массы, помещают в коническую колбу вместимостью 250 см 3 , растворяют в 20 см 3 воды и титруют раствором серной кислоты в присутствии метилового оранжевого до изменения окраски раствора из желтой в оранжево-розовую.
6.3.3. Обработка результатов.
Массовую долю углекислого натрия (X) в процентах вычисляют по формуле:
V — объем раствора серной кислоты концентрации точно 1 моль/дм 3 , израсходованный на титрование, см 3 ;
0,05299 — масса углекислого натрия, соответствующая 1 см 3 раствора серной кислоты концентрации точно с (1/2 H2SO4 = 1 моль/дм 3 , г/см 3 );
m — масса навески кальцинированной соды, г.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,2 %.
6.4. Определение массовой доли перекиси водорода в препарате и его растворах.
Калий марганцовокислый по ГОСТ 20490-76, х.ч., 0,1 н. раствор.
Кислота серная по ГОСТ 4204-77, х.ч., раствор 1:4.
0,15 — 0,20 г перекиси водорода или 1,0 — 2,0 мл рабочего раствора, взятые с погрешностью не более 0,0002 г (или 0,01 мл), помещают в коническую колбу вместимостью 250 см 3 . Вносят 25 см 3 воды, 20 см 3 серной кислоты и титруют раствором марганцовокислого калия до розовой окраски, не исчезающей в течение минуты.
Одновременно проводят контрольный опыт в тех же условиях и с тем же количеством реактивов, но без анализируемого препарата.
6.4.3. Обработка результатов.
Массовую долю перекиси водорода (X) в процентах вычисляют по формуле:
V — объем точно 0,1 н. раствора марганцовокислого калия, израсходованный на титрование анализируемого раствора, см 3 ;
V1 — объем точно 0,1 н. раствора марганцовокислого калия, израсходованный на титрование контрольного опыта, см 3 ;
0,0017 — масса перекиси водорода, соответствующая 1 см 3 точно 0,1 н. раствора марганцовокислого калия, г;
m — масса навески (г), или объем раствора (мл) взятых для анализа.
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,1 %.
6.5. Определение массовой доли глутарового альдегида в препарате и его растворах.
Раствор бисульфита натрия (NaHSO3) — готовят растворением в воде пиросульфита натрия из расчета 4,0 г Na2S2O5 на 1 дм 3 воды. Взвешивают пиросульфит натрия и растворяют его в дистиллированной воде при тщательном перемешивании. Хранят в посуде, плотно закрытой пробкой.
В 3 конические колбы вносят мерной пипеткой по 25 см 3 раствора бисульфита натрия, закрывают их притертыми пробками. Затем в колбы с бисульфитом натрия вносят пробы анализируемого раствора глутарового альдегида (содержащие около 0,025 г глутарового альдегида), взвешенные на аналитических весах с погрешностью не более 0,0002 г. Колбы оставляют при комнатной температуре на 30 мин, после чего оттитровывают непрореагировавший бисульфит натрия 0,1 н раствором йода до появления желтой окраски раствора.
Параллельно с рабочим проводят контрольный опыт, для чего в три конические колбы вносят по 25 см 3 раствора бисульфита натрия и оттитровывают их 0,1 н раствором йода до появления желтого окрашивания. Ввиду большой смачиваемости стенок бюретки раствором йода во избежание большой ошибки титрование ведут при одинаковой скорости истечения раствора йода во время рабочего и контрольного определений.
6.5.3. Обработка результатов анализа.
Массовую долю глутарового альдегида определяют по формуле:
X — массовая доля глутарового альдегида, %;
m — навеска раствора глутарового альдегида, г;
N — нормальность водного раствора йода;
K — поправочный коэффициент к титру раствора йода;
Vx — объем раствора йода, пошедший на титрование 25 см 3 раствора бисульфита натрия (контрольной пробы), см 3 ;
V — объем раствора йода, пошедший на титрование рабочей пробы, см 3 .
За результат анализа принимают среднее арифметическое трех определений, расхождение между максимальным и минимальным значениями которых не должно превышать 3 %.
6.6. Определение массовой доли активного хлора в препаратах и их растворах.
Калий йодистый по ГОСТ 4232-74, 10 %-ный раствор.
Кислота серная по ГОСТ 4204-77, 5 %-ный раствор.
Крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76, 1 %-ный раствор.
6.6.2. Определение массовой доли активного хлора в хлорной извести, кальция гипохлорите нейтральном и натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты.
1 — 1,5 г натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты или кальция гипохлорита нейтрального, или 2,2 — 2,8 г хлорной извести взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г, переносят в фарфоровую ступку, добавляют 30 — 40 см 3 воды и растирают пестиком до образования однородной массы.
