Меню Рубрики

Патогенез и микробиологический диагноз дифтерии

1. Морфология и культуральные свойства

Возбудитель относится к роду Carinobakterium, виду C. difteria.

Это тонкие палочки, прямые или слегка изогнутые, грамположительные. Для них характерен выраженный полиморфизм. На концах булавовидные утолщения – метахроматические зерна волютина. Эти включения располагаются по одному на каждом конце и могут быть выявлены при окраске по методу Нейссера. В мазках бактерии располагаются под углом в виде V или X, что обусловлено их собственным «щелкающим» делением.

Спор и капсул не образуют. Неподвижны. Имеют фимбрии. Являются факультативными анаэробами или аэробами.

Выделяясь во внешнюю среду со слюной, пленками, дифтерийные палочки способны сохранять жизнеспособность на предметах в течение нескольких дней. Хорошо переносят высушивание. Чувствительны к антибиотикам и дезинфицирующим средствам.

Каринобактерии требовательны к питательным средам, для их культивирования применяются сывороточные среды или среды с добавлением крови. Используется среда Ру (свернутая сыворотка). На ней видимый рост наблюдается через 10–12 ч, колонии выпуклые, величиной с булавочную головку, серовато-белого цвета, с гладкой поверхностью, не сливаются друг с другом.

Для выделения используются элективные питательные среды с добавлением толурита калия в такой концентрации, в которой он не подавляет рост коринобактерий, но ингибирует рост сопутствующей микрофлоры. На кровяно-толуритовом агаре формируются колонии от серого до черного цвета. На жидких средах наблюдается рост в виде пленки или помутнения с осадком.

По биохимическим свойствам, характеру роста на питательных средах каринобактерии подразделяются на три биовара:

Для дифференцировки биоваров учитывают следующие биохимические свойства:

2) восстановление нитратов;

1) групповой полисахаридный антиген;

3) вариантспецифический К-антиген.

По К-антигену вид подразделяется на 11 сероваров.

1) ворсинки, фимбрии или пили (отвечают за способность к адгезии);

2) колонизация и инвазия (за счет ферментов, таких как нейраминидаза, гиалуронидаза, протеазы);

3) корд-фактор (нарушает фосфорилирование процессов дыхания клеток макроорганизма);

4) ведущий фактор – экзотоксин. Это белок, состоящий из пептидов А и В. Пептид В выполняет функцию акцептора, он распознает соответствующие рецепторы клеток, связывается с ними и формирует внутримембранный канал, через который в клетку проникает пептид А. Пептид А реализует биологическую активность токсина.

Пути передачи – воздушно-капельный, контактно-бытовой. Заболевание развивается у лиц, не имеющих антитоксического иммунитета.

Возбудитель проникает через слизистые оболочки ротоглотки, реже – глаз, половых органов, кожу, раневую поверхность. В месте входных ворот возбудитель прикрепляется к соответствующим рецепторам эпителиальных клеток, вызывая воспалительный процесс. Затем происходят колонизация и выделение экзотоксина (гистотоксина).

Токсин блокирует ферменты синтеза белка в клетках хозяина, что приводит к их гибели. Это обуславливает некроз и летальный исход.

Сам возбудитель остается на месте входных ворот инфекции, а патогенез и клиническая картина определены действием экзотоксина, который оказывает общее и местное действие.

Патоморфологическим проявлением взаимодействия макро– и микроорганизма при дифтерии является фибринозное воспаление. Экзотоксин сначала поражает непосредственно эпителиальные клетки, а затем близлежащие кровеносные сосуды, повышая их проницаемость. В выходящем из сосудов экссудате обнаруживается фибриноген, при свертывании которого на поверхности слизистой оболочки образуются серовато-белого цвета пленчатые налеты, плотно спаянные с окружающей тканью. Они тяжело снимаются, при их отрыве обнажается эрозийная поверхность. Разрастание этих пленок и переход их на воздухоносные пути приводят к развитию истинного крупа и асфиксии.

Затем в воспалительный процесс вовлекаются:

1) регионарные лимфатические узлы (лимфадениты);

2) сосуды (токсин быстро проникает в кровь, при этом возникает паретическое расширение сосудов, что приводит к застою и стазу);

3) сердце (токсин поражает миокард, проводящую систему сердца, что приводит к параличу сердечной мышцы);

4) кора надпочечников избирательное поражение, что оказывает вторично неблагоприятное влияние на сердечно-сосудистую систему;

6) периферическая нервная система – полиневриты, парезы, параличи (в первую очередь – парез мягкого неба);

7) иммунная система (на 5—7-й дни антитела отсутствуют).

Сила токсина измеряется в DLM. 1 DLM – это минимальное количество токсина, которое при подкожном введении морской свинке весом 250 г вызывает ее гибель на 4—5-е сутки при характерной патолого-анатомической картине: надпочечники увеличены, резко гиперемированы, в полостях геморрагический экссудат.

После перенесенного заболевания формируется нестойкий и непродолжительный антибактериальный иммунитет и стойкий антитоксический.

Наиболее восприимчивы к дифтерии дети от 1 года до 4 лет.

3. Диагностика. Профилактика. Лечение

1. Основной метод – бактериологическое исследование.

2. Определение токсигенности видовой культуры (реакция преципитации Вагая).

Способы определения токсигенности:

1) биологическая проба – морским свинкам внутрикожно вводится бульонная культура;

3) использование ДНК-зондов, с помощью которых определяется наличие токсического оперона в геноме выделенной культуры;

4) реакция преципитации Вагая.

1) лица с подозрением на дифтерию;

2) больные с различными заболеваниями лор-органов.

Особенности бактериологического исследования при дифтерии:

1) осуществляется посев материала на элективные питательные среды;

2) слизистые оболочки носа, зева, половых органов, кожа в составе нормальной микрофлоры содержат различных представителей рода Carinobakterium. Они условно-патогенны, объединены понятием дифтероиды. У ослабленных больных, с вторичным иммунодефицитом, у онкологических больных могут вызывать различные гнойно-воспалительные процессы. В ходе бактериологического исследования надо дифференцировать каринобактерии дифтерии от дифтероидов.

Отличия дифтероидов от возбудителей дифтерии:

1) различия по морфологическим свойствам. Дифтероиды в мазках располагаются беспорядочно или в виде палисада. В цитоплазме зерна волютина отсутствуют;

2) различия в биохимической активности;

3) для выявления различий в антигенных свойствах используют реакцию агглютинации по идентификации с видовой дифференцированной сывороткой;

4) чувствительность к бактериофагу.

Культуральные свойства не отличаются.

Этиотропная терапия: антитоксическая противодифтерийная сыворотка; вводится в дозе 10 000—50 000 АЕ (в зависимости от возраста и тяжести заболевания).

1 АЕ – это такое минимальное количество сыворотки, которое нейтрализует 100 DLF дифтерийного токсина.

Серотерапия эффективна в ранний период болезни, пока токсин не фиксирован клетками организма и ткани существенно не повреждены.

1) активная. Используются вакцины: АД (дифтерийный анатоксин), АДС, АДСМ, АКДС. Вакцинация АКДС проводится трехкратно детям в возрасте 3 месяцев. Ревакцинация проводится под контролем определения содержания (титра) антитоксинов сыворотки с помощью реакции РПГА с дифтерийным анатоксическим эритроцитарным диагностикумом. Если РПГА положительна при разведении 1: 20 и выше, титр считается защитным;

2) пассивная. Проводится в очагах заболевания антитоксической сывороткой, доза которой определяется формой и тяжестью заболевания.

источник

Возбудитель дифтерии относится к роду Corynebacterium (от лат. coryna — булава, diphthera — пленка). Бактерии имеют булавовидные утолщения на концах. К этому роду относятся патогенные для человека дифтерийные палочки и непатогенные виды — ложнодифтерийные палочки и дифтероиды, обнаруживаемые на слизистых оболочках и кожных покровах.

Возбудители дифтерии — Corynebacterium diphtheriae — были обнаружены Т. Клебсом (1883) и выделены в чистом виде Ф. Леффлером (1884).

Морфология. Возбудители дифтерии слегка изогнутые, тонкие палочки, размером 3-6 × 0,3-0,5 мкм, на концах которых имеются утолщения. В этих утолщениях имеются зерна волютина (зерна Бабеша — Эрнста). Бактерии дифтерии неподвижны, не имеют спор и капсул. Грамположительны. Они хорошо окрашиваются основными анилиновыми красителями, при этом волютиновые зерна окрашиваются интенсивнее. Для окраски обычно применяют щелочной метиленовый синий или кристаллический фиолетовый. Особенностью коринебактерий дифтерии является их полиморфность; в одной кулатуре встречаются различные по форме и размерам палочки: изогнутые, прямые, длинные, короткие, толстые, иногда коккобактерии. Характерно расположение бактерий в мазках — они обычно располагаются попарно под острым или тупым углом, в виде растопыренных пальцев и т. д. Расположение в мазках и наличие зерен волютина является дифференциально-диагностическим признаком при микроскопическом исследовании. Непатогенные представители рода коринебактерий — ложнодифтерийные палочки и дифтериоды чаще располагаются в виде частокола, зерна волютина у них могут отсутствовать либо быть на одном конце (см. рис. 4).

Культивирование. Коринебактерий дифтерии — факультативные анаэробы. Растут при температуре 35-37° С, рН среды 7,4-7,8. Они не размножаются на обычных питательных средах. Культивируют их на средах, содержащих кровь или сыворотку.

В конце XIX века французский ученый Э. Ру для культивирования бактерий дифтерии предложил использовать свернутую бычью или лошадиную сыворотку, а Ф. Леффлер рекомендовал добавлять к ней бульон (25%) и 1% глюкозу. На этих средах коринебактерий растут быстро, в течение 14-18 ч образуют несливающиеся выпуклые колонии кремового цвета (рост на скошенной среде напоминает шагреневую кожу). Однако отдифференцировать на этих средах дифтерийные палочки от ложнодифтерийных невозможно.

В настоящее время основными средами для выращивания являются среда Клауберга (содержащая сыворотку крови и теллурит калия), хинозольная среда Бунина, среда Тинсдаля и др. На основании культуральных и ферментативных свойств коринебактерий дифтерии делят на три биовара: гравис (gravis), ми тис (mitis), интермедиус (intermedins). Биовар гравис обычно находится в R-форме. На среде Клауберга бактерии этого биовара растут в виде крупных колоний 2-3 мм, серовато-черного цвета (так как восстанавливают теллурит в теллур), имеют изрезанные края, что придает им вид розетки. При прикосновении к колонии петлей она как бы рассыпается. На бульоне бактерии этого биовара образуют крошащуюся пленку и зернистый осадок.

Коринебактерии биовара митис (mitis) на среде Клауберга растут в виде небольших, гладких колоний (S-форма) черного цвета. На бульоне они дают равномерное помутнение.

Коринебактерии биовара интермедиус (intermedins) являются промежуточными. На среде Клауберга бактерии этого биовара чаще растут в виде блестящих, мелких, черных колоний (этот биовар встречается редко).

Ферментативные свойства. Все три биовара дифтерийных бактерий обладают ферментом цистиназой, расщепляющим цистин с образованием сероводорода. Эти свойства используются для дифференциации возбудителей дифтерии от непатогенных представителей этого рода (табл. 49).


Таблица 49. Свойства возбудителей дифтерии и близких к ним коринебактерий

Примечание. + положительная реакция (расщепляет); — отрицательная реакция (не расщепляет).

Возбудители всех трех биоваров расщепляют глюкозу и мальтозу до образования кислоты. С. gravis расщепляют крахмал. Это свойство отличает его от двух других биоваров. Коринебактерий дифтерии восстанавливают нитраты в нитриты, не образуют индол, не разлагают мочевину.

Коринебактерии дифтерии образуют нейраминидазу, гиалуронидазу и другие ферменты патогенности.

Токсинообразование. Вирулентные штаммы возбудителей дифтерии продуцируют экзотоксин. Химически он представляет собой термолабильный белок, состоящий из Двух фракций. Фракция В фиксирует токсин на чувствительных к нему тканях организма. Фракция А ответственна за токсическое действие. Силу токсина дифтерийных культур можно устанавливать «in vivo» на чувствительных к этому токсину морских свинках. Dim дифтерийного экзотоксина — минимальная смертельная доза, это минимальное количество яда, убивающее морскую свинку массой 250 г на 4-й день.

Наличие экзотоксина можно обнаружить также «in vitro» — на плотной питательной среде. Этот метод широко используется в практической работе. Дифтерийный экзотоксин малоустойчив. Он быстро разрушается под влиянием температуры, света и кислорода воздуха. После добавления к токсину формалина (0,3-0,4%) и выдерживания его при температуре 37-38° С в течение нескольких недель он переходит в анатоксин, который теряет ядовитость, но сохраняет антигенные свойства токсина. Токсины, образуемые различными штаммами, не различаются между собой и могут быть нейтрализованы дифтерийным антитоксином * .

* ( В настоящее время установлено, что все биовары коринебактерий могут быть токсигенными и нетоксигенными.)

Антигенная структура. У бактерий дифтерии имеется поверхностный термолабильный белковый антиген и типоспецифический полисахаридный О-антиген. Кроме этого, среди коринебактерий различают 19 фаговаров, которые учитываются при идентификации культур. С помощью фаговаров выявляют источник заболевания.

Устойчивость к факторам окружающей среды. Возбудители дифтериии сравнительно устойчивы. Температура 60° С убивает их через 10-15 мин, 100° С — через минуту. В пленке они выдерживают нагревание до 90° С. На свернутой сыворотке при комнатной температуре сохраняются до 2 мес, на детских игрушках — несколько суток. Низкие температуры коринебактерий переносят хорошо. К высушиванию возбудители дифтерии довольно устойчивы. Дезинфицирующие вещества (3% раствор фенола, 1% раствор сулемы, 10% раствор перекиси водорода) убивают эти бактерии в течение нескольких минут.

Восприимчивость животных. В естественных условиях животные дифтерией не болеют. Из экспериментальных животных наиболее восприимчивы морские свинки и кролики. При внутрикожном или подкожном заражении у них развивается картина токсикоинфекции с образованием на месте введения воспаления, отека, некроза. В надпочечниках наблюдаются кровоизлияния.

Источники заболевания. Больные люди и бактерионосители.

Пути передачи. Воздушно-капельный путь, контактно-бытовой (через посуду, игрушки, книги, полотенца и т. д.).

Заболевание у человека: 1) дифтерия зева; 2) дифтерия носа.

Реже возникает дифтерия трахеи, бронхов, глаз, уха, влагалища и дифтерия поврежденной кожи.

Патогенез. Входными воротами являются слизистые оболочки дыхательных путей и поврежденная кожа. Попав на слизистую оболочку, возбудители дифтерии размножаются в месте внедрения и вызывают некроз ткани. Образуется пленка, тесно связанная с подлежащими тканями. На поверхности слизистой появляются грязно-серые или желтоватые налеты, состоящие из разрушенного эпителия, фибрина, лейкоцитов и коринебактерий дифтерии. При снятии пленки ватным тампоном или шпателем поверхность слизистой может кровоточить.

Читайте также:  Прививать ребенка против дифтерии и столбняка

В процессе размножения коринебактерий дифтерии в некротических участках накапливается экзотоксин, который может привести к отеку слизистой оболочки и клетчатки. Со слизистой оболочки отек может распространяться на гортань, бронхи и вызвать явления асфиксии. Токсин, циркулирующий в крови, избирательно поражает сердечную мышцу, надпочечники и клетки нервной ткани.

Дифтерия — это токсикоинфекция. Тяжесть процесса зависит от степени токсигенности штамма и от защитных сил организма.

Иммунитет. Невосприимчивость обусловливается антитоксическим и антибактериальным иммунитетом. Грудные дети не болеют, так как у них имеется пассивный иммунитет, переданный от матери.

О наличии антитоксического иммунитета судят по реакции Шика. Для постановки реакции 1 /40 Dlm (летальной дозы токсина для морской свинки), содержащегося в 0,2 мл изотонического раствора натрия хлорида, вводят внутрикожно в области предплечья. При отсутствии в крови антитоксина в месте введения через 24-48 ч появляется краснота и припухлость (до 2 см в диаметре). При наличии антитоксина припухлости и красноты нет (имеющийся в крови антитоксин нейтрализовал введенный токсин).

Перенесенное заболевание оставляет иммунитет. Однако в 6-7% случаев наблюдаются повторные заболевания.

Профилактика. Ранняя диагностика. Изоляция. Дезинфекция. Выявление носителей токсигенной дифтерийной палочки.

Специфическая профилактика осуществляется введением анатоксина. В СССР проводят обязательную вакцинацию детей вакциной АКДС — это комплексная вакцина, в которую входят дифтерийный и столбнячный анатоксин и взвесь убитых коклюшных палочек. Вакцинируют детей с 5-6 месяцев с последующей ревакцинацией. Для ревакцинации вводят вакцину без коклюшных палочек.

Специфическое лечение. Применяют противодифтерийную антитоксическую сыворотку. Доза и кратность определяется лечащим врачом, вводят также антимикробные препараты.

1. Какова морфология коринебактерий дифтерии и какие имеются биовары?

2. На каких средах выращивают бактерии дифтерии и каков характер роста?

3. Отношение к какому углеводу позволяет отличить биовар gravis от других биоваров дифтерии?

4. Каков путь передачи и где чаще локализуется возбудитель дифтерии у больного?

5. Каковы специфическая профилактика и специфическое лечение дифтерии?

Цель исследования: выделение возбудителя для постановки диагноза. Выявление бактерионосителей дифтерии по эпидемиологическим показаниям. Выявление экзотоксина у выделенной культуры.

1. Отделяемое слизистой оболочки зева.

2. Отделяемое слизистой оболочки носа.

3. Отделяемое слизистой оболочки глаза.

5. Отделяемое слизистой оболочки влагалища.

Материал для исследования зависит от локализации процесса.


Способы сбора материала

При любой локализации процесса обязательно исследует слизистую зева и носа. Материал собирают ватным тампоном, для чего используют металлическую проволоку, желательно алюминиевую, на один конец которой плотно накручивают вату, затем тампон монтируют в корковую пробку, помещают в пробирку и стерилизуют в печи Пастера при температуре 160° С 1 тампон течение часа или в автоклаве при температуре 112° С.

Примечания. 1. Материал собирают натощак либо не раньше чем через 2 ч после еды и не ранее чем через 4 дня после лечения антибиотиками или другими антибактериальными средствами. 2. Если материал берут из зева и носа, то пробирки с обоими тампонами надписывают и связывают вместе. Посевы делают раздельно и исследование материала из каждого тампона ведут как самостоятельную работу. 3 Материал, собранный сухим тампоном, должен быть посеян не позднее чем через 2-3 ч после забора. При необходимости транспортировки собранного материала тампон предварительно смачивают 5% раствором глицерина в изотоническом растворе натрия хлорида.


Первый день исследования

Чашки вынимают из термостата и просматривают. Рост бактерий на среде Клауберга может быть замедлен из-за наличия ингибиторов в среде. В этом случае чашки ставят в термостат еще на 24 ч.

Чашки вынимают из термостата, просматривают их с помощью лупы или стереоскопического микроскопа. При наличии подозрительных колоний часть их под контролем стереоскопического микроскопа выделяют на агар с 25% сывороткой и на столбик со средой Пизу для определения фермента цистиназы. Из другой части колоний ставят пробу на токсигенность.

При микроскопическом исследовании колоний, снятых со среды Клауберга, коринебактерии дифтерии теряют свою специфичность: отсутствует зернистость, изменяется величина, расположение сохраняется. При посеве их на среды с сывороткой морфологическая специфичность возбудителей дифтерии восстанавливается.

Проба на наличие фермента цистиназы и определение токсигенности являются обязательными при идентификации возбудителей дифтерии. Если результат этих опытов, проведенных с частью колоний со среды Клауберга, недостаточно четкий или отрицательный, то опыт повторяют, используя выделенную чистую культуру.

Проба на цистиназу. Проводят посев исследуемой культуры уколом в центр столбика среды Пизу. При положительной реакции через 18-24 ч по ходу укола наблюдается почернение, а вокруг черного стержня образуется темное облачко; почернение происходит в результате того, что фермент цистиназа расщепляет цистин, входящий в состав среды Пизу, и освободившаяся сера вступает в реакцию с ацетатом свинца — образуется сульфит свинца черного цвета. Дифтероиды и ложнодифтерийные палочки не содержат фермент цистиназу, поэтому при росте их на среде Пизу цвет среды не изменяется.

Определение экзотоксина. Проводят методом диффузной преципитации в геле. Метод основан на взаимодействии токсина с антитоксином. В тех участках агара, где эти компоненты взаимодействуют, образуется преципитат в виде закругленных линий.

Методика определения: в чашки Петри разливают растопленный и охлажденный до 50° С агар Мартена рН 7,8 (на агаре Мартена лучше продуцируется экзотоксин). Количество агара в чашке должно быть не более 12-15 мл, чтобы сохранить прозрачность, — в толстом слое линии преципитации плохо видны. После застывания агара накладывают полоску стерильной фильтровальной бумаги, смоченной противодифтерийной антитоксической сывороткой.

Испытуемую культуру засевают «бляшками». Посев производят петлей. Диаметр бляшек 0,8-1,0 см. Расстояние бляшек от края полосок бумаги 0,5-0,7 см, между двумя бляшками испытуемой культуры засевают бляшки заведомо токсигенного штамма. Испытуемую культуру считают токсигенной, если линии преципитации четки и сливаются с линиями преципитации контрольного (токсигенного) штамма. Если линии преципитации перекрещиваются с линиями контрольного штамма или отсутствуют, выделенную культуру считают нетоксигенной (рис. 50).


Рис. 50. Выявление экзотоксина C.Diphtheriae методом диффузной преципитации в агаре. 1 — бляшки нетоксигенного штамма (линии преципитации перекрещиваются); 2 — бляшки токсигенного штамма (линии преципитации соединяются)

Приготовление полосок бумаги. Из фильтровальной бумаги нарезают полоски размером 1,5×8 см, заворачивают по несколько штук в бумагу и стерилизуют в автоклаве при температуре 120° С в течение 30 мин. Перед постановкой опыта стерильным пинцетом вынимают одну полоску, укладывают ее в стерильную чашку Петри и смачивают противодифтерийной антитоксической сывороткой. Предварительно сыворотку разводят так, чтобы в 1 мл содержалось 500 АЕ (антитоксических единиц). Бумажку смачивают 0,25 мл сыворотки (125 АЕ) и помещают на поверхность среды. Затем делают посевы указанным выше способом. Все посевы ставят в термостат. Учет результатов производят через 18-24 и 48 ч.

