Лабораторная диагностика оспы свиней

Оспа свиней – вирусное заболевание, вызываемое несколькими видами возбудителей, родственными тому, кто поражает человека. Болезнь протекает остро с повышением температуры, сильной интоксикацией и образованием на теле пузырьков с водянистым содержимым. Каждый фермер должен иметь представление о том, как происходит заражение животных, как проявляются симптомы заболевания и как его лечить.

Признаки оспы у домашнего скота

Оспу вызывает эпителиотропный вирус, содержащий молекулу ДНК. Существует около 20 разных видов возбудителя оспы. Свиньи могут поражаться несколькими разновидностями вируса:

Осповакцины.
Вирусом оспы коров.
Вирусом оспы свиней.

Возбудитель проникает в организм различными путями – через слизистую оболочку, через микроповреждения на коже, а также вместе с кормом. Источниками заражения могут быть особи-вирусоносители, которые в данный момент находятся в инкубационном периоде, или больные свиньи, коровы. Человек тоже может стать источником заражения вирусом осповакцины.

Возбудитель проявляет устойчивость к замораживанию, высушиванию. Он долгое время сохраняется на шерсти скота, на предметах, в корме, — до 6 месяцев. Ещё дольше он может сохраняться в клетках кожи, например, во фрагментах корочек, которые отделились от тела больного животного. Под воздействием ультрафиолета, ультразвука и кислот вирус разрушается.

Свиньи наиболее подвержены заражению в холодное время года. Осенью и зимой, когда животные постоянно находятся в помещении, их рацион оскудевает, а иммунная система ослабевает, вероятность возникновения вирусных заболеваний повышается.

Плохие условия содержания свиней

Имеют значение и условия содержания свиней. Если в свинарнике сыро, прохладно, это негативно сказывается на резистентности организма. Рассмотрим основные причины распространения оспы:

Неполноценный рацион.
Плохие условия содержания.
Несоблюдение правил карантина вновь прибывших на ферму животных.
Пренебрежение дезинфекцией помещений после случаев заражения оспой.
Приём на ферму предметов одежды, обихода, инвентаря, корма из неблагополучных хозяйств, где были зарегистрированы случаи оспы.
Кожные паразиты – вши, блохи, клещи и различные насекомые могут стать причиной инфицирования свиней.

Справка. Самым основным фактором, влияющим на распространение оспы в хозяйстве, является снижение сопротивляемости иммунной системы животных. Вот почему осенью и зимой рекомендуется тщательно следить за рационом скота, обогащать его витаминами.

После проникновения вируса в организм животного, он начинает интенсивно размножаться в клетках эпителия и слизистых оболочек. Инкубационный период болезни довольно продолжительный, он составляет 9-20 дней. Оспа свиней имеет следующие симптомы:

В первые 2 дня отмечается резкое повышение температуры до 41-41,5 градусов.
Животное теряет аппетит, оно ослаблено, угнетено.
Развивается конъюнктивит и ринит.
Примерно на 2-3 сутки температура нормализуется.
На коже образуются пятна розового цвета, розеолы.
Далее, через сутки-двое в центре розеол образуются уплотнения-папулы, обрамлённые по краям красноватой окантовкой.
Через некоторое время папулы превращаются в везикулы, когда наполняются серозным экссудатом, прозрачной жидкостью. Интересно, что оспины в этот момент имеют характерную особенность – их центр слегка вдавлен внутрь.
Везикулы самопроизвольно лопаются, содержимое (иногда гнойное) вытекает наружу, высыхает, после чего на оспинах образуются корочки.
Некротизирующие очаги внедрения вируса называют пустулами. Они имеют тёмный цвет, могут сливаться в группы, из них выделяется липкая тягучая жидкость.
Далее, наступает стадия заживления. Лопнувшие пустулы, освободившись от содержимого, покрываются струпьями, которые впоследствии постепенно отшелушиваются от кожи.
На месте бывших очагов поражения образуются рубцы из соединительной ткани.

Больные свиньи сильно ослаблены, их походка шаткая. Им доставляет беспокойство кожный зуд, поэтому они расчёсывают кожу. При распространении папул в ротовой полости затруднено пережёвывание и проглатывание пищи.

При тяжёлом течении болезни оспа свиней может продолжаться около 50-60 дней. Если же заболевание протекает в лёгкой форме, как, например, при заражении вирусом осповакцины, выздоровление наступает к концу третьей недели.

Внимание! При низкой резистентности организма больная особь подвержена развитию осложнений из-за проникновения в организм патогенных бактерий, например, у молодняка оспа нередко осложняется пневмонией, паратифом или сепсисом.

Диагноз ставится на основании клинических признаков болезни, а также лабораторных исследований:

Вирусологических;
Гистологических;
Биопроб на кроликах, поросятах.

Для вирусологического исследования необходимо взять фрагменты папул. В лаборатории их окрашивают специальным раствором по Морозову и рассматривают под микроскопом. В биоматериале больных оспой свиней должна просматриваться россыпь оспенных вирионов. Таким способом не всегда удаётся подтвердить диагноз, поэтому прибегают к другим методам идентификации вируса.

Биопроба на поросятах и телятах – ещё один метод исследования, он помогает с высокой точностью диагностировать заболевание, его применяют, если результат вирусологического исследования сомнителен. Для диагностики используют вирусосодержащий биоматериал, взятый от больной свиньи. Его внедряют в кожу поросят, восприимчивых к оспе. Если через 5-9 дней на скарифицированных участках подопытных животных появятся оспины, диагноз подтверждается.

Дополнительное исследование скарифицированного участка подопытного животного даёт возможность различить тип вируса, которым инфицирована больная свинья. При поражении вирусом осповакцины или коровьей оспой образуются инфильтраты без геморрагий. Если же произошло заражение вирусом генуинной оспы, то в инфильтратах обнаруживаются геморрагические инфильтраты. Под микроскопом в биоматериале свиней, инфицированных генуинной оспой, различают не только оспенные вирионы, но и белковые паракристаллы.

Больное животное при первых признаках недомогания отделяют от стада. Помещение, где оно пребывало до обнаружения симптомов болезни, дезинфицируют. Для обработки подходят следующие средства:

Горячий раствор едкого натра в концентрации 2%.
Раствор формальдегида (2%).
Сернокарболовой смеси (3%).

Животному, находящемуся в изоляторе, обеспечивают комфортные условия и покой. Недопустимо содержать инфицированных особей в холодном и сыром свинарнике. Схемы лечения оспы не существует, терапия направлена на снятие симптомов болезни и предотвращение развития осложнений.

Очаги поражения обрабатывают различными мазями и дезрастворами:

Салициловой.
Борной.
Синтомициновой.
Раствором марганцовки 5%.

Очаги поражения на слизистых оболочках протирают раствором перманганата калия (1%), перекисью, отваром ромашки, коры дуба или шалфея.

Хотя антибиотики не оказывают воздействие на вирус, их всё же применяют, чтобы предупредить развитие осложнений – пневмонии или стрептококкового дерматита. Для лечения используют преимущественно препараты пенициллинового ряда.

Если свинья не способна пережёвывать пищу или ей трудно глотать, тогда ей готовят жидкие высококалорийные болтушки. Во время болезни желательно ввести в рацион витаминные добавки для активации иммунного ответа организма.

Персонал, обслуживающий больных животных, должен соблюдать меры безопасности. Все работы с инфицированными свиньями проводятся в спецодежде и защитных перчатках. Каждый раз после контакта с заражёнными особями необходимо обрабатывать руки раствором хлорамина в концентрации 1%, а одежду и обувь подвергают дезинфекции в пароформалиновых камерах.

