Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.
У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.
Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.
Брюшной тиф диагностируют на основании длительной лихорадки, головной боли, нарастающей интоксикации с развитием тифозного статуса, типичных изменений языка, появления метеоризма, розеолёзной сыпи, гепатоспленомегалии и изменений периферической крови.
Лабораторная диагностика брюшного тифа основана на обнаружении возбудителя в биоматериале и специфических антител в крови больного. Решающее значение имеет обнаружение возбудителя в крови (гемокультура), моче (уринокультура), испражнениях (копрокультура), жёлчи (биликультура), а также в костном мозге, спинномозговой жидкости, розеолах, гное или экссудате.
В практической работе для ранней диагностики брюшного тифа наибольшее значение имеет гемокультура, которую следует проводить на протяжении всего лихорадочного периода. Кровь из вены в количестве 5-10 мл засевают во флакон с 50-100 мл 10-20% жёлчного бульона (лучшие результаты даёт посев в трипсин-соевый бульон). Положительные результаты гемокультуры чаще получают при посевах крови на первой неделе заболевания, когда бактериемия наиболее выражена. Со второй недели болезни брюшнотифозные палочки можно обнаружить в посевах кала, мочи и дуоденального содержимого. Наиболее высокий процент выделения палочек брюшного тифа получают при посевах костного мозга. В целом бактериологическое подтверждение диагноза брюшного тифа удаётся получить у 80-90% больных.
Серологические методы позволяют обнаружить специфические антитела в крови или антигены в биосубстрате. В практической работе чаще всего применяют реакцию Видаля и РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с использованием эритроцитарных О-, Н- и Vi-антигенов. Реакция Видаля основана на обнаружении специфических О- и Н-антител-агглютининов в крови больного с помощью соответствующих антигенов. Положительные результаты можно получить с 8-9 сут болезни. Реакция Видаля может быть положительной у привитых и перенёсших брюшной тиф, поэтому решающее значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания. Для более точного выявления специфических иммунных сдвигов в крови больного реакцию Видаля следует повторять с О- (IX и XII) и Н-монодиагностикумами для исключения перекрёстных реакций с сальмонеллами других групп.
Более специфичны и чувствительны РНГА с эритроцитарными О- и Vi-антигенами и реакция Vi-гемагглютинации. Эти реакции используют для ранней диагностики брюшного тифа. В РНГА концентрация О-антител нарастает в динамике заболевания, а титры Vi-антител существенно не меняются. Реакция Vi-гемагглютинации имеет наибольшее значение при обследовании лиц, подозрительных на брюшнотифозное носительство.
Серологические реакции на обнаружение специфических антител в крови больного следует ставить с 4-5-го дня болезни, а затем на 2-3-й нед и позднее. Диагноз брюшного тифа считают серологически подтверждённым при титре антител 1:200 и выше или при нарастании титра антител в 2-3 раза в динамике заболевания. При оценке серологических реакций важно учитывать, что нарастание титров специфических О-антител свидетельствует об остром инфекционном процессе, а наличие только Н- или Vi-антител — о перенесённом ранее брюшном тифе или бактерионосительстве.
Для серологической диагностики бактерионосительства и вакцинальных реакций предложено раздельное определение специфических антител, относящихся к IgM и IgG в ИФА. Выявление специфических брюшнотифозных IgM указывает на текущий инфекционный процесс, а изолированное обнаружение специфических антител, относящихся к классу IgG, — о вакцинальной природе антител или перенесённом ранее брюшном тифе.
Дифференциальная диагностика брюшного тифа
В практической работе брюшной тиф у детей чаще приходится дифференцировать с тифоподобной формой сальмонеллёза, паратифами, инфекционным мононуклеозом, лимфогранулематозом, иерсиниозом, малярией, а в начальном периоде — с гриппом, энтеровирусной инфекцией и острой кишечной инфекцией другой этиологии.
[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19]
источник
Определение нормальных антител к брюшнотифозному антигену в реакции агглютинации
Для определения нормальных антител берут у здорового человека шприцем кровь из локтевой вены в количестве 2-3 мл и дают ей свернуться. Образовавшийся сгусток отделяют, а сыворотку отсасывают в чистую пробирку и готовят ряд разведений от 1:10 до 1:160 следующим образом: во все пробирки разливают по 1 мл (20 капель) физиологического раствора, затем в 1-ю пробирку этой же пипеткой наливают 1 мл сыворотки, разведённой 1:5, перемешивают с физиологическим раствором, получают разведение 1:20. Также получают разведения 1:40, 1:30 и 1:160.
В отдельную контрольную пробирку и наливают 1 мл физиологического раствора без сыворотки (контроль антигена). Во все пробирки закапывают по 2 капли брюшнотифозного ди-агностикума. Штатив ставят в термостат на 2 часа при 37 °С, а затем оставляют на сутки при комнатной температуре.
При учёте реакции сначала просматривают контрольную пробирку. В ней при лёгком встряхивании наблюдается равномерное помутнение, хлопьев не должно быть. Опытные пробирки просматривают одновременно с контрольной, держа в одной руке и встряхивая. При положительной реакции обнаруживаются хлопья из склеенных бактерий. Учитывают максимальное разведение сыворотки, при котором произошла отчетливая агглютинация (титр сыворотки).
Специфические антитела (агглютинины) обнаруживаются в крови больного со 2-ой недели болезни. Для постановки реакции Видаля берут шприцем кровь из локтевой вены в количестве 2-3 мл и дают ей свернуться. Образовавшийся сгусток отделяют, а сыворотку отсасывают в чистую пробирку и готовят из неё 3 ряда разведений сыворотки больного от 1:100 до 1:800 следующим образом: во все пробирки разливают по 1 мл (20 капель) физиологического раствора; затем этой же пипеткой наливают 1 мл сыворотки, разведенной 1:50 в первую пробирку, перемешивают с физиологическим раствором, таким образом получают разведение 1:100, Из этой пробирки переносят 1 мл сыворотки в следующую пробирку, перемешивают с физиологическим раствором, получают разведение 1:200 также получают разведения 1:400 и 1:800 в каждом из трёх рядов. Реакция агглютинации Видзля ведётся в объеме 1 мл жидкости, поэтому из последней пробирки после смешения жидкости удаляют 1 мл. В отдельную контрольную пробирку наливают 1 мл физиологического раствора без сыворотки. Этот контроль ставится для проверки возможности спонтанной агглютинации антигена (диагностикума) а каждом ряду
В сыворотках больных могут быть как специфические, так и групповые антитела, которые различаются по высоте титра. Специфическая реакция агглютинации идёт обычно до более высокого титра. Реакция считается положительной, если агглютинация произошла хотя бы в первой пробирке с разведением 1:200. Обычно она наступает в больших разведениях. Если наблюдается групповая агглютинация с двумя или тремя антигенами, то возбудителем болезни считают того микроба, с которым произошла агглютинация в наиболее высоком разведении сыворотки.
1. реакция положительна, начиная со 2-ой недели заболевания;
2. реакция положительна в 3-х случаях: у больных (инфекционная реакция), у переболевших (анамнестическая) и у вакцинированных (прививочная).
Для дифференциации реакций прибегают к повторной постановке ее через 5-6 дней. У больных отличается резкое нарастание титра антител При прививочной и анамнестической реакциях титр антител не изменится.Реакцию Видаля можно поставить одновременно с Н- и О-антигенами бактерий брюшного тифа, что помогает дифференцировать инфекционную реакцию от прививочной, так как у привитых обнаруживаются только Н-антитела, О-агглютинин в высоком титре отмечается только в разгар болезни.
Дата добавления: 2015-05-10 ; Просмотров: 855 ; Нарушение авторских прав? ;
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
источник
• Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: исходя из особенностей патогенеза брюшного тифа, на 1-й неделе заболевания, в период бактериемии, возбудителей выделяют из крови (получение гемокультуры), со 2-й недели заболевания — из испражнений (получение копрокультуры), мочи или желчи.
Бактериологическое исследование(схема 13.2.1).
Получение гемокультуры. В 1-й день из локтевой вены больного берут 5—10 мл крови и засевают в колбу с 50—100 мл селективной среды Раппопорт, содержащей желчный бульон (для подавления роста других бактерий), глюкозу, индикатор Андреде и поплавок для обнаружения газа. Указанные соотношения крови и среды необходимы для подавления бактерицидного действия белков крови. Посевы инкубируют при 37 «С в течение 18—20 ч. На 2-й день при росте сальмонелл наблюдается помутнение и изменение цвета среды. При росте паратифозных бактерий (биовары paratyphi А, Си schottmuelleri) наряду с указанными изменениями появляются пузырьки газа в поплавке. Для ускорения ответа из среды Раппопорт делают мазки и препараты «висячая» капля. При наличии чистой культуры грамотрицательных подвижных палочек и изменении цвета среды (или наличии газа) дают первый предварительный ответ. Затем культуру из среды Раппопорт пересевают в пробирку со средой Ресселя, полагая при этом, что из крови выделена чистая культура и можно сразу приступить к ее идентификации. Одновременно со среды Раппопорт делают посевы на среду Эндо для получения изолированных колоний с целью проверки чистоты выделенной культуры.
На 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Ресселя и ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. На основании полученных данных дают второй предварительный ответ. Для дальнейшего исследования отбирают несколько бесцветных колоний со среды Эндо и пересевают их в среду Ресселя или скошенный питательный агар (для контроля полученных результатов). Чистую культуру пересевают на среды «пестрого» ряда и серотипируют в реакции агглютинации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с
адсорбированными монорецепторными О- и Н-сальмонеллез-ными сыворотками. Окончательный диагноз устанавливают на основании биохимических (табл. 13.2.1) и антигенных свойств.
Таблица 13.2.1. Биохимические свойства сальмонелл — возбудителей брюшного тифа и паратифов
Биовар S.enterica | Ферментация | Образование | |||||
лактозы | глюкозы | мальтозы | сахарозы | ман-нита | H2S | NH3 | индола |
Paratyphi А — КГ КГ — КГ — —
Schottmuelleri — КГ КГ — КГ + +
Условные обозначения: К — образование кислоты; КГ — образование кислоты и газа; (+) — обнаружение признака; (—) — отсутствие признака.
Биохимические признаки (развернутый «пестрый» ряд) позволяют дифференцировать сальмонеллы от схожих сними энтеробактерий: Citrobacter, Hafnia (табл. 13.2.2).
Таблица 13.2.2. Дифференциация сальмонелл и других энтеробакте рий по биохимическим признакам
Род | Лизин- декар- бокси- лаза | Ферментация углеводов | р- Галак-този-даза | ||
дуль-цита | сорбита | ксилозы | рам-нозы | салицина | 4% лактозы |
Citrobacter — К(-) К К К К(±) К(±) К
Hafnia + — — К К К(+) — К
Условные обозначения: (+) — положительная реакция; (—) — отрицательная реакция; ± — вариабельная реакция; К — образование кислоты; К(—) — образование кислоты (редко); К(±) — образование кислоты (вариабельно).
Выделенную чистую культуру бактерий используют для определения чувствительности к антимикробным препаратам.
Фаготипирование. С помощью набора стандартных Vi-фагов определяют до 78 фаготипов S.enterica биовара typhi. При этом необходимым условием является наличие в культуре FZ-антигена. Культуры S.enterica биовара paratyphi В (schottmuelleri) дифференцируются на11 фаготипов и подтипов.
Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо или Левина) или элективные среды обогащения (Мюллера, селени-
товая или висмут-сульфит агар). Для посева петлю фекалий вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию. После оседания крупных комочков суспензию петлей наносят на поверхность агаровой среды — на одну половину чашки. Материал тщательно растирают шпателем по одной, а затем по другой половине чашки для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18—20 ч. На 2-й день изучают характер колоний, выросших на чашках (рис. 13.2.1; на вклейке), пересевают 2—3 бесцветные колонии (со среды Эндо или Левина) или колонии черного цвета (висмут-сульфит агар) на среду Ресселя и в пробирки со скошенным питательным агаром. При отсутствии подозрительных колоний на чашках делают высевы из среды Мюллера или селенитовой среды на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Для ускорения ответа ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с материалом, взятым из бесцветной колонии. Далее поступают так же, как и при идентификации гемокультуры.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика. Влабораторной практике широко применяют развернутую реакцию агглютинации Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей антител — агглютининов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Реакцию ставят одновременно с четырьмя антигенами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяют для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела появляются на 1-й неделе, накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются в разгар заболевания, накапливаются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. У людей, вакцинированных против брюшного тифа и парати-фов, также наблюдается положительная реакция Видаля, причем в довольно высоком титре, поэтому «инфекционный Ви-даль» удается отличить от «прививочного» только по нарастанию титра агглютининов у больных в процессе заболевания. Реакцию Видаля ставят в четырех рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные. Для контроля каждого диагностикума в пробирки вносят по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в который добавляют 2 капли диагностикума. В контрольной пробирке с
1 мл сыворотки (без диагностикума) не должно быть хлопьев. При спонтанной агглютинации реакция не учитывается. Диагностический титр реакции Видаля равен 1:200. Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию непрямой И-гемаг-глютинации, с помощью которой в сыворотке крови людей определяют присутствие антител к К/-антигену. В качестве антигена используют эритроцитарный Р?-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека 1(0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Fz’-антиге-ном S.enterica биовара typhi. Готовят разведения испытуемой сыворотки от 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубренными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательной реакции, так же как и в контроле, эритроциты осаждаются на дно пробирки и имеют виддиска с ровными краями («пуговки»). Диагностическое значение имеет титр пассивной Й-гемагглютинации, начиная с 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови у которых дает положительный результат в РНГА с эритроцитарным F/f-диагностикумом, рассматривают как подозрительных на носительство S.enterica биовара typhi и подвергают многократному бактериологическому обследованию.
• Микробиологическая диагностика сальмонеллезов
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ: микробиологическая диагностика сальмонеллезов принципиально не отличается от диагностики брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика не применяется по причине большого числа сероваров возбудителей.
• Микробиологическая диагностика кишечного иерсиниоза
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь, моча, спинномозговая жидкость.
МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:
Бактериологическое исследование.Посев материала на дифференциально-диагностические (среда Эндо, Мак-Конки, СБТС-агар с желчью и бромтимоловым синим) и селективные (CIN-arap с антибиотиками цефсулодином и новобиоцином) плотные среды или жидкие среды обогащения (буферно-казе-иново-дрожжевой бульон, 1 %, пептонная вода с рН 7,6—7,8). Посевы инкубируют при 25 «С в течение 24—48 ч. Идентификация чистой культуры осуществляется на основании морфологии, подвижности, тинкториальных свойств (грамотрица-
тельные палочки с закругленными концами и характерным биполярным окрашиванием, неспорообразующие, перитрихи), культуральных, биохимических признаков.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика.Диагностическое значение имеет обнаружение антител к поверхностным антигенам возбудителей наиболее распространенных серотипов (03, 04, 05, 06, 08, 09) в РА. Положительной считается РА в титре не менее 1:160. Разработаны также ИФА-тесты.
