Диагностика брюшного тифа основывается на характерных особенностях клинической картины (особенно начала болезни), данных анамнеза (особенно эпидемиологического – контакты с больными, посещение инфекционно опасных регионов, где много бактерионосителей), результатах, полученных в ходе лабораторных исследователей.
Конечно при диагностике брюшного тифа применяется микробиологическая диагностика, при которой из крови и естественных выделений человека выделяется возбудитель. Именно методы микробиологической диагностики позволяют выявить болезнь на раннем этапе.
Используется также серологическая диагностика. Однако ее методы могут показать заболевание только начиная с 5-го – 8-го дня с начала болезни. Причем максимум возможностей достигает на 2-ой – 3-ей неделях болезни. То есть очевидно запаздывание с выставлением диагноза.
Отметим, что в практике серологической диагностики брюшного тифа широко применяется реакция Видаля, а также РПГА (реакция пассивной гемагглютинации). Эти варианты диагностики используются также для дифференциальной диагностики с целью отстройки от болезней со схожими симптомами (паратифы, сальмонеллез).
Брюшной тиф относится к типичным антропонозным кишечным инфекциям. Источником заболевания может являться только больной человек или здоровый носитель бактерий. Инфицирование происходит фекально-оральным (при употреблении загрязненной воды, термически необработанного молока, мяса и т.д.) и контактно-бытовым путем (как правило, это более характерно для детей).
Инкубационный период болезни составляет 3-14 дней (иногда он может удлиняться до 21-го дня). При пищевом пути заражения период инкубации значительно короче, чем при водном или контактно-бытовом заражении. Чем короче период инкубации инфекции, тем тяжелее течение брюшного тифа и острее начало заболевания.
Комплексная диагностика брюшного тифа основывается на анализе клинической симптоматики, данных 
эпидемического анамнеза и анализов. Важную роль в диагностике играет наличие в анамнезе:
- контакта с больным брюшным тифом или лихорадящими пациентами;
- поездок в эндемичные по брюшному тифу районов;
- употребления сырого молока, термически необработанного мяса и фарша, немытых фруктов или овощей;
- употребления молочных или мясных продуктов, приготовленных частными лицами в антисанитарных условиях (шаурма, чебуреки и т.д., приобретенные на стихийных рынках и в ларьках);
- приема пищи в общепитах или кафе с низким уровнем санитарного контроля и т.д.
При обследовании больного, в первую очередь обращают на себя внимание:
- его заторможенность, сонливость и адинамичность;
- наличие лихорадки 39-40 градусов;
- снижение артериального давления;
- брадиаритмия, появление негрубого систолического шума;
- вздутый, болезненный при пальпации живот с увеличенными мезентериальными лимфоузлами. Отмечается симптом Падалки – при пальпации и перкуссии правой подвздошной области выявляется сильное урчание и укорочение перкуторного звука.
- жалобы на бессонницу, головные боли, сильную слабость, запоры;
- желтизна кожи на стопах и подошвах;
- трещины и язвы на губах, а также тифозный или «поджаренный» язык (сероватый налет в центре с ярко красным ободком по краям);
- увеличение печени и селезенки с четвертого дня;
- розеолезная сыпь с 8-х суток;
- появление у пациента бреда, маний, психоза и галлюцинаций.
Первые два-три дня болезни в общем анализе крови отмечают умеренное увеличение лейкоцитов или незначительную лейкопению (снижение числа лейкоцитарных клеток). С четвертого-пятого дня болезни в анализах появляется ускорение скорости оседания эритроцитов и выраженная лейкопения.
Возможно развитие анэозинофилии, относительного лимфоцитоза, нейтропении (характерен палочкоядерный сдвиг). Также характерно снижение количества тромбоцитов (риск тяжелого кровотечения прямо пропорционален уровню тромбоцитопении).
Поражение почек проявляется развитием олигурии (уменьшение объема мочи) или анурии (отсутствие мочи). В анализах мочи отмечается появление:
- протеинурии (белок в моче);
- микрогематурии (эритроциты в моче);
- цилиндрурии (цилиндры в моче).
При развитии кишечного кровотечения отмечается сильная тахикардия, резкая бледность кожи, падение артериального давления, снижение температуры тела, появление мелены (дегтеобразного стула с резким запахом).
Выделение гемокультуры брюшнотифозных сальмонелл возможно на протяжении всего лихорадочного периода, однако наиболее информативным анализ является на первой неделе заболевания.
В качестве дополнительного метода диагностики с десятого дня болезни проводится микробиологическая диагностика брюшного тифа с исследованием естественных выделений.
Анализ испражнений и мочи проводят со второй недели заболевания. Однако данные исследования обладают малой чувствительностью и позволяют выделить возбудителя только у 30-40 процентов больных.
По показаниям могут проводиться посевы на возбудителя соскобов (скарификата) с розеолезных высыпаний, спинномозговой жидкости и мокроты.
Для определения специфических антител с четвертого-пятого дня болезни может проводиться реакция Видаля с О- и Н- антигенами. О положительном результате свидетельствует титр 1:200, а также увеличение титра в динамике, при проведении повторного исследования.
На данный момент, реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) практически вытеснила классическую реакцию Видаля. Это объясняется тем, что РНГА с О-, Н- и Vi- антигенами отличается больше чувствительностью и специфичностью (реакция Видаля может дать неспецифическую реакцию с другими бактериями, входящими в семейство энтеробактерий).
Серологическая диагностика посредством РНГА проводится на четвертый-пятый день болезни и в динамике – через десять – четырнадцать дней, с момента первого анализа. При этом, для острой инфекции показательны положительные титры с О-антигенами. Высокие титры Н-антигенов характерны для пациентов с иммунитетом против брюшного тифа, сформировавшимся в результате перенесенного заболевания или после проведения вакцинации.
Vi-антигены обнаруживают у хронических носителей сальмонелл.
В качестве дополнительных методов диагностики (контроль состояния больного и раннее выявление осложнений) проводят:
- ультразвуковое исследование органов брюшной полости;
- ЭКГ и Эхо-КГ;
- рентгенографию ОГК (органы грудной клетки);
- анализ кала на скрытую кровь;
- контроль гематокрита;
- биохимическое исследование крови, коагулограмму, электролиты крови и т.д.
При подозрении на перфорацию кишечника и кровотечение показана консультация хирурга.
Лечение брюшного тифа проводится в инфекционном стационаре. Длительность лечения составляет от 25 до 45 и более дней и зависит от тяжести инфекции. В течение всего периода лихорадки и на протяжении пяти-семи дней после снижения лихорадки, больному показан строжайший постельный режим. Далее, больному постепенно разрешают садиться в кровати. Ходить можно не ранее 22-го дня от начала заболевания.
Назначается диета №4А и №4. Из рациона больного полностью исключаются все продукты с большим содержанием грубой клетчатки, а также способствующие усилению кишечной моторики и газообразованию. Из рациона исключают черный хлеб, квашеную капусту, жирные молочные продукты, картофель, бобовые, цитрусы и т.д.
С пятого-шестого дня стабилизации температуры возможно расширение диеты. При кишечных кровотечениях назначают голод на сутки (через 12-ть часов после кровотечения можно поить прохладным чаем).
Медикаментозная терапия брюшного тифа проводится комплексно и включает в себя назначение противомикробных, дезинтоксикационных и антигистаминных препаратов.
Дополнительно проводится симптоматическое лечение, направленное на облегчение состояния больного, а также профилактику и лечение осложнений.
Противомикробная терапия назначается в виде длительного непрерывного курса. Антибиотики назначаются с учетом возраста, тяжести состояния больного и наличия осложнений.
Назначение азитромицина целесообразно при легком неосложненном течении болезни. При среднетяжелом и тяжелом брюшном тифе рекомендовано использовать:
- цефалоспорины (препараты цефиксима, цефтриаксона, цефотаксима);
- фторхинолоновые средства (препараты ципрофлоксацина, офлоксацина, пефлоксацина).
На фоне длительной антибактериальной терапии целесообразно применение флуконазола, с целью профилактики грибковых осложнений.
По показаниям может применяться брюшнотифозная вакцина. При наличии иммунодефицитных состояний, высокого риска осложнений, а также при тяжелом течении показана иммунотерапия. Рекомендовано использование пентоксила, тимогена, метацила.
Для нормализации температуры тела больного назначают нестероидные противовоспалительные средства (парацетамол, нимесулид).
Десенсибилизация пациента проводится препаратами хлоропирамина (Супрастин), мебгибролина (Диазолин) и т.д.
Дезинтоксикация проводится при помощи инфузии растворов натрия хлорида, глюкозы, реополиглюкина, Рингера и т.д.
При развитии судорожного синдрома назначают диазепам.
Дополнительно проводится антиоксидантнаяи витаминная терапия. Назначают рибоксин, аскорбиновую кислоту, витамины А и Е, витамины групп В, препараты цитохрома С, и т.д.
Из стационара больные выписываются не ранее двадцать первого дня от момента стабилизации температуры, а также при отрицательных бак.анализах кала и мочи (требуются 2-х кратные отрицательные тесты) и желчи (однократно).
Каждый месяц проводится исследование кала и мочи. В конце третьего месяца – желчи.
