Меню Рубрики

Метод определение пцр вирусных гепатитов

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 10 6 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 10 5 МЕ/мл = 2.2* 10 6 копий/мл.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*10 4 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*10 7 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста.

источник

Исследования ДНК и ПЦР вируса гепатита В являются самыми чувствительными анализами, которые позволяют обнаружить в тканях печени молекулярные следы ДНК, идентифицирующие наличие вируса. Суть метода заключается в многократном копировании фрагмента ДНК, принадлежащего возбудителю болезни.

ПЦР гепатита типа В — это полимеразная цепная реакция внешнего химического реагента с исследуемым биологическим материалом, направленная на выявление молекул вирусного ДНК в крови и их количественных показателей на единицу объёма. Анализ назначается в следующих случаях:

  • при возникновении признаков гепатита В у пациента;
  • во время диагностических мероприятий при микст-гепатитах;
  • для уточнения эффективности терапии.

Для ПЦР анализа делается забор венозной крови. Перед исследованием необходимо воздержаться от приёма пищи примерно 8 часов.

Нормальным результатом при выявлении ДНК у вируса считается показатель «не обнаружен». Он означает, что вирус в крови отсутствует или его содержание незначительное. Окончательный диагноз может выставить только специалист на основании комплексного биохимического и иммунологического анализа кровяной плазмы на гепатит типа B. Врач назначает курс терапии. Самолечение влечёт за собой слишком большой риск.

Непривычная утомляемость

  • нарастающая усталость при небольших нагрузках;
  • непривычная утомляемость;
  • тяжесть в области правого подреберья;
  • пониженный аппетит, тошнота;
  • желтушность кожных покровов, склер глаз;
  • светлый кал;
  • тёмная моча;
  • болезненные ощущения в суставах.

Инкубационный период, после которого начинают проявляться эти признаки, составляет от месяца до полугода. Это срок накопления клеток вируса в печёночном кровотоке. Когда их концентрация доходит до критической массы, вирус прорывает мембраны гепатоцитов и продолжает размножаться уже внутри клеток. В результате клетки печени гибнут, развивается цирроз, который, при отсутствии должных терапевтических мер, приводит пациента к летальному исходу. Своевременный анализ крови на ПЦР и ДНК гепатита B позволяет избежать негативных.

Показаниями к ПЦР являются:

  • положительный тест на ДНК, подтверждающий диагноз — гепатит B;
  • острый и хронический гепатит;
  • микст-гепатиты;
  • количественное определение вируса в кровяной сыворотке;
  • разработка тактики эффективной терапии.

Подготовка к диагностике с помощью ПЦР определяется видом биоматериала. Так кровь и мочу сдают только в первой половине дня, натощак. Также берутся мазки и соскобы из урогенитальной области. Ограничением для женщин является только менструация. Для обоих полов ограничиваются половые контакты накануне исследований.

Результаты ПЦР можно будет считать достоверными только при правильной подготовке пациента к процедуре. Это исследование подразумевает соблюдение следующих условий:

  • полный душевный комфорт, отсутствие всяких волнений. Для обеспечения этого анализ можно сдать даже дома. Нужно только вызвать к себе врача с соответствующим оборудованием;
  • воздержание от пищи, алкоголя, курения, физической активности минимум за 8-12 часов перед анализом, иначе данные исследования будут искажены;
  • 15-20 минут полной релаксации перед забором крови;
  • прекращение приёма лекарственных препаратов (если это не представляется возможным, лаборатория должна быть предупреждена);
  • детям в возрасте до пяти лет в течение получаса перед анализом необходимо давать пить кипячёную воду маленькими порциями.

В основе анализа ПЦР лежат принципы, которыми пользуется молекулярная биология. Они заключаются в использовании специальных ферментов, расщепляющих и копирующих участки ДНК и РНК возбудителя инфекции, который обнаружен в крови. После проведения этой операции, полученные образцы идентифицируются по базе данных, имеющихся в лаборатории. Одновременно выявляется вид инфекции и концентрация в крови возбудителя.

Для проведения исследования используется амплификатор — термостат, способный нагревать и охлаждать пробирки с биоматериалом. Это необходимо для активации репликационных процессов. От точности температурных параметров зависит достоверность анализа.

Позитивным результатом для пациента является лабораторное заключение «не обнаружено». Оно означает отсутствие в крови ДНК гепатита B. В цифровом выражении это примерно 120 МЕ/мл, или 200 копий на такую же единицу объёма крови. Данное значение — норма. Требованием к биологическому материалу является то, что он не должен быть загрязнён.

Расшифровка других итогов анализа позволяет поставить следующие диагнозы:

  • Концентрация в крови ДНК гепатита B более 200 копий, но ниже критического уровня. Выраженная патология отсутствует.
  • Виремия в умеренной форме, доходящей до 500 копий на мл. Выбор лечения зависит от показателей биопсии печени и степени ухудшения её функций.
  • Повышенная концентрация вируса (более 500 копий/мл). Воспалительный процесс в активной фазе и требует интенсивной противовирусной терапии.
  • Предельная вирусная нагрузка (свыше 800 копий на мл.). Терапевтические мероприятия разрабатываются исходя из состояния больного и целиком направлены на его максимально возможное улучшение.

Для пациента хорошим результатом является заключение «не обнаружено»

Определение количественных показателей содержания ДНК гепатита B при проведении ПЦР является основой для выбора лечебного курса. Через три или шесть месяцев анализы проводятся снова, чтобы проверить эффективность противовирусной терапии.

В методике ПЦР используется два подхода к определению ДНК, принадлежащего вирусу: качественный и количественный.

Качественный подход подтверждает или отрицает наличие гепатита B. ПЦР назначается по просьбе пациента, подозревающего, что он заражён HBV-инфекцией или в том случае, когда ранняя диагностика иным способом не даёт однозначных результатов.

Если вирус гепатита B удаётся выявить не позже, чем через две недели после его проникновения в организм, положительный прогноз при лечении наиболее вероятен. В дальнейшем болезнь начнёт прогрессировать. Приблизительно через два месяца она перейдёт в хроническую фазу. Полное излечение в таком случае станет невозможным.

Количественный подход в ПЦР применяется только при обнаружении вируса. Он оценивает:

  • конкретную вирусную нагрузку на печень;
  • интенсивность прогрессирования заболевания;
  • устойчивость к препаратам противовирусной группы;
  • результативность лечения.

Эти показатели имеют прямое практическое значение. Особенно количественный показатель ДНК. От концентрации вируса в кровотоке печени зависит прогноз в острой фазе гепатита B. Так низкая концентрация вирусных клеток почти полностью исключает переход острого гепатита в хронический. Такие больные не представляют опасности для окружающих. Высокая вирусная нагрузка способствует хронизации патологического процесса и возможности заражения гепатитом людей, контактирующих с больным.

Существует также связь между концентрацией в крови генов вируса и цирротическим перерождением печени, и возникновением рака её паренхимы.

Анализы ПЦР помогают врачу обнаружить носители вируса

Результативность терапии противовирусными препаратами определяется по степени снижения концентрации ДНК гепатита B в печёночном кровотоке. Достаточным результатом считается уменьшение вирусной нагрузки в 1-2 раза при интенсивном лечении в течение от трёх месяцев до полугода. Более низкие показатели требуют изменения лечебного курса.

