Эмбрион-вакцина против оспы птиц из куриного вируса с разбавителем «Авивак ОСПА»
- Вакцина против оспы птиц сухая культуральная с разбавителем.
- Вакцина изготовлена из вируссодержащего материала (культура клеток кожи СПФ-эмбрионов кур, инфицированная аттенуированным штаммом «К» вируса оспы кур) с добавлением стабилизатора. Разбавитель представляет собой 25%-ный раствор глицерина в фосфатном буферном растворе.
- По внешнему виду вакцина представляет собой сухую однородную пористую массу желто-белого или розовато-желтого цвета, легко ресуспендируется в разбавителе без образования хлопьев и осадка. Разбавитель по внешнему виду представляет собой прозрачную бесцветную жидкость.
- Вакцина расфасована в стеклянные флаконы (ампулы) по 1,0-10,0 см 3 , что соответствует 100-500 иммунизирующим дозам. Разбавитель расфасован в стеклянные флаконы по 10,0 и 20,0 см 3 . Флаконы укупорены резиновыми пробками и обкатаны алюминиевыми колпачками, ампулы герметично запаяны. На каждом флаконе (ампуле) с вакциной должна быть этикетку с указанием: организации-производителя, наименования вакцины, объема (см 3 ), количества доз во флаконе (ампуле), номера серии и контроля, даты изготовления (мес, год), условий хранения, срока годности. На каждом флаконе с разбавителем должна быть этикетка с указанием: организации-производителя, наименования препарата, объема (см 3 ), номера серии и контроля, даты изготовления (мес, год), условий хранения, срока годности. Вакцину и разбавитель упаковывают в картонные или полимерные коробки с наличием гнезд или перегородок, обеспечивающих их неподвижность и целостность. На коробке с вакциной должна быть этикетка с указанием: организации-производителя и ее товарного знака, наименования вакцины, количества флаконов (ампул) в коробке, объема (см 3 ), количества доз во флаконе (ампуле), номера серии и контроля, даты изготовления (месяц, год), срока годности, условий хранения, обозначения СТО, знака соответствия по ГОСТ Р, надписи «Для животных». В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению вакцины и 2-х игольные инъекторы (по 5-10 штук). На коробке с разбавителем должна быть этикетка, на которой указывают: наименование и товарный знак организации-производителя, наименование препарата, номер серии и контроля, дату изготовления (месяц, год), количество флаконов в коробке, объем (см ), срок годности, условия хранения, обозначение СТО, знак соответствия по ГОСТ Р.
- Срок годности вакцины и разбавителя 12 месяцев с даты изготовления при условии хранения и транспортирования вакцины — при температуре от 2°С до 10°С, а разбавителя -при температуре от 2°С до 25°С. По истечении срока годности вакцина и разбавитель к применению не пригодны. 6. Флаконы (ампулы) с вакциной и разбавителем без этикеток, с нарушением целостности, герметичности укупорки, с измененным цветом, консистенцией, содержащие плесень, постороннюю примесь, при низкой растворимости, а также не использованные в течение 4 часов после вскрытия выбраковывают и обеззараживают кипячением в течение 30 минут.
- Вакцина индуцирует иммунный ответ, обусловленный действием клеточных и гуморальных факторов, через 5-7 сут после иммунизации, который сохраняется в течение всего периода выращивания.
- Вакцина безвредна, ареактогенна, лечебным действем не обладает.
- Одна иммунизирующая доза вакцины содержит 1000 ИД50 вируса оспы кур.
- Вакцину применяют с профилактической целью в неблагополучных и угрожаемых по оспе хозяйствах.
- Клинически здоровую птицу старше двухмесячного возраста иммунизируют однократно. Допускается иммунизация птиц в возрасте 25-30 сут с последующей ревакцинацией через 2-3 месяца.
- При возникновении в хозяйстве других острых инфекционных болезней птиц вакцину против оспы применять не разрешается. 13.Перед применением вакцину разводят из расчета: 100 доз вакцины в 1,5 см разбавителя, т.е. в одном флаконе разбавителя объемом 10,0 см разводят 700 доз вакцины; в одном флаконе разбавителя объемом 20,0 см — 1400 доз вакцины.
- Вакцину вводят методом прокола перепонки крыла 2-игольным инъектором. Инъектор погружают в разведенную вакцину, вынимают и прокалывают им кожную перепонку с внутренней стороны крыла так, чтобы отверстия игл проникали через всю толщину кожи. Объем вводимой вакцины при этом составляет 0,013-0,015 см 3 .
- После вакцинации каждой птицы иглы инъектора протирают ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором или дистиллированной водой, прокаливают на пламени горелки и охлаждают. Нельзя применять для вакцинации горячие иглы. В случае засорения каналов игл инъекторов загрязненность устраняют механически.
- На 5-8 сутки после иммунизации на наружной и внутренней поверхности перепонки крыла птиц в месте прокола образуются характерные оспины, исчезающие через 28-30 сут.
- Убой птицы и реализация мяса разрешается через 14 сут после вакцинации.
- Все работы с вакциной необходимо проводить в соответствующей спецодежде с обязательным использованием средств индивидуальной защиты: халат, головной убор, марлевая маска, резиновые перчатки.
- При попадании вакцины на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды. При случайном введении препарата вакцинатору ему следует обратиться в медицинское учреждение. 20.Вакцину следует хранить в местах, недоступных для детей.
Инструкция разработана ООО НПП «АВИВАК». Юридический адрес и адрес производства ООО «НПП АВИВАК»: 188502 Ленинградская обл., Ломоносовский район, д. Горбунки.
Рекомендовано к регистрации в Российской Федерации ФГУ ВГНКИ.
источник
аттенуированный штамм «кэм-7» вируса оспы кур fowlpox virus для изготовления препаратов специфической профилактики и диагностики оспы птиц
| Классы МПК: | C12N7/00 Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их A61K39/275 Poxviridae, например вирус оспы птиц | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Автор(ы): | Кулаков Владимир Юрьевич (RU) , Похвальный Станислав Александрович (RU) , Федосеев Константин Юрьевич (RU) , Андрейчук Дмитрий Борисович (RU) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Патентообладатель(и): | Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») (RU) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Приоритеты: | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Таблица 1 | |||||
| Накопление вируса оспы кур штамма «КЭМ-7» (титр, Ig ЭИД 50 /см 3 ) в разных частях эмбрионов соответственно их возрасту и способу заражения | |||||
| Способ заражения | Тестируемый материал | Возраст эмбрионов, сутки | |||
| 5 | 7 | 9 | 11 | ||
| в аллантоисную полость | ЭЭЖ | 5,25±0,31* | 5,0±0,18 | 5,3±0,30 | 5,1±0,28 |
| тушка эмбриона | 4,35±0,26 | 5,17±0,23 | 5,2±0,18 | 4,0±0,23 | |
| ХАО | 5,1±0,31 | 5,6±0,26 | 6,1±0,30 | 5,8±0,26 | |
| на ХАО | ЭЭЖ | 3,5±0,18 | 5,0±0,11 | 5,2±0,18 | 4,7±0,23 |
| тушка эмбриона | 5,3±0.24 | 4,9±0,31 | 4,7±0,21 | 3,9±0,28 | |
| ХАО | 5,3±0,21 | 6,2±0,20 | 6,3±0,18 | 6,2±0,18 | |
| Примечание: | |||||
| * — даны средние величины титров (n=3) и их стандартные ошибки (±m) | |||||
| Таблица 2 | ||
| Состав осветленной фильтрованием суспензии ткани ХАО СПФ-эмбрионов, инфицированных вирусом оспы кур штамма «КЭМ-7» | ||
| Распределение частоты встречаемости соответственно линейному диаметру частиц* | Накопительный процент | Размеры, мкм |
| 10,00 | 2,092 | |
| 20,00 | 4,18 | |
| 30.00 | 4,80 | |
| 40,00 | 5,21 | |
| 50,00 | 5,76 | |
| 60,00 | 7,80 | |
| 70,00 | 14,12 | |
| 80,00 | 15,90 | |
| 90,00 | 17,65 | |
| 95,00 | 18,97 | |
| Примечание: | ||
| * — Passing (%) — кумулята частоты встречаемости; | ||
| Channel (%) — частота встречаемости соответственно классам; | ||
| Size — размеры частиц в микрометрах. | ||
| Таблица 3 | |||
| Соотношение инфекционных титров вируса штамм «КЭМ-7», установленных на цыплятах (IgИД 50 /см 3 ) и СПФ-эмбрионах кур (IgЭИД 50 /см 3 ) | |||
| Номер опыта | Величина титра | =IgT 2 -IgT 1 | |
| IgИД 50 /см 3 (IgT 1 ) | IgЭИД 50 /см 3 (IgT 2 ) | ||
| 1 | 5,89 | 6,92 | 1,03 |
| 2 | 4,14 | 5,33 | 1,19 |
| 3 | 4,56 | 5,76 | 1,2 |
| 4 | 5,89 | 6,83 | 0,94 |
| 5 | 5,49 | 6,59 | 1,1 |
| 6 | 3,81 | 4,6 | 0,79 |
| 7 | 5,89 | 6,48 | 0,59 |
| 8 | 4,06 | 5,36 | 1,3 |
| 9 | 6,03 | 7,02 | 0,99 |
| 10 | 6,19 | 6,72 | 0,53 |
| 11 | 4,32 | 5,82 | 1,5 |
| 12 | 4,88 | 5,82 | 0,94 |
| Средняя оценка ( ±m) | 1,0065±0,081 | ||
| Таблица 4 | ||||
| Результаты клинических наблюдений птиц, привитых различными дозами штамма «КЭМ-7» | ||||
| Клинические признаки | Прививная доза (D, IgИД 50 /0,004 см 3 ) | |||
| 0 D 50 /см 3 | Иммуногенность** | Реактогенность*** | ||
| 2 | 6,08±0,13* | 6/6 | 0/4 | |
| 4 | 6,29±0,15 | 4/4 | 0/4 | |
| 6 | 6,32±0,09 | 8/8 | 0/6 | |
| 8 | 6,26±0,13 | 6/6 | 0/4 | |
| Примечание: | ||||
| * — дано среднее значение инфекционного титра (IgЭИД 50 /см 3 ) и его стандартная ошибка (n=3) в осветленном гомогенате ткани ХАО; | ||||
| ** — отсутствие местной воспалительной реакции при контрольном заражении вирусом оспы кур штамма «Кучинский» (3 Ig ЭИД 50 интрадермально) через 21 сут после вакцинации; | ||||
| *** — признаки генерализации инфекционного процесса, где: в числителе — количество заболевших, в знаменателе — общее число подопытных цыплят. | ||||
| Таблица 6 | ||
| Результаты сравнения иммунологического действия двух штаммов «КЭМ-7» и «Gibbs» (в составе вакцины «Нобилис АЕ+РОХ», «Интервет») | ||
| Подопытные группы: | Доля иммунных птиц | |
| способ оценки наличия иммунитета | ||
| повторная прививка | контрольное заражение | |
| группа 1: цыплята, привитые штаммом «КЭМ-7» | 10/10* | 10/10 |
| группа 2: цыплята, привитые штаммом «Gibbs» | 10/10 | 10/10 |
| группа 3: контрольные цыплята | н.и.** | 0/10 |
| Примечание: | ||
| * — доля иммунных птиц (с=a/n, где: а — количество птиц без воспалительной реакции, n — объем группы); | ||
| ** — данную позицию не исследовали. | ||
| Таблица 7 | ||
| Результаты клинического исследования эмбрион-вакцины против оспы птиц из штамма «КЭМ-7» с разбавителем в ЗАО «Белгородский бройлер» | ||
| Иммунобиологические показатели вакцины, их характеристики, нормы и фактические оценки | ||
| Показатели | Характеристики и нормы (ожидаемый результат) | Оценка препарата |
| Безвредность (исключение генерализации инфекционного процесса) | вторичные очаги инфекционного процесса должны отсутствовать | вторичные очаги инфекционного процесса отсутствуют |
| Реактогенность (продолжительность местной воспалительной реакции после прививки), сут, не более | 21 | 14-20 |
| Продолжительность допротективного периода иммунитета (отсутствие местной воспалительной реакции на повторную прививку), сут, не более | 14 | 15 |
| Сохранность поголовья | сопоставление показателя сохранности до и после проведения вакцинации | сохранность до прививки 99,9%, после прививки 99,9% |
| Таблица 8 | ||
| Определение эффективности вакцинации методом повторной прививки штамма «КЭМ-7» | ||
| № птичника | Процент птиц с поствакцинальной реакцией | Процент иммунных птиц |
| 1 | 89 | 100 |
| 2 | 100 | 100 |
| 3 | 93 | 100 |
| 4 | 82 | 100 |
| 5 | 97,5 | 100 |
| Таблица 9 | ||||
| Сопоставление показателей сохранности и продуктивности до и после вакцинации кур-несушек по птичникам | ||||
| № птичника | Яйценоскость, % | Среднесуточный падеж птицы, гол. | ||
| до вакцинации | после вакцинации | до вакцинации | после вакцинации | |
| 1 | 94 | 91 | 2 | 5 |
| 2 | 83 | 86 | 27 | 26 |
| 3 | 81 | 81 | 10 | 10 |
| 4 | 67 | 62 | 13 | 25 |
| 5 | 85 | 83 | 16 | 17 |
1. Аттенуированный штамм «КЭМ-7» вируса оспы кур Fowlpox virus, депонированный в ФГБУ «ВГНКИ» под регистрационным номером (ссылкой) «КЭМ-7»-ДЕП, генетически аутентичный по последовательности нуклеотидов гена 241ext, для изготовления биопрепаратов специфической профилактики и диагностики оспы птиц.
2. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он адаптирован к организму развивающихся эмбрионов кур, где способен накапливаться в ткани ХАО в среднем титре (6,3±0,18) Ig ЭИД 50 /см 3 .
3. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он является умеренно реактогенным и безвредным для птицы при интрадермальной инъекции в дозах до 3,7 IgИД 50 /0,004 см 3 .
4. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он является иммуногенным с иммунизирующей дозой 3 Ig ЭИД 50 /0,004 см 3 , обеспечивающей защиту 95% привитых птиц при контрольном заражении вирулентным вирусом оспы кур.
5. Штамм по п.4, характеризующийся тем, что он индуцирует поствакцинальный иммунитет (не менее 80% защищенности поголовья) продолжительностью 360 суток после прививки.
6. Штамм по п.1, характеризующийся тем, что он сохраняет аттенуированный фенотип при пассажах как в системе культивирования, так и на естественно восприимчивой птице.
источник
Эмбрион- вакцина против инфекционного ларинготрахеита птиц из штамма «О»
Общие положения
- Эмбрион-вакцина изготовлена из лиофильно высушенного гомогената хориоаллантоисных оболочек СПФ эмбрионов кур, содержащих вирус инфекционного ларинготрахеита птиц (ИЛТ) птиц вакцинного штамма «О».
- Вакцина представляет собой сухую однородную массу пористой структуры бежевого цвета.
- Вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы по 2-4 см 3 , закрывают резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками. Допускается другая фасовка, согласованная в установленном порядке.
- На флакон с вакциной наклеивают или наносят несмываемой краской этикетку с указанием на ней товарного знака и наименования предприятия-изготовителя, наименования биопрепарата, количества прививных (окулярных) доз, номера серии, номера контроля, условий хранения и срока годности препарата (мес., год).
- Флаконы с вакциной упаковывают в картонные коробки с разделительными перегородками (или пластиковые блистеры с гнездами), обеспечивающие неподвижность и целостность флаконов.
- На каждую упаковку с флаконами наклеивают (или вкладывают внутрь блистера) этикетку, на которой указывают: наименование и товарный знак предприятия-изготовителя, полное название биопрепарата, количество флаконов в коробке, количество доз во флаконе, номер серии, номер контроля, дату изготовления, срок годности, условия хранения, обозначения настоящих ТУ и надпись «Для животных». В каждую коробку вкладывают наставление по применению вакцины.
- Флаконы с вакциной с нарушенной целостностью, содержащие посторонние примеси или с истекшим сроком годности выбраковывают и в открытом виде обеззараживают кипячением в течение 30 мин. Аналогичным образом проводят обеззараживание использованных флаконов, прочей посуды и инвентаря, который контактировал с вакциной.
- Срок годности вакцины 12 месяцев с даты изготовления при условии хранения и транспортировки ее при температуре от 2 до 6 0 С.
- Разбавитель (концентрат), предназначенный для растворения эмбрион-вакцины при применении ее окулярным способом, изготовлен на основе изотонического фосфатно-буферного раствора, содержащего глицерин и не токсичный для птиц краситель (индигокармин).
- Разбавитель представляет собой прозрачный раствор сине-голубого цвета.
- Разбавитель расфасовывают в «стеклянные флаконы по 7, 14 или 21см 3 , закрывают резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками. Допускается другая фасовка, согласованная в установленном порядке.
- На флакон с разбавителем наклеивают или наносят несмываемой краской этикетку с указанием на ней товарного знака и наименования предприятия-изготовителя, наименования препарата, его количества в м 3 , номера серии и номера контроля, срока годности (мес., год) и надпись «Для животных».
- Флаконы с разбавителем упаковывают в картонные коробки с разделительными перегородками (или пластиковые блистеры с гнездами), обеспечивающие неподвижность и целостность флаконов.
- На каждую упаковку с флаконами с разбавителем наклеивают (или вкладывают внутрь блистера) этикетку, на которой указывают: наименование и товарный знак предприятия-изготовителя, полное название препарата, количество флаконов в коробке, количество см 3 во флаконе, номер серии, номер, контроля, дату изготовления, срок годности, условия хранения, обозначение настоящих ТУ и надпись «Для животных».
- Срок годности разбавителя 24 месяца с даты изготовления при условии хранения и транспортировки его при температуре от 2 до 6°С.
Биологические свойства вакцины
- Механизм действия вакцины основан на свойстве аттенуированного вируса штамма «О» создавать у привитой птицы иммунитет, препятствующий заражению вирулентным возбудителем ИЛТ.
- Прививная (окулярная) доза вакцины составляет 7000 ЭИД50
- Иммунитет у вакцинированных птиц возникает через 21 сут. после первой вакцинации и сохраняется не менее 6 месяцев.
- Вакцина является безвредной для кондиционных птиц (развитие которых соответствует паспортным характеристикам данной породы), у ослабленных и некондиционных птиц на 4-7 день после первой вакцинации могут отмечаться: угнетение, затрудненное дыхание или легкие формы серозных конъюнктивитов. Через 4-7 суток перечисленные явления исчезают.
Порядок применения вакцины
- Эмбрион-вакцина предназначена для специфической профилактики ИЛТ/кур.
- Вакцина может быть применена двумя способами: окулярным (нанесение на конъюнктиву глаза) или оральным (выпаивание).
- Окулярный способ. Вакцину применяют в виде суспензии, приготовленной на разбавителе. В соответствии с объемом разбавителя (концентрата), указанным на флаконе образуют его рабочее разведение предназначенное для суспендирования вакцины. Используя чистую кипяченую или дистиллированную воду, содержимое одного флакона разбавителя доводят до рабочего разведения, соблюдая следующее соотношение: 7см 3 концентрата доводят до 50 см 3 , 14см 3 — до 100 см 3 , 21см 3 — до 150 см 3 .
Окулярная форма вакцины должна содержать одну прививную дозу в 0,05 см 3 суспензии, что соответствует объему одной капли при истечении из носика стандартной глазной пипетки. Объем рабочего разведения разбавителя (см 3 ), необходимый для суспендирования одного флакона вакцины определяют по формуле (число прививных доз во флаконе)/20.
Требуемый «объем суспендированной вакцины (см 3 ) рассчитывают по формуле: (численность поголовья)/20.
Пример. Окулярным способом необходимо вакцинировать 8720 голов птицы. Один флакон вакцины данной серии содержит 2000 окулярных доз. На основании этих условий определяют:
- объем рабочего разведения разбавителя для суспендирования одного флакона вакцины, 2000/20=100(см 3 );
- требуемый объем суспендированной вакцины, 8720/20=436(см 3 ).
Окулярную прививку проводят следующим образом: одну каплю суспензии наносят на конъюнктиву под нижнее веко глаза и ожидают ее равномерного распределения. В случае истечения из-под века большей части дозы допускается однократное повторение операции в другой глаз.
Вакцина в виде суспензии должна быть использована в течение 2 часов.
- Оральный способ. До вакцинации, соответственно породе и возрасту птицы, определяют величину прививного объема — среднего объема жидкости (см 3 ) выпиваемого одной птицей в течение 30 мин. Вакцину применяют в виде суспензии, приготовленной на каком-либо из следующих разбавителей: пастеризованное обезжиренное молоко (10%); сухое обезжиренное молоко (1%); пептон (0,5%). Основой перечисленных разбавителей служит чистая кипяченая вода.
Оральная форма вакцины в прививном объеме должна содержать 4 окулярные дозы. Объем разбавителя (см 3 ), необходимый для суспендирования одного флакона вакцины рассчитывают по формуле: (число прививных доз во флаконе х прививной объем)/4 .Требуемый объем суспендированной вакцины (см 3 ) рассчитывают по формуле: численность поголовья х прививной объем.
Пример. Оральным способом необходимо вакцинировать 8720 голов птицы. Один флакон вакцины данной серии содержит 2000 окулярных доз. Прививной объем составил 6,7 см 3 . На основании этих условий определяют:
- объем разбавителя для суспендирования одного флакона вакцины, 2000х6,7/4 = 3350 (см 3 );
- требуемый объем суспендированной вакцины 8720х6,7=58424(см 3 ).
Вакцину выпаивают один раз в сутки. 11еред вакцинацией птицу мясных пород выдерживают без воды в течение 2-3 часов, птицу яичных пород — в течение 4-8 часов. Вакцину распределяют через поилки, которые должны быть промыты и не содержать на внутренней поверхности дезсредств. Продолжительность присутствия вакцины в системе поилок не более 2 час.
- Вакцинации подлежит клинически здоровая птица в возрасте старше 15 сут. Птица в возрасте до 60 сут. вакцинируется дважды с интервалом 14 сут. Птица в возрасте старше 60 сут. возраста вакцинируется однократно.
- Мясо и яйца вакцинированных птиц могут быть использованы без ограничений.
источник
Фармакологическая группа
Иммунотропные средства. Вакцины живые
Эмбрион-вакцина против оспы птиц из штамма «КЭМ-7» по основным характеристикам соответствует требованиям, изложенным в Fowl pox. // O.I.E. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (mammals, birds and bees). — 7th ed. – Paris, 2012. – Vol. 1, Ch. 2.3.10. – P. 507-513
Эмбрион-вакцина против оспы птиц из штамма «КЭМ-7» зарегистрирована в РФ. Номер регистрационного удостоверения: 12-1-29.12-1065 №ПВР-1-29.12/02870
Назначение
Вакцина предназначена для профилактики оспы у кур путем создания активного специфического иммунитета
Состав
Действующее вещество. Биологически активный аттенуированный вариант вируса оспы кур (штамм «КЭМ-7»)
Таксономия штамма. Семейство: Poxviridae. Подсемейство: Chordopoxvirinae. Род: Avipoxvirus. Вид (таксон): Fowl poxvirus (Вирус оспы кур).
Система культивирования вируса. Системой культивирования штамма «КЭМ-7» вируса оспы птиц являются развивающиеся эмбрионы кур международной категории SPF (Specific Pathogen Free)
Биологическая чистота вируса (исключение контаминантов). Все производственные генерации штамма «КЭМ-7» вируса оспы кур (Original Virus, Master Seed и Working Seed) тестированы на контаминацию бактериальной микрофлорой и грибами по ГОСТ 28085, а также прошли контроль в ПЦР на исключение присутствия геномов посторонних вирусов и микоплазм.
Состав препарата. Вакцина представляет собой лиофилизованный гомогенат ткани вируссодержащих хориоаллантоисных оболочек SPF-эмбрионов кур с добавлением сахарозы (5%) гидролизата лактальбумина (5%), и желатозы (0,5%).
Вспомогательное средство. Вспомогательным средством, предназначенным для ресуспендирования вакцины, является разбавитель, которой придает ей необходимые физико-химические свойства. Разбавитель выпускается в виде прозрачного раствора красного цвета, в состав которого входят: глицерин (37 %); Na2HPO4 х 12 Н2О (4,20 %); KH2PO4 х 2 Н2О (0,02 %), кислотно-основной индикатор феноловый-красный (0,001%).