В дальнейшем они состоят на учете у санэпиднадзора еще два года. Хронические носители (положительная Vi- гемагглютинация) состоят на учете пожизненно.
источник
Волгоградский государственный медицинский университет
Кафедра детских инфекционных болезней
ОСНОВНЫЕ ПРАКТИЧЕСКИЕ НАВЫКИ
· Материал берется врачом при первом обращении больного в стационар или поликлинику до начала лечения антибиотиками.
· Забор материала производится разными для зева, носа, глаза и т. д. тампонами.
· Мазок берется натощак, до туалета ротовой полости или через 3 часа после еды.
· 
Взятие производят стерильным ватно-марлевым тампоном, под контролем глаза, обязательно со шпателем. Слизь берется с миндалин, дужек, язычка, задней стенки глотки, не задевая языка, слизистой щек и зубов.
· Корень языка отдавливается книзу и кпереди шпателем (левой рукой), а правой рукой осторожно вводят в ротовую полость тампон и снимают слизь. При наличии пленок слизь берется на границе здоровой и пораженной ткани.
· При взятии слизи из носа, необходимо предварительно очистить носовые ходы (предлагают больному высморкаться), маленьким детям сухим ватным фитилем удаляют корки. Тампон вводят в каждую ноздрю, плотно прикасаясь всеми его сторонами к стенке и перегородке носа.
· Материал доставляется в лабораторию не позднее 3-4 часов от момента забора.
Контрольное бактериологическое исследование на токсигенные коринебактерии проводится через 3 дня после отмены антибиотиков, двукратно с интервалом в 1 день.
Правила забора материала для бактериологического исследования на менингококк
1. При менингококковой инфекции исследованию подлежит носоглоточная слизь (берется мазок из глотки и носовых ходов).
2. Материал из глотки берется с помощью стерильного тампона, укрепленного на алюминиевой проволоке, изогнутой под углом 1350.
3. Материал забирается натощак или через 3-4 часа после еды, при этом язык обязательно фиксируется шпателем.
4. Тампон осторожно вводят в ротовую полость, проводят за небную занавеску (не касаясь при этом щек, зубов, языка) и снимают слизь с задней поверхности глотки под контролем глаза.
5. При взятии слизи из носа, необходимо предварительно очистить носовые ходы (предлагают больному высморкаться), маленьким детям сухим ватным фитилем удаляют корки. Тампон вводят в каждую ноздрю, плотно прикасаясь всеми его сторонами к стенке и перегородке носа.
Взятые мазки немедленно высевают на соответствующие плотные питательные среды, а также наносят на предметное стекло, обводят стеклографом, подсушивают и направляют в лабораторию для микроскопического исследования.
1. Обнаружение паразитов в мазке крови является основным методом диагностики малярии. Мазки используют в случаях, когда видовую принадлежность плазмодиев, найденных в толстой капле, установить не удалось.
2. Лучше всего производить забор крови во время лихорадки или сразу же после озноба, до начала этиотропной терапии.
3. Предметные стекла, на которых будут готовить препарат, должны быть хорошо вымыты и обезжирены.
4. Кровь берут с соблюдением правил асептики. Первую выступившую каплю крови вытирают сухой ватой, затем палец поворачивают проколом вниз и ко второй капле прикасаются предметным стеклом.
5. При приготовлении мазка капля крови должна быть 2-3 мм., шлифованное стекло ставят перед каплей под углом 450º и продвигают вперед до соприкосновения с ней. Когда кровь растечется между обоими стеклами, плавным и быстрым движением делают мазок.
6. Для приготовления толстой капли на стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм. Её размазывают иглой или углом предметного стекла в диск диаметром 10-15 мм. Толщина полученной капли должна быть такой, чтобы через нее можно было читать газетный шрифт. Обычно на одно стекло наносят 2-3 капли на некотором расстоянии одна от другой. Взятые капли должны быть отмечены на обратной стороне стекла восковым карандашом — ФИО больного или регистрационный номер.
7. Возможно нанесение толстой капли на влажный мазок крови. В данном случае капля самостоятельно растекается в правильный диск. Маркировка препарата делается простым карандашом. При приготовлении толстой капли данным способом, удается хорошо сохранить в мазке пораженные эритроциты, что весьма важно для уточнения вида паразитемии, препарат удерживается на стекле более прочно, чем при непосредственном нанесении на стекло.
8. Приготовленные препараты высушивают при комнатной температуре не менее 2-3 часов и окрашивают по Романовскому-Гимзе.
Методика проведения спиномозговой пункции.
1. Пункцию проводят натощак в процедурном кабинете или операционной.
2. Ребенка укладывают на бок, сгибают голову кпереди, бедра приводят к животу, выгибая спину кзади, и фиксируют в таком положении.
3. Место прокола обтирают 95% спиртом.
4. Прокол производят между II-III или III-IV поясничными позвонками (место прокола определяют по линии, соединяющей гребни подвздошных костей).
5. Для пункции используют специальные иглы с коротким срезом обязательно с мандреном.
6. Игла вводится строго сагиттально по средней линии с легким наклоном в сторону головы. Игла вводится медленно, преодолевая сначала кожу, потом межпозвоночные связки, твердую мозговую оболочку, после чего как бы проваливается в спиномозговой канал.
7. Количество спиномозговой жидкости примерно составляет 1 мл на год жизни ребенка, но не более 5-6 мл.
8. После забора жидкости иглу извлекают, место прокола зажимают стерильным тампоном и заклеивают лейкопластырем. Ребенок должен лежать на животе, без подушки. Строгий постельный режим должен соблюдаться не менее суток.
Методика забора материала при коклюше методом
1. Ребенка фиксируют на руках так же, как и при заборе мазков из зева.
2. Врач шпателем нажимает левой рукой на корень языка и слегка раздражает заднюю стенку глотки, при этом в правой руке он держит открытую подогретую и подсушенную чашку Петри со средой Борде-Жангу.
3. При появлении кашлевых толчков из трахеи и бронхов отходит мокрота, которую собирают в открытую чашку Петри, поднеся ее на расстояние 10-15 см ко рту ребенка.
Правила забора материала для бактериологического исследования на кишечную группу бактерий.
1. Забор материала осуществляют до начала лечения этиотропными средствами. Посев производят немедленно после забора, непосредственно у постели больного. Если собранный материал нельзя направить в лабораторию, его помещают в консервант, хранят в холодильнике при температуре +40С.
2. Забор испражнений (2-3г) производят стерильным деревянным шпателем или стеклянной палочкой из судна, горшка, специального лотка или пеленки. В судне или горшке не должно оставаться следов дезинфицирующих средств, для чего их необходимо тщательно промыть горячей водой. При отсутствии стула возможен забор материала непосредственно из прямой кишки с помощью ватных тампонов, металлических петель или через трубку ректоскопа.
3. Для посева нужно стремиться взять слизь, гной, фибринные пленки, избегая примеси крови в связи с ее бактерицидными свойствами
Правила забора материала для бактериологического исследования при брюшном тифе.
Материалом при исследовании на брюшной тиф служат кровь, испражнения, моча, желчь, соскобы с розеол, в редких случаях — пунктат костного мозга.
· Выделение сальмонелл из крови (гемокультура) является наиболее ранним и достоверным методом диагностики. Кровь для исследования берут при повышенной температуре в любой день болезни (обычно в первые 10 дней). Чем раньше от начала заболевания произведен посев, тем достовернее результат. Кровь берут из вены, желательно до начала антибактериальной терапии, в количестве 10 мл на первой неделе, и 15-20 мл в более поздние сроки, у постели больного засевают на питательную среду в соотношении 1:10 (при меньшем объеме питательной среды кровь оказывает бактерицидное действие на микроб-возбудитель).
· Посев кала (копрокультура) производят со второй недели заболевания. Стерильным деревянным шпателем или стеклянной палочкой берут 2-3 г испражнений из судна или горшка и помещают в стерильные банки. Для устранения дезинфицирующих средств судно или горшок следует тщательно промыть горячей водой. Посев производят прямым методом на чашки со средой Плоскирева или Левина.
· Посев мочи (уринокультура) производят непосредственно на среды, начиная со второй недели заболевания. В стерильную посуду собирают 20-30 мл мочи с соблюдением условий, исключающих попадания посторонней флоры.
· Посев из розеол (розеолокультура) осуществляют при появлении на коже розеолезной сыпи. Кожу над розеолой обрабатывают спиртом и скарифицируют. На место скарификации наносят каплю желчного или простого бульона, а затем с помощью пипетки переносят во флакон с 50 мл желчного бульона.
· Посев желчи (биликультура) производят не ранее 10 дня нормальной температуры. Желчь, полученную при помощи дуоденального зондирования, собирают в стерильные пробирки. Производят посев всех порций дуоденального содержимого (А, В, С) по 0,5 мл на чашки Петри с дифференциальными средами, и 1-2 мл на среду обогащения (бульон).
Правила забора крови для серологических исследований
Сущность метода заключается в определении роста титра антител в сыворотке крови больного по отношению к известным антигенам.
1. Кровь берут дважды с интервалом в 7-10 дней, начиная с 3-5 дня заболевания.
2. Забор крови осуществляется «самотеком» – в локтевую вену вводят иглу широкого диаметра без шприца, кровь (3-5 мл) собирают в пробирку. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка реже бывает с явлениями гемолиза.
3. После отстаивания и центрифугирования с помощью пипетки сыворотку крови переносят в другую пробирку и хранят в холодильнике при +40С до постановки реакции.
4. Нарастание титра антител в 4 и более раза является подтверждением предполагаемого диагноза.
Правила введение гетерогенных сывороток по методу Безредки
Все гетерогенные сыворотки содержат остаточное количество чужеродного (лошадиного) белка, поэтому вводить сыворотку нужно дробно, определив предварительно чувствительность организма.
1. Внутрикожно в среднюю треть сгибательной поверхности предплечья вводят 0,1 мл разведенной в 1:100 сыворотки (ампулы прилагается к каждой упаковке). Результат оценивается через 20-30 минут. Проба считается отрицательной, если диаметр папулы и гиперемии не превышает 9 мм и нет общей реакции организма (сыпи, повышения температуры и т. д.).
2. При отрицательной внутрикожной пробе вводят подкожно (в наружную поверхность плеча) 0,1 мл не разведенной сыворотки. Результат учитывают через 40 минут. Если в месте введения диаметр папулы или гиперемии не превышает 9 мм, проба считается отрицательной.
3. Вводят всю лечебную дозу сыворотки внутримышечно (в переднюю поверхность бедра или наружный квадрант ягодичной мышцы).
1. Катетеризацию проводят мягким одноразовым катетером с соблюдением асептики.
2. Ребенка укладывают на спину и обмывают наружные половые органы марлевым тампоном, смоченным раствором фурациллина (1:5000). Конец катетера смачивают стерильным вазелином.
3. У мальчиков средним и безымянным пальцами левой руки обхватывают половой член ниже головки, а большим и указательным фиксируют её и слегка натягивают уретру по средней линии. Девочкам указательным и большим пальцами раздвигают большие половые губы и дезинфицирующим раствором обрабатывают наружное отверстие уретры.
4. Катетер вводят стерильным пинцетом в наружное отверстие уретры и проталкивают его внутрь до мочевого пузыря. О попадании катера в пузырь свидетельствует появление мочи.
1. Грудного ребенка укладывают на спину с приподнятыми вверх ногами.
2. Прокипяченный резиновый баллон с кипяченой водой (28-300С) осторожно вводят в задний проход на глубину 3-5 см. Предварительно его наконечник смазываю вазелином маслом.
3. Медленно вводят в прямую кишку воду. Количество воды для новорожденного 25-30 мл, грудного ребенка – 60-150 мл.
4. После введения жидкости ягодицы ребенка сжимают рукой, а другой осторожно извлекают наконечник чтобы не допустить вытекания воды до усиления перистальтики кишечника.
Методика проведения очистительной клизмы ребенку старшего возраста
1. Для очистительных клизм детям старшего возраста используют кружку Эсмарха.
2. Ребенка укладывают на левый бок с подогнутыми ногами. Заполняют кружку кипяченой водой (20-220С) и вешают на штатив, чтобы она находилась на 50-75 см выше уложенного ребенка.
3. Резиновый наконечник смазывают вазелином и, разведя ягодицы, вводят на глубину 5-10 см.
4. Скорость поступления жидкости и ее объем регулируют с помощью крана, размещенного на резиновой трубке.
5. Детям 2-5 лет вводят 150-200 мл, более старшего возраста – 200-500 мл.
6. После введения жидкости больной должен полежать 8-10 мин, пока не усилится перистальтика.
Промывание желудка производится с лечебной и диагностической целью для удаления из него недоброкачественной пищи, ядов, слизи. При этом используется принцип сифона.
1. Больной садится на стул, плотно прислонившись к его спинке, слегка наклонив голову вперед. Между ногами больного ставится таз или ведро, куда будут собираться промывные воды.
2. Введение зонда может вызвать тошноту или рвоту. Больного предупреждают об этом и предлагают делать частые глотательные движения и глубоко дышать через нос.
3. После введения зонда в желудок к наружному концу трубки присоединяют воронку и наполняют ее жидкостью, затем воронку поднимают вверх. Когда жидкость опустится до нижней части конуса воронки, ее опускают до уровня головы ребенка.
4. Как только воронка заполнится содержимым желудка и промывной жидкостью, резиновую трубку пережимают пальцами ниже воронки и все сливают в таз. Это повторяют до тех пор, пока из желудка не будут поступать чистые промывные воды.
5. Собранные промывные воды собирают в стерильную посуду и отправляют в лабораторию для исследования.
источник
Проведение забора материала от больных для бактериологических исследований 3319
1. Вид материала определяется клинической картиной заболевания, т.е. он должен соответствовать
локализации предполагаемого возбудителя с учетом патогенеза болезни. Например, забираем
гнойное содержимое ран, фурункулов, карбункулов, мокроту при бронхо-легочных заболеваниях4;
испражнения при заболеваниях ЖКТ; кровь при лихорадочных состояниях и т.д.
2. Материал следует брать до применения антибиотиков или других химиотерапевтических препаратах
или через определенный промежуток времени после их назначения, необходимый для выведения
препарата из организма (например, антибиотики выводятся из организма через 8-10 часов)
3. Материал необходимо брать в достаточном количестве для исследования, соблюдая правила
асептики в процедурном кабинете, в перевязочной или операционной, что бы не загрязнить его
микроорганизмами окружающей среды и представителями нормальной микрофлоры человека.
4. Забор материала осуществляют, по возможности, в начальном периоде болезни, т.к. именно в этот
период возбудители выделяются чаще, их больше и они имеют более типичную локализацию.
Ранний этиологический диагноз предполагает более ранее, следовательно, более эффективное
5. Исследуемый материал в возможно короткие сроки (1-2 часа) следует доставить в лабораторию. Его
доставка должна осуществляться средним медицинским персоналом и производиться в
лабораторной посуде или специальных контейнерах при сохранении первоначальной температуры
материала, или при охлаждении, замораживании сухим льдом (зависимости от характера материала).
Любой материал, направляемый в лабораторию, должен сопровождаться соответствующим
направлением, в котором указывается фамилия, имя и отчество больного, вид материала, дата и
время его взятия, предварительный диагноз заболевания, название учреждения или отделения,
подпись врача, направляющего материал на исследование.
6. Любой клинический материал должен рассматриваться как потенциально опасный для человека.
Поэтому при его заборе, хранении, доставке, обработке во избежание заражения должны
соблюдаться такие же меры техники безопасности, как в бактериологической лаборатории.
7. После исследования остатки материала подлежат уничтожению (автоклавированию или сжиганию), а
посуда, контейнеры, инструменты – обеззараживанию.
1.2.Правила забора и посева крови на стерильность и гемокультуру
Производится при тифо-паратифозных заболеваниях, сепсисе, менингококковой инфекции или других
инфекциях, сопровождающихся лихорадкой, причем на протяжении всего лихорадочного периода
болезни, но лучше в начальном периоде или в разгаре болезни (при выраженной бактериемии). Для
исследования берут кровь из вены локтевого сгиба, у маленьких детей кровь берут в меньшем
количестве из мочки уха, пятки, пальца. Пробы крови отбирают после тщательной обработки кожи с
соблюдением правил асептики, одноразовым стерильным шприцем. Посев на питательные среды
стерильного материала (кровь или другие, содержащие микробов жидкости у здоровых лиц) также
лучше делать у постели больного, либо помещать в стерильную посуду, содержащую вещества,
препятствующие свертыванию крови 0,3% раствора цитрата натрия, 0,1% раствор оксалата натрия).
Обычно берут 5-10мл крови и засевают во флакон, содержащий 50-100 мл среды. Для этого
используют для флакона с питательной средой (один для аэробов, другой для анаэробов). Посев
крови производится на жидкие питательные среды – 10% желчный бульон, 1% сахарный бульон,
двухфазную среду, а также жидкие и полужидкие среды для культивирования анаэробов в
разведении 1:10. Флаконы с питательной средой получают в лаборатории, переливание крови из
шприца во флакон необходимо производить над пламенем спиртовки, предварительно сняв иглу.
Флакон с посевом направляется в лабораторию, а в вечернее и ночное время помещают в термостат.
Студенту важно помнить, что тем раньше от начала заболевания производится посев. Тем больше
шансов получить положительный результат. И, наоборот, чем позже взята кровь, тем меньшее
количество возбудителя в ней находится и положительные результаты получаются реже. А при
нормальной температуре – совсем редко. Следует знать, что для повышения числа положительных
результатов гемокультуры рекомендуется, при отсутствии противопоказаний, за 15-20 минут для
взятия крови ввести подкожно 1мл 0,1% раствора адреналина, что способствует сокращению
селезенки и выходу в кровяное русло возбудителей (например, при тифозно-паратифозных
Предварительный результат посева при тифо-паратифозных заболеваниях получают через 2-3 дня, а
окончательный – через 7-10 дней. Следует помнить, что увеличение кратности посевов крови (три
дня подряд на подъеме температуры) значительно повышают частоту выделения микробов из крови.
У леченных больных кровь для посева следует брать 5-6 раз.