• Микробиологическая диагностика кишечного дисбактериоза
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование.Имеет ориентировочное значение. При резко выраженном дисбактериозе в мазках преобладают микроорганизмы определенных видов (например, дрожжеподобные грибы, стафилококки и др.) на фоне существенного уменьшения грамотрицательной микрофлоры.
Бактериологическое исследование.Проводится количественное исследование состава микрофлоры кишечника. Для этого из исследуемого материала готовят разведения Ю -2 , 10 -4 , Ю -6 и т.д. Первичные посевы по 0,1 мл каждого разведения производят параллельно на несколько питательных сред (Эндо, кровяной агар, ЖСА, агар Сабуро и др.) и инкубируют при 37 °С. Подсчитывают число выросших колоний и определяют число КОЕ в 1 г материала. Проводят отсев 2—3 колоний каждого вида для выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов.
Дляобнаружения анаэробных Bifidobacterium spp. делают мерные посевы материала в разведениях 10″ 7 и выше в пробирки с 13—15 мл модифицированной среды Блаурокка, в состав которой входит печеночный бульон, пептон — 1 %, лактоза — 1 %, хлорид натрия — 0,5 %, цистин — 0,01 %, агар-агар — 0,75%, твин-80 — 0,1 %. При росте Bifidobacterium spp. через 24—48 ч происходит помутнение всей среды с образованием тяжей или отдельных колоний. Готовят мазки и окрашивают по методу Грама. Выделение чистых культур Bifidobacterium spp. является весьма трудоемким и практически необязательным. При необходимости идентификацию представителей рода осуществляют по биохимическим свойствам.
Для оценки результатов бактериологического исследования
сопоставляют полученные данные с количественным содержанием микроорганизмов в норме. Ориентировочные критерии нормальной микрофлоры толстой кишки представлены в табл. 13.2.3.
Таблица 13.2.3. Критерии нормы кишечной флоры
Патогенные микробы сем. Enterobacteriaceae О
Общее количество E.coli, млн/г 300—400
E.coli со слабовыраженными ферментативными
свойствами, % До 10
E.coli с гемолитическими свойствами, % Нет
Энтеробактерии (лактозоотрицательные и лактозополо
жительные): Hafnia, Aerobacter, Citrobacter, Klebsiella,
Serratia, % До 5
Гемолитический стафилококк по отношению ко
всем кокковым формам, % Нет
Bifidobacterium spp. (рост при посеве разведения) 10 и выше
Бактерии рода Proteus Нет
При кишечном дисбактериозе происходит значительное снижение облигатной анаэробной микрофлоры, и в первую очередь Bifidobacterium spp., а также увеличение аэробных видов, в частности E.coli, содержание которых может превышать 10 11 микробных клеток в 1 г испражнений. Увеличивается частота обнаружения штаммов E.coli со слабой ферментацией лактозы и имеющих гемолитические свойства (до 30—40 %), гемолитических и негемолитических стафилококков, бактерий рода Proteus, грибов рода Candida (до 15—16 %). У лиц с дис-бактериозами более часто обнаруживают лактозоотрицательные и лактозоположительные энтеробактерии, относящиеся к родам Hafnia, Aerobacter, Citrobacter. Для микроорганизмов, в норме отсутствующих в испражнениях или имеющихся в небольшом количестве, показателем дисбактериоза будет содержание их 10 5 —10 6 и выше КОЕ в 1 г материала (Proteus spp., Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida spp.). Для окончательного заключения о кишечном дисбактериозе важное значение имеет повторное его выявление в динамике обследования больного.
• Диагностические, профилактические и лечебные препараты
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Лучшие изречения: Увлечёшься девушкой-вырастут хвосты, займёшься учебой-вырастут рога 9538 — | 7542 — или читать все.
193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.
Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно
источник
Реакция Видаля. Со второй недели заболевания в крови больных накапливаются антитела против возбудителя инфекции. Для их выявления исследуют сыворотку крови больного в реакции агглютинации. В качестве антигена используют убитые культуры сальмонелл — диагностикумы.
Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида.
Кровь (2-3 мл) из мякоти пальца или локтевой вены собирают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию. В лаборатории пробирку ставят в термостат на 20-30 мин для образования сгустка, затем пастеровской пипеткой обводят сгусток, чтобы отделить от стенки пробирки, и ставят на 30-40 мин на холод. Отделившуюся сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции агглютинации с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифов. Для получения сыворотки кровь можно отцентрифугировать.
При возникновении инфекционного процесса — брюшного тифа или паратифов — в организме вырабатываются О- и Н-антитела к одноименным антигенам возбудителя.
О-антитела появляются первыми и исчезают довольно быстро. Н-антитела сохраняются долго. То же самое происходит и при вакцинации, поэтому положительная реакция Видаля с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших (анамнестическая реакция), и у привитых (прививочная). Исходя из этого, реакцию Видаля ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы).
Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В.
Реакцию Видаля широко используют, так как она проста и не требует специальных условий.
Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным (см. главу 12). В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки (табл. 36).
Таблица 36. Возможный результат реакции агглютинации
Примечание. В практике реакцию Видаля ставят с четырьмя диагностикумами: брюшного тифа «О» и «Н», а паратифов А и В — с диагностикумами «ОН».
Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки — 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. Таким образом, нарастание титра антител в сыворотке крови служит показателем заболевания.
В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей.
Реакция Vi-гемагглютинации. Это наиболее чувствительная реакция для выявления антител.
Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi-антиген и приобретают при этом способность агглютиниповаться соответствующими Vi-антителами.
Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами.
Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут:
1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; З) Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида.
Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в пластмассовых пластинах с лунками.
Кровь у больного берут так же, как для реакции Видаля. Получают сыворотку. Из сыворотки готовят двукратные серийные разведения, начиная с 1:10 до 1:160.
По 0,5 мл каждого разведения вносят в лунку и прибавляют по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Реакцию ставят в объеме 0,75 мл.
Контролем служат: 1) стандартная агглютинирующая монорецепторная сыворотка + диагностикум — реакция должна быть положительной до титра сыворотки; 2) диагностикум в изотоническом растворе натрия хлорида (контроль) — реакция должна быть отрицательной.
Содержимое лунок тщательно перемешивают, ставят в термостат на 2 ч и оставляют при комнатной температуре до следующего дня (на 18-24 ч).
Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума.
Результаты учитывают по четырехкрестной системе:
++++ эритроциты полностью агглютинированы — осадок на дне лунки в виде «зонтика»;
+++ «зонтик» меньше, не все эритроциты агглютинировались;
++ «зонтик» маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов;
— реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки.
1. В какой период заболевания ставят реакцию Видаля?
2. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции Видаля?
3. С какими диагностикумами ставят реакцию Видаля?
4. Какая из серологических реакций является самой чувствительной при диагностике тифопаратифозных инфекций?
5. Каким диагностикумом пользуются при постановке реакции Vi-гемагглютинации?
6. Какой сывороткой определяют наличие Vi-антигена у исследуемой культуры?
7. Какое значение имеет определение Vi-фаготипа?
Возьмите у преподавателя О- и Н-диагностикумы из сальмонелл тифа, паратифа А и паратифа В и сыворотку больного. Поставьте реакцию Видаля.