Вынимают посевы из термостата, учитывают результат. Делают мазки из культуры, выросшей на среде с сывороткой, и окрашивают их синим Леффлера.

Наличие в мазках характерных по морфологии палочек, черного с облачком стержня в среде Пизу и линий преципитации в агаре позволяет дать предварительный ответ: «Обнаружены коринебактерии дифтерии». Исследование продолжают. При отсутствии линий преципитации в агаре или их недостаточной четкости исследование на токсигенность обязательно повторяют с выделенной чистой культурой.

Для окончательной идентификации выделенной культуры и определения биовара возбудителя производят посев на глюкозу, сахарозу, крахмал и бульон с мочевиной (для выявления фермента уреазы). Посев на среды делают обычным способом.

Проба на уреазу. Выделенную культуру засевают на бульон с мочевиной и индикатором (крезоловый красный) и ставят в термостат. Уже через 30-40 мин можно учитывать результат: при посеве истинных возбудителей дифтерии цвет среды не изменяется, так как они не содержат уреазу. Псевдодифтерийные палочки расщепляют мочевину и изменяют индикатор — среда приобретает малиново-красный цвет.

Производят учет результатов (табл. 50).


Таблица 50. Ферментативные свойства выделенных возбудителей

1. Какой материал исследуют для выявления возбудителя дифтерии?

2. Как собирают материал для исследования на дифтерию из зева и носа?

3. Что нужно сделать с тампоном, если собранный материал необходимо транспортировать?

4. При помощи какого прибора изучают колонии на среде Клауберга?

5. Какие исследования проводят для окончательной идентификации выделенной культуры?

6. Какими методами определяют токсигенность коринебактерий дифтерии?

1. Возьмите у преподавателя проволоку и вату и приготовьте 10 тампонов, вмонтируйте их в корковую пробку, вставьте в пробирку и простерилизуйте.

Внимание! Перед стерилизацией проверьте, достаточно ли плотно накручен тампон.

2. Возьмите у преподавателя стерильные тампоны и произведите забор материала друг у друга из зева и носа (разными тампонами).

3. Изучите по табл. 49 свойства возбудителей дифтерии и близких к ним коринебактерий.

4. Поставьте пробу на токсигенность. Бляшки сделайте петлей без культуры.

5. Зарисуйте ход исследования и положительный и отрицательный результат пробы на токсигенность.

Теллуровая среда Клауберга: первая смесь — предварительно за 1,5 мес готовят смесь из 20 мл бараньей или лошадиной крови и 10 мл глицерина. В день приготовления среды готовят две другие смеси; вторая смесь — 50 мл МПА рН 7,5 растапливают и охлаждают до температуры 50° С, после чего прибавляют 2,5 мл первой смеси; третья смесь — смешивают 17 мл бараньей крови и 33 мл дистиллированной воды (смесь приготавливают стерильно), подогревают на водяной бане до температуры 50° С. Соединяют вторую и третью смеси, прибавляют 4 мл 1% раствора теллурита калия К2ТеО3, быстро все перемешивают и разливают в чашки. Среда прозрачная, имеет цвет красного вина.

Среда Пизу. К 90 мл расплавленного 2% МПА (рН 7,6) добавляют 2 мл раствора цистина (1% раствор цистина в 0,1 н. растворе гидроксида натрия), тщательно перемешивают и добавляют такой же объем 0,1 н. раствора серной кислоты. Среду стерилизуют 30 мин при температуре 112° С. К расплавленной и охлажденной до 50° С среде добавляют 1 мл 10% раствора ацетата свинца, стерилизованного двукратно текучим паром, перемешивают и добавляют 9 мл нормальной лошадиной сыворотки. Среду стерильно разливают в маленькие пробирки по 2 мл. Посев производят уколом.

Среда Бунина. Сухую хинозольную среду добавляют к 100 мл холодной воды (рН 7,6-7,8), размешивают и нагревают на слабом огне до расплавления агара (по прописи на этикетке). Затем среду кипятят 2-3 мин до образования пены, после чего среду остужают до 50° С и добавляют 5-10 мл стерильной дефибринированной крови. Среду перемешивают и разливают в чашки Петри. Готовую среду можно сохранять 3-4 дня при температуре 4-10°.

Среда Тинсдаля. К 100 мл 2% питательного агара, расплавленного и охлажденного до 50° С, добавляют: 1) 12 мл 1% раствора цистина на 0,1 н. растворе серной кислоты; 2) 12 мл 1% раствора гидроксида натрия; 3) 1,8 мл 2% раствора теллурита калия; 4) 1,8 мл 2,5% раствора гипосульфита натрия, 20 мл нормальной лошадиной или бычьей сыворотки. После добавления каждого ингредиента среду тщательно перемешивают. Чашки со средой хранят 3-4 дня при 10° С.

источник

Возбудитель дифтерии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Выявление антитоксического иммунитета. Специфическая профилактика и лечение

Дифтерия — острая инфекционная болезнь, харак­теризующаяся фибринозным воспалением в зеве, гортани, реже в других органах и явлениями ин­токсикации. Возбудителем ее является Corynebacterium diphtheriae.

Таксономия. Corynebacterium относится к отделу Firmicutes, роду Corynebacterium.

Морфологические и тинкториальные свойства. Возбудитель дифтерии характеризуется полиморфизмом: тонкие, слегка изогнутые палочки (наиб. распространенные) встречаются кокковидные и вет­вящиеся формы. Бактерии нередко располагаются под углом друг к другу. Они не образуют спор, не имеют жгутиков, у многих штаммов выявляют микрокапсулу. Характерная особенность — наличие на концах палочки зерен волютина (обусловливает булавовидную форму). Возбудитель дифтерии по Граму окрашивается положи­тельно.

Культуральные свойства. Факульта­тивный анаэроб, оптим. темпе­ратура. Микроб растет на специальных питатель­ных средах, например на среде Клауберга (кровяно-теллуритовый агар), на которой дифтерийная палочка даёт колонии 3 типов: а) крупные, серые, с неровными краями, радиальной исчерченностью, напоминающие маргаритки; б) мелкие, чер­ные, выпуклые, с ровными краями; в) похожие на первые и вторые.

В зависимости от культуральных и ферментативных свойств различают 3 биологических варианта C.diphtheriae: gravis, mitis и промежуточный intermedius.

Ферментативная ак­тивность. Высокая. Ферментируют глк и мальтозу в образованием кислоты, не разлагают сахарозу, лактозу и маннит. Не продуцируют уреазу и не образуют индол. Продуцирует фермент цистиназу, рпсщепляющую цистеин до H2S. Образует каталазу, сукцинатдегидрогеназу.

Антигенные свой­ства. О-антигены – термостабильные полисахаридные, расположены в глубине клеточной стенки. К-антигены – поверхностные, термолабильные, сероватоспецифические. С помошью сывороток к К-антигену С.diph. разделяют на серовары(58).

Факторы патогенности. Экзотоксин, нарушающий синтез белка и пора­жающий в связи с этим клетки миокарда, надпочечников, почек, нервных ганглиев. Способность вырабатывать экзотоксин обус­ловлена наличием в клетке профага, несущего tох-ген, ответ­ственный за образование токсина. Фер­менты агрессии — гиалуронидазу, нейраминидазу. К фак­торам патогенности относится также микрокапсула.

Читайте также:  Какой группе инфекционных заболеваний относится дифтерия

Резистентность. Устойчив к высушиванию, действию низких температур, поэто­му в течение нескольких дней может сохраняться на предметах, в воде.