1.3.Правила забора и посева испражнений
Производится при кишечных инфекциях (брюшной тиф, паратифы, шигеллезы, сальмонеллезы и т.д.), а
так же при всех болезнях, протекающих с поражением ЖКТ и сопровождающихся расстройством
стула. Сбор испражнений производится стерильным деревянным шпателем или стеклянной палочкой
в количестве 2-3г в стерильные баносчеи из судна, горшка или лотка, а так же непосредственно из
прямой кишки с помощью тампонов, металлических петель или трубки ректоскопа. Студенты
должны помнить, что даже остаточное количество дезинфицирующих средств на стенках судна или
горшка способно значительно изменить как количественный, так и качественный состав микробов в
клиническом материале, поэтому их следует тщательно промывать горячей водой. Следует брать
слизь, гной, фибринные пленки и избегать примеси крови. При невозможности своевременного
посева кала используют консервант – глицериновую смесь, составляющую 2\3 общего объема.
Необходимо помнить, что посев испражнений производят прямым способом на чашки Петри со
средой Плоскирева, Левина, Эндо, висмут-сульфит агаром или на среды обогащения (селенитовая,
среда Мюллера), с последующим пересевом на перечисленные выше среды для выделения
энтеробактерий, на щелочной агар (1% пептонную воду с последующим пересевом на щелочной
агар) – для вибрионов, МПА – для бацилл, МПА с фурагином – для выделения псевдомонад, ЖСА –
для выделения стафилококков, среду Китта-Тароцци – для клостридий.
Студенты должны знать, что при брюшном тифе посевы кала следует проводить со второй недели
заболевания, перед выпиской из стационара, а пищевикам и им приравненным лицам – на
протяжении всего периода работа в декретированных учреждениях. Положительные результаты
копрокультуры при тифо-паратифозных заболеваниях бывают на 2-3 неделе заболевания и реже – в
первые дни болезни, а рри других заболеваниях – на 2-3 день после посева.
Производится при воспалительных заболеваниях мочевыводящих путей. Для бактериологического
исследования следует брать среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета
мочеполовых органов кипяченой водой с мылом. Мочу собирают в стерильную посуду, на
исследование отбирают 3-5мл в стерильной, плотно закрывающийся флакон и доставляют в
лаборатории. В течение 1 часа. При затрудненном мочеиспускании возможен отбор мочи с помощью
катетера. При бактериологическом исследовании определяют степень бактериурии, т.е. количество
колониеобразующих единиц в 1мл мочи, методом секреторных посевов мочи. Для этого чашку Петри
с питательной средой 3-5% кровяным агаром необходимо разделить на 4 сектора.
Бактериологической петлей диаметром 2мм (вместимость 0,005мл) производят посев мочи (30-40
штрихов) на сектор а чашки Петри, после этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева
из сектора А в сектор ! и аналогичным образом – из 1 во 2, из 2 в 3.
Наносят по капле мочи на чашки Петри со средами Эндо (для энтеробактерий) и Сарубо (для грибов), а
затем засевают штрихом по всей поверхности чашек. По капле материала (0,05мл) засевают в
селенитовую среду и сахарный бульон в соотношении 1:9, все чашки и пробирки инкубируют 18-24
часа при 35-37 градусах. После инкубации число выросших колоний на разных секторах
подсчитывают и определяют степень бактериурии по таблице.
Наличие в 1 мл мочи у детей 104, а у взрослых 105 микроорганизмов и более, говорит о наличии
инфекции в мочевыводящих путях или почках. После подсчета микролных клеток в 1мл мочи
проводят выделение чистой культуры микробов для дальнейшей идентификации и определения
чувствительности к атибиотикам. Окончательный результат исследования выдается на 4-5 сутки.
Производится при воспалительных заболеваниях желчевыводящих путец. Желчь забирается во время
дуоденального зондирования. В отдельные стерильные пробирки собирают все три порции желчи (А,
В и С) с количестве 10-20мл и не ранее 8-10 дня нормальной температуры. Конец зонда
предварительно обрабатывают спиртом, затем, после выделения 1-2мл желчи, которые не
используют для исследования, наполняют пробирки через зонд с помощью стерильного шприца.
При тифо-паратифозных заболеваниях студент должен знать, что положительная биликультура может
быть в течение всего заболевания, а так же в периоде реконвалесценции. При этом возбудитель в
желчи обнаруживается в ,15 чаще, чем в корпо- и уринокультурах. Однако, из-за опасности
дуоденального зондирования в лихорадочном периоде, посев желчи производится только у
реконвалесцентов и бактерионосителей. Для посева желчи используют жидкие среды обогащения
(селенитовая, Мюллера и т.д.) и плотные дифференциально-диагностические (Плоскирева, висмут-
сульфит агар). Материал в количестве 1-2мл вносят в жидкую среду, а 0,5мл наносят на поверхность
на поверхность плотной среды, затем равномерно распределяют шпателем.
При воспалительных процессах в желчном пузыре иной этиологической природы необходимо посев
материала проводить как при посеве мочи. Учет результатов исследования и выписка производится
1.6.Правила забора рвотных масс и промывных вод желудка
Производится при пищевых токсикоинфекциях и кишечных инфекциях. Рвотные массы собирают в
стерильные банки в количестве 50-100мл и немедленно отправляют их в лабораторию.
Целесообразно проводить исследование материала на обнаружение и патогенной и условно-
патогенной флоры. Для этого полученный материал разводят в физ. растворе, затем титруют его и
засевают на чашки со вредами для выделения энтеробактерий (Левина, Эндо, Плоскирева), для
вибрионов – на щелочной агар, для бацилл – на МПА, для клостридий – на стреду Китта-Тароцци.
После инкубации выделяют чистые культуры, проводят их идентификацию, определяют
чувствительность к антибиотикам, определяют факторы патогенности. При выделении УПМ
необходимо учитывать не только качественный состав микрофлоры, но и количественный, т.к.
этиологически значимой для отсутствующих или присутствующих в небольшом количестве в
кишечнике здоровых людей видом является 106 и больше
Посев промывных вод желудка производится при пищевых токсикоинфекциях и кишечных инфекциях.
Собираются в количестве 20-25мл в стерильные банки или широкогорлые флаконы после
промывания желудка кипяченой водой без добавления гидрокарбоната натрия или перманганата
калия. Из промывных вод следует забирать первые порции, доставляется материал в лабораторию
немедленно. Посев проводится так же как и рвотных масс, только без разведения в физ. растворе.
1.7.Правила забора гноя, экссудата и розеолокультуры
Посев производится из воспалительных очагов. Материал забирается стерильным шприцем, пинцетом
или тампоном, по возможности из более глубоких отделов, т.к. верхние отделы могут содержать
сапрофитную микрофлору. При снятии повязки рекомендуется очистить поверхность от мази,
отмерших тканей и только после этого отбирать материал с соблюдением правил асептики. Взятый
материал помещают в стерильную пробирку, флакон или чашку Петри и доставляют в лабораторию.
Забор отделяемого проводят двумя ватными тампонами – один для приготовления нативного мазка,
второй для посева на питательные среды. Посев производят в пробирку с сахарным бульоном,
неоднократно погружая ее в среду, после чего несколько капель сахарного бульона пипеткой
засевают в среду Китта-Тароцци или тиогликолевую. Этим же тампоном материал засевают на
плотные питательные среды (кровяной агар, ЖСА, Эндо, Сабуро).
После инкубирования выделяют чистую культуру, идентифицируют микрофлору по рода и вида и
определяют чувствительность к антибиотикам.
Посев из розеол производится для выделения микроорганизмов (при тифо-паратифозных заболеваниях).
С целью получения содержимого розеолы кожу над ней обрабатывают спиртом и скарифицируют.
На место скарификации наносят капли стерильного желчного или простого бульона, а затем с
помощью пипетки переносят во флакон с 50мл желчного бульона. После инкубации 24 часа при 37
градусах материал из флакона пересевают на плотные питательные дифференциально-
диагностические среды (Плоскирева, висмут-сульфит агар и т.д.). материал в количестве 0,5мл
наносят на поверхность плотной среды и затем равномерно растирают шпателем.
Посев из розеол желается с 8-10 для болезни, когда появляются розеолы на коже. Метод не ранний, но
важный в периоде реконвалесценции и при диагностике стертых форм тифо-паратифозных
заболеваних, так как в крови возбудители бывают в небольшом количестве.
1.8.Правила забора и посева носоглоточной слизи
Производится при менингококковом назофарингите и для выявления носительства менингококка, реже –
при других формах менингококковой инфекции. Слизь из носоглотки берется натощак или через 3-4
часа после еды. Стерильный тампон, укрепленный на изогнутой проволоке (угол 120-130 градусов),
направляется концом вверх и подводится под мягкое небо в носоглотку. Материал берется при
надавливании шпателем на корень языка. После взятия носоглоточной слизи необходимо сразу же
сделать посев на теплые чашки с сывороточным агаром, можно с добавлением ристомицина, который
ингибирует рост сопутствующей флоры. После посева необходимо незамедлительно поставить
чашки в термостат и, не допуская охлаждения, доставить их в лабораторию, так как менингококк
очень чувствителен к снижению температуры ниже 36 градусов. Окончательный ответ посева
выдается на 4 день исследования. Необходимо помнить, что при менингитах другой этиологии в
носоглоточной больного может быть обнаружен менингококк, а так же отрицательные результаты
посева не исключают менингококковую этиологию заболевания.