Иммунуологические свойства
Вакцина вызывает формирование иммунного ответа у кур против оспы через 14 суток после однократного применения, продолжительностью не менее 12 месяцев. Иммунизирующая доза вакцины содержит не менее 1000 ЭИД50 вируса оспы кур штамма «КЭМ-7». Вакцина безвредна, лечебными свойствами не обладает
Применение
Вакцина предназначена для специфической профилактики оспы птиц в неблагополучных и угрожаемых по данному заболеванию птицеводческих хозяйствах. Вакцинации подлежат клинически здоровые куры в возрасте старше 25 суток.
Вакцину применяют однократно методом внутрикожной инъекции в перепонку крыла с помощью инъектора-перфоратора.
Форма выпуска
Расфасовка, маркировка и упаковка. Вакцина расфасована по 2 см³ в стеклянные флаконы, соответствующей вместимости, в которых проведена ее лиофилизация. Флаконы герметично закрыты резиновыми пробками, ТУ 38.106612, укрепленными металлическими колпачками. Флаконы с лиофилизированным материалом заполнены инертным газом (азотом) или вакуумированы, ГОСТ 28083.
Разбавитель расфасован по 5 см³ в стеклянные флаконы, соответствующей вместимости. Флаконы герметично укупорены резиновыми пробками, укрепленными металлическими колпачками.
Флаконы с вакциной и разбавителем упакованы в коробки пенополистирольные с наличием гнезд, обеспечивающих их целостность при транспортировании.
Флаконы и коробки этикетированы в соответствии с Федеральным законом об обращении лекарственных средств (редакция от 25.12.2012 г).
Транспортирование, хранение и срок годности препарата
Вакцину и разбавитель транспортируют всеми видами крытого транспорта в соответствии с ГОСТ 17786 и «Правилами перевозок скоропортящихся грузов и багажа», действующими на данном виде транспорта.
Вакцину и разбавитель хранят в организации-производителе, у потребителя и в торговых организациях в коробках изготовителя (и в транспортной таре) в сухом темном помещении, при температуре от 2ºС до 8ºС.
Срок годности эмбрион-вакцины и разбавителя 12 мес от даты выпуска. Датой выпуска вакцины считают месяц и год, когда произведена лиофилизация, разбавителя – месяц и год, когда препарат расфасован во флаконы.
Гарантии изготовителя
«Эмбрион-вакцину против оспы птиц из штамма «КЭМ-7» производят согласно регламенту, утвержденному в ФГБУ «ВНИИЗЖ». Технические требования к препарату отражены в СТО 00495527-0175-2012.
Каждые 2 года препарат проходит государственный контроль на предмет получения сертификата качества.
Каждая серия вакцины и разбавителя проходит производственный контроль
(ГОСТ Р 52684), результаты которого являются основанием для разрешения на реализацию препарата и закрепляются в соответствующем документе, характеризующем качество препарата (паспорте на серию вакцины).
Организация-производитель гарантирует соответствие «Эмбрион-вакцины против оспы птиц из штамма «КЭМ-7» и разбавителя требованиям СТО при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения.
источник
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности, к получению нового штамма вируса оспы кур, который пригоден для изготовления средств диагностики и специфической профилактики оспы птиц.
Оспа птиц — контагиозная, медленно распространяющаяся вирусная болезнь птиц, которая характеризуется образованием локализованных пролиферативно-некротических поражений на коже и дифтеритического воспаления слизистой оболочки ротовой полости, верхних дыхательных путей и конъюнктивы глаз [1, 2]. Болезнь распространена по всему миру, в том числе и в РФ, и наносит существенный экономический ущерб птицеводческим хозяйствам в связи со снижением яйценоскости, замедлением роста птиц, повышением смертности и вынужденным убоем [3, 4, 5, 6, 7, 8].
В соответствии с классификацией, установленной Международной комиссией по таксономии вирусов (International Committee on Taxonomy of Viruses — ICTV), вирус оспы птиц относится к роду Avipoxvirus, семейства Poxviridae.
Основным способом борьбы с этим заболеванием является специфическая профилактика. С этой целью применяют живые вакцины на основе аттенуированных штаммов вируса.
Известен штамм «НР-В», на основе которого готовится импортная коммерческая противооспенная вакцина [9].
Известен штамм «Gibbs», который входит в состав ассоциированной вакцины против инфекционного энцефаломиелита птиц и оспы [10]. Однако на территории РФ данные импортные препараты имеют высокую стоимость.
Известен штамм «ВГНКИ-3/7», используемый для изготовления отечественного варианта живой вакцины против оспы птиц [11]. Однако для культивирования данного штамма необходимо использование культуры клеток, что в данном случае рассматривается как усложнение технологии приготовления вакцины.
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является аттенуированный штамм «К» (прототип) вируса оспы кур, используемый для изготовления отечественной вирус-вакцины.
Недостатком штамма-прототипа также является необходимость использования для его культивирования клеточных культур [12, 13], что в свою очередь существенно усложняет технологический процесс изготовления на его основе вирус-вакцин.
В задачу создания настоящего изобретения входило получение нового штамма вируса оспы кур, обладающего аттенуированным фенотипом и высокой иммуногенной активностью, способного к культивированию на эмбрионах кур как на более технологически простой системе и обеспечивающего изготовление высокоиммуногенных и безвредных биопрепаратов для профилактики и диагностики оспы птиц.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала вакцинных штаммов вируса оспы кур, генетически аутентичных, безвредных, обладающих аттенуированным фенотипом и высокой иммуногенностью, способных к культивированию на эмбрионах кур как на более технологически простой системе, и пригодных для изготовления биопрепаратов специфической профилактики оспы птиц, тем самым, усиливая в данном аспекте биологическую безопасность государства.
Указанный технический результат достигнут получением штамма «КЭМ-7» (авторское наименование) вируса оспы кур.
Штамм «КЭМ-7» является вариантом вакцинного штамма «К» вируса оспы кур (ФГУ «ВГНКИ»), который был получен в 2005 г. в ФГУ «ВНИИЗЖ» путем многократных пассажей материнского вируса на развивающихся эмбрионах кур до стадии достижения стабильной величины накопления вируса в ткани ХАО.
Полученный штамм «КЭМ-7» депонирован 02 июня 2011 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного бюджетного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ») под регистрационным номером (ссылкой) — штамм «КЭМ-7» — ДЕП вируса оспы кур.
Генетическая аутентичность штамма.