Профилактические меры позволят защитить поголовье от инфицирования вирусом оспы. В хозяйство не допускается ввоз предметов, кормов, инвентаря из неблагополучных пунктов. Все вновь прибывшие на ферму особи должны содержаться отдельно от стада в течение 30 дней. В это время они находятся под пристальным вниманием. Другие меры профилактики:

Поддержание нормальных условий в свинарнике — проведение своевременной дезинфекции, уборки, обеспечение хорошей вентиляции и отопления.
Обеспечение полноценного рациона и регулярного моциона, что позволит поддерживать иммунитет животных.
Введение в рацион витаминных добавок, особенно в осенне-зимний период.
Своевременная диагностика заболеваний – всех свиней нужно периодически осматривать, чтобы вовремя отделить больных особей в изолятор.

В случае обнаружения в хозяйстве случаев оспы необходимо сообщить об этом ветеринару. На ферму будет наложен карантин, во время которого не допускается вывоз животных, инвентаря, корма, одежды персонала за пределы фермы. Карантин снимается через 21 день после того, как выздоровеет или умрёт последнее заражённое животное.

Внимание! Навоз, туши погибших от оспы животных требуют утилизации.

Оспа свиней представляет особую опасность для поросят-сосунов и отъёмышей, так как их иммунная система намного уязвимее, чем у взрослых особей. Молодняк нередко страдает от осложнений, возникших на фоне вирусного заболевания, — пневмонии, бронхопневмонии. Вот почему целесообразно сразу начинать применять антибиотики. В целом прогноз по оспе благоприятный. После выздоровления животные приобретают иммунитет к тому виду вируса, который вызвал недуг. Однако свиньи остаются восприимчивыми к другим видам возбудителя.

источник

Лабораторная диагностика оспы овец

Оспа овец — острая контагиозная болезнь, протекающая с характерными папулезно-улезными поражениями кожи морды и других мест со слабым волосяным покровом (экзантема) и слизистых оболочек. В 1964 г. на XII сессии Генерального Комитета МЭБ оспу овец внесли в список наиболее опасных (конвенционных) болезней животных. Она широко распространена в соседних странах, занимающихся овцеводством. Эпизодически в результате заноса из неблагополучных соседних стран бывают вспышки в южных регионах России.

Диагноз ставят с учетом эпизоотологических данных, результатов клинического обследования, биопробы и вирусоскопии мазков из свежеразвившихся первичных очагов поражения или мест инокуляции вируса при постановке биопробы. В этих случаях необходимо найти животных с характерными оспинами гнездно-сетчатого строения с кратерообразными углублениями, чего при других экземах, как правило, не бывает. При типичном течении диагностировать оспу не трудно. При тщательном обследовании овец пораженной отары всегда можно найти отдельных животных с типичными оспинами на разных стадиях формирования. У одного и того же животного оспины образуются не одновременно, одни находятся в стадии розеол, другие — в стадии папул.

Лабораторная диагностика оспы основана на выделении вируса, вирусоскопии мазков препаратов из срезанного эпителия розеолы, на присутствие элементарных телец, постановке биопробы, РИФ, РДП.

Выделение вируса.Для исследования берут содержимое везикул или пустул, поверхность которых предварительно очищают ватным тампоном, смоченным эфиром или спиртом. Для гистологического исследования вырезают измененные участки кожи на границе с неизмененными. Патологический материал для вирусологических исследований следует пересылать в замороженном или охлажденном (до 4-6°С) виде. Обычно при абортивном и неясном течении болезни ставят биопробу на неиммунных молодых овцах. Испытуемую суспензию, приготовленную общепринятым методом в разведениях 1:20 и 1:200, инокулируют внутрикожно в бесшерстную поверхность хвоста в дозе 0,1-0,15 мл. Наблюдение ведут в течение 10 дн. В положительных случаях на месте инъекции развивается местный оспенный процесс (розеола, папула, везикула, пустула, некроз), специфичность которого подтверждают методом вирусоскопии мазков, приготовленных из срезанного эпителия розеолы, на присутствие элементарных частиц.

ИФ.Исследование (прямой метод) проводят общепринятым методом. При наличии ВОО в клетках инфицированной культуры с 6-8-го ч после заражения в отдельных участках цитоплазмы появляются светящиеся очаги. Позже начинают светиться обширные участки.

РДП.Для получения сыворотки, годной для использования в РДП, иммунизируют кроликов овиной, делают 2-4 внутривенные инъекции в объеме 2; 1; 0,5 и 0,25 мл с интервалом в 5 дн. Через 7 дн после последней инъекции у кроликов берут кровь для получения сыворотки. Полученные кроличьи сыворотки необходимо истощить культурой фибробластов эмбриона овцы. РДП ставят общепринятым методом.

Дифференциальная диагностика.Оспу овец и коз в стадии образования пустул и корок следует дифференцировать от чесотки, пустулезной экземы и контагиозного пустулезного дерматита (эктимы) овец и коз.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Как то на паре, один преподаватель сказал, когда лекция заканчивалась — это был конец пары: «Что-то тут концом пахнет». 8181 — | 7873 — или читать все.

источник

Оспа свиней (Variola suum) – контагиозная болезнь, протекающая с признаками интоксикации, лихорадки, узелковой пустулезной сыпи на коже (экзантемы) и на слизистых оболочках (энантемы).

Возбудитель. Заболевание может вызываться несколькими возбудителями: вирусами оспы коров или осповакцины, близкими в антигеном и иммуногеном отношении к вирусу оспы человека.

Вирусом оспы свиней (оригинальным, собственным), опасным только для этого вида животных.

Свиньи, переболевшие оспой, вызванной вирусом оспы свиней, сохраняют восприимчивость к вирусам оспы коров и осповакцины, и наоборот.

Химический состав вирусов оспы, сложный и близок химическому составу бактерий. Они содержат азот, липоиды, углеводы и др. вещества. Размножаются вирусы оспы, как правило, в цитоплазме. Большинство их чувствительно к 20%-ному этиловому эфиру и кислой среде (рН 3-3,6),но они сравнительно термостабильны (более 30 мин) в водяной бане при температуре 50°С.

Вирусы, находящиеся в клетках тканей, могут сохранять жизнеспособность месяцами, особенно в сухих корочках, отпавших с оспин в холодное время года. Хорошо сохраняются при минусовых температурах и высушивании. Замораживание консервирует вирусы. Они быстро разрушаются под действием ультразвука и прямых ультрафиолетовых лучей. Инактивируют возбудителей оспы 2-5%-ные растворы серной, соляной и карболовой кислот, 0,5%-ные растворы формалина и сулемы, 1-4%-ные растворы хлорамина. К антибиотикам вирус нечувствителен.

Эпизоотологические данные. Основные источники вируса — больные и вирусоносители (животные в инкубационном периоде и переболевшие). Больные животные выделяют его со слюной, истечениями из носа, глаз и отторгаемыми оспинами. В высохших тканях вирус может сохранять свою жизнеспособность до года и более. Свиньи болеют оспой независимо от времени года и природно-климатических условий, но чаще и тяжелее зимой и ранней весной, когда у животных наблюдается недостаток витаминов, простуда, пониженная резистентность организма. Более чувствительны к вирусу оспы свиньи скороспелых пород и молодняк. Тяжело переболевают поросята – сосуны и отъемыши от неиммунных маток и свиноматок.