1.9.Правила забора слизи из зева и носа
Производятся при ангине, дифтерии и других инфекциях. Тампон для взятия мазков должен быть
заранее простерилизован в лаборатории. Мазок из зева берут натощак или не ранее 2 часов после
полоскания, питься, или еды под контролем глаза, не касаясь тампоном слизистых оболочек рта,
языка, зубов. Корень языка придавливают книзу и кпереди шпателем, держа его левой рукой, а
правой осторожно вводят в ротовую полость тампон и осторожно снимают налет или слизь на
границе пораженного участка и здоровой ткани, где количество возбудителей больше, чем в других
Перед взятием слизи из носа предварительно необходимо очистить нос, удалить корки. Тампон вводят
поочередно в обе ноздри, плотно прикасаясь к стенкам, перегородке носа и плотно прижимая крылья
носа к тампону. Полученный материал с тампона немедленно засевается на плотные питательные
среды и одновременно наносится на предметное стекло, подсушивается и направляется в
лабораторию для микроскопического исследования.
При подозрении на дифтерию материал засевают на кровяно-теллуритовый агар, предварительно
подогретый до комнатной температуры. При посеве материал со всех сторон тампона втирают в
среду на участке площадью 2х1см, а затем этим жен тампоном засевают круговыми движениями,
втирая в общую поверхность среды. Засеянные чашки инкубируют при 37 градусах на 24-48 часа.
При отсутствии возможности доставить материал в лабораторию в течение 3 часов с момента взятия
пробы рекомендуется засевать материал на чашки с питательной средой непосредственно у постели
больного или пробирки с транспортной средой помещают в термостат и затем доставляют в
лабораторию. Через 24 часа инкубации с транспортной среды проводитсч пересев на КТА, поэтомк
срок исследования увеличивается на одни сутки. После инкубации проводится выделение чистой
культуры. Определяется род и вид. Кроме того, обязательно определяется токсигенность
При подозрении на другую инфекцию мазок из зева берется параллельно двумя стерильными
тампонами. Один помещают в пробирку с сахарным бульоном, другой используют для
приготовления мазка. После инкубации через 24 часа проводится пересев с сахарного бульона на
питательные среды (кровяной агар, шоколадный агар, ЖСА, Эндо, Сабуро). Чем больше набор
селективных питательных сред используется для посева материала, тем больше вероятность
выделения и идентификации микроорганизмов, вырвавших болезнь. После идентификации до рода и
вида необходимо определить чувствительность к антибиотикам.
Производится на 20% сывороточный агар или же на среду обогащения – 0,1% полужидкий агар. Среды
должны быть свежими: срок хранения их в холодильнике не более суток. Ликвор необходимо
собирать в стерильную пробирку и немедленно доставлять в лабораторию на исследование в водяной
бане при 37 градусах. Ликвор центрифугируют, берут 2-3 капли осадка жидкости, взятой со дна
пробирки, засевают на повехность подогретого сывороточного агара в чашку Петри. Готовится мазок
для бактериоскопического исследования, а оставшийся ликвор в пробирке заливается 5мл
стерильного полужидеого 0,1% агара с добавлением сыворотки и помещается в термостат для
накопления микробных клеток (так называемое «обогащение»). Предварительный результат посева,
получается через 1-2 дня, а окончательный – через 3-4 дня, при выделении чистой культуры
менингококка с помощью метода обогащения – через 7-8 дней.
2. Правила приготовления и окрашивания микропрепаратов, методы окраски
Окраска по Граму. Методика:
1) окрасить мазок генцианвиолетом ( 2 минуты,через фильтровальную бумагу);
2) бумагу удалить, оставшуюся краску слить;
3) окрасить мазок раствором Люголя (1 минута);
4) раствор Люголя слить и нанести несколько капель чистого 96% спирта (30-40 секунд, осторожно
5) тщательно смыть спирт водой;
6) окрасить водным фуксином (2 минуты);
7) промыть водой и высушить.
Грам-положительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, Грам-отрицательные – в
Окраска кислотоустойчивых бактерий. Кислотоустойчивые микроорганизмы обладают выраженной к
неорганическим кислотам, спиртам, щелочам. Это связано с наличием в клеточной стенке и
мембране сравнительно большого количества липидов. Бактерии этой группы очень плохо
окрашиваются обычными способами, поэтому используют концентрированные растворы с
подогревом. При последующей кратковременной обработке кислотой клетки, воспринявшие краску,
не обесцвечиваются. Это позволяет отличить кислотоустойчивые бактерии. Их окрашивают по
методу Циля-Нильсена, который разработан с учетом все указанных особенностей
Окраска по Цилю-Нильсену. Методика:
1) нанести несколько капель карболового фуксина на фиксированный мазок. Покрытый фильтровальной
бумагой, и подогреть до появления паров (3-5 минут);
2) бумагу снять, мазок охладить и обесцветить 3% серной кислотой или 3% солянокислым спиртом (3-4
3) тщательно промыть водой;
4) окрасить дефферовской синькой (3-5 минут);
5) промыть водой и высушить.
Окаска спор. Зрелая спора с трудом поддается окрашиванию из-за низкой проницаемости стенки. При
окраске по Граму спорообразующей культуры краска воспринимается только вегетативной частью
микроба, а спора остается бесцветной. Проницаемость ее клетки резко увеличивается после
обработки горячей соляной кислотой или при испольщовании концентрированного раствора краски в
подогревом. Восприняв краску, спора при последующей обработке кислотой не обесцвечивается, в то
время как вегетативные клетки немедленно отдают краску.
1) нанести несколько капель 0,5% соляной кислоты на нефиксированный мазок и нагреть до появления
2) слить кислоту, промыть водой, высушить;
3) зафиксировать в пламени;
4) окрасить по методу Циля-Нильсена (при этом споры окрашиваются в красный цвет, а вегетативные
формы – в синий). Часто для окраски спор используют только метод Циля-Нильсена.
Окраска включения волютина (по Нейссеру).
1) Окрасить мазок уксуснокислой синькой Нейссера (2-3 минуты);
3) Окрасить раствором Люголя (30 секунд);
4) Слить раствор Люголя и окрасить везувином (1 минута)
5) Промыть препарат и высушить
Цитоплазма клетки, имеющая кислую реакцию, принимает желтый цвет. Зерна волютина – темно-синие,
Окраска по Бурри (обнаружение капсул). Для обнаружения капсул используют негативную окраску,
т.к. окрашивается пространство между бактериями. Таким образом, образуется темное поле с
1) Смешать на предметном стелке немного капсульной культуры и каплю разведенной (1:9) туши;
2) Высушить на воздухе и бактериоскопировать.
Модификация по Бурри-Гинсу включает создание фона краской конгорот, последующую фиксацию в
5% растворе соляной кислоты, дополнительную окраску водным фуксином. В результате – общий
фон темный, капсулы бесцветны, сами бактерии – красные.
Окраска по Романовскому-Гимзе. Относится к сложным методам окраски и применяется чаще всего
для мазков-отпечатков из органов или мазков крови после фиксации в жидком фиксаторе. Позволяет
выявить ядерные элементы бактериальных клеток и зерна волютина. Для окраски берут каплю
готовой краски на 1мл воды, которая должна быть подщелочена до рН – 7,2.
1) Поместить препарат (мазком вниз) в чашку Петри, подложив под края стекла спички или кусочки
2) Подлить краску сбоку так, чтобы она без пузырей подтекла под мазок (красить 1-24ч);
3) Промыть водой (рН – 7,2) и высушить;
Протоплазма молодых клеток окрашивается в сине-фиолетовый цвет, ядерные элементы – в
4. Правила проведения посева на жидкие и плотные питательные среды для получения чистых культур
аэробных бактерий. Методы выделения чистых культур бактерий.
1. Посев петлей. Посевной материал втирают петлей в поверхность среды у края чашки. Избыток
снимают, поколов петлей агар, а оставшийся материал рассеивают параллельными штрихами по всей
2. Посев шпателем. Материал наносят петлей или пипеткой, а затем стеклянным или металлическим
шпателем тщательно втирают его по всей поверхности среды.
3. Посев тампоном. Тампон и исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями
втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая тампон и чашку.
4. Посев на секторы. Дно чашки делят на секторы. Посев производят зигзагообразными движениями от
края чашки к центру так, что бы штрихи с одного не переходили на другой.
5. Посев газоном. 1мл исследуемого материала (жидкая бульонная культура или взвесь микробов в
физиологическом растворе) наносят пипеткой на поверхность среды и тщательно распределяют по
всей поверхности. Избыток материала отсасывают пипеткой.
После посева чашки закрывают и кладут вверх дном. Надписи на чашках делают со стороны дна, на
пробирках – в верхней части.
При посеве на жидкую среду петлю слегка погружают в жидкость и растирают посевной материал по
стенке пробирки. После чего смывают его средой.
6. Правила проведения посева на питательные среды для получения чистых культур анаэробных
бактерий. Методы создания анаэробных условий.
Анаэробные бактерии можно культивировать только на специальных бескислородных питательных
средах с низким окислительно-восстановительным потенциалом. Для контролем за насыщением этих
сред кислородом используют специальные радокс-индикаторы.