Прогноз развития патологии и назначения соответствующей терапии исходит из:

  • количественного объёма ДНК печёночного вируса в кровяной сыворотке;
  • сопутствующих биохимических показателей (например, уровня лейкоцитов в крови и содержания там билирубина);
  • маркеров вирусной инфекции;
  • результатов биопсии печени.

Анализы с помощью полимеразной цепной реакции помогают врачу:

  • обнаружить носители вируса;
  • прогнозировать процесс развития гепатита типа B;
  • убедиться в переходе болезни в хроническую форму;
  • мониторить активность вируса на всех фазах развития;
  • выявить мутантные и скрытые штаммы гепатита B;
  • оценить эффективность лечения вируса при выборе определённой тактики и изменить её в случае недостаточной успешности.

В отличие от других анализов, которые применяются для диагностики гепатита B, ПЦР обладает:

Анализ ПЦР обладает исключительной чувствительностью

  1. Исключительной чувствительностью. Методика даёт возможность исследователю обнаружить возбудителя заболевания, даже если концентрация молекул его ДНК в крови минимальна. Это позволяет принять профилактические и лечебные меры на ранней стадии болезни, когда внешне она ещё не выражена никакими симптомами.
  2. Широким охватом возможностей. ПЦР способен выявить не только возбудителя вирусного гепатита B, но и ряд других патологий.
  3. Универсальностью подходов. Биоматериалом для исследований может быть кровь, слюна, клетки слизистых и кожных покровов.
  4. Оперативностью. Заключение будет готово ровно через день после забора крови (сам результат анализа получают не позже чем через 7 часов).
  5. Достоверностью. При соблюдении всех условий проведения ПЦР-методика никогда не показывает ложных данных.
  6. Ценовой доступностью исследования. По стоимости ПЦР лишь слегка превышает обычные анализы, использующие кровь как биоматериал.

Единственной издержкой исследования является его технологическая сложность. Для качественного выполнения ПЦР требуется исключительно чистый биоматериал, современное оборудование и хорошо подготовленный персонал. Обращаться за диагностикой по этому методу предпочтительней в специализированные лаборатории.

Вирусный гепатит B относится к заболеваниям, полное излечение от которых представляется возможным только на самых ранних стадиях развития. Выявить болезнь именно в этой фазе помогает сверхчувствительная диагностика по методу ПЦР. Первые симптомы, вызывающие подозрение на поражение печени вирусом, должны быть поводом для обращения к специалисту. Если диагноз подтвердится, лечение следует начинать немедленно. Это улучшит прогноз и повысит вероятность поддержки печени в здоровом состоянии на долгие годы.

источник

О возбудителе HCV-инфекции стало известно сравнительно недавно. До начала 1990-х годов точное выявление заболевания представляло собой серьезную проблему. Это обусловило широкое распространение вируса при гемотрансфузионных процедурах и трансплантации органов, длительное течение инфекции без адекватной терапии. Но сейчас диагностика гепатита С точна, анализы помогают прогнозировать эффективность терапии, а срок выполнения специфических исследований не превышает 3–5 дней.

Так почему масштабы распространения HCV некоторые специалисты сравнивают с эпидемией? В современном российском законодательстве предусмотрена регулярная проверка на гепатит С методом ИФА как у людей из группы риска, так и у работников, способных инфицировать других. Тем не менее, многие не проходят регулярной диспансеризации и не сдают даже стандартные клинические анализы, не говоря о специфических исследованиях.

Но HCV далеко не всегда сопровождается какими-либо клиническими проявлениями, более того, характерные симптомы заболевания отмечают только у четверти пациентов. Вирусная инфекция обычно протекает медленно, но репликация возбудителя патологии происходит постоянно. В результате наступает необратимая гибель гепатоцитов. На месте клеток, утративших свои функции, появляются участки соединительной ткани – своего рода шрамы.

Читайте также:  Диагностика лечение и профилактика гепатитов вирусной этиологии

Таким образом развивается фиброз, который, если не предпринять лечебных мер, перерастает в цирроз печени – тяжелое заболевание, сопровождающееся нарушением работы всех внутренних органов. При диагностике на этой стадии можно избавиться от вируса. Однако изменения печеночной паренхимы остаются необратимыми. В некоторых случаях больным требуется срочная трансплантация печени, а лечение начинают после проведения операции.

Поэтому чем раньше поставлен точный диагноз, тем скорее доктор начинает терапию. Таким образом репликацию вируса останавливают еще до развития тяжелых осложнений. Однако обычных клинических исследований недостаточно для выявления инфекции. Необходимо сдать более специфичные анализы, отличающиеся как по технике выполнения, так и по особенностям расшифровки результатов.

Сделать ряд диагностических тестов можно самостоятельно, но интерпретировать полученные данные (особенно если они положительны либо сомнительны) должен только врач.

Заподозрить наличие инфекции можно по некоторым клиническим признакам. К их числу относят:

  • постоянное чувство слабости;
  • астенический синдром;
  • непереносимость физических нагрузок (ранее привычных);
  • сонливость;
  • эмоциональная раздражительность;
  • расстройства пищеварения различной интенсивности (могут отсутствовать, иногда проявляются в виде отсутствия аппетита, тошноты).

Но подобные симптомы не могут достоверно выявить HCV, так как данные признаки не специфичны и указывают на множество других патологий или обычное переутомление.

Как определить гепатит С у взрослых и у детей:

  • по анализу крови на содержание определенных иммуноглобулинов (ИФА);
  • по результатам исследования, проведенного методом полимеразной цепной реакции;
  • по биохимическому анализу на содержание печеночных проб, билирубина.

Недавно на фармацевтическом рынке появились диагностические наборы, позволяющие провести анализ на наличие гепатита С в домашних условиях. Подобные тест-системы менее чувствительны, чем исследования, проводимые в лаборатории. Но в целом, это быстрый и достаточно точный способ самодиагностики.

Интерпретация результатов, особенно сомнительных, должна проводиться врачом. Положительный тест служит показанием для консультации доктора.

Дополнительно необходима проверка показателей общеклинического теста крови и мочи. Перед началом лечения доктор оценивает состояние печени по данным неинвазивных исследований (УЗИ, эластометрия). При подозрении на тяжелые поражения ткани выполняют биопсию органа.

Учитывая длительное бессимптомное течение, результаты обычного анализа крови и мочи могут быть без каких-либо отклонений. Поэтому для выявления вируса гепатита Ц используют серологические (ИФА) и молекулярные (ПЦР) методы лабораторной диагностики. Для этого сдают кровь из вены в частной лаборатории либо поликлинике по месту жительства. Срок получения результатов – до 5 дней.

Основные методы диагностики патологии можно разделить на две группы. Молекулярные исследования направлены на обнаружение частиц вируса. Помимо наличия РНК возбудителя гепатита С, такой анализ показывает его количественное содержание и точный генотип. Серологическое исследование (ИФА) «реагирует» на выработку иммуноглобулинов, синтезируемых при попадании вируса в кровь человека.