Проводили генетическую идентификацию полученного вируса и сравнительный анализ последовательности ДНК генома. Использовали полимеразно-цепную реакцию (ПЦР) и секвенирование. Нуклеиновую кислоту выделяли из 0,1 мл суспензии вирусного материала с помощью набора с сорбентом NudeoS+ (ООО «БиоКом», г.Москва), согласно инструкции изготовителя. ПЦР проводили с праймерами на ген 241ext (Jarmin S.A., 2006).
Условия проведения ПЦР. В пробирку емкостью 0,5 мл вносили следующие компоненты: деионизованная вода (9 мкл), растворы праймеров (по 1,0 мкл), дНТФ (0,5 мкл), 25 мМ р-р хлорида магния (3,5 мкл), 5х буфер для ПЦР (5,0 мкл), Taq ДНК-полимераза (1-2 ед.), ДНК (исследуемый образец, 5 мкл).
Смесь переносили в амплификатор и проводили ПЦР при следующих режимах: 95°С — 5 мин, 30 циклов с параметрами: 95°С — 20 с, 58°С — 30 с, 72°С — 120 с, финальный прогрев 72°С — 5 мин. Далее проводили электрофорез ПЦР-фрагментов в геле 2% агарозы с последующей очисткой для определения нуклеотидной последовательности. Секвенирование очищенной кДНК осуществляли на автоматическом секвенаторе ABI Prism 3100 (Applied Biosystems, США).
Установленную структуру участка гена 241ext штамма «КЭМ-7» сравнивали с нуклеотидной последовательностью данного участка 5 коммерческих вакцинных штаммов вируса оспы кур, используемых для производства вакцин известными фирмами: «Diftosec» (Merial), «Nobilis» (Intervet), «HP-B» (Avinova), а также штаммов «К» и «ВГНКИ-3/7» (ОАО «ПЗБ»). Последовательности участка генома 241 ext штаммов «Diftosec» и «Nobilis» получены из базы данных GenBank ресурса EMBL он-лайн, а для штаммов «ВГНКИ-3/7», «HP-B» и «К» были установлены в ФГБУ «ВНИИЗЖ».
Для анализа полученных последовательностей использовали программы BioEdit (версия 7.0, в свободном доступе на сайте http://www.mbio.ncsu.edu/BioEdit/bioedit.html) и MEGA (версия 4, в свободном доступе на сайте http://www.megasoftware.net). Для построения филогенетического дерева применяли метод «ближайшего соседа» (neighbor-joining). Достоверность проверяли способом «бутстреп» (bootstrap) с 500 репликациями. Достоверным считали «бутстреп» индекс >60.
В результате сравнения полученной последовательности участка гена 241ext штамма «КЭМ-7» была построена дендрограмма (Фиг.1), отражающая отличия по этому гену данного штамма от других исследованных штаммов вируса оспы кур.
Анализ последовательности указанного гена показал, что геном полученного штамма «КЭМ-7» отличался от всех сопоставляемых штаммов на 2-13 нуклеотидных позиции (0,2-1,3% отличий), при этом генетически более близкими к штамму «КЭМ-7» оказались штаммы «НР-В», «К» и «Nobilis», для которых выявлены 1-2 нуклеотидных отличия (0,2%). Полученные данные позволяют считать штамм «КЭМ-7» генетически аутентичным.
Штамм «КЭМ-7» вируса оспы кур характеризуется следующими признаками и свойствами.
Штамм «КЭМ-7» вируса оспы кур относится к семейству Poxviridae, роду Avipoxvirus и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя вируса оспы кур: вирион кирпичеобразной формы с проекционными размерами приблизительно 330×280×200 нм имеет суперкапсидную оболочку. Геном вируса представлен молекулой ДНК длиной 288 тысяч пар нуклеотидов, который содержит более 250 генов.
Культуральные свойства штамма.
Использовали развивающиеся эмбрионы кур международной категории SPF (Specific Pathogen Free). Эмбрионы заражали осветленной фильтрованием вируссодержащей суспензией ткани хориоаллантоисной оболочки (ХАО) в дозе 3 Ig ЭИД50/0,2 см 3 . Определяли параметры культивирования: возраст эмбрионов, способ заражения, место локализации вируса. Критерием оценки являлась величина инфекционного титра в экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ), в суспензии ткани тела эмбриона и ткани ХАО. Результаты представлены в таблице 1.
Результаты, приведенные в таблице 1, указывают на то, что для культивирования штамма «КЭМ-7» необходимо использовать эмбрионы в возрасте от 7 до 10 суток, которые следует заражать на ХАО. При этом продолжительность культивирования должна составлять от 4 до 5 суток. В качестве вирусного сырья использовать ткань ХАО, где возбудитель накапливается в титре 6,3±0,18 Ig ЭИД50/см 3 .
Характеристика вирусного материала.
Относящийся к семейству Poxviridae, вирус штамма «КЭМ-7» может находиться внутри инфицированных клеток ХАО, имеющих размеры 30÷100 мкл. Следовательно, для получения корпускулярного вируса требуется разрушение клеточных структур путем высокой степени дезинтеграции указанной ткани.
В таблице 2 приведена характеристика необходимой дисперсности тканевой взвеси, получаемой после осветления гомогената ткани вируссодержащих ХАО.
Данные, приведенные в таблице 2, демонстрируют, что все наблюдаемое представительство тканевых элементов суспензии имеет проекционные размеры менее 20 мкм (средневзвешенная оценка диаметра частиц составила величину 5,76 мкм). Таким образом, большинство клеток ткани ХАО являются разрушенными и основная масса вируса не ограничена клеточными стенками. Данный тип вирусного материала использовали для исследований иммунобиологических свойств штамма «КЭМ-7». При этом для работы на эмбрионах необходимые разведения материала выполняли на физиологическом растворе, для работы на птице материал разбавляли физиологическим раствором с добавлением 40% глицерина.
Сущность предлагаемого изобретения поясняется следующими графическими материалами:
Фиг.1 — Дендрограмма, отражающая отличия штамма «КЭМ-7» по последовательности участка гена 241ext от вакцинных штаммов вируса оспы кур «Diftosec», «Nobilis», «НР-В», «К» и «ВГНКИ-3/7»;
Фиг.2 — Диаграмма значений долей защищенных птиц (с) соответственно испытанным прививным дозам вируса (IgD) через 21÷28 суток после вакцинации; пунктиром показан график зависимости исследуемых параметров, построенный по регрессионному уравнению вида «c=f[«y=1,21(IgD)-0,25];
Фиг.3 — Диаграмма распределения долей защищенных птиц (с) в подопытных группах соответственно времени после вакцинации.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.
