Прогноз дифтерии во многом зависит от формы заболевания. Осложнения часто развиваются при токсической форме, реже — при распространенных формах заболевания. Защищает от дифтерии антитоксической иммунитет и накопившиеся в крови больного антитела к возбудителю.
На прогноз дифтерии оказывает влияние вирулентность возбудителя, возраст больного, его иммунный статус, локализация и распространенность местных изменений, тяжесть течения заболевания, сроки установления диагноза и начала соответствующего лечения, адекватный уход за больным.
От 30 до 50% больных во времена, когда дифтерийный антитоксин еще не использовался, и не было соответствующих антибиотиков, умирали от дифтерии. Особенно большая смертность регистрировалась у детей в возрасте до 4-х лет, причиной которой являлся дифтерийный круп. Сегодня от дифтерии умирает не более 5% больных, летальный исход у которых обусловлен преимущественно миокардитом.
При токсической форме дифтерии прогноз более серьезный, чем при локализованной или распространенной формах заболевания. Вакцинированная часть населения реже подвержена риску заболевания, заболевание у них протекает легко и редко дает осложнения.
Большое число непривитых в организованных коллективах увеличивает вероятность вспышек токсикогенных форм дифтерии. Защитит от заболевания прививка.
У 5 — 10% выздоравливающих лиц (реконвалесцентов) возбудители дифтерии длительно персистируют в носоглотке.
Задержка надлежащего лечения повышает риск летального исхода от дифтерии многократно.
Рис. 1. На месте внедрения дифтерийных палочек (входных ворот) на поверхности слизистых оболочек образуются фибринозные пленки. Чем больше их распространенность, тем тяжелее протекает заболевание.
Острая сердечно-сосудистая недостаточность, обусловленная инфекционно-токсическим шоком, острая недостаточность надпочечников и паралич сердечной мышцы являются причинами смерти больного на первой неделе заболевания, миокардит — на 2 — 3 неделе заболевания, паралич дыхательных мышц и диафрагмальных мышц — на 4 — 8 неделе заболевания.
В связи с возможностью развития поздних осложнений к прогнозу заболевания у ребенка и взрослого следует подходить осторожно. Закупорка дыхательных путей дифтерийными пленками может произойти совершенно внезапно. При ненадлежащем уходе за маленькими детьми вероятность смертельного исхода у них значительно возрастает.
Активная иммунизация населения, совершенные методы лечения и улучшение медицинского обслуживания значительно снизили смертность от дифтерии.
Противодифтерийный иммунитет в половине случаев сохраняется в среднем в течение одного года. У второй половины больных, перенесших заболевание, формируется стойкий иммунитет. Повторные случаи дифтерии регистрируются редко — в 5 — 7% случаев.
Защищает от дифтерии антитоксический иммунитет, формирование которого связано с накоплением в крови антитоксина, в меньшей степени — антимикробные антитела. Антитоксин новорожденным передается через плаценту от матери. Антитоксин у взрослых накапливается в результате «бытовой» иммунизации. Антитоксины появляются после перенесенной дифтерии и при бактерионосительстве.
Наличие или отсутствие противодифтерийного иммунитета устанавливается при помощи реакции Шика. В случае отрицательной реакции говорят о невосприимчивости к дифтерии. Реакцию Шика сегодня используют только по эпидпоказаниям.
Дифтерийный токсин блокирует синтез белка в клетках млекопитающих, в результате чего они погибают. Это свойство токсина лежит в основе реакции по определению титра (количества) противодифтерийных антител в крови человека. Уровень антител в титре 0,1 МЕ/мл гарантирует надежную защиту от заболевания.
Рис. 2. Активная иммунизация дифтерийным анатоксином, который входит в состав АКДС-вакцины, — эффективная профилактика заболевания.
источник
Дифтерийный токсин и его свойства. Анатоксин. Иммунитет при дифтерии и его характер. Определение напряженности антитоксического иммунитета. Специфическая иммунотерапия и специфическая профилактика.
• Основной фактор патогенности (дифтерия — токсикоинфекция)
• Полипептид, состоящий из двух фрагментов:
Ø Фрагмент В — рецепторная функция
Ø Фрагмент А — блокирует синтез белка на стадии элонгации (наращивания) полипептидной цепи на рибосомах, действуя на фермент трансферазу
• Рецепторы к токсину на клетках миокарда, надпочечниках, почках, нервных ганглиях
• Выработка токсина кодируется умеренным ДНК-бактериофагом, имеющим ген toх+, который лизогенизирует бактерию (т.е. токсин вырабатывают только лизогенные бактерии).
Устойчивость C. diphtheriae во внешней среде
• Достаточно высока, что позволяет е сохраняться несколько дней на предметах (на игрушках – до 15 дней) и в воде. Хорошо переносит высушивание – в пыли до 5 месяцев
• Чувствительна к дезинфектантам.
• В очаге болезни обязательна дезинфекция
Источник инфекции →Человек (больной или носитель токсигенного штамма)
Основной механизм передачи→ Аэрозольный (воздушно-капельный)
Дополнительный механизм передачи → Контактный (в том числе и непрямой)
Патогенез и клиника дифтерии
Дифтерия (греч. diphtheria — кожа, пленка) — острая инфекция, характеризующуяся:
• В месте проникновения возбудителя (в зеве, гортани, реже — в других органах) образуется фибринозная пленка.
• Интоксикация — поражение сердечно-сосудистой, кортикоадреналовой систем и периферических нервов.
• В нервной ткани токсин вызывает демиелинизацию нервных волокон и, как результат – развитие парезов и параличей
• Естественный иммунитет. Восприимчивость зависит от уровня антитоксического иммунитета. Наиболее восприимчивы не привитые дети до 5 лет. При снижении уровня антитоксического иммунитета могут болеть взрослые.
• Постинфекционный иммунитет стойкий. Основной механизм гуморальный:
ü антитоксический: IgG и IgM к фрагменту В гистотоксина.
ü антибактериальный иммунитет малопротективен, носит также и клеточный характер
В довакцинальный период (до 1955 года) дифтерия имели широкое эпидемическое распространение среди детей до 5 лет с летальностью 40-60%. С началом вакцинации заболеваемость и смертность резко снизилась. В РБ с 1990 по 1998 год заболели 1028 человек и 29 умерли. Рост был в 1994 г (230 случаев), 1995г (332 случая). В 1996 году была проведена массовая вакцинация (7 млн.). Это снизило заболеваемость. В 2003 году заболело 6, в 2004 – 15, 2005 – 11.
Этиотропная терапия дифтерии
ü антитоксическая сыворотка (её введение необходимо начинать как можно раньше, пока токсин не связался с тканью миокарда и нервной системы),
ü антибиотики(b-лактамные, тетрациклины, хинолоны; носителей санируют эритромицином).
ü выявление и изоляция больных для лечения
ü санация бактерионосителей
ü дезинфекция игрушек, которыми пользовались больные дети
ü Плановое введение анатоксина (в том числе входящего в вакцины АКДС и АДС)
ü при необходимости сохранения антитоксического иммунитета у взрослых необходима ревакцинация анатоксином каждые 10 лет
Возбудитель коклюша, общая характеристика. Дифференциация с возбудителем паракоклюша. Патогенез, иммунитет. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика коклюша.
Домен: BACTERIA;Тип: Proteobacteria;Класс: Betaproteobacteria;Порядок: Burkholderiales;Семейство: Alcaligenaceae;Род: BORDETELLA
Виды: (всего 8)В. pertussis,B. parapertussis, B. bronchiseptica.
В. pertussis – вызывает коклюш: острую антропонозную инфекцию, сопровождающийся воспалением гортани, трахеи, бронхов, приступообразным спазматическим кашлем;
B. parapertussis – вызывает паракоклюш; сходен с коклюшем, но протекает легче; составляет 15% от числа заболеваний с диагнозом коклюш; перекрестный иммунитет при этих болезнях не возникает.
B. bronchiseptica – вызывает бронхисептикоз, у человека встречается редко, клинически протекает как острая респираторная вирусная инфекция.
Мелкие кокковидные грамотрицательные палочки с закругленными концами(0,2-0,5 х 0,5-2 мкм), биполярно окрашенные. Жгутиков, спор нет. Имеют микрокапсулу и пили. Облигатные аэробы, хемоорганотрофы, требовательны к питательным средам. Имеют О-антиген. Капсульные антигены, которые называются факторами. Их шесть. Видоспецифическим является фактор 1
Устойчивость во внешней среде
Чувствительны к физическим и химическим факторам. Плохо переносят высушивание (выживают часы в сухой мокроте). Низкая температура быстро приводит к гибели. При 56ºС сохраняются 20-30 минут. Ультрафиолет вызывает гибель за минуты.
• Коклюшный экзотоксин (пертуссин)
• Аденилатциклаза – накопление цАМФ в клетке с нарушением ее (клетки) функции
• Филаментозный гемагглютинин – адгезия
• Белки наружной мембраны (пертактин и др.) — адгезия
• Трахеальный цитотоксин – повреждает эпителий трахеи
Коклюшный экзотоксин(основной фактор патогенности)
• Состоит из двух функциональных частей (А и В) и пяти структурных (S1-S5). Часть А соответствует S1, часть В – S2-S5.
• Часть В рецептрорная, часть А – ферментативная.
• Токсин ингибирует клеточную аденилатциклазу, что нарушает функцию клеток-мишеней
Действие токсина:
оказывает местное раздражающее действие на нервные рецепторы дыхательных путей. В результате: возбуждение дыхательного центра, спазм мелких бронхов, спастический кашель
Патогенез коклюша обусловлен:
1) воспалительным ответом на размножение возбудителя (слизистая оболочка гортани, бронхов, бронхиол и альвеол)
2) действием факторов вирулентности B. pertussis
• Слабый естественный иммунитет у детей до трех лет – высокая восприимчивость.
• Приобретенный постинфекционный, видоспецифический, обычно стойкий, пожизненный.
• Механизмы приобретенного иммунитета:
ü Гуморальный – формируются протективные антитела к адгезинам, токсину, пертактину. Местные IgA подавляют прикрепление возбудителя к эпителию.
ü Клеточный. Развивается ГЗТ
Неспецифическая
• Выявление и изоляция больных для лечения
Специфическая
• Убитая коклюшная вакцина. В ее состав входит убитая культура 1 фазы, коклюшный токсин, агглютиногены, капсульный антиген
• Нормальный человеческий иммуноглобулин (при контакте с больным детям до года и неиммунизированным)
Профилактика: АКДС (с убитыми коклюшными МБ S-формы).
10. Лечение: противококклюшный иммуноглобулин, АБ (тетрациклины, макролиды).
1. Материал: берут так, чтобы не спровоцировать кашель методом «кашлевых пластинок» или изогнутым тампоном.
2. Бактериологический: посев на КУА или картофельно-глицериновый агар (среда Борде-Жангу). Если материал берется тампоном, готовят мазок по Гр (большое кол-во Гр- МБ). Для экспресс диагностики возможна РИФ. Посевы инкубируют в термостате. Рост паракоклюша 2 суток, коклюша 3-4 сут. Колонии мелкие, при боковом освещении в стерескопическом микроскопе сбоку виден светящийся конус («парашутик»). Мазок по Гр, РА с сывороткой против бордетелл, агглютинирующиеся МБ отсеивают для накопления на скошенный КУА. Идентификация МБ.
3. Серологическая диагностика: имеет вспомогательное значение в основном для диагностики атипичных стертых форм (РПГА или РСК)
источник
Тема: Микробиологическая диагностика дифтерии.
Цель: На основе знаний биологии коринебактерий дифтерии, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику микробиологической диагностики, профилактику и терапию вызываемого ими заболевания.
1. Классификацию и морфобиологические особенности возбудителя дифтерии.
2. Экологию, особенности патогенеза и иммунитета при дифтерии.
3. Материал и методы микробиологической диагностики дифтерии.
4. Методы определения антитоксического иммунитета при дифтерии.
5. Специфическую профилактику и терапию дифтерии.
1. Проводить забор материала из зева, носа и его посев на кровяно-теллуритовый агар с целью выявления бактерионосительства возбудителя дифтерии.
2. Идентифицировать и дифференцировать возбудителя дифтерии от дифтероидов.
3. Окрасить препарат из культуры возбудителя дифтерии по методу Нейссера, промикроскопировать и интерпретировать полученный результат.
4. Учитывать, оценивать результаты РП в геле для определения токсигенности коринебактерий дифтерии.
5. Определять уровень антитоксического иммунитета (РНГА).
1. Классификация и морфобиологические особенности возбудителя дифтерии.
2. Фактор патогенности возбудителя дифтерии и механизм его действия.
3. Источники инфекции, пути заражения, особенности патогенеза и иммунитета при дифтерии.
4. Определение антитоксического иммунитета при дифтерии (РНГА).
5. Материал и методы микробиологической диагностики дифтерии.
6. Цель, техника постановки и оценка результатов РП в геле при диагностике дифтерии.
7. Специфическая профилактика и терапия дифтерии.
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Провести бактериологическое исследование на дифтерию у обследуемых с клиническим диагнозом «дифтерия ротоглотки», для чего:
1.1. Изучить посевы отделяемого из зева и носа на кровяно-теллуритовом агаре, отобрать и описать характерные изолированные колонии.
1.2. Изучить характер роста и морфотинкториальные свойства культур (окраска по Граму и Нейссеру), выделенных из характерных колоний на сывороточном агаре от тех же больных.
1.3. Учесть и оценить результаты посева исследуемых культур на «пестрый ряд» (глюкоза, сахароза, крахмал, мочевина, цистин).
1.4. Учесть и оценить РП в геле исследуемых культур с антитоксической противодифтерийной сывороткой.
На основании полученных результатов определить вид выделенной культуры, ее токсигенность; заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.
2. Продолжить бактериологическое исследование на бактерионосительство коринебактерий дифтерии у студентов, для чего:
2.1. Изучить посевы отделяемого из зева на кровяно-теллуритовом агаре, отобрать и описать характерные изолированные колонии.
2.2. Из отобранных колоний приготовить препараты, окрасит по Граму и Нейссеру, промикроскопировать.
На основании полученных результатов сформулировать вывод.
3. Поставить, учесть и оценить РНГА с сыворотками обследуемых и эритроцитарным дифтерийным антигенным диагностикумом для определения антитоксического иммунитета.
4. Охарактеризовать биопрепараты: АКДС, АДС, АДС-М, антитоксическая противодифтерийная сыворотка.
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
I. Проведите бактериологическое исследование по выделению возбудителя дифтерии от больных с клиническим диагнозом «дифтерия ротоглотки»:
1 этап. Успех бактериологического исследования зависит от своевременного и правильного взятия материала. От больных с ангинами и с подозрением на дифтерию забор материала необходимо проводить в течение 3-4 часов с момента обращения в ЛПУ до начала какой-либо терапии.
Материалом служит слизь и пленки с миндалин из зева и носа. Взятие материала должны производить специально обученные медицинские работники.
Материал забирают стерильными ватными сухими тампонами отдельно для зева и носа. Материал из зева забирают натощак или не ранее, чем через 2 часа после еды; при хорошем освещении с использованием шпателя, не касаясь тампоном языка, слизистых щек и зубов. При наличии налетов материал следует брать с границы пораженных и здоровых тканей, слегка нажимая на них тампоном. Для взятия материала из носа используют один тампон, который вводят сначала в один, а потом в другой носовой ход, не касаясь крыльев носа снаружи.
Посев от одного обследуемого производят на одну чашку с кровяно-теллуритовым агаром (КТА), используя при этом одну половину для посева материала из зева, вторую — для посева материала из носа.
При посеве материал втирают в среду со всех сторон тампоном на участке площадью 2х1 см 2 , а затем этим же тампоном, не меняя положения, производят посев отрывными линиями. Чашки инкубируют при температуре 37°С 24-48 ч.
Посев следует производить на чашки с КТА, согретые при комнатной температуре или в термостате в течение 15-20 мин.
На 2 этапеоцените результаты посева исследуемого материала из зева и носа тех же больных на КТА. Дайте характеристику выросшим колониям, отберите и опишите в протоколе те колонии, характеристика которых совпадает с таковой предполагаемого возбудителя. Сформулируйте ответ.
На КТА C. diphtheriae v. gravis образуют серовато-черные колонии диаметром 2-3 мм, плоские, с радиальной исчерченностью (R-форма); C. diphtheriae v. mitis — черные, матовые, диаметром 1-2 мм, выпуклые, с ровными краями (S-форма). В препаратах коринебактерии дифтерии — это грамположительные полиморфные, прямые и слегка изогнутые палочки, расположенные под углом или в виде растопыренных пальцев, а также образуют скопления, напоминающие войлок. При окраске по Нейссеру выявляются темно-синие зерна волютина, расположенные на концах клеток. Дифтероиды, в основном, располагаются «частоколом» и обычно лишены зерен волютина.
Характерные колонии отсевают на скошенный сывороточный агар, среду Пизу и ставят РП на токсигенность. Посевы помещают в термостат при 37°С на 18-24 часа.
На 3 этапе учтите результаты РП в геле и пробы Пизу. В случае положительной РП и пробы Пизу на цистиназу, выдают ответ лечащему врачу, что выделена токсигенная дифтерийная культура.