Уровень РНК, достаточный для лабораторного определения, достигается через 10–16 дней после инфицирования (если проводить диагностику современными высокочувствительными технологиями). Количественно вирусную РНК можно определить позже, через 4–6 недель после заражения. Тогда же целесообразно проводить и генотипирование. Синтез антител начинается сразу же, при первом контакте вируса с кровью человека. Но лабораторным путем при помощи анализа ИФА их можно обнаружить только через 3–4 недели.

Возможность выявления вируса на ранних стадиях зависит от индивидуальных особенностей больного – сроков выработки антител и активности процессов репликации вируса.

Какие анализы сдают при подозрении на гепатит С:

  • биохимия крови, печеночные пробы (отклонения от нормы могут лишь косвенно указывать на наличие гепатита С);
  • ИФА;
  • ПЦР.

Грамотное поэтапное полное обследование способствует исключению неопределенных результатов, дает максимально точную картину здоровья пациента в целом и позволяет врачу назначить правильное лечение.

Исследование методом ПЦР – самый точный анализ для обнаружения гепатита С в организме. Сам принцип постановки полимеразной цепной реакции достаточно сложен. Для проведения необходим обработанный и соответствующим образом подготовленный образец биологического материала. К нему добавляют фермент, провоцирующий деление заданного участка РНК (при его наличии) в геометрической прогрессии. Впоследствии определение частиц вируса проводят при помощи различных физико-химических методов.

Основные отличия ПЦР-диагностики гепатита C от исследования путем иммуноферментного анализа приведены в таблице:

Молекулярный тест, проведенный по методике ПЦР Иммуноферментный анализ
Мишени для исследования
РНК вируса в крови Антитела к гепатиту С (класса G и М)
Разновидности анализа и изучаемые критерии
Качественный анализ позволяет ответить на главный вопрос, здоров человек или болен Anti HCV Total определяет в крови общий титр всех антител к возбудителю гепатита С вне зависимости от класса
Количественное исследование оценивает вирусную нагрузку Определение иммуноглобулинов по классам: обнаруженные маркеры IgG свидетельствует о хронической инфекции, IgM – об острой
Генотипирование служит для выявления разновидности патологии Антитела с белку core и неструктурным протеинам HCV – это развернутый анализ, назначается нечасто, служит для дифференциальной диагностики инфекции с другими заболеваниями, прогнозирования особенностей течения и исхода
Сроки диагностики
до 3 дней 3–5 дней
Сроки обнаружения (с момента инфицирования)
10–14 дней Через 3–4 недели
Вероятность получения ложных результатов и ошибочной расшифровки
Минимальна, ошибки могут быть связаны с неправильной подготовкой образцов либо нарушением правил постановки реакции Неправильные результаты (ложноотрицательные или ложноположительные) могут быть следствием определенных заболеваний и состояний (например, беременности, аутоиммунных патологий, ВИЧ, системных инфекций и т.д.)

Качественный анализ, предназначенный для выявления патогенной РНК строго специфичен, поэтому используется для дифференциальной диагностики хронического вирусного гепатита С и для первичного определения наличия заболевания. Современные наборы реактивов, используемые для проведения исследования, характеризуются высокой чувствительностью. Достоверная диагностика возможна уже через 1,5–2 недели после инфицирования.

Расшифровка анализа не отличается сложностью. Если частицы вируса обнаружены, человек болен либо произошла реконвалесценция болезни. Отрицательный результат свидетельствует в пользу отсутствия патологии или о диагностическом окне, когда человек заражен, но уровень РНК патогена слишком низок для лабораторного обнаружения.

При помощи качественного анализа методом ПЦР возможна ранняя диагностика вирусной инфекции.

Исследование проводится после подтверждения диагноза гепатита С по качественной ПЦР. По анализу определяют показатель вирусной нагрузки. Этот параметр определяет активность патологического процесса. В зависимости от результата количественного анализа выделяют несколько уровней вирусной нагрузки (представлено в таблице).

Уровень вирусной нагрузки (измеряется в МЕ/мл) Расшифровка
Ниже 3ˑ104 Низкая виремия
3ˑ104–8ˑ105 Средняя виремия
Сверх 8ˑ105 Высокий уровень виремии

Чем выше параметр вирусной нагрузки (ВН), тем активнее происходит репликация вируса, хуже прогноз и выше вероятность необратимых изменений структуры тканей печени. Как правило, высокая виремия сопровождается достаточно характерными клиническими проявлениями инфекции. Обнаружение низкой ВН, особенно на фоне острой фазы заболевания является предиктором самостоятельного выздоровления. В таком случае начало терапии откладывают на 7–14 дней, после чего исследование повторяют.

Данный анализ проводят только в том случае, если в крови обнаружена вирусная РНК и установлено ее количественное содержание. Генотипирование – единственное исследование, которое определит разновидность возбудителя гепатита С. Только так можно правильно назначить курс терапии и установить продолжительность их применения.

В настоящее время диагностика вирусной инфекции возможна дома, при этом человеку не нужны какие-либо специальные медицинские навыки. Экспресс-тест на гепатит С «работает» по принципу иммуноферментного анализа, то есть набор позволяет определить наличие антител к HCV в образце биологического материала. Большинство тест-систем предназначены для проверки крови. Но появились наборы, позволяющие выяснить, есть ли иммуноглобулины к гепатиту С в слюне.

Относительно достоверности экспресс-тестов было проведено несколько клинических исследований. Установлено, что подобные наборы – не самый точный способ диагностики инфекции, многое зависит от правильности забора биологического материала, соблюдения других правил выполнения анализа. Однако проведение такого теста дает возможность самостоятельно определить инфицирование, не посещая доктора и лабораторию.

Цена одной тест-системы, позволяющей проверить наличие вируса, колеблется в пределах 800–2000 рублей в зависимости от производителя и способа выполнения анализа. Исследование выполняют следующим образом. На тест-полосу наносят образец биологического материала (слюна либо кровь) и ждут отведенное время. Появление одной контрольной полоски свидетельствует об отрицательном результате, две линии – о возможном инфицировании.

При подготовке к проведению обследования необходимо соблюдать такие правила:

  • исключить токсическое влияние алкоголя на печень (отказаться от употребления спиртного за 5–7 дней до сдачи анализов);
  • соблюдать диету с ограничением жирных, жареных, копченых блюд (стол №5) за неделю до проведения обследования;
  • сдавать кровь строго натощак (прием пищи запрещен за 12–14 часов до забора крови);
  • не курить за 8 часов до исследования.

Существует несколько способов проведения диагностики. Можно сдать кровь в частной лаборатории, где не требуется направлений от врача. Необходимые тесты выполняют по полису страхования, но перед этим придется получить направления у участкового терапевта или инфекциониста.

Нередко пациенты интересуются, покажет ли общий анализ крови гепатит С, ведь общеклинические исследования сдаются регулярно при вирусных заболеваниях и других, более распространенных инфекциях. Но изменения картины крови возникают далеко не всегда. Кроме того, подобные нарушения неспецифичны и не позволяют провести точную диагностику заболевания.

Приблизительно в 20–30% случаев возникают следующие изменения:

  • снижение общего уровня лейкоцитов за счет лимфоцитов;
  • уменьшение содержания гемоглобина;
  • изменение уровня тромбоцитов за счет нарушений свертывающей системы крови;
  • повышение параметров скорости оседания эритроцитов.