После отстаивания водный слой декантируют в мерную колбу вместимостью 500 см 3 . К остатку в ступке добавляют около 20 см 3 воды, тщательно растирают и переносят всю массу количественно в ту же колбу. В случае исследования натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты навеску сразу переносят в мерную колбу. Объем жидкости в колбе доводят до метки водой, тщательно перемешивают и, не давая осадку осесть, отбирают пипеткой 50 см 3 раствора в коническую колбу вместимостью 500 см 3 . В эту же колбу вносят затем 10 см 3 раствора йодистого калия, перемешивают, прибавляя 50 см 3 раствора серной кислоты, закрывают колбу пробкой, снова перемешивают и помещают в темное место. Через 5 мин выделившийся йод титруют раствором серноватистокислого натрия до соломенно-желтого цвета, добавляют 1 — 2 см 3 раствора крахмала и продолжают титрование до обесцвечивания раствора.
6.6.3. Определение массовой доли активного хлора в растворах вышеуказанных препаратов (п. 6.6.2.) и гипохлорите натрия.
10 см 3 раствора отбирают пипеткой и переносят в мерную колбу вместимостью 250 см 3 , доводят объем раствора водой до метки и тщательно перемешивают.
10 см 3 приготовленного раствора переносят пипеткой в коническую колбу вместимостью 250 см 3 , прибавляя 10 см 3 йодистого калия и 20 см 3 серной кислоты, перемешивают, закрывают колбу пробкой и ставят в темное место.
Через 5 мин титруют выделившийся йод до обесцвечивания раствора.
6.6.4. Обработка результатов.
Массовую долю активного хлора (X) в процентах вычисляют по формуле:
V — объем точно 0,1 н. раствора серноватистокислого натрия, израсходованный на титрование анализируемой пробы, см 3 ;
0,0035453 — масса активного хлора, соответствующая 1 см 3 точно 0,1 н. раствора серноватистокислого натрия, г;
А — исходный объем приготовленного раствора, см 3 ;
m — масса навески препарата, г;
Б — масса раствора, взятого для титрования, см 3 .
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,3 %.
С утверждением настоящих «Методических указаний . » отменяется действие Приложения 4 к «Инструкции по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации» утвержденной 8.12.1968 г. «Методики бактериологического контроля качества дезинфекции при туберкулезе», утвержденной 20.05.82 г. «Методических указаний по ускоренному выделению санитарно-показательных микроорганизмов с поверхностей животноводческих объектов для контроля качества дезинфекции», утвержденных 2.07.86 г., п. 13 «Инструкции по ветеринарно-санитарной обработке вагонов после перевозки животных, продуктов и сырья животного происхождения», утвержденной 17.12.85 г. (бактериологический контроль качества дезинфекции).
Методические указания по контролю качества дезинфекции разработаны Всесоюзным ордена Дружбы народов научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии, Всесоюзным ордена Ленина научно-исследовательским институтом экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, Центральной ветеринарной лабораторией и Омским ветеринарным институтом.
к Методическим указаниям по
контролю качества дезинфекции
1. Приготовление нейтрализующих растворов.
Нейтрализующие растворы готовят в концентрации в 10 раз меньшей чем концентрация использованного дезинфицирующего средства.
Раствор готовят на стерильной воде в стерильной посуде и разливают в пробирки или флаконы с соблюдением правил стерильности. (Растворы уксусной кислоты и бикарбоната натрия можно стерилизовать автоклавированием). Раствор аммиака стерилизации не подлежит. Готовые пробирки (флаконы) можно хранить в течение 5 дн при комнатной температуре.
Ватные или марлевые тампоны для взятия смывов монтируют на алюминиевой проволоке, пропущенной через резиновую пробку. В пробирки разливают по 10 мл физиологического раствора, закрывают резиновыми пробками с вмонтированными тампонами и стерилизуют автоклавированием при 1 атм в течение 30 мин.
3. Подготовка материалов для исследования методом отпечатков.
3.1. Подготовка предметных стекол. Для исследования используют предметные стекла (размером 2,5×7,5 см) или стекла, разрезанные вдоль на две половинки (1,2×7,5 см). Стекла предварительно кипятят 10 — 15 мин в 2 — 5 %-ном растворе моющего порошка типа «Лотос» «Новость» и т.п., затем поверхность предметных стекол с двух сторон натирают с помощью зубной щетки или ерша этим же порошком, слегка увлажненным водой после чего тщательно промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Подготовленные стекла хранят в банке с притертой крышкой в сухом виде.
3.2. Обработка ванн и пробирок, предназначенных для транспортировки, хранения и инкубирования проб-отпечатков. При взятии проб на широкие стекла используют пластмассовые ванны для окраски мазков крови на предметном стекле (ТУ-64-1), на узкие — бактериологические пробирки, закрытые резиновыми пробками.
Пластмассовые ванны разбирают и тщательно моют горячим мыльным раствором, после чего ополаскивают вначале водопроводной водой, затем 65 — 70 %-ным этиловым спиртом или кипящей дистиллированной водой и облучают в течение 2 ч ультрафиолетовыми лучами. На дно обработанной указанным способом ванны помещают стерильную фильтровальную бумагу, затем ванны собирают и закрывают крышками.
Бактериологические пробирки и резиновые пробки моют и стерилизуют общепринятым способом. Перед стерилизацией на дно пробирки помещают небольшой ватный тампон.
