Серологическая диагностика брюшного тифа рнга

Лабораторная диагностика брюшного тифа включает общеклинические методы исследования и специфические реакции. В результате комплексного обследования специалист сможет сделать заключение о тяжести заболевания, свойствах возбудителя (в том числе и чувствительности к антибиотикам), степени опасности пациента для окружающих (его заразности). Все необходимые исследования проводятся в начале болезни (при поступлении пациента в стационар) и перед выпиской. При необходимости анализ на брюшной тиф повторяется несколько раз.

Ваш ребенок постоянно болеет?
Неделю в садике (школе), две недели дома на больничном?

В этом виновато много факторов. От плохой экологии, до ослабления иммунитета ПРОТИВОВИРУСНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ!
Да-да, вы не ослышались! Пичкая своего ребенка мощными синтетическими препаратами вы, порой, наносите больше вреда маленькому организму.

Чтобы в корне изменить ситуацию, необходимо не губить иммунитет, а ПОМОГАТЬ ЕМУ.

Есть еще один важный нюанс: дифференциальная диагностика брюшного тифа и паратифов возможна только на основании специфического лабораторного обследования. Ни клинические детали, ни общеклинические методы диагностики не позволяют отличить возбудитель брюшного тифа от возбудителей паратифов А, С или В. Эта информация может иметь существенное значение с точки зрения возможного заражения окружающих, а также формирования только типоспецифического иммунитета.

Где сдать анализ с целью диагностики брюшного тифа? Этот вопрос не должен беспокоить пациента, так как современные медицинские протоколы подразумевают обязательную госпитализацию больных с таким предварительным диагнозом. В крупных медицинских учреждениях (или в пределах одного города) функционирует многопрофильная лаборатория, сотрудники которой смогут сделать все необходимые специфические и неспецифические исследования для полноценной диагностики брюшного тифа и паратифов.

Универсального ответа на вопрос, через сколько дней пациент будет знать точный диагноз, не существует. Для проведения неспецифических исследований требуется только один день, результат специфических реакций придет только на 4-5 сутки или даже больше.

Выявление возбудителя брюшного тифа и паратифов является главным направлением комплексного обследования не только больного, но потенциальных носителей (здоровых людей, выделяющих возбудитель и заражающих окружающих). Результаты такого обследования заносятся в санитарную (медицинскую) книжку человека (декретированная специализированная группа), работающего в пищевой отрасли, в детских учреждениях и некоторых других предприятиях.

Для проведения различных диагностических тестов у больного (носителя) берут следующие биологические жидкости:

Необходимость взятия той или иной биологической среды пациента определяется лечащим доктором. С другой стороны, действовать нужно достаточно быстро, так как назначенные антибиотики снижают эффективность микробиологической диагностики брюшного тифа – биологические жидкости нужно брать до начала лечения.

Стандартные процедуры, такие как общеклинический анализ крови и мочи, в данном случае действительно имеют диагностическую ценность, так как выявленные изменения очень характерны.

В общем анализе крови при тифо-паратифозных заболеваниях выявляются:

• лейкоцитоз в первые 1-2 дня, который сменяется лейкопенией;
• нехарактерные для бактериальной инфекции лимфоцитоз, тромбоцитопению, анэозинофилию;
• в тяжелых случаях может наблюдаться панцитопения (угнетение функции всех кровяных ростков);
• выявление эозинофилов в период выздоровления пациента является прогностически благоприятным признаком в течении болезни.

Многим знакомы эти ситуации:

• Как только начинается сезон простуд — ваш ребенок обязательно заболевает, а потом и вся семья.
• Вроде бы покупаете дорогие препараты, но они действуют только пока их пьешь, а через неделю-две малыш заболевает по-новой.
• Вы переживаете, что иммунитет вашего ребенка слабый, очень часто болезни берут верх над здоровьем.
• Боитесь каждого чиха или покашливания.

Необходимо укреплять ИММУНИТЕТ ВАШЕГО РЕБЕНКА!

В общеклиническом анализе мочи выявляются традиционные изменения (повышение уровня лейкоцитов, эритроцитов), типичные для выраженной интоксикации.

При проведении общеклинического исследования кала (копрограмма) могут быть выявлены эритроциты, что свидетельствует о наличии незначительного кишечного кровотечения. Наряду с копрограммой принято назначать еще исследование кала на скрытую кровь, чтобы исключить диагностическую ошибку и своевременно диагностировать кровотечение.

В случае тифо-паратифозных заболеваний биохимические показатели исследуются только с целью выявления выраженных нарушений функций внутренних органов, например, при развитии специфического гепатита или пиелонефрита.

Микробиологическая диагностика брюшного тифа является основанием для постановки окончательного диагноза и дальнейших противоэпидемических действий. При обследовании особых групп населения (декретированная группа) отметка об отрицательном результате исследования крови на брюшной тиф для санкнижки является допуском к рабочему месту. Специфический анализ на брюшной тиф включает бактериологическое и серологическое исследования.

Предполагает взятие биологического материала от больного и последующий посев на специальные питательные среды (чаще всего – желчный бульон). Изучение морфологических, биохимических и многих других свойств микроорганизма позволяют со 100% точностью идентифицировать его. Кроме того, современная микробиология предусматривает такой обязательный этап как антибиотикочувствительность, без которой существенно затрудняется процесс эффективной противомикробной терапии.

Кровь на брюшной тиф лучше сдавать в первую неделю болезни. Положительный анализ крови на брюшной тиф, то есть положительная гемокультура – это абсолютное подтверждение диагноза. Обнаружение тифозной сальмонеллы в моче и каловых массах может наблюдаться в одинаковой степени у больного человека и носителя, то есть требуются другие дополнительный исследования.

Основой множества реакций, реализующих серологический метод исследования, является соединение известного антигена (брюшнотифозного) и антител, которые синтезируются в крови больного. Серологическая диагностика брюшного тифа — это реакция Видаля, реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), при необходимости – реакция с Vi – антигеном.

Реакция Видаля – это модификация реакции агглютинации, диагностическая ценность заключается в нарастании титра антител по мере течения заболевания. Эта реакция может быть ложноположительной при других сальмонеллезах, поэтому требуется и другая серодиагностика брюшного тифа. Например, более специфична РНГА с различными антигенами. Некоторые лаборатории проводят РПГА – реакцию пассивной агглютинации антител известными антигенами.

При подозрении на брюшной тиф диагностика специфическая позволяет подтвердить или опровергнуть диагноз этого инфекционного заболевания, а также, возможно, выяснить, откуда появилась эта инфекция.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Брюшной тиф диагностируют на основании длительной лихорадки, головной боли, нарастающей интоксикации с развитием тифозного статуса, типичных изменений языка, появления метеоризма, розеолёзной сыпи, гепатоспленомегалии и изменений периферической крови.

Лабораторная диагностика брюшного тифа основана на обнаружении возбудителя в биоматериале и специфических антител в крови больного. Решающее значение имеет обнаружение возбудителя в крови (гемокультура), моче (уринокультура), испражнениях (копрокультура), жёлчи (биликультура), а также в костном мозге, спинномозговой жидкости, розеолах, гное или экссудате.

В практической работе для ранней диагностики брюшного тифа наибольшее значение имеет гемокультура, которую следует проводить на протяжении всего лихорадочного периода. Кровь из вены в количестве 5-10 мл засевают во флакон с 50-100 мл 10-20% жёлчного бульона (лучшие результаты даёт посев в трипсин-соевый бульон). Положительные результаты гемокультуры чаще получают при посевах крови на первой неделе заболевания, когда бактериемия наиболее выражена. Со второй недели болезни брюшнотифозные палочки можно обнаружить в посевах кала, мочи и дуоденального содержимого. Наиболее высокий процент выделения палочек брюшного тифа получают при посевах костного мозга. В целом бактериологическое подтверждение диагноза брюшного тифа удаётся получить у 80-90% больных.

Серологические методы позволяют обнаружить специфические антитела в крови или антигены в биосубстрате. В практической работе чаще всего применяют реакцию Видаля и РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с использованием эритроцитарных О-, Н- и Vi-антигенов. Реакция Видаля основана на обнаружении специфических О- и Н-антител-агглютининов в крови больного с помощью соответствующих антигенов. Положительные результаты можно получить с 8-9 сут болезни. Реакция Видаля может быть положительной у привитых и перенёсших брюшной тиф, поэтому решающее значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания. Для более точного выявления специфических иммунных сдвигов в крови больного реакцию Видаля следует повторять с О- (IX и XII) и Н-монодиагностикумами для исключения перекрёстных реакций с сальмонеллами других групп.

Более специфичны и чувствительны РНГА с эритроцитарными О- и Vi-антигенами и реакция Vi-гемагглютинации. Эти реакции используют для ранней диагностики брюшного тифа. В РНГА концентрация О-антител нарастает в динамике заболевания, а титры Vi-антител существенно не меняются. Реакция Vi-гемагглютинации имеет наибольшее значение при обследовании лиц, подозрительных на брюшнотифозное носительство.

Серологические реакции на обнаружение специфических антител в крови больного следует ставить с 4-5-го дня болезни, а затем на 2-3-й нед и позднее. Диагноз брюшного тифа считают серологически подтверждённым при титре антител 1:200 и выше или при нарастании титра антител в 2-3 раза в динамике заболевания. При оценке серологических реакций важно учитывать, что нарастание титров специфических О-антител свидетельствует об остром инфекционном процессе, а наличие только Н- или Vi-антител — о перенесённом ранее брюшном тифе или бактерионосительстве.

Для серологической диагностики бактерионосительства и вакцинальных реакций предложено раздельное определение специфических антител, относящихся к IgM и IgG в ИФА. Выявление специфических брюшнотифозных IgM указывает на текущий инфекционный процесс, а изолированное обнаружение специфических антител, относящихся к классу IgG, — о вакцинальной природе антител или перенесённом ранее брюшном тифе.

Дифференциальная диагностика брюшного тифа

В практической работе брюшной тиф у детей чаще приходится дифференцировать с тифоподобной формой сальмонеллёза, паратифами, инфекционным мононуклеозом, лимфогранулематозом, иерсиниозом, малярией, а в начальном периоде — с гриппом, энтеровирусной инфекцией и острой кишечной инфекцией другой этиологии.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19]

источник

Тема: Серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и В. Сальмонеллы – возбудители острых гастроэнтеритов.

Цель: Освоение методов микробиологической диагностики сальмонеллезов и серологической диагностики брюшного тифа и паратифов А и В.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема занятия 25. Серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и В. Сальмонеллы – возбудители острых гастроэнтеритов.

Сальмонеллез – острая кишечная инфекция. характеризующаяся преимущественным поражением желедочно-кишечного тракта, возбудителями которой являются многочисленные бактерии рода Salmonella (кроме S. typhi, S, paratyphi A, S. schottmuelleri).

Таксономическое положение и свойства. см. в методичке 26.

Морфология и тинкториальные свойства.

Эпидемиология. Основной источник заболевания – животные, преимущественно домашние и птицы. Реже источниками заболевания являются люди – больные и носители. Механизм заражения – фекально-оральный. Основной путь передачи инфекции – пищевой. Факторами передачи могут быть не только мясо животных и птиц, инфицированное при жизни животного либо при его обработке, но и яйца. Наиболее восприимчивы к заболеванию люди со сниженным иммунным статусом (в том числе грудные дети) и больные, получающие антибиотики. Подъем заболеваемости наблюдается летом.

Патогенез. Сальмонеллы проникают в организм через рот, достигают тонкого кишечника, где и развертывается патологический процесс. Бактерии благодаря факторам адгезии прикрепляются к слизистой оболочке, проникают в ее глубокие слои, где захватываются макрофагами. Сальмонеллы размножаются и погибают с освобождением эндотоксина, который, помимо общей интоксикации, вызывает диарею и нарушение вводно-солевого обмена. Находящаяся в нормальном состоянии микрофлора кишечника в значительной мере препятствует накоплению сальмонелл. В некоторых случаях (при снижении иммунного статуса и высокой вирулентности возбудителя) возможно развитие бактериемии и поражение костей, суставов, мозговых оболочек и других органов.

Клиническая картина. Инкубационный период равен в среднем 12-24 часа. Заболевание характеризуется повышением температуры, тошнотой, рвотой, поносом, болью в животе. Как правило, продолжительность болезни составляет 7 дней. но в некоторых случаях наблюдается молниеносная токсическая форма, приводящая к смерти больного.

Иммунитет после перенесенного заболевания сохраняется менее года.

Микробиологическая диагностика. Основной материал для исследования — рвотные массы, испражнения, промывные воды желудка. Применяют бактериологический и серологический (РА, РПГА) методы диагностики.

Лечение сальмонеллеза заключается в промывании желудка, диете, введении жидкостей для нормализации вводно-солевого обмена. Антибиотики при формах средней тяжести и легких не назначают, т.к. их применение приводит к дисбактериозу и в результате более длительному течению болезни; кроме того, очень велико число антибиотикорезистентных сальмонелл.

Профилактика неспецифическая — санитарно-гигиенические мероприятия, заключающиеся, в частности, в правильной кулинарной обработке мяса и яиц.

Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов А и В.

Для постановки диагноза применяется реакция агглютинации Видаля, основанная на обнаружении в сыворотке крови людей агглютининов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Особенности реакции заключаются в том, что реакция ставится одновременно с 4 разными диагностикумами (антигенами): ОН-диагностикум брюшного тифа, О-диагностикум брюшного тифа, ОН-диагностикум паратифа А и ОН-диагностикум паратифа В. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни, т.к. содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела накапливаются в разгвр заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени.

Это помогает дифференцировать острую стадию заболевания и «прививочную» или анамнестическую реакции.

У больных брюшным тифом в сыворотке крови определяются О- и Н-антитела, а в сыворотке крови людей, перенесших брюшной тиф или вакцинированных против него, сохраняются только Н-антитела.

Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации (РПГА), с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотке крови людей, появляющиеся только к концу заболевания, но постоянно обнаруживающиеся у носителей брюшного тифа.

Ознакомиться с биологическими свойствами и классификацией представителей семейства Salmonella.

Описывать патогенез сальмонеллезов.

Изучить методы микробиологической диагностики сальмонеллезов.

Ознакомиться с методами серологической реакции брюшного тифа, паратифов А и В.

Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии брюшного тифа, паратифов А и В.

Трактовать результаты бактериологического и серологического исследования.

Проводить дифференциацию сальмонелл – возбудителей сальмонеллезов.

Забирать материал для исследования от больных сальмонеллезами.

Выделять чистые культуры сальмонелл.

Трактовать результаты бактериологического и серологического исследования.

Сальмонеллы – возбудители пищевых токсикоинфекций.

Антигенная структура, факторы патогенности.

Патогенез и иммуногенез заболеваний. Бактерионосительство.

Методы микробиологической диагностики сальмонеллезов.

Специфическая профилактика и лечение сальмонеллезов.

Практические задания, выполняемые на занятии:

Выделение чистой культуры S. typhi :

Изучение посевов «фекалий» больного брюшным тифом на среде Ресселя.

Проверка чистоты культур: приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопия и зарисовывание.

Пересев чистой культуры на среду Гиса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации выделенной чистой культуры.

Микроскопия демонстрационных микропрепаратов чистых культур S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis.

Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения методов микробиологической диагностики сальмонеллезов и серологической диагностики брюшного тифа, паратифов А и В. Далее студенты знакомятся с правилами забора материала от больных сальмонеллезами для бактериологического и серологического исследования. Потом продолжают выделение чистой культуры S. typhi :

Изучение посевов «фекалий» больного брюшным тифом на среде Ресселя.

Проверка чистоты культур: приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопия и зарисовывание.

Пересев чистой культуры на среду Гиса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации выделенной чистой культуры.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных микропрепаратов чистых культур S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis и зарисовывают их в протокол.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

источник

Реакция Видаля. Со второй недели заболевания в крови больных накапливаются антитела против возбудителя инфекции. Для их выявления исследуют сыворотку крови больного в реакции агглютинации. В качестве антигена используют убитые культуры сальмонелл — диагностикумы.

Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида.

Кровь (2-3 мл) из мякоти пальца или локтевой вены собирают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию. В лаборатории пробирку ставят в термостат на 20-30 мин для образования сгустка, затем пастеровской пипеткой обводят сгусток, чтобы отделить от стенки пробирки, и ставят на 30-40 мин на холод. Отделившуюся сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции агглютинации с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифов. Для получения сыворотки кровь можно отцентрифугировать.

При возникновении инфекционного процесса — брюшного тифа или паратифов — в организме вырабатываются О- и Н-антитела к одноименным антигенам возбудителя.

О-антитела появляются первыми и исчезают довольно быстро. Н-антитела сохраняются долго. То же самое происходит и при вакцинации, поэтому положительная реакция Видаля с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших (анамнестическая реакция), и у привитых (прививочная). Исходя из этого, реакцию Видаля ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы).

Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В.

Реакцию Видаля широко используют, так как она проста и не требует специальных условий.

Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным (см. главу 12). В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки (табл. 36).

Таблица 36. Возможный результат реакции агглютинации

Примечание. В практике реакцию Видаля ставят с четырьмя диагностикумами: брюшного тифа «О» и «Н», а паратифов А и В — с диагностикумами «ОН».

Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки — 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. Таким образом, нарастание титра антител в сыворотке крови служит показателем заболевания.

В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей.

Реакция Vi-гемагглютинации. Это наиболее чувствительная реакция для выявления антител.

Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi-антиген и приобретают при этом способность агглютиниповаться соответствующими Vi-антителами.

Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами.

Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут:

1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; З) Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида.

Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в пластмассовых пластинах с лунками.

Кровь у больного берут так же, как для реакции Видаля. Получают сыворотку. Из сыворотки готовят двукратные серийные разведения, начиная с 1:10 до 1:160.

По 0,5 мл каждого разведения вносят в лунку и прибавляют по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Реакцию ставят в объеме 0,75 мл.

Контролем служат: 1) стандартная агглютинирующая монорецепторная сыворотка + диагностикум — реакция должна быть положительной до титра сыворотки; 2) диагностикум в изотоническом растворе натрия хлорида (контроль) — реакция должна быть отрицательной.

Содержимое лунок тщательно перемешивают, ставят в термостат на 2 ч и оставляют при комнатной температуре до следующего дня (на 18-24 ч).

Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума.

Результаты учитывают по четырехкрестной системе:

++++ эритроциты полностью агглютинированы — осадок на дне лунки в виде «зонтика»;

+++ «зонтик» меньше, не все эритроциты агглютинировались;

++ «зонтик» маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов;

— реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки.

1. В какой период заболевания ставят реакцию Видаля?

2. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции Видаля?

3. С какими диагностикумами ставят реакцию Видаля?

4. Какая из серологических реакций является самой чувствительной при диагностике тифопаратифозных инфекций?

5. Каким диагностикумом пользуются при постановке реакции Vi-гемагглютинации?

6. Какой сывороткой определяют наличие Vi-антигена у исследуемой культуры?

7. Какое значение имеет определение Vi-фаготипа?

Возьмите у преподавателя О- и Н-диагностикумы из сальмонелл тифа, паратифа А и паратифа В и сыворотку больного. Поставьте реакцию Видаля.

Питательные среды

Среды ЭМС, Плоскирева, висмут-сульфитный агар выпускаются медицинской промышленностью в виде сухого порошка. Их готовят согласно указаниям на этикетке: отвешивают определенное количество порошка, наливают соответствующее количество воды, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри.

Среда Рассела. В 950 мл дистиллированной воды добавляют 40 г сухой питательной среды и прибавляют 5 г питательного агара. Нагревают до кипения и растворения порошков. В 50 мл дистиллированной воды растворяют 1 г х. ч. глюкозы и добавляют к приготовленной смеси. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл, стерилизуют текучим паром (2 дня по 2 мин) и скашивают так, чтобы оставался столбик. Среду Рассела с маннитом и сахарозой готовят так же.

Среда Олькеницкого из сухого агара. 2,5 г сухого питательного агара расплавляют в 100 мл дистиллированной воды. В остуженный до 50° С агар прибавляют все ингредиенты, указанные в рецептуре (этикетке). Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют текучим паром (3 дня по 20 мин) и затем скашивают. Готовая среда должна быть бледно-розового цвета.

Дата добавления: 2016-11-22 ; просмотров: 493 | Нарушение авторских прав

источник

• Микробиологическая диагностика брюшного тифа и пара­тифов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: исходя из особеннос­тей патогенеза брюшного тифа, на 1-й неделе заболевания, в период бактериемии, возбудителей выделяют из крови (полу­чение гемокультуры), со 2-й недели заболевания — из испраж­нений (получение копрокультуры), мочи или желчи.

Бактериологическое исследование(схема 13.2.1).

Получение гемокультуры. В 1-й день из локтевой вены больного берут 5—10 мл крови и засевают в колбу с 50—100 мл селективной среды Раппопорт, содержащей желчный бульон (для подавления роста других бактерий), глюкозу, индикатор Андреде и поплавок для обнаружения газа. Указанные соотно­шения крови и среды необходимы для подавления бактерицид­ного действия белков крови. Посевы инкубируют при 37 «С в течение 18—20 ч. На 2-й день при росте сальмонелл наблюда­ется помутнение и изменение цвета среды. При росте парати­фозных бактерий (биовары paratyphi А, Си schottmuelleri) наряду с указанными изменениями появляются пузырьки газа в по­плавке. Для ускорения ответа из среды Раппопорт делают маз­ки и препараты «висячая» капля. При наличии чистой культу­ры грамотрицательных подвижных палочек и изменении цвета среды (или наличии газа) дают первый предварительный ответ. Затем культуру из среды Раппопорт пересевают в пробирку со средой Ресселя, полагая при этом, что из крови выделена чистая культура и можно сразу приступить к ее идентифика­ции. Одновременно со среды Раппопорт делают посевы на среду Эндо для получения изолированных колоний с целью проверки чистоты выделенной культуры.

На 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Рес­селя и ставят ориентировочную реакцию агглютинации на сте­кле. На основании полученных данных дают второй предвари­тельный ответ. Для дальнейшего исследования отбирают не­сколько бесцветных колоний со среды Эндо и пересевают их в среду Ресселя или скошенный питательный агар (для кон­троля полученных результатов). Чистую культуру пересевают на среды «пестрого» ряда и серотипируют в реакции агглюти­нации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с

адсорбированными монорецепторными О- и Н-сальмонеллез-ными сыворотками. Окончательный диагноз устанавливают на основании биохимических (табл. 13.2.1) и антигенных свойств.

Таблица 13.2.1. Биохимические свойства сальмонелл — возбудителей брюшного тифа и паратифов

Paratyphi А — КГ КГ — КГ — —
Schottmuelleri — КГ КГ — КГ + +

Условные обозначения: К — образование кислоты; КГ — образо­вание кислоты и газа; (+) — обнаружение признака; (—) — отсутствие признака.

Биохимические признаки (развернутый «пестрый» ряд) по­зволяют дифференцировать сальмонеллы от схожих сними энтеробактерий: Citrobacter, Hafnia (табл. 13.2.2).

Таблица 13.2.2. Дифференциация сальмонелл и других энтеробакте рий по биохимическим признакам

Citrobacter — К(-) К К К К(±) К(±) К
Hafnia + — — К К К(+) — К

Условные обозначения: (+) — положительная реакция; (—) — от­рицательная реакция; ± — вариабельная реакция; К — образование кисло­ты; К(—) — образование кислоты (редко); К(±) — образование кислоты (вариабельно).

Выделенную чистую культуру бактерий используют для оп­ределения чувствительности к антимикробным препаратам.

Фаготипирование. С помощью набора стандартных Vi-фагов определяют до 78 фаготипов S.enterica биовара typhi. При этом необходимым условием является наличие в культуре FZ-антигена. Культуры S.enterica биовара paratyphi В (schottmuel­leri) дифференцируются на11 фаготипов и подтипов.

Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо или Левина) или элективные среды обогащения (Мюллера, селени-

товая или висмут-сульфит агар). Для посева петлю фекалий вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию. После оседания крупных комочков сус­пензию петлей наносят на поверхность агаровой среды — на одну половину чашки. Материал тщательно растирают шпате­лем по одной, а затем по другой половине чашки для получе­ния изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18—20 ч. На 2-й день изучают характер колоний, выросших на чашках (рис. 13.2.1; на вклейке), пересевают 2—3 бесцветные колонии (со среды Эндо или Левина) или колонии черного цвета (висмут-сульфит агар) на среду Ресселя и в пробирки со скошенным питательным агаром. При отсутствии подозрительных колоний на чашках делают высевы из среды Мюллера или селенитовой среды на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Для ускорения ответа ста­вят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с ма­териалом, взятым из бесцветной колонии. Далее поступают так же, как и при идентификации гемокультуры.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый мате­риал, полученный из очага инфекции, используют для обнару­жения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаруже­ния соответствующих молекул можно поставить предваритель­ный диагноз.

Серодиагностика. Влабораторной практике широко приме­няют развернутую реакцию агглютинации Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей антител — агглюти­нинов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Реакцию ставят одновременно с четырьмя анти­генами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные монодиагностикумы при­меняют для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела появляются на 1-й неделе, накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются в разгар заболевания, накапливаются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. У людей, вакцинированных против брюшного тифа и парати-фов, также наблюдается положительная реакция Видаля, при­чем в довольно высоком титре, поэтому «инфекционный Ви-даль» удается отличить от «прививочного» только по нараста­нию титра агглютининов у больных в процессе заболевания. Реакцию Видаля ставят в четырех рядах пробирок по 7 проби­рок в каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные. Для контроля каждого диагностикума в пробирки вносят по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в который до­бавляют 2 капли диагностикума. В контрольной пробирке с

1 мл сыворотки (без диагностикума) не должно быть хлопьев. При спонтанной агглютинации реакция не учитывается. Диа­гностический титр реакции Видаля равен 1:200. Для серологи­ческого исследования реконвалесцентов и выявления бакте­рионосителей широко используют реакцию непрямой И-гемаг-глютинации, с помощью которой в сыворотке крови людей определяют присутствие антител к К/-антигену. В качестве антигена используют эритроцитарный Р?-диагностикум, пред­ставляющий собой взвесь эритроцитов человека 1(0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Fz’-антиге-ном S.enterica биовара typhi. Готовят разведения испытуемой сыворотки от 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубрен­ными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательной реакции, так же как и в контроле, эрит­роциты осаждаются на дно пробирки и имеют виддиска с ровными краями («пуговки»). Диагностическое значение имеет титр пассивной Й-гемагглютинации, начиная с 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови у которых дает положительный результат в РНГА с эритроцитарным F/f-диагностикумом, рас­сматривают как подозрительных на носительство S.enterica биовара typhi и подвергают многократному бактериологическо­му обследованию.

• Микробиологическая диагностика сальмонеллезов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ: микробиологическая диагнос­тика сальмонеллезов принципиально не отличается от диа­гностики брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика не применяется по причине большого числа сероваров возбуди­телей.

• Микробиологическая диагностика кишечного иерсиниоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь, моча, спинномозговая жид­кость.

МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование.Посев материала на диф­ференциально-диагностические (среда Эндо, Мак-Конки, СБТС-агар с желчью и бромтимоловым синим) и селективные (CIN-arap с антибиотиками цефсулодином и новобиоцином) плотные среды или жидкие среды обогащения (буферно-казе-иново-дрожжевой бульон, 1 %, пептонная вода с рН 7,6—7,8). Посевы инкубируют при 25 «С в течение 24—48 ч. Идентифи­кация чистой культуры осуществляется на основании морфо­логии, подвижности, тинкториальных свойств (грамотрица-

тельные палочки с закругленными концами и характерным биполярным окрашиванием, неспорообразующие, перитрихи), культуральных, биохимических признаков.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить пред­варительный диагноз.

Серодиагностика.Диагностическое значение имеет обнару­жение антител к поверхностным антигенам возбудителей наи­более распространенных серотипов (03, 04, 05, 06, 08, 09) в РА. Положительной считается РА в титре не менее 1:160. Разработаны также ИФА-тесты.

• Микробиологическая диагностика кишечного дисбактериоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование.Имеет ориентировочное значение. При резко выраженном дисбактериозе в мазках пре­обладают микроорганизмы определенных видов (например, дрожжеподобные грибы, стафилококки и др.) на фоне сущест­венного уменьшения грамотрицательной микрофлоры.

Бактериологическое исследование.Проводится количествен­ное исследование состава микрофлоры кишечника. Для этого из исследуемого материала готовят разведения Ю -2 , 10 -4 , Ю -6 и т.д. Первичные посевы по 0,1 мл каждого разведения про­изводят параллельно на несколько питательных сред (Эндо, кровяной агар, ЖСА, агар Сабуро и др.) и инкубируют при 37 °С. Подсчитывают число выросших колоний и определяют число КОЕ в 1 г материала. Проводят отсев 2—3 колоний каждого вида для выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов.

Дляобнаружения анаэробных Bifidobacterium spp. делают мерные посевы материала в разведениях 10″ 7 и выше в про­бирки с 13—15 мл модифицированной среды Блаурокка, в со­став которой входит печеночный бульон, пептон — 1 %, лакто­за — 1 %, хлорид натрия — 0,5 %, цистин — 0,01 %, агар-агар — 0,75%, твин-80 — 0,1 %. При росте Bifidobacterium spp. через 24—48 ч происходит помутнение всей среды с образованием тяжей или отдельных колоний. Готовят мазки и окрашивают по методу Грама. Выделение чистых культур Bifidobacterium spp. является весьма трудоемким и практически необязатель­ным. При необходимости идентификацию представителей рода осуществляют по биохимическим свойствам.

Для оценки результатов бактериологического исследования

сопоставляют полученные данные с количественным содержа­нием микроорганизмов в норме. Ориентировочные критерии нормальной микрофлоры толстой кишки представлены в табл. 13.2.3.

Таблица 13.2.3. Критерии нормы кишечной флоры

Патогенные микробы сем. Enterobacteriaceae О

Общее количество E.coli, млн/г 300—400

E.coli со слабовыраженными ферментативными
свойствами, % До 10

E.coli с гемолитическими свойствами, % Нет

Энтеробактерии (лактозоотрицательные и лактозополо­
жительные): Hafnia, Aerobacter, Citrobacter, Klebsiella,
Serratia, % До 5

Гемолитический стафилококк по отношению ко
всем кокковым формам, % Нет

Bifidobacterium spp. (рост при посеве разведения) 10 и выше

Бактерии рода Proteus Нет

При кишечном дисбактериозе происходит значительное снижение облигатной анаэробной микрофлоры, и в первую очередь Bifidobacterium spp., а также увеличение аэробных видов, в частности E.coli, содержание которых может превы­шать 10 11 микробных клеток в 1 г испражнений. Увеличивается частота обнаружения штаммов E.coli со слабой ферментацией лактозы и имеющих гемолитические свойства (до 30—40 %), гемолитических и негемолитических стафилококков, бактерий рода Proteus, грибов рода Candida (до 15—16 %). У лиц с дис-бактериозами более часто обнаруживают лактозоотрицатель­ные и лактозоположительные энтеробактерии, относящиеся к родам Hafnia, Aerobacter, Citrobacter. Для микроорганизмов, в норме отсутствующих в испражнениях или имеющихся в не­большом количестве, показателем дисбактериоза будет содер­жание их 10 5 —10 6 и выше КОЕ в 1 г материала (Proteus spp., Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus au­reus, Candida spp.). Для окончательного заключения о кишеч­ном дисбактериозе важное значение имеет повторное его вы­явление в динамике обследования больного.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Студент — человек, постоянно откладывающий неизбежность. 10196 — | 7222 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

С 8-го дня заболевания в крови у больных брюшным тифом можно обнаружить агглютинины. Для постановки реакции агглютинации необходимо иметь сыворотку больного и диагностикумы – взвеси убитых бактерий брюшного тифа, паратифы А и В (реакция Видаля). У больного из вены берут в пробирку 1-2 мл крови. Для ускорения свертывания крови пробирку ставят на 30 минут в термостат. Затем свернувшуюся кровь некоторое время дают отстояться на холоде, далее осторожно отделяют сгусток обожженной петлей от стенок пробирки, после чего сыворотку отсасывают. Кровь для» получения сыворотки можно взять и посредством укола мякоти безымянного пальца. Из сыворотки с помощью физиологического раствора готовят три ряда разведений: 1:100, 1:200, 1:400, 1:600 каждое в объеме 1 мл. Затем в пробирки с разведенной сывороткой добавляют по 1-2 капле диагностикумов тифа и паратифа А и В. Для контроля реакции в конце каждого ряда помещают пробирку, в которой смешивают по 1 мл физиологического раствора и по 1-2 капле соответствующих диагностикумов. Пробирки ставят на 2 часа в термостат, после чего учитывают предварительный результат реакции. Окончательный результат отмечают на второй день после стояния пробирок в условиях комнатной температуры. Реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки не менее чем 1:200.

Реакция Видаля может дать положительный результат не только у больных, но и у лиц, до того перенесших брюшной тиф («анамнестический Видаль»). Кроме того, положительная реакция иногда является результатом проведенных ранее прививок («прививочный Видаль»). «Анамнестический» и «прививочный Видаль» отличают от инфекционного следующим образом. Реакцию Видаля ставят повторно на протяжении болезни. В случае заболевания брюшным тифом с каждым днем происходит нарастание титра антител, то есть положительная реакция отмечается все в больших разведениях сыворотки. Этого не наблюдается при «анамнестическом» или «прививочном Видале».

Для этиотропного лечения используют антибиотики или другие химиотерапевтические препараты.

Специфическая профилактика тифо-паратифозного заболевания проводится убитыми и химическими вакцинами по эпидемическим показаниям, контактным лицам — экстренная фагопрофилактика сальмонеллезными поливалентными бактериофагами.

Вопросы для обсуждения

1. Классификация и общая характеристика семейства энтеробактерий.

2. Патогенез брюшного тифа и паратифа А и В.

3. Методы лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифа А и В в

различные сроки заболевания.

4. Бактериологический метод исследования брюшного тифа и

паратифа А и В в разные стадии патогенеза заболевания.

5. Выявление бактерионосительства при брюшном тифе.

6. Серологический метод диагностики брюшного тифа и паратифа А и В.

7. Лечение и профилактика брюшного тифа и паратифа А и В.

Самостоятельная работа

Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного на гемокультуру:

1. Произвести посев исследуемого материала на среду Рапопорт.

2. Изучить изменение цвета среды (помутнение; наличие пузырьков газа в поплавке).

3. Пересеять на среду Эндо.

4. Занести полученные данные в протокол.

5. Изучить различия колоний на среде Эндо. Отобрать подозрительные колонии и произвести посев для накопления чистой культуры. Описать культуральные свойства.

6. Исследовать чистую культуру по морфологическим, тинкториальным, биохимическим, антигенным свойствам. Полученные данные занести в протокол.

7. Идентифицировать чистую культуру возбудителя.

Серологическая диагностика брюшного тифа

1. Учесть результаты реакции Видаля.

2. Полученные данные занести в протокол.

Протокол бактериологического исследования

Материал для исследования:

Дата добавления: 2015-10-19 ; просмотров: 4363 . Нарушение авторских прав

источник

Начиная со 2-й недели заболевания (иногда с конца 1-й) брюш­ным тифом или паратифами проводят серологическое исследование сыворотки крови больного с целью обнаружения специфических ан­тител /AT/ — ставят реакцию агглютинации Видаля или реакцию не­прямой гемагглютинации /РНГА/. К этому времени в крови больного накапливаются АТ-агглютинины, причем в разгар заболевания обна­руживаются О- и: Н-агглютинины, а после выздоровления или после прививок надолго остаются только И-агглютинины. Это дает возмож­ность дифференцировать реакцию Видаля инфекционной природы от реакции прививочной или анамнестической путем постановки ре­акции раздельно с О- и Н-диагностикумами. Диагностический титр реакции Видаля у больного равен 1:200. Чтобы подтвердить диагноз в сомнительных случаях, проводят повторно постановку реакции у того же больного с интервалом около недели (парные сыворотки): при на­личии заболевания титр реакции возрастает.

Методика постановки реакции Видаля. Берут 4 ряда пробирок по 7 пробирок- в каждом ряду. В 5 пробирках каждого ряда готовят разведения сыворотки больного от 1:50 до ] :800 в объеме 1,0 мл. 6-ая пробирка каждого ряда — контроль Аг. 7-ая пробирка — контроль испы­туемой сыворотки. Затем во все 6 пробирок первого ряда вносят по 3 капли брюшнотифозного О-диагностикума, в 6 пробирок второго ряда брюшнотифозный Н-диагностикум, в пробирки третьего и четвертого ряда соответственно паратифозный А- и паратифозный В-диагностикумы. Инкубация при 37°С.

Предварительный учет через 2 часа инкубации, титр окончатель­но определяют через 18-24 часа. Результат оформить в виде таблицы.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) также широко при­меняется. Она более чувствительна, чем реакция Видаля и результат получают через 2-3 часа, а не через сутки, как при реакции Видаля. РНГА с брюшнотифозным О-диагностикумом позволяет выявить ост­рые формы брюшного тифа, что особенно ценно в диагностике лег­ких, абортивных форм у детей. Диагностическим титром О-антител считается разведение сыворотки 1:640. РНГА с брюшнотифозным Vi-диагностикумом ставят для выявления хронического бактерионоси­тельства, так как при формировании брюшнотифозного бактерионосительства характерно появление Vi-антител. Диагности­ческий титр реакции 1:40.

Наиболее точные результаты, позволяющие выявить специфичес­кие антитела в сыворотке больного, дает РНГА с эритроцитарными диагностикумами, содержащими отдельные О- и Н-антигенные рецеп­торы, присущие S.typhi (09 и Hd), S.paratyphi A(O2 и На) и S.paratyphi В (04 и Н6).

4. Факторы патогенности. Возбудители брюшного тифа, как и другие энтеробактерии имеют эндотоксин, ос­вобождающийся при разрушении бактерий.

У S.typhi имеется Vi-антиген, связанный с микрокапсулой и от­носящийся к К-антигенам. Это высокомолекулярный полимер, кото­рый состоит из соединенных между собой остатков N-ацетилгалактозаминуроновой кислоты. С наличием Vi-антигена свя­зывают повышенную вирулентность брюшнотифозных бактерий. Со­держащие Vi-антиген культуры S.typhi (обычно это штаммы, свежевыделенные от больных) называются V-формой, не имеющие его — W-формой. Культуры в V-форме агглютинируются анти-У1-сыворот-кой и не агглютинируются анти-О-сывороткой, так как О-антиген «мас­кирован» более поверхностно расположенным Vi-антигеном. После прогревания бактерий при 100°С в течение 30 минут О-агглютинабильность восстанавливается вследствие разрушения Vi-антигена. Этот антиген является рецептором дл брюшнотифозных Vi-фагов, на чем основано фаготипирование S.typhi.

У возбудителей брюшного тифа обнаружены фак­торы адгезии и колонизации. У них имеются факторы инвазии. Важной особенностью возбудителей является способность размно­жаться в макрофагах, что способствует их выживанию и распрост­ранению по всему организму.

Попавшие через рот возбудители в инфекционной дозе (не менее 10 млн живых бактерий) в течение инкубационного периода, который обычно длится 10-14 дней, прикрепляются к стенке гонкой кишки, начинают размножаться на поверхности эпителия (ад­гезия и первичная колонизация) и. далее, проникают в лимфатические образования тонкого кишечника — пейеровы бляшки и солидарные фол­ликулы (инвазия), где фагоцитируются макрофагами. Находясь в фагосомах макрофагов, возбудители не погибают, а интенсивно размножаются. Вместе с макрофагами по лимфатическим путям они проникают в мезентериальные и забрюшинные лимфатические узлы, где развивается воспалительный процесс и продолжается фагоцитоз новыми макрофагами и накопление возбудителей. Это приводит к про­рыву гемато-лимфатического барьера и попаданию возбудителей в кровяное русло, где часть их погибает под действием бактерицид­ных свойств крови и в результате фагоцитоза.

В течение 1 -ой недели заболевания у всех больных имеется бак­териемия, которая при дальнейшем течении болезни постепенно пре­кращается. Часть возбудителей с кровью заносится в паренхиматозные органы, и в костный мозг, где продолжается их размножение в макро­фагах, а также гибель, при которой высвобождаются новые порции эндотоксина.

