Меню Рубрики

Рнга при диагностике брюшного тифа

Реакция Видаля. Со второй недели заболевания в крови больных накапливаются антитела против возбудителя инфекции. Для их выявления исследуют сыворотку крови больного в реакции агглютинации. В качестве антигена используют убитые культуры сальмонелл — диагностикумы.

Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида.

Кровь (2-3 мл) из мякоти пальца или локтевой вены собирают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию. В лаборатории пробирку ставят в термостат на 20-30 мин для образования сгустка, затем пастеровской пипеткой обводят сгусток, чтобы отделить от стенки пробирки, и ставят на 30-40 мин на холод. Отделившуюся сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции агглютинации с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифов. Для получения сыворотки кровь можно отцентрифугировать.

При возникновении инфекционного процесса — брюшного тифа или паратифов — в организме вырабатываются О- и Н-антитела к одноименным антигенам возбудителя.

О-антитела появляются первыми и исчезают довольно быстро. Н-антитела сохраняются долго. То же самое происходит и при вакцинации, поэтому положительная реакция Видаля с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших (анамнестическая реакция), и у привитых (прививочная). Исходя из этого, реакцию Видаля ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы).

Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В.

Реакцию Видаля широко используют, так как она проста и не требует специальных условий.

Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным (см. главу 12). В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки (табл. 36).


Таблица 36. Возможный результат реакции агглютинации

Примечание. В практике реакцию Видаля ставят с четырьмя диагностикумами: брюшного тифа «О» и «Н», а паратифов А и В — с диагностикумами «ОН».

Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки — 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. Таким образом, нарастание титра антител в сыворотке крови служит показателем заболевания.

В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей.

Реакция Vi-гемагглютинации. Это наиболее чувствительная реакция для выявления антител.

Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi-антиген и приобретают при этом способность агглютиниповаться соответствующими Vi-антителами.

Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами.

Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут:

1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; З) Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида.

Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в пластмассовых пластинах с лунками.

Кровь у больного берут так же, как для реакции Видаля. Получают сыворотку. Из сыворотки готовят двукратные серийные разведения, начиная с 1:10 до 1:160.

По 0,5 мл каждого разведения вносят в лунку и прибавляют по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Реакцию ставят в объеме 0,75 мл.

Контролем служат: 1) стандартная агглютинирующая монорецепторная сыворотка + диагностикум — реакция должна быть положительной до титра сыворотки; 2) диагностикум в изотоническом растворе натрия хлорида (контроль) — реакция должна быть отрицательной.

Содержимое лунок тщательно перемешивают, ставят в термостат на 2 ч и оставляют при комнатной температуре до следующего дня (на 18-24 ч).

Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума.

Результаты учитывают по четырехкрестной системе:

++++ эритроциты полностью агглютинированы — осадок на дне лунки в виде «зонтика»;

+++ «зонтик» меньше, не все эритроциты агглютинировались;

++ «зонтик» маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов;

— реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки.

1. В какой период заболевания ставят реакцию Видаля?

2. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции Видаля?

3. С какими диагностикумами ставят реакцию Видаля?

4. Какая из серологических реакций является самой чувствительной при диагностике тифопаратифозных инфекций?

5. Каким диагностикумом пользуются при постановке реакции Vi-гемагглютинации?

6. Какой сывороткой определяют наличие Vi-антигена у исследуемой культуры?

7. Какое значение имеет определение Vi-фаготипа?

Возьмите у преподавателя О- и Н-диагностикумы из сальмонелл тифа, паратифа А и паратифа В и сыворотку больного. Поставьте реакцию Видаля.

Питательные среды

Среды ЭМС, Плоскирева, висмут-сульфитный агар выпускаются медицинской промышленностью в виде сухого порошка. Их готовят согласно указаниям на этикетке: отвешивают определенное количество порошка, наливают соответствующее количество воды, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри.

Среда Рассела. В 950 мл дистиллированной воды добавляют 40 г сухой питательной среды и прибавляют 5 г питательного агара. Нагревают до кипения и растворения порошков. В 50 мл дистиллированной воды растворяют 1 г х. ч. глюкозы и добавляют к приготовленной смеси. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл, стерилизуют текучим паром (2 дня по 2 мин) и скашивают так, чтобы оставался столбик. Среду Рассела с маннитом и сахарозой готовят так же.

Среда Олькеницкого из сухого агара. 2,5 г сухого питательного агара расплавляют в 100 мл дистиллированной воды. В остуженный до 50° С агар прибавляют все ингредиенты, указанные в рецептуре (этикетке). Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют текучим паром (3 дня по 20 мин) и затем скашивают. Готовая среда должна быть бледно-розового цвета.

Дата добавления: 2016-11-22 ; просмотров: 489 | Нарушение авторских прав

источник

Диагностика брюшного тифа затруднена из-за сложной дифференциации заболевания от схожих по симптоматике течений кишечных расстройств, туберкулеза или холеры. Анализы на наличие брюшного тифа и прочие исследования назначаются, обычно, на стадии закрепления постоянной фебрильной (38-39 0 С) температуры и устойчивых характерных признаков. Помимо определения диагноза по болезни, анализ на брюшной тиф является обязательным для сдачи работникам общепита, сотрудникам детских и медицинских учреждений, представителям сферы гостиничных или санаторных услуг.

Возбудитель инфекционного заболевания, бактерия Salmonella typhi, попадает в организм человека через предметы общего пользования — например, игрушки в детском саду или вещи личной гигиены, плохо переработанные молочные продукты, грязную воду. В каком бы возрасте не произошло инфицирование, единожды заболев, человек приобретает устойчивую невосприимчивость к повторному заражению.

По статистике, угроза проникновения бактерии сальмонеллы выше всего у младших школьников, однако это не исключает факт носительства возбудителя тифа или заболевания в острой форме людей старшего возраста.

Анализ на брюшной тиф сдается при наличии всех характерных признаков из нижеперечисленных (за исключением сыпи, которая возникает не во всех случаях заражения):

  • постоянная жажда при постоянном ощущении стягивания, сухости во рту, побледнение и шелушение кожи лица и тела, распухание и покрытие беловатым налетом языка;
  • острые периодические боли в животе;
  • симптомы интоксикации — рвотные позывы, накатывающая тошнота, плохой аппетит, упадок сил, потливость;
  • затруднение дефекации или понос;
  • возникновение сыпи типа розеол, которые становятся слаборазличимы при нажатии на них.

Симптоматика характерна постепенным наращиванием, но в трