Пцр днк вирусного гепатита в

Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.

ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:

при возникновении признаков гепатита В у пациента;
во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
для уточнения эффективности терапии.

Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.

Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.

Непривычная утомляемость

нарастающая усталость при небольших нагрузках;
непривычная утомляемость;
тяжесть в области правого подреберья;
пониженный аппетит, тошнота;
желтушность кожных покровов, склер глаз;
светлый кал;
тёмная моча;
болезненные ощущения в суставах.

Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.

Показаниями к ПЦР являются:

положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
острый и хронический гепатит;
микст-гепатиты;
количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
разработка тактики эффективной терапии.

Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.

Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:

полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.

В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.

Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.

Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.

Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:

Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.

Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»

Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.

В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.

Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.

Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.

Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:

конкретную вирусную нагрузку на печень;
интенсивность прогрессирования заболевания;
устойчивость к препаратам противовирусной группы;
результативность лечения.

Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.

Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.

Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса

Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.

Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:

количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
маркеров вирусной инфекции;
результатов биопсии печени.

Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:

обнаружить носители вируса;
прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
мониторить активность вируса на всех фазах развития;
выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.

В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:

Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью

Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.

Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.

Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.

источник

Полимеразная цепная реакция — это вид анализа крови, который позволяет безошибочно выявлять вирус гепатита В. Особенностью метода является то, что он способен показать ВГВ на ранних стадиях — уже через месяц после инфицирования, в то время как специфический антиген у больного обнаруживается только через 2 месяца. ПЦР может выявить не только обычный ДНК-вирус, но и мутантные штаммы, которые ни один другой анализ увидеть не позволяет.

При расшифровке ПЦР на гепатит В результаты сравниваются со стандартными значениями. На основе этого делаются выводы о наличии заболевания (положительный результат), концентрации вируса (активности) или отсутствии недуга (отрицательный результат). Обработка данных идет 2 недели.

Существует 2 вида диагностики, которые назначают при гепатите В. Качественный ПЦР дает возможность с точностью в 100% сказать, есть ли ВГВ в крови или нет. Количественный ПЦР показывает активность вируса, то есть сколько ДНК фрагментов ВГВ содержится в 1 мл крови.

Проведение анализа крови на гепатит В методом ПЦР может выявить лишь наличие ДНК-фрагментов. Назначается в том случае, когда пациент подозревает о заражении ВГВ (HBV) или когда другие способы диагностики, например, серологические пробы не дают четкого ответа. Расшифровка результатов при проведении качественного анализа очень проста:

отрицательный результат — вируса нет;
положительный результат — вирус обнаружен.

Целью качественного ПЦР является подтверждение или опровержение наличия вируса гепатита В, а также проведение ранней диагностики. Если ВГВ выявлен в течение 1-2 недели после заражения, то лечение станет максимально эффективным. При активном развитии HBV в течение 2-х месяцев и выше, заболевание переходит в хроническую форму и полному излечению не подлежит.

В случае когда качественный ПЦР на гепатит показывает наличие вируса, следующим этапом становится проведение количественной диагностики.

Для назначение эффективного лечения или оценки результатов проводимой терапии просто знать, что у больного имеется ВГВ, недостаточно. Необходимо определить количественно значение ДНК вируса гепатита В в 1 мл крови, то есть вирусную нагрузку на организм. Этот вид ПЦР на гепатит В проводится в следующих случаях:

Перед назначением лечения.
Для оценки эффективности терапии.
Для определения развития устойчивости вируса к принимаемым препаратам.
Для определения стадии, на которой находится заболевание.

Единицей измерения вируса являются международные единицы (МЕ/мл) или количество копий ДНК/мл, то есть количество ДНК-фрагментов на 1 мл крови. Соотношение между двумя единицами зависит от выбранной тест системы и колеблется от 2 до 7 копий/мл в 1 МЕ/мл. Если система неизвестна, то для пересчета используется усредненное значение:

Если сразу делается количественный анализ, то граничная норма для диагностирования заболевания составляет 75 МЕ/мл. При результате выше этого показателя, ставится диагноз ВГВ, ниже — ВГВ не выявлен.

При гепатите В нормами ПЦР выступают следующие значения вирусной нагрузки (виремии), копий/мл:

10^5 копий/мл. Когда же при большой вирусной активности наблюдается повышение уровня АЛТ чаще 2-х раза за полгода, то сразу же назначается антивирусная терапия.

Чтобы узнать, как будет вести себя ДНК гепатит в плане хронизации, то есть перехода к хронической форме из острой, также используются результаты ПЦР-диагностики:

ДНК ВГВ 2 х 10^6 копий/мл означает, что приобретение хронической формы недуга неизбежно.

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

На сегодняшний день ПЦР-диагностика для выявления гепатита В является самым точным методом. Способ позволяет увидеть скрытые и мутировавшие формы заболевания, выявить недуг на первых неделях после инфицирования и, соответственно, провести эффективное лечение. В зависимости от ситуации проводится качественный или количественный ПЦР, которые направлены на выявление ВГВ и установлении его активности. Чтобы пройти обследование, нужно обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу.

источник

Определение ДНК вируса гепатита В необходимо преимущественно в диагностике хронической формы болезни. Проводится качественный и количественный анализ ДНК гепатита для установления активности репликации возбудителя (вирусная нагрузка) и принятия решения о необходимости начала специфической противовирусной терапии.

В процессе лечения хронического гепатита В и после завершения полного курса эти анализы проводятся повторно для оценки эффективности проведенной терапии.

HBV DNA – это главная составляющая возбудителя гепатита В, в которой хранится генетическая информация о вирусе. В клинической практике определение ДНК HBV вместе с HBsAg и другими маркерами вирусного гепатита используется в диагностике хронической формы болезни, реже – острой.

Если в крови пациента не обнаружено следов ДНК HBV (качественный анализ отрицательный), то это позволяет полностью исключить диагноз острого и хронического гепатита В. Именно этот анализ помогает в сложных диагностических случаях, когда серологические маркеры вирусного гепатита В вызывают сомнения у лечащего врача.

Если позволяют технические возможности, то в крови пациента выявляют только ДНК HBV методом ПЦР без определения серологических маркеров вирусного гепатита В. Этот метод может быть использован в качестве скринингового как самый надежный, но не всегда доступный из-за своей высокой стоимости.