Еще одним способом, как обнаружить вирусное поражение печени, служат показатели биохимического исследования крови.

О возможном инфицировании свидетельствует повышение концентрации:

Нарушения функциональной активности печени проходят по мере приема противовирусных препаратов.

Диагноз гепатита С не ставят на основании результатов печеночных проб и стандартного клинического исследования крови.

Для получения полной картины состояния пациента необходимо проведение дополнительных инструментальных исследований. Это связано с длительным бессимптомным течением патологии. Нередко о наличии болезни пациент узнает на стадии фиброза, а при неблагоприятном прогнозе – на этапе цирроза либо злокачественной малигнизации гепатоцитов.

От состояния печени во многом зависит тактика терапии. При декомпенсированных формах цирроза прием таргетных противовирусных препаратов дополняется рибавирином, либо продолжительность лечения увеличивают до 24 недель.

Процедура проводится для определения стадии и степени цирроза, а также подтверждения злокачественного перерождения клеток (предварительно опухоль обнаруживают при помощи ультразвукового исследования). Пункцию выполняют в условиях стационара под местной анестезией.

Под контролем УЗИ специалист делает прокол и вводит в паренхиму печени специальную иглу с системой захвата, позволяющей взять образец биологического материала. Кусочек ткани помещают в специальную среду, при необходимости добавляют краситель и исследуют под микроскопом.

Противопоказанием к проведению процедуры служит паразитарное поражение печени и тяжелые нарушения системы свертывания. Кроме того, возможность выполнения манипуляции напрямую зависит от согласия самого пациента. Для принятия взвешенного решения врач должен подробно объяснить, для чего необходимы результаты биопсии, каковы риски при проведении процедуры.

Ультразвуковое исследование сочетает в себе высокую информативность, безболезненность и безопасность. В течение 15–20 минут доктор может получить подробные данные о размерах и структуре печени и других органов брюшной полости.

Как правило, УЗИ, проведенное на фоне гепатита С, демонстрирует:

  • нарушения кровоснабжения органа;
  • изменения, связанные с оттоком и секрецией желчи;
  • наличие уплотнений, очагов воспаления, некроза, в тяжелых случаях возможно обнаружение новообразований;
  • увеличение размеров печени.

По итогам УЗИ доктор поймет масштабы поражения печени, однако точная диагностика гепатита С возможна только по результатам анализа крови.

Сама техника выполнения обследования напоминает ультразвуковую диагностику. Эластометрия – неинвазивное безболезненное исследование, предназначенное для оценки плотности паренхимы печени. Таким образом доктор может определить стадию и тяжесть фиброза, при котором нормальная ткань органа замещается соединительной. Без соответствующей терапии и таргетного противовирусного лечения развивается цирроз печени.

Подобные методики информативны при диагностике цирроза и наличия злокачественных новообразований. Томограмма имеет ряд противопоказаний. Но подобное исследование гораздо информативнее УЗИ и эластометрии, позволяет в полной мере оценить состояние печени.

Самостоятельная диагностика вируса без проведения должных исследований и их грамотной расшифровки невозможна. Человек может предположить наличие инфекции по ряду симптомов, например, повышенной утомляемости, постоянной слабости, сочетающихся с расстройствами пищеварения. К группе риска относят людей, часто подвергающихся инвазивным медицинским или эстетическим процедурам, пренебрегающими барьерными методами защиты при случайных половых контактах.

Наиболее простой способ самостоятельной диагностики – проведение экспресс-теста либо сдача анализов в платной лаборатории. Однако при наличии характерной для вирусного поражения печени лучше пройти комплексное обследование под контролем врача.

Обследование на гепатит С при беременности является обязательным и выполняется дважды: при первой консультации у гинеколога и постановке на учет, а затем в середине последнего триместра. Доктор назначает анализы, выполняемые по методики ИФА. Но основная проблема заключается в получении ложноположительных результатов. После зачатия в организме женщины начинается выработка протеинов, близких по структуре к антителам к гепатиту С.

Поэтому позитивный ИФА при беременности не всегда является признаком инфицирования и требует подтверждения методом ПЦР. Также в период вынашивания ребенка возможно обследование органов брюшной полости при помощи УЗИ, иногда проводится эластометрия. Но при подтверждении диагноза лечение может навредить плоду. Поэтому назначают поддерживающие здоровье женщины медикаменты, а основную терапию начинают после родов.

Лечение гепатита С вполне реально как на острой, так и на хронической фазе. Но одно из условий успешной терапии – своевременная диагностика, когда еще возможно восстановление функциональной активности печени. Поэтому специалисты рекомендуют самостоятельно либо по направлению от врача сдавать соответствующие тесты, а при позитивном результате незамедлительно обращаться за медицинской помощью.

источник

Гепатит С часто протекает скрыто, без очевидных клинических проявлений. Чтобы определить наличие вируса в организме и поражение им печени требуется пройти соответствующее исследование — ПЦР количественный на гепатит С.

Количественный ПЦР — исследование крови или другой физиологической жидкости, которое позволяет определить количественную вирусную нагрузку на организм.

Заболевания, в зависимости от тяжести протекания, отражаются присутствием в крови определённого количества (мл на 1 см3) возбудителя инфекции. Каждый живой организм имеет в своём составе белки, рибонуклеиновую (РНК) и дезоксирибонуклеиновую (ДНК) кислоты.

Читайте также:  Ифа показатели вирусного гепатита

Каждый вирус имеет характерные только для него РНК, ДНК, белки. Суть метода полимеразной цепной реакции в том, что он указывает количество РНК конкретного организма (например, вируса определённого генотипа) в 1 мл жидкости. Таким образом, выясняется степень и тяжесть заболевания.

При гепатите С, количественный ПЦР показывает сколько в исследуемом материале РНК вируса. Предварительно проводят качественный анализ, выясняя его наличие.

Из всех существующих способов определения возбудителя, а также его количества, полимеразная цепная реакция — наиболее точный метод. Он призван обнаружить сам вредоносный организм, а не последствия его пребывания (антитела).

Терапия любого заболевания допустима только после установления точного диагноза. Врач сбирает анамнез, оценивает клинические проявления недомогания, а также назначает дополнительные лабораторные обследования.

Прежде чем доктор поставит диагноз, подберёт лечение, необходимо количественное определение РНК вируса гепатита С. Этот анализ назначается не всем пациентам, а при конкретных показаниях:

  • контакт с больным гепатитом С;
  • симптомы заболевания печени;
  • клинические проявления цирроза;
  • в биохимическом анализе крови показатели активности АЛТ, АСТ выше нормы;
  • подозрение на инфицирование гепатитом С;
  • выявлены антитела к HCV при иммуноферментном исследовании крови;
  • уточнение диагноза;
  • определение вирусной нагрузки, чтобы доктор мог выбрать тактику, правильно составить схему лечения;
  • контроль эффективности проводимой терапии в динамике (1, 4, 12, 24 недели после начала лечения);
  • динамика протекания заболевания;
  • при подозрении на смешанные поражения железы;
  • по окончании лечения гепатита для периодической проверки, чтобы исключить рецидив.