Эпидемиология. Источник дифтерии — больные люди Заражение происходит чаще через дыхательные пути. Основной путь передачи воздушно-капельный, возможен и контактный путь — через белье, посуду.

Патогенез. Входные ворота инфекции — слизистые обо­лочки зева, носа, дыхательных путей, глаз, половых органов, раневая поверхность. На месте входных ворот наблюдается фибринозное воспаление, образуется характерная пленка, кото­рая с трудом отделяется от подлежащих тканей. Бактерии вы­деляют экзотоксин, попадающий в кровь, — развивается токсинемия. Токсин поражает миокард, почки, надпочечники, нервную систему.

Клиника. Существуют различные по локализации формы дифтерии: дифтерия зева, которая наблюдается в 85—90 % случаев, дифтерия носа, гортани, глаз, наружных половых ор­ганов, кожи, ран. Инкубационный период составляет от 2 до 10 дней. Заболевание начинается с повышения температуры тела, боли при глотании, появления пленки на миндалинах, увеличения лимфатических узлов. Отека гортани, разви­вается дифтерийный круп, который может привести к асфик­сии и смерти. Другими тяжелыми осложнениями, которые так­же могут явиться причиной смерти, являются токсический миокардит, паралич дыхательных мышц.

Иммунитет. После заболевания — стойкий, напряженный антитоксичный иммунитет. Особое значение – образование АТ к фрагменту В. Они нейтрализуют дифтерийный гистотоксин, предупреждая прикрепление последнего к клетке. Антибактериальный иммунитет – ненажняженный, сероватоспецифичен

Микробиологическая диагностика. С помощью тампона у больного берут пленку и слизь из зева и носа. Для постановки предварительного диагноза возможно применение бактериоскопического метода. Основной метод диагностики — бактериологический: посев на среду Клаубера II (кровяно-теллуритовый агар), на плотную сывороточную среду для выявления продукции цистиназы, на среды Гисса, на среду для определения токсигенности возбудителя. Внутривидовая идентификация заключается в определении био- и серовара. Для ускоренного обнаружения дифтерийного токсина применяют: РНГА (реакция непрямой геммаглютинации) с антительным эритроцитарным диагностикумом, реакцию нейтрализации антител (о наличии токсина судят по эффекту предотвращения гемаггютинации); РИА (радиоиммунный) и ИФА(имунноферментный анализ).

Лечение. Основной метод терапии — немедленное введение специфической антитоксической противодифтерийной лошадиной жидкой сыворотки. Иммуноглобулин человека противодифтерийный для в/в введения.

Ассоциированные вакцины: АКДС (абсорбированная коклюшно – столбнячная вакцина), АДС (абсорбированный дифтерийно — столбнячный анатоксин).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

ЛЕКЦИЯ 16 . Микробиологическая диагностика воздушнокапельных инфекций (дифтерия, коклюш, туберкулез, микобактериозы).

ВОЗБУДИТЕЛИ ДИФТЕРИИ И ТУБЕРКУЛЕЗА

План лекции I . Возбудитель дифтерии: 1) морфология;

5) этиотропная терапия, специфическая профилактика.

6) Сorynebacterium non diphtheriaе. II. Возбудитель туберкулеза: 1) морфология;

6) лабораторная диагностика; 7) этиотропная терапия, специфическая профилактика.

Возбудитель дифтерии

Дифтерия – это острое инфекционное заболевание, характеризующиеся воспалительным процессом слизистых оболочек, реже кожи, с образованием фибринозных пленок и общей интоксикацией.

Возбудитель: семейство Corynebacteriacae, род. Corynebacterium, вид Сorynebacterium diphtheriaе.

Вид Сorynebacterium diphtheria является патогенным и внутри вида делится на токсигенные и нетоксигенные штаммы.

Возбудителем дифтерии является C. diphtheriae tox +. Нетоксигенные штаммы не вызывают дифтерию.

Все остальные представители рода обозначаются общим термином дифтероиды, или коринеформные бактерии, они не отличаются от C. diphtheriae по морфологическим и культуральным, но отличаются по биохимическим свойствам. Все они условнопатогенные, входят в состав нормальной микрофлоры (кожа, носоглотка, гениталии). Дифтероиды могут вызывать ГВЗ самой различной локализации, в иммунокомпроментированном организме.

C. diphtheriae требовательны к питательным средам. Растут на средах с добавлением сыворотки крови. На свернутой сыворотке (среда Ру) рост появляется через 10-12 часов. Колонии выпуклые, не сливаются, желтовато-кремового цвета. Для выделения культуры возбудителя дифтерии из патологического материала используют элективные питательные среды. Такой средой является кровяно-теллуритовый агар. Теллурит подавляет рост сопутствующей флоры и не влияет на рост C. diphtheria. На нем хороший рост появляется через 48 часов. Колонии от серого до черного цвета (в зависимости от их биовара) за счет восстановления теллурита калия или натрия до металлического теллура (черного цвета), который накапливается в цитоплазме клетки. В жидкой питательной среде они либо растут в виде пленки, либо дают помутнение и осадок в зависимости от биовара.

По морфологии C. diphtheriae — палочки средней величины, прямые или слегка изогнуты, на концах имеют булавовидное утолщение. В мазках характерно расположены в виде римских букв X, V, L. Такое расположение обусловлено особенностями деления. В цитоплазме находятся метахроматические включения (полифосфаты). У возбудителя дифтерии они расположены по одному по концам палочки. У дифтероидов этих включений нет или они располагаются по всей цитоплазме. Они обнаруживаются при окраске мазков метиленовым синим или по Нейссеру. Расположение их является дифференциально-диагностическим признаком.

Грам +. Спор и капсул нет. Имеются фимбрии. Факультативные анаэробы. Вид C. diphtheriae внутри вида подразделяются на 4 биовара: gravis; mitis; intermedius; belfanti.

Биовары отличаются по культуральным свойствам:

по характеру колонии на КТА;

по характеру роста на сывороточном бульоне;

по биохимическим свойствам.

C. diphtheria обладают сложным антигенным строением и делятся на серовары.

К факторам вирулентности относят: 1. Фимбрии.

У C. Diphtheria обнаружены фимбрии трех типов. Фимбрии обуславливают тропизм возбудителя к определенным клеткам и тканям организма и участвуют в процессах образования биопленки.

2. Ферменты агрессии и защиты (нейраминидаза, протеаза, гиалуронидаза), кордфактор. Основным ведущим фактором является продукция экзотоксина, синтез которого детерминирован профагом, т.е. является результатом лизогенной конверсии. По наличию профага C. diphtheriaе подразделяются на tox + и tox –.

Дифтерийный экзотоксин состоит из 2 субъединиц: А и В пептидов. Пептид В выполняет акцепторную функцию. Он распознает соответствующие рецепторы, связывается с ними и формируют внутримембранный канал, по которому в клетку поступает пептид А. Он модифицирует фактор элонгации Ef-2. Эта модификация приводит к нарушению синтеза белка на рибосомах. Дифтерийный экзотоксин оказывает специфическое и избирательное действие. Он поражает в основном сердце (миокард), симпатико-адреналовую систему, периферическую нервную систему (демиелинизация нервных волокон), сосуды (прямое действие и через поражение надпочечников). Сила токсина измеряется в Dlm.

Dlm – это наименьшее количество токсина, которое при подкожном введении морской свинке весом 250 г. вызывает ее гибель на 3-4 сутки при характерной патологоанатомической картине.

Определение дифтерийного токсина можно проводить с помощью:

— биопробы. Морским свинкам вводят внутрикожно бульонную культуру. На месте введения – некроз;

— реакция преципитации в агаре;

— иммуноиндикация: ИФА и латекс-агглютинация;

Дифтерия – антропоноз, источником является человек, больной или носитель.