В естественных условиях, заражаются обычно здоровые животные при контакте с больными, через загрязненные вирусом корм и воду, подстилку, а также аэрогенным путем. Чаще всего вирус оспы проникает в организм через кожу и слизистую оболочку, особенно при нарушении их целостности. Вирус оспы могут разносить грызуны и накожные паразиты, особенно вши, у которых он может сохраняться до года и больше, а также москиты.

Читайте также: Оспа фото после болезни

При эпизоотиях, вызванных вирусом генуинной оспы свиней, болезнь быстро охватывает до 80% животных, но у каждого из них она протекает сравнительно медленно (20-60 дней) в отличие от «коровьей» оспы и осповакцины. Неблагоприятные условия содержания способствуют снижению резистентности организма, возникновению оспы, распространению вируса и усугублению течения болезни.

Патогенез. Попав в организм свиньи, вирус на месте внедрения начинает размножатся в эпителиальном слое кожи и слизистой оболочке органов дыхания или желудочно-кишечного тракта, образуя оспенные фокусы. Выраженность оспин зависит от резистентности и реактивности организма, вирулентности штамма, путей проникновения его в организм и состояния эпителиального слоя. Из первичных очагов вирус оспы, уже в первые сутки проникает в кровь, лимфатические узлы и внутренние органы (вызывая вирусемию). В клетках РЭС он интенсивно размножается, что сопровождается вторичной вирусемией. Кровью вирус переносится к сосочковому слою кожи и в слизистые оболочки, обычно в места травмированного эпителия, еще не пораженного вирусом. Таким образом возникают вторичные оспенные поражения. Это сопровождается повышением температуры тела, лихорадкой, изменениями в клетках крови, кроветворных органах. Формирование оспин в коже проходит ряд определенных стадий.

Стадия предвестников совпадает с наличием вируса в крови и характеризуется лихорадкой, катаральным ринитом и конъюнктивитом.

Стадия высыпания оспенных экзантем и энантем — первое проявление развивающегося в эпителиальной ткани вируса происходит через 1-2 дня, когда температура тела у больного поросенка снижается (вирус исчезает из крови), на коже появляются небольшие розоватые пятна-розеолы.

Через 1-3 дня в результате пролиферации и очень быстрого размножения эпителиальных клеток в местах внедрения вируса, в центре розеол образуются плотные припухлости кожи, окруженные красным пояском, — стадия папул. Если процесс затихает, эпителий некротизируется, узелки, подсыхая, превращаются в корочки, после отпадания которых эпителий полностью регенерируется. Однако чаще из папул формируются везикулы. Размножившиеся эпителиальные клетки подвергаются дегенерации и, лизируясь, образуют обычно щели и полости, заполненные прозрачной серозной жидкостью. Клетки, не подвергшиеся дегенеративному процессу, под давлением лимфы вытягиваются в тонкие тяжи, образующие рыхлое сетчатое строение между небольшими сообщающимися друг с другом полостями. Так в течение 2-3 дней возникают пузырьки сетчатого строения, верхушки которых как бы вдавлены внутрь, — везикулы. Стадия везикул обычно плохо заметна у свиней. Вокруг везикул разрастается эпителиальный слой, а в центре их образуются впадины. Содержимое везикул, в котором скапливается масса лейкоцитов, разрушает каркас пузырьков. При появление пиогенных микробов, содержимое становится гнойным; везикулы превращаются в некротизирующие оспины-пустулы; иногда они лопаются и из них вытекает тягучая липкая жидкость. В этот период состояние больных поросят ухудшается, происходит повышение температуры тела. Через 3 дня стадия нагноения переходит в стадию заживления (стадию образования струпьев, корочек — крустозную стадию).

Содержимое пустул подсыхает, образуются бурые струпья. Находящаяся под ними собственно кожа покрывается свежим эпителием. При отпадении корочек обнаруживается гранулирующая поверхность со следами гноя.

Клинические признаки. Инкубационный период -2-10 дней. До появления оспин у свиней отмечаем кратковременное повышение температуры тела до 41-41,8°С, появляются катаральные конъюнктивиты и риниты. Поросята угнетены, аппетит у них понижен. В дальнейшем на коже лицевой части головы, ушей, живота, внутренней поверхности бедер и других мало покрытых щетиной участков тела появляются розеолы. В центре их образуются узелки, которые через 2-3 дня превращаются в пустулы достигающие размеров 1,5-2,5 см в диаметре, с красновато-синим ободком и западающей серединой.

В том случае если папулы сливаются, то наблюдаем так называемую сливную форму оспы. После вскрытия оспины лопаются, их содержимое подсыхает и образуются черно-коричневые струпья, которые через 5-8 дней отпадают и на их месте остаются соединительнотканные рубцы. На слизистой оболочке оспины у поросят превращаются в эрозии и язвы. У отдельных свиней отмечаем шаткую походку, диарею, зуд и расчесы кожи. С момента появления оспин повышенная температура тела у свиней, если нет осложнений, понижается. При нагноении оспин, перед появлением вторичных оспин и при осложнениях оспы температура тела у свиней может снова повыситься.

Процесс образования оспин (от розеол до рубца) продолжается около 20 дней, но может затянуться до 45-60 дней. Подобное наблюдают, когда возникают вторичные оспины и при поражении больших участков кожи и слизистых оболочек. При доброкачественном течении оспы рубцы у свиней могут отсутствовать (это бывает чаще после заражения свиней вирусом осповакцины).

Если у свиней протекает сливная форма оспы, то болезнь протекает тяжело, и прогноз в таком случае неблагоприятный, как и при геморрагической (черной) оспе, когда наблюдают геморрагическую инфильтрацию папул.

Оспа часто осложняется бронхопневмонией (чаще у поросят), паратифом, кокковым сепсисом и другими инфекционными болезнями. При возникновении осложнений падеж у поросят достигает до 40% и более, причем главным образом среди истощенных и слаборазвитых поросят.

Раньше злокачественное течение оспы диагносцировали даже как эруптивную форму рожи.

Патологоанатомические изменения характеризуются наличием остаточных признаков экзантемы и энантемы в области рта, носа, глотки, иногда трахеи и бронхов. Регионарные лимфатические узлы увеличены, клетчатка окружающая их отечна, у отдельных животных наблюдаем явления очаговой пневмонии. При остро протекающем катаральном или геморрагическом гастроэнтерите на верхушках складок слизистой оболочки желудка видны оспины в виде плоских возвышений серо-красного цвета, эрозий и изъязвлений.

Цитоморфологические изменения в оспинах характеризуются признаками гиперплазии эпидермиса с образованием массивных гребешков, внедрившихся в дерму, вакуолизации и ретикулярной дистрофии эпидермиса и соединительной ткани дермы. Нахождение специфических изменений в эпителиальных клетках может служить основанием для подтверждения оспы.

Диагноз основан на анализе эпизоотологических, клинических данных, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных (вирусологических, гистологических) исследований и биопробы на поросятах, кроликах и телятах, в последних случаях при подозрении на «коровью « оспу и осповакцину.

Для вирусологических исследований берут патологический материал (срезы оспенной сыпи), который помещают в стерильные пробирки с резиновыми пробками. Снаружи пробирки обрабатывают 3%-ным раствором хлорамина, упаковывают в пеналы и направляют с нарочным в ветеринарную лабораторию или научно-исследовательское ветеринарное учреждение.

При вирусологических исследованиях в пораженных участках кожи обнаруживают характерные скопления оспенных вирионов в виде россыпи (в мазках, окрашенных по Морозову). Однако отсутствие их в препарате еще не исключает оспу. При затруднениях в постановке диагноза в изоляторе проводят биопробу на восприимчивых к оспе поросятах. Если в патологическом материале есть вирус оспы, то на 5-9-ый день на коже по линии скарификации и нанесения суспензии исследуемого материала образуются характерные оспины, которые проходят определенные стадии формирования от розеол-папул до пустул и корок.

Гистоисследованиями, установив вакуолизацию ядер кератиноцитов пораженного эпидермиса кожи, подтверждают заболевание, вызванное вирусом генуинной оспы. Пикнотические изменения ядер гиперплазированных кератиноцитов при наличии ацидофильных цитоплазматических включений подтверждает оспу, вызванную вирусами оспы коров или осповакцины.

Для индентификации вида вируса ставят биопробу на кроликах. После втирания суспензии, содержащей вирус оспы коров, по линии скарифицированной кожи через 3-5 дней, образуются геморрагические инфильтраты (вирус осповакцины вызывает инфильтраты без геморрагий). При электронной микроскопии материал от свиней, зараженных вирусом генуинной оспы, в препаратах видны оспенные вирионы и белковые паракристаллы, а зараженных вирусами оспы коров или осповакцины –только оспенные вирионы.

Дифференциальный диагноз. Оспу у свиней следует дифференцировать от экзантем незаразной этиологии (при гиповитаминозах, аллергиях, нарушениях обмена веществ), от оспоподобных сыпей при энзоотической бронхопневмонии, стрептококковом сепсисе, сальмонеллезе, чесотке и трихофитии. Мы должны также исключить ящур. Везикулярную болезнь и вирусную экзантему свиней.

Иммунитет. Естественный иммунитет к оспе у поросят-сосунов не вырабатывается. У поросят в возрасте старше 2 месяцев, отъемышей после переболевания вырабатывается иммунитет на 3,5-6 месяцев и больше. Взрослые свиньи остаются иммунными сравнительно долго, особенно после переболевания оспой, вызванной вирусом генуинной оспы. Невосприимчивость у свиней бывает выражена уже через 11-12 дней. После появления первой оспенной папулы. Животные переболевшие «коровьей» оспой и вирусом осповакцины, остаются восприимчивыми к вирусу генуинной оспы, и наоборот.

Мероприятия по профилактике оспы свиней строятся исходя из инструкции о мерах по профилактике и ликвидации оспы свиней. Утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 18 октября 1984года, а именно.

Для предупреждения возникновения заболевания свиней оспой и ее распространения руководители хозяйств, организаций и учреждений, зооветеринарные специалисты, а также граждане-владельцы животных обязаны:

не допускать ввоза (ввода) в хозяйство, ферму, отделение, в населенный пункт животных, а также кормов из хозяйств и населенных пунктов, неблагополучных по оспе;
всех вновь поступивших в хозяйство животных карантинировать в течение 30 дней;
содержать в надлежащем ветеринарно-санитарном состоянии животноводческие помещения, выгульные дворы и площадки, места кормления и водопоя;
обеспечивать систематическое наблюдение за состоянием животных.

При подозрении на оспу необходимо изолировать больных и подозрительных по заболеванию свиней и сообщит об этом ветеринарному специалисту, обслуживающему хозяйство или населенный пункт.

Ветеринарный специалист, в случае обнаружения у этих животных характерных для оспы признаков сообщает об этом главному ветеринарному врачу района, отбирает и направляет патологический материал для лабораторных исследований, проводит клинический осмотр всех остальных подозреваемых в заражении животных и совместно с руководителем хозяйства организует изоляцию больных, подозрительных по заболеванию и подозреваемых в заражении животных свиней от остального поголовья.

При установлении диагноза на оспу свиней хозяйство (ферму, отделение, населенный пункт) Постановлением Губернатора области объявляют неблагополучным по оспе свиней и в нем вводят ограничения.

В неблагополучном пункте запрещают:

ввод и вывод за его пределы свиней;
вывоз из него шкур, другого сырья животного происхождения, а также фуража. Фураж, с которым имели контакт больные и подозрительные по заболеванию оспой свиньи, скармливают на месте больным, переболевшим этой болезнью свиньям;
перегруппировку поголовья свиней без ведома главного (старшего) ветеринарного врача, обслуживающего этот пункт;
проведение выставок, ярмарок, базаров, а также других мероприятий, связанных со скоплением животных на неблагополучной территории;
доступ лиц, не связанных с обслуживанием неблагополучных по оспе свиней групп, в места содержания этих животных.

Ограничивают ввод и вывод за его пределы крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, кроликов.

Идентифицируют вирус, вызвавший заболевание в хозяйстве. Для этого изолируют несколько голов свиней (не менее двух), уже переболевших оспой, и им в свежескарифицированную поверхность кожи на тыльной стороне уха, ближе к основанию, или на внутренней части бедра втирают оспенную вакцину (из вируса осповакцины).

Отсутствие реакции на вакцину у животных (образование оспенных пустул на месте введения) говорит о наличие в пункте оспы свиней, вызванной вирусом оспы коров или осповакцины. Положительная реакция на вакцину говорит о заболевании свиней оспой, вызванной оригинальным вирусом оспы свиней.

При установлении оспы, вызванной вирусом оспы коров или осповакцины, здоровых свиней прививают сухой оспенной вакциной (из вируса осповакцины) в соответствии с действующим наставлением по ее применению для свиней.

Свиней, больных оспой, изолируют и подвергают симптоматическому лечению независимо от возбудителя, вызвавшего заболевание, а именно:

при распространение сыпи с целью предупреждения развития вторичной инфекции и осложнений внутримышечно вводят пенициллин и стрептомицин в соответствии с наставлением по их применению;
пораженные участки кожи обтирают 5%-ным раствором перманганата калия, местно применяют примочки из буровской жидкости и мазей, содержащих антибиотики;
при наличии высыпаний, эрозий, возникновении некротических очагов на слизистой оболочки рта и глотки пораженные участки промывают 1%-ным раствором перманганата калия или борной кислоты, 3%-ным раствором перекиси водорода, отварами шалфея, ромашки и другим дезинфицирующими и вяжущими средствами;
при затрудненном жевании и глотании животным дают высококалорийные, богатые витаминами корма в жидком или полужидком виде. В кормах не должно быть раздражающих веществ;
при соответствующих показаниях применяют сердечные и другие симптоматические средства.

Санитарную оценку мяса и других продуктов, полученных от убоя больных и подозрительных по заболеванию свиней, осуществляются согласно действующим Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

Шкуры и щетина, полученные от животных в период неблагополучия хозяйства по оспе, дезинфицирует согласно действующей Инструкции по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке.

Свиней, павших при наличии клинических признаков оспы, утилизируют вместе со шкурами.

В очаге оспы животноводческие помещения, оборудование, предметы ухода, а также места, в которых находятся больные животные, дезинфицируют через каждые 5 дней в течение всего периода неблагополучия хозяйства по оспе.

Для дезинфекции применяют: 4%-ные или горячие 2%-ные растворы едкого натра, калия; 20%-ную взвесь свежегашеной извести; осветвленный раствор хлорной извести, содержащий 2% активного хлора; горячий 3%-ный раствор сернокарболовой смеси или 2%-ный раствор формальдегида.

Навоз и навозную жижу обеззараживают согласно Инструкции по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации.

Лица, занятые на работе в очаге оспы свиней, должны быть обеспечены двумя сменными комплектами спецодежды и необходимыми предметами ухода за животными. Спецодежду и предметы ухода за животными запрещаются выносить из животноводческих помещений.