3.3. Подготовка предметных стекол со средой. В стерильном боксе на предметные стекла наносят тонкий слой расплавленной питательной среды: для выделения группы бактерий кишечной палочки используют агар Эндо, стафилококков — 8,5 %-ный солевой мясо-пептонный агар (рН 7,2 — 7,4). Количество нанесенной среды должно соответствовать 0,15 мл (4 капли) для узкого предметного стекла и 0,33 мл (8 капель) для широкого.
Перед нанесением на стекло среду, находящуюся в пробирках, ставят в водяную баню и расплавляют. В расплавленную среду погружают стерильную пастеровскую пипетку. Температуру воды в бане поддерживают в пределах 80 — 90 °С.
Прогретые над пламенем горелки предметные стекла раскладывают на ровной, строго горизонтальной поверхности стола. Предметные стекла берут корцангом, слегка подогревают и наносят пипеткой указанное количество питательной среды, отступя на 2 — 2,5 см от поперечного края стекла. Затем, расположив горизонтально пастеровскую пипетку, питательную среду быстро распределяют по средней трети поверхности стекла. Распределив среду, стекла раскладывают на строго горизонтальную поверхность стола и подсушивают при комнатной температуре до появления вокруг питательной среды высушенной полосы шириной 0,5 — 1 мм. Широкие стекла со средой помещают в пластмассовые ванны, узкие — в пробирки.
Ванны и пробирки предварительно увлажняют, внеся на дно 1 или 0,1 мл стерильной водопроводной воды соответственно.
Для удобства транспортировки ванны устанавливают в биксы, пробирки — в металлические пеналы или в специально приспособленную сумку.
Подготовленные предметные стекла с солевым агаром хранятся при температуре +4 °С до 10 сут, со средой Эндо — 2 — 3 сут (если нет видимого изменения цвета среды).
4. Подготовка стекол для микрокультивирования микобактерий.
Предметные стекла разрезают вдоль на узкие стекла размером 1,2×7,5 см, моют и помещают на 2 ч в хромпик, который готовят следующим образом: берут двухромовокислый калий (40 г) помещают в фарфоровую кружку или эксикатор и растворяют в небольшом количестве воды, затем добавляют осторожно концентрированную серную кислоту до общего объема 1 л.
После хромпика стекла вновь моют дистиллированной водой, протирают чистой льняной тканью, стерилизуют сухим жаром (160°) в течение 2 ч и хранят в закрытых сосудах (эксикаторах).
5. Приготовление питательных сред.
5.1. Среды для выделения кишечной палочки.
5.1.1. Модифицированная среда Хейфеца.
К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют рН, который должен быть в пределах 7,4 — 7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикатора 1 мл 5 %-ного водного раствора метиленовой сини. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм 15 мин. Исходный цвет среды — красновато-сиреневый.
5.1.2. Питательная среда КОДА сухая. Состав и способ приготовления приведены в этикетке на упаковке среды.
5.2. Среды для выделения стафилококка.
5.2.1. Солевой мясо-пептонный бульон. К обычному МПБ с рН 7,2 — 7,4 добавляют 6,0 % натрия хлорида квалификации «ХЧ» или «ЧДА», перемешивают до полного растворения соли, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 1 атм в течение 20 — 30 мин.
5.2.2. Солевой мясо-пептонный агар. К расплавленному МПА добавляют 8,0 % натрия хлорида квалификации «ХЧ» или «ЧДА», перемешивают до полного растворения соли, разливают в колбы и стерилизуют при 1 атм 20 — 30 мин. Перед использованием солевой агар разливают в стерильные бактериологические чашки по 10 — 15 см. После застывания среды ее подсушивают в термостате в течение 1 ч.
5.3. Дифференциально-диагностическая среда для индикации Вас. anthracis
5.3.1. Приготовление растворов ингредиентов.
Полимиксина М сульфат во флаконе растворяют в стерильной дистиллированной воде, а затем последовательными разведениями стерильным 0,9 %-ным раствором натрия хлорида доводят до концентрации 10000 ЕД/мл.
Невиграмон переносят в стеклянный флакон или пробирку и растворяют в 25 %-ном водном растворе аммиака при тщательном перемешивании стеклянной палочкой. Затем последовательно разводят стерильным 0,9 %-ным раствором натрия хлорида до концентрации 100 мкг/мл.
Моющее средство «Прогресс» разводят стерильной дистиллированной водой до 0,1 %-ной концентрации.
Гризеофульвин в таблетках тщательно растирают в ступке, затем растворяют в стерильной дистиллированной воде до содержания 100 мкг препарата в 1 мл.
Фенолфталеинфосфат натрия (продажный 10 %-ный раствор) для стерилизации прогревают на водяной бане при 56 °С в течение 30 мин.
5.3.2. Приготовление дифференциально-диагностической среды.
Питательный агар в колбах по 100 мл расплавляют в кипящей водяной бане и охлаждают до температуры 45 — 50 °С. Затем в агар добавляют основные растворы:
источник