Основной путь передачи — воздушно-капельный, возможен контактно-бытовой. Болеют в основном дети, в последнюю вспышку, и взрослые. Различают разные локализации процесса дифтерия: нос и зев, глаза, раны, кожа и половые органы.

Попав воздушно-капельным путем, возбудитель адсорбируется на эпителии и размножается с выделением экзотоксина. При дифтерии возбудитель остается на месте входных ворот, а патогенез заболевания обусловлен действием экзотоксина – местным и общим. По существу дифтерия – это токсинемия.

Местное действие: токсин поражает эпителиальные клетки носоглотки, а затем прилегающие кровеносные сосуды. Их поражение приводит к повышенной проницаемости сосудистой стенки. В экссудате содержится фибриноген, свертывание которого приводит к появлению на слизистых оболочках сероватобелых пленчатых налетов, которые пронизывают ткани миндалин, поэтому налёты очень плотно спаяны с подлежащей тканью. Такой тип фибринозного воспаления носит название — дифтерическое. Это местное действие токсина. Если пленок много и они проникают в воздухоносные пути, то наступает асфиксия (истинный круп). Общее действие: избирательное действие экзотоксина – поражение миокарда, нарушение сосудистой системы, всегда поражается кора надпочечников, периферическая нервная система.

Инкубационный период от 2-12 дней. Если это дифтерия зева, появляется температура, боли в горле, в зеве – характерная пленка. Развивается интоксикация разной степени. Осложнения-миокардиты, параличи, парезы. После перенесенного заболевания формируется стойкий антитоксический иммунитет.

1. Бактериологическое исследование. Материал зависит от клинической формы.

2. Иммуноиндикация. Обнаружение экзотоксина — ИФА, латекс-агглютинация.

3. ПЦР – обнаружение нуклеотидных последовательностей, которые кодируют синтез экзотоксина.

Лечение антитоксической сывороткой, которую вводят в дозе 10000-50000 АЕ, в зависимости от тяжести заболевания и возраста.

Она осуществляется дифтерийным анатоксином:

АКДС

АДС

Ревакцинация проводится под контролем определения антитоксического иммунитета. Ставят РПГА с дифтерийным эритроцитарным анатоксическим диагностикумом.

Сorynebacterium non diphtheriaе вызывают ОРВИ в 11%; бронхиты, пиелонефриты, уретриты, эндокардиты, кольпиты, дерматиты, пневмонии, артриты и др. Чаще выделяли С. pseudobliphthericum и C. xerasis, C. ulcrans. Часто Сorynebacterium non diphtheriaе выделяли из клинического материала в ассоциации со стафилококками и стрептококками. В этих случаях факторы патогенности и резистентности к антибиотикам более выражены.

Возбудитель туберкулеза

Ежегодно в мире от туберкулеза погибают 3 млн. человек и регистрируется 8-9 млн.

новых случаев заболеваний. За последние 10 лет заболеваемость в России повысилась в 2 раза, летальность – в 1,5 раза. Широко распространены штаммы, обладающие множественной лекарственной устойчивостью. По данным ВОЗ лечение больных, у которых туберкулез вызван множественноустойчивыми штаммами, обходится в 100 раз дороже, а эффективность лечения не превышает 65%.У больных с ВИЧ, туберкулез встречается в 500 раз чаще.

Возбудитель: семейство Mycobacteriaceae, род Mycobacterium.

Микобактерии туберкулезного комплекса:

M. africanum; M. microti.

Основная роль M. Tuberculosis – 95%; M. Bovis – 5%. Остальные представители рода обозначаются как нетуберкулезные микобактерии (НТМБ). НТМБ — это условно патогенные бактерии, широко распространены в природе, могут заселять верхние и нижние отделы респираторного тракта и мочевыводящую систему. В настоящие время около 20 видов НТМБ могут вызывать различные заболевания (поражения кожи, подкожной клетчатки, костей, мягких тканей, воспалительные процессы в легких, менингиты и 6

дессиминированные процессы). По последним данным у ВИЧ — инфицированных 5056% вторичные инфекции вызывают НТМБ.

Март 1882 г. Р. Кох – выделил возбудителя туберкулеза.

Это палочки средней величины, тонкие, изящные, полиморфные. Встречаются ветвящиеся формы, внутри — включения — зерна Муха. Спор и капсул нет. Неподвижные. Снаружи от клеточной стенки – слой гликопептидов (в виде паутинки) – МИКОЗИДЫ – это микрокапсула, один из факторов вирулентности. Очень плохо воспринимают анилиновые красители. Для окраска по методу Грама нужно 24 часа → Грам +. Применяется метод Циля – Нильсена. Микобактерия характеризуется особенностями строения клеточной стенки: многослойная;

Клеточная стенка устроена значительно сложнее, чем у всех прокариот; в состав кл. стенки входит большое количество липидов (более 60% сухого вещества).

Липиды КС разнообразны, но есть характерные для МБ — миколовые кислоты; они либо находятся фиксированно в каркасе клеточной стенке, либо в свободном состоянии — сульфатиды. Все слои клеточной стенки пронизываются липоарабиномананном. Манозные концы отвечают за способность туберкулезной бактерии взаимодействовать с рецепторами макрофага. Перечисленные особенности играют ключевую роль в физиологии микобактерий. Эти особенности объясняют кислото-, щелоче- и спиртоустойчивость микобактерий, они объясняют неспособность окрашиваться анилиновыми красителями; возбудители, попавшие в микрофаги, устойчивы к биоцидным свойствам макрофагов. По типу получения энергии они аэробы.

1. Требовательны к питательным средам, фактором роста является глицерин; используют яично-глицериновые, картофельно-глицериновые синтетические среды.

2. Поскольку они растут медленно, для подавления сопутствующей флоры добавляют бриллиантовый зеленый или генциан-виолетт.

3. Бактерии туберкулеза растут очень медленно; время генерации 14-16 часов. Видимый рост появляется через 21-28 дней. Медленный рост — один из признаков для дифференциации M. tuberculosis от других быстро растущих микобактерий. Способность к медленному росту объясняется строением клеточной стенки. Благодаря гидрофобности, питательные вещества очень медленно проникают в цитоплазму, что приводит к снижению метаболизма. Этим же объясняется плохое проникновение анилиновых красителей.

На плотных средах дают колонии желтоватого цвета, не сливаются, поверхность не ровная. В жидких средах растут в виде пленки.

Изучение биохимических свойств используется для определения видовой принадлежности.

Антигенное строение: сложное. Антигены: белки и фосфолипиды клеточной стенки, корд-фактор и эндотоксин.

Основные факторы вирулентности M. tuberculosis начинают продуцировать, только когда они попадают в организм (макроорганизм). Когда они находятся во внешней среде, эти факторы репрессированы. К факторам вирулентности относят: сульфатиды, микозиды, липоарабиномананн. Туберкулезные бактерии являются факультативными внутриклеточными паразитами, которые размножаются внутри макрофагов.