Спецодежду и спецобувь ежедневно после работы дезинфицируют в пароформалиновой камере или обрабатывают 3%-ным раствором хлорамина, 3% -ным раствором хлорной извести в соответствии с действующей Инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации.

Руки обрабатывают 1%-ным раствором хлорамина.

Ограничения с пункта, неблагополучного по оспе свиней, снимают по истечении 21 дня после полного выздоровления, падежа или убоя больных оспой животных, обработки кожных покровов свиней 1-1,5 %-ным раствором креолина или лизола, 0,3%-ным раствором едкой щелочи, а также проведения заключительных мероприятий.

источник

1. БОЛЕЗНИ, ОБЩИЕ ДЛЯ ВСЕХ ИЛИ НЕСКОЛЬКИХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ

1.6. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ОСПЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ОВЕЦ, КОЗ, СВИНЕЙ И ВЕРБЛЮДОВ

УТВЕРЖДЕНЫ 12 ноября 1985 г., N 115-6а

1.1. Оспа — контагиозная болезнь животных, протекающая с признаками аутоинтоксикации, лихорадки и узелково-пустулезной сыпи на коже (экзантемы) и на слизистых оболочках (энантемы), проходящей определенные стадии формирования: розеола — везикула — папула — пустула — струп.

1.2. Оспа у разных видов животных вызывается следующими вирусами:

— крупный рогатый скот — оспы коров или осповакцины;

— овцы — оспы овец;

— козы — оспы коз;

— свиньи — оспы свиней, оспы коров или осповакцины;

— верблюды — оспы верблюдов, оспы коров или осповакцины.

1.3. Лабораторная диагностика оспы животных включает в себя:

— обнаружение в патологическом материале оспенных частиц (вирионов) методом вирусоскопии;

— обнаружение цитоплазматических ацидофильных включений в пораженных участках кожи больного или зараженного животного гистологическим методом;

— выделение вируса на куриных эмбрионах (КЭ) с последующей его идентификацией;

— биологическую пробу (в сомнительных случаях) на естественновосприимчивых животных.

2.1. Патологический материал отбирают не менее чем с 5 участков пораженной кожи. Для сбора и консервирования материала используют стерильные инструменты, посуду и консервирующие растворы.

Материал от больных животных, обработанных моющими или дезинфицирующими растворами (едкого натра и др.), к исследованию не пригоден.

2.2. Для исследования в лабораторию направляют:

— мазки, сделанные из содержимого везикул больного животного, и мазки-отпечатки с оспенных поражений кожи;

— патологический материал от больных животных (содержимое везикул, целые папулы и пустулы, иссеченные вместе с субэпидермальной отечной тканью).

2.3. Мазки высушивают на воздухе, складывая так, чтобы они не соприкасались между собой, и упаковывают в целлофан.

2.4. Везикулярную жидкость собирают в капилляры пастеровских пипеток, которые затем помещают в пробирки с резиновыми пробками.

2.5. Папулы и пустулы иссекают ножницами вместе с отечной тканью и помещают в два стерильных флакона: один — с 50%-ным раствором глицерина, второй — с 10%-ным раствором формалина.

2.6. Отобранный материал (пробирки и флаконы с патологическим материалом предварительно обрабатывают снаружи 3%-ным раствором хлорамина) упаковывают в металлические коробки или пеналы и направляют с нарочным в лабораторию. Неконсервированный материал доставляют в термосе со льдом в день отбора.

3.1. Для обнаружения вирусных оспенных частиц (вирионов) исследуют мазки и мазки-отпечатки из патологического материала окрашенные по методу Морозова или Пашена (см. приложение 1).

При микроскопии в препаратах обнаруживают множество мелких частиц кокковидной формы, расположенных поодиночке, парами или в виде скоплений. При окраске по Морозову оспенные частицы имеют темно-коричневый цвет, по Пашену — темно-красный.

3.2. Результат исследования считают положительным только при обнаружении вирионов в массовом количестве (в виде россыпей). При отрицательном результате вирусоскопического исследования, а также при обнаружении единичных вирионов проводят дальнейшие исследования.

4.1. Из фиксированных формалином проб кожи на замораживающем микротоме готовят срезы, которые окрашивают гематоксилин-эозином.

Ознакомиться с документом вы можете, заказав бесплатную демонстрацию систем «Кодекс» и «Техэксперт».

источник

Методические указания по лабораторной диагностике оспы крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и верблюдов

Купить бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку «Купить» и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль».

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
Курьерская доставка (7 дней)
Самовывоз из московского офиса
Почта РФ

Учебное издание содержит действующие методические указания, наставления и инструкции по лабораторной диагностике вирусных болезней животных, утвержденные Министерством сельского хозяйства СССР, РФ и Россельхознадзором РФ. Документы систематизированы по видам животных, в большинстве прошли многолетнюю аппробацию в Алтайской краевой ветеринарной лаборатории и включены в «Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения» (по состоянию на июль 2011 г.). Приводятся предметный указатель и библиографический список.

Предназначено для студентов, обучающихся по специальности «Ветеринария» и направлению «Ветеринарно-санитарная экспертиза», ветеринарных врачей и лаборантов ветеринарных лабораторий.

2. Отбор, упаковка и пересылка патологического материала

3. Вирусоскопическое исследование

4. Патогистологические исследования

5. Выделение возбудителя на куриных эмбрионах

Краткий словарь использованных ветеринарных терминов

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ

П. И. Барышников, В. В. Разумовская

— САНКТ-ПЕТЕРБУРГ • •МОСКВА-• КРАСНОДАР• •2015-

Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

Кожу вентрального бесшерстного участка хвоста подопытных животных обрабатывают 70°-ным этиловым спиртом, затем шприцом внутрикожно в два участка вводят по 0,2 мл надосадочной жидкости исследуемой суспензии (в разведениях 1:20 и 1:200).

Биопробу на оспу считают положительной при появлении у ягнят (козлят) на 6. 8-й день после заражения характерных оспенных розеол, папул и пустул.

6.4. Биопробу на оспу свиней ставят на двух клинически здоровых поросятах в возрасте 2. 3 мес. Кожу живота поросят в 4 участках размером 4,0х4,0 см выбривают, обрабатывают спиртом, затем скарифицируют, делая насечки длиной по 3 см. В скарифицированную поверхность кожи каждого участка втирают шпателем по 0,6 мл надосадочной жидкости исследуемой суспензии.

Результат исследования на оспу свиней считают положительным при образовании по ходу насечек через 6. 8 дней после заражения характерной узелково-пустулезной сыпи и обнаружении в патматериале с этих мест методом микроскопии вирусных оспенных частиц.

6.4.1. Дифференциацию возбудителя, вызвавшего оспу у свиней, проводят на куриных эмбрионах (п. 5) или на поросятах. С этой целью используют 2 поросят, переболевших оспой (подопытные) и 2 здоровых (контрольные). Подопытным и контрольным поросятам втирают в два участка скарифицированной кожи по 2 капли растворенной сухой оспенной вакцины, изготовленной из вируса осповакцины.

Развитие оспин на скарифицированной коже подопытных и контрольных животных через б. 8 дней после нанесения вируса осповакцины указывает на наличие в хозяйстве оспы, вызванной вирусом оспы свиней.

Отсутствие оспенных поражений на коже подопытных животных (при положительной поствакцинальной реакции у контрольных поросят) свидетельствует о наличия у свиней оспы, вызванной вирусом оспы коров или осповакцины.