С конца 1-ой — начала 2-ой недели заболевания возникают за­щитные реакции: образуются специфические антитела, активируется фагоцитоз, однако преобладают проявления гуморального иммуните­та. Организм больного в значительной степени освобождается от воз­будителей, уменьшается интоксикация, но нарастает воспалительный процесс в лимфатическом аппарате тонкого кишечника. Этому спо­собствует вторичный занос в просвет тонкого кишечника из желчного пузыря и инвазия возбудителей в лимфатические элементы. В желч­ном пузыре бактерии находятся в благоприятных условиях и защище­ны от воздействия антител, что способствует их длительному сохранению.

Различают 5 периодов в развитии воспалительного процесса в лимфатических элементах стенки кишечника: мозговидное набухание, некроз фолликулов, отторжение некротических масс и образование язв, очищение язв, заживление язв. Начиная с конца 2-ой — начала 3-ей недели возбудители вместе с некротическими массами поступают

в просвет тонкой кишки и выделяются с испражнениями обычно вплоть до клинического выздоровления. Иногда бактериовыдсление затяги­вается и может перейти в хроническое бактерионосительство (у 3-5% переболевших).

2. 3. Методика постановки реакции Видаля. Берут 4 ряда пробирок по 7 пробирок- в каждом ряду. В 5 пробирках каждого ряда готовят разведения сыворотки больного от 1:50 до ] :800 в объеме 1,0 мл. 6-ая пробирка каждого ряда — контроль Аг. 7-ая пробирка — контроль испы­туемой сыворотки. Затем во все 6 пробирок первого ряда вносят по 3 капли брюшнотифозного О-диагностикума, в 6 пробирок второго ряда брюшнотифозный Н-диагностикум, в пробирки третьего и четвертого ряда соответственно паратифозный А- и паратифозный В-диагностикумы. Инкубация при 37°С.

Предварительный учет через 2 часа инкубации, титр окончатель­но определяют через 18-24 часа. Результат оформить в виде таблицы.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) также широко при­меняется. Она более чувствительна, чем реакция Видаля и результат получают через 2-3 часа, а не через сутки, как при реакции Видаля. РНГА с брюшнотифозным О-диагностикумом позволяет выявить ост­рые формы брюшного тифа, что особенно ценно в диагностике лег­ких, абортивных форм у детей. Диагностическим титром О-антител считается разведение сыворотки 1:640. РНГА с брюшнотифозным Vi-диагностикумом ставят для выявления хронического бактерионоси­тельства, так как при формировании брюшнотифозного бактерионосительства характерно появление Vi-антител. Диагности­ческий титр реакции 1:40.

Наиболее точные результаты, позволяющие выявить специфичес­кие антитела в сыворотке больного, дает РНГА с эритроцитарными диагностикумами, содержащими отдельные О- и Н-антигенные рецеп­торы, присущие S.typhi (09 и Hd), S.paratyphi A(O2 и На) и S.paratyphi В (04 и Н6).

4. 1) Вакцина брюшнотифозная спиртовая сухая — инактивированные этиловым спиртом лиофилизированные брюшнотифозные бактерии (штамм 4446). Применяется для профилактики брюш­ного тифа у взрослых.

2) Вакцина брюшнотифозная Ви-полисахаридная жидкая — ра­створ капсульного полисахарида, выделенного из культуры брюшнотифозных бактерий, очищенного ферментативными и физико-химическими методами. Введение вакцины приводит к быстрому и интенсивному образованию Ат и формированию резистентное™ через 1-2 недели. Применяется для профилак­тики брюшного тифа у взрослых.

3) Вакцина брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Ви-антигеном — состоит из двух вышеописанных вакцин, которые соединяют непосредственно перед применением. Вакцина сти­мулирует клеточный иммунитет и образование Ат к О- и Ви-антигенам возбудителя брюшного тифа. Предназначена для профилактики брюшного тифа у детей 7-14 лет.

4) Бактериофаг брюшнотифозный в таблетках с кислотоуспюйчивым покрытием — таблетки из концентрированного лиофилизированного фаголизата сальмонелл брюшного тифа, покрытые слоем ацетилфталилцеллюлезы (АЦФ) или содержащие пектин. Препарат предназначен для профилактики брюшного тифа по эпидемическим показаниям в семейном очаге, больнице, населенном пункте и пр.

1. Пищевые токсикоинфекции чаще всего вызываются сальмонел­лами, входящими в серогруппы В, С, D, Е. Все они имеют резервуар среди животных иптиц, т.е. эти заболевания являются зооантрононозными. Наиболее распространены следующие возбудители ПТИ:

— S.typhimurium (группа В) — источником инфекции могут быть мыши, голуби, домашние птицы и их яйца. Вторично могут быть заражены другие продукты.

— S.choleraesuis (группа С) — источник инфекции — свиньи.

— S.enteritidis (группа D) — источник инфекции — крупный рогатый скот.

Патогенез. В патогенезе пищевых токсикоинфекции важное зна­чение имеет попадание с пищей большого количества возбудителей и их эндотоксина. Прикрепившись к эпителию кишечника, сальмонеллы начинают размножаться, проникают в подслизистое простран­ство и в лимфатические образования в стенке кишечника, где проис­ходит их дальнейшее размножение и гибель с высвобождением эндотоксина. Массивное накопление эндотоксина (вместе с эндоток­сином, попавшим извне) приводит к интоксикации, часто тяжелой (с лихорадочным состоянием, нарушениями со стороны нервной и со­судистой систем, вплоть до коллапса.) и диарее.

При меньшем количестве сальмонелл, попавших в организм с пищей, заболевание может протекать в виде гастроэнтерита с диаре­ей, но без выраженной интоксикации и без подъема температуры.

2. Исследуемый материал: с 1 недели – кровь.

со 2 недели – моча, желчь, соскобы.

3. На 1-й неделе заболевания исследуют кровь с целью выделения возбудителя. Гемокультуру выделяют в 100% случаев заболевания. Примерно у 40% заболевших удается выделить гемокультуру и на 2-й неделе заболевания при условии посева 15-20 мл крови. Кровь берут из локтевой вены в объеме 10 мл и засевают в колбу со 100 мл жидкой питательной среды (среды обогащения для «чистого» материала — среда Раппопорт или желчный бульон). Следует соблюдать соотношение крови и питательной среды не менее 1:10. чтобы не проявилось бакте­рицидное действие крови. Далее делают высев со среды обогащения на чашку со средой Эндо, где в положительном случае вырастают лактозонегативные (лак-) колонии- бесцветные или бледнорозовые по­лупрозрачные колонии. Колонии засевают в комбинированные дифференциально-диагностические среды (Клиглсра, Рсссела и др.). Выделенную лактозонегативную культуру идентифицируют на осно­вании изучения биохимических и антигенных свойств. Биохимическое тестирование проводят на различных дифференциально-диагностических средах или более совершенными методами — в системе API 20 Е, с помо­щью энтеротестов, «Enterotube’II Roche и др. Серологическая идентификация осуществляется с помощью агглютинирующих адсорби­рованных сальмонеллезных О- и Н-сывороток (см. с. 28).

С 3-й недели заболевания (нередко с конца 2-й) проводят повтор­ные высевы возбудителя из испражнений. Со 2-й недели заболевания возможно выделить возбудителя также из мочи, желчи, соскоба из ро­зеол, костного мозга, но, практически, это делают редко. Бактериоло­гическое исследование испражнений несколько отличается от исследования крови, поскольку этот материал содержит посторон­нюю микрофлору. Пробу испражнений разводят в десять раз физиоло­гическим раствором NaCl и далее надосадочную жидкость в соотношении 1:5 засевают на среды обогащения (среды, предназна­ченные для посева загрязненных материалов — селенитовый бульон или среду Мюллера). Затем делают пересев на чашки со средами Эндо, Плоскирева, или висмут-сульфит агаром. На двух последних значи­тельно подавляется рост посторонней микрофлоры, что способствует выделению возбудителя.

Как правило, одновременно с посевом на среды обогащения, про­бу испражнений засевают непосредственно на чашки со средами Плос­кирева или висмут-сульфит агара. Если на них вырастают колонии возбудителя, срок бактериологического диагноза становится на сутки короче. Выросшие подозрительные колонии — лактозонегативные на средах Эндо и Плоскирева и черные или коричневые на висмут-сульфит агаре — отсевают на комбинированные среды Клиглера, Рассела и др., т.е. дальнейшее выделение чистой культуры возбудителя и его идентификация проводится так же, как и при исследовании кро­ви.