Источником является человек. Путь заражения воздушно-капельный, контактнобытовой и алиментарный. При аэрогенном пути заражения туберкулезная палочка попадает в альвеолы, где происходит контакт с альвеолярными макрофагами; размножение в них сопровождается развитием неспецифической доиммунной гранулемы. Они легко проникают через барьеры в регионарные лимфатические узлы, затем кровь и другие органы. Развитие специфической гранулемы или туберкулемы происходит только через 2-3 недели и связано с подключением Т —

сенсибилизированных лимфоцитов. Эта специфическая гранулема еще называется первичным аффектом. В процессе вовлекаются регионарные лимфатические сосуды и узлы. Все вместе составляет первичный туберкулезный комплекс. У большинства людей он самоизлечивается, первичный аффект подвергается фибролизу и кальцификации. В других случаях (у детей) самоизлечение не наступает и развивается острый первичный туберкулез. Это всегда острый процесс у лиц, которые ранее не имели контакт с туберкулезными бактериями. Вторичный туберкулез – это хронический процесс, он возникает не ранее чем через 5 лет после первичного туберкулеза. Хронический туберкулез не излечивается без этиотропной терапии; хронический процесс — это всегда иммунопатология, относится к внутримакрофаговым инфекциям. Вторичный туберкулез в 80% случаев возникает в результате реактивации эндогенной инфекции и лишь 20% случаев является результатом экзогенного заражения. Чаще заболевание развивается при стрессе, плохих жилищных условиях. Причины, по которым происходит активация эндогенного туберкулеза, расплывчаты, вероятность его развития нельзя предсказать.

Читайте также:  Как можно заболеть дифтерией и столбняком

Туберкулезный процесс может развиваться в любых органах: легкие, кости, мочеполовая система и др. Наиболее частая локализация – легкие

Иммунитет при туберкулезе нестерильный, не стойкий. Антитела не играют защитной роли, решающую роль в механизме играет инфекционная аллергия.

1. Бактериологическое исследование: 2 мазка (по Цилю-Нильсену и флюорохромами). В процессе лечения они могут терять клеточную стенку ( превращаясь в L- форму). С потерей клеточной стенки они теряют кислотощелочоустойчивость, не обнаруживаются при окраске по Цилю-Нильсену.

2. Бактериологическое исследование: посев на специальные среды (28 дней). Определяется чувствительность к противотуберкулезным препаратам.

3. Серодиагностика. ИФА. Антитела не играют защитной роли, но они образуются.

5. А-ллергические диагностические пробы.

Возбудители природно-устойчивы к большинству антибиотиков. Выделяют особую группу противотуберкулезных препаратов. Основная комбинация в настоящее время – рифампицин + изониазид. Однако процент штаммов, обладающих лекарственной устойчивостью, быстро растет. Для лечения применяется комбинированная терапия, как минимум 2 препарата, лечение длительное (6 месяцев и более).

Существует вакцина БЦЖ – живая вакцина (бактерии Кальметта и Герена). Вводится в роддоме, на 3-5 день после рождения. Ревакцинация проводится в школе, под контролем пробы Манту. Ревакцинируют лиц с отрицательной пробой Манту.

и лабораторной диагностики, специфической профилактики и этиотропного лечения дифтерии и туберкулеза.

На протяжении всей истории человечества врачи и философы, жрецы и учёныепытались выяснить природу туберкулёза. Однако все догадывались, что этозаразная болезнь. В древней Персии, Риме-чахотка, в Индии- были запрещеныбраки с больными туберкулёзом, В Египте была обнаружена мумия человека споражениями внутренних органов, умершего примерно 2000 лет от туберкулеза.

Название болезни туберкулёз происходит от её характерного патанатоморфологического признака – специфических гранулам и туберкулом. (tuberkulum – от лат. бугорок; phthisis – совмещает два значения: харкать кровью и чахнуть – быстро терять вес. Ежегодно от tbc умирает 3 млн. чел. и 8-10 млн. новых случаев регистрируется ежегодно.

Туберкулез – бугорчатка, чахотка — хроническая инфекционное заболевание, характеризующееся образованием в различных органах, чаще в лёгких, специфических воспалительных изменениях. Инфекционная природа tbc была доказана в марте 1882г. на заседании Берлинского физиологического общества учёным Кохом, который сообщил о своих исследованиях по этиологии tbc – поэтому в настоящее время возбудители tbc называют палочкой Коха.

Возбудители относится к семейству M ус obacheriac е ae род. M ус obacherium, виды–

М. tuberculosis (95%) и m.bovis (5%), некоторые учёные относят сюда виды m.auium,

м.africanum. Но современный tbc связан преимущественно с видом М.tuberculosis.

По морфологии это тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки средней величины, неподвижные, спор и капсул не образуют. Снаружи клеточная стенка окружена паутинным слоем гликолипидов, которые называются микозидами, а данную оболочку называют микозидной, и иногда сравнивают с микрокапсулой. Морфологические особенности: в цитоплазме есть включения, зёрна Муха. Морфологической особенностью М. tuberculosis является строение клеточной стенки: компонентами клеточной стенки этих бактерий является липоарабиноманат, и монозные радикалы или кэпы, которые определяют взаимоотношения микобактерий с макрофагами. В клеточной стенке, которая устроена сложнее, чем у других прокариот, преобладают липиды (более 60%),специфичные для микобактерий. Большинство липидов представлено миколовыми кислотами, которые не только фиксированы в каркасе клеточной стенки, но и присутствуют в виде свободных гликопептидов — и корд — факторов.

Наличие корд — фактора определяет рост М.tub. в виде жгутиков. Ранее считали, что с ним связано вирулентность, но в наше время это не доказано. Наличие уникальных миколовых кислот в клеточной стенке М.tub. делает их отличной мишенью для таких химиотерапевтических соединений как изониацид , этлонамид. С другой стороны, высокое содержание липидов в клеточной стенке придаёт этим бактериям ряд характерных свойств — устойчивость к кислотам, щелочам и спирту. Труднее восприятие анилиновых красителей (плохо окрашиваются по гр. (гр. +) в течение 24ч.) поэтому для окраски М.tub. используют метод Циля-Нильсона.

Необходимо отметить, что морфология микобактерий может изменяться в зависимости от состава питательной среды, условий культивирования, и особенностей клинического течения.

При неблагоприятных условиях могут образовываться колбовидные, ветвящиеся, напоминающие форму мицеллия гриба, коковидные, зернистые, фильтрующиеся и L – формы бактерий.

1. Культуральные свойства. Очень требовательны к питальным средам: для роста необходимы глицерин и аминокислоты. Наиболее часто используются яично – глицериновая среда Левинштейна- Иенсена; картофельная глицериновая среда и синтетические среды. Кроме того, для оптимального роста необходимо большое количество О2.

Даже в оптимальных условиях М.tub. растут очень медленно. Видимый рост на твёрдых питательных средах появляется на 21-28 день, в жидких на 7-10 день, для появления обильного роста необходимо 4-6 нед. Это связано с медленным размножением М. tub.- период генерации который составляет 14-15 часов (а типично бактерии делятся каждые 15 мин.).

Одной из причин медленного деления является их выраженная гидрофобность, связанная с высоким содержанием липидов в клеточной стенке. Это затрудняет поступление питательных веществ, снижая метаболическую активность клетки.

На плотных средах бактерии дают морщинистые, сухие, с неровными кр изолированные, не сливающиеся друг с другом колонии. При культивировании на жи средах — рост на поверхности в виде сухой пасты, которая со временем уплотня становится бугристо-морщинистой. Бульон остаётся прозрачным.

M . tub . относится к мезофиллам, растущим только при t = 37С.

В связи с необходимостью длительного культивирования для устранения возможности роста посторонней микрофлоры обязательным компонентом сред для культивирования являются анилиновые красители — типа бриллианта зелёного, метиленового синего.

Б/х. свойства используется для дифферинциальной диагностики других представителей этого рода. Используются следующие тесты: редукций нитратов, определение активности никотинамидазы, никотиназы, пероксидазы, уреазы, каталазы.

Антигенные свойства. В АГ структуре микобактерий выделяют 4-е гр. АГ:

2) общие для медленно растущих

3) общие для быстрорастущих

4) общие для определенного вида;

Возбудители имеют сложное АГ строение. АГ М. bact. являются белки и фосфолипиды клеточной стенки, Корд-фактор и эндотоксин-туберкулим.