В параллельных экспериментах определяли соотношение инфекционных титров вируса, установленных для 25-45-суточных цыплят методом интрадермальной прививки в перепонку крыла (Ig ИД50/см 3 ) и для СПФ-эмбрионов путем введения инфицирующей жидкости на ХАО (Ig ЭИД50/см 3 ). В экспериментах были использованы вируссодержащие материалы различной биологической активности. Соответствующие результаты приведены в таблице 3.
Было установлено, что соотношение титров данного варианта вируса для кур и СПФ-эмбрионов составило среднюю логарифмическую разность Δ±m=1,0065±0,081, которая находилась в границах доверительного интервала [0,828÷1,185]p≤0,05. Развивающиеся СПФ-эмбрионы были приняты как референтная тест-система для оценки инфекционной активности вируса штамма «КЭМ-7».
Безвредность вируса для птиц.
Проводили оценку воздействия различных доз вируса на физиологическое состояние птиц. Цыплятам в возрасте старше 25 суток инъецировали интрадермально вирусный материал в дозах 0÷3,7 Ig ИД50. Результаты клинических наблюдений представлены в таблице 4.
Результаты, представленные в таблице 4, показывают, что инъекция вируса штамма «КЭМ-7» в диапазоне доз (1≤D≤3,7) IgИД50 не обусловила каких-либо изменений в общем состоянии птиц. Величина прививной дозы в определенной степени влияла на время проявления, продолжительность и интенсивность местной воспалительной реакции. Однако ни при какой из испытанных доз образование вторичных воспалительных процессов отмечено не было, т.е. исследуемый штамм генерализации инфекционного процесса не проявил. Полученные результаты подтверждают умеренную реактогенность и безвредность штамма для кур.
Иммунизирующая доза вируса, обеспечивающая защиту 95% привитых птиц (ИмД95).
Оценивали напряженность протективного иммунитета птиц в зависимости от прививной дозы штамма «КЭМ-7». С этой целью группы цыплят (5≤n≤12) были вакцинированы различными прививными дозами (-1,22÷2,09 IgИД50) интрадермально в перепонку крыла. Через 21÷28 суток после вакцинации птицам провели интрадермальную инъекцию вирулентного штамма «Кучинский» вируса оспы кур в дозе 3 Ig ИД50 в крыло, противоположное тому, в которое была ранее сделана прививка. Птицу считали защищенной, если воспалительная реакция на месте инъекции вирулентного штамма отсутствовала.
Для заданных прививных доз (D) определяли долю защищенных птиц в группе (с). Полученные величины с преобразовывали в табличные пробит-эквиваленты (y=f(c)) для построения линейной модели вида «y=y+k(IgD), где «y — прогнозируемый пробит-эквивалент с для заданной величины IgD. На основании построенной модели определяли прогнозируемую величину прививной дозы, гарантирующую защиту 95% иммунизированных птиц. Далее по таблице производили обратное преобразование по типу «c=f(«y). Полученные результаты в графическом виде представлены виде диаграммы (Фиг.2).
Проведенный анализ системы «прививная доза → протективный эффект» позволил определить, что для защиты 95% иммунизированной птицы необходима доза вакцинного вируса в размере IgD95=1,567IgИД50 (или D95=37 ИД50). Учитывая статистические характеристики исследуемой системы и ориентируясь на более осторожный прогноз, в качестве гарантирующей протективной дозы приняли верхнюю границу соответствующего доверительного интервала (р≤0,05), которая составила приближенную величину IgD + 95=2 IgИД50 (или D + 95=100 ИД50), что соответствует 3 IgЭИД50 или 10 3 ЭИД50.
Динамика напряженности иммунитета у цыплят, вакцинированных штаммом.
Оценивали напряженность иммунитета через заданные интервалы времени в группах птиц (n≥8), вакцинированных в дозе 3 Ig ЭИД50/0,004 см 3 . С этой целью использовали повторную прививку штамма «КЭМ-7» в той же дозе, выполненной в противоположное крыло на 3, 5, 7, 14, 21, 30, 60, 120, 200, 270 и 360 сутки после вакцинации. Отсутствие воспалительной реакции на повторную прививку свидетельствовало о наличии иммунной защиты у птицы. В подопытных группах определяли доли защищенных птиц. На основании полученных данных построили диаграмму (Фиг.3).
Приведенные на диаграмме результаты иллюстрируют, что протективная фаза иммунитета наступает на 14 сутки после иммунизации. Далее происходит плавное снижение напряженности иммунитета. В продолжение эксперимента (360 суток) показатель напряженности иммунитета превышал значение 0,8, что указывает на высокую иммуногенность штамма «КЭМ-7».
Устойчивость аттенуированного фенотипа вируса при пассажах в системе культивирования.
Провели 8 пассажей штамма «КЭМ-7» на развивающихся СПФ-эмбрионах кур. В качестве вирусного материала использовали осветленный высокодисперсный гомогенат ХАО. Для каждого четного пассажа определяли следующие иммунобиологические показатели: инфекционный титр (IgЭИД50/см 3 ), иммуногенное действие вируса в дозе 3 IgЭИД50/0,004 см 3 (по исключению местной воспалительной реакции при контрольном заражении через 21 сутки после вакцинации); безвредность вируса в дозе 3,7 IgИД50/0,004 см 3 (по исключению эффекта генерализации). Полученные результаты представлены в таблице 5.
Приведенные в таблице 5 результаты показывают, что вирусная популяция штамма «КЭМ-7» в течение 8 пассажей, проведенных на СПФ-эмбрионах кур, по изученным признакам не показала видимых изменений своего фенотипа. Установленные соответственно пассажам величины инфекционных титров, характеризующие накопление вируса в данной системе культивирования, существенных различий не имели.
Устойчивость аттенуированного фенотипа штамма при пассажах на птице.