4. Названии среды: Висмут-сульфит агар, селективная среда; плотная, в чашке Петри молочно-зеленовато цвета. Состав: МПА, сульфит висмута. сульфат железа. фосфат натрия, бриллиантовый зеленый. Назначение: для сальмонелл и протея. Принцип действия: сальмонеллы образуют из сульфата железа сероводород, который взаимодействуя с бесцветным сульфитом висмута, переводит его в сульфид висмута черного цвета. Поэтому колонии сальмонелл имеют черный цвет (или черные с коричневатым или гемнозеленым оттенком). Рост Грам- флоры и многих энтеробактерий подавляется. Эшерихин образуют коричневатые колонии, вырастающие значительно позже.

1. Протеи являются наиболее распространенными возбудителями ОКИ среди условно-патогенных энтеробактерий. Род Proteus включа­ет несколько видов, наибольшее значение в инфекционной патологии имеют роды: P.mirabilis и P.vulgaris.

2. Патогенез пищевой протейной инфекции связан с массивным проникновением в ЖКТ бактерий протея и некоторого количества сво­бодного эндотоксина. Бактерии попадают в лимфатический аппарат кишечной стенки, где происходит их интенсивное разрушение и осво­бождение большого количества эндотоксина. Это приводит к общей интоксикации организма через несколько часов после приема пищи, что характерно для ПТИ.

При наличии у штамма протея, попавшего в пищеварительный тракт, дополнительных факторов патогенности для развития ОКИ до­статочно значительно меньшей дозы бактерий. Такие штаммы коло­низируют слизистую оболочку тонкого кишечника, не проникая в клетки эпителия. Основное патологическое действие оказывает энтеротоксин, нарушающий функции аденилатциклазной системы эпителиоцитов. В результате развивается гастроэнтерит с диарейными явлениями и, как правило, без выраженной интоксикации. Заражение обычно происходит от больных или бактерионосителей.

Протеи могут вызывать также гнойно-воспалительные заболева­ния различной локализации: холециститы, пиелонефриты, циститы, остеомиелиты, отиты, конъюнктивиты и др., часто имеющие хрони­ческое течение. Заболевания могут развиваться как эндогенная инфек­ция, но чаще это внутрибольничная экзогенная инфекция с контактно-бытовым способом заражения.

4. При диагностике ПТИ, вызванных условно-патогенными энтеробактериями, к которым относится и протей, необходимо не только выделить возбудителя, но и доказать массивное обсеменение исследу­емых материалов и, особенно, пищевых продуктов. Для этого из ис­следуемой пробы готовят десятикратные разведения от 10

8 , из которых делают высевы на чашки с дифференциально-диагностичес­кими средами.

Доказательным является рост колоний из разведений 10 5 — 10 6 и выше.

1. Для бактерий рода Salmonella характерно наличие следующих ан­тигенов: О-антигена, называемого соматическим, Н-антигена (жгути­кового) и К-антигена (футлярного, или оболочечного).

О-антиген термостабилен, расположен в клеточной стенке, по своей природе является полисахаридно-белково-липидным комплек­сом. Антигенная специфичность О-антигена связана с полисахаридом, который неоднороден и у сальмонелл одного вида состоит из несколь­ких антигенных рецепторов. Антигенные рецепторы обозначаются цифрами 1,2,3,4. и т.д.

Футлярные К-антигены термолабильны, находятся в клеточной стенке более поверхностно, чем О-антиген. У сальмонелл обнаруже­ны относящиеся к К-антигенам М-Аг и Vi-Ar.

Н-антиген термолабилен, по химической природе является бел­ком (флагеллин), располагается в жгутиках. У бактерий одного и того же вида Н-антиген может состоять из двух антигенных комплексов, отличающихся по серологической специфичности. Такие бактерии называются двухфазными и могут существовать в двух фазах, для каж­дой из которых характерно наличие соответствующих антигенных ком­плексов.

3.Серологическая идентификация сальмонелл проводится в ре­акции агглютинации на стекле с агглютинирующими адсорбирован­ными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками. Такие сыворотки получают методом адсорбции антител по Кастеллани из видовых им­мунных сывороток (путем насыщения сыворотки родственными бак­териями, на которых адсорбируются группоспецифические антитела). Агглютинирующие адсорбированные сальмонеллезные сыворотки мо­гут быть поливалентными и монорецепторными, т.е. содержать не­сколько различных антител (рецепторов) или только одно.

Последовательность серологической идентификации выделенной культуры:

1. Для установления принадлежности культуры к роду Salmonella, а именно к наиболее распространенным серогруппам — А, В, С, D, Е — культуру испытывают в реакции агглютинации с адсор­бированной поливалентной О-сывороткой, содержащей антите­ла против антигенных рецептеров 2, 4, 7, 9, 3, 10. При необходимости используют монорецепторные О-сыворотки про­тив редких серогрупп. При диагностике брюшного тифа, пара­тифа А и паратифа В можно использовать смесь О-сывороток, содержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.

2. При положительном результате для определения принадлежно­сти испытуемой культуры к определенной серологической группе ставят реакцию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: ре­цептор 2 (серогруппа А), рецептор 4 (серогруппа В), рецептор 7 (серогруппа С), рецептор 9 (серогруппа D) и т.д.

3. После установления серогруппы, к которой относится культура, определяют ее видовую принадлежность (серовариант) с помо­щью реакции агглютинации с адсорбированными монорецептор­ными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Далее проводят реак­цию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антиген­ную формулу испытуемой культуры.

4. Отравление остатками пищи.

5. Среда Клиглера: комбинированная, дифференциально-диагностическая, плотная, в пробирках в виде скошенного столбика». Цвет среды: красновато-бурый. Компоненты: МПА, лактоза 1%, натрий тиосульфат, индикатор. Назначение: для отсева «подозрительных» колоний.

1. Лабораторный диагноз стафилококковой пищевой интокси­кации основан на обнаружении стафилококкового энтеротоксина в ма­териалах от больного и в пищевых продуктах и в выделении чистой культуры S.aureus, продуцирующей энтеротокисн.

Исследуемые материалы: испражнения, рвотные массы, промыв­ные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.

Энтеротоксин обнаруживают в декантате или фильтрате из ис­следуемых материалов и в бульонной культуре стафилококков, выделенных из перечисленных материалов с помощью следую­щих методов:

— серологический — путем обнаружения стафилококкового эн­теротоксина с помощью реакций РОНГА, ИФА, реакции пре­ципитации в геле;

— биологический — путем постановки биологической пробы на котятах, у которых после введения исследуемого материала, содержащего стафилококковый энтеротоксин, через рот раз­вивается рвота и понос.

Бактериологический — выделение коагулазоположительной куль­туры S.aureus с последующим обнаружением энтеротоксина и других факторов патогенности.

Как правило, в пище, послужившей причиной отравления, обнару­живают не менее 10 5 — 10 6 энтеротоксигенных стафилококков на 1г/мл продукта. Фаготипирование позволяет определить принадлежность ста­филококковых культур, выделенных из пищи и из организма больного, к одному фаговару, и тем самым подтвердить их идентичность.

2. Энтеротоксины стафилококков относятся к простым токсинам и являются одноцепочечными белками с одной дисульфидной связью; молекулярная масса колеблется в пределах 26 000 -34 000. Энтероток­сины термостабильны (выдерживают кипячение в течение 20-30 ми­нут), устойчивы к действию пищеварительных ферментов и к изменению рН в пределах 4,5 — 10,0. При воздействии формалина они не превращаются в анатоксины. Известно 7 антигенных вариан­тов энтеротоксинов: А, В, Cl, C2, СЗ, В, Е; их образование кодируют гены конвертирующих фагов. Пищевую интоксикацию вызывают преимущественно антигенные варианты (типы) А и В.

4. Патогенез. В отличие от многих энтеротоксинов, продуцируе­мых другими бактериями, стафилококковые энтеротоксины не нару­шают функции аденилатциклазной системы эпителиоцитов. Обладая свойствами суперантигенов, они неспецифически стимулируют мно­жество клонов лимфоцитов, что приводит к гиперсекреции цитокинов (интерлейкин-2) и развитию вторичной (опосредованной цитокинами) интоксикации. Избыточное накопление интерлейкина-2, кроме общей интоксикации организма способствует возбуждению гладкой мускулатуры кишечной стенки и повышению ее моторики, что приво­дит к развитию диареи. Есть данные, что энтеротоксин может оказы­вать и прямое воздействие на центры головного мозга (нейротропное действие), а также на клетки эпителия кишечника, с чем связана соот­ветственно многократная рвота и диарея.