Изучите рост культуры, отсеянной из колоний предполагаемого возбудителя, на скошенном сывороточном агаре. Приготовьте фиксированный препарат из исследуемой культуры, окрасьте по Нейссеру (уксусно-кислая синька Нейссера — 60 с, смыть; раствор Люголя – 30 с, слить; хризоидин — 10-15 с, смыть; высушить) и промикроскопируйте. Полученные результаты внесите в протокол.
Выделенную чистую культуру засевают на среды Гисса с глюкозой, сахарозой, крахмалом, цистином (проба Пизу) и мочевиной (проба Закса), а также ставят снова РП.
На 4 этапе учтите и оцените результаты работы на 3 этапе исследования:
— биохимическую активность выделенной культуры на средах Гисса, среде Пизу (цистиназа) и среде Закса (уреаза);
— РП в агаровом геле, обратив внимание на достоверность полученных результатов.
По результатам всех этапов исследования установите вид возбудителя, его биовар; определите его токсигенность и заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.
II. Продолжите бактериологическое исследование на бактерионосительство коринебактерий дифтерии у студентов, для чего:
Изучите посевы отделяемого из зева и носа на кровяно-теллуритовом агаре, отберите и опишите характерные изолированные колонии.
Из отобранных колоний приготовьте препараты, окрасьте по Граму и Нейссеру, промикроскопируйте.
На основании полученных результатов сформулируйте вывод.
III. Поставьте, учтите и оцените РНГА с сыворотками обследуемых и эритроцитарным дифтерийным антигенным диагностикумом для определения антитоксического иммунитета.
Определение уровня антитоксического иммунитета осуществляется для оценки эффективности и качества проведения прививочной работы. С этой целью обследуется индикаторная группа населения, включающая в себя лиц, имеющих документально подтвержденных прививочный анамнез и получивших последнюю прививку за 6-18 мес. до обследования.
Для этой цели ставится РНГА в полистироловых планшетах (см. таблицу №1).
Схема постановки РНГА для определения антитоксического иммунитета
| Ингредиенты (капли) | Разведения исследуемого материала | КЭ | КД | ||
| 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | |
| — | ||||
     Сыворотка обследуемого 1:5 (1-я пипетка) | — | — | — | — | — |
| 3% взвесь эритроцитов (2-я пипетка) | — |
Физ. раствор (1-я пипетка)Экспозиция 30-40 мин при комнатной температуре
Планшеты оставляют на ровной поверхности при Т-20°С; их перемещение до учета результатов реакции не допустимо!
Учет результатов РНГА осуществляется визуально в крестах по степени агглютинации эритроцитов (см. занятие №10). В контролях должен отсутствовать феномен гемагглютинации. Титром сыворотки является последнее разведение, дающее реакцию гемагглютинации не менее ++. Для оценки результатов используют защитный титр, равный 1:20.
IV. Ознакомьтесь и опишите в протоколе биопрепараты, указав, что они содержат, для чего и как применяются.
Дата добавления: 2016-12-17 ; просмотров: 698 | Нарушение авторских прав
источник
Основным способом профилактики дифтерии является вакцинация дифтерийным анатоксином. Проводится вакциной АКДС, начиная с 3-х месячного возраста. Зарубежные вакцины, зарегистрированные в России:Инфанрикс (Бельгия) — коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина,Д.Т.Вакс (Франция) — коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина,Тетракок (Франция) — коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина и инактивированная вакцина для профилактики полиомиелита.Вакцинация проводится трехкратно с интервалом 30-40-дней. Ревакцинация (повторная вакцинация) осуществляется АКДС-вакциной однократно через 1,5-2 года после законченной вакцинации. Для ревакцинации в возрасте 6-7, 11-12, 16-17 лет используется вакцина АДС-М. Лица, переболевшие дифтерией, также подлежат вакцинации.Заболевание дифтерией любой формы у непривитых детей и подростков расценивают как первую вакцинацию, у получивших до заболевания одну прививку — как вторую вакцинацию. Дальнейшая вакцинация проводится по календарю прививок. Дети и подростки, привитые против дифтерии (получившие законченную вакцинацию, одну или несколько ревакцинаций) и переболевшие легкой формой дифтерии без осложнений, не подлежат дополнительной прививке после заболевания. Очередную возрастную ревакцинацию им проводят в соответствии с календарем прививок. Дети и подростки, привитые против дифтерии (получившие законченную вакцинацию, одну или несколько ревакцинаций) и перенесшие токсические формы дифтерии прививаются вакциной в зависимости от возраста и состояния здоровья — однократно в дозе 0,5 мл, но не ранее чем через 6 мес после перенесенного заболевания.Взрослые, ранее привитые (получившие не менее одной прививки) и переболевшие дифтерией в легкой форме, дополнительной вакцинации против дифтерии не подлежат, при перенесении токсической формы проводят иммунизацию не ранее, чем через 6 мес. после перенесенного заболевания. Ревакцинация проводится через 10 лет.Лица с неизвестным прививочным анамнезом подлежат серологическому обследованию на антитоксические антитела, при отсутствии защитного титра антитоксинов (более 1:20) проводится вакцинация.При определении активности противодифтерийных антител используются два важных качества дифтерийного токсина. Во-первых, это выраженное дермонекротическое свойство, т.е. способность вызывать воспалительную реакцию при внутрикожном введении людям или животным. Это свойство используется для постановки реакции Шика. Второе свойство — это способность дифтерийного токсина блокироватьсинтез белка в культивируемых in vitro клеткахмлекопитающих, в результате чего происходит гибель этих клеток. Это свойство используется для определения количества (титров) противодифтерийных антител с помощью реакции нейтрализации in vitro с использованием клеточных культур, чувствительных к дифтерийному токсину. Дополнительными тестами in vitro для количественного определения противодифтерийных антител являются реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и иммуноферментный анализ.