Для сохренения низкого ОВП среды должны быть агаризованы. Для культивирования оглигатно-
анаэробных бактерий среды должны быть свежеприготовленными (не позднее 2 часов). Для
успешного выращивания требуется внесение большого количества посевного материала. Это связано
с тем, что в больших количествах анаэроб способны быстрее понижать ОВП среды.
Среды должны очень богаты питательными субстратами и витаминами, факторами роста, т.к.
анаэробный типа дыхания менее продуктивный, чем аэробный.
Методы создания анаэробных условий
1.Физичесикие методы. Для удаления растворенного в питательных средах кислорода используют их
регенерацию путем кипячения в течение 15-20 минут на водяной бане с последующим быстрым
охлаждением до 50 градусов. После посева поверхность среды заливают парафином или
вазелиновым маслом. Так же, возможен посев в столбик плотной или полужидкой среды на глубину
10-12см. кислород с воздуха диффундирует на 1,5-2см, а в глубине создаются благоприятные
Применение анаэростатов и анаэробных боксов.
2.Химические методы. Для поглощения кислорода из замкнутого простанства можно использовать
гидросульфит натрия. Для связывания кислорода в 1л объема используют 100мл
свежеприготовленного 20% Na2S2O4 и 16мл 50% КОН.
Для связывания остатков кислорода используют вещества-редуценты, к которым относится
тиогликоевая кислота или тиогликолат натрия, аскорбиновая кислота, различные сахара, цистин и
цистеин, муравьинокислый натрий и т.д.
3.Биологические методы. Совместнео выращиевание анаэробов и аэробов (метод Фортнера). При нем
на одну половину чашку засевают исследуемы материал, а на другую – культуру аэробного или
факультативно-анаэробного микроба, способного энергично поглощать кислород.
Помещение в среду кусочков печени, почек, мозга. При это тканевые клетки активно поглощают и
адсорбируют кислород, а в среде создаются анаэробные условия.
Методы выделения чистых культур анаэробов.
1. Метод Цейсслера. Исследуемый материал сеют штрихами по поверхности плотной среды. Создают
анаэробные условия. И инкубируют при 37 градусах 24-72ч. Изолированные колонии анаэробов
пересевают на среду контроля стерильности или среду Китта-Тароцци.
2. Метод Вейнберга. Несколько капель исследуемого материал вносят в пробирку с 4-5мл
изотонического раствора. Перемешивают запаянным капилляром переносят в пробирку с
охлажденным до 45-50 градусов сахарным агаром, разлитым высоким столбиком. После
перемешивания этим же капилляром засевают еще две пробирки с сахарным агаром и быстро
охлаждают под струей воды. Выросшие в глубине колонии пересевают на СКС или среду Китта-
3. Метод Перетца. Готовят разведение материала, как указано выше. Содержимое пробирки с
соответствующим разведением выливают в чашку Петри, на дне которой на двух палочках лежит
стеклянная пластина 6х6см. среду заливают так, что бы она заполнила пространство между
пластиной и дном чашки. При появлении роста пластинку поднимают и чистые колонии пересевают.
7. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам диско-диффузионным методом.
Для использования необходимо использовать стандартные питательные среды. Стандартные диски с
антибиотиками используются только до истечения срока годности. После вскрытия флакон с
дисками можно хранить в течение недели в рефрижераторе при 10 градусах.
На поверхность подсушенной питательной среды в чашке Петри наносят 1мл исследуемой культуры,
равномерно распределяют путем покачивания, избыток удаляют пипеткой. Плотные субстраты
(мокрота, кал, рвота) должны быть предварительно гомогенизированы, мочу и экссудат засевают из
осадка после центрифугирования. Материал наносят на чашку ватным тампоном. После выделения
чистой культуры исследование проводят уже с ней. После посева среду подмушивают при комнатной
температуре 10-15 минут. Диски с антибиотиками накладывают пинцетом на равно расстоянии друг
от друга и на 2см от края чашки (на одну чашку не более 6 дисков). Чашку сразу ставят в термостат
вверх дном и инкубируют при 35-37 градусах в течение 18-20 часов.
Для учета результатов чашки помещают на темную матовую поверхность и освещают под углом 45
градусов. Допускается учет в проходящем свете.
задержки роста, включая сами диски, с точность до 1мм. Не следует обращать внимания на очень
мелкие колонии в пределах зоны торможения роста. Оценку проводят по таблицам в соответствии с
используемой средой и видом возбудителя.
10. Методы дезинфекции, правила дезинфекции в бактериологической лаборатории
В зависимости от характера действующего агента различают физический и химический способы
Физический способ сводится к механической очистке объектов (орошению, мытью, чистке,
встряхиванию и выколачиванию, влажной уборке, вентиляций помещений). Он не позволяет
достигнуть полного обеззараживания обрабатываемых объектов, однако его применение приводит к
значительному уменьшению числа патогенных микроорганизмов во внешней среде.
В микробиологической практике широкое применение нашли способы химической дезинфекции (рук и
рабочего места, отработанного патологического материала, градуированных и пастеровских пипеток,
стеклянных шпателей, стекол).
Дезинфицирующие средства предназначены для уничтожения возбудителей во внешней среде
(помещениях, предметах ухода за больными, выделениях и одежде больных). Они должны:
1. Хорошо растворяться в воде
2. В короткие сроки проявлять бактерицидное действие
3. Не утрачивать обеззараживающих свойств при наличии органических примесей в среде, подлежащей
4. Не оказывать токсического действия на людей и животных
5. Достаточно долго сохранять бактерицидные свойства при хранении в сухом виде или растворе
6. Быть дешевыми и удобными при транспортировке
Антисептческие средства применяются для воздействия на микробы, контаминирующие поверхности
кожных покровов, слизистых оболочек и соприкасающихся с ними тканей.
Галогеносодержащие соединения: хлорная известь, хлорамин, раствор Люголя, спиртовой раствор
Соединения тяжелых металлов: сулема, серебра нитрат, цинка сульфат, цинка окись, ксероформ,
ПАВ: пероксид водорода, калия перманганат.
Альдегиды: формальдегид. Циминаль
Фенолы: карболовая кислота, лизол, деготь, ихтиол
11. Методы стерилизации, аппаратура и режимы стерилизации, используемые в
Стерилизация сухим жаром применяется для обеспложивания стеклянной посуды, пробирок, колб,
чашек Петри и пипеток. Для этой цели используют сухожаровые шкафы (печи Пастера), в который
необходимый эффект достигается при температуре 160 градусов в течение 2 часов или при
температуре 170 градусов в течение 40 минут.
Принципиальные преимущества сухого жара заключаются в том, что при его применении не происходит
коррозии металлов и инструментов, не повреждаются стеклянные поверхности. Он пригоден для
стерилизации порошков и не содержащих воды нелетучих вязких жидкостей.
Стерилизация паром под давлением – один из наиболее эффективных методов, основанный на
сильном гидролизирущем действии насыщенного пара. Паром под давлением стерилизуют
различные питательные среды (кроме содержащих нативные белки): жидкости, приборы, резиновые
предметы, стеклянную посуду с резиновыми пробками. Для этого применяют автоклавы.
Питательные среды, перевязочные материалы и белье стерилизуют при 1атм 15-20 минут, питательные
среды с углеводами – при 0,5атм 15 минут, а патогенный материал обеззараживают при 2атм.
12. Использование реакций Аг+Ат (РА, РИГА, РП) для идентификации бактерий
РА. Проводят на предметных стеклах. Для этого на обезжиренное стекло наносят пастеровской
пипеткой несколько капель сыворотки в небольших (1:10 – 1:20) разведениях и каплю ИХН для
контроля. Для идентификации в каждую каплю сыворотки, а также в каплю контроля вносят петлю
суточной культуры испытуемого микроорганизма, взятой с поверхности плотной питательной среды.
Для выявления АТ в исследуемой сыворотке крови в нее, как и в каплю ИХН, пастеровской пипеткой
вводят по 1 капле взвеси известных микроорганизмов (диагностикума). Внесенную культуру
тщательно перемешивают до получения суспензии.
Реакция происходит при комнатной температуре. Результаты реакции учитывают невооруженным
глазом через 2-5 минут, иногда для этого используют лупу. Если предметные стекла поместить во
влажную камеру, что бы исключить испарение капель, то результаты реакции можно учитывать и
При положительной реакции в капле сыворотки отмечают появление хлопьев (крупных и мелких),
хорошо видимых на темном фоне при покачивании предметного стекла. При отрицательной реакции
жидкость остается равномерно мутной, как и в контроле.
РНГА. Применяется для идентификации бактериальных и вирусных аг а исследуемом материале, а так
же для экспресс-диагностики ряда инфекций.
В данной реакции эритроциты сенсибилизируют антителами. Частицы антительного эритроцитарного
диагностикума склеиваются при добавлении аг.
Готовят двукратные разведения исследуемого материала в стабилизирующем растворе. Вносят по одной
капле каждого разведения аг в три соседние лунки планшета (реакция занимает три параллельных
ряда лунок). В каждую лунку первого ряда вносят по 1 капле стабилизирующего раствора, второго
ряда – по одной капле гомологичной иммунной сыворотке, третьего ряда – по 1 капле
гетерологичной иммунной сыворотке. Второй и третий ряды служат контролем специфичности
реакции. Смесь оставляют на 20 минут при комнатной температуре. Затем во все лунки добавляют по
1 капле 1% суспензии эритроцитарного антительного диагностикума и тщательно встряхивают
планшеты. Результаты реакции учитывают через 30-40 минут. При наличии специфического аг
гемагглютинация наблюдается в первом и третьем рядах и отсутствует во втором ряду, где аг
предварительно нейтрализован гомологичной сывороткой. Реакцию сопровождают контролями
сенсибилизированных эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации.