Питательные среды
Среды ЭМС, Плоскирева, висмут-сульфитный агар выпускаются медицинской промышленностью в виде сухого порошка. Их готовят согласно указаниям на этикетке: отвешивают определенное количество порошка, наливают соответствующее количество воды, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри.
Среда Рассела. В 950 мл дистиллированной воды добавляют 40 г сухой питательной среды и прибавляют 5 г питательного агара. Нагревают до кипения и растворения порошков. В 50 мл дистиллированной воды растворяют 1 г х. ч. глюкозы и добавляют к приготовленной смеси. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл, стерилизуют текучим паром (2 дня по 2 мин) и скашивают так, чтобы оставался столбик. Среду Рассела с маннитом и сахарозой готовят так же.
Среда Олькеницкого из сухого агара. 2,5 г сухого питательного агара расплавляют в 100 мл дистиллированной воды. В остуженный до 50° С агар прибавляют все ингредиенты, указанные в рецептуре (этикетке). Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют текучим паром (3 дня по 20 мин) и затем скашивают. Готовая среда должна быть бледно-розового цвета.
Дата добавления: 2016-11-22 ; просмотров: 499 | Нарушение авторских прав
источник
С 8-го дня заболевания в крови у больных брюшным тифом можно обнаружить агглютинины. Для постановки реакции агглютинации необходимо иметь сыворотку больного и диагностикумы – взвеси убитых бактерий брюшного тифа, паратифы А и В (реакция Видаля). У больного из вены берут в пробирку 1-2 мл крови. Для ускорения свертывания крови пробирку ставят на 30 минут в термостат. Затем свернувшуюся кровь некоторое время дают отстояться на холоде, далее осторожно отделяют сгусток обожженной петлей от стенок пробирки, после чего сыворотку отсасывают. Кровь для» получения сыворотки можно взять и посредством укола мякоти безымянного пальца. Из сыворотки с помощью физиологического раствора готовят три ряда разведений: 1:100, 1:200, 1:400, 1:600 каждое в объеме 1 мл. Затем в пробирки с разведенной сывороткой добавляют по 1-2 капле диагностикумов тифа и паратифа А и В. Для контроля реакции в конце каждого ряда помещают пробирку, в которой смешивают по 1 мл физиологического раствора и по 1-2 капле соответствующих диагностикумов. Пробирки ставят на 2 часа в термостат, после чего учитывают предварительный результат реакции. Окончательный результат отмечают на второй день после стояния пробирок в условиях комнатной температуры. Реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки не менее чем 1:200.
Реакция Видаля может дать положительный результат не только у больных, но и у лиц, до того перенесших брюшной тиф («анамнестический Видаль»). Кроме того, положительная реакция иногда является результатом проведенных ранее прививок («прививочный Видаль»). «Анамнестический» и «прививочный Видаль» отличают от инфекционного следующим образом. Реакцию Видаля ставят повторно на протяжении болезни. В случае заболевания брюшным тифом с каждым днем происходит нарастание титра антител, то есть положительная реакция отмечается все в больших разведениях сыворотки. Этого не наблюдается при «анамнестическом» или «прививочном Видале».
Для этиотропного лечения используют антибиотики или другие химиотерапевтические препараты.
Специфическая профилактика тифо-паратифозного заболевания проводится убитыми и химическими вакцинами по эпидемическим показаниям, контактным лицам — экстренная фагопрофилактика сальмонеллезными поливалентными бактериофагами.
Вопросы для обсуждения
1. Классификация и общая характеристика семейства энтеробактерий.
2. Патогенез брюшного тифа и паратифа А и В.
3. Методы лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифа А и В в
различные сроки заболевания.
4. Бактериологический метод исследования брюшного тифа и
паратифа А и В в разные стадии патогенеза заболевания.
5. Выявление бактерионосительства при брюшном тифе.
6. Серологический метод диагностики брюшного тифа и паратифа А и В.
7. Лечение и профилактика брюшного тифа и паратифа А и В.
Самостоятельная работа
Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного на гемокультуру:
1. Произвести посев исследуемого материала на среду Рапопорт.
2. Изучить изменение цвета среды (помутнение; наличие пузырьков газа в поплавке).
3. Пересеять на среду Эндо.
4. Занести полученные данные в протокол.
5. Изучить различия колоний на среде Эндо. Отобрать подозрительные колонии и произвести посев для накопления чистой культуры. Описать культуральные свойства.
6. Исследовать чистую культуру по морфологическим, тинкториальным, биохимическим, антигенным свойствам. Полученные данные занести в протокол.
7. Идентифицировать чистую культуру возбудителя.
Серологическая диагностика брюшного тифа
1. Учесть результаты реакции Видаля.
2. Полученные данные занести в протокол.
Протокол бактериологического исследования
Материал для исследования:
Этапы исследования | Ход исследования | Результаты исследования с предварительными выводами |
Дата добавления: 2015-10-19 ; просмотров: 4370 . Нарушение авторских прав
источник
Начиная со 2-й недели заболевания (иногда с конца 1-й) брюшным тифом или паратифами проводят серологическое исследование сыворотки крови больного с целью обнаружения специфических антител /AT/ — ставят реакцию агглютинации Видаля или реакцию непрямой гемагглютинации /РНГА/. К этому времени в крови больного накапливаются АТ-агглютинины, причем в разгар заболевания обнаруживаются О- и: Н-агглютинины, а после выздоровления или после прививок надолго остаются только И-агглютинины. Это дает возможность дифференцировать реакцию Видаля инфекционной природы от реакции прививочной или анамнестической путем постановки реакции раздельно с О- и Н-диагностикумами. Диагностический титр реакции Видаля у больного равен 1:200. Чтобы подтвердить диагноз в сомнительных случаях, проводят повторно постановку реакции у того же больного с интервалом около недели (парные сыворотки): при наличии заболевания титр реакции возрастает.
Методика постановки реакции Видаля. Берут 4 ряда пробирок по 7 пробирок- в каждом ряду. В 5 пробирках каждого ряда готовят разведения сыворотки больного от 1:50 до ] :800 в объеме 1,0 мл. 6-ая пробирка каждого ряда — контроль Аг. 7-ая пробирка — контроль испытуемой сыворотки. Затем во все 6 пробирок первого ряда вносят по 3 капли брюшнотифозного О-диагностикума, в 6 пробирок второго ряда брюшнотифозный Н-диагностикум, в пробирки третьего и четвертого ряда соответственно паратифозный А- и паратифозный В-диагностикумы. Инкубация при 37°С.
Предварительный учет через 2 часа инкубации, титр окончательно определяют через 18-24 часа. Результат оформить в виде таблицы.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) также широко применяется. Она более чувствительна, чем реакция Видаля и результат получают через 2-3 часа, а не через сутки, как при реакции Видаля. РНГА с брюшнотифозным О-диагностикумом позволяет выявить острые формы брюшного тифа, что особенно ценно в диагностике легких, абортивных форм у детей. Диагностическим титром О-антител считается разведение сыворотки 1:640. РНГА с брюшнотифозным Vi-диагностикумом ставят для выявления хронического бактерионосительства, так как при формировании брюшнотифозного бактерионосительства характерно появление Vi-антител. Диагностический титр реакции 1:40.
Наиболее точные результаты, позволяющие выявить специфические антитела в сыворотке больного, дает РНГА с эритроцитарными диагностикумами, содержащими отдельные О- и Н-антигенные рецепторы, присущие S.typhi (09 и Hd), S.paratyphi A(O2 и На) и S.paratyphi В (04 и Н6).