6.5. Биопробу на оспу верблюдов проводят на одном верблюжонке (отлученном от матки). Кожу бесшерстного вентрального участка хвоста или бесшерстного участка бедра

L Болезни, общие для всех или нескольких видов шкюгшшх 105

. 1111. mill. Ilium. ши. iimiuiuim.

животного обрабатывают спиртом, затем с помощью шприца внутрикожно в два участка вводят по 0,2 мл надосадоч-ной жидкости исследуемой суспензии в разведении 1:20 и 1:200.

Результат исследования на оспу верблюдов считают положительным при образовании на 5. 7-й день после заражения в местах инокуляции суспензии из патматериала папул и пустул, а также обнаружении в них методом виру-соскопии оспенных частиц.

6,5.1. Для дифференциации вируса оспы верблюдов от вируса оспы овец, коров и осповакцины переболевшему оспой и здоровому (контрольному) животным наносят глаз-ной пипеткой на свежескарифицированную поверхность кожи 2. 3 капли растворенной сухой оспенной вакцины, изготовленной из вируса осповакцины.

Развитие на месте скарификации кожи на 6. 7-й день после нанесения вакцины пустул у подопытного и кон-трольного животных показывает на наличие в хозяйстве оспы, вызванной вирусом оспы верблюдов.

Отсутствие реакции у подопытного животного (при положительной поствакцинальной реакции у здорового контрольного животного) свидетельствует о наличии в хозяйстве оспы, вызванной вирусом оспы коров или осповакцины.

7. Диагноз на оспу животных считают установленным при получении положительного результата по одному из методов исследования, указанных в п, 1.2.

8. Срок исследования: вирусоскопического — 1 день; гистологического — 3. 4 дня; выделения возбудителя — 6. 12 дней; биопробы — 9 дней.

Настоящие Методические указания разработаны Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов (авторы старшие научные сотрудники Е. И. Скалинский, Ю. Ф. Борисович).

ПРИЛОЖЕНИЕ к Методическим указаниям по лабораторной диагностике оспы крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и верблюдов от 12 ноября 1985 г.

1, Метод окрашивания элементарных частиц.

106 Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

1.1. Окраска по Морозову. Для окрашивания по Морозову предварительно готовят три реактива:

■ реактив № 1 (жидкость Руге): 1 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл 40% -ого формальдегида и 100 мл дистиллированной воды;

N реактив № 2:5 г танина, 100 мл дистиллированной воды и 1 мл жидкой карболовой кислоты;

■ реактив № 3: 5 г кристаллического азотнокислого серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды; из этого раствора в отдельный сосуд отливают 20 мл. К 80 мл оставшегося раствора по каплям добавляют 25%-ный раствор аммиака, пока образующийся жел-товато-коричневый, а затем буро-черный осадок не растворяется и не останется лишь легкая опалесценция. Если добавление аммиака вовремя не прекращено, то берут раствор азотнокислого серебра (из 20 мл) и добавляют его по каплям до появления легкой опалесценции. Для окраски препаратов готовый реактив разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:10.

На приготовленные препараты (п. 2.2) наносят реактив

№ 1 (жидкость Руге), который через 1 мин сливают; промывают дистиллированной водой и протравливают реактивом № 2 при подогревания над пламенем спиртовки до появления паров (1. 2 мин). Затем после промывания водой препараты покрывают одним слоем фильтровальной бумаги и обрабатывают реактивом № 3 при легком подогревании, пока мазки приобретут темно-коричневую окраску, после чего их вновь тщательно промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.

1.2. Окраска по Пашену. Для окраски по методу Паше-на предварительно готовят раствор для протравы по Леф-флеру, состоящий из 20% -ого водяного раствора танина — 100 мл насыщенного водного раствора сернокислого записного аммиачного железа — 50 мл и насыщенного спиртового раствора основного фуксина — 10 мл.

Перед окраской раствор фильтруют, наносят его на препараты, осторожно подогревают до появления паров и оставляют на несколько минут для остывания, затем смывают

L Болезни, общие для всех или нескольких видов животных 107

llllltMIIIIIIIIIIIIIIIII|llirilllllllllllIIIIIIIIIII)l|l(IIIIIIIIIIIJIII1llllllllll|||tlll|iHINII|ll|JIHIIItl ШИП lljlllllUIIIIMII№IIIM!IIIIHtlllll№IIIIIIIIIIIHnilllUIIIIIIIIIMIIIIIIIIttlllHlllllllllllUIIIJIIII!IIIIIIIN II

дистиллированной водой и наносят на препараты карболовый фуксин Циля; осторожно подогревают до появления паров, оставляют для остывания и снова промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.

Антигены (анти + греч. genes — порождающий) — чужерод-ные для организма высокомолекулярные органические вещества коллоидной структуры (белки, белково-липидные и белково-полисахаридные комплексы), способные при поступлении (введении парентерально) вызывать синтез особых глобулинов-антител и вступать в специфическое взаимодействие с ними.

Антитела (анти. + тело) — противотела — специфические белки (иммуноглобулины), образующиеся в организме под воздействием антигенов. Они накапливаются в сыворотке крови и тканях, вступают в специфическую связь с соответствующими антигенами и разрушают или обезвреживают их.

Биологическая проба (биопроба) — один из методов диагностики инфекционных болезней с помощью заражения патологическим материалом подопытных животных (куриных эмбрионов, культур клеток) и их исследования.

Вирион — полноценная внеклеточная вирусная частица.

Вирусовыделение — выделение возбудителей инфекции из организма больного животного или вирусоносителя.

Вирусоносительство — наличие возбудителя инфекции в определенных органах и тканях клинически здорового животного, не сопровождающееся иммунологической перестройкой организма.

Вирусы (лат. virus — яд) — облигатные внутриклеточные паразиты, отличающиеся от растительных и животных организмов малыми размерами, отсутствием клеточного строения и автономного метаболизма, наличием только одного типа нуклеиновой кислоты и дезъюнктивным способом размножения.

Краткий словарь использованных ветеринарных терминов 665

В. безоболочечные — вирусы, в структуре которых отсутствует липопротеидная оболочка,

В. оболочечные — вирусы, в структуре которых присутствует липопротеидная оболочка.

Вирусоскопия (вирусы +■ skopeo — смотрю, наблюдаю) — метод микроскопического изучения морфологии вирусов.

Гемагглютинация (греч. haima — кровь + agglutinatio — склеивание) — склеивание и выпадение в осадок эритроцитов под воздействием вирусов, бактерий, токсинов идр., способных адсорбироваться на поверхности эритроцитов, а также ге-магглютининов.

Гемадсорбция (греч. haima — кровь + adsorbtio — поверхностное поглощение) — способность культур клеток, зараженных вирусами, адсорбировать эритроциты различных животных, что объясняется включением в плазматическую мембрану синтезирующихся вирусных белков.

Диагностика (греч. diagnostikos — способный распознавать) — раздел клинической ветеринарии о методах исследования животных для распознавания их болезней и состояния организма с целью назначения необходимого лечения и профилактических мероприятий.

Диагностический набор — набор стандартных препаратов, используемых для постановки диагноза (антиген, специфическая и контрольная сыворотки идр.).

ДНК-зондов метод — метод генодиагностики, основанный на способности меченой одноцепочечной молекулы ДНК взаимодействовать с комплементарной ей молекулой нуклеиновой кислоты определенного вируса с образованием двухцепочечной структуры.