РП (реакция кольцепреципитации). В узкую пробирку (диаметр 0,5см) наливают 0,3-0,5мл
неразведенной преципитирующей сыворотки. Пастеровской пипеткой медленно наслаивают по
стенке (пробирку держат наклонно) аг в таком же объеме. Затем пробирку осторожно, что бы не
смешать жидкости, ставят вертикально. При правильном наслоении аг на сыворотку четко видна
граница между двумя жидкостями. РП должна обязательно сопровождаться контролем аг и
сыворотки. Результаты учитывают в зависимости от вида микроорганизма через 5-10 минут, 1-2
часа, 20-24 часа. В случае положительной реакции в случае в пробирке на границе между сывороткой
и исследуемым материалом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.
РП (реакия преципитации в геле). Основана на взаимодействии гомологичных аг и ат в агаровом геле
с образованием видимых полос преципитации. Аг и ат в результате встречной диффузии в гель
образуют макромолекулярные иммунные комплексы, регистрируемые визуально.
В застывшем агаре вырезают лунки, удаляя из них гель пастеровской пипеткой. В одни лунки вносят ат,
в другие – аг. И оставляют во влажной камере на несколько дней. Учитывая результаты реакции,
сравнивают локализацию и характер линий преципитации возле опытных лунок и контрольной тест-
14. Использование реакций Аг+Ат с мечеными компонентами (РИФ, ИФА, РИА) для
ИФ. Основана на использовании флюоресцеинизотиоционата или других флюорохромов, химически
связанных с ат. При этом меченные ат сохраняют свою иммунологическую специфичность. И
вступают во взаимодействие со строго определенными корпускулярными аг. Комплексы аг и
меченными ат можно легко определить по интенсивному желто-зеленому свечению при изучении
препарата в люминисцентном микроскопе.
Прямая РИФ ставится следующим образом: препарат окрашивается специфической меченой
антисывороткой во влажной камере 30 минут при 25 градусах.
Непраямая РИФ проводится в 2 этапа с использованием двух различных антисывороток. В начале
применяют немеченые ат против искомого аг, а на втором этапе образовавшийся комплекс ат-аг
обрабатывают люминесцирующей антисывороткой, содержащей меченые ат против гамма-глобулина
того вида животного, на котором была получена немеченая антисыворотка, использованная на
ИФА. Метод основан на использовании для метки ат ферментов, способных разгалать субстрат и
приводить к образованию окрашенных продуктов. Коъюшированные с ферментом ат сохраняют
способность соединяться с гомологичными аг. Интенсивность окраски хромогена соответствует
количеству образовавшихся комплексов аг-ат+фермент. В качетве ыерментов чаще всего используют
пероксидазу, щелочную фосфотазу. Субстратом для пероксидазы служит перекись водорода, а
хромогеном 5-аминосалициловая кислота и другие вещества.
В настоящее время в микробиологии используется твердофазная модификация ИФА. Ее суть
заключается в том, что в начале на каком-либо твердом материале сорбируют аг (или ат) и лишь
после этого добавляют остальные ингредиенты реакции.
Определение неизвестных аг состоит из следующих этапов:
1. Связывание ат, специфичных для искомого аг. С пластиком лунки планшета;
2. Внесение антигенсодержащего материала;
3. Внесение 2-х антител той же специфичности;
4. Внесение коъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки);
5. Внесение хромогенного субстрата;
РИА. Аг илил ат для РИА метят радиоизотопом. Чаще всего 125I. Реакция РИА очень чувствительна,
позволяет определить 1-2нг и меньше исследуемого материала.
Чаще всего применяется радиофазная модификация РИА (суть такая же, как и ИФА). Применяют три
метода твердофазной РИА: конкурентный, обратный и непрямой.
При конкурентном методе на поверхности сорбента сорбируют известные ат. Затем в лунки вносят
исследуемый аг и спустя определенное время, достаточное для специфического взаимодействия,
добавляют меченый радиоизотопом очищенный аг той же специфичности.
Если в исследуемом материале содержится аг, соответствующий иммобилизированым ат, чатсь
активных центров последних блокируется. В таком случае внесенный в лунки меченый аг будет в
меньшей степени (в сравнении с контролем) соединяться с ат, о чем можно судить по радиоактивной
жидкой части реагирующей смеси.
При проведении РИА обратным методом на поверхности лунок сорбируют очищенный немеченый аг,
гомологичный исследуемому аг. В отдельной пробирке соединяют антигенсодержащий материал с
меченвми ат, специфичными с аг, иммобилизированными в лунках. Если в исслудемомо материале
модержится аг, способный взаимодействовать и мечеными ат, активные центры последних
полностью или частично блокируются. В таком случае при внесении в лунки с аг смеси, меченые ат
буду не полностью взаимодействовать с аг, о чем можно судить по степени радиоактивности
жидкости в сравнении с контролем.
Наиболее удобным является непрямой метод РИА с использованием антивидовых меченых ат. Метод
может использован для идентификации неизвестных аг и ат. В обоих случаях применят антивидовую
сыворотку, содержащих ат против соответствующих гамма-глобулинов.
Для проведения этого метода на поверхности лунок сорбируют аг, а затем добавляют разведенную
сыворотку больного. При наличии в ней соответствующих ат на поверхности лунок формируется
комплекс ат-аг. При последующем введении в лунку антивидовой меченой сыворотки ат,
содержащиеся в ней, адсорбируются на образовавшемся комлексе. Чем больше в сыворотке больного
ат, тем больше удет связанной с поверхностью лунок радиоактивной метки.
15. Использование реакций Аг+Ат с мечеными компонентами (РИФ, ИФА, РИА) для обнаружения
антител в сыворотке крови.
ИФА. Определение неизвестных ат включает несколько этапов:
1. Связывание известного аг с пластиком лунки планшета;
2. Внесение испытуемой сыворотки
3. Внесение конъюгата (меченой ферментом антиглобулиновой сыворотки);
4. Внесение хромогенного субстрата;
Остальные реакции по сути такие же.
1. Брюшнотифозная моновакцина и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном –
комплексный препарат, состоящих из бактерий (инактивированных) и Vi-антигена S.Typhi, который
выполняет роль растворителя. Применяется по эпидемическим показаниям.
2. Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и
Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной
профилактики и лечения у детей.
3. Колибактерин. Содержит лиофильно высушенные живые клетки E. Coli штамма М17. Обладает
выраженными антагонистическими свойствами в отношении ряда патогенных кишечных бактерий.
Применяют для нормализации кишечной микрофлоры.
4. Холерная вакцина. Взвесь равных количеств холерных вибрионов сероваров Огава и Инаба,
классических или эльтор биоваров. Вакцина вводится подкожно взрослым и детям по эпидемическим
5. Ботулинический трианатоксин адсорбированный очищенный. Экзотоксины С.botulinum (серотипы А,
В и Е) обезвреживают формалином при нагревании, затем очищают от балластных веществ.
Применяют подкожно в возрасте от 16 и 60 лет.
1. Коклюшная вакцина. Содержит взвесь В.Pertussis в I фазе, убитых формалином. Применяют для
обязательной активной специфической профилактики коклюша. Входит в совтав АКДС.
2. Иммуноглобулин нормальный человеческий. Получен из плацентарной или венозной крови
человека. Содержит специфические антитела против возбудителей многих инфекционных
заболеваний, в том числе возбудителей коклюша. Применяют у детей для экстренной профилактики.
3. Дифтерийный адсорбированный очищенный анатоксин. Обезвреживают формалином при
нагревании, очищают от балласта. Входит в состав АКДС.
4. Противодифтерийная антитоксическая сыворотка.
5. АКДС – коклюшно-столбнячная адсорбированная жидкая вакцина, состоит из взвеси убитых
коклюшных микробов и очищенных дифтерийного и столбнячного анатоксинов. Вводят
внутримышечно детям с трехмесячного возраста трехкратно с интервалом 30 дней, ревакцинация
6. Менингококковые вакцины. Вакцины А и А+С отечественного производства представляет собой
капсульные специфические полисахариды менингококков соответствующих серогрупп. Выпускается
в сухом виде в ампулах. Препарат вводят детям от 1 года и взрослым однократно подкожно.
7. Поливалентная пневмококковая полисахаридная вакцина Пневмовакс 23. Смесь очищенных
капсульных полисахаридов 23 наиболее часто встречающихся серотипов пневмококка. Выпускается
о флаконах, содержащих одну дозу вакцины.
8. Вакцина БЦЖ. Живая лиофильно высушенная в 1,5% растворе глютамата натрия культура
авирулентного штамма M. Bovis BCG. Применяется однократно внутрикожно у новорожденных,
последующие ревакцинации в возрасте 6-7 и 14-15 лет при отрицательной пробе Манту.