4. Факторы патогенности. Возбудители брюшного тифа, как и другие энтеробактерии имеют эндотоксин, освобождающийся при разрушении бактерий.
У S.typhi имеется Vi-антиген, связанный с микрокапсулой и относящийся к К-антигенам. Это высокомолекулярный полимер, который состоит из соединенных между собой остатков N-ацетилгалактозаминуроновой кислоты. С наличием Vi-антигена связывают повышенную вирулентность брюшнотифозных бактерий. Содержащие Vi-антиген культуры S.typhi (обычно это штаммы, свежевыделенные от больных) называются V-формой, не имеющие его — W-формой. Культуры в V-форме агглютинируются анти-У1-сыворот-кой и не агглютинируются анти-О-сывороткой, так как О-антиген «маскирован» более поверхностно расположенным Vi-антигеном. После прогревания бактерий при 100°С в течение 30 минут О-агглютинабильность восстанавливается вследствие разрушения Vi-антигена. Этот антиген является рецептором дл брюшнотифозных Vi-фагов, на чем основано фаготипирование S.typhi.
У возбудителей брюшного тифа обнаружены факторы адгезии и колонизации. У них имеются факторы инвазии. Важной особенностью возбудителей является способность размножаться в макрофагах, что способствует их выживанию и распространению по всему организму.
Попавшие через рот возбудители в инфекционной дозе (не менее 10 млн живых бактерий) в течение инкубационного периода, который обычно длится 10-14 дней, прикрепляются к стенке гонкой кишки, начинают размножаться на поверхности эпителия (адгезия и первичная колонизация) и. далее, проникают в лимфатические образования тонкого кишечника — пейеровы бляшки и солидарные фолликулы (инвазия), где фагоцитируются макрофагами. Находясь в фагосомах макрофагов, возбудители не погибают, а интенсивно размножаются. Вместе с макрофагами по лимфатическим путям они проникают в мезентериальные и забрюшинные лимфатические узлы, где развивается воспалительный процесс и продолжается фагоцитоз новыми макрофагами и накопление возбудителей. Это приводит к прорыву гемато-лимфатического барьера и попаданию возбудителей в кровяное русло, где часть их погибает под действием бактерицидных свойств крови и в результате фагоцитоза.
В течение 1 -ой недели заболевания у всех больных имеется бактериемия, которая при дальнейшем течении болезни постепенно прекращается. Часть возбудителей с кровью заносится в паренхиматозные органы, и в костный мозг, где продолжается их размножение в макрофагах, а также гибель, при которой высвобождаются новые порции эндотоксина.
С конца 1-ой — начала 2-ой недели заболевания возникают защитные реакции: образуются специфические антитела, активируется фагоцитоз, однако преобладают проявления гуморального иммунитета. Организм больного в значительной степени освобождается от возбудителей, уменьшается интоксикация, но нарастает воспалительный процесс в лимфатическом аппарате тонкого кишечника. Этому способствует вторичный занос в просвет тонкого кишечника из желчного пузыря и инвазия возбудителей в лимфатические элементы. В желчном пузыре бактерии находятся в благоприятных условиях и защищены от воздействия антител, что способствует их длительному сохранению.
Различают 5 периодов в развитии воспалительного процесса в лимфатических элементах стенки кишечника: мозговидное набухание, некроз фолликулов, отторжение некротических масс и образование язв, очищение язв, заживление язв. Начиная с конца 2-ой — начала 3-ей недели возбудители вместе с некротическими массами поступают
в просвет тонкой кишки и выделяются с испражнениями обычно вплоть до клинического выздоровления. Иногда бактериовыдсление затягивается и может перейти в хроническое бактерионосительство (у 3-5% переболевших).
2. 3. Методика постановки реакции Видаля. Берут 4 ряда пробирок по 7 пробирок- в каждом ряду. В 5 пробирках каждого ряда готовят разведения сыворотки больного от 1:50 до ] :800 в объеме 1,0 мл. 6-ая пробирка каждого ряда — контроль Аг. 7-ая пробирка — контроль испытуемой сыворотки. Затем во все 6 пробирок первого ряда вносят по 3 капли брюшнотифозного О-диагностикума, в 6 пробирок второго ряда брюшнотифозный Н-диагностикум, в пробирки третьего и четвертого ряда соответственно паратифозный А- и паратифозный В-диагностикумы. Инкубация при 37°С.
Предварительный учет через 2 часа инкубации, титр окончательно определяют через 18-24 часа. Результат оформить в виде таблицы.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) также широко применяется. Она более чувствительна, чем реакция Видаля и результат получают через 2-3 часа, а не через сутки, как при реакции Видаля. РНГА с брюшнотифозным О-диагностикумом позволяет выявить острые формы брюшного тифа, что особенно ценно в диагностике легких, абортивных форм у детей. Диагностическим титром О-антител считается разведение сыворотки 1:640. РНГА с брюшнотифозным Vi-диагностикумом ставят для выявления хронического бактерионосительства, так как при формировании брюшнотифозного бактерионосительства характерно появление Vi-антител. Диагностический титр реакции 1:40.
Наиболее точные результаты, позволяющие выявить специфические антитела в сыворотке больного, дает РНГА с эритроцитарными диагностикумами, содержащими отдельные О- и Н-антигенные рецепторы, присущие S.typhi (09 и Hd), S.paratyphi A(O2 и На) и S.paratyphi В (04 и Н6).
4. 1) Вакцина брюшнотифозная спиртовая сухая — инактивированные этиловым спиртом лиофилизированные брюшнотифозные бактерии (штамм 4446). Применяется для профилактики брюшного тифа у взрослых.
2) Вакцина брюшнотифозная Ви-полисахаридная жидкая — раствор капсульного полисахарида, выделенного из культуры брюшнотифозных бактерий, очищенного ферментативными и физико-химическими методами. Введение вакцины приводит к быстрому и интенсивному образованию Ат и формированию резистентное™ через 1-2 недели. Применяется для профилактики брюшного тифа у взрослых.
3) Вакцина брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Ви-антигеном — состоит из двух вышеописанных вакцин, которые соединяют непосредственно перед применением. Вакцина стимулирует клеточный иммунитет и образование Ат к О- и Ви-антигенам возбудителя брюшного тифа. Предназначена для профилактики брюшного тифа у детей 7-14 лет.
4) Бактериофаг брюшнотифозный в таблетках с кислотоуспюйчивым покрытием — таблетки из концентрированного лиофилизированного фаголизата сальмонелл брюшного тифа, покрытые слоем ацетилфталилцеллюлезы (АЦФ) или содержащие пектин. Препарат предназначен для профилактики брюшного тифа по эпидемическим показаниям в семейном очаге, больнице, населенном пункте и пр.
1. Пищевые токсикоинфекции чаще всего вызываются сальмонеллами, входящими в серогруппы В, С, D, Е. Все они имеют резервуар среди животных иптиц, т.е. эти заболевания являются зооантрононозными. Наиболее распространены следующие возбудители ПТИ:
— S.typhimurium (группа В) — источником инфекции могут быть мыши, голуби, домашние птицы и их яйца. Вторично могут быть заражены другие продукты.
— S.choleraesuis (группа С) — источник инфекции — свиньи.
— S.enteritidis (группа D) — источник инфекции — крупный рогатый скот.