Чтобы сделать количественный ПЦР вирусной РНК гепатита С, надо соблюдать методику выполнения исследования:

  1. Лучше всего для тестирования подходит венозная кровь. Анализы сдаются натощак. Пациенту не рекомендуют есть жирную и жареную пищу, пить спиртное за два дня до манипуляции.
  2. После забора биологического материала, его доставляют в лабораторию, обрабатывают.
  3. ПЦР состоит из трёх этапов (подготовка, увеличение копий ДНК возбудителя, идентификация) на каждом из которых используется определённое оборудование и реактивы.
  4. Образцы, взятые для исследования, маркируются. Из них с помощью реагентов выделяют РНК вируса, обозначенного качественным ПЦР.
  5. Процесс амплификации (создание и увеличение копий) проходит несколько раз посредством изменения температуры материала (нагревания, охлаждения) с использованием реактивов.
  6. На последнем этапе происходит определение вирусной нагрузки. Результат исследования интерпретирует лечащий врач, у которого есть расшифровка, таблица значений и итоги предварительной диагностики.

После количественной полимеразной цепной реакции, данные о вирусной нагрузке на печень и организм в целом отображают в бланке. Количество РНК возбудителя выражается как МЕ/мл (международные единицы/миллилитры). Данные обычно выводятся в виде таблицы, в которой представлены:

  • норма количественного ПЦР при гепатит С;
  • полученный результат;
  • другие параметры.

Значения показателей вирусной нагрузки при гепатите С

Показатель Интерпретация
Отрицательный РНК возбудителя в биологическом материале не обнаружено
0 — 1,8Х10^2МЕ/мл Количество генетического материала вируса ниже установленного референтного значения
1,8Х10^2МЕ/мл — 8Х10^5МЕ/мл Невысокая вирусная нагрузка.
8Х10^5МЕ/мл — 2,4Х10^7МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка
2,4Х10^7МЕ/мл и более Превышена верхняя граница значений.

Показатели отчасти зависят от типа и чувствительности теста. Поэтому расшифровать результат анализа может только доктор, который учитывает все параметры.

Лечащий врач, исходя из результатов анализов, собранного анамнеза, клинических признаков подберёт противовирусную терапию. Интенсивность её будет зависеть от количества найденного генотипа вируса в образце.

Любое лабораторное исследование может иметь погрешность, если не будут соблюдены условия его проведения на всех этапах (от подготовки к процедуре до интерпретации результатов). Количественная полимеразная цепная реакция – один из наиболее достоверных методов определения вирусной нагрузки. Но при нарушении методики она может давать ошибочные результаты, так как присутствует человеческий фактор.

Чтобы максимально избежать ложноположительных или неверных данных, требуется выполнять все необходимые требования диагностики:

  1. Прежде чем проводить количественный ПЦР рекомендуется провести иммунологическое исследование крови на выявление антител к гепатиту С. Кроме этого, требуется определить генотип вируса.
  2. Пациенту важно подготовиться к сдаче анализов в соответствии с рекомендациями. Чтобы уменьшить вероятность ошибки в тесте, надо сообщить лаборанту о приёме лекарств (если такой момент имеет место). На прохождение ПЦР влияет употребление запрещённой пищи, стресс, вредные привычки, физические нагрузки, различные заболевания.
  3. Лаборант, который обрабатывает образец биологического материала должен быть компетентен, знать методику проведения количественного ПЦР, а также работу оборудования. Правильная идентификация, подсчёт копий – основа верного результата
  4. Качество, способ, сроки хранения реактивов должны соответствовать заявленным требованиям.
  5. Соблюдение температурного режима на всех этапах реакции обязательно.

Правила и рекомендации по подготовке, сбору материала, проведения количественного ПЦР необходимо соблюдать для достижения 100% точности полученного результата. Ошибочные данные приводят к неправильному выбору тактики лечения и неэффективности терапии.

При подозрении на инфицирование гепатитом С надо обязательно проконсультироваться с врачом. Если проведена диагностика, а ПЦР положительная или её количественные показатели говорят о наличии вирусной нагрузки, это однозначно повод безотлагательно посетить медучреждение.

Доктор, расшифровав результаты анализов, назначит лечение. Правильно выбранные лекарства, техника терапии, своевременное начало приёма медикаментов помогут избежать патологических изменений структуры и работы печени.

Гепатит С — тяжёлое вирусное заболевание, которое может привести к необратимым последствиям для человека. Ранняя, точная диагностика (количественный ПЦР) даёт возможность увеличить вероятность выздоровления в несколько раз.

источник

ПЦР диагностика позволяет не только определить наличие вируса гепатита В в крови и его этиологию, но также оценить его активность. Выявление вирусной нагрузки особенно важно для подбора эффективного лечения, если она слишком высока, то вероятность выздоровления уменьшается. В чем суть метода полимеразной цепной реакции?

При гепатите проводят ПЦР, чтобы наверняка удостовериться в поставленном диагнозе. При помощи этого метода можно выявить ДНК вируса, а также определить его количество в крови.

ДНК вирус в крови методом ПЦР при гепатите можно выявить по окончании инкубационного периода, в это время на фоне повышенного уровня трансаминаз можно определить и HBsAg, после чего появляется HBeAg.

При качественном определении можно точно установить диагноз, есть гепатит или его нет. В норме в крови ДНК вируса должен отсутствовать. Количественный метод позволяет определить интенсивность развития болезни и размножение вируса.

Анализ имеет очень высокую чувствительность и достоверность. В качестве биологического материала берут венозную кровь. Благодаря современным технологиям, при ПЦР можно обнаружить вирус при концентрации 5×103-104 копий/мл в крови. По результатам анализа, зная норму, можно судить о вирусной нагрузке и поставить прогноз на лечение.

Важно! Именно ДНК вируса способствует развитию цирроза и других хронических заболеваний печени.

Обнаружение ДНК при помощи ПЦР необходимо в следующих случаях:

Сомнения при постановке окончательного анализа после сдачи анализов. Определение острой стадии болезни. Выявление скрытых форм гепатита. Оценка эффективности после прохождения противовирусной терапии.

Как расшифровать полученные после ПЦР диагностики результаты?

По количественной оценке можно не только определить наличие вируса, но и узнать вирусную нагрузку, в случае если ПЦР покажет положительный результат.

Количественный метод необходим, чтобы узнать такую информацию:

Интенсивность развития заболевания. Эффективность лечения. Развитие резистентности к противовирусным препаратам.

Количественная оценка очень важна при постановке диагноза хронического гепатита. В этом случае все показатели будут находиться не в пределах нормы. Уровень трансаминаза будет повышен, индекс активности вируса более 4, а концентрация ДНК вируса более 105 копий ДНК/мл. Если концентрация вируса более низкая, а уровень трансаминаза находится в норме, то можно говорить о пассивном носительстве.

Перед назначением противовирусного лечения прохождение ПЦР диагностики, а именно количественного обследования, является обязательным условием, чтобы определить вирусную нагрузку.

Делают анализ каждые 3 месяца, и если вирусная нагрузка возросла в 10 раз, то можно говорить об устойчивости вируса к лечению.