52.Иммунитет. Виды иммунитета. Пассивный иммунитет,его характеристика.Препараты для пассивной иммунизации и их применение.Пассивная иммунизация имеет цель: быструю компенсацию иммунологической незащищенности организма. Осуществляется с помощью введения специфической иммунной сыворотки или очищенного препарата иммуноглобулина. Пассивная иммунизация используется для профилактики заболеваний лиц, контактировавших с больными, и в терапии больных в начальной стадии заболевания, когда организм еще не начал выработку собственных АТ. Создаваемый при пассивной иммунизации иммунитет является кратковременным (2-6 недель), так как введенные антителаподвергаются иммуноэлиминации. Иммунные сыворотки получают из крови искусственно иммунизированных животных и людей-добровольцев (в ряде случаев от лиц, перенесших заболевание). Для получения высоких титров АТ животных иммунизируют дробным введением соответствующих антигенов в больших дозах. Сыворотки, полученные из крови животных, получили название гетерологичных, от добровольцев – гомологичных. Гетерологичными являются сыворотки против дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой гангрены и др. Гомологичными являются сыворотки для лечения кори, вирусных гепатитов и других инфекций. Гетерологичные сыворотки вводят с соблюдением мер предосторожности. Например, столбнячную антисыворотку (получаемую из крови иммунизированных лошадей) вводят после постановки кожных проб на чувствительность, дробно по Безредке на фоне приема десенсибилизирующих средств. Препараты иммуноглобулинов применяются наряду с иммунными сыворотками для лечения и профилактики таких заболеваний, как корь, клещевой энцефалит, стафилококковые инфекции, столбняк, грипп, ботулизм, сибирская язва и других. Получают препараты из иммунных сывороток путем осаждения фракции гамма-глобулинов, в которой и сконцентрированы специфические антитела.Для профилактики и лечения инфекционных заболеваний и создания пассивного иммунитета промышленностью выпускаются следующие сывороточные препараты:Цитотект (иммуноглобулин человека с высоким титром антител против цитомегаловируса)Иммуноглобулин человеческий противогриппозный (жидкий)Гаммаглобулин антирабический из сыворотки лошадей жидкий Иммуноглобулин против клещевого энцефалита человека жидкийИммуноглобулин лептоспирозный из сыворотки воловИммуноглобулин против клещевого энцефалита из сыворотки лошадей очищенные.
источник
Возбудитель дифтерии, общая характеристика. Отличия от непатогенных коринебактерий. Механизмы патогенеза. Методы микробиологической и молекулярно-биологической диагностики дифтерии.
Характеристика С. diphtheriae
Полиморфные прямые или слегка изогнутые палочки (0,3-0,8х1,5-8 мкм), иногда с булавовидными концами (от греч. korinе — булава) – зерна волютина. Располагаются в виде буквы «V».
Грамположительные. Имеют микрокапсулу. Неподвижны. Спор не образуют
Факультативные анаэробы. Растут на средах с добавлением сыворотки или крови. Выделяют 4 биовара: gravis, mitis, intermedius, belfanti.
цистиназная активность (проба Пизу) – положительная
уреазная активность (проба Закса) – отрицательная
Для идентификации биовара gravis:
О-антиген-общий с микобактериями и нокардиями
К-антиген– несколько десятков сероваров
Антигенный состав дифтерийной палочки неоднороден и её серологическая классификация не общепринята.
Факторы патогенности C. diphtheriae
Экзотоксин (гистотоксин) – нарушая синтез белка, поражает клетки миокарда, надпочечников, нервных ганглиев
Гликолипид – нарушает фагоцитоз
Отличия от непатогенных коринебактерий.
1) В мазке патогенные располагаются буквой V, если беспорядочно – условно патогенные.
2) По биохимическим признакам:
Патогенные:Глюкоза +, крахмал +-, цистиназа +, уреаза -;
НЕпатогенные:глюкоза -, крахмал — , цистиназа — , уреаза +;
Методы микробиологической диагностики:
а) предварительная микроскопия материала по Леффлеру или Нейсеру. По Леффлеру – голубые с более синими концами, по Нейсеру – желтые с коричневыми окончаниями.
б) посев материала на 2 группы сред: среда без телурита и сывороточный телуритовый агар.
в) быстрая идентификация по сокращенному варианту.
г) проба на токсигенность (их 3): 1) реакция преципитации в агаровом геле; 2) реакция коагглютинации со стафилококковым АТ диагностикумом; 3) нейтрализации у животных.
Дифтерийный токсин и его свойства. Анатоксин. Иммунитет при дифтерии и его характер. Определение напряженности антитоксического иммунитета. Специфическая иммунотерапия и специфическая профилактика.
Основной фактор патогенности (дифтерия — токсикоинфекция)
Полипептид, состоящий из двух фрагментов:
Фрагмент В — рецепторная функция
Фрагмент А — блокирует синтез белка на стадии элонгации (наращивания) полипептидной цепи на рибосомах, действуя на фермент трансферазу
Рецепторы к токсину на клетках миокарда, надпочечниках, почках, нервных ганглиях
Выработка токсина кодируется умеренным ДНК-бактериофагом, имеющим ген toх+, который лизогенизирует бактерию (т.е. токсин вырабатывают только лизогенные бактерии).
Устойчивость C. diphtheriae во внешней среде
Достаточно высока, что позволяет е сохраняться несколько дней на предметах (на игрушках – до 15 дней) и в воде. Хорошо переносит высушивание – в пыли до 5 месяцев
Чувствительна к дезинфектантам.
В очаге болезни обязательна дезинфекция
Источник инфекции →Человек (больной или носитель токсигенного штамма)
Основной механизм передачи→ Аэрозольный (воздушно-капельный)
Дополнительный механизм передачи → Контактный (в том числе и непрямой)
Патогенез и клиника дифтерии
Дифтерия (греч. diphtheria — кожа, пленка) — острая инфекция, характеризующуяся:
В месте проникновения возбудителя (в зеве, гортани, реже — в других органах) образуется фибринозная пленка.
Интоксикация — поражение сердечно-сосудистой, кортикоадреналовой систем и периферических нервов.
В нервной ткани токсин вызывает демиелинизацию нервных волокон и, как результат – развитие парезов и параличей
Естественный иммунитет. Восприимчивость зависит от уровня антитоксического иммунитета. Наиболее восприимчивы не привитые дети до 5 лет. При снижении уровня антитоксического иммунитета могут болеть взрослые.
Постинфекционный иммунитет стойкий. Основной механизм гуморальный:
антитоксический: IgG и IgM к фрагменту В гистотоксина.
антибактериальный иммунитет малопротективен, носит также и клеточный характер
В довакцинальный период (до 1955 года) дифтерия имели широкое эпидемическое распространение среди детей до 5 лет с летальностью 40-60%. С началом вакцинации заболеваемость и смертность резко снизилась. В РБ с 1990 по 1998 год заболели 1028 человек и 29 умерли. Рост был в 1994 г (230 случаев), 1995г (332 случая). В 1996 году была проведена массовая вакцинация (7 млн.). Это снизило заболеваемость. В 2003 году заболело 6, в 2004 – 15, 2005 – 11.
Этиотропная терапия дифтерии
антитоксическая сыворотка(её введение необходимо начинать как можно раньше, пока токсин не связался с тканью миокарда и нервной системы),
антибиотики (b-лактамные, тетрациклины, хинолоны; носителей санируют эритромицином).
выявление и изоляция больных для лечения
дезинфекция игрушек, которыми пользовались больные дети
Плановое введение анатоксина (в том числе входящего в вакцины АКДС и АДС)
при необходимости сохранения антитоксического иммунитета у взрослых необходима ревакцинация анатоксином каждые 10 лет
источник
Данное заболевание у взрослых и детей вызывает бактерия булавовидной формы – дифтерийная палочка, носителем которой выступает человек (передается с предметами и пищей, живет в окружающей среде пару месяцев). Особенно плоха в ней природная устойчивость ко всем существующим на данный момент антибиотикам.
Иммунитет дифтерия тоже не вырабатывает даже с десятками лет носительства – просто переходит после успешного купирования острой стадии в латентную форму. Впоследствии больной обычно не заразен, но это зависит от состояния его системы защиты (насколько эффективно она подавляет возбудителя, ослабляя его). Случаи заражения от давно переболевших ею и привитых носителей тоже известны.
Бактерия передается от людей (больных или носителей) людям при прямом и опосредованном контакте и воздушно-капельным путем.
У заболевших впервые отмечаются все признаки острого иммунного ответа:
- боль в горле при глотании;
- набухание шейных и ключичных лимфоузлов;
- отек тканей в задетой области и рядом;
- упадок сил;
- повышение температуры.
Около 95% случаев дифтерии приходится на поражение горла. Оно покрывается серовато-белым сплошным или очаговым налетом, сильно отекает. Случаются также инфекции кожи (особо заразный вариант), пищеварительного тракта, бронхов, легких, половых путей. По масштабам заражения дифтерию делят на:
- локализованную – только глоточные миндалины;
- распространенную – задето и мягкое нёбо;
- токсическую – помимо температуры под 40 0 С, налетом заняты миндалины, задняя стенка пищевода, мягкое и твердое нёбо, включая язычок, наблюдается отек шейной клетчатки, производящий впечатление огромного «зоба», носовое дыхание тоже затруднено или перекрыто, что говорит о захвате и носовых пазух;
- гипертоксическую – пациент без сознания, дыхание затруднено отеком носо- и ротоглотки одновременно, могут наблюдаться судороги и синюшность губ, налетом покрыта почти вся ротовая полость, кроме десен, зубов и губ с кончиком языка;
- геморрагическую – с пурпурой, кровотечениями внутренними (преимущественно в желудке и кишечнике), из носа, зубных лунок, гематомами по всему телу, окрашиванием ранее сероватого налета в алый цвет крови.
Тяжесть симптомов мало зависит от того, насколько активно борется иммунитет против дифтерии. Главная сложность с ее возбудителем состоит в выделении им сильного яда (опасен для клеток всех типов, но особенно нервных). Антитела против него бессильны, а помогающих против самого возбудителя антибиотиков не существует.
У данного заболевания способ терапии существует лишь один – внутримышечные/внутривенные инъекции того же дифтерийного токсина, только лишенного отравляющих свойств (для выработки антител). В тяжелых случаях назначают вспомогательные меры:
- полоскание горла антисептиками;
- прием антибиотиков (от присоединенной инфекции);
- внутривенное введение «Реополиглюкина» (10% одного из полимеров сахара с хлоридом натрия или чистой глюкозой) и/или калиево-глюкозной смеси, альбуминов, очищенной плазмы крови, витамина С, других поддерживающих и детоксикационных растворов.
Дифтерию лечат исключительно в стационаре – не на дому, так как вполне вероятен летальный исход из-за отека горла и асфиксии. При ярко выраженном крупе (тот самый отечный зоб) активность иммунной защиты иногда приходится не просто не повышать, а даже подавлять – чаще всего, назначением преднизолона (кортикостероид, антигистаминное).
Если лечение было успешным, впоследствии можно заняться самостоятельным укреплением подорванного здоровья, хотя серая пленка отторгнется без посторонней помощи за 5-8 суток. Последствий при своевременно начатой терапии тоже не останется.
В период больничного наблюдения (а госпитализации подлежат как пациенты с диагностированной дифтерией, так и те, у кого подозревают ее активное носительство) придется удовлетвориться врачебными назначениями – введением аскорбиновой кислоты, плазмаферезом, другими белками крови.