Патогенез. В патогенезе пищевых токсикоинфекции важное значение имеет попадание с пищей большого количества возбудителей и их эндотоксина. Прикрепившись к эпителию кишечника, сальмонеллы начинают размножаться, проникают в подслизистое пространство и в лимфатические образования в стенке кишечника, где происходит их дальнейшее размножение и гибель с высвобождением эндотоксина. Массивное накопление эндотоксина (вместе с эндотоксином, попавшим извне) приводит к интоксикации, часто тяжелой (с лихорадочным состоянием, нарушениями со стороны нервной и сосудистой систем, вплоть до коллапса.) и диарее.
При меньшем количестве сальмонелл, попавших в организм с пищей, заболевание может протекать в виде гастроэнтерита с диареей, но без выраженной интоксикации и без подъема температуры.
2. Исследуемый материал: с 1 недели – кровь.
со 2 недели – моча, желчь, соскобы.
3. На 1-й неделе заболевания исследуют кровь с целью выделения возбудителя. Гемокультуру выделяют в 100% случаев заболевания. Примерно у 40% заболевших удается выделить гемокультуру и на 2-й неделе заболевания при условии посева 15-20 мл крови. Кровь берут из локтевой вены в объеме 10 мл и засевают в колбу со 100 мл жидкой питательной среды (среды обогащения для «чистого» материала — среда Раппопорт или желчный бульон). Следует соблюдать соотношение крови и питательной среды не менее 1:10. чтобы не проявилось бактерицидное действие крови. Далее делают высев со среды обогащения на чашку со средой Эндо, где в положительном случае вырастают лактозонегативные (лак-) колонии- бесцветные или бледнорозовые полупрозрачные колонии. Колонии засевают в комбинированные дифференциально-диагностические среды (Клиглсра, Рсссела и др.). Выделенную лактозонегативную культуру идентифицируют на основании изучения биохимических и антигенных свойств. Биохимическое тестирование проводят на различных дифференциально-диагностических средах или более совершенными методами — в системе API 20 Е, с помощью энтеротестов, «Enterotube’II Roche и др. Серологическая идентификация осуществляется с помощью агглютинирующих адсорбированных сальмонеллезных О- и Н-сывороток (см. с. 28).
С 3-й недели заболевания (нередко с конца 2-й) проводят повторные высевы возбудителя из испражнений. Со 2-й недели заболевания возможно выделить возбудителя также из мочи, желчи, соскоба из розеол, костного мозга, но, практически, это делают редко. Бактериологическое исследование испражнений несколько отличается от исследования крови, поскольку этот материал содержит постороннюю микрофлору. Пробу испражнений разводят в десять раз физиологическим раствором NaCl и далее надосадочную жидкость в соотношении 1:5 засевают на среды обогащения (среды, предназначенные для посева загрязненных материалов — селенитовый бульон или среду Мюллера). Затем делают пересев на чашки со средами Эндо, Плоскирева, или висмут-сульфит агаром. На двух последних значительно подавляется рост посторонней микрофлоры, что способствует выделению возбудителя.
Как правило, одновременно с посевом на среды обогащения, пробу испражнений засевают непосредственно на чашки со средами Плоскирева или висмут-сульфит агара. Если на них вырастают колонии возбудителя, срок бактериологического диагноза становится на сутки короче. Выросшие подозрительные колонии — лактозонегативные на средах Эндо и Плоскирева и черные или коричневые на висмут-сульфит агаре — отсевают на комбинированные среды Клиглера, Рассела и др., т.е. дальнейшее выделение чистой культуры возбудителя и его идентификация проводится так же, как и при исследовании крови.
4. Названии среды: Висмут-сульфит агар, селективная среда; плотная, в чашке Петри молочно-зеленовато цвета. Состав: МПА, сульфит висмута. сульфат железа. фосфат натрия, бриллиантовый зеленый. Назначение: для сальмонелл и протея. Принцип действия: сальмонеллы образуют из сульфата железа сероводород, который взаимодействуя с бесцветным сульфитом висмута, переводит его в сульфид висмута черного цвета. Поэтому колонии сальмонелл имеют черный цвет (или черные с коричневатым или гемнозеленым оттенком). Рост Грам- флоры и многих энтеробактерий подавляется. Эшерихин образуют коричневатые колонии, вырастающие значительно позже.
1. Протеи являются наиболее распространенными возбудителями ОКИ среди условно-патогенных энтеробактерий. Род Proteus включает несколько видов, наибольшее значение в инфекционной патологии имеют роды: P.mirabilis и P.vulgaris.
2. Патогенез пищевой протейной инфекции связан с массивным проникновением в ЖКТ бактерий протея и некоторого количества свободного эндотоксина. Бактерии попадают в лимфатический аппарат кишечной стенки, где происходит их интенсивное разрушение и освобождение большого количества эндотоксина. Это приводит к общей интоксикации организма через несколько часов после приема пищи, что характерно для ПТИ.
При наличии у штамма протея, попавшего в пищеварительный тракт, дополнительных факторов патогенности для развития ОКИ достаточно значительно меньшей дозы бактерий. Такие штаммы колонизируют слизистую оболочку тонкого кишечника, не проникая в клетки эпителия. Основное патологическое действие оказывает энтеротоксин, нарушающий функции аденилатциклазной системы эпителиоцитов. В результате развивается гастроэнтерит с диарейными явлениями и, как правило, без выраженной интоксикации. Заражение обычно происходит от больных или бактерионосителей.
Протеи могут вызывать также гнойно-воспалительные заболевания различной локализации: холециститы, пиелонефриты, циститы, остеомиелиты, отиты, конъюнктивиты и др., часто имеющие хроническое течение. Заболевания могут развиваться как эндогенная инфекция, но чаще это внутрибольничная экзогенная инфекция с контактно-бытовым способом заражения.
Этап исследования | Ход исследования | Результат |
1-й | Посев исследуемого материала на: а) среду Плоскирева или б) висмут-сульфит агар. Эти среды содержат соли желчных кислот и подавляют роение протея, поэтому протей вырастает в виде изолированных колоний. | а) На среде Плоскирева -крупные желтовато-розовые (лак-) полупрозрачные колонии; б) На висмут-сульфит агаре колонии коричневатые, после их снятия остается темнокоричневая редукционная зона. |
2-й | Посев колоний на скошенный агар по Шукевичу. | На скошенном агаре отмечается ползучий рост. |
3-й | Идентификация выделенной культуры:
|
|
4-й | Учет полученных результатов и заключение по проведенному исследованию. | Из исследуемого материала выделена культура Proteus, типичная по свойствам. |
4. При диагностике ПТИ, вызванных условно-патогенными энтеробактериями, к которым относится и протей, необходимо не только выделить возбудителя, но и доказать массивное обсеменение исследуемых материалов и, особенно, пищевых продуктов. Для этого из исследуемой пробы готовят десятикратные разведения от 10
8 , из которых делают высевы на чашки с дифференциально-диагностическими средами.
Доказательным является рост колоний из разведений 10 5 — 10 6 и выше.
1. Для бактерий рода Salmonella характерно наличие следующих антигенов: О-антигена, называемого соматическим, Н-антигена (жгутикового) и К-антигена (футлярного, или оболочечного).
О-антиген термостабилен, расположен в клеточной стенке, по своей природе является полисахаридно-белково-липидным комплексом. Антигенная специфичность О-антигена связана с полисахаридом, который неоднороден и у сальмонелл одного вида состоит из нескольких антигенных рецепторов. Антигенные рецепторы обозначаются цифрами 1,2,3,4. и т.д.