ДНК-содержащие вирусы — вирусы* имеющие один тип нуклеиновой кислоты — ДНК, у большинства она представлена двухцепочечной структурой, у некоторых — одной цепью.

Идентификация (лат. identiftco — отождествляю) — признание тождественности, опознание-определение видовой (типовой) принадлежности микроорганизма на основании всестороннего изучения его свойств.

Иммуноферментный анализ — группа методов, позволяющих выявлять комплекс антиген — антитело с помощью субстрата, который расщепляется ферментом (пероксидазой, щелочной фосфатазой идр.) с появлением окрашивания.

Инактивация вирусов (лат. inactivus — неактивный) — уничтожение инфекционной активности вирусов путем повреждения генома физическим или химическим воздействием.

656 Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

14Г1||-|1И111Л111|111Г||||1|и IIIIMI ||MI|lllllflJllfllll-lllll|IIINIII[|i||llfflJltEmjfl||l|F| IHIUNIIIMIII |KIIIIIIIII9||IIJIHII(|l|IM|IIILIJIIIf|1l|IMII (IUIIIinKtlllllNII№lllll!NIIHIIIIIIIMI11llllllHnillRMIIIRIIIIIHIIfflllll(NIJIIIIII№ll

Тельца включения — своеобразные морфологические образования, обнаруживаемые в цитоплазме или ядрах клеток определенных тканей при некоторых вирусных инфекциях и состоящие из скопления вирионов и вирусных белков.

Термолабильность (греч. thermos — теплый + лат. labilis — нестойкий) — неустойчивый к тепловому воздействию, изменяющийся при нагревании.

Термостабильность (греч. thermos — теплый + лат. stabilis — неизменный) — сохраняющий свои свойства при нагревании.

Титр вируса — концентрация инфекционных единиц вируса в определенном объеме материала.

Цитопатогенное действие вирусов (ЦПД, цитопатический эффект) — специфическая морфологическая деструкция (разрушение) и функциональная патология зараженных вирусами клеток в культурах.

Штамм (нем. stamm — род, корень) культура микроорганизмов одного вида с одинаковыми морфологическими и биологическими свойствами.

Элементарные тельца — см. Вярион (2, 3).

1. Лабораторные исследования в ветеринарии. Вирусные, риккетсиозные и паразитарные болезни: справочник / под ред. Б. И. Антонова. — М.: Агропромиздат, 1987. — 240 с.

2. Баку лов, И. А. Эпизоотологический словарь-справочник / И. А, Бакулов, Г. Г. Юрков, В. А. Ведерников [и др.]. —

3. Нымм, Э. М. Словарь ветеринарных микробиологических и вирусологических терминов / Э. М. Нымм, К. А. Петерсон, Э, А. Аавер [и др.]. — М,: Росагропромиздат, 1989,

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ

Издание второе, исправленное

Министерством сельского хозяйства РФ в качестве учебного пособия для студентов вузов, обучающихся по направлению подготовки fcrieiiwaAbHocm-uJ «Ветеринария»

УМО вузов РФ по образованию в области зоотехнии и ветеринарии в качестве учебного пособия для студентов вузов, обучающихся по направлению подготовки (специальности) «Ветеринария»

(квалификация (степень) «Ветеринарный врач»)

• САНКТ-ПЕТЕРБУРГ • МОСКВА * КРАСНОДАР • •2015*

Агар мяео-пептонный (МПА) 101, 109, 125, 326, 3871 444, 4561 476, 483_t 542, 588 Альбумин бычий 7, 226, 618 Аппарат Киппа 126, 466

Бульон мясо-пептонный (МПБ) 7S, 101, 109, 125,

326, 444, 456, 476, 483, 496, 542, 588

— триптозо-фосфатный 519 Буфер вероналовый 35,375

— фосфатно-солевой 174, 315, 328, 561, 604

карбонатно-бикарбонатный 335, 561, 604, 618

369, 507 Гемолитическая система

Иммуноасцитическая жидкость (ИАЖ) 84

Комплемент 27, 116, 216, 300,

Метод вирусоскопии 99, 443, 548

— иммуноферментного анализа (ИФА) 88, 159, 173, 228, 233,244,314, 328, 336, 349, 406, 409, 436, 561,

— перекрестного иммунитета 64

— полимеразной цепной реакции (ПЦР) 180, 253, 307, 342, 416, 425, 625

— Рида и Менча 66, 242, 297, 324, 380, 394, 500, 523,

— электронной микроскопии 327, 593

Окраска гистопрепаратов по Ленцу 80

— мазков по Борману — Гайнуллиной 74

Перевиваемая линия почки свиньи (СПЭВ) 70, 386, 392

Л12 Лабораторная диагностика вирусных болезней животных / Сост. П. И. Барышников, В. В. Разумовская: Учебное пособие. — 2-е изд., испр. — СПб.: Издательство «Лань», 2015.— 672с,: ил, — (Учебники для вузов. Специальная литература).

Учебное издание содержит действующие методические указания, наставления и инструкции по лабораторной диагностике вирусных болезней животных, утвержденные Министерством сельского хозяйства СССР, РФ и Россельхознадзором РФ. Документы систематизированы по видам животных, в большинстве прошли многолетнюю аппробацшо в Алтайской краевой ветеринарной лаборатории и включены р «Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения» (по состоянию на июль 2011 г.). Приводятся предметный указатель и библиографический список.

И. И. ГУСЛАВСКИЙ — доктор ветеринарных наук, профессор кафедры микробиологии, эпизоотологии, паразитологии и ВСЭ Алтайского государственного аграрного университета;

В. И. ПЛЕШАКОВА — доктор ветеринарных наук, профессор, зав. кафедрой ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии Омского государственного аграрного университета им. П. А. Столыпина;

В. А СИНИЦЫН доктор ветеринарных наук, зав. отделом ФГБУ «Новосибирская межрегиональная ветеринарная лаборатория».

художественное оформление, 2015

Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

. IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIH III II IHJlimilllllll 11 Hllll I llllllllll llllll I lull HUH l (‘ПН пни МНЮ I Hill и НИ I l|U IIIIUtllilH IIIIM-t!

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ОСПЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ОВЕЦ, КОЗ, СВИНЕЙ И ВЕРБЛЮДОВ

(утверждены 12 ноября 1985 г„ № 115-6а)

1.1. Оспа — контагиозная болезнь животных, протекающая с признаками аутоинтоксикации, лихорадки и узелково-пустулезной сыпи на коже (экзантемы) и на слизи-

стых оболочках (энантемы), проходящей определенные стадии формирования: розеола — везикула — папула — пустула — струп.

1.2. Оспа у разных видов животных вызывается следующими вирусами:

и крупный рогатый скот — оспы коров или осповакцины;

в свиньи — оспы свиней, оспы коров или осповакцины;

в верблюды — оспы верблюдов, оспы коров или осповакцины.

1.3. Лабораторная диагностика оспы животных включает в себя:

ш обнаружение в патологическом материале оспенных частиц (вирионов) методом вирусоскопии;

К обнаружение цитоплазматических ацидофильных включений в пораженных участках кожи больного или зараженного животного гистологическим методом;

к выделение вируса на куриных эмбрионах (КЭ) с последующей его идентификацией;

ш биологическую пробу (в сомнительных случаях) на естественновосприимчивых животных.

2. Отбор, упаковка и пересылка патологического материала.

Материал от больных животных, обработанных моющими или дезинфицирующими растворами (едкого натра и др,), к исследованию не пригоден.