Факторы-вирулентности: токсический компонент клеточной стенки — жирные кислоты: миколовая, фтионовая и др.; эндотоксин и корт-фактор.

Патогенезисточник инфекций — больной человек (бациллярный больной), выделяющий с мокротой М.tub.

Для возбуждения конфликта с хозяином, бактерии должны попасть в альвеолы, где М.tub. поглощаются резидентными макрофагами отношения с которыми определяют дальнейшее развитие событий.

Неслучайно ТВС относится к классическим внутримакрофагальным инфекциям.

“ TBC ”- болезнь макрофагов. Главная роль в связывании с микроорганизмами принадлежит микозидам и микоарабитоманниту.

Оказавшись внутри клеток благодаря мощной липидной оболочки малочувствительны к факторам фагоцитов. Взаимодействие междупалочками макрофагами инициируют базисный для ТВС процесс воспаления — гранулематозного типа. Сама по себе гранулема не уникальна для ТВС, сходные реакции возникают и при других хронических инфекциях. Появляясь тотчас после инфекцированных туберкулёзных гранулем получают мощный импульс с появлением Т- лимфоцитов, синсибилированных возбудителю. Неспецифическая гранулема трансформируется в специфическую, обретая признаки, характерныедля ТВС. Именно с этогомомента гранулема называется туберкулом. Доиммунная гранулема неостанавливает инфекцию легких. ТВС палочки проникают в регионарные лимфатические узлы и далее в кровоток, получая возможность для диссеминации. Доимунная фаза соответствует инкубациинному периоду.

Клиника по локализации различают туберкулез легких, почек, туберкулезный менингит, костно – суставной.

По характеру поражения — миллиарный, инфильтративный, лобарная пневмония, диссеминированный кавернозный, фибринозно — ковернозный, туберкулема. По эпидемиологической опасности: -открытую и закрытую формы.

При открытой форме в мокроте обнаруживаются М.tub. и больной представляет опасность для окружающих. При закрытой- М.tub. в мокроте нет, больной опасности для окружающих не представляет. Но при прогрессировании болезни, закрытая форма может перейти в открытую.

Принято выделять 2 патогенетических варианта туберкулёза: первичный и вторичный. Первичный – возникает у лиц ранее не имевших контакт с возбудителем. Инфицирование обычно происходит в раннем детском возрасте.

Первичный ТВС развивается без аллергии к возбудителю. В зоне внедрения (обычно это в паренхиме лёгкого) возбудитель захватывается микрофагами, возбуждая неспецифическую гранулематозную реакцию. Бактерии легко проходят этот барьер, быстро проникают в регионарные лимфатические узлы и далее через кровеносное русло попадают в отдалённые органы.

Развитие истинного туберкулёза (т.е. специфической гранулемы) занимает 2-3 недели и связано с Т-синсибилизированием лимфоцитов – формируется первичный аффект, а втягивание в процесс регионарной лимфоидной ткани ведёт развитию лимфаденита и лимфангита, т.е. формируется первичный ТВС комплекс в лёгком + лимфаденит. Первичный очаг поражения в лёгких со временем может инкапсулироваться и кальцинироваться с образованием петpификата – очаг Гона. Однако, этот процесс не завершается полным освобождением организма от возбудителя и микобактерии могут сохраняться в организме на протяжении многих лет, создавая состояния инфицированности. Но эти люди, в отличии от носителей не являются эпидемиологически опасными, т.к. не выделяют МО во внешнюю среду.

Запомните! бактерионосительства при ТВС – нет.

Также при первичном ТВС возможны осложнения в виде развития системной инфекции .

Вторичный ТВС – может быть отнесён к категории иммунопатологии. Он развивается в более позднем возрасте при наличии эндогенной инфекции и повторном инфицировании.

Вторичный ТВС протекает хронически и не излечивается без этиотропной терапии. Почти всегда это патология лёгких – там формируется очаг. С мокротой возбудитель попадает в гортань, ротовую полость, кишечник, кровяное русло, угрожая экстрапульмонарными осложнениями.

Вторичный ТВС возникает при реактивации эндогенного инфекта через 5 лет и более после первичного заражения. Реинфицирование из вне тоже возможно, но наблюдается гораздо реже.

Интоксикация – одно из обязательных проявлений ТВС, она имеет не специфический характер (таким образом поиски специфических туберкулёзных токсинов оказались безуспешными).

Пути передачи :

1) Аэрогенный возбудитель — полевой возбудитель – капельный — самый опасный, капельки мокроты больного отлетают не более чем на 1.5 метра.

2) Алиментарный — чаще с молочными продуктами, от больной коровы, пастеризация не убивает М.tub, необходимо кипячение.

3) Контактный— при уходе за больными, мокрота с М.tub попадает на раневую поверхность

4) Внутриутробный — крайне редко, если женщина больна туберкулезом.

Туберкулез это: антропозоонозный, наследственнообусловленный, мультифакториальный, длительно действующий инфекционный процесс.

В процессе эволюции передаётся способность вырабатывать специфические защитные механизмы, это связано с системой несовместимости тканей НLA. Поэтому сейчас выделяют людей, устойчивых к ТВС. Наше население на ¾ и более являются потомками устойчивой линии, дают абортивные формы, бессимптомные, если не сыграли роль различные факторы — сон, еда, условия жизни, нет сопутствующих заболеваний — ТВС относится социальной болезни.

Особенности туберкулёза на современном этапе:

1) развивается на фоне хронических вирусных инфекций и вторичных имуннодифицитов

2) увеличение удельного веса, запущенных труднодиагностируемых форм

3) распространение ТВС с мультилекарственной устойчивостью

ТБ и ЛУ. -это связано с нерациональной химиотерапией данного заболевания.

Лечение. Хорошее питание, свежий воздух, снятие эмоций, химиотерапия.

1 ряд — широкоиспользуемые препараты, наиболее эффективны туберкулостатики — изониазид, тубазит.

2 ряд – стрептомицин, этионамит. 3 ряд – паси и его аналоги.

Профилактика ТВС.

Живой аттенуированной вакциной -бациллы Гернета и Кельмета, содержащий авирулентный штамм М.boris. проводят на 3-7нед. Ревакципеации в 57лет и более поздние сроки. Ревакцинацию проводят БЖЦ вакциной, содержащей в 2- раза меньше нагрузки. Особенности иммунитета.

1. не стерильный — инфекционный т.е. поддерживается бактериями, обеспечивающими состояние инфицированности.

2. неустойчивый – при определённых условиях микобактерии могут стать причиной развития эндогенной инфекции.

3. нестойкий. Продолжительность циркуляции вакцинных штамов в организме 5-7лет.

4. клеточный. Основной механизм защиты при ТВС- антимикробная резистентность осуществляется активностью систем комплемента и фагацитоза.

5. аллергический, т.е. развиваются реакции ГЗТ.

6. АТ к микобиктериям туберкулёза является свидетелями иммунитета и не оказывают ингибирующего действия на возбудитель.

Лабораторная диагностика ТВС.

Осуществляется в соответствии с документами МЗ РФ № 342 от 29.05.1980г. «Об улучшении борьбы с внелёгочным туберкулёзом» и с приказом № 324 от

22.11.1995г. «О совершенствовании противотуберкулёзной помощи РФ»

1. бактериоскопический— окраска мазков по методу Циля – Нильсона..

2. люминисцениттныя микроскопия – носит ориентировачный характер, т.к.

не позволяет отличить возбудителя ТВС от других микобактерий.

Дата добавления: 2018-10-15 ; просмотров: 309 | Нарушение авторских прав

источник