После выписки стоит уделить внимание восстановлению дыхательной системы, подавлению остаточных очагов воспаления в ней, поскольку иммунитет после дифтерии вырабатывается, но нестойкий и не гарантирующий от нового заражения уже спустя 10 лет после первого эпизода. Для этого идеально подходят:
- ингаляции – раствором 1 ч. л. поваренной соды на 250 мл теплой воды, крепкими (1 ст. л. с горкой на стакан кипятка) отварамитравы чистотела, шалфея, тысячелистника, березовых почек, хвои. Проводить процедуру утром и вечером, по 20 мин., 7-10 суток после отторжения дифтерийного налета;
- спелеотерапия – посещение соляных пещер через 1-2 суток, на протяжении полугода с момента заболевания;
- прогревания – грудной клетки посередине, чуть ближе к ключицам, чем солнечному сплетению (там расположены бронхи);
- посещение оздоровительных санаториев – с пульмонологическим (горы, хвойные леса, естественные пещеры, соляные озера) профилем. Не стоит пока тратить время на грязи, минеральные воды, другие процедуры, предназначенные для терапии обменных патологий и опорно-двигательного аппарата, хотя уж через полгода их актуальность может возрасти.
Терапия острой формы и профилактика заболеваемости дифтерией проводятся одним способом – введением содержащей антидот к ее яду сыворотки. Обычно речь идет о комплексной вакцине АКДС (расшифровывается как адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная сыворотка). В ней содержатся неживые возбудители коклюша и очищенные, инактивированные обычным способом (выдерживание в подогретом формалине) токсины столбнячной и дифтерийной палочек.
Детей до 1 года от нее берегут антитела крови, переданные от матери через плаценту. У взрослых после терапевтического или превентивного введения анатоксина формируется бессимптомное носительство. Определить наличие/отсутствие антител к дифтерийному токсину позволяют исследования нескольких типов.
Непосредственно заражение дифтерийной палочкой подтверждает бактериальный посев мазка с миндалин, кожи, половых органов – тех областей, на инфекцию которых есть подозрение. Присутствие антител к ней определяет РНГА – реакция непрямой гемолитической агглютинации, один из видов анализа крови. При нем образец сыворотки помещают к эритроцитам, содержащим антиген («подозреваемого» возбудителя). Если они совпадут, эритроцитарная масса слипнется.
Наличие выделяемого дифтерийной палочкой яда в любых концентрациях определяют методом ПЦР – полимеразной цепной реакции. При ней оборудование анализирует предоставленный образец, находит стороннюю ДНК/РНК (включая их фрагменты) и реплицирует ее до тех пор, пока не станет ясно, какому патогену она принадлежит.
Напряженность иммунитета к дифтерии сохраняется только 5-10 лет после вакцинации или перенесенного заболевания. Спустя указанный выше промежуток дифтерией можно переболеть снова. В норме, новый эпизод протекает в гарантированно легкой форме. Но при приобретенном иммунодефиците (ВИЧ, сахарный диабет, патологии печени или почек) возможны даже более тяжелые осложнения, чем в первом случае.
источник
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим и биохимическим методам оценки напряженности антибактериального иммунитета к возбудителю дифтерии. Сущностью способа является определение иммуноферментным анализом в слюне пациента уровня специфических секреторных IgА к корд-фактору коринебактерий дифтерии, по величине которого проводят оценку антибактериального иммунитета. Техническим результатом является повышение эффективности и специфичности оценки напряженности антибактериального иммунитета к дифтерии.
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологическим и биохимическим методам исследования биологических жидкостей человека для оценки напряженности антибактериального иммунитета к дифтерии.
Наиболее близким является способ определения антибактериальных антител при дифтерийной инфекции (Кондрашина Н. Н., Шмелева Е.А., Берестень С.Ф. ЖМЭИ, 1987, N 9, c.115-117). По этому способу при оценке антибактериального иммунитета к коринебактериям дифтерии в сыворотке крови исследуют количество антител к белку клеточной стенки с Мм 64 кДа. Определение антител класса IgG проводят в сыворотке крови с использованием иммуноферментного анализа (ИФА).
Недостатком этого способа является то, что исследование уровня антибактериальных антител проводится в сыворотке крови, тогда как местом локализации возбудителя является слизистая носоглотки.
По этому способу определяют антитела класса IgG, в то время как специфическими, протективными антителами слизистых являются секреторные IgA (SIgA).
В прототипе в качестве антигена используется белок клеточной стенки коринебактерий, функциональное значение которого неизвестно, следовательно, протективная значимость антител к нему необоснованна.
Таким образом, этот способ является недостаточно информативным, специфичным и точным при оценке напряженности антибактериального противодифтерийного иммунитета.
Целью предлагаемого способа является повышение эффективности и специфичности оценки напряженности антибактериального иммунитета к дифтерии.
Нами предлагается исследование протективно значимых специфических секреторных антител изотипа IgA к коринебактериям дифтерии в слюне к корд-фактору (трегалозо-6,6′-димиколат) — фактору патогенности, играющему ведущую роль в адгезии и колонизации микроорганизмов на слизистых.
Для достижения этой цели проводят иммуноферментный анализ (ИФА) слюны лиц, подлежащих обследованию. Используют иммунологические планшеты, сорбированные в качестве антигена корд-фактором коринебактерий дифтерии. Определяют секреторные IgA к корд-фактору в слюне и по их наличию оценивают устойчивость организма к колонизации слизистых коринебактериями дифтерии.
Способ осуществляется следующим образом.
Суспензию высокочищенного корд-фактора (трегалозо-6,6′-димиколат) с концентрацией 1,0
0,5 мкг/мл в фосфатно-солевом буфере рН 7,20,l (ФСБ) вносят в лунки иммунологического планшета по 0,1 мл и оставляют для сорбции в течение 18 ч при t=42 o C. Затем 4-кратно отмывают ФСБ, содержащим 0,05% бычьего сывороточного альбумина (ФСБ-БСА).