Провели шесть последовательных пассажей штамма «КЭМ-7» на цыплятах путем интрадермальных инъекций в перепонку крыла. Для каждого пассажа образовывали группу цыплят в возрасте 30-45 суток (n≥6), которых на 7 сутки после прививки подвергали эвтаназии и отбирали пробы дермы, имеющей признаки воспаления с места инъекции вируссодержащего препарата. Из полученных образцов ткани готовили 10%-ную суспензию, которую использовали для следующего пассажа.
В группе цыплят 6 пассажа в течение 28 суток проводили клинический контроль. Установили, что на 7 сутки после введения препарата развивалась обычная для данного вакцинного штамма картина местного воспалительного процесса, где присутствовали стадии розеолы, папулы, крусты. Признаки угнетения, отказа от корма у подопытных птиц отсутствовали. Диаметр очага воспаления находился в диапазоне от 8 до 17 мм. Признаков генерализации инфекции (возникновение вторичных очагов воспаления) не отмечено. Был сделан вывод, что фенотип вакцинного штамма «КЭМ-7» при пассажах на естественно восприимчивых объектах по совокупности исследованных признаков изменений не претерпел.
Сравнение иммунологического действия двух штаммов «КЭМ-7» и «Gibbs» (в составе вакцины «Нобилис АЕ+РОХ», «Интервет»).
Использовали 50 голов цыплят 30-суточного возраста, которых разделили на 3 группы. Цыплят первой группы (20 голов) вакцинировали штаммом «КЭМ-7» интрадермально в дозе 3 Ig ЭИД50. Цыплят второй группы (20 голов) привили препаратом «Нобилис АЕ+РОХ» согласно инструкции. У цыплят первой и второй группы через 5-7 суток на месте прививки наблюдали воспалительную реакцию, характерную для вакцин против оспы. Цыплята третьей группы служили в качестве контроля. На 21 сутки после вакцинации в обеих опытных группах десяти цыплятам в противоположное крыло провели повторную гомологичную прививку. Остальных десять цыплят в каждой подопытной группе, а также в контрольной, инфицировали в дозе 10 3 ИД50 полевым изолятом вируса оспы кур, выделенным из патологического материала, присланного в ФГБУ «ВНИИЗЖ» (первый пассаж на эмбрионах кур). За птицей установили ежедневный клинический контроль. Птицу считали защищенной, если воспалительная реакция на месте повторной прививки или инъекции вирулентного штамма отсутствовала. В подопытных группах определяли долю защищенных птиц, в контрольной группе оценивали заболеваемость. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 6.
Результаты, приведенные в таблице 6, демонстрируют, что напряженность иммунитета у птиц на штамм «КЭМ-7» и «Gibbs» была одинаковой как при оценке путем повторной гомологичной прививки, так и при контрольном заражении патогенным полевым изолятом. Все цыплята подопытных групп имели протективный уровень иммунитета. При этом все цыплята контрольной группы в той или иной степени демонстрировали развитие инфекционного процесса.
Проведенный эксперимент показал, что по изученным признакам иммунный ответ птицы на прививку штамма «КЭМ-7» не уступает иммунной реакции, индуцированной штаммом «Gibbs», входящим в состав коммерческого препарата «Нобилис АЕ+РОХ», «Интервет».
Клинические исследования эмбрион-вакцины против оспы птиц из штамма «КЭМ-7» с разбавителем.
На основе штамма «КЭМ-7» был изготовлен препарат «Эмбрион-вакцина против оспы птиц из штамма «КЭМ-7» с разбавителем».
Препарат состоит из сухого компонента (эмбрион-вакцина), который представляет собой лиофилизированный гомогенат ткани ХАО, содержащий вирус оспы кур штамм «КЭМ-7», и жидкого компонента (разбавителя) — изотонического фосфатно-буферного раствора с добавлением глицерина.
Клинические исследования препарата «Эмбрион-вакцина против оспы птиц из штамма «КЭМ-7» с разбавителем» проводили в хозяйствах ЗАО «Белгородский бройлер» (Белгородская область) и ЗАО «Птицефабрика Александровская» (Владимирская область).
Препарат применяли однократно методом внутрикожной инъекции в перепонку крыла с помощью двухигольного инъектора в соответствии с прилагаемой инструкцией. На протяжении 21 суток после прививки за птицей вели клиническое наблюдение.
На предприятии ЗАО «Белгородский бройлер» было привито 38923 кур кросса «F15» в возрасте 70 суток. Полученные результаты клинического исследования препарата представлены в таблице 7.
На предприятии ЗАО «Птицефабрика Александровская» было привито 241215 кур-несушек в возрасте 250-807 суток.
Препарат оценивали по следующим показателям:
1. Оценка эффективности вакцинации. Показателем результативности прививки (приживления вируса) являлась воспалительная реакция на месте инъекции. Определяли представительство (процент) птицы с поствакцинальной реакцией. Соответствующие результаты представлены в таблице 8. Критерием эффективности вакцинации (наличие поствакцинального иммунитета) считали отсутствие местной воспалительной реакции у птиц после вторичной прививки препарата, проведенной в противоположное крыло через 21-67 суток после первой вакцинации. С этой целью в каждом цехе выделяли группу вакцинированных птиц в количестве 40-70 голов, которым производили повторную прививку и в течение 10 суток вели клиническое наблюдение. Определяли процент иммунных птиц. Полученные результаты по оценке эффективности вакцинации представлены в таблице 8.
В вакцинированном поголовье иммунная птица составила 100%. Эмбрион-вакцина является иммуногенной.
2. Оценка сохранности и продуктивности птицепоголовья. Сопоставили показатели продуктивности птиц и сохранности (яйценоскость и среднесуточный падеж за 7 суток) до и после проведения вакцинации. Полученные результаты представлены в таблице 9.
Данные, представленные в таблице 9, демонстрируют, что применение эмбрион-вакцины не оказывает выраженного влияния на показатели сохранности и продуктивности иммунизированного птицепоголовья.
На основании результатов проведенных клинических исследований препарата в ЗАО «Птицефабрика Александровская» и в ЗАО «Белгородский бройлер» установлено, что приготовленная эмбрион-вакцина на основе штамма «КЭМ-7» вируса оспы кур является безвредной и иммуногенной. Применение данного препарата не повлияло на показатели сохранности и продуктивности вакцинированного птицепоголовья.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Аттенуированный штамм «КЭМ-7» вируса оспы кур Fowlpox virus для изготовления препаратов специфической профилактики и диагностики оспы птиц»:
источник