Футлярные К-антигены термолабильны, находятся в клеточной стенке более поверхностно, чем О-антиген. У сальмонелл обнаружены относящиеся к К-антигенам М-Аг и Vi-Ar.
Н-антиген термолабилен, по химической природе является белком (флагеллин), располагается в жгутиках. У бактерий одного и того же вида Н-антиген может состоять из двух антигенных комплексов, отличающихся по серологической специфичности. Такие бактерии называются двухфазными и могут существовать в двух фазах, для каждой из которых характерно наличие соответствующих антигенных комплексов.
Этап | Ход исследования | Результат |
Предварительный этап | Посев исследуемого материала на селенитовую среду или среду Мюллера | Рост культуры вызывает помутнение среды |
1-й | Посев исходного исследуемого материала или пересев со среды обогащения на чашки со средами Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агар | На чашках выросли различного вида колонии, в том числе полупрозрачные бесцветные лактозонегативные на средах Эндо и Плоскирева; коричневые и черные — на висмут-сульфит агаре |
2-й | Пересев подозрительных колоний уколом и штрихом на комбинированные среды суспензируют в дистиллированной, воде и засевают на тест-системы API-20 Е или др. | На среде Кл игл ера: столбик желтый, скошенная часть розового цвета, почернение в нижней части среды (культура lac-,glu+H2S),B среде -пузырьки газа. На среде Рассела: столбик синего Цвета, скошенная часть розовая (культура lac-. glu+), пузырьки газа |
Идентификация выделенной культуры: а) изучение морфологических свойств в мазке, окрашенном по Граму; б) учет биохимического тестирования в тест-системе API-20 E; в) серологическая идентификация: 1. реакция агглютинации на стекле с поливалентной сальмоиеллезной О-сывороткой (рецепторы 0-2, О-4, О-7. 0-9; могут входить и другие рецепторы); | а) при микроскопии видны небольшие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные беспорядочно; б) результаты на API-20 E тест-системе; в) I. При положительной реакции культура относится к ролу Salmonella; 2.0-2 0-4 0-7 0-9 | |
3-й | 2. Реакция агглютинации на стекле с отдельными монорецепторными 0- сыворотками, входившими в состав поливалентной сыворотки для определения серогруппы сальмонелл; 3. реакция агглютинации на стекле с монорецепторными Н-сыворотками для определения вида (серовара); г) постановка теста на определение фаготипа д) проверка чувствительности культуры к антибиотикам методом бумажных дисков. | Культура относится к серогруппе… 3. Культура является S. г) Культура является фаготипом . д) Учет чувствительности к антибиотикам |
4-й | Учет полученных результатов и заключение | Заключение: из . .(материала) больного выделена культура S. типичная по свойствам, чувствительна к антибиотикам . |
3.Серологическая идентификация сальмонелл проводится в реакции агглютинации на стекле с агглютинирующими адсорбированными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками. Такие сыворотки получают методом адсорбции антител по Кастеллани из видовых иммунных сывороток (путем насыщения сыворотки родственными бактериями, на которых адсорбируются группоспецифические антитела). Агглютинирующие адсорбированные сальмонеллезные сыворотки могут быть поливалентными и монорецепторными, т.е. содержать несколько различных антител (рецепторов) или только одно.
Последовательность серологической идентификации выделенной культуры:
1. Для установления принадлежности культуры к роду Salmonella, а именно к наиболее распространенным серогруппам — А, В, С, D, Е — культуру испытывают в реакции агглютинации с адсорбированной поливалентной О-сывороткой, содержащей антитела против антигенных рецептеров 2, 4, 7, 9, 3, 10. При необходимости используют монорецепторные О-сыворотки против редких серогрупп. При диагностике брюшного тифа, паратифа А и паратифа В можно использовать смесь О-сывороток, содержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.
2. При положительном результате для определения принадлежности испытуемой культуры к определенной серологической группе ставят реакцию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: рецептор 2 (серогруппа А), рецептор 4 (серогруппа В), рецептор 7 (серогруппа С), рецептор 9 (серогруппа D) и т.д.
3. После установления серогруппы, к которой относится культура, определяют ее видовую принадлежность (серовариант) с помощью реакции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Далее проводят реакцию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.
4. Отравление остатками пищи.
5. Среда Клиглера: комбинированная, дифференциально-диагностическая, плотная, в пробирках в виде скошенного столбика». Цвет среды: красновато-бурый. Компоненты: МПА, лактоза 1%, натрий тиосульфат, индикатор. Назначение: для отсева «подозрительных» колоний.
1. Лабораторный диагноз стафилококковой пищевой интоксикации основан на обнаружении стафилококкового энтеротоксина в материалах от больного и в пищевых продуктах и в выделении чистой культуры S.aureus, продуцирующей энтеротокисн.
Исследуемые материалы: испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.
Энтеротоксин обнаруживают в декантате или фильтрате из исследуемых материалов и в бульонной культуре стафилококков, выделенных из перечисленных материалов с помощью следующих методов:
— серологический — путем обнаружения стафилококкового энтеротоксина с помощью реакций РОНГА, ИФА, реакции преципитации в геле;
— биологический — путем постановки биологической пробы на котятах, у которых после введения исследуемого материала, содержащего стафилококковый энтеротоксин, через рот развивается рвота и понос.
Бактериологический — выделение коагулазоположительной культуры S.aureus с последующим обнаружением энтеротоксина и других факторов патогенности.
Как правило, в пище, послужившей причиной отравления, обнаруживают не менее 10 5 — 10 6 энтеротоксигенных стафилококков на 1г/мл продукта. Фаготипирование позволяет определить принадлежность стафилококковых культур, выделенных из пищи и из организма больного, к одному фаговару, и тем самым подтвердить их идентичность.
2. Энтеротоксины стафилококков относятся к простым токсинам и являются одноцепочечными белками с одной дисульфидной связью; молекулярная масса колеблется в пределах 26 000 -34 000. Энтеротоксины термостабильны (выдерживают кипячение в течение 20-30 минут), устойчивы к действию пищеварительных ферментов и к изменению рН в пределах 4,5 — 10,0. При воздействии формалина они не превращаются в анатоксины. Известно 7 антигенных вариантов энтеротоксинов: А, В, Cl, C2, СЗ, В, Е; их образование кодируют гены конвертирующих фагов. Пищевую интоксикацию вызывают преимущественно антигенные варианты (типы) А и В.
4. Патогенез. В отличие от многих энтеротоксинов, продуцируемых другими бактериями, стафилококковые энтеротоксины не нарушают функции аденилатциклазной системы эпителиоцитов. Обладая свойствами суперантигенов, они неспецифически стимулируют множество клонов лимфоцитов, что приводит к гиперсекреции цитокинов (интерлейкин-2) и развитию вторичной (опосредованной цитокинами) интоксикации. Избыточное накопление интерлейкина-2, кроме общей интоксикации организма способствует возбуждению гладкой мускулатуры кишечной стенки и повышению ее моторики, что приводит к развитию диареи. Есть данные, что энтеротоксин может оказывать и прямое воздействие на центры головного мозга (нейротропное действие), а также на клетки эпителия кишечника, с чем связана соответственно многократная рвота и диарея.
Обычно пищевые интоксикации вызывают кондитерские изделия с кремом, молочные, мясные, рыбные продукты, инфицированные стафилококками и находившиеся в условиях, способствующих размножению стафилококков и накоплению энтеротоксина.
Заболевание возникает через 2-4 часа после приема пищи. Отмечаются сильные боли в эпигастральной области, повторная рвота, слабость, падение артериального давления, иногда развивается коллапс; диарея не всегда выражена. Как правило, выздоровление наступает через 2-3 дня.
1. C.botulinum — возбудитель ботулизма. Ботулизм — тяжелая пищевая интоксикация, вызываемая ботулиническим токсином и характеризующаяся поражением нервной системы..
Вид C.botulinum образует экзотоксины, различающиеся по антигенным свойствам, и по этому признаку подразделяется на серотипы. Ботулотоксины всех типов обладают сходной биологической активностью и являются вариантами единого нейротоксина. Кроме нсйротоксического действия ботулотоксин обладает лейкотоксической, гемолитической и лецитиназной активностью.
Известны 8 антигенных вариантов ботулотоксина: А, В, Cl, C2, D, E, F, G. Токсинообразование типов С, D, Е закодировано в геноме конвертируемых бактериофагов и проявляется при интеграции профага в бактериальную хромосому; у остальных типов генетический контроль осуществляет непосредственно хромосома клетки.
Заболевания человека вызывают ботулотоксины типов А, В, Е, а также F. В организме человека С. botulinum размножаются слабо и не продуцируют токсина за редким исключением. Ботулотоксин накапливается в пищевых продуктах, инфицированных спорами С. botulunum, при их прорастании, если созданы анаэробные условия (например при консервировании). Для человека ботулотоксин — самый сильнодействующий бактериальный яд, губительно действующий в дозе 10 х г. Токсин полностью инактивируется при кипячении в течение 20 минут.
Токсин представляет собой полипептидную цепь с одной или несколькими внутримолекулярными связями, его молекулярная масса равна 150 000, он относится к бинарным токсинам.
Ботулотоксины всех типов продуцируются в виде токсичных белковых комплексов, состоящих из нейротоксина и нетоксичного белка. Белок является стабилизатором токсина, защищает его от разрушающего действия протеолитических ферментов и НС1.
Ботулотоксин в виде высокомолекулярного комплекса малотоксичен и является прототоксином. В результате мягкого протеолиза, осуществляемого у большинства типов токсина собственными эндогенными протеазами, а у типа Е экзогенными протеазами (например трипсином), прототоксин распадается на 2 субкомпонента: L-легкий и Н-тяжелый. Между ними сохраняется дисульфидная связь. L-субкомпонент соответствует фрагменту А (активатор) и оказывает токсическое действие на клетку-мишень (мотонейрон). Н-субкомпонент соответствует фрагменту В (акцептор) и осуществляет прикрепление к рецептору клетки-мишени.
2.Патогенез. Попав вместе с пищей в ЖКТ, ботулотоксин прикрепляется к клеткам эпителия кишечника и путем пиноцитоза попадает в лимфатические сосуды, затем в кровь и далее проходит гематоэнцефалический барьер. В организме он распадается на 2 субкомпонента: L-легкий и Н-тяжелый. Н-субкомпонент связывается с ганглиозидами пресимпатической мембраны мотонейронов. L-субкомпонент, действуя как эндопротеаза, блокирует секрецию ацетилхолина. Тем самым прерываются нервные импульсы, идущие от мотонейрона к мышце, что приводит к развитию вялых параличей. Ботулотоксин поражает мотонейроны спинальных моторных центров, продолговатого мозга и периферической нервной системы.
Экология. C.botulinum является сапронозом и вегетирует в почве, часто обнаруживается в кишечнике лошадей и других животных, реже встречается в кишечнике человека. Из почвы или испражнений споры возбудителя попадают на различные объекты и могут загрязнять пищевые продукты. В анаэробных условиях споры прорастают, вегетативные клетки продуцируют ботулотоксин. Чаще всего заболевание возникает при употреблении в пищу консервированных продуктов домашнего приготовления, что связано с их недостаточной стерилизацией.
3. Лабораторный диагноз ботулизма проводят одновременно в двух направлениях — обнаруживают ботулотоксин и выделяют возбудителя.
Исследуемые материалы: кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, моча, секционный материал, пищевые продукты. 1. Выявление ботулотоксина и определение его типа может быть осуществлено:
Серологическим методом с помощью серологических реакций РОНГА, ИФА, реакции преципитации в геле.
Бактериологический — выделение и идентификация культуры C.botulinum (как и других клостридий) проводят, используя методы выделения анаэробных бактерий.
4. Биопроба на мышах. Для этой цели кровь, фильтрат или центрифугат других исследуемых материалов разливают в 4 пробирки, в каждую из трех добавляют разные противоботулинические сыворотки А, В и Е, в 4-ю — нормальную сыворотку и инкубируют в термостате 30 минут. Затем содержимое пробирок вводят 4-м группам мышей (не менее 2-х мышей в каждой группе) и наблюдают за животными в течение 4-х суток. При наличии ботулотоксина выживают мыши только одной группы вследствие нейтрализации токсина гомологичной сывороткой, что позволяет определить тип ботулинического токсина.
5. Сыворотки противоботулинические типов А, В, Е лошадиные очищенные концентрированные жидкие — представляют собой специфические иммуноглобулинные сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных ботулиническими анатоксинами, очищенные, концентрированные. С лечебной целью сыворотку вводят в максимально ранние сроки с момента появления первых симптомов ботулизма. Для лечения заболеваний, вызванных неизвестным типом токсина ботулизма, используют смесь моновалентных сывороток. При известном типе токсина используют моновалентную сыворотку соответствующего типа.
1. Клостридии — возбудители псевдимембранозного колита.
Псевдомембранозный колит — тяжелое заболевание, вызываемое С. difficile, сопровождается общей интоксикацией и лихорадкой, схваткообразными болями в животе, диареей с примесью крови.
С. difficile обладает адгезивной активностью и продуцирует комплексный термолабильный токсин, состоящий из энтеротоксина (токсина А) и цитотоксина (токсин В).
Токсин А действует на гуанилатциклазную систему, стимулируя образование цГМФ, что приводит к развитию диареи. Этот токсин обладает слабым летальным действием (его определяют путем внутривенного введения токсина в разных разведениях экспериментальным животным). Токсин В ингибирует синтез белка, нарушает функции клеточных мембран с потерей К+ и обладает сильным летальным действием, превышающим в 1000 раз активность токсина А.
2.Патогенез псевдомембранозного колита. При попадании C.difficile в желудочно-кишечный тракт псевдомембранозный колит развивается у людей на фоне лечения антибиотиками. В результате антибиотикотерапии подавляется нормальная микрофлора толстого кишечника, что приводит к снижению колонизационной резистентности, обусловленной, главным образом бифидобактериями и бактероидами. Это создает благоприятные условия для адгезии и колонизации эпителия толстого кишечника антибиотикоустойчивыми штаммами С. difficile.
Образующийся комплексный токсин вызывает развитие язвенного пленчатого колита с диарейными явлениями и кровью в испражнениях. Слизистая толстого кишечника частично или полностью некротизируется, покрывается лейкоцитами и налетом фибрина (псевдомембрана). У детей грудного возраста заболевание может возникать и без применения антибиотиков.
3.Лабораторный диагноз псевдомембранозного колита. Исследуемые материалы: испражнения, рвотные массы, подозрительные пищевые продукты.
1) Бактериологический — выделение и идентификация возбудителя — С. difficile — проводится по тем же правилам, что и при других клостридиозах с установлением идентичности возбудителя, выделенного от больного и из пищевого продукта.
2) Серологический — определение токсинов серотипов А или В с помощью ИФА и встречного иммуноэлектрофореза.
источник