В лунки иммунологического планшета, сорбированного корд-фактором коринебактерий дифтерии вносят по 0,1 мл разведенной слюны. В одну лунку планшета добавляют 0,1 мл ФСБ-БСА (контроль фона). Во вторую лунку планшета вносят 0,1 мл пулированной слюны новорожденных (отрицательный контроль). В третью лунку планшета вносят 0,1 мл слюны с высоким уровнем антител к корд-фактору (возможно использование слюны реконвалесцентов).
Планшет закрывают крышкой и выдерживают в течение 1 часа при t=371 o С, после чего 3-кратно промывают ФСБ-БСА. Остатки влаги удаляют постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Затем в каждую лунку планшета вносят по 0,1 мл разведенного в рабочей концентрации ФСБ-БСА коньюгата к секреторному IgA. Планшет закрывают крышкой и инкубируют при t= 371 o C в течение 1 часа. После инкубации все лунки 3-кратно промывают ФСБ-БСА и вносят субстратно-индикаторный раствор, выдерживают в течение 30 мин при t=l8-26 o С в темном месте, добавляют по 0,05 мл стоп-реагента (2 н. серная кислота) и немедленно производят учет результатов исследования с помощью фотометрического устройства.
На основании полученных значений оптической плотности (ОП) определяют наличие противодифтерийных антибактериальных антител в условных единицах. Для этого ОП исследуемой слюны делят на ОП отрицательной контрольной слюны и сравнивают с аналогичными показателями, полученными для положительной контрольной слюны.
Пример конкретного осуществления способа.
У пациентов «А» и «В» натощак после тщательного полоскания полости рта кипяченой водой отбирают пробу смешанной нестимулированной слюны в количестве 3 мл в чистую сухую пробирку и замораживают. После размораживания образцы слюны центрифугируют (g=250) в течение 15 мин. Супернатант отделяют и используют для исследования.
В лунки иммунологического планшета, сорбированного корд-фактором коринебактерий дифтерии, вносят по 0,1 мл разведенной слюны пациентов «А» и «В».
В первую лунку планшета вносят 0,1 мл ФСБ-БСА (контроль фона), в другую — 0,1 мл пулированной слюны новорожденных (отрицательный контроль), в третью лунку планшета — 0,1 мл слюны реконвалеспентов (положительный контроль).
После 1-часовой инкубации при t=371 o С планшет 3-кратно промывают ФСБ-БСА, после чего в каждую лунку вносят по 0,1 мл разведенного в рабочей концентрации ФСБ-БСА коньюгата к секреторному IgA. Закрытый крышкой планшет инкубируют при t= 371 o C в течение 1 ч. После инкубации все лунки 3-кратно промывают ФСБ-БСА и вносят по 0,1 мл субстратного раствора, после 30-минутной инкубации при t=18-26 o C в темном месте добавляют по 0,05 мл стоп-реагента (2 н. серная кислота) и немедленно производят учет результатов исследования с помощью фотометрического устройства.
Были получены следующие значения оптической плотности (ОП): — контроль фона (ФСБ-БСА) — 0,06; — отрицательный контроль (слюна новорожденных) — 0,11; — положительный контроль (слюна реконвалеспента) — 1,89; — слюна пациента «А» — 0,39; — слюна пациента «В» — 1,98.
Индекс антител к корд-фактору для положительной контрольной слюны (отношение величины ОП положительной контрольной слюны к ОП отрицательной контрольной слюны) составляет 1,89/0,11=17,2.
Затем определяют индекс уровня антител к корд-фактору в слюне пациента «А» (отношение величины ОП слюны пациента «А» к ОП отрицательной контрольной слюны (слюна новорожденного)) : 0,39/0,11=3,5.
Аналогичным образом определяют индекс антител в слюне пациента «В», у которого индекс антител к корд-фактору составил 1,98/0,11=18,0.
Таким образом, в слюне пациента «В» содержание антибактериальных противодифтерийных антител оказалась высоким, сопоставимым с их концентрацией в положительной контрольной слюне.
В слюне пациента «А» содержание антибактериальных противодифтерийных антител оказалось низким.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет осуществлять более объективную оценку антибактериального иммунитета к дифтерии, так как основан на определении протективно значимых специфических антител в слюне к бактериальному антигену, фактору патогенности, ответственному за процессы адгезии и колонизации микроорганизмов на слизистых.
С эпидемиологической точки зрения важно, что исследование проводится с использованием неинвазивных методов.
Исследование уровня секреторных антител изотипа IgA, имеющих протективное значение, к патогенетически значимому антигену коринебактерий дифтерии корд-фактору обеспечивает высокую точность, надежность и специфичность диагностики напряженности антибактериального противодифтерийного иммунитета.
Использование с этой целью метода иммуноферментного анализа обеспечивает высокую методическую чувствительность, точность, воспроизводимость и быстродействие диагностики. Возможность широкого практического применения обеспечивается использованием широко распространенного в учреждениях практического здравоохранения типового оборудования для иммуноферментного анализа.
Высокое быстродействие при достаточной точности наряду с комплексной автоматизацией дает возможность эффективно использовать предлагаемый способ при массовых эпидемиологических и клинических обследованиях населения для исследования колонизационной резистентности, формировании носительства, эффективности вакцинопрофилактики, при конструировании и оценке различных вакцинных препаратов и так далее, а также для проведения научных исследований.
Метод разработан и апробирован в лаборатории иммунохимии и отделении микробиологии и биохимии бактерий Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной.
Разработаны и оформлены методические рекомендации «Комплекс методов оценки антибактериального и антитоксического популяционного иммунитета к коринебактериям дифтерии» (Немов В.В., Дегтева Г.К., Ивашкина С.Г., Никитина З.И. , Беляева Е.В., Ермолина Г.Б.).
Способ оценки антибактериального иммунитета к дифтерии путем исследования биологической жидкости с помощью иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что в качестве объекта исследования используют слюну пациента, определяют в ней наличие специфических секреторных Ig А к корд-фактору в условных единицах и по величине указанного показателя оценивают антибактериальный иммунитет к дифтерии.
источник