2.2. Для исследования в лабораторию направляют:

т мазки, сделанные из содержимого везикул больного животного, и мазки-отпечатки с оспенных поражений кожи;

т патологический материал от больных животных (содержимое везикул, целые папулы и пустулы, иссеченные вместе с субэпидермальной отечной тканью).

100 Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

2.5. Папулы и пустулы иссекают ножницами вместе с отечной тканью и помещают в два стерильных флакона: один — с 50% -ным раствором глицерина, второй — с 10% -ным раствором формалина,

2.6. Отобранный материал (пробирки и флаконы с патологическим материалом предварительно обрабатывают снаружи 3% -ным раствором хлорамина) упаковывают в металлические коробки или пеналы и направляют с нарочным в лабораторию. Неконсервированный материал доставляют в термосе со льдом в день отбора.

3. Вирусоскопическое исследование.

3.1. Для обнаружения вирусных оспенных частиц (ви-рионов) исследуют мазки и мазки-отпечатки из патологического материала окрашенные по методу Морозова или Пашена (см. приложение 1).

4. Патогистологические исследования.

4.2. При исследовании папул в дерме находят гиперемию, серозный отек и клеточный пролиферат, состоящий из лейкоцитов, гистиоцитов (макрофагов) и фибробластов, в эпидермисе — гиперплазию и некроз кератоцитов.

В везикулах обнаруживают скопление серозного экссудата или полиморфноядерных лейкоцитов, лизис клеток дермы, в пустулах — наличие гнойных телец.

При оспе в эпителиальных клетках эпидермиса, а у овец и коз также в гистиоцитах сосочкового слоя дермы находят цитоплазматические ацидофильные включения.

4.3. Патологогистологический диагноз на оспу свиней и оспу овец считают положительным при обнаружении, кроме вышеописанных изменений (п. 4.2), внутриядерных вакуолей в кератиноцитах эпидермиса кожи свиней и соответственно, в гистиоцитах собственно кожи (дермы) овец.

4.4. Оспу овец дифференцируют от контагиозного пустулезного дерматита, при котором устанавливают гиперкератоз, пролиферацию эпителия волосяных фолликулов, а также ацидофильные цитоплазматические изменения в кератиноцитах эпидермиса.

5. Выделение возбудителя на куриных эмбрионах.

5.1. Пробы исследуемого материала растирают в ступке и готовят 10%-ную суспензию на физиологическом растворе (рН7,2. 7,4).

Если патматериал консервирован глицерином, его предварительно отмывают физиологическим раствором.

Суспензию центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость отсасывают, добавляют к ней антибиотики (из расчета 500 ЕД/мл пенициллина, 250 мкг/мл стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина); выдерживают при 4°С 12 ч. Надосадочную жидкость проверяют на бактериальную загрязненность. При отсутствии в течение суток роста микрофлоры в МПБ и на МПА ее используют для заражения куриных эмбрионов.

5.2. Выделение вируса оспы коров и осповакцины проводят на куриных эмбрионах 11. 12-дневного возраста* Для заражения их используют надосадочную жидкость в разведениях 1:10 (исходное разведение), 1:100 и 1:1000,

Перед заражением КЭ овоскопируют, отмечают пугу (воздушный мешок) и бессосудистую зону на боковой поверхности хориоаллантоисной оболочки (ХАО). Затем эмбрионы обрабатывают спиртом с содержанием 0,1 % настойки йода и фламбируют.

Лабораторная диагностика вирусных болезней животных

Для заражения эмбриона в скорлупе пробойником де-лают отверстия в центре пуги и сбоку в бессосудистой зоне. Через боковое отверстие на ХАО вводят по 0,2 мл надоса-дочной жидкости в разведении 1:10,1:100 и 1:1000 (по 4 эмбриона на каждое разведение). После введения исследуемую жидкость равномерно распределяют на ХАО осторожным покачиванием яйца. Затем отверстия в скорлупе заклеивают лейкопластырем, яйца укладывают на бок вверх заклеенным отверстием. Для контроля оставляют незаряженными 4 КЭ.

5.3. Эмбрионы инкубируют при 34,5. 35°С в течение 5 сут, ежедневно просматривая. Гибель эмбрионов в первые сутки считают неспецифической. Эмбрионы, погибшие в более поздние сроки, отбирают, охлаждают и вскрывают. По истечении пяти суток инкубации вскрывают все оставшиеся эмбрионы.

5.4. Вскрытие КЭ проводят в стерильных условиях. Пинцетом в месте заражения удаляют скорлупу и глазными ножницами иссекают всю пораженную часть ХАО, которую затем промывают в физиологическом растворе, помещают в чашку Петри и просматривают с помощью лупы на черном фоне на наличие оспенных поражений.

5.5. При наличии в патматериале вируса осповакцины к 72-му часу после заражения на ХАО образуются плоские беловатого цвета оспины диаметром З. 4мм. Вирус оспы коров образует сходные поражения, но отличающиеся резко геморрагическим характером («красные оспины»), однако отдельные оспины (1. 3%) могут быть беловатого цвета.

Из пораженных участков ХАО делают мазки для обнаружения частиц вируса оспы методом серебрения по Морозову или окраски по Пашену (п. 3).

При отсутствии специфических поражений на ХАО, суспензией из ХАО делают второй пассаж на КЭ.

5.6. Вирусы оспы овец, коз, свиней, верблюдов на ХАО не вызывают образования специфических изменений.

6.1. Биологическую пробу проводят на лабораторных или естественновосприимчивых животных, взятых из благополучных по инфекционным болезням хозяйств.

1. Болезни, общие для всех или нескольких видов животных 103

6.2, Дифференциацию вируса осповакцины от вируса оспы коров проводят постановкой биопробы на цыплятах, белых мышах или кроликах,

6.2.1, Биопроба на цыплятах: у 1,5-месячных цыплят в области голени удаляют перья; в свежеобнаженные фолликулы голени одной конечности (вторая— для контроля) стерильным шпателем втирают 0,6 мл исследуемой надоса-дочной жидкости (п. 5.1) или суспензии из пораженной ХАО, в которые предварительно добавляют 20% стерильного глицерина.

Вирус осповакцины вызывает образование у цыплят на

7.. .9-й день после заражения доброкачественного оспенного фолликулита; вирус оспы коров специфических изменений не вызывает.

6.2.2, Биопроба на белых мышах: пяти белым мышам массой 15. 18 г вводят внутримышечно по 0,2 мл надоса-дочной жидкости исследуемой суспензии (п. 5.1),

Вирус осповакцины гибели мышей не вызывает; вирус оспы коров вызывает гибель мышей на 5. 7-й день после заражения.

6.2.3. Биопроба на кроликах: у двух кроликов массой тела 1,5. 2 кг на 4 участках в области живота выстригают шерсть на площади 2,5×2,5 см; кожу обрабатывают 70°-ным этиловым спиртом и острым концом стерильного скальпе-ля делают насечки длиной по 1 см, избегая появления капель крови. В скарифицированную кожу втирают стерильным шпателем по 0,2 мл (на каждый участок) надосадочной жидкости исследуемой суспензии. В суспензию предварительно добавляют 20% глицерина.

Вирус осповакцины на 3. 5-Й день после заражения вызывает у подопытных кроликов на скарифицированных участках кожи образование инфильтратов без геморрагии; вирус оспы коров вызывает образование геморрагических инфильтратов.

6.3. Исследования на оспу овец (коз) проводят на двух клинически здоровых ягнятах (козлятах) в возрасте

2.. .3 мес., взятых от неболевших и невакцинированных против оспы маток.

источник