1. Чумная живая сухая вакцина. Высушенная живая культура штамма EV. Используется однократно по
2. Туляремийная живая сухая накожная вакцина. Высушенная живая культура штамма F.tularensis
применяетс однократно накожно и внутрикожно детям с 7 лет, ревакцинация через 5 лет.
3. Бруцеллезная лечебная вакцина. Взвесь убитых нагреванием бруцелл.
4. Сибиреязвенная живая вакцина СТИ. Высушенная взвесь живых спор авирулентного бескапсульного
штамма В. Anthracis. Применяют двукратно с интервалом 21 день.
5. Противосибиреязвенный иммуноглобулин.
6. Лептоспирный иммуноглобулин. Для лечения и профилактики.
7. Лептоспирная вакцина. Культуры основных сероваров лептоспир, убитых нагреванием.
8. Вакцина Е сыпнотифозная комбинированная живая сухая. Представляет собой риккетсии Провачека
авирулентного штамма. Для профилактики сыпного тифа у лиц в возрасте 16-60 лет. Иммунитет
развивается через 3-4 недели.
18. Использование иммунобиологических препаратов для специфической профилактики
1. Вакцина живая, очищенная аллантоисная сухая. Готовят из аллантоисной жидкости куриных
эмбрионов, зараженных вакцинными штаммами гриппа. Применяют для профилактики гриппа.
2. Убитые гриппозные вакцины. Инактивированные формалином цельные вирионы вакцинного штамма
гриппа, выращенного в культуре клеток. Получают ежегодно на основе данных эпидемиологического
3. Лечебно-профилактическая поливалентная гриппозная сыворотка. Получена путем
гипериммунизации лошадей вирусом гриппа разных серотипов. Выпускают в виде смеси с
4. Живая ослабленная коревая вакцина. Аттенуированный штамм вируса кори Л-16. Изготавливают при
выращивании вакцинного штамма на культуре клеток эмбриона перепела.
5. Иммуноглобулин человеческий противокоревой. Получают из крови серопозитивных здоровых
доноров. Применяют для создания пассивного иммунитета.
6. Живая ослабленная краснушная вакцина. Содержит аттенуированный штамм вируса краснухи.
Вводят парентерально детям в 12 месяцев, ревакцинация в 6 лет.
1. Пероральная живая вакцина против полимиелита. Содержит ослабленные штаммы вирусов
полиомиелита 1, 2 и 3 типов. Выпускается в жидком виде. Применяют с трехмесячного возраста.
2. Парентеральная вакцина против полимиелита. Содержит инактивированные вирусы 1-3 типов.
Вводится подкожно или внутримышечно с трехмесячного возраста.
3. Вакцина гепатита А культуральная очищенная концентрированная.
гепатита А. выращенных на культуре клеток.
1. Плазменная вакцина против гепатита В. Готовят путем инактивации вируса, содержащегося в плазме
доноров-носителей вируса. В России не применяется.
2. Генно-инженерные вакцины против гепатита В. Готовят путем встраивания гена вируса в дрожжевые
клетки. После завершения процесса дрожжи выделяют белок Hbs-Ag, который очищают.
1. Инактивированная культуральная вакцина против клещевого энцефалита. Состоит из
специфического антигена вируса энцефалита, инактивированного формалином. Применяют для
профилактики по эпидемическим показаниям. Вакцина проводится в возрасте 4-65 лет и состоит из
2. Иммуноглобулин против клещевого энцефалита из сыворотки лошадей, жидкий.
3. Живая антирабическая вакцина Ферми. Изготавливается из мозга овец, зараженных
аттенуированным вирусов бешенства. Вакцину вводят людям, укушенными подозрительными
4. Вакцина культуральная инактивированная сухая антирабическая. Получают путем инактивации
ультрафиолетом вирусов, выращенных на культуре клеток. Вводят подкожно или внутримышечно.
Схема применения зависит от укуса.
5. Иммуноглобулин антирабический. Получают путем гипериммунизации лошадей фиксированным
вирусом. Применяют для создания пассивного иммунитета для профилактики бешенства.
19. Использование иммунобиологических препаратов для диагностики бактериальных инфекций.
1. Сальмонеллезные групповые. Адсорбированные и монорецепторные О- и Н- агглютинирующие
диагностические сыворотки. Применяют для серотипирования в РА.
2. Эритроцитарные диагностикумы для РНГА: комплексный эритроцитарный диагностикум группы
АВСДЕ, брюшнотифозный эритроцитарный О9 диагноститум.
3. Агглютинирующие ОВ-сыворотки против патогенных кишечных палочек. Получают путем
иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующего серовара и применяют в РА.
4. Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл. Различают групповые и
моновалентные сыворотки. Получают путем иммунизации кроликов определенными сероварами.
5. Эритроцитарные диагностикумы Флекснера и Зонне для постановки РНГА с целью ретроспективной
диагностики. Диагностические титры при дизентерии Флекснера 1:200 и дизентерии Зоне 1:100.
6. Противохолерная агглютинирующая О-сыворотка, типовые сыворотки Огава и Инаба. Получены из
крови кроликов, иммунизированных вибрионами.
1. Агглютинирующие адсорбированные (факторные) сыворотки. Применяют для серологической
дифференциации возбудителей коклюша.
2. Агглютинирующая противодифтерийная сыворотка. Применяют для дифференциации дифтерии от
3. Диагностикум корпускулярный коклюшный, применяется в РСК с парными сыворотками,
полученными от больного на 2-3 неделе заболевания для определения нарастания титра антител в 4 и
4. Эритроцитарный менингококковый диагностикум для определения антител в РНГА,
диагностический титр 1:200.
5. Стандартные агглютинирующие сыворотки для определения серогрупп менингококков.
1. Бруцеллезный единый диагностикум. Взвесь убитых бруцелл, окрашенных метиленовым синим.
Применяется для серодиагностики бруцеллеза в РА.
2. Туляремийный диагностикум. Взвесь убитых бактерий. Применяется для постановки РА при
4. Сибиреязвенный бактериофаг.
5. Антраксин. Белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, извлеченный при гидролизе
микроорганизма. Применяется для постановке кожно-аллергической пробы.
1. Диагностические стафилококковые фаги. Набор специфических фагов для фаготипирования
2. Антигены для реакции Вассермана
. Специфический антиген из тканевых трепонем, разрушенных ультразвуком
. Неспецифический кардиолипиновый антиген – высокоочищенный экстракт бычьего сердца,
имеющий постоянный химический состав липидов, смешанный в определенных пропорциях с
3. Гонококковый антиген. Взвесь убитой культуры гонококка. Применяется для постановки РСК.
20. Использование иммунобиологических препаратов для диагностики вирусных инфекций.
1. Типоспецифические гриппозные сыворотки. Применяют для серотипирования вирусов в РТГА,
2. Типоспецифические парагриппозные сыворотки.
3. Сухие типоспецифические диагностикумы (гриппозный, парагриппозный, аденовирусный).
Применяются для диагностики соответствующих инфекций.
4. Диагностикумы из вирусов кори, краснухи, эпидемического паротита для выявления ат и РСК,
1. Диагностические поливалентные и типоспецифические полиомиелитные сыворотки.
2. Диагностические поливалентные и типоспецифические сыворотки к вирусам Коксаки.
1. Стандартная диагностическая сыворотка анти-Hbs. Получена из крови переболевших гепатитом
2. Стандартный HBs аг. Применяют для серодиагностики вирусного гепатита В в реакции ИФА.
3. Диагностикум эритроцитарный для определения антител к Нве-антигену. Применяют в РНГА.
1. Диагностикум из вируса клещевого энцефалита. Применяют для диагностики.
2. Диагностические эталонные типоспецифические сыворотки против вируса энцефалита.
3. Тест-системы для выявления вирусов бешенства в РИФ.
21. Постановка и учет внутрикожных аллергических проб
Для диагностики ряда инфекционных заболеваний вспомогательным методом является аллергический,
основанный на введении аллергенов в виде прозрачных бесцветных жидкостей, полученных путем
гидролиза микробных масс в кислой среде. В основе лежит повышенная чувствительность
макроорганизма к возбудителям или его токсинам. Они специфичны, просты и доступны в любых
условиях и применяются при таких заболеваниях, как бруцеллез, туляремия, сибирская язва,
Аллергены в количестве 0,1-0,2мл туберкулиновым шприцом вводятся внутрикожно на ладонной
поверхности предплечья, после предварительной дезинфекции кожи спиртом. При правильном
внутрикожном введении на месте инъекции образуется беловатый, плотный и четко очерченный
пузырек в виде лимонной корочки и исчезавший не ранее, чем через10-15 минут.
Оценку внутрикожной аллергической пробы необходимо осуществлять через 24 и 48 часов после
Различают следующие реакции:
. Резко положительные, при которых инфильтрат более 6см в диаметре, имеется повышение
температуры тела, регионарный лимфаденит;
. Положительные, инфильтрат 3-6см, общая реакция отсутствует;
. Слабо положительная, инфильтрат 1-3см;
. Сомнительная, инфильтрат менее 1см;
Реакция считается отрицательной, если после введения аллергена появляется покраснение кожи без
отека, исчезающее обычно через 3 часа.
Аллергические пробы становятся положительными одновременно с серологическими реакциями или
несколько раньше и сохраняются длительное время у переболевших инфекционными заболеваниями
источник