Количественный анализ дает очень важную информацию, ведь можно определить, сколько в крови содержится ДНК возбудителя. Чем больше его количество, тем больше вирусная нагрузка и тем тяжелее состояние больного. При снижении вирусной нагрузке после прохождения лечения, можно судить о его эффективности. В некоторых случаях ПЦР при гепатите является показанием к проведению дополнительного обследования, такого как биопсия печени. При повышенном уровне АЛТ проводится ПЦР. Расшифровка анализов такая: если вирусная нагрузка более 105копий ДНК/мл, а уровень АЛТ превышает норму, но не более чем в 2 раза на протяжении полугода, то такой больной нуждается в биопсии. При сильном воспалении или фиброзе показано противовирусное лечение. Если же уровень АЛТ превышает норму более чем в 2 раза при высокой вирусной нагрузке, то сразу назначают лечение без дополнительной диагностики.

Только хорошие специалисты смогут правильно расшифровать результаты количественного ПЦР.

Качественный анализ позволяет определить наличие вируса гепатита в крови. В норме он должен отсутствовать. Благодаря этому методу можно точно установить диагноз.

Качественный ПЦР анализ дает 100% точный результат.

Ни один другой метод не дает настолько достоверных данных. В более чем половине случаев после прохождения диагностики выявляют ДНК вируса, при отсутствии антигена. Очень важно на начальном этапе заболевания установить диагноз.

Доказано, что если ДНК вируса гепатита В активно размножается в организме человека в течение двух месяцев, то болезнь приобретает хроническую форму. Если же начать бороться с вирусом уже в течение первых недель после инфицирования, то шансы на полное выздоровление очень велики.

Как происходит расшифровка полученных результатов обследования при помощи качественного метода?

Расшифровка анализа очень проста:

В норме результат должен быть отрицательным, то есть ДНК вируса не обнаружено. Положительный результат свидетельствует о наличии гепатита.

Анализ помогает выявить вирус, определить его генотип и начать своевременное лечение. Очень часто при наличии ДНК наряду с качественной оценкой проводят и количественную.

При анализе на гепатит при помощи ПЦР диагностики берут кровь из вены. Проходить обследование лучше всего с утра, так как кровь всегда нужно сдавать натощак (после последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов).

Чтобы анализ был максимально достоверным, больной должен знать о некоторых факторах, которые могут повлиять на конечный результат:

Перед тем как сдавать кровь из вены, нужно 20 минут отдохнуть. Кроме того, что анализ сдается натощак, так, еще за 12 часов нельзя употреблять спиртное, курить, заниматься спортом и употреблять жирную еду. Некоторые лекарственные средства, которые вынужден принимать больной, могут повлиять на конечный результат. Лаборант должен знать о случае медикаментозного лечения. Если кровь нужно сдать ребенку в возрасте до 5 лет, то в таком случае его за полчаса до диагностики нужно поить каждые 10 мин. по стакану кипяченой воды.

Очень важно проходить ПЦР в клинике, которая хорошо себя зарекомендовала. Ведь несмотря на то что ПЦР определяет наличие вируса с точностью до 100%, этот показатель может снизиться до 95%, если учесть человеческий фактор.

Неквалифицированные лаборанты или плохая репутация клиники может стать причиной получения ложных результатов.

Гепатит B – вирусная инфекция, поражающая печень. Сегодня около 300 млн человек по всему миру являются носителями гепатита B.

У некоторых вирус переходит в цирроз печени или гепатоцеллюлярную карциному (первая стадия рака). Новые противовирусные стратегии исследования болезни имеют две задачи:

Для лечения и чистки ПЕЧЕНИ наши читатели успешно используют

. Внимательно изучив этот метод мы решили предложить его и вашему вниманию.

определить, насколько организм чувствителен к вирусной нагрузке; определить, насколько вирус устойчив к приему лекарств и других медицинских вмешательств.

Серологические исследования направлены на выявление в сыворотке крови антигенов и антител, но этот метод ненадежен. Поэтому ученые разработали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Он позволяет не только качественно определить наличие вируса (есть или нет), но и количественно (в каком количестве присутствуют антитела в сыворотке крови).

Перед сбором крови врач должен выяснить:

принимал ли пациент наркотические вещества внутривенно; являлся ли человек донором либо реципиентом (кому вливали кровь); проводились ли больному хирургические вмешательства; повреждался ли у пациента кожный покров; уверен ли человек в здоровье своего сексуального партнера; были ли контакты с зараженными вирусом гепатита B.

При остром гепатите положительный результат можно выявить через 1-2 недели после инкубации путем ПЦР.

Анализы крови для выявления вирусного гепатита В (ВГВ) берутся при:

Диагностике острого гепатита в: период инкубации (1-2 недели); интенсивный период недуга (3-4 недели); период ранней стадии выздоровления. Диагностике ХВГ (хронического вирусного гепатита). При микс-гепатитах.

Также регулярно анализы берутся у людей, находящихся в группе риска, к ним относят:

людей, нуждающихся в частых переливаниях крови; пациентов, проходящих постоянные процедуры очищения крови при почечной недостаточности; людей, больных СПИДом или ВИЧ-инфекцией; беременных женщин; медицинских работников, контактирующих с кровью; больных с симптомами заболевания печени. лечащихся от цирроза, рака и других заболеваний печени.

Подготовка к количественному анализу предполагает соблюдение таких правил:

не курить за 1 час до сдачи анализа; не есть за 4 часа до процедуры; лучше всего количественный анализ сдавать после сдачи качественного; не пить алкоголь за сутки до исследования.

Эффективная терапия при заболевании влияет на уменьшение количества ДНК вируса в сыворотке. Через полгода после старта лечения количество вируса должно уменьшиться на 2-3 порядка. Если результаты анализов через время не изменились, или, наоборот, стали хуже, то в обязательном порядке меняется вся терапия, и автоматически острый гепатит переименовывается в хронический.

При попадании ДНК вируса гепатита в организм инфекция может пойти 2путями:

репликативным (происходит развитие острого либо хронического гепатита, что в дальнейшем, без медицинского вмешательства, ведет к циррозу печени); интегративным (развитие бессимптомного, неактивного вирусоносительства, которое все-таки приведет к циррозу либо гепатоцеллюлярной карциноме).

Как происходит процедура забора крови? Врач стягивает предплечье больного жгутом и вводит иглу в вену на локтевом сгибе, после забирает кровь в шприц и переливает в специальную пробирку. Результаты будут готовы через несколько дней, срок зависит от места, где пациент сдает анализ.

Читайте также:  Заразиться вирусным гепатитом а можно при укусе комара

Материалом служит сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты, которые помещают в пробирку с хорошо завинчивающейся крышкой. Но на результат может повлиять загрязненный материал для забора анализа, передержка материала (он хранится до 24 часов при температуре не более +4 °С).

Существует несколько способов количественного анализа, среди которых ПЦР, ИФА, биохимия.

Это анализ на поверхностный антиген-белок, который составляет часть внешней оболочки вируса. После того, как вирусные частицы попали внутрь организма, они начинают интенсивное размножение на поверхности печени, уничтожая здоровые клетки органа. Новые молекулы выбрасываются в кровь.

Исходя из этого, исследуют уровень концентрации в сыворотке антител и определяют, есть заражение гепатитом B или нет.

Материал для исследования берется натощак. ПЦР проводится в аппарате под названием амплификатор.