В отечественной клинической практике традиционно принято не начинать обследование пациента с ДНК HBV, а стартовать с более доступных с финансовой и технической точек зрения серологических маркеров вирусного гепатита Б.

Необходимость выявить наличие ДНК HBV (или подтвердить ее отсутствие) целесообразно в таких ситуациях:

длительное течение острой формы гепатита В (затяжной вариант с высокой вероятностью хронизации);
при получении сомнительных результатов серологических маркеров (например, отрицательный HBsAg и положительный HBeAg);
перед началом противовирусной терапии пациенту с хроническим гепатитом В для оценки концентрации вирусных частиц в крови (вирусная нагрузка);
через месяц от момента старта противовирусной терапии для оценки эффективности назначенных противовирусных средств (вирусная нагрузка должна снижаться);
после завершения курса специфического лечения для оценки его эффективности (качественный и количественный анализ ДНК HBV должны стать отрицательными).

Семейный доктор также может назначить анализ на ДНК HBV в процессе проведения дифференциальной диагностики, если у пациента заподозрено заболевание печени или диагностирован синдром желтухи неустановленной этиологии.

Кратность проведения анализов на ДНК HBV, какой именно вариант необходим (качественный или количественный) – решает лечащий доктор. Пациенту лучше не заниматься самодиагностикой, так как ПЦР-диагностика на ДНК HBV достаточно дорогая.

Полимеразная цепная реакция не требует специальной подготовки. Правила подготовки такие же, как и к другим традиционным лабораторным исследованиям. Если у пациента возникают вопросы, то их необходимо задать лечащему доктору или сотруднику лабораторного комплекса. Перед определением ДНК HBV пациенту необходимо:

на протяжении 3 дней отказаться от приема лекарственных препаратов;
исключить жирную пищу;
выдержать период голодания в течение 8-10 часов до момента взятия крови;
запланировать визит в лабораторный комплекс на первую половину дня;
приходить натощак, но обязательно выпить 1-2 стакана обычной питьевой воды или некрепкого чая.

Допускается взятие крови пациента в одном подразделении и последующая доставка контейнера с биологическим материалом в лабораторный комплекс. Венозная кровь наливается в емкость с веществом, препятствующим свертыванию крови.

Биологический материал в обязательном порядке транспортируется в лабораторный комплекс в условиях переносного холодильника (температура от 2 до 8 градусов). Информативный результат может быть получен только при условии доставки крови в течение 24 часов.

ДНК HBV обнаруживают методом полимеразной цепной реакции. Это значит, что с помощью амплификации в биологической жидкости обследуемого пациента участки ДНК вируса гепатита В синтезируются – их концентрация увеличивается в несколько раз. Каждый макро- и микроорганизм обладает уникальной неповторимой последовательностью нуклеотидов.

Разработаны праймеры – так называемые эталоны, в сравнении с которыми устанавливается порядок нуклеотидов и идентифицируется микробный агент. Это значит, что практически исключена диагностическая ошибка.

Ложноположительный и ложноотрицательный результаты встречаются крайне редко. Компания-производитель на упаковке с диагностической тест-системой всегда указывает значение (концентрацию вируса), которое расценивается как положительный результат.

ПЦР-диагностика – быстрый метод диагностики. Результат известен через 2-3 часа от момента начала работы с биологической жидкостью пациента. Лаборатория выдает ответ на бланке, где указан не только сам результат (положительный или отрицательный, или же концентрация вирусных частиц), но и название тест-системы, а также ее чувствительность.

Качественное исследование ДНК вируса гепатита В предполагает только выявление этого микробного агента. Этот анализ назначается чаще, чем количественный, так как его диагностическая ценность несколько выше.

Это исследование позволяет отличить норму от патологии, то есть получить однозначный ответ на вопрос, есть ли в крови обследуемого пациента возбудитель вирусного гепатита В или его нет. Чаще всего качественный анализ на ДНК вируса гепатита В необходим для диагностики хронической формы гепатита, когда клинические признаки этого варианта поражения печени минимальны.

В диагностике острого вирусного гепатита В качественный анализ на ДНК необходим только в сложных диагностических случаях. Например, если в крови пациента уже не обнаруживается ни поверхностный антиген HBsAg, ни антитела anti-HBs. В такой ситуации вероятно затяжное течение болезни или трансформация острой формы в хроническую.

Возникает необходимость назначения специфической мощной противовирусной терапии, поэтому необходимо оценить уровень репликации возбудителя гепатита В. Если это так называемое «серонегативное окно», то есть краткий период, когда отсутствует и антиген, и антитела, то противовирусная терапия не нужна. Если репликация вируса установлена, то это означает необходимость контроля за состоянием пациента и назначением противовирусной терапии.

Анализ концентрации ДНК вируса гепатита В необходим преимущественно в диагностике хронической формы болезни. В клинической практике количественный анализ называется чаще вирусной нагрузкой, так как исследуется количество вирионов вируса гепатита В в 1 мкл крови пациента.

Обнаруженный уровень вирусной нагрузки до начала лечения является своеобразным эталоном. С изначальной цифрой сравнивается последующий результат, который назначается через месяц от начала специфической терапии и после завершения полного курса противовирусного лечения.

Нужно не просто найти вирус гепатита В в биологическом материале пациента, но и знать, как трактовать полученные результаты. Пациенту следует понимать, что анализировать сделанные самостоятельно выводы – далеко не всегда правильно. Оценивать весь комплекс анализов на основании клинического осмотра больного может только лечащий доктор.

Предварительно расшифровать полученный ответ можно с помощью таблицы:

Анализ	Результат
Качественный	отрицательный – пациент не инфицирован вирусом гепатита В, дальнейшая диагностика этого вирусного заболевания нецелесообразна
Качественный	положительный – пациент инфицирован вирусом гепатита В, необходим качественный анализ для оценки уровня репликации микробного агента и принятия решения о необходимости старта противовирусной терапии
Количественный	более 2000 ME/мл или 10 000 копий/мл – вирусная нагрузка высокая, репликация возбудителя интенсивная, необходима специфическая терапия при отсутствии противопоказаний к ней
Количественный	менее 2000 ME/мл или 10 000 копий/мл – вирусная нагрузка низкая, решение о старте противовирусного лечения принимается после комплексной оценки других результатов обследования (биохимические и серологические тесты)

Бланки ПЦР-анализа на ДНК вируса гепатита В не являются диагнозом и основанием для назначения терапии противовирусными лекарственными средствами. Все выводы и необходимые дальнейшие рекомендации делает лечащий доктор.

источник

Исследование для выявления возбудителя гепатита B (HBV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (ДНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

ДНК HBV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HBV, определяемых тест-системой, составляет 75,0 — 1,0*10^8 МЕ/мл.

Вирус гепатита В (ВГВ), количественное определение ДНК.

Hepatitis B Virus DNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood; HBV Viral Load; Hepatitis B Virus DNA Quant.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

МЕ/мл (международная единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит В (ВГВ) – инфекционное заболевание печени, вызванное ДНК-содержащим вирусом гепатита В (HBV). Среди всех причин развития острого гепатита и хронической вирусной инфекции вирус гепатита В считается одной из самых распространенных в мире. Действительное количество инфицированных неизвестно, так как у многих людей инфекция протекает без специфических симптомов и за медицинской помощью они не обращаются. Нередко вирус обнаруживают при проведении профилактических лабораторных исследований. По приблизительным подсчетам, в мире около 350 миллионов человек поражено вирусом гепатита В и ежегодно от его последствий умирает 620 тысяч. В России количество носителей HBV превышает 5 миллионов человек.

Источник инфекции – больной ВГВ или бессимптомный вирусоноситель. HBV передается с кровью и другими биологическими жидкостями. Заразиться можно при незащищенном половом контакте, использовании нестерильных шприцев, переливании крови и пересадке донорских органов, ребенка может заразить мать во время или после родов (через трещины в сосках). В группу риска входят: медицинские работники, у которых возможен контакт с кровью пациента, пациенты, получающие гемодиализ, инъекционные наркоманы, люди, ведущие беспорядочную половую жизнь, дети, рождённые от матерей с ВГВ.

Инкубационный период заболевания – от 4 недель до 6 месяцев. Вирусный гепатит В может протекать как в виде легких форм, длящихся несколько недель, так и в виде многолетней хронической инфекции. Основные признаки гепатита: желтушность кожных покровов, лихорадка, тошнота, утомляемость, в лабораторных анализах – нарушения функции печени и специфические антигены вируса гепатита В. Острое заболевание может быстро приводить к летальному исходу, переходить в хроническую инфекцию или заканчиваться полным выздоровлением. Считается, что после перенесенного ВГВ формируется стойкий иммунитет. Хронический вирусный гепатит В связан с развитием цирроза и рака печени.

Есть несколько специфических тестов для выявления существующего или перенесенного вирусного гепатита В. Для подтверждения наличия инфекции и уточнения периода заболевания используют определение антигенов вируса, антител к ним и ДНК вируса.

Полимеразная цепная реакция отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки позволяет оценить интенсивность развития болезни, эффективность проводимой терапии или развитие устойчивости к противовирусным препаратам.

Существует зависимость между концентрацией вируса в крови и исходом острого вирусного гепатита В. При низком уровне виремии вероятность перехода инфекции в хроническую форму близка к нулю, а инфицированный человек неопасен для окружающих. При высокой вирусной нагрузке ( 5 копий/мл) хронизация возникает часто и больной является потенциальным источником инфекции. Доказана связь между количеством ДНК вируса в сыворотке крови, присутствием HBeAg, повышенной АЛТ и развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы (рака печени).

Эффективность противовирусной терапии оценивается по уменьшению количества ДНК вируса в крови. Через 3-6 месяцев после начала лечения вирусная нагрузка при адекватном терапевтическом ответе должна уменьшиться на 1-2 порядка. Отсутствие уменьшения количества вируса или его увеличение на фоне проводимого лечения требует пересмотра и изменения терапии.

Количественное определение ДНК вируса гепатита В совместно с клинической картиной заболевания и биохимическими показателями, маркерами инфекции, а также результатом пункционной биопсии печени позволяет дать прогноз заболевания и оценить необходимость противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

Для прогнозирования течения вирусного гепатита В.
Для подтверждения хронической формы вирусного гепатита В.
Для выявления носителей вирусного гепатита В и мониторинга активности размножения вируса.
Для выявления скрытых и мутантных штаммов вируса гепатита В.
Для оценки эффективности противовирусной терапии гепатита В и принятия решения о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

При качественном обнаружении ДНК вируса гепатита В.
При остром и хроническом вирусном гепатите В.
При микст-гепатитах.
До и во время противовирусной терапии.

Референсные значения: не обнаружено

«Не обнаружено» – ДНК вируса гепатита В не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (50 МЕ/мл);
1*10^8 МЕ/мл – ДНК вируса гепатита В обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций ДНК вируса гепатита В, определяемых тест-системой, составляет 75,0 — 1,0*10^8 МЕ/мл.

Количественное определение ДНК вируса гепатита В является обязательным исследованием до назначения противовирусной терапии. Во время курса лечения анализ необходимо повторить через 3-6 месяцев.
Вирусный гепатит В нередко сочетается с вирусным гепатитом D.

Кто назначает исследование?

Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000 – Т.1.: 601-654.
Chan Henry Lik-Yuen, Wong May Ling, and others. Use of Hepatitis B Virus DNA Quantitation To Predict Hepatitis Be Antigen Reversion in Cases of Chronic Hepatitis B. J Clin Microbiol. 2003 October; 41(10): 4793–4795. PMCID: PMC294957
Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
Management of Hepatitis B. An NIH Consensus Development Conference. Program and Abstracts. October 20–22, 2008.

источник

Гепатит В – инфекционное заболевание печени, протекающее по аутоиммунному механизму. Вирус, попадая в кровь, размножается в гепатоцитах, вызывает их гибель. В затяжной хронической форме гепатит В вызывает рак и цирроз. По симптоматике заболевание схоже с простудой, выявить его на ранней стадии сложно. После контакта с больным или посещении стран с высокой заболеваемостью, угрозе потенциального заражения проводятся исследования крови.

Анализ ПЦР на гепатит B с высокой точностью определяет присутствие вируса, степень активности возбудителя. Качественная оценка выявляет возбудителя, количественная помогает установить степень вирусной нагрузки. Повторное исследование помогает увидеть клиническую картину течения заболевания в динамике.

Метод полимеразной реакции (ПЦР) разработан лауреатом нобелевской премии Мюллисом. Он основан на принципе копирования структуры возбудителя. Определяет в крови ДНК вирус HBV и его концентрацию. В период заболеваемости в сыворотке присутствует белковый антиген – часть оболочки возбудителя. Именно его распознает и атакует иммунная система организма. По концентрации антигенов и антител в сыворотке крови можно судить о степени активности возбудителя.

ПЦР дает оценку HBV на момент взятия проб. В процессе молекулярного исследования сначала расщепляется цепочка ДНК, для этого в амплификаторе сначала повышается температура, затем резко снижается. Маркеры в нужной последовательности присоединяются к ДНК – создаются копии исследуемого материала, по ним определяют концентрацию возбудителя в расчете на 1 мл.

Качественный анализ ПЦР выявляет возбудителя. По результатам судят о стадии гепатита.

реципиенты донорской крови;
больные с почечной недостаточностью, находящиеся на гемодиализе;
инфицированные ВИЧ;
беременные женщины;
медицинские работники инфекционных отделений;
лаборанты, исследующие кровь;
больные с печеночными патологиями;
все потенциально зараженные;
люди, побывавшие в странах с высоким уровнем заболеваемости.

Количественный ПЦР проводится:

если ранее был выявлен возбудитель HBV, проводится лечение;
после положительных проб ИФА (иммуноферментного анализа);
при печеночных заболеваниях, причиной которых бывает вирус гепатита В.

Для исследования берется венозная кровь, делается это на голодный желудок. Точность оценки зависит от правильности подготовки пациента перед исследованиями.

Количественный и качественный методы диагностики гепатита В по сути не различаются. Они основаны на свойствах ДНК-вируса, его способности синтезировать особые белки, которых нет в организме человека. Метод полимеразной реакции с высокой долей вероятности выявляет возбудитель, имеющий сложную структуру. В зависимости от концентрации HBsAg, HBeAg судят о стадии развития заболевания, правильности лечения. При остром гепатите они присутствуют в крови одновременно, при наличии HBeAg больной является вирусоносителем, способен заражать других. Методику ПЦР определяет врач на основании анамнеза пациента.

Показатель ПЦР количественный при гепатите B характеризует:

интенсивность деления вируса в клетках печени;
способность организма противостоять инфекции;
правильность выбора противовирусных средств.

В ходе болезни неоднократно проводится анализ полимеразной цепной реакции, количество вирусов в крови постоянно меняется. После инкубационного периода возрастает уровень HBsAg. Затем появляется HBeAg – антиген, находящийся в ядре возбудителя. Когда этот антиген исчезает, вместо него появляются антитела. Это говорит о борьбе организма с возбудителем. Метод определяет вирусную нагрузку на иммунную систему.

По количественному показателю ПЦР выявляется опасность хронической формы заболевания. Установлена норма трансаминазы, при которой вирус неактивен для окружающих. Больным, состоящим на учете, исследования проводятся каждые три месяца. По вирусной нагрузке определяют степень тяжести болезни. Если она превышает допустимую в два раза, больному назначают дополнительное обследование, меняют тактику лечения.

Метод полимеразной реакции самый надежный для выявления возбудителя. Качественный ПЦР анализ на гепатит В с высокой точностью устанавливает факт заражения вирусом HBV. Он подтверждает или опровергает предварительный диагноз. В 50% ДНК вирус выявляется на стадии, пока организмом не вырабатываются антитела. Иммунная система не сразу распознает чужеродные белки, они выявляются, когда размножившийся вирус покидает гепатоциты. Уничтожая HBsAg и HBeAg, организм попутно разрушает гепатоциты. Это приводит к серьезным осложнениям. Когда HBV присутствует в крови более двух месяцев, гепатит В переходит в хроническую форму. В течение первых двух недель с вирусом бороться легче.

Человек здоров, если возбудитель не присутствует в крови, или концентрация HBsAg ничтожна, а HBеAg отсутствует полностью. Результат в этом случае отрицательный. Только в единичных случаях при отрицательном результате выявляется заболевание, это говорит о быстром течении болезни или злокачественным ее характере. Антитела, вырабатываемые иммунной системой, нейтрализуют ДНК-вирус. Но в этом случае возможно обширное поражение печени.

Если результат HBsAg выше нормативных показателей и есть HBеAg, то дополнительно проводится количественный анализ на гепатит В, чтобы узнать, насколько активизировался возбудитель.

Важно обезопасить близких:

отдельно держать предметы личной гигиены, способные повреждать кожу и слизистые (зубную щетку, бритву, маникюрные принадлежности);
пользоваться индивидуальным полотенцем;
изолировать раны.

Полезно придерживаться диеты, отказаться от вредных привычек. При соблюдении всех назначений врача от вируса избавляются навсегда.

источник

Вирусный гепатит В успешно лечится, если его вовремя обнаружить и правильно определить количество антител и антигенов в крови больного. С помощью иммуноферментного анализа на гепатит можно обнаружить присутствие маркеров вируса, но не могут установить точно стадию процесса.

Для количественной оценки применяют ПЦР диагностику. С помощью теста возможно посчитать количество маркеров, спрогнозировать течение болезни и вероятность излечения при помощи противовирусных препаратов.

Главное преимущество исследования — возможность обнаружить даже минимальные концентрации вируса, идентифицировать возбудителя на видовой стадии.

Вирус гепатита В отличается большой контагиозностью и устойчивостью к внешним воздействиям. Он сохраняет активность в следах крови больного до нескольких недель. Поэтому каждый человек подвержен риску заражения даже при условии соблюдения профилактики.

Для диагностики заболевания назначают следующие исследования:

Иммуноферментный анализ крови на наличие антител к ВГВ	Это быстрый и информативный тест. Его недостатком является то, что исследование только дает информацию о присутствии антител, но не уточняет их количество.
Биохимический анализ крови	При начавшихся изменениях в печени в крови больного будет повышен уровень билирубина, щелочной фосфатазы и снижен уровень печеночных ферментов. Но на начальной стадии показатели будут находиться в пределах нормы.
ПЦР (полимеразная цепная реакция)	С ее помощью восстанавливают ДНК вируса, подсчитывают количественные показатели антител, уточняют стадию заболевания. То есть разное количество антител может свидетельствовать об остром этапе или о постпрививочном иммунитете.

Американский химик К.Муллис получил Нобелевскую премию, и до сих пор применяется его метод диагностики

Родоначальником метода ПЦР (полимеразной цепной реакции) считается ученый из Норвегии Х. Клеппе. Он первый стал проводить амплификацию (восстановление) ДНК при помощи короткой цепочки ДНК, то есть синтетического праймера (своеобразной копии).

Однако, ученому не удалось реализовать свою идею. Похожие исследования сделал американский химик К.Муллис, который в 1993 был удостоен Нобелевской премии за свое изобретение. С тех пор ПЦР используют для установления отцовства, диагностики генетических болезней, обнаружения вирусов.

Суть реакции в том, что при помощи ферментов копируется определенный участок ДНК. Скопировать можно только участок, который соответствует заданным параметрам и если он есть в представленном образце. Для запуска реакции применяют следующие компоненты:

Матричная ДНК с участком, подлежащим копированию.
Праймеры, схожие по строению участку ДНК.
Полимераза, то есть фермент, запускающий реакцию. Она должна быть термостабильной, то есть выдерживать перепады температур.
Раствор с определенными параметрами, обеспечивающий прохождение реакции.

Реакция проводится в несколько этапов:

Денатурация (прогревание)	Сначала раствор нагревают, в результате чего цепочки ДНК расходятся.
Стадия отжига	Раствор остужают, праймеры связываются с одноцепочечной матрицей.
Этап элонгации	Полимераза создает дочернюю цепь ДНК, достраиваются все фрагменты цепочки. Цепочка может расти до пределов, которые задаются количеством реагентов, затем достигает состояния плато.

Для обнаружения гепатита в применяют два типа реакции: количественную и качественную.

Количественный метод определяет количество генома ВГВ

Количественный ПЦР предполагает одновременное создание копий фрагментов ДНК и определение количества молекул. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования.

Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного.

Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы:

С какой интенсивностью прогрессирует болезнь.
Насколько эффективно проводимое лечение.
Развилась ли резистентность к назначенным препаратам.

Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции. Если количество ДНК ниже 100 шт/мл при нормальном уровне трансаминаза, то человек является носителем вируса.

При острой фазе количество антител значительно выше.При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения.

Качественный ПЦР дает меньше информации, однако может исключить заражение

Качественный ПЦР позволяет только установить присутствие возбудителя в крови. Если они отсутствуют, то пациент не заражен, при попадании возбудителя в кровь результат будет положительным.

Однако, с помощью качественной реакции невозможно уточнить геном вируса, этап заболевания. Поэтому для диагностики ВГВ проводят как количественное, так и качественное измерение.

Для проведения анализа методом полимеразной реакции необходима венозная кровь. Это необходимо сделать утром на голодный желудок.

Пациенту следует правильно подготовиться к исследованию:

За 10 часов отказаться от пищи, можно пить только чистую воду.
Накануне прекратить прием алкоголя, за 4 часа не курить.
Перед обследованием стоит избегать физических и эмоциональных стрессов.
За 2 суток перестать употреблять лекарства, если это невозможно, то необходимо предупредить лаборанта. Некоторые препараты оказывают влияние на конечный результат.

При количественной реакции оценивают полученные показатели в зависимости от числа копий ДНК

Интерпретировать данные качественного измерения несложно. Он дает либо положительный, либо отрицательный ответ.

При количественной реакции оценить полученные показатели можно в зависимости от числа копий ДНК. Единицей измерения является копий/мл.

Расшифровываются данные следующим образом:

Если количество ДНК ВГВ менее 90, то инфекция отсутствует. У пациента развился поствакцинальный иммунитет, либо он излечился от болезни.
При числе копий 2х100 говорят о носительстве вируса.
Количество 2х106 свидетельствует о хронической стадии болезни.
При ДНК более 2х109 пациент болен острой стадией гепатита.

Преимущества метода диагностики с помощью полимеразных реакцийи заключаются в следующем:

Прямое обнаружение возбудителей. В отличие от него, метод ИФА дает информацию о присутствии антител к вирусу.
Специфичность. То есть копируется именно участок ДНК, который имеется в образце биоматериала.
Повышенная чувствительность. Метод может обнаружить даже единичные фрагменты клеток.
Диагностика болезней в острой и в скрытой стадии. То есть, можно диагностировать болезнь на этапе доклинических проявлений.

У метода есть недостатки, которые приводят к ложным результатам. Самый существенный недостаток — вероятность загрязнения материала. Основным источником загрязнения являются плохо обработанные пробирки, руки лаборанта, реактивы.

В кровь может попасть часть ДНК от предыдущей реакции. Поэтому к лабораториям предъявляются повышенные санитарные требования: раздельные помещения, пластиковые пробирки, обработка лабораторий ультрафиолетом и т. д.

Ложноотрицательные результаты могут быть следствием сниженной чувствительности реакции. Это происходит в следующих ситуациях:

пациент принимает лекарственные препараты, например, антикоагулянты;
человек перед анализом перенес физическое напряжение (занятия спортом, тяжелая работа);
заражение произошло недавно.

Если у пациента есть высокая вероятность инфицирования, а результат исследования отрицательный, ему необходимо повторное обследование.

Метод полимеразной цепной реакции является основным и самым информативным для диагностики ВГВ. Он позволяет не просто установить носительство инфекции, но и уточнить этап заболевания, оценить результаты лечения.

Для более точного диагноза применяют качественное и количественное измерение. К недостаткам способа можно отнести вероятность загрязнения, снижение чувствительности и довольно высокую цену.

Для того, чтобы результаты были наиболее достоверными, следует правильно подготовиться к исследованию и проводить его в клинике с соответствующей лицензией и хорошей репутацией.

Смотрите видео о ПЦР:

источник

ВГВ является сложноорганизованным ДНК-содержащим вирусом и относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus.

Гепатит В — антропонозная инфекция, преимущественно с парентеральным механизмом заражения, которая может протекать в форме вирусного носительства, острой и хронической форм и характеризуется поражением печени с возможным развитием острой печеночной недостаточности, хронического гепатита, цирроза печени и первичного рака печени (гепатоцеллюлярной карциномы).

Инфицирование организма человека происходит при непосредственном проникновении HBV в кровь (при каких либо инвазивных вмешательствах и при переливании крови и ее препаратов), или через слизистые и кожные покровы во время родов, при половых и тесных бытовых контактах. Попав в печень, HBV проникает в гепатоцит, где начинает интенсивно размножаться.

Развитие инфекционного процесса может происходить двумя путями: репликативным и интегративным. Репликативная форма инфекции ведет к развитию острого или хронического гепатита и циррозу печени, тогда как интегративная — к развитию «здорового» вирусоносительства, неактивного хронического гепатита, циррозу печени и первичной гепатокарциномы.

Серологическая диагностика и прогноз HBV-инфекции основан на выявлении антигенов вируса и антител к нему. Но, как оказалось, в популяции вируса гепатита В встречается достаточно мутантных штаммов (HBеAg-негативных), которые не улавливаются обычными серологическими тестами. Поэтому метод ПЦР для диагностики HBV-инфекции является крайне важным.

ПЦР позволяет определять в исследуемом материале ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Качественное определение вируса гепатита В в материале (цельная кровь, сыворотка, плазма, биоптаты печени) подтверждает наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает патогенез заболевания. Количественный метод определения содержания ДНК вируса в плазме дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к антивирусным препаратам. ПЦР при ВГВ безусловно необходим для суждения о вирусной репликации. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBеAg. Выявление ДНК HBV в крови имеет большое значение для прогноза острого ВГВ. Установлено, что персистирование ДНК HBV более 8 недель после дебюта заболевания указывает на хронизацию процесса, тогда как элиминация ДНК вируса в течение первых 2 недель болезни коррелирует с полным выздоровлением.

Качественное определение ДНК вируса гепатита В методом ПЦР.

Аналитические показатели: выявление ДНК вируса гепатита В (hepatitis В virus) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в плазме крови.

Определяемый фрагмент-уникальная последовательность ДНК гена структурного белка вируса гепатита В. Специфичность определения — 98%. Чувствительность определения — не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл прошедшей обработку (выделение ДНК) пробы.

Таким образом, определение ДНК HBV в материале является важнейшим анализом, который в совокупности с другими лабораторными исследованиями позволяет диагностировать инфекцию, определять характер инфекционного процесса, выступать в качестве критерия в проведении терапии и оценки ее эффективности.

Показания к назначению анализа:

Профилактические скрининговые исследования (ДНК вируса гепатита В — самый ранний маркер при острой инфекции).

Исследования при HBsAg-негативной инфекции.

Обследования контактных лиц.

Диагностика гепатитов смешанной этиологии — выявление ведущего вируса.

Выявление стадии активной репликации вируса при хроническом состоянии.

Контроль проводимой терапии.

Слабость, недомогание, быстрая утомляемость, снижение аппетита, тошнота, тяжесть в правом подреберье, увеличение печени, а также боли в мышцах, суставах.

Желтуха, кожный зуд, увеличение селезенки, сосудистые «паучки», в некоторых случаях покраснение ладоней и стоп.

ПЦР диагностика позволяет не только определить наличие вируса гепатита В в крови и его этиологию, но также оценить его активность. Выявление вирусной нагрузки особенно важно для подбора эффективного лечения, если она слишком высока, то вероятность выздоровления уменьшается. В чем суть метода полимеразной цепной реакции?

При гепатите проводят ПЦР, чтобы наверняка удостовериться в поставленном диагнозе. При помощи этого метода можно выявить ДНК вируса, а также определить его количество в крови.

ДНК вирус в крови методом ПЦР при гепатите можно выявить по окончании инкубационного периода, в это время на фоне повышенного уровня трансаминаз можно определить и HBsAg, после чего появляется HBeAg.

При качественном определении можно точно установить диагноз, есть гепатит или его нет. В норме в крови ДНК вируса должен отсутствовать. Количественный метод позволяет определить интенсивность развития болезни и размножение вируса.

Анализ имеет очень высокую чувствительность и достоверность. В качестве биологического материала берут венозную кровь. Благодаря современным технологиям, при ПЦР можно обнаружить вирус при концентрации 5×103-104 копий/мл в крови. По результатам анализа, зная норму, можно судить о вирусной нагрузке и поставить прогноз на лечение.

Важно! Именно ДНК вируса способствует развитию цирроза и других хронических заболеваний печени.

Обнаружение ДНК при помощи ПЦР необходимо в следующих случаях:

Сомнения при постановке окончательного анализа после сдачи анализов. Определение острой стадии болезни. Выявление скрытых форм гепатита. Оценка эффективности после прохождения противовирусной терапии.

Как расшифровать полученные после ПЦР диагностики результаты?

По количественной оценке можно не только определить наличие вируса, но и узнать вирусную нагрузку, в случае если ПЦР покажет положительный результат.

Количественный метод необходим, чтобы узнать такую информацию:

Интенсивность развития заболевания. Эффективность лечения. Развитие резистентности к противовирусным препаратам.

Количественная оценка очень важна при постановке диагноза хронического гепатита. В этом случае все показатели будут находиться не в пределах нормы. Уровень трансаминаза будет повышен, индекс активности вируса более 4, а концентрация ДНК вируса более 105 копий ДНК/мл. Если концентрация вируса более низкая, а уровень трансаминаза находится в норме, то можно говорить о пассивном носительстве.

Перед назначением противовирусного лечения прохождение ПЦР диагностики, а именно количественного обследования, является обязательным условием, чтобы определить вирусную нагрузку.

Делают анализ каждые 3 месяца, и если вирусная нагрузка возросла в 10 раз, то можно говорить об устойчивости вируса к лечению.

Количественный анализ дает очень важную информацию, ведь можно определить, сколько в крови содержится ДНК возбудителя. Чем больше его количество, тем больше вирусная нагрузка и тем тяжелее состояние больного. При снижении вирусной нагрузке после прохождения лечения, можно судить о его эффективности. В некоторых случаях ПЦР при гепатите является показанием к проведению дополнительного обследования, такого как биопсия печени. При повышенном уровне АЛТ проводится ПЦР. Расшифровка анализов такая: если вирусная нагрузка более 105копий ДНК/мл, а уровень АЛТ превышает норму, но не более чем в 2 раза на протяжении полугода, то такой больной нуждается в биопсии. При сильном воспалении или фиброзе показано противовирусное лечение. Если же уровень АЛТ превышает норму более чем в 2 раза при высокой вирусной нагрузке, то сразу назначают лечение без дополнительной диагностики.

Только хорошие специалисты смогут правильно расшифровать результаты количественного ПЦР.

Качественный анализ позволяет определить наличие вируса гепатита в крови. В норме он должен отсутствовать. Благодаря этому методу можно точно установить диагноз.

Качественный ПЦР анализ дает 100% точный результат.

Ни один другой метод не дает настолько достоверных данных. В более чем половине случаев после прохождения диагностики выявляют ДНК вируса, при отсутствии антигена. Очень важно на начальном этапе заболевания установить диагноз.

Доказано, что если ДНК вируса гепатита В активно размножается в организме человека в течение двух месяцев, то болезнь приобретает хроническую форму. Если же начать бороться с вирусом уже в течение первых недель после инфицирования, то шансы на полное выздоровление очень велики.

Как происходит расшифровка полученных результатов обследования при помощи качественного метода?

Расшифровка анализа очень проста:

В норме результат должен быть отрицательным, то есть ДНК вируса не обнаружено. Положительный результат свидетельствует о наличии гепатита.

Анализ помогает выявить вирус, определить его генотип и начать своевременное лечение. Очень часто при наличии ДНК наряду с качественной оценкой проводят и количественную.

При анализе на гепатит при помощи ПЦР диагностики берут кровь из вены. Проходить обследование лучше всего с утра, так как кровь всегда нужно сдавать натощак (после последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов).

Чтобы анализ был максимально достоверным, больной должен знать о некоторых факторах, которые могут повлиять на конечный результат:

Перед тем как сдавать кровь из вены, нужно 20 минут отдохнуть. Кроме того, что анализ сдается натощак, так, еще за 12 часов нельзя употреблять спиртное, курить, заниматься спортом и употреблять жирную еду. Некоторые лекарственные средства, которые вынужден принимать больной, могут повлиять на конечный результат. Лаборант должен знать о случае медикаментозного лечения. Если кровь нужно сдать ребенку в возрасте до 5 лет, то в таком случае его за полчаса до диагностики нужно поить каждые 10 мин. по стакану кипяченой воды.

Очень важно проходить ПЦР в клинике, которая хорошо себя зарекомендовала. Ведь несмотря на то что ПЦР определяет наличие вируса с точностью до 100%, этот показатель может снизиться до 95%, если учесть человеческий фактор.

Неквалифицированные лаборанты или плохая репутация клиники может стать причиной получения ложных результатов.

Гепатит B – вирусная инфекция, поражающая печень. Сегодня около 300 млн человек по всему миру являются носителями гепатита B.

У некоторых вирус переходит в цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному (первая стадия рака). Новые противовирусные стратегии исследования болезни имеют две задачи:

Для лечения и чистки ПЕЧЕНИ наши читатели успешно используют

. Внимательно изучив этот метод мы решили предложить его и вашему вниманию.

определить, насколько организм чувствителен к вирусной нагрузке; определить, насколько вирус устойчив к приему лекарств и других медицинских вмешательств.

Серологические исследования направлены на выявление в сыворотке крови антигенов и антител, но этот метод ненадежен. Поэтому ученые разработали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Он позволяет не только качественно определить наличие вируса (есть или нет), но и количественно (в каком количестве присутствуют антитела в сыворотке крови).

Перед сбором крови врач должен выяснить:

принимал ли пациент наркотические вещества внутривенно; являлся ли человек донором либо реципиентом (кому вливали кровь); проводились ли больному хирургические вмешательства; повреждался ли у пациента кожный покров; уверен ли человек в здоровье своего сексуального партнера; были ли контакты с зараженными вирусом гепатита B.

При остром гепатите положительный результат можно выявить через 1-2 недели после инкубации путем ПЦР.

Анализы крови для выявления вирусного гепатита В (ВГВ) берутся при:

Диагностике острого гепатита в: период инкубации (1-2 недели); интенсивный период недуга (3-4 недели); период ранней стадии выздоровления. Диагностике ХВГ (хронического вирусного гепатита). При микс-гепатитах.

Также регулярно анализы берутся у людей, находящихся в группе риска, к ним относят:

людей, нуждающихся в частых переливаниях крови; пациентов, проходящих постоянные процедуры очищения крови при почечной недостаточности; людей, больных СПИДом или ВИЧ-инфекцией; беременных женщин; медицинских работников, контактирующих с кровью; больных с симптомами заболевания печени. лечащихся от цирроза, рака и других заболеваний печени.

Подготовка к количественному анализу предполагает соблюдение таких правил:

не курить за 1 час до сдачи анализа; не есть за 4 часа до процедуры; лучше всего количественный анализ сдавать после сдачи качественного; не пить алкоголь за сутки до исследования.

Эффективная терапия при заболевании влияет на уменьшение количества ДНК вируса в сыворотке. Через полгода после старта лечения количество вируса должно уменьшиться на 2-3 порядка. Если результаты анализов через время не изменились, или, наоборот, стали хуже, то в обязательном порядке меняется вся терапия, и автоматически острый гепатит переименовывается в хронический.

При попадании ДНК вируса гепатита в организм инфекция может пойти 2путями:

репликативным (происходит развитие острого либо хронического гепатита, что в дальнейшем, без медицинского вмешательства, ведет к циррозу печени); интегративным (развитие бессимптомного, неактивного вирусоносительства, которое все-таки приведет к циррозу либо гепатоцеллюлярной карциноме).

Как происходит процедура забора крови? Врач стягивает предплечье больного жгутом и вводит иглу в вену на локтевом сгибе, после забирает кровь в шприц и переливает в специальную пробирку. Результаты будут готовы через несколько дней, срок зависит от места, где пациент сдает анализ.

Материалом служит сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты, которые помещают в пробирку с хорошо завинчивающейся крышкой. Но на результат может повлиять загрязненный материал для забора анализа, передержка материала (он хранится до 24 часов при температуре не более +4 °С).

Существует несколько способов количественного анализа, среди которых ПЦР, ИФА, биохимия.

Это анализ на поверхностный антиген-белок, который составляет часть внешней оболочки вируса. После того, как вирусные частицы попали внутрь организма, они начинают интенсивное размножение на поверхности печени, уничтожая здоровые клетки органа. Новые молекулы выбрасываются в кровь.

Исходя из этого, исследуют уровень концентрации в сыворотке антител и определяют, есть заражение гепатитом B или нет.

Материал для исследования берется натощак. ПЦР проводится в аппарате под названием амплификатор.

Сначала расщепляют ДНК на 2 самостоятельные цепочки с помощью повышения температуры материала для исследования в амплификаторе. Материал немного охлаждают с помощью азота. Праймеры находят нужные последовательности в молекуле ДНК и присоединяются к ним. Элонгация – третий шаг, когда два праймера присоединяются к двум цепочкам ДНК. При помощи фермента ДНК-полимеразы происходит достраивание участка ДНК от присоединившегося к нему ранее праймера. Таким образом, на участке в области праймеров в каждой из цепочек ДНК образуется вторая комплементарная цепочка ДНК.

В дальнейшем эти шаги повторяются множество раз, и за несколько часов выполняется 35-45 циклов, образуются миллиарды копий искомого образца. Если такие копии есть, то высчитывается их количество на 1 мл материала для анализа.

Многие наши читатели для лечения и чистки печени активно применяют широко известную методику на основе натуральных ингредиентов, открытую Еленой Малышевой. Советуем обязательно ознакомиться.

Помимо ПЦР, существует метод ИФА (иммуноферментного анализа). Он определяет не только поверхностные антитела, но и расположенные внутри и взаимосвязанные с предыдущими антигенами, а также их количество.

Еще один метод количественного анализа. При попадании вируса из поврежденных клеток печени в организм выбрасываются ферменты, если их количество больше нормы, то можно говорить о заражении. Кроме того, нужно определить вирусную нагрузку (ДНК-HBV), сдать печеночные пробы (на билирубин с фракциями, АЛТ, АСТ, щелочную фосфатазу, гамму-ГТ). Обязательным является посещение инфекциониста, который при необходимости направляет больного на фиброэластометрию, подбирает курс лечения.

Биохимия — количественного анализ

В этом методе поиск копий происходит после каждого цикла, а не после 35-45, Метод работает так же, как и ПЦР, позволяет определять количество копий в образце для исследований. Тем самым время проведения анализа заметно сокращается, при этом гарантирован 100 % результат.

Установление количества ДНК гепатита B очень важно, так как при малом показателе прогноз болезни более благоприятный, чем при большем. Концентрацию ДНК ВГВ измеряют в копий/мл либо me/мл

Результаты данного анализа могут быть следующими:

ДНК вируса не обнаружена, если его нет в организме либо концентрация очень мала, 90 me/мл = 200 копий/мл; ДНК вируса обнаружена в количестве ниже нормы концентрации, 2×106 копий/мл; ДНК вируса находится в среднем количестве, при 2×106-2×109 копий/мл; ДНК вируса больше 2×109 копий/мл, концентрация антител высокая, что говорит о прогрессе заболевания.

Если результат анализа положительный, то диагностируется:

носительство вируса гепатита B; заболевание хроническим гепатитом; заболевание острым гепатитом B.

Если результат отрицательный, то:

вируса в организме нет; возможно наличие гепатита B в период выздоровления (если предыдущие анализы являлись положительными).

В редких случаях отрицательный результат анализа на ДНК вируса гепатита B говорит о быстром и злокачественном течении болезни.

Решение о сдаче анализа на вирус принимает:

Отзыв нашей читательницы Светланы Литвиновой

Недавно я прочитала статью, в которой рассказывается о «Leviron Duo» для лечения заболеваний печени. При помощи данного сиропа можно НАВСЕГДА вылечить печень в домашних условиях.

Я не привыкла доверять всякой информации, но решила проверить и заказала упаковку. Изменения я заметила уже через неделю: постоянные боли, тяжесть и покалывания в печени мучившие меня до этого — отступили, а через 2 недели пропали совсем. Улучшился настроение, снова появилось желание жить и радоваться жизни! Попробуйте и вы, а если кому интересно, то ниже ссылка на статью.

Читать статью —> терапевт; вирусолог; гематолог; инфекционист.

Количественный анализ является обязательным при диагностике заболевания и должен состояться еще до начала терапии. Но необходимо помнить о том, что гепатит B иногда тесно переплетается с гепатитом D, что может создавать дополнительные сложности при проведении такого анализа. Поэтому следует учитывать и такие варианты осложнений:

Решение о сдаче анализа на вирус принимает:

Отзыв нашей читательницы Светланы Литвиновой

Читать статью —> терапевт; вирусолог; гематолог; инфекционист.

коинфекция – происходит заражение сразу двумя видами гепатита B и D. Такое заболевание протекает намного сложнее и болезненнее. Хронической формы у такого недуга нет, потому что в большинстве своем болезнь заканчивается летальным исходом; суперинфекция – к ранее спавшему гепатиту D присоединяется острый ВГB, в этом случае болезнь перетекает в хроническую с неблагоприятным прогнозом.

Вам все еще кажется, что ВОССТАНОВИТЬ ПЕЧЕНЬ невозможно?

Судя по тому, что вы сейчас читаете эти строки — победа в борьбе с заболеваниями печени пока не на вашей стороне…

И вы уже думали о хирургическом вмешательстве и применении токсичных препаратов, которые рекламируют? Оно и понятно, ведь игнорирования болей и тяжести в печени, может привести к тяжелым последствиям. Тошнота и рвота, желтоватый или сероватый оттенок кожи, горечь во рту, потемнение цвета мочи и диарея… Все эти симптомы знакомы вам не понаслышке.

Но возможно правильнее лечить не следствие, а причину? Прочитайте историю Алевтины Третьяковой, о том как она не только справилась с болезнью печени, но и восстановила ее…. Читать статью >>

ВГВ является сложноорганизованным ДНК-содержащим вирусом и относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus.

Качественное определение ДНК вируса гепатита В методом ПЦР.

Показания к назначению анализа:

Исследования при HBsAg-негативной инфекции.

Обследования контактных лиц.

Диагностика гепатитов смешанной этиологии — выявление ведущего вируса.

Выявление стадии активной репликации вируса при хроническом состоянии.

Контроль проводимой терапии.

источник