Обычно пищевые интоксикации вызывают кондитерские изде­лия с кремом, молочные, мясные, рыбные продукты, инфицирован­ные стафилококками и находившиеся в условиях, способствующих размножению стафилококков и накоплению энтеротоксина.

Заболевание возникает через 2-4 часа после приема пищи. Отме­чаются сильные боли в эпигастральной области, повторная рвота, сла­бость, падение артериального давления, иногда развивается коллапс; диарея не всегда выражена. Как правило, выздоровление наступает через 2-3 дня.

1. C.botulinum — возбудитель ботулизма. Ботулизм — тяжелая пищевая интоксикация, вызываемая ботулиническим токсином и ха­рактеризующаяся поражением нервной системы..

Вид C.botulinum образует экзотокси­ны, различающиеся по антигенным свойствам, и по этому признаку подразделяется на серотипы. Ботулотоксины всех типов обладают сход­ной биологической активностью и являются вариантами единого нейротоксина. Кроме нсйротоксического действия ботулотоксин обладает лейкотоксической, гемолитической и лецитиназной активностью.

Известны 8 антигенных вариантов ботулотоксина: А, В, Cl, C2, D, E, F, G. Токсинообразование типов С, D, Е закодировано в геноме конвертируемых бактериофагов и проявляется при интеграции профага в бактериальную хромосому; у остальных типов генетический контроль осуществляет непосредственно хромосома клетки.

Заболевания человека вызывают ботулотоксины типов А, В, Е, а также F. В организме человека С. botulinum размножаются слабо и не продуцируют токсина за редким исключением. Ботулотоксин на­капливается в пищевых продуктах, инфицированных спорами С. botulunum, при их прорастании, если созданы анаэробные условия (например при консервировании). Для человека ботулотоксин — самый сильнодействующий бактериальный яд, губительно действующий в дозе 10 х г. Токсин полностью инактивируется при кипячении в тече­ние 20 минут.

Токсин представляет собой полипептидную цепь с одной или несколькими внутримолекулярными связями, его молекулярная масса равна 150 000, он относится к бинарным токсинам.

Ботулотоксины всех типов продуцируются в виде токсичных бел­ковых комплексов, состоящих из нейротоксина и нетоксичного белка. Белок является стабилизатором токсина, защищает его от разрушаю­щего действия протеолитических ферментов и НС1.

Ботулотоксин в виде высокомолекулярного комплекса малоток­сичен и является прототоксином. В результате мягкого протеолиза, осуществляемого у большинства типов токсина собственными эндо­генными протеазами, а у типа Е экзогенными протеазами (например трипсином), прототоксин распадается на 2 субкомпонента: L-легкий и Н-тяжелый. Между ними сохраняется дисульфидная связь. L-суб­компонент соответствует фрагменту А (активатор) и оказывает токси­ческое действие на клетку-мишень (мотонейрон). Н-субкомпонент соответствует фрагменту В (акцептор) и осуществляет прикрепление к рецептору клетки-мишени.

2.Патогенез. Попав вместе с пищей в ЖКТ, ботулотоксин прикреп­ляется к клеткам эпителия кишечника и путем пиноцитоза попадает в лимфатические сосуды, затем в кровь и далее проходит гематоэнцефалический барьер. В организме он распадается на 2 субкомпонента: L-легкий и Н-тяжелый. Н-субкомпонент связывается с ганглиозидами пресимпатической мембраны мотонейронов. L-субкомпонент, действуя как эндопротеаза, блокирует секрецию ацетилхолина. Тем самым пре­рываются нервные импульсы, идущие от мотонейрона к мышце, что приводит к развитию вялых параличей. Ботулотоксин поражает мотонейроны спинальных моторных центров, продолговатого мозга и пе­риферической нервной системы.

Экология. C.botulinum является сапронозом и вегетирует в по­чве, часто обнаруживается в кишечнике лошадей и других животных, реже встречается в кишечнике человека. Из почвы или испражнений споры возбудителя попадают на различные объекты и могут загряз­нять пищевые продукты. В анаэробных условиях споры прорастают, вегетативные клетки продуцируют ботулотоксин. Чаще всего заболе­вание возникает при употреблении в пищу консервированных продук­тов домашнего приготовления, что связано с их недостаточной стерилизацией.

3. Лабораторный диагноз ботулизма проводят одновременно в двух направлениях — обнаруживают ботулотоксин и выделяют возбудителя.

Исследуемые материалы: кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, моча, секционный материал, пищевые продукты. 1. Выявление ботулотоксина и определение его типа может быть осуществлено:

Серологическим методом с помощью серологических реак­ций РОНГА, ИФА, реакции преципитации в геле.

Бактериологический — выделение и идентификация культуры C.botulinum (как и других клостридий) проводят, используя методы выделения анаэробных бактерий.

4. Биопроба на мышах. Для этой цели кровь, фильтрат или центрифугат других исследуемых материалов разливают в 4 пробирки, в каждую из трех добавляют разные противоботулинические сыворотки А, В и Е, в 4-ю — нормальную сыворотку и инкубируют в термостате 30 минут. Затем содержимое пробирок вводят 4-м группам мышей (не менее 2-х мышей в каждой группе) и наблюдают за живот­ными в течение 4-х суток. При наличии ботулотоксина вы­живают мыши только одной группы вследствие нейтрализации токсина гомологичной сывороткой, что по­зволяет определить тип ботулинического токсина.

5. Сыворотки противоботулинические типов А, В, Е лошади­ные очищенные концентрированные жидкие — представляют собой специфические иммуноглобулинные сыворотки крови ло­шадей, гипериммунизированных ботулиническими анатоксина­ми, очищенные, концентрированные. С лечебной целью сыворотку вводят в максимально ранние сроки с момента появ­ления первых симптомов ботулизма. Для лечения заболеваний, вызванных неизвестным типом токсина ботулизма, используют смесь моновалентных сывороток. При известном типе токсина используют моновалентную сыворотку соответствующего типа.

1. Клостридии — возбудители псевдимембранозного колита.

Псевдомембранозный колит — тяжелое заболевание, вызываемое С. difficile, сопровождается общей интоксикацией и лихорадкой, схват­кообразными болями в животе, диареей с примесью крови.

С. difficile обладает адгезив­ной активностью и продуцирует комплексный термолабильный ток­син, состоящий из энтеротоксина (токсина А) и цитотоксина (токсин В).

Токсин А действует на гуанилатциклазную систему, стимулируя образование цГМФ, что приводит к развитию диареи. Этот токсин об­ладает слабым летальным действием (его определяют путем внутри­венного введения токсина в разных разведениях экспериментальным животным). Токсин В ингибирует синтез белка, нарушает функции кле­точных мембран с потерей К+ и обладает сильным летальным дей­ствием, превышающим в 1000 раз активность токсина А.

2.Патогенез псевдомембранозного колита. При попадании C.difficile в желудочно-кишечный тракт псевдомембранозный колит развивается у людей на фоне лечения антибиотиками. В результате антибиотикотерапии подавляется нормальная микрофлора толстого ки­шечника, что приводит к снижению колонизационной резистентности, обусловленной, главным образом бифидобактериями и бактероидами. Это создает благоприятные условия для адгезии и колонизации эпителия толстого кишечника антибиотикоустойчивыми штаммами С. difficile.

Образующийся комплексный токсин вызывает развитие язвенного пленчатого колита с диарейными явлениями и кровью в испражнени­ях. Слизистая толстого кишечника частично или полностью некротизируется, покрывается лейкоцитами и налетом фибрина (псевдомембрана). У детей грудного возраста заболевание может воз­никать и без применения антибиотиков.

3.Лабораторный диагноз псевдомембранозного колита. Иссле­дуемые материалы: испражнения, рвотные массы, подозрительные пи­щевые продукты.

1) Бактериологический — выделение и идентификация возбудителя — С. difficile — проводится по тем же правилам, что и при других клостридиозах с установлением идентичности возбудителя, вы­деленного от больного и из пищевого продукта.

2) Серологический — определение токсинов серотипов А или В с помощью ИФА и встречного иммуноэлектрофореза.

источник