Сначала расщепляют ДНК на 2 самостоятельные цепочки с помощью повышения температуры материала для исследования в амплификаторе. Материал немного охлаждают с помощью азота. Праймеры находят нужные последовательности в молекуле ДНК и присоединяются к ним. Элонгация – третий шаг, когда два праймера присоединяются к двум цепочкам ДНК. При помощи фермента ДНК-полимеразы происходит достраивание участка ДНК от присоединившегося к нему ранее праймера. Таким образом, на участке в области праймеров в каждой из цепочек ДНК образуется вторая комплементарная цепочка ДНК.

В дальнейшем эти шаги повторяются множество раз, и за несколько часов выполняется 35-45 циклов, образуются миллиарды копий искомого образца. Если такие копии есть, то высчитывается их количество на 1 мл материала для анализа.

Многие наши читатели для лечения и чистки печени активно применяют широко известную методику на основе натуральных ингредиентов, открытую Еленой Малышевой. Советуем обязательно ознакомиться.

Помимо ПЦР, существует метод ИФА (иммуноферментного анализа). Он определяет не только поверхностные антитела, но и расположенные внутри и взаимосвязанные с предыдущими антигенами, а также их количество.

Еще один метод количественного анализа. При попадании вируса из поврежденных клеток печени в организм выбрасываются ферменты, если их количество больше нормы, то можно говорить о заражении. Кроме того, нужно определить вирусную нагрузку (ДНК-HBV), сдать печеночные пробы (на билирубин с фракциями, АЛТ, АСТ, щелочную фосфатазу, гамму-ГТ). Обязательным является посещение инфекциониста, который при необходимости направляет больного на фиброэластометрию, подбирает курс лечения.

Биохимия — количественного анализ

В этом методе поиск копий происходит после каждого цикла, а не после 35-45, Метод работает так же, как и ПЦР, позволяет определять количество копий в образце для исследований. Тем самым время проведения анализа заметно сокращается, при этом гарантирован 100 % результат.

Установление количества ДНК гепатита B очень важно, так как при малом показателе прогноз болезни более благоприятный, чем при большем. Концентрацию ДНК ВГВ измеряют в копий/мл либо me/мл

Результаты данного анализа могут быть следующими:

ДНК вируса не обнаружена, если его нет в организме либо концентрация очень мала, 90 me/мл = 200 копий/мл; ДНК вируса обнаружена в количестве ниже нормы концентрации, 2×106 копий/мл; ДНК вируса находится в среднем количестве, при 2×106-2×109 копий/мл; ДНК вируса больше 2×109 копий/мл, концентрация антител высокая, что говорит о прогрессе заболевания.

Если результат анализа положительный, то диагностируется:

носительство вируса гепатита B; заболевание хроническим гепатитом; заболевание острым гепатитом B.

Если результат отрицательный, то:

вируса в организме нет; возможно наличие гепатита B в период выздоровления (если предыдущие анализы являлись положительными).

В редких случаях отрицательный результат анализа на ДНК вируса гепатита B говорит о быстром и злокачественном течении болезни.

Решение о сдаче анализа на вирус принимает:

Отзыв нашей читательницы Светланы Литвиновой

Недавно я прочитала статью, в которой рассказывается о «Leviron Duo» для лечения заболеваний печени. При помощи данного сиропа можно НАВСЕГДА вылечить печень в домашних условиях.

Я не привыкла доверять всякой информации, но решила проверить и заказала упаковку. Изменения я заметила уже через неделю: постоянные боли, тяжесть и покалывания в печени мучившие меня до этого — отступили, а через 2 недели пропали совсем. Улучшился настроение, снова появилось желание жить и радоваться жизни! Попробуйте и вы, а если кому интересно, то ниже ссылка на статью.

Читать статью —> терапевт; вирусолог; гематолог; инфекционист.

Количественный анализ является обязательным при диагностике заболевания и должен состояться еще до начала терапии. Но необходимо помнить о том, что гепатит B иногда тесно переплетается с гепатитом D, что может создавать дополнительные сложности при проведении такого анализа. Поэтому следует учитывать и такие варианты осложнений:

вируса в организме нет; возможно наличие гепатита B в период выздоровления (если предыдущие анализы являлись положительными).

В редких случаях отрицательный результат анализа на ДНК вируса гепатита B говорит о быстром и злокачественном течении болезни.

Решение о сдаче анализа на вирус принимает:

Отзыв нашей читательницы Светланы Литвиновой

Недавно я прочитала статью, в которой рассказывается о «Leviron Duo» для лечения заболеваний печени. При помощи данного сиропа можно НАВСЕГДА вылечить печень в домашних условиях.

Я не привыкла доверять всякой информации, но решила проверить и заказала упаковку. Изменения я заметила уже через неделю: постоянные боли, тяжесть и покалывания в печени мучившие меня до этого — отступили, а через 2 недели пропали совсем. Улучшился настроение, снова появилось желание жить и радоваться жизни! Попробуйте и вы, а если кому интересно, то ниже ссылка на статью.

Читать статью —> терапевт; вирусолог; гематолог; инфекционист.

Количественный анализ является обязательным при диагностике заболевания и должен состояться еще до начала терапии. Но необходимо помнить о том, что гепатит B иногда тесно переплетается с гепатитом D, что может создавать дополнительные сложности при проведении такого анализа. Поэтому следует учитывать и такие варианты осложнений:

коинфекция – происходит заражение сразу двумя видами гепатита B и D. Такое заболевание протекает намного сложнее и болезненнее. Хронической формы у такого недуга нет, потому что в большинстве своем болезнь заканчивается летальным исходом; суперинфекция – к ранее спавшему гепатиту D присоединяется острый ВГB, в этом случае болезнь перетекает в хроническую с неблагоприятным прогнозом.

Вам все еще кажется, что ВОССТАНОВИТЬ ПЕЧЕНЬ невозможно?

Судя по тому, что вы сейчас читаете эти строки — победа в борьбе с заболеваниями печени пока не на вашей стороне…

И вы уже думали о хирургическом вмешательстве и применении токсичных препаратов, которые рекламируют? Оно и понятно, ведь игнорирования болей и тяжести в печени, может привести к тяжелым последствиям. Тошнота и рвота, желтоватый или сероватый оттенок кожи, горечь во рту, потемнение цвета мочи и диарея… Все эти симптомы знакомы вам не понаслышке.

Но возможно правильнее лечить не следствие, а причину? Прочитайте историю Алевтины Третьяковой, о том как она не только справилась с болезнью печени, но и восстановила ее…. Читать статью >>

ВГВ является сложноорганизованным ДНК-содержащим вирусом и относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus.

Гепатит В — антропонозная инфекция, преимущественно с парентеральным механизмом заражения, которая может протекать в форме вирусного носительства, острой и хронической форм и характеризуется поражением печени с возможным развитием острой печеночной недостаточности, хронического гепатита, цирроза печени и первичного рака печени (гепатоцеллюлярной карциномы).

Инфицирование организма человека происходит при непосредственном проникновении HBV в кровь (при каких либо инвазивных вмешательствах и при переливании крови и ее препаратов), или через слизистые и кожные покровы во время родов, при половых и тесных бытовых контактах. Попав в печень, HBV проникает в гепатоцит, где начинает интенсивно размножаться.

