Меню Рубрики

Парентеральный вирусный гепатит диагностика

Патологические процессы, развивающиеся во внутренних органах человека, вызываются болезнетворными бактериями, которые провоцируют воспаление тканей. К наиболее опасным заболеваниям печени относят парентеральные вирусные гепатиты.

Вирусы, являющиеся возбудителем этого заболевания, классифицируются по типам В, D, С, F, G, TTV, Sen V. Своевременное распознавание проблемы осложняется бессимптомным течением болезни.

В этом случае диагностика возможна только при проведении плановой диспансеризации.

Патогенез парентеральных вирусных гепатитов заключается в проникновении болезнетворных бактерий в организм человека при контакте с инфицированным лицом. Носитель может страдать острой формой заболевания или хроническими проявлениями. К источникам заражения относят: кровь, слюну, урину, пот, грудное молоко и желчь.

Инфицирование человека происходит по естественным причинам и вследствие искусственного заражения. Пути передачи вируса:

При сексуальном контакте без использования презерватива

  • при сексуальном контакте без использования механических средств контрацепции (презерватива);
  • вертикальной передачей от матери к младенцу во время родов, проходящих естественным способом, или в период внутриутробного развития плода через плаценту;
  • при совместном использовании разными лицами предметов личной гигиены (зубных щеток, бритвенных принадлежностей, расчесок, белья);
  • при бытовом контакте человека с кровью носителя инфекции, в данном случае этиология заболевания определяется при наличии у пациента ран и ссадин, через которые может проникнуть вирус;
  • контактные виды спорта, особенно единоборства, в которых присутствует ударная техника, также являются причиной передачи вируса от носителя заболевания спарринг-партнеру;
  • заражение происходит при использовании одного шприца несколькими лицами для проведения инъекций. В группе риска обычно состоят наркоманы, употребляющие тяжелые вещества внутривенно;
  • передача заболевания возможна в тату-салоне при некачественной обработке инструмента;
  • зоной риска считаются косметологические кабинеты и салоны, оказывающие услуги по выполнению маникюра и педикюра;
  • установка пирсинга также связана с риском передачи заболевания при некачественной стерилизации инструментов.

Нередко причиной заболевания является халатность медицинского персонала при выполнении своих обязанностей. Пациенту требуется с особенным вниманием относиться к следующим процедурам:

Забор донорской крови

  • забор и переливание донорской крови;
  • проведение гемодиализа;
  • небольшие оперативные вмешательства;
  • проведение вакцинации.

В настоящее время во всех медицинских учреждениях такие операции выполняются с применением одноразовых инструментов, поэтому риск заболевания сведен к минимуму и инфицирования пациентов в больницах фиксируются в исключительных случаях.

Недуг протекает как в стандартной клинической, так и в бессимптомной форме. Обнаружение признаков заболевания возможно в срок от 1,5 месяца до полугода, после инфицирования пациента.

В этот период происходит активная колонизация тканей печени болезнетворными бактериями, вследствие чего у пациента развивается желтушность, которая характеризуется:

  • быстрой утомляемостью;
  • общей слабостью;
  • рвотными позывами и тошнотой;
  • потерей аппетита;
  • болевыми ощущениями в суставах;
  • проявлениями, характерными для заболевания гриппом.

На следующем этапе заболевания регистрируют негативные проявления:

Кожный зуд

  • у пациента происходит увеличение размеров селезенки и печени;
  • возникает зуд на кожных покровах;
  • изменяется цвет мочи, которая становится похожа на темное пиво;
  • возможно высыпание по типу крапивницы;
  • белки глаз приобретают желтый оттенок;
  • изменяется цвет кожных покровов, они приобретают желтоватый оттенок;
  • повышается температура тела пациента;
  • возникает постоянная сонливость;
  • возможны головокружения;
  • головная боль.

На третьем этапе развития заболевания обнаруживаются следующие симптомы:

  • болевые ощущения в правой стороне в области нижних ребер;
  • чувство тяжести;
  • биохимические показатели состояния печени пациента снижаются.

После окончания этого периода наступает выздоровление или болезнь переходит в хроническую форму. Постановление диагноза на ранних стадиях затруднено бессимптомным течением заболевания, поэтому регулярная диспансеризация со сдачей биологического материала для тестирования, позволит своевременно выявить недуг и принять меры.

Первоначально врач производит визуальный осмотр пациента и по внешним признакам ставит предварительный диагноз заболевания. Для уточнения выводов потребуется изучение биологического материала человека и инструментальные исследования.

Назначают следующие исследования:

  • общий анализ мочи и крови;
  • общий анализ кала;
  • биохимический и иммуноферментный анализ крови;
  • исследование крови по методу полимеразной цепной реакции;
  • УЗИ поджелудочной железы пациента;
  • компьютерная и магнитно-резонансная томография.

При подтверждении диагноза парентерального гепатита, пациента госпитализируют. При начальной форме заболевания длительность терапии составляет от трех недель до двух месяцев. Больному прописывают специальную диету и постельный режим, медикаментозное воздействие не применяется.

При тяжелых патологиях, а также при наличии ВИЧ-инфекции у пациента, длительность лечения может превышать шесть месяцев. Назначаются медикаментозные препараты, диета и витаминная поддержка организма.

Требования к организации питания больного парентеральным гепатитом:

  • животные жиры рекомендуется заменить растительными и молочными;
  • количество белка в рационе больного в сутки не должно превышать 1,5 грамма на кг веса пациента;
  • общая суточная энергетическая ценность пищи должна находиться в пределах 3000 ккал;
  • обязательно употребление чистой воды в объеме 2,5 литра в сутки.

Диета при гепатите

После выздоровления пациент обязан придерживаться диеты в течение шести месяцев.

К медикаментозным средствам, применяемым для лечения заболевания, относят рекомбинантные интерфероны α-2 в виде инъекций. Дозировку определяет врач, исходя из состояния пациента.

В отдельных случаях для купирования заболевания назначают препараты улучшающие метаболизм и стимулирующие работу внутренних органов:

  • дезинтоксикационные лекарства (Ацесоль, Трисоль);
  • регуляторы метаболизма (Гептрал, Люминал);
  • антихолестатические препараты (Урсосан, Холестирамин);
  • стимуляторы выделения желчи (Фламин, Одестон);
  • противовоспалительные средства (Контрикал, Трасисол);
  • антиоксиданты (Легалон, Тиотриазолин);
  • иммунорегулирующие медикаменты (Тимоген, Азитиоприн);
  • мочегонные (Трисамин);
  • витаминные комплексы.

Самолечение при обнаружении парентерального гепатита недопустимо. Терапия заболевания требует комплексного подхода и сложной схемы приема препаратов, поэтому назначение конкретных средств и дозировки осуществляет исключительно доктор.

Не допустить заболевания позволит профилактика парентеральных гепатитов.

Самым надежным способом избежать проникновения вируса гепатита в организм человека является вакцинация. После прививки пациент получает стойкую защиту и приобретает иммунитет от инфекции.

Профилактические инъекции необходимо выполнить следующим лицам:

  • младенцам, на третьи сутки после рождения;
  • работникам лечебных учреждений и студентам медицинских ВУЗов до прохождения ими практики;
  • близким родственникам инфицированных пациентов;
  • пациентам, которым рекомендуется проведение гемотрансфузии;
  • пациентам, направленным в хирургию для проведения оперативного вмешательства;
  • лаборантам, имеющим контакт с биологическим материалом носителей болезни.

Предотвращение заболевания зависит от соблюдения следующих правил:

  • при сексуальных контактах с малознакомыми партнерами рекомендуется обязательно использовать презервативы;
  • для выполнения гигиенических процедур требуется использовать только личные средства (зубная щетка, бритвенный станок);
  • при посещении косметических салонов рекомендуется обращать внимание на качественную стерилизацию инструментов, которыми работает мастер;
  • в медицинских учреждениях также необходимо следить за тем, чтобы работники использовали только одноразовые, стерильные инструменты;
  • инъекционный способ передачи вируса самый частый, поэтому лицам, зависимым от наркотических веществ, нельзя использовать общий шприц для уколов;
  • при получении серьезных открытых ран, для предупреждения попадания инфекции в кровеносную систему, необходимо обращаться в медицинское заведение, где смогут качественно обработать поражение и нанести стерильную повязку.

Беременным женщинам требуется в обязательном порядке сдавать кровь для исследования не менее двух раз за период вынашивания плода. Существует реальная опасность инфицирования младенца во время родов, поэтому при обнаружении в биологическом материале матери антител ВГВ или HCV, рекомендуется проведение кесарево сечения.

В исключительных случаях, для предупреждения заболевания младенца, его вакцинируют в течение суток после рождения.

Тяжесть поражения организма инфицированного человека зависит от типа патологии и состояния иммунной системы. Лечение проблемы проводится комплексно, с использованием медикаментозной терапии, соблюдением сбалансированного питания и с обязательным отказом от употребления алкогольных напитков и курения.

Лучшим способом избежать заболевания является своевременная вакцинация и поддержание здорового образа жизни, с отказом от случайных сексуальных связей.

источник

Патологии печени имеют различную природу и причины, по которым начинается их развитие в организме. Название «парентеральный гепатит» объединяет группу вирусных заболеваний, поражающих гепатобилиарную систему, инфицирование которыми связано с повреждением кожных покровов и биологическими жидкостями человека. По статистике ВОЗ, от разных типов гепатита ежегодно умирает до 1,4 млн человек.

Парентерально — означает попадание вируса во внутреннюю среду организма минуя желудочно-кишечный тракт.

Парентеральные гепатиты — это заболевания печени, вызываемые вирусами типа В, С, D, F, G. Характеризуются вирулентностью, т. е. минимальным количеством инфекции, необходимой для заражения. Для штамма В достаточно остаточных следов инфицированной крови в объеме 0,0001 мл, и по этому показателю он в 100 раз превосходит ВИЧ. Также парентеральные гепатиты склонны к хронизации болезни, развитию цирроза и рака печени. Причиной является слабое проявление симптомов и позднее обращение за врачебной помощью.

Открыт в 1964 американским врачом вирусологом Барухом Самуэлем Бламбергом. Гепатит В самый устойчивый к внешнему воздействию. На него не влияет ультрафиолет и слабо действуют дезинфицирующие средства. При нагревании до 100 градусов вирус инактивируется спустя 15—30 мин., в условиях комнатной температуры живет несколько недель, в холодильнике сохраняет активность полгода, замороженный — до 20 лет. Гепатит В является самым заразным, его концентрация в крови настолько высока, что он выделяется с потом, мочой, слюной, спермой.

Выделен в 1989 году исследователями из центров CDC, США (Даниэль У. Брэдли) и Хирон (Майкл Хотон). Особенностью гепатита является его изменчивость и способность к мутациям. Известно 8 генотипов вируса и более 100 подтипов, что стало основным препятствием для создания вакцины. При гепатите С преобладают безжелтушные формы болезни со склонностью к хронизации — до 80% заболевших. Риск заражения при незащищенных половых контактах, а также ребенка от матери в процессе родов или кормлении, минимален.

Выявлен в 1977 г итальянским профессором Марио Ризетто в процессе исследования больных с особо острой формой гепатита В. Это инфекционный агент, который не может развиваться в организме самостоятельно. Для распространения ему необходимо, чтобы клетки уже были поражены вирусом В, оболочки которого он использует для упаковки своего генетического материала. Протекание гепатита D тяжелое, велика вероятность развития терминальной стадии печеночной недостаточности, стремительного развития цирроза и рака печени.

Открыт в 1995 г научной группой фирмы Abbot от больного хроническим гепатитом С. Изучение этого типа продолжается. Неясным является, вызывает ли он сам заболевание печени или ассоциируется с вирусом другой этиологии. Предполагается наличие 3-х генотипов. В окружающей среде вирус неустойчив и сразу погибает при кипячении.

Выделен недавно и является предметом споров между учеными. Вирус определяется только методом исключения, поскольку до сих пор не разработаны маркеры для его идентификации. Считается, что для гепатита F возможен любой путь заражения, как фекально-оральный (через грязные руки, зараженные воду и продукты питания), так и гематогенный.

Парентеральные вирусные гепатиты распространяются двумя путями:

  • Естественный: незащищенный половой акт, вертикальная передача от матери к ребенку внутриутробно или в процессе родов, контактно-бытовой путь. Последний подразумевает использование общих с больным предметов личной гигиены: бритвенных и маникюрных принадлежностей, зубных щеток и т. п. Естественным путем передачи вируса является и заражение от ран, полученных в уличных драках.
  • Искусственный: медицинские манипуляции, хирургические вмешательства, иглоукалывание, косметические процедуры в салонах с применением не стерильных инструментов, употребление инъекционных наркотиков.

Вернуться к оглавлению

Для парентеральных гепатитов характерно слабое проявление симптомов или их полное отсутствие. Первые признаки заражения гепатитом очень похожи на грипп. Это слабость, быстрая утомляемость, нарушения сна, ломота в мышцах, ухудшение аппетита, сухость кожи или сыпь. Температура может совсем не повышаться или быть субфебрильной. Со временем возникает тошнота, рвота, увеличивается печень.

При развитии болезни возникают желтушные проявления: пожелтение склер, слизистых оболочек, кожи. Темнеет моча до цвета темного пива и обесцвечивается кал. Но характерные признаки желтухи могут быть кратковременными, слабовыраженными или вообще отсутствовать. Разрушение печени происходит и при скрытом протекании, поэтому очень важно выявить гепатит еще на ранних стадиях.

Для выявления патологий печени применяют:

    Лабораторные исследования помогут дифференциировать вид гепатита.
  • общий — измеряет уровень билирубина и печеночных ферментов, дает возможность подтвердить воспалительный процесс в печени;
  • биохимический — по соотношению белковых фракций, уровню ферментов и липидов определяется степень поражения;
  • имуноферментный — выявляет специфические антитела и антигены, характерные для конкретного типа гепатита.
  • Полимеразная цепная реакция: определяет генетический материал инфекционного агента в любой биологической жидкости (преимущественно в крови) и устанавливает тип вируса.
  • УЗИ печени — диагностика степени поражения органа и наличия структурных изменений.
  • Вернуться к оглавлению

    Специальная терапия для гепатитов, передающихся парентеральным путем, применяется только в тяжелых и запущенных случаях. Основным является использование щадящих препаратов и анализ целесообразности их применения, т. к. печень уже достаточно поражена инфекцией. Применяют препараты для ее восстановления, такие как «Урсосан», «Эссенциале» вместе с противовирусными средствами: «Интерферон» или «Рибавирин».

    При легком течении гепатита назначают симптоматическое лечение желчегонными препаратами, витаминными комплексами. Обязательным является соблюдение диеты: исключение из рациона жирного мяса и рыбы, супов на бульоне, жареных и острых блюд с применение соусов и подлив, копченостей, алкогольных и газированных напитков. Положительно на печени сказываются вегетарианские супы с овощами и крупами, варенное или тушеное нежирное мясо, рыба, свежие и вареные овощи, сладкие фрукты.

    Предупреждение болезни заключается в соблюдении общих правил гигиены. Это контроль целостности кожи перед посещением саун и бассейнов, использование барьерных контрацептивов, посещение проверенных косметологических учреждений, использование только личных предметов гигиены — бритв, маникюрных инструментов, расчесок и т. п. При планировании беременности обязательно сдать анализы на возможное присутствие в организме гепатита. Профилактика парентеральных гепатитов с помощью прививок возможна только для гепатита В.

    источник

    Воспалительные заболевания печени, которые развиваются под воздействием различных факторов, называют парентеральными гепатитами. Инфекция передаётся через повреждённые участки кожи и слизистой оболочки. В большинстве случаев вирус передаётся через кровь, чуть реже – через другие биологические жидкости заражённого человека.

    Парентеральные гепатиты опасные, так как для инфицирования достаточно минимального количества заражённого материала. Существуют ещё энтеральные гепатиты, которые передаются через рот, их провоцируют вирусы гепатита А и Е. Парентеральные инфекции вызывают вирусы B, D, C, F, G. Патогенные микроорганизмы провоцируют опасные заболевания, которые нередко приводят к летальному исходу.

    Парентеральные вирусные гепатиты возникают после проникновения в организм многих вирусов, которые принадлежат к определённым группам. Медики выделяют следующие виды гепатитов, которые возникают вследствие повреждения целостности кожи и слизистых:

    • HBV провоцирует гепатит В, он относится к группе гепаднавирусов, он имеет сложную структуру. Патогенный микроорганизм проявляет устойчивость к физическому и химическому воздействию. Он сохраняется при температуре -20° несколько лет, при кипячении – 30 минут, а также в кислой среде. Во время стерилизации (160°) вирус погибает через 60 минут. Раствор хлорамина (3 – 5%) инактивирует ВГВ через 1 час, фенол (3 – 5%) – спустя 24 часа, этанол (70%) – через 2 минуты, перекись водорода (6%) – по истечении 60 минут.
    • HCV принадлежит группе флавивирусов. Парентеральный путь – это основной способ инфицирования. Патогенный микроорганизм способен постоянно мутировать и самовоспроизводиться в разных вариациях. Из-за этой особенности затрудняется выработка иммунного ответа, осложняются серологические исследования (анализ крови на антитела), возникают проблемы в создании вакцины. Нередко инфекция имеет скрытое течение и переходит в хроническую форму.
    • HDV – это представитель дельта-вирусов. Инфицирование происходит парентеральным путём. Этот вирус не способен самостоятельно вырабатывать белки, необходимые для его размножения. Для репликации он использует белки HBV.
    • HFV ещё находится на стадии изучения. Известно, что по строению он напоминает аденовирусную инфекцию. Основным путем передачи инфекции является гематогенный и фекально-оральный. HFV способен размножаться в многослойных клеточных структурах.
    • HGV является инфекцией с парентеральным механизмом передачи. Вирус отличается своей неоднородностью. Не так редко HGV обнаруживают у пациентов с гемофилией (хроническая кровоточивость) и другими формами хронического гепатита. Для его выявления проводят анализ крови на ПЦР (полимеразная цепная реакция) и иммуноферментный анализ крови.

    Это основные возбудители гепатитов, передающиеся парентеральным путём.

    Парентеральное заражение провоцируют больные и пациенты, которые являются носителями инфекции. Эти патологии очень опасные, так как после попадания вируса в человеческий организм разу происходит заражение.

    HBV содержится в крови, сперме, слюне, моче и других секретах. Основной механизм передачи вируса – парентеральный.

    Медики выделяют следующие способы заражения гепатитом В:

    • Приём инъекционных наркотиков, переливание крови и её компонентов. Инфицирование происходит в ЛПУ (лечебно-профилактические учреждения), когда во время диагностики или лечения используются плохо очищенные или нестерилизованные инструменты.
    • Вирус передаётся во время полового контакта без применения барьерных контрацептивов.
    • HBV может находиться в засохших каплях крови на бытовых предметах (зубные щётки, бритвы, швейные иглы и т. д.).
    • Инфекция передаётся от матери к плоду.

    HCV в большинстве случае передаётся через кровь и её препараты. В группу риска входят больные на гемодиализе (внепочечное очищение крови при почечной недостаточности). Большая вероятность заражения у лиц, употребляющих инъекционные наркотики, которые пользуются общим шприцем. Риск передачи HCV половым путём ниже, чем при HBV.

    Кроме того, существует «спорадический» гепатит С – это инфекция с невыясненным путём заражения. Согласно медицинской статистике, у 40% пациентов не могут установить путь передачи HCV.

    Крайне редко инфекция передаётся перинатальным способом (от матери к ребёнку).

    Согласно медицинской статистике, HDV обнаружили в организме 15 миллионов человек. Передача вируса дельта связана с инфицированием вирусом В. Патогенные микроорганизмы проникают в организм через кровь, её продукты, во время интимной связи без применения презерватива.

    Существует вероятность одновременного заражения гепатитом В и D. Также возможна суперинфекция, когда HDV присоединяется к HBV. При последнем сценарии заболевание протекает тяжело, да и прогноз хуже.

    Способ передачи HGV схож с эпидемическим процессом при HCV. Вероятность патологии повышается при частом переливании крови, употреблении инъекционных наркотиков. Информация о распространённости этой инфекции в мире отсутствует. Медики проводят исследования, чтобы выяснить роль HGV, так как некоторые из них считают, что этот вирус всего лишь «свидетель» серьёзных патологий.

    Вероятность заражения вирусными гепатитами повышается у пациентов, которые посещают салоны красоты, где делают маникюр, татуировки, пирсинг.

    Вирусный гепатит В имеет длительный инкубационный период – от 1,5 до 6 месяцев, а иногда он увеличивается до 1 года. В продромальный период (период между инкубацией и болезнью) проявляется болью в суставах, моно- и полиартритами. На начальной стадии заболевания лихорадка возникает редко. Пациенты жалуются на боль в животе или правом подреберье, тошноту, извержение рвотных масс, потерю аппетита, расстройства стула.

    Желтуха при ВГВ может длиться около 1 месяца. Для этого периода характерны нарушения оттока желчи, появление зуда на коже, развитие гепатомегалии (увеличение печени). Во время пальпации врач ощущает, что железа гладкая, плотная.

    ВГВ проявляется артритами, сыпью на коже, болью в мышцах, васкулитами (воспаление и разрушение стенок сосудов), неврологическими расстройствами, поражением почек. Возможно снижение числа лейкоцитов, повышение лимфоцитов, моноцитов, плазматических клеток, повышение СОЭ (скорость оседания эритроцитов).

    При желтушном ВГВ пациент выздоравливает через 4 месяца после появления симптоматики. Хроническая инфекция длится около полугода. Заболевание может осложниться печёночной энцефалопатией в первый месяц.

    При HCV инкубационный период продолжается около 2 месяцев. У многих пациентов заболевание не проявляется выраженными симптомами. После стёртого течения болезни может появляться тошнота, приступы рвоты, боль справа под рёбрами, обесцвечивание кала, потемнение урины.

    При гепатите С аланинаминотрансфераза (АлАТ) и аспартат-аминотрансфераза (АсАТ) – это ферменты, указывающие на болезни печени, повышаются в 10 – 15 раз. Уровень трансаминаз волнообразно меняется, но остаётся выше нормы на протяжении 12 месяцев. Так, ВГС приобретает хроническое течение. По статистике, у 20% заражённых гепатит развивается, провоцируя цирроз.

    HDV проявляется такими же симптомами, как ВГВ. Как правило, прогноз благополучный, пациент выздоравливает.

    Иногда гепатит D протекает двухфазно, при этом активность АлАТ И АсАТ повышается с промежутком в 2 – 4 недели. Во время второй волны возникает лихорадка и проявляется характерная симптоматика.

    При суперинфекции гепатит протекает тяжело, сопровождается некрозом гепатоцитов и проявляется симптомами печёночной энцефалопатии (нервно-психические расстройства вследствие дисфункции печени).

    Достоверная информация о клинических проявлениях HGV отсутствует. Инфекция может сопровождаться выраженными симптомами или нет. При гепатите G поражаются желчные протоки. Общая симптоматика напоминает признаки ВГС, но с более лёгким течением. Эта патология чаще протекает остро, однако тяжёлые признаки и осложнения отсутствуют. При одновременном развитии HGV и HCV болезнь быстро прогрессирует и угрожает здоровью пациента.

    При появлении симптомов инфекции (пожелтение кожи, слизистых оболочек, общая слабость, обесцвечивание кала, потемнение мочи) следует посетить врача. Сначала специалист проведёт визуальный осмотр и соберёт анамнез.

    Диагностика состоит из лабораторных исследований венозной крови. Биологический материал проверяют на наличие специфических маркеров вирусов. Кроме того, определяется концентрация билирубина (желчный пигмент), активность ферментов печени, выявляются антигены и специфические антитела к ним.

    Чтобы подтвердить диагноз, оценить степень поражения железы, а также тяжесть осложнений, назначают ультразвуковое исследование, компьютерную и магнитно-резонансную томографию.

    На парентеральные гепатиты указывают следующие показатели:

    При общем анализе крови, мочи или кала проявляется:

    • Агрунулоцитоз – снижение концентрации нейтрофилов.
    • Лимфоцитоз – повышение количества лимфоцитов.
    • Тромбоцитопения – уменьшение числа тромбоцитов.
    • Повышение СОЭ.
    • Уробилинурия – выделение уробилина с мочой.
    • Отсутствие стеркобилина в каловых массах.

    Во время биохимического анализа крови наблюдаются следующие изменения:

    • Увеличивается концентрация билирубина.
    • Повышается активность АлАТ, альдолаз, дегидрогеназ и других печёночных ферментов.
    • Высокая активность щелочной фосфатазы, гамма-глутамилтранспептидазы.
    • Увеличивается концентрация холестерина, жиров.
    • Снижаются протромбины, альбумины, фибриноген.
    • Повышаются глобулины.

    Для выявления специфических маркеров вирусов проводят иммуноферементный анализ крови. Определить ДНК вируса и вычислить его концентрацию в крови можно с помощью анализа, который проводят методом полимерной цепной реакции (ПЦР).

    Если у пациента выявили паренетеральный гепатит, то его необходимо госпитализировать. При лёгком течении инфекции пациент выздоравливает через несколько недель или месяцев. Если форма болезни средняя или тяжёлая, то пациенту назначают медицинские препараты, постельный режим, диету №5, а также витамины (В6, В12, С). При общем отравлении организма больному назначают инфузионное лечение с применением специальных растворов.

    Во время нахождения в стационаре пациент должен соблюдать следующие правила питания:

    • Суточное количество белка животного происхождения не превышает 1,5 г/кг, а жиров – 1 г/кг.
    • Рекомендуется употреблять молочный жир (сметана, сливочное масло, сливки). Кроме того, полезны растительные масла.
    • Энергетическая ценность рациона не должна превышать 3000 ккал (сюда входит суточная доза белков, жиров, а остальное дополняют углеводами).
    • Необходимо пить не менее 2,5 л жидкости (вода без газа или щелочная минеральная, сладкий чай, соки из фруктов, компоты, морсы) за сутки.
    Читайте также:  Хронический вирусный гепатит в и его лечение

    Когда состояние пациента улучшится, его рацион постепенно расширяют. По возвращении домой больной должен соблюдать диету на протяжении 3–6 месяцев.

    Лечебные меры при остром гепатите С и хронических инфекциях типа B, C, D, G включают применение рекомбинантных интерферонов α-2. Лекарство вводят внутримышечно по 3 миллиона единиц через сутки. Лечение продолжается, пока полностью не исчезнет вирус из крови.

    После заражения парентеральным гепатитом проводят патогенетическое лечение. Эта терапия помогает корректировать нарушенные функции органов, нормализовать метаболизм, повысить неспецифическую устойчивость, а также иммунную реактивность организма. Для этой цели применяют следующие группы препаратов:

    • Дезинтоксикационные средства (раствор глюкозы (5 – 10%), альбумина (10%), Трисоль, Ацесоль, Реополиглюкин).
    • Препараты, нормализующие метаболизм (Милдронат, Гептрал, Хофитоль, Люминал и т. д.).
    • Препараты с антихолестатическим эффектом (Холестирамин, Урсосан, Гептрал и т. д.).
    • Медикаменты, которые увеличивают выделение желчи (Одестон, Фламин, Аллохол).
    • Препараты с противовоспалительным эффектом (глюкокортикостероиды по медицинским показаниям, средства, подавляющие активность ферментов поджелудочной железы, так как Трасисол, Контрикал, Овомин).
    • Антиоксиданты и препараты, восстанавливающие структуру печени (Тиотриазолин, витамин Е, Эссенциале, Легалон и т. д.).
    • Лекарственные средства с иммунорегулирующими свойствами (Делагил, Азатиоприн, Тимолин, Тимоген).
    • Мочегонные средства, а также кристаллоидные растворы (гидрокарбонат натрия, Трисамин).
    • Гемостатическое лечение (плазма крови свежезамороженная, Викасол, Контрикал).
    • Витаминные препараты, содержащие витамины С, элементы группы В, а также витамины А и Е (если отсутствует холестаз).
    • Чтобы ускорить регенерацию печёночной ткани, назначают Урсосан, препараты на основе солянки холмовой.
    • Эфферентные методы лечения, при которых применяют аппараты, очищающие кровь от токсинов (плазмаферез, гемосорбция).

    При необходимости врач подбирает симптоматические препараты: энтеросорбенты (Смекта, Энтеросгель), ферментированные средства (Креон, Мезим), спазмолитические средства (Но-шпа, Риобал).

    Профилактика парентеральных гепатитов поможет предупредить заболевание и спасти жизнь.

    Вакцинация – это экстренная профилактика инфекции, после этой процедуры организм человека защищён от проникновения патогенного микроорганизма.

    В прививке нуждаются следующие категории пациентов:

    • Новорожденные (на 2–3 сутки после рождения).
    • Студенты-медики.
    • Пациенты, которые нуждаются в гемотрансфузии.
    • Люди, которые тесно контактируют с больным или носителем вируса.
    • Лица, которым не проводили вакцинацию перед операцией.

    Кроме того, прививку делают сотрудникам лабораторий.

    Основные мероприятия по профилактике гепатитов:

    • Избегайте случайных интимных связей, пользуйтесь презервативами.
    • Используйте только свои средства для гигиены и бытовые предметы (полотенце, зубная щётка, бритва и т. д.).
    • Во время косметологических или медицинских процедур требуйте стерилизовать инструмент или использовать новый.
    • Откажитесь от наркотических средств, особенно инъекционных, и не злоупотребляйте алкоголем.
    • При получении серьёзной травмы обращайтесь за медицинской помощью.

    Новорожденные нередко заражаются во время родов, если мать больна. Поэтому женщине во время вынашивания плода следует пройти анализ на антитела к ВГВ. При выявлении антигенов рекомендуется исследовать кровь на наличие HCV.

    Если мать больна, то рекомендуется кесарево сечение. В качестве экстренной профилактики ребёнку вводят вакцину в первые сутки после родов. Далее иммунизация происходит согласно схеме.

    Симптомы и прогноз при парентеральных гепатитах зависят от типа вируса (B, C, D, F, G). Лечение инфекции должно быть комплексным: медикаментозная терапия, соблюдение правил питания, снижение физических нагрузок и отказ от вредных привычек. Чтобы предупредить заболевание, следует вовремя провести вакцинацию, соблюдать рекомендации врачей, которые касаются образа жизни.

    источник

    Как проводится диагностика вирусного гепатита С, какие симптомы болезни и какое может быть назначено лечение

    Вирусные гепатиты — группа инфекционных заболеваний, которые вызываются различными гепатотропными вирусами, отличаются по механизму передачи, течению и прогнозу.

    Существует множество форм вирусных гепатитов: от легких, субклинических, до тяжелых, быстропрогрессирующих; от острых до хронических поражений с развитием цирроза и рака печени.

    Хронический вирусный гепатит — хроническое заболевание печени, вызванное вирусами гепатитов В, С, Д, развивающееся через 6 мес. после перенесенного острого гепатита.

    Классификация хронических вирусных гепатитов

    МКБ-10
    В 18 — хронический вирусный гепатит
    В 18.0 — хронический вирусный гепатит В с дельта-агентом
    В 18.1 — хронический вирусный гепатит В без дельта-агента
    В 18.2 — хронический вирусный гепатит С
    В 19 — неопределенный вирусный гепатит

    Гепатит С (ГС) — инфекционное заболевание, вызванное вирусом гепатита С (HCV). HCV принадлежит к семейству флавивирусов, рода Hepacivirus. В клинической практике различают 6 основных генотипов HCV: 1а, 1b, 2a, 2b, 3, 4.

    Гепатит С — это вирусная инфекция печени. Её возбудителем является вирус гепатита С. Этот вирус размножается в печени, и из клеток печени он проникает в кровь. Примерно у 60-80 % пациентов их собственная защитная иммунная система не в состоянии успешно справиться с этим вирусом. В таких случаях заболевание гепатитом С принимает хроническую форму. Другая часть пациентов, составляющая 20-40 %, выздоравливает от гепатита С на протяжении полугода без какого-либо лечения.

    Симптомы гепатита С почти незаметны, большинство пациентов вообще не замечают, что они заражены. Некоторые пациенты ощущают повышенную усталость,чувствуют себя разбитыми и замечают снижение своей работоспособности или у них возникают жалобы на неприятные ощущения с правой стороны надчревной области. Желтуха развивается обычно реже.

    Наличие вируса гепатита С в крови может быть подтверждено либо прямым путем — на основании его наследственной информации (РНК) или же косвенно — на основании наличия в крови антител, выработанных белыми кровяными тельцами пациента. Положительное подтверждение РНК свидетельствует об остром заболевании, а наличие антител против вируса гепатита С (анти-HCV) не может отличить излеченную инфекцию гепатита С от сохраняющейся хронической инфекции. Поэтому также и у пациентов, излеченных от гепатита С, еще на протяжении дли- тельного периода времени можно обнаружить антитела, но не РНК вируса гепатита С.

    Основой диагностики гепатита С является подтверждение наличия антител к вирусу гепатита С (анти-HCV). Если такой тест окажется положительным (т.е. в крови пациента имеются антитела к вирусу гепатита С), то в данном случае необходимо провести прямое исследование на наличие вируса, например, так называемым методом PCR (полимеразная цепная реакция, ПЦР). Это — особенно чувствительный тест, предназначенный для подтверждения наличия вирусов гепатита С в крови.

    Во всех тех случаях, когда возникает мысль о проведении антивирусной терапии, имеет смысл провести дополнительное исследование для определения количества вирусов в крови (вирусная нагрузка) а также генотипа вируса гепатита С.

    С некоторыми ограничениями показатели печени АЛТ и АСТ, также именуемые «трансаминазами») дают информацию о воспалительной активности гепатита. Однако нормальные показатели печени не означают того, что можно исключить хроническое заболевание гепатитом С. Для контроля показатели печени будут определяться также и во время процесса лечения.

    Поскольку у пациентов с хронической формой гепатита С риск получения рака печени повышен, то у них через регулярные промежутки времени (от шести до двенадцати месяцев) необходимо определять наличие в крови онкомаркера рака печени — альфа-фетопротеина. С такими же интервалами времени следует проводить и ультразвуковое исследование печени.

    Биопсия печени (пункция печени)

    Для того чтобы получить возможность оценить долю волокон соединительной ткани в печени, активность воспалительного процесса и степень ожирения, может возникнуть необходимость в пункции печени. При пункции печени под местным наркозом изымается небольшой кусочек ткани, гистологию которого затем исследуют под микроскопом. При проведении полного гистологического исследования будут раздельно определены показатели воспалительной активности (оценка степени активности) и стадии фиброза.

    «Здоровые» носители вируса гепатита С (в крови выявлены вирусы, но показатели печени нормальны и пробы ткани печени тоже нормальны) встречаются чрезвычайно редко. У большинства пациентов даже при нормальных показателях печени можно подтвердить признаки хронического гепатита в тканях печени.

    Механизм развития болезни

    При хронической инфекции вирусы гепатита постоянно заражают новые клетки печени. Признаком воспалительного процесса является проникновение белых кровяных телец в ткани печени. Эти белые кровяные тельца заботятся о том, чтобы инфицированные и погибшие клетки печени были уничтожены и удалены. Однако сам вирус они, как правило, победить не в состоянии. Отмершие клетки печени позже могут быть замещены клетками соединительной ткани (= рубцовая ткань). Если на печени произошли изменения соединительной ткани, то в таких случаях на ранней стадии врачи говорят о фиброзе печени, а позже — о циррозе печени. Организм уже не в состоянии преобразовать цирротическую рубцовую ткань в ткани печени.

    Заражение вирусом гепатита С происходит в основном через прямой или непрямой контакт с кровью (парентеральное заражение).

    До 1990 г. далеко не редким явлением было заражение вирусом гепатита С через препараты, изготовленные из крови, а также через препараты для улучшения свертываемости крови. В настоящее время при помощи современных методов тестирования можно выявлять доноров крови, являющихся носителями гепатита С. На сегодняшний день остаточный риск заражения инфекцией гепатита С при переливании крови является минимальным.

    Вирус может передаваться от одного человека к другому также через зараженные шприцы, например, при употреблении наркотиков. Другими факторами риска для заражения вирусом гепатита С являются нанесение татуировок или вживление пирсинга. Возможно также и заражение через открытые раны, бритвенные лезвия или зубные щетки. Возможна передача вируса и сексуальным путем. Однако риск для сексуального партнера зараженного пациента оценивается как весьма незначительный. Риск заражения зависит от сексуального поведения.

    Случаи заражения вирусом через неповрежденную кожу или через слюну до сих пор в научной литературе не описаны. Таким образом, если на посуде, на стаканах или на столовых приборах нет загрязнений кровью, то опасаться заражения не приходится.

    Отдаленные осложнения гепатита С

    На основе хронического гепатита (воспаление печени, при котором в тканях печени имеются отчетливые признаки воспалительного процесса) в последующие годы примерно у 30 % пациентов развивается цирроз печени. Риск развития цирроза печени зависит, в том числе, от возраста пациента на момент заражения и от продолжительности заболевания. Это означает, что при заражении в более зрелом возрасте (старше 40 лет) болезнь часто развивается быстрее. К факторам, которые могли бы ускорить развитие цирроза печени, относятся дополнительные хронические заболевания печени, к примеру, заражение другими печеночными вирусами (например, дополнительная инфекция вирусом гепатита В) или вещества, наносящие вред печени иным образом. К ним относится, в первую очередь, алкоголь. Врачи говорят о циррозе печени в тех случаях, когда большая часть ткани печени оказывается замещенной соединительной тканью. Вследствие этого нормальная структура ткани печени разрушается. В результате возникают изменения кровоснабжения, что может привести к повышению кровяного давления в воротной вене (вене, проходящей между кишечником и печенью). В результате застоя крови в пищеводе и в желудке могут образоваться расширенные вены (варикозные узлы). Если такие сосуды лопнут, то могут открыться тяжелые кровотечения в области кишечника и желудка. Опасность открытия кровотечения возрастает также еще и потому, что из-за ослабленного синтеза белка в печени и из-за уменьшения количества кровяных пластинок (тромбоцитов) сворачиваемость крови ограничена. В том числе из-за повышенного кровяного давления перед печенью в брюшной полости могут также скапливаться физиологические жидкости (асцит). При наличии цирроза печени токсичные вещества, попадающие в кровь из желудочно-кишечного тракта, уже не могут перерабатываться печенью и, таким образом, они попадают в большой круг кровообращения. Это может привести к усилению утомляемости и снижению концентрационной способности (гепатическая энцефалопатия, «Encephalon» = головной мозг).

    Из-за пониженной выработки белка в печени с цирротическими изменениями наряду с нарушениями процессов очистки крови также снижается выработка веществ, необходимых для защитных механизмов организма. Результатом является повышенная предрасположенность к инфекциям. Из-за застоя желчи при тяжелых заболеваниях печени глаза и кожа часто приобретают желтую окраску (желтуха). Это часто сопряжено также с зудом. Одновременно моча может приобрести темную окраску. Если пациент страдает хроническим гепатитом С на протяжении длительного времени, то у него также повышается и риск развития рака печени (гепатоцеллюлярная карцинома). У большинства пациентов гепатоцеллюлярная карцинома развивается на базе цирроза печени, однако, у небольшого числа пациентов с хроническим гепатитом С были также описаны случаи карциномы печени, несмотря на то, что у них еще не было цирроза печени. Поэтому имеет смысл проводить регулярные ультразвуковые обследования, а также исследования крови.

    В некоторых случаях гепатит С развивается в настолько тяжелой форме, что может понадобиться пересадка печени. Активность воспалительного процесса, а также степень ожирения печени и изменений в соединительных тканях можно установить только путем взятия гистологических проб. Для этого из печени необходимо взять ткань на пробу (биопсия печени). Степень развития фиброза печени можно также хорошо оценить при помощи таких неинвазивных методов, как например, эластография.

    Хронический гепатит С на протяжении нескольких десятков лет может привести к циррозу печени и к раку печени. Терапия и здоровый образ жизни могут остановить или замедлить этот процесс.

    Наличие вируса гепатита С в крови может быть подтверждено либо прямым путем — на основании его наследственной информации (РНК) или же косвенно — на основании наличия в крови антител, выработанных белыми кровяными тельцами пациента. Положительное подтверждение РНК свидетельствует об остром заболевании, а наличие антител против вируса гепатита С (анти-HCV) не может отличить излеченную инфекцию гепатита С от сохраняющейся хронической инфекции. Поэтому также и у пациентов, излеченных от гепатита С, еще на протяжении дли- тельного периода времени можно обнаружить антитела, но не РНК вируса гепатита С.

    Основой диагностики гепатита С является подтверждение наличия антител к вирусу гепатита С (анти-HCV). Если такой тест окажется положительным (т.е. в крови пациента имеются антитела к вирусу гепатита С), то в данном случае необходимо провести прямое исследование на наличие вируса, например, так называемым методом PCR (полимеразная цепная реакция, ПЦР). Это — особенно чувствительный тест, предназначенный для подтверждения наличия вирусов гепатита С в крови.

    Во всех тех случаях, когда возникает мысль о проведении антивирусной терапии, имеет смысл провести дополнительное исследование для определения количества вирусов в крови (вирусная нагрузка) а также генотипа вируса гепатита С.

    С некоторыми ограничениями показатели печени АЛТ и АСТ, также именуемые «трансаминазами») дают информацию о воспалительной активности гепатита. Однако нормальные показатели печени не означают того, что можно исключить хроническое заболевание гепатитом С. Для контроля показатели печени будут определяться также и во время процесса лечения.

    Поскольку у пациентов с хронической формой гепатита С риск получения рака печени повышен, то у них через регулярные промежутки времени (от шести до двенадцати месяцев) необходимо определять наличие в крови онкомаркера рака печени — альфа-фетопротеина. С такими же интервалами времени следует проводить и ультразвуковое исследование печени.

    Биопсия печени (пункция печени)

    Для того чтобы получить возможность оценить долю волокон соединительной ткани в печени, активность воспалительного процесса и степень ожирения, может возникнуть необходимость в пункции печени. При пункции печени под местным наркозом изымается небольшой кусочек ткани, гистологию которого затем исследуют под микроскопом. При проведении полного гистологического исследования будут раздельно определены показатели воспалительной активности (оценка степени активности) и стадии фиброза.

    «Здоровые» носители вируса гепатита С (в крови выявлены вирусы, но показатели печени нормальны и пробы ткани печени тоже нормальны) встречаются чрезвычайно редко. У большинства пациентов даже при нормальных показателях печени можно подтвердить признаки хронического гепатита в тканях печени.

    источник

    Диагностика острых и хронических гепатитов обязательно должна носить комплексный характер.

    Прежде всего она направлена на определение возбудителя данного заболевания. Также врач обязательно должен оценить степень нарушения работы печени и выявить сопутствующие осложнения. Начальной стадией диагностики является изучения анамнеза и осмотр пациента. После этого специалист назначает другие методы диагностики вирусных гепатитов – лабораторные и инструментальные.

    В процессе ПЦР-диагностики заболевания определяют маркеры острых и хронических гепатитов. К ним относят следующее:

    1. Маркеры гепатита А. Анти-НАV IgM появляются в крови к окончанию инкубационного периода. В этот момент у человека возникают первые симптомы гепатита. Антитела присутствуют в сыворотке около полугода. Благодаря выявлению данных веществ методом ПЦР можно говорить о текущей или недавно возникшей инфекции.
      Анти-НАV-total возникают в сыворотке позже. Они говорят о присутствии HAV-инфекции и последующем формировании иммунитета. Данный показатель, полученный в процессе исследований методом ПЦР, может использоваться для определения эффективности профилактики с помощью вакцин.
    2. Маркеры гепатита В. В эту категорию входит НВsAg, который является поверхностным антигеном гепатита В и появляется в завершающей стадии инкубационного периода. Его не удается выявить в 10 % острых случаев заболевания и большинстве хронических.
      Антитела анти-НВs возникают спустя 3-12 месяцев после начала развития патологии. Они присутствуют в организме примерно 5 лет. Ангиген НbcorA не удается определить в сыворотке крови. Его удается выявить лишь в гепатоцитах.
      Анти-Нвcor IgM представляет собой антитела к ядерному антигену, которые характерны для завершения инкубационного периода и начала развития болезни. Определение данных веществ является значимым критерием при проведении ПЦР-диагностики.
      Анти-Нвcor IgG характерны для парентеральных гепатитов во время развернутой клинической картины. Они сохраняются на всю жизнь и свидетельствуют о том, что человек перенес инфекцию. В завершение инкубационного периода можно обнаружить НвeAg. Он сохраняется в течение 10-12 недель и говорит о репликации парентеральных вирусов.
      Анти-Нве представляют собой антитела к HbeAg и возникают во время развернутых проявлений. Данные вещества сохраняются на 5 лет после заболевания. При хронических парентеральных гепатитах их выявляют и по истечении указанного времени.

    Помимо ПЦР-диагностики, очень важно оценить количество ферментов печени. Поражение тканей органа сопровождается попаданием в кровь ферментов, что влечет их увеличение в составе плазмы. В нормальном состоянии количество АСАТ составляет 5-35 Ед./л, а АЛАТ – 5-40 Ед./л.
    Лабораторная диагностика вирусных гепатитов должна включать определение плазматической активности щелочной фосфатазы. В случае развития гепатита она увеличивается. В норме данный показатель составляет 30-115 Ед./л.
    Немаловажное значение имеет оценка фракций билирубина – свободного и связанного. Его повышение обусловлено неспособностью клеток печени выводить из организма данный пигмент. В норме концентрация связанного билирубина составляет 0,1-0,3 мг/дл, а свободного – 0,2-0,7 мг/дл.

    Наши постоянная читательница

    Наша постоянная читательница справилась с ГЕПАТИТОМ С действенными медикаментами — Софосбувир и Даклатасвир. По отзывам пациентов — результат 97% — полное избавление от вируса. Мы решили посоветовать ДЕЙСТВЕННУЮ терапию Вам. Результат почти 100%. ДЕЙСТВЕННЫЙ МЕТОД.

    Чтобы обследовать органы брюшной полости, обычно применяют ультразвуковое исследование. Это достаточно простой метод, который помогает визуализировать увеличение печени и других органов, а также оценить происходящие в них изменения. Также с помощью УЗИ оценивается состояние сосудов. Если же врач планирует сделать пункционную биопсию, данный метод поможет выбрать оптимальное место для прокола.
    С помощью данного аппарата удается увидеть на мониторе определенные сечения внутренних органов. В результате можно визуализировать локальные изменения в них – камни, опухолевые образования и т.д.
    Неправильные результаты можно получить исключительно в том случае, если работа органа нарушается на клеточном уровне. Вследствие этого весь орган поражен. К примеру, при изменении клеток печени удастся обнаружить нарушение оттенка тканей. Однако информацию относительно характера и тяжести болезни получить не удастся.
    В такой ситуации проводится пункционная биопсия. Это наиболее точная методика, которая позволяет получить максимальное количество информации. С помощью данного способа оценивается структура тканей печени, что позволяет наиболее точно диагностировать гепатит.

    Гепатит у беременных – очень опасная патология, поскольку она практически всегда провоцирует нарушения в развитии плода. При поражении вирусом типа В практически всегда заражается и ребенок. Наличие гепатита С у беременных провоцирует несколько иную картину. Тем не менее, нельзя сказать, развитие данного заболевания у беременных спровоцирует инфицирование малыша.
    Чтобы провести правильную диагностику, прежде всего нужно сдать анализ крови и провести ПЦР-диагностику. При гепатите В у беременных имеет значение наличие HBsAg и НВеАg. Если они присутствуют, риск заражения ребенка повышается. В такой ситуации также уменьшается эффективность вакцины для беременных.
    Если же будущая мама заболевает гепатитом С, инфицирование ребенка происходишь лишь в 5 % случаев. При этом данный вид заболевания передается от беременных к плоду лишь при условии активного протекания недуга. В большинстве случае ребенок заражается от матери при родах.
    При выявлении вирусного гепатита у беременных обязательно требуется стационарная терапия. Если у женщин развивается цирроз печени, нужно принимать все меры, чтобы беременность и вовсе не наступила. Дополнительные нагрузки на организм, которые возникают у беременных, спровоцируют сильное обострение болезни.
    При хронизации процесса беременность не оказывает влияния на клиническую картину патологии. Иногда у беременных женщин воспаления в печени и вовсе прекращаются. Однако нужно быть готовой к тому, что после родов гепатит резко обострится. Потому так важно держать данный процесс под контролем.

    Дифференциальная диагностика проводится для того, чтобы отличить вирусный гепатит от острых поражений печени, связанных с воздействием химических веществ. Особенно важно провести диф диагностику алкогольной формы заболевания. На начальном этапе развития этого недуга часто ставят ошибочный диагноз, принимая его за вирусный гепатит. Это происходит в 50 % случаев.
    Чтобы провести диф диагностику этих процессов, нужно учитывать, что алкогольный гепатит развивается исключительно на фоне постоянного употребления большого количества спиртного. Важными критериями диф диагностики в данном случае является следующее:

    источник

    2.3. Диагностика парентеральных вирусных гепатитов. Парентеральные вирусные гепатиты — группа инфекционных

    заболеваний печени, основными этиологическими агентами которых являются не родственные между собой вирусы гепатита В (сем. Hepadnoviridae) и гепатита С (сем. Flaviviridae). Вирусный гепатит В может быть осложнен вирусом-сателлитом Д (дельта), который способен развиваться только в присутствии вируса гепатита В.

    Для постановки диагноза вирусный гепатит учитываются следующие факторы:

    Читайте также:  Сколько делается анализ на вирусный гепатит

    -показатели активности печеночных ферментов; -наличие маркеров вирусов гепатитов, -эпидемиологический анамнез; -результаты клинического осмотра пациента.

    Безусловно решающим для постановки диагноза является обнаружение маркеров вируса. Вирусы гепатитов В и С не культивируются в лабораторных условиях. В связи с этим, их выявление основано на обнаружении компонентов вирусов (белков, нуклеиновых кислот) или антител к антигенам вирусов.

    Диагностика вирусного гепатита В.

    Выявление вируса гепатита В базируется в основном на иммунологических методах. Наиболее значимым и часто применяемым в практике является исследование на наличие HBs антигена вируса гепатита В, который является главным маркером этого инфекционного агента. Тест на HBs антиген используется при выявлении первично инфицированных, бессимптомных носителей, оценки эффективности лечения, проверки доноров и пулов донорской крови. Впервые HBs антиген был выявлен в реакции преципитации в геле [122]. Следующим этапом совершенствования диагностики гепатита В стало внедрение методов встречного иммуноэлектрофореза и реакции обратной пассивной гемагглютинации, чувствительность которых достигала 400 и 20 нг/мл соответственно [90].

    В настоящее время в качестве метода выявления HBs антигена используются различные модификации твердофазного ИФА. В большинстве тест-систем применяется схема одностадийного «сэндвича». Современные планшетные тест-системы позволяют выявить ad и ау субтипы HBs антигена в концентрации до 0,05 нг/мл [90].

    Разработаны экспрессные, безинструментальные тесты на HBs антиген, основанные на твердофазном ИФА — «Flow through», «Lateral flow», «Immunocomb HBsAg», которые позволяют получить результат за несколько минут без использования сложного оборудования. Однако их чувствительность составляет 0,5-5 нг/мл. Несмотря на низкую чувствительность, они нашли свою область применения. Экспресс тесты используют, когда применение высокочувствительных методов невозможно из-за ограничений по времени, например при необходимости экстренного переливания крови [57].

    Радиоиммуный метод выявления НВэ антигена используется достаточно редко, хотя и имеет высокую чувствительность — 0,05 нг/мл. Ограничения обусловлены использованием радиоактивной метки [90].

    В последние годы разработаны тест системы и оборудование для выявления НВб антигена хемилюминисцентным методом (разработки фирм «Рош диагностик», «ОМБ». Чувствительность метода составляет 0,05 нг/мл.

    Несмотря на высокую специфичность современных тест-систем, не исключается получение ложно-положительных результатов. Это может быть связано с неспецифическим взаимодействием компонентов реакционной смеси и сывороток крови, с бактериальным загрязнением и другими факторами. С целью подтверждения правильности выявления НВэ антигена используют тест нейтрализации. Для этого антиген пробы нейтрализуют аттестованной анти- НВэ сывороткой. После чего проводят повторный тест, который в случае правильного определения НВб -антигена должен быть отрицательным. Проведение теста нейтрализации обязательно в диагностическом исследовании.

    Определение анти — НВя антител. Выявление анти — НВб антител является важным тестом, поскольку позволяет проверять эффективность вакцинации против гепатита В. По международному стандарту, выраженному в мили (международных единицах на миллилитр- шШ/т1), протективный уровень анти — НВз антител должен быть не ниже 10 тШ/ш1. Для количественного определения анти — НВэ антител применяют тест- систем на основе твердофазного ИФА, где в качестве конъюгата используется меченый высокоочищенный НВб -антиген [90]. Имеются тест- системы для выявления анти — НВэ антител, основанные на хемилюминисцентном методе [203].

    Определение HBcorAg и антител HBcorAg не часто проводят в практической диагностике вирусного гепатита В. Соответствующие ИФА тест-системы производятся и используются в основном в научно- исследовательских работах. Наибольшее значение имеет выявление антител класса IgM к НВс антигену. Наличие таких антител свидетельствует об имеющейся или прошедшей активной репликации вируса [90].

    Выявление HBeAg и антител к HBeAg представляется важным, поскольку это связано с существованием мутантных форм ВГВ. HBeAg и анти HbeAg рассматриваются как суррогатные серологические маркеры Рге- соге — мутантов ВГВ [69]. Для выявления используется «сэндвич» ИФА. Исследования на присутствие HbeAg проводят при наличии HBs антигена. В сыворотках крови, содержащих HBs антиген, в большинстве случаев удается выявить HBeAg и антитела к нему. В качестве подтверждающего теста используется тест нейтрализации HbeAg.

    Определение ДНК вируса гепаита В.

    Для выявления ДНК вируса гепатита В исходно использовались методы ДНК-зондов: гибридизация «Дот-блот»; жидкостная гибридизация с выделением образовавшегося комплекса на колонке (тест-система фирмы «ABBOTT») [230, 393]. Чувствительность этих методов — 6х10 6 частиц вируса/мл.

    Более совершенным является метод, получивший наименование гибридизация с использованием разветвленных зондов (branch assay). В процессе реакции происходит многократное присоединение друг к другу зондов, меченных ферментом, окисляющим субстрат и запускающим хемилюминисценцию. С присоединением каждого зонда происходит амплификация сигнала люменисценции. Чувствительность разветвленной гибридизации 7×10 5 частиц/мл [192]. Метод гибридного захвата (hybrid capture) для выявления ДНК ВГВ основан на связывании продукта гибридизации вирусной ДНК и РНК — зонда с моноклональными антителами. Использование флуоресцентной метки позволило повысить чувствительность метода до 4,7×10 3 — 5,6×10 7 частиц/мл [193, 298].

    На современном этапе ДНК вируса гепатита В выявляется, как правило, тест-системами, использующими принцип ПЦР. Промышленный диагностикум «Amplicor HBV monitor» фирмы «Roche diagnostics», где используются меченые праймеры, позволяет выявлять продукт амплификации при помощи ИФА. Он имеет чувствительность 4×10″ частиц/мл [244]. Использование технологии «PCR real time» (варианты: TaqMan, molecular becons, интеркалирующие агенты) позволяет более точно проводить оценку концентрации вируса и повысить чувтвительность до 50­100 частиц/мл. [64,68,69,73]. Для этих методов характерен также широкий линейный диапазон выявления вирусной ДНК (от 100 до 10 10 копий) и успешная детекция вирусов, относящихся к различным генотипам [239, 372]. Ряд тест-систем, основанных на технологии «PCR real time», сопряжены с различными типами автоматизированных систем выделения нуклеиновых кислот из сыворотки и плазмы крови [117, 195, 398].

    Благодаря ПЦР стало возможным проведение генотипирования вирусов гепатита В. В ряде работ ПЦР является первой стадией исследования и используется для получения информативного фрагмента генома вируса. Определение генотипа осуществляется рестрикционным анализом фрагмента или его секвенированием [137, 153]. Кроме того, разработаны мультиплексные ПЦР тест-системы, позволяющие одновременно определять наличие вируса и устанавливать его генотип [138, 242].

    Важной проблемой, связанной с терапией гепатита В, является обнаружение вариантов вируса, устойчивых к противовирусным препаратам. Для ее решения созданы ПЦР тесты для выявления различных вариантов мутаций, вызывающих устойчивость к ламивудину [365, 373, 388, 397]. С использованием метода ПЦР выявлены так же мутации, приводящие к изменению HBs антигена вируса гепатита В. Такие мутантные формы вируса не могут быть обнаружены тест-системами на HBs-антиген. Для их детекции могут быть применены методы, выявляющие вирусную ДНК [200, 292].

    Перспективны для выявления ДНК ВГВ и другие технологии, использующие принцип амплификации нуклеиновых кислот — транскрипционная амплификация (NASBA) и лигазная цепная реакция (ЛЦР). Так, в экспериментах транскрипционная амплификация более чем в 100 раз превосходила гибридизационные технологии и позволяла с высокой линейностью результатов выявлять ДНК ВГВ в интервале от 5×10 до 5×10 копий/мл. Метод может быть с успехом использован для определения вирусной нагрузки [216]. Тест система, основанная на приципе лигазной цепной реакции фирмы «ABBOTT», успешно применяется для детекции ДНК мутантных форм ВГВ [219].

    Таким образом, несмотря на наличие широкого круга информативных, высокочувствительных и специфичных иммунологических тестов методы, основанные на выявлении ДНК, нашли широкое применение в диагностике гепатита В. В основном, они используются для проверки эффективности терапии гепатита, определения генотипа вируса, контроля за образованием резистентных форм вируса и вирусов с измененным HBs антигеном. Дискутируется вопрос о целесообразности проверки донорской крови на ВГВ с использованием метода ПЦР. Поскольку отмечен случай заражения реципиента кровью, показавшей отрицательный результат в тестах на HBsAg и антитела к HBcorAg [103, 140]. Ретроспективный анализ методом «nest- ПЦР» показал наличие ДНК ВГВ. Повторная донация при проверке была положительна на HBsAg и antiHBcor. Очевидно, донор находился в пресероконверсионной, ранней стадии заболевания, когда уровень HBsAg ниже детектируемого [103].

    Диагностика вирусного гепатита Дельта.

    На практике достаточно редко проводят выявление свободного дельта антигена, поскольку в процессе развития инфекции он присутвует в крови ограниченное время. Как правило, он выявляется в составе дельта-вируса. Для этого проводят обработку исследуемого материала детергентами, после чего антиген выявляют в твердофазном варианте ИФА.

    Для обнаружения антител ВГБ классов IgG и IgM разработаны диагностические препараты для ИФА и РИА. Используемые схемы проведения реакции аналогичны схемам выявления антител к НВсог антигену классов G и М. Очищенный дельта антиген, используемый в диагностикумах, получают при помощи генно-инженерных технологий [90].

    Так же, как и при лабораторной диагностике гепатита В для постановки диагноза дельта-гепатита применяются методы обнаружения РНК ВГО, основным из которых является ОТ-ПЦР [134]. Разработаны варианты тест- систем «PCR real time» Они использованы разработчиками для определения вирусной нагрузки у больных и изучения динамики ответа на терапию. Показаны высокая чувствительность метода, способность его выявлять ВГО различных генотипов [233, 395]. Разработана мультиплексная ПНР тест система для одновременной детекции ДНК ВГВ и РНК BFD с определением продуктов амплификации гибридизацией на биочипе [95] и вариант ПЦР для генотипирования BTD [348].

    Диагностика вирусного гепатита С.

    Этиологическая диагностика ВГС стала доступной относительно недавно. В 1989 году был клонирован геном вируса и получены иммунореактивные олигопептиды, взаимодействующие с антителами крови больных гепатитом С. Это сделало возможным разработку диагностикумов к ВГС. Основным методом детекции стал метод ИФА. Многообразие антигенов, кодируемых геномом ВГС, позволило разработчикам апробировать широкий спектр полипептидов. Созданы тест-системы трех поколений. В первых диагностикумах использовались два полипептида: пептид 5-1-1 (кодируемый зоной NS4 генома) и пептид С100-3 (кодируемый зоной NS3 генома). Они позволяли выявить до 70-80% носителей ВГС. Антитела к ВГС системами первого поколения определялись через 30-90 дней после появления желтухи. В современных диагностикумах применяются четыре пептида: С22-3 (Core область генома); С200 (NS3 и NS4 области генома); СЗЗс (NS3 область генома); и пептид, кодируемый NS5 областью генома. Эффективность выявления носителей ВГС этими системами составляет 97%, антитела определяются через 7-10 дней после начала желтухи [181].

    Спектр выявляемых антител зависит от стадии гепатита С. Первыми обнаруживаются антитела к белкам, кодируемым Core и NS5 зонами генома. Антитела к белкам, кодируемым NS4-3onoft, в острую фазу заболевания отсутствуют [5].

    Имеются тест-системы для выявления анти-ВГС класса IgM. На стадии разработки апробировались различные пептиды. Для производства используется вариант, кодируемый Core регионом. Однако диагностическая роль теста на антитела IgM к ВГС оказалась не столь высока, как выявление IgM антител при ВГА и ВГВ, поскольку они выявляются достаточно часто как при остром, так и при хроническом ВГС [309] и тест не может служить маркером острого гепатита С.

    Одной из наиболее важных проблем при выявлении антител к ВГС является высокая частота ложноположительных результатов (10-20%) [326]. Они связаны с неспецифическим взаимодействием компонентов реакции, перекрестными реакциями с другими антигенами и рядом иных факторов. Чаще всего ложноположительные результаты наблюдаются при обследовании больных с онкологическими и аутоиммунными заболеваниями, лиц с иммунодефицитами и больных сифилисом [193, 338].

    Для подтверждения правильности положительного результата используют иммуноблотинг. Антигены, кодируемые разными участками генома ВГС, отдельными полосами наносят на нитроцеллюлозный фильтр. Связывание анти-ВГС с сорбированными антигенами выявляется антителами против IgG человека, меченными ферментом.

    Активно ведётся разработка тест систем для выявления антигенов ВГС. Созданы диагностикумы на основе твердофазного ИФА для выявления Сог- антигена ВГС. Тест показал высокую специфичность, чувствительность. Он перспективен для применения в службе переливания крови [107]. Установлены возможность специфичного выявления Cor-антигена в сыворотке и плазме крови; наличие циркуляции Cor-Ag у серонегативных по анти-ВГС лиц; высокая частота (90,3%) выявления Cor-Ag в сыворотках крови, содержащих антитела к ВГС и РНК ВГС; прямая корреляция между концентрацией РНК ВГС и частотой выявления Cor-Ag. Исследования на Cor-антиген позволяют сократить фазу «серонегативного окна». По данным ряда авторов Cor-Ag выявляется в 83% случаев на следующий день после первого обнаружения РНК ВГС и задолго (в среднем за 26 дней) до появления антител к ВГС [107, 301].

    Методы обнаружения РНК ВГС. Гибридизационные методы выявления РНК ВГС использовались главным образом в варианте «гибридизация in situ» для идентификации вируса непосредственно в клетках. Вирус был выявлен в гепатоцитах, мононуклеарах крови, клетках слюнных желез [109, 271]. Выявление в гибридизации негативных (репликативных) цепей РНК ВГС свидетельствовало об активной репликации вируса [132, 284]. Наиболее совершенные гибридизационные диагностикумы, используемые в настоящее время базируются на технологии разветвленных зондов (Branched DNA assay фирмы «Bayer») и выявляют 2500 копий РНК ВГС.

    Метод ПЦР широко применяется для выявления РНК ВГС как за рубежом, так и в России. Мишенью является участок 5′-нетранслируемой области генома как наиболее консервативный (92-98% гомологии нуклеотидов между вирусами разных генотипов и 98-99% гомологии в пределах генотипа). Использование праймеров, меченых ферментом, позволяет проводить детекцию ампликонов методом ИФА. Применение гибридизации с олигонуклеотидом для обнаружения ампликона увеличивает чувствительность и специфичность метода. Для повышения чувствительности и специфичности может быть использована «гнездовая ПЦР». Однако, при ее применении возрастает риск контаминации и получения ложно-положительных результатов [317]. Открытие и использование термостабильных полимераз с ревертазной активностью (ТТН-ДНК-полимераза) позволило создать тест-системы, в которых стадии обратной транскрипции и ПЦР проводятся последовательно в одной пробирке в одной реакционной смеси [347].

    Опыт применения ПЦР диагностикумов, созданных в научных лабораториях (так называемых домашних тестов — «in house tests») выявил значительную вариабельность их чувствительности и специфичности и отсутствие воспроизводимости результатов [146].

    Стандартизованные наборы («Roche Diagnostics Systems» США; «Интерлабсервис» Россия) выявляют 100-1000 копий/мл РНК ВГС. Наличие в них внутренних контрольных образцов позволяет избежать ложноотрицательных результатов, а использование систем антиконтаминационной модификации ампликонов снижает вероятность получения ложноположительных результатов.

    Одним из наиболее перспективных методов выявления РНК ВГС является метод ПЦР в реальном времени «PCR real time». Разработаны и активно применяются варианты, основанные на принципах TaqMan и molecular becons [187, 273, 277, 306, 320]. Для этих систем характерен широкий линейный диапазон выявления вируса от 10 до 10 9 копий/мл, возможность количественной оценки вирусной нагрузки, эффективное выявление вирусов, относящихся к разным генотипам, быстрота исследования, автоматизация процесса [268, 297]. Однако, имеются сообщения, что одна из наиболее популярных коммерческих систем «PCR real time» COBAS TaqMan («Roshe»,CILIA) с высокой чувствительностью выявляет варианты ВГС генотипа 1, но уступают по чувствительности и эффективности детекции вирусов генотипов 2, 3, 4 системе фирмы «Bayer», ФРГ, основанной на методе разветвленных зондов [171, 174].

    Одной из важных проблем, решаемой методом ПЦР, является генотипирование ВГС. Определение генотипа вируса имеет не только теоретическое значение, оно необходимо для назначения адекватной терапии. Поскольку показано, что для подавления развития ВГС, относящегося к генотипу 1Ь, требуются более высокие концентрации противовирусных препаратов и более продолжительный период их введения. Для определения генотипа ВГС к настоящему времени разработаны «PCR real time» мультиплексные системы. Они позволяют одновременно выявлять РНК ВГС и дифференцировать 4-6 генотипов [145, 240, 269]. Продолжается разработка методов генотипирования, базирующихся на традиционных вариантах ДНК-диагностики. Группой канадских исследователей предложена технология определения генотипа ВГС гибридизацией с олигонуклеотидами. Продемонстрирована высокая надежность метода, способность выявлять каждый из генотипов при смешанном инфицировании, невысокая стоимость исследования [105].

    Совершенствуются методы непосредственного обнаружения РНК ВГС в гепатоцитах печени. Отечественными учеными создан метод ПЦР in situ, позволяющий выявлять вирус, как в ядре, так и в цитоплазме гепатоцита [343]. Во Франции разработана высокочувствительная система детекции минус цепи РНК ВГС для определения активности репликации вируса в клетках печени. Она базируется на технологии «nested ПЦР». При этом вторая стадия амплификации проводится в режиме реального времени. Достигнута чувствительность 25 копий в пробе даже в присутствии 10 5 копий плюс цепи [133].

    Технологии, базирующиеся на выявлении РНК, играют существенную роль в диагностике и изучении вирусного гепатита С. Они являются основными методами выявления компонента вирусной частицы и используются для определения вирусной нагрузки при назначении терапии и контроле эффективности лечения. Выявление белковых антигенов вируса, хотя и является менее затратным, чем ОТ-ПЦР, пока не нашло широкого применения, поскольку уступает в чувствительности методам детекции вирусной РНК.

    Благодаря методу ПЦР были разработаны варианты генотипирования ВГС, доступные для практических лабораторий. Внедрение методов РНК диагностики позволили усовершенствовать методическую базу контроля

    контаминации донорской крови [140, 199, 327] и проводить более эффективную профилактику вертикального пути передачи ВГС [305]. 1.2.4 Диагностика НУГИ.

    НУГИ — группа инфекционных клинически полиморфных заболеваний мочеполовой системы человека, вызываемых вирусами, бактериями родов Chlamydia, Mycoplasma, Ureaplasma и их ассоциациями. Возбудители НУГИ, исключая хламидии, являются условно патогенными микроорганизмами [11, 15, 17, 18].

    НУГИ — широко распространенные заболеваниями, передающиеся преимущественно половым путем. Источником инфекции служит больной человек или бессимптомный носитель. Восприимчивость к возбудителям НУГИ высокая и приближается к 100%. Заболевания характеризуются склонностью к хронизации, персистенции, часто регистрируются бессимптомные формы. У лиц, перенесших НУГИ, стойкого иммунитета не вырабатывается [17, 18, 35].

    Клинические проявления многообразны. У женщин возбудители НУГИ вызывают уретриты, циститы, вагиниты, кольпиты, эндометриты, сальпингиты, оофориты; у мужчин — уретриты, циститы, простатиты, эпидидимиты, орхиты, проктиты [1 1, 35, 53]. Связи между видом возбудителя и формами патологии не прослеживается, что затрудняет клиническую диагностику НУГИ [11, 15, 17].

    Решающую роль при постановке диагноза имеют результаты лабораторных исследований. Однако лабораторная диагностика НУГИ осложняется тем, что вирусы герпеса, папилломавирусы, хламидии и микоплазмы являются труднокультивируемыми или некультивируемыми микроорганизмами, и, как правило, не выявляются бактериологическими и вирусологическими методами [20, 49].

    Данный раздел посвящен анализу методов выявления наиболее распространенных и клинически значимых возбудителей НУГИ: Cytomegalovirus, Herpes simplex I/II типов, Papillomavims, C.trachomatis,

    M.hominis, U.urealyticum. Рассмотрены как классические методы, базирующиеся на культивировании и микроскопии, так и современные методы, основанные на технологиях ПИФ, ИФА, ПЦР и ряде других.

    Методы выявления вирусов семейства Herpesviridae.

    Herpes simplex virus I и II типов относится к подсемейству Alphaherpesviridae. Его капсид 100 нм в диаметре, состоит из 162 капсомеров. Геном представлен линейной двухцепочечной ДНК размером 96 МДа. [31]. Род Cytomegalovirus относится к подсемейству Betaherpesviridae. Капсид ЦМВ 120-150 нм в диаметре, как и капсид ВПГ, состоит из 162 капсомеров. Геном также представлен линейной двухцепочечной ДНК, но размеры его больше — 145 МДа [17, 31].

    С ВПГ 1 ассоциируются следующие формы инфекций: лабиальный герпес, герпес кожи и слизистых, офтальмогерпес, генитальный герпес, герпетический энцефалит, пневмонии; с ВПГ II — генитальный герпес и неонатальный герпес; с ЦМВ — врожденное поражение ЦНС, ретинопатия, пневмопатия, гепатит [17, 26, 31, 35].

    Выявление ВПГ I/II и CMV, основанное на визуализации вирионов и морфологических изменений в пораженных тканях.

    Для экспресс-диагностики герпетической инфекции с 1972 г. используется электронная микроскопия [31]. Препарат для просмотра готовится из содержимого везикул или из жидкой фракции растертых в дистиллированной воде корочек с засохших везикул. В качестве контрастера используется фосфорно-вольфрамовая кислота. Возможно определение концентрации вирусных частиц по методу «loop drop». Дифференциация ВПГ I/II от других морфологически неотличимых вирусов данного семейства может быть выполнена при использовании иммунной электронной микроскопии [17, 35].

    Имеются методы обнаружения ВПГ I/II и ЦМВ, основанные на световой микроскопии [31, 35]. Для выявления ВПГ I/II готовят препараты из содержимого везикул, соскобов со дна эрозии, слизистой уретры, стенок влагалища, цервикального канала, крови, биопсийного материала. При исследовании на ЦМВ инфекцию готовят препараты из осадков слюны и мочи, содержимого цервикального канала, спермы, грудного молока, ликвора. Препараты готовят и окрашивают: по Папаниколау; Селлеру- Павловскому; Романовскому — Гимзе [31, 35]. Цитологические методы доступные, быстрые и дешевые. Однако, они неспецифичны, субъективны, результат оценки препарата зависит от опыта исследователя, уровня его профессионализма.

    Методы выявления ВПГ I/II и ЦМВ, основанные на культивировании вирусов.

    ВПГ I и ВПГ II культивируются на ряде культур эукариотических клеток: Vero, Hela, ФЭЧ, ткани роговицы, почки кролика, амниона человека, куриных диплоидных фибробластах. ВПГ I/II вызывают характерное изменение клеток — набухание, округление, иногда образование синцития. Цитопатический эффект обычно наблюдается через 3 дня, реже через 7 дней. По данным ряда исследователей выявление ВПГ I/II по цитопатическому эффекту достигает 40-50% по истечении суток, 80-82% — через 48 часов, более 90% — через 72 часа [35]. Успех исследования зависит не только от типа индикаторной культуры, но и от вида исследуемого материала и сроков его взятия у больного. При анализе материала, забранного на стадии везикул, вирус удавалось культивировать в 94% случаев, на стадии пустул — в 87%, на стадии язв — в 70%, а на стадии образования корочек — только в 27 % случаев [17,35].

    ВПГ I/II культивируются на куриных эмбрионах. Материал вводят в хорион-аллантоисную оболочку. При наличии вируса через 48-72 часа инкубации при 37° С на оболочке образуются очаги поражения в виде бляшек. ВПГ I образует мелкие бляшки — 0,5мм, ВПГ И— более крупные. Кроме этого, ВПГ II вызывает и более тяжелое поражение хорион- аллантоисной мембраны [35].

    Для выделения и выращивания ЦМВ используют первично- трипсинизированные культуры клеток фибробластов эмбриона человека, культуры диплоидных клеток человека, Нер-2 [35].

    Материалом для детекции ЦМВ служат моча, смывы из зева, соскобы и выделения из урогенитального тракта, слюна, мокрота, кровь, спинномозговая жидкость. Цитопатогенное действие ЦМВ оценивают на зараженной культуре ткани (монослой) в течение 7-30 дней [31,35].

    В настоящее время многие исследователи рассматривают культуральный метод как «золотой стандарт» для выявления ВГТГ 1/Н и ЦМВ. Он позволяет обнаружить инфекционный агент, определить его концентрацию. Но метод сложен, продолжителен, имеет высокую стоимость и не позволяет анализировать много образцов, что делает его малопригодным для практических лабораторий.

    Методы выявления ВПГ 1/11 и ЦМВ, основанные на детекции вирусных антигенов.

    В настоящее время существует несколько вариантов выявления вирусов ВПГ 1/11 и ЦМВ, основанных на иммунологической детекции вирусных антигенов. Широкое практическое применение нашел метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ). Препараты для анализа готовят из тех же субстратов, которые используются для диагностики ВПГ 1/Н и ЦМВ инфекций другими методами. Делают мазки-соскобы, мазки-отпечатки, которые обрабатываются флюоресцирующей специфической сывороткой (поликлональной или моноклональной) с контрастерами. Для увеличения специфичности используют различные разведения сыворотки. На один и тот же препарат можно наносить 2-3 антителсодержащих диагностикума или их разведения. Положительным считается мазок, который содержит не менее 3 морфологически неизмененных клеток с интенсивной флюоресценцией, имеющей типичную локализацию. Для ВПГ 1/Н характерна локализация свечения в ядре и цитоплазме одновременно, для ЦМВ — в ядрышке и ядре [17, 31].При использовании метода непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) мазки-соскобы и мазки-отпечатки сначала обрабатываются раствором антител к вирусу, а затем флюоресцинмеченным раствором антивидовых антител. Этим достигается усиление сигнала флюоресценции. Результат считается положительным, если клетки с флюоресцирующими включениями составляют не менее 5% [17, 31].

    Читайте также:  Возбудитель для вирусный гепатит а

    При исследовании методами ПИФ и НИФ непосредственно клинического материала велик процент ошибок. Это связано с тем, что инфицированных клеток с включениями, как правило, немного и для правильной оценки препарата необходим большой опыт работы. Для устранения этого недостатка рекомендуется на первом этапе провести подращивание исследуемой пробы на культуре клеток. Однако стадия обогащения усложняет метод и снижает его доступность для практиков.

    Для выявления вирусных белков-антигенов ВПГ I/II и ЦМВ в клинических образцах разработаны тест-системы, основанные на принципе твердофазного ИФА. Они при 90% специфичности имеют чувствительность — 10 3 — 10 4 бляшкообразующих частиц, что существенно ниже соответствующих показателей ПТДР. Данные системы не нашли широкого применения в практических исследованиях. Исключением являются диагностикумы для выявления фосфопротеина ЦМВ с массой 65000 МД (рр65) [172, 228, 289].

    Выявление антител к ВПГ //// и ЦМВ.

    Наиболее распространенной технологией выявления антител к ВПГ I/II и ЦМВ является твердофазный ИФА — конкурентный вариант; трехслойный «сэндвич»; четырехслойный «capture» вариант [17, 35]. Созданы тест- системы для выявления антител классов IgG, IgM, суммарных антител.

    Наличие достаточно высоких титров IgG и IgM или их рост при анализе парных сывороток, как правило, свидетельствует об острой фазе инфекции или об обострении латентной инфекции. Выявление только антител IgM указывает на первичную острую инфекцию, обнаружение антител 1^0 без ^М — на реконвалесценцию или выздоровление после инфекции [17, 21].

    Установлено, что значительная часть человеческой популяции имеет антитела к ВПГ1/П и ЦМВ, следовательно, выявление антител не может быть единственным критерием при постановке диагноза [35]. Титр антител часто не соответствует клинической картине заболевания. Высокие показатели регистрируются и у носителей, и у больных в период обострения. По выявлению антител классов и ^М затруднительно идентифицировать первичную и вторичную инфекции, острую и хроническую стадии заболевания. Возможны ложноотрицательные результаты при определении ^М антител у новорожденных и больных СПИД. При реактивации инфекции антитела и 1§М могут не выявляться [10, 26, 35].

    Несоответствие между параметрами иммунного ответа и клиническими проявлениями связана с особенностями инфекций, ассоциированных с ВПГ Т/Н и ЦМВ, часто протекающих на фоне иммунодефицита. В связи с этим информативность выявления антител к герпесвирусам снижается. Это исследование является вспомогательным в общем комплексе методов диагностики ВПГ 1/П и ЦМВ инфекций.

    Молекулярно-биологические методы детекции ВПГ 1/П и ЦМВ.

    В настоящее время одними из наиболее перспективных методов выявления ВПГ 1/П и ЦМВ являются технологии, базирующиеся на выявлении уникальных фрагментов их нуклеиновых кислот. В 80-е годы 20 века использовался метод ДНК-зондов [17, 49]. Он не нашел широкого применения в практике из-за сложности и недостаточной чувствительности (особенно при использовании нерадиоактивных меток). С 90-х годов началось активное внедрение в диагностику ВПГ 1/П и ЦМВ инфекции метода ПЦР [152].

    Первоначально были созданы системы, базирующиеся на классическом варианте ПЦР, одни — для выявления ЦМВ, и другие — для одновременной детекции ВПГ I и ВПГ II без установления типа вируса. К настоящему времени имеются мультиплексные ПЦР системы, позволяющие в одной реакции выявить ВПГ I и ВПГ II и определить тип вируса [318]. Разработаны диагностикумы для одновременной индикации значимых вирусов группы герпеса в различных сочетаниях: ВПГ VIII, ЦМВ, вирус Эпштейн-Барр [165, 282]; ВПГ I, ВПГ II, ЦМВ, Эпштейн-Барр [318, 319]; ВПГ I, ВПГ II, ВПГ III, ЦМВ, вирус Эпштейн-Барр [263].

    Чувствительность ПЦР при выявлении вирусов группы герпеса составляет 100 вирионов, что значительно превосходит чувствительность других методов прямого выявления вирусов. При удачном выборе праймеров специфичность приближается к 100%. Продолжительность исследования в зависимости от модификации метода составляет 3-4 часа при применении ПЦР — «real time» и 6-8 часов — традиционной ПЦР. При использовании варианта ПЦР — «real time», возможно определение концентрации вирусов [179, 249].

    Сравнение различных современных коммерческих систем ПЦР детекции (ЦМВ, ВПГ I и ВПГ И: «Real time» ПЦР (Abbot), Cobas Amplicor (Roshe), классических вариантов ПЦР с детекцией продукта амплификации ИФА в планшетном формате показало, что аналитические показатели систем близки, порог чувствительности методов в серии разведений составляет 20­45 копий, корреляция результатов 0,94 [307, 389]. Проведены параллельные исследования по выявлению ЦМВ методом «Real Нте»ПЦР и ИФА на рр65- антиген. В ряде работ отмечается высокая корреляция результатов [102, 261, 289], в других — значительное разночтение при высокой эффективности выявления возбудителя каждым из методов [172, 228]. Предпочтение отдается ПЦР из-за более высокой эффективности выявления вируса при низких концентрациях и возможности более ранней (на 14 дней) диагностики CMV-инфекции [102, 289], в то же время показано, что тест на рр65-антиген эффективнее для выявления реактивации вируса [228].

    В настоящее время ПЦР — ведущий метод выявления ВПГ I/II и ЦМВ в любых типах клинического материала. Метод активно используется при обследовании доноров и реципиентов при пересадке органов, костного мозга, стволовых клеток [114, 169, 228, 236, 303, 304, 307, 322], для выявления внутриутробного инфицирования и изучения влияния герпесвирусных инфекций на исход беременности [285, 287, 344, 349, 383], определении повреждений ДНК ЦМВ при проведении противовирусной терапии [211].

    Бактерии вида С. trachomatis.

    Хламидии — мелкие, грамотрицательные бактерии, облигатные внутриклеточные паразиты. У них уникальный цикл развития, в ходе которого они представлены двумя формами — элементарными (ЭТ) и ретикулярными (РТ) тельцами. ЭТ — высокоинфекционные, без метаболической активности овальные клетки размером 250-500 нм. Проникая в цитоплазму клетки хозяина путем пиноцитоза (фагоцитоза), хламидии используют для роста и размножения клеточную АТФ. За 6-8 часов ЭТ превращаются в РТ — метаболически активные размножающиеся структуры. После завершения деления РТ преобразуются в ЭТ и при разрушении клетки хозяина выходят в окружающую среду. Цикл размножения хламидий длится 48-72 часа [15, 18, 25].

    С.trachomatis является типичным возбудителем НУГИ, вызывает воспалительные процессы урогенитального тракта у женщин (вульвит, уретрит, кольпит, экзо и эндоцервицит, эндометрит, эндомиометрит, сальпингит, оофорит, цистит, пиелонефрит) и мужчин (уретрит, простатит, везикулит, орхоэпидидимит, фуникулит) [35].

    При воспалительных процессах, обусловленных C.trachomatis, у женщин может наблюдаться нарушение физиологического течения беременности, эктопическая беременность, привычная невынашиваемость беременности, бесплодие; у мужчин — нарушение сперматогенеза различной степени выраженности (олигоспермия, астеноспермия, тератоспермия) [35, 139, 353].

    Цитологический ,метод выявления C.trachomatis. В связи с тем, что размер морфологических структур возбудителя ЭТ колеблется от 200 до 500 нм, а PT достигают 600—1000 нм, они видны в световой микроскоп при увеличении в 900—1350 раз [18, 35]. Мазки-соскобы слизистой урогенитального тракта окрашивают раствором Люголя и по Папаниколау. При этом ЭТ хламидий приобретат розовый, а РТ— синий цвет. Они обнаруживаются в виде скоплений вокруг ядра клетки в форме «шапочки жандарма» или диффузно [18, 42]. Достоверность выявления C.trachomatis при микроскопировании зависит от опыта исследователя. Поэтому, процент обнаружения хламидий по данным разных авторов варьирует от 12% до 40% [18, 25, 35, 38, 64]. Результат зависит также от соблюдения правил отбора материала, кратности исследования, клинической формы и давности заболевания. Цитологический метод широко не применяется из-за субъективности и ненадежности.

    Выявление C.trachomatis культивированием. Хламидии, как внутриклеточные паразиты, способны размножаться на клеточных культурах. Обработка клинического материала перед заражением культуры клеток для выявления хламидий, аналогична той, что проводится при детекции вирусов герпеса. В клеточных культурах (ФЭЧ, Heia, СОЦ, диплоидные, клетки L) C.trachomatis вызывают специфические морфологические изменения с образованием большого количества включений, в других (КФ, КЭМ, KB, RES, Нер-2) цитопатический эффект незначителен или выражен в единичных клетках. Установлено также, что различные штаммы хламидий по разному поражают фибробластоподобные или эпителиальные клетки тканевых культур [35].

    C.trachomatis инфицируют желточные мешки куриных эмбрионов. Культивирование продолжается 12 суток. Размножение хламидий сопровождается гиперемией кожных покровов и кожными геморрагиями эмбрионов, истончением оболочек желточных мешков и разжижением их содержимого. О наличии C.trachomatis судят также по регулярной специфической гибели эмбрионов. [35, 42]. Культуральные методы выявления C.trachomatis сложны, продолжительны, затратны, что делает их малопригодными для практической диагностики.

    Методы выявления C.trachomatis, за счет детекции антигенов. В практике для выявления хламидийного антигена чаще применяют методы ПИФ и НИФ. Подготовка образцов к исследованию и постановка эксперимента сходны с таковыми при ПИФ и НИФ-детекции антигенов ВПГ Т/И и ЦМВ. Для выявления C.trachomatis используют моноклональные антитела к белковому видоспецифичному антигену возбудителя, в качестве флюорофора — ФИТЦ. При микроскопировании определяют хламидийные включения в виде образований с зеленой или желто-зеленой флюоресценцией на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток.

    В настоящее время эти простые, быстрые и недорогие методы составляют основу скрининговой диагностики хламидиозов в России. Однако, при работе непосредственно с клиническим материалом, они имеют существенные недостатки — низкая чувствительность и субъективность оценки. При невысоких концентрациях инфекционного агента велика вероятность как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов [18, 35].

    Высокой специфичностью и информативностью (возможность выделения чистой культуры и определение антибиотикорезистентности) обладает комбинированый метод, в котором ПИФ проводится после непродолжительного культивирования C.trachomatis на культуре клеток. Многие исследователи считает этот вариант «золотым стандартом» диагностики хламидиоа [18, 35, 38]. Однако усложненный вариант ПИФ малодоступен для практических лабораторий, большинство из которых не располагает оборудованием для работы с клеточными культурами.

    Разработаны варианты ИФА для выявления антигенов C.trachomatis [35]. В отличие от ПИФ и НИФ метод ИФА определяет не только бактерии, но и их растворимые антигены, накапливающиеся в жидкостях организма — моче, отделяемом слизистых. К преимуществам ИФА следует отнести быстроту (4-6 часов), высокую пропускную способность и автоматизацию. Метод не нашел широкого применения из-за недостаточной чувствительности при исследовании клинического материала.

    Выявление антител, как косвенный метод диагностики хламидиозов. Для выявления антител классов М, О, А к С.Ь’асЬотайв в крови и секретах инфицированного организма используют метод ИФА. При первичном заражении появляются антитела 1§М, затем — и последними —

    Угасание иммунного ответа выражено снижением концентрации антител каждого из классов в той же последовательности. При повторном инфицирование быстро нарастают титры антител О и А, антитела класса М практически полностью отсутствуют [18]. При остром хламидиозе обнаруживаются антитела ^М и (или) быстро изменяющиеся количества (нарастающие или снижающиеся) ^О и ^А. Хронический процесс характеризуется стабильными титрами продолжительное время антител классов в и А. Редко (в 3% случаев) при хроническом хламидиозе до появления антител несколько недель регистрируются в низких титрах. Наличие антител класса А в невысоких титрах в течение длительного времени при отсутствии симптомов заболевания свидетельствует о микробной персистенции. Низкие, стабильные во времени титры ^О указывают на давно перенесенную хламидийную инфекцию. Только повторные качественные и количественные исследования на каждый класс антител, проведенные с интервалом в 2-3 недели, дают возможность сделать заключение о характере и стадии заболевания [18].

    Непрямые иммунологические методы имеют существенное значение в диагностике хламидиозов. Они позволяют избежать ложноотрицательных результатов, которые могут быть получены прямыми методами при низкой концентрации возбудителя, и в ряде случаев помогают определить стадию и характер течения заболевания. Выявление антител является основным методом диагностики хламидиоза яичников и маточных труб, когда отбор материала для прямого выявления инфекционного агента невозможен или требует хирургического вмешательства [18, 35].

    Молекулярно-биологческие методы детекции С. trachomatis. В настоящее время одним из наиболее распространенных методов выявления C.trachomatis является ПЦР. При разработке тест-систем на хламидии в качестве мишени были использованы последовательности хромосомных генов (рибосомальных РНК, главного белка внутренней мембраны) и последовательности мультикопийной видоспецифичной криптической плазмиды [152]. Первые варианты тест-систем потенциально способны взаимодействовать со всеми штаммами C.trachomatis. Вторые варианты имеют чувствительность в 10 раз выше, чем у первых, поскольку в клетке содержится 10 копий плазмиды, однако имеется вероятность ложноотрицательных результатов из-за потери плазмиды. Бесплазмидные штаммы C.trachomatis пока не выявлены, но существование таких культур вероятно.

    Для выявления C.trachomatis используются тест системы, базирующиеся на разных типах ПЦР — классической и ПЦР в реальном времени. При сравнительных исследованиях различных вариантов современных тест-систем на хламидии, как правило, показатели их чувствительности и специфичности достаточно близки [208, 210, 376, 377, 380]. Очевидно преимущество диагностикумов, основанных на технологии «Real time» ПЦР по продолжительности исследования. Для анализа 25 проб системой COBAS AMPLICOR («Roche») с выявлением продукта амплификации в планшетном формате потребовалось 232 минуты, при использовании «Real time» ПЦР тест — системы результат был получен через 134 минуты [210]. Достигнуты практически абсолютные показатели аналитической чувствительности — с 95% вероятностью выявляется 1 копия криптической плазмиды и 3 копии гена мембранного белка [209]. Реальная чувствительность составила 10 — 25 копий мишени на пробу [209, 258, 386].

    Сравнение ПЦР-детекции C.trachomatis, культурального метода и ИФА выявило преимущество ГТ1ДР в чувствительности и специфичности [113, 159]. При этом культуральный метод превосходил ИФА [159]. Близкие к ПЦР показатели чувствительности и специфичности имел метод обнаружения С.trachomatis флюоресцентно-меченными РНК и ДНК зондами. Совпадение результатов — 89-100% [159, 217]. Не смотря на то, что метод зондов уступал по чувствительности и специфичности ПЦР, он оценен как перспективный для практики [159, 217].

    Предложены методы выявления и серотипирования С.trachomatis, сочетающие ПЦР и гибридизацию. Они используются в эпидемиологических исследованиях [381, 396]. На первом этапе амплифицируется фрагмент гена ompl, затем он гибридизуется с зондами, специфичными 15 серотипам С.trachomatis. Результаты, полученные этим методом, совпали с результатами серотипирования секвенированием [396].

    Создана мультиплексная «Real time» ПЦР система для детекции C.trachomatis и дифференцировки сероварианта L2, вызывающего венерическую лимфогранулему [188]. Разработаны мультиплексные тест- системы, выявляющие в одной реакции хламидии и другие инфекционные агенты, вызывающие УГИ: C.trachomatis, N.gonorrhoea [123, 258, 376]; C.trachomatis, N.gonorrhoea, U.urealyticum [332]; C.trachomatis, N.gonorrhoea, T. vaginalis [355]; C.trachomatis, ВПГ I/II, T.pallidum [241]. Имеется мультиплексная ПЦР система для детекции патогенных хламидий и хламидофилл: C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae, C.peccorum [386]. Она эффективно выявляет как одиночные возбудители, так и их ассоциации. Как правило, конкурентного ингибирования в этих мультиплексных тест- системах не было. Исключение составили системы D.M. Whiley, Т.Р. Sloots [376], для которых отмечено ингибирование при анализе проб, содержащих С trachomatis и N.gonorrhoeae,

    Для выявления C.trachomatis используют лигазную цепную реакцию, и транскрипционную амплификации рРНК [385]. Не смотря на ряд преимуществ перед ПЦР, эти методы не нашли широкого применения.

    Высокая чувствительность и специфичность, автоматизация ряда стадий, простота и универсальность делает ПЦР перспективным методом диагностики хламидиозов. Он рекомендован и используется для установления инфицирования [108, 210, 222]. Ряд исследователей считают ПЦР «золотым стандартом» выявления C.trachomatis [18].

    Диагностика Mollicutes— М. hominis, U. urealyticum.

    Mollicutes мельчайшие (0,5 микрона в диаметре), наиболее просто организованные прокариоты, имеют минимальный набор органелл (мембрану, рибосомы и самую малую бактериальную хромосому, представленную двухцепочечной кольцевой ДНК). В отличие от вирусов они самостоятельно воспроизводятся, а в отличие от большинства бактерий лишены клеточной стенки и не синтезируют ее компоненты. Моликуты — «мембранные паразиты», поскольку они всегда связаны с мембранами, в том числе ядерными [11, 20, 35].

    Единого мнения о роли микоплазм и уреаплазм в патологии человека нет. Однако большинство исследователей считают их условно-патогенными микроорганизмами, способными вызывать сложные многофакторные патологические процессы [361]. M.hominis и U.urealyticum часто обнаруживаются у людей с патологией репродукции, с воспалительными процессами урогенитального тракта, и ассоциированы с ними [175, 182, 184, 252, 392]. При инфицировании этими микроорганизмами лабораторных животных и добровольцев установлена возможность развития патологических процессов [276]. Показано, что присутствие M.hominis и U.urealyticum в организме человека изменяет уровни синтеза интерлейкинов [196], способствует развитию аутоиммунных процессов и снижению иммунного статуса [2, 155, 215]. В то же время они часто выявляются у людей без признаков патологии [35, 53, 92].

    Кулътуральный метод выявления M.hominis и U.urealyticum. В отличие от C.trachomatis, M.hominis и U.urealyticum способны расти на питательных средах, содержащих 10-20% сыворотки крови животных [11, 35]. Разработаны коммерческие дифференциально-диагностические среды, позволяющие идентифицировать М.ЬогштБ и и.игеа1уйсит по биохимическим свойствам. В их состав наряду с питательной основой и антибитиками входят субстрат, специфичный для ферментов этого микроорганизма и индикатор, реагирующий на изменение рН. При росте искомого микроорганизма изменяется цвет среды [160]. Этот вариант культивирования позволяет определять количество возбудителя, антибиотикорезистентность, не требуется сложное лабораторное оборудование. Этиологически значимый титр уреаплазм и микоплазм — 10 4 КОЕ/мл и более [11, 35]. Для определения антибиотикоустойчивости образцы с М.Ьошшз и и.игса1у11сит, вносят в питательные среды, с антибиотиками в разных концентрациях. О подавлении роста бактерий судят по отсутствию изменения цвета среды.

    Выявление М.1югшт8 и и.игеа1у1;1сит посевом на дифференциально- диагностические среды — один из наиболее распространенных в практике методов. Он прост, информативен, малозатратен. Для получения достоверного результата методом культивирования необходимо соблюдение правил отбора, хранения и транспортировки материала. Образцы помещают в транспортную среду и при температуре 4-6° С быстро доставляют в лабораторию. Оптимальные результаты получаются при проведении посева у постели.

    Методы выявления ММотгтБ и и.игесйуйсит за счет детекции антигенов. При работе с клиническим материалом иммунологические методы выявления бактериальных антигенов .М.ЬоггнтБ и и.игеа1у1лсит (ПИФ, НИФ, ИФА) применяются редко из-за низкой чувствительности [11, 35]. Кроме этого, идентификацию затрудняет мимикрия антигенов микоплазм и уреаплазм под клеточные антигены макроорганизма. ПИФ, НИФ, ИФА применяются при идентификации микроорганизмов после культивирования на питательных средах и для определения серотипа и.игеа1уйсит. По результатам серотипирования уреаплазмы были разделены на 2 биотипа: Parvum (серотипы 1,2,6,14) и Т-960 (серотипы 2,4,5,7,8,9,10,11,12,13). Недавно биоварам присвоен статус видов. Серотипы Parvo получили видовое наименование U.parvum, а название U.urealyticum оставлено за серотипами Т-960.

    Косвенные методы диагностики микоплазмозов и уреаплазмозов за счет выявления антител M.hominis и U.urealyticum. Для выявления антител классов М, G, А к микоплазмам и уреаплазмам используется метод ИФА [11, 69]. Однако значение этих исследований не столь велико, как в диагностике хламидиозов. Серологические тесты при диагностике инфекций, ассоциированных с M.hominis и U.urealyticum малоэффективны. Отсутствие или низкий титр антител к ним связаны с особенностями их взаимодействия с организмом хозяина. Иммунная система человека часто не определяет эти бактерии как чужеродный агент из-за их сходства с собственными мембранными антигенами. [35].

    Молекулярно-биологческие методы детекции M.hominis и U.urealyticum. ПЦР в настоящее время и наряду с микробиологическим методом наиболее часто применяется в клинической практике для выявления уреаплаз и микоплазм. Мишенью для амплификации являются, как правило, фрагменты генов рибосомальных РНК. Для детекции U.urealyticum используется ген уреазы [252].

    Первоначально были разработаны ПЦР тест-системы выявляющие уреаплазму без дифференциации на виды [152]. Современные системы определяют и одновременно дифференцируют виды U.parvum и U.urealyticum [127, 162, 252, 390]. Большинство этих мультиплексных систем основано на «real time» ПЦР. Созданы системы для определения серовариантов бактерий рода Ureaplasma [128].

    Достаточно часто ПЦР тесты на уреаплазму и микоплазму входят в мультиплексные системы: совместно с C.trachomatis и N.gonorrhoea [129, 330], M.genitalium [250]. Поскольку эти микроорганизмы часто встречаются в ассоциациях, для анализа продуктов амплификации используют гибридизацию с зондами, метод чипов [129, 250, 330].

    В сравнительных экспериментах показано, что метод ПЦР выявляет микоплазмы и уреаплазмы в клиническом материале на 27-47% эффективнее, чем микробиологический метод. [127, 150, 312, 390]. Это обусловлено высокой чувствительностью ПЦР, и его способностью выявлять некультивируемые формы микроорганизмов и погибшие клетки.

    В то же время, метод ПЦР дороже и уступает микробиологическому методу в информативности, поскольку не позволяет определять антибиотикорезистентность. Не- смотря на это, метод ПЦР часто используется в практической диагностике и проведении скрининговых исследований контингентов риска при эпидемиологических исследованиях и оценивается рядом авторов как наиболее надежный вариант детекции M.hominis и U.urealyticum [127, 183, 190, 250, 312, 316].

    Диагностика папшломаеирусной инфекции.

    Вирусы папилломы человека (ВПЧ) — мелкие, ДНК-содержащие вирусы, способные вызывать пролиферацию эпителия кожи и слизистых оболочек, относятся к семейству паповавирусов. Вирион икосаэдрический размером 30-50 нм. Геном представлен кольцевой двухцепочечной ДНК весом 4-7 mD, с содержанием ГЦ оснований 41 — 49% [35, 173, 202].

    ВПЧ не размножаются на культурах клеток. ВПЧ разделены на 100 генотипов [173, 202], 30 из них вызывают поражение аногенитальной области. Особый интерес среди ВПЧ представляют генотипы высокого канцерогенного риска. Они обнаруживаются в 93% случаев инвазивного рака аногениталий, причем в 50% выявляется ВПЧ 16 генотипа [35, 202, 342]. Довольно часто папилломавирусы встречаются в ассоциациях с G.trachomatis и ВПЧ I/II, что может увеличивать риск карциномы цервикального канала [163]. ВПЧ способны вызывать онкологические заболевания других органов, в частности карциному ротовой полости [246]. В таблице 1 представле

    Типы ВПЧ, обнаруженные при различных поражениях кожи и слизистых оболочек

    перечень поражения кожи и слизистых оболочек, ассоциированных с определенными генотипами ВПЧ.

    источник