Развитие инфекционного процесса может происходить двумя путями: репликативным и интегративным. Репликативная форма инфекции ведет к развитию острого или хронического гепатита и циррозу печени, тогда как интегративная — к развитию «здорового» вирусоносительства, неактивного хронического гепатита, циррозу печени и первичной гепатокарциномы.

Серологическая диагностика и прогноз HBV-инфекции основан на выявлении антигенов вируса и антител к нему. Но, как оказалось, в популяции вируса гепатита В встречается достаточно мутантных штаммов (HBеAg-негативных), которые не улавливаются обычными серологическими тестами. Поэтому метод ПЦР для диагностики HBV-инфекции является крайне важным.

Количественное определение ДНК вируса гепатита В методом ПЦР.

Аналитические показатели: выявление ДНК вируса гепатита В (hepatitis В virus) ме­тодом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и определение вирусной нагрузки в плазме крови.

Определяемый фрагмент — уникальная последовательность ДНК гена структур­ного белка вируса гепатита В. Специфичность определения — 98%. Чувствительность определения — от 2х105 МЕ/мл 5х103 копий/мл вирусных частиц в сыворотке крови.

Количественная характеристика содержания ДНК вируса гепатита важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для опре­деления хронизации гепатита В: при исходно низком уровне виремии (ДНК HBV менее 2х105 копий/мл (2х105 МЕ/мл)) процент хронизации острого гепатита В близок к нулю. При концентрации HBV ДНК от 2х105 копий/мл (2х105 МЕ/мл) до 2х10° копий/мл (8х105 МЕ/мл) хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне ви­ремии у пациента (более 2х10° копий/мл (8х105 МЕ/мл)) острый гепатит В чаще всего пе­реходит в хронический. Снижение концентрации ДНК вируса гепатита В к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии.

Наличие современных препаратов против гепатита B (HBV) с четкими показаниями для их назначения требует точной и быстрой верификации диагноза. Однако ввиду скудных клинических данных на первых неделях болезни и ограниченности иммуноферментных методов анализа, скорость постановки диагноза снижается.

Присутствие маркеров анти-HBc IgM, HBsAg, анти-HBc, HBeAg, анти-HBe позволяют подтвердить HBV или установить факт перенесенной болезни. Но определить присутствие активных вирусных частиц в крови и посчитать их число на момент проведения исследования можно посредством ПЦР — количественного real-time теста по выявлению гепатита B. Метод, в сравнении с иммуноферментными способами диагностики, решает диагностические проблемы и позволяет прогнозировать течение болезни на фоне приема противовирусных препаратов.

Диагностика гепатита B основывается на оценке клинических проявлений, иммуноферментных и инструментальных методов исследований. Заболевание протекает в острой фазе после инкубационного периода и, в зависимости от дозы инфекции и эффективности лечения, переходит в хроническую стадию. Главной целью лечения остается предотвращение хронизации, то есть элиминация всех вирусных частиц из крови. Клиническая норма течения болезни — излечение без последующей виремии.

Факт устранения инфекции необходимо доказать количественным методом исследования.

Поскольку любой качественный иммуноферментный анализ позволяет диагностировать HBV косвенно, то есть не показывают наличие возбудителя во внутренней среде организма, а характеризует иммунный ответ на инфекцию, то контроль эффективности терапии и факт излечения становится труднодоказуемыми. Потому пациенту с гепатитом B или с наличием диагностических критериев в его пользу должна проводиться полимеразная цепная реакция с целью количественного определения числа вирусных частиц в крови. Диагностическая норма — это отсутствие копий ДНК инфекта.

Высокочувствительный метод ПЦР-диагностики гепатита В относится к категории генно-инженерных молекулярно-биологических исследований. Посредством него определяется количество вирусной ДНК в биологическом материале пациента и допустимая норма. По полученным результатам устанавливается число вирусных частиц в единице объема. Материалом для диагностического теста является венозная кровь пациента. Забор желателен натощак из-за возможного влияния хилезной сыворотки на результат исследования.

Полученные результаты необходимо предоставить врачу для интерпретации и определения дальнейшей тактики. Самостоятельная расшифровка не представляет диагностической ценности.

Значимость результата числа вирусных частиц, полученного метода ПЦР, превышает значение иммуноферментных исследований. Поскольку анализ в режиме real-time показывает присутствие возбудителя заболевания в крови, его информативность выше прочих. Если ИФА свидетельствуют только о наличии антител, что наблюдается с 4-х недель инкубационного периода и сохраняется более 8 недель после элиминации вируса из крови, то полимеразная цепная реакция однозначно подтверждает активное течение заболевания или его излечение, характеризует динамику назначенной терапии.

Полимеразная цепная реакция с количественным определением частиц возбудителя решает диагностические вопросы в пользу прекращения лечения в связи с выздоровлением или продолжения терапии из-за ее недостаточной эффективности. Метод максимально специфичен в отношении вируса HBV и отличается приемлемой погрешностью.

Количественный анализ гепатита B является наиболее достоверным и позволяет подтвердить данные, полученные иммуноферментными методами. Он назначается при:

  1. получении положительного диагностического результата ИФА;
  2. лечении пациента с установленным диагнозом вирусного поражения печени;
  3. при диагностике гепатитов смешанной этиологии;
  4. при необходимости определения вирусной нагрузки у пациента.

Поскольку более широко в практике инфекциониста применяется метод иммуноферментного анализа, то часть пациентов с легким течением болезни можно лечить и не прибегая к необходимости подсчета вирусной нагрузки. Но ПЦР общепринято считается «золотым стандартом» диагностики в гепатологии, так как из-за однозначности своего результата снимает ряд организационных вопросов. Поэтому направление пациента на количественный анализ преследует следующие цели:

  • получение данных о числе вирусных частиц в крови пациента;
  • подтверждение острого течения гепатита и своевременной верификации хронизации заболевания;
  • постоянное выявление латентных вирусоносителей с положительными ИФА-тестами, мониторинг их виремии;
  • принятие решения о назначении антивирусного лечения, его комбинирования и прекращения.

Наиболее значимой целью применения количественного ПЦР-теста на выявление HBV является определение возможных комбинаций лечения. В случаях с высокой вирусной нагрузкой результат анализа дает специалисту возможность приступить к комбинированию препаратов. В ходе терапии на основании результата ПЦР легко определить эффективность назначенного фармакологического лечения. Руководствуясь только данными иммуноферментных методов, нельзя своевременно определить факт излечения и его текущую эффективность. Поэтому количественный real-time тест — необходимый анализ перед началом лечения острого гепатита, латентного вирусоносительства с высокой виремией и хронического HBV.

Расшифровка результатов количественного ПЦР-теста должна проводиться лечащим врачом пациента. Необходимо дать оценку диагностического показателя и определить терапевтическую тактику.

Стандартный анализатор способен выдавать количественный показатель, который отражает число копий вирусной ДНК, присутствующих в исследуемой венозной крови. Единицы измерения — копии/мл, МЕ/мл (копии на миллилитр, международные единицы на миллилитр). Расшифровка результатов приведена в таблице с указанием разных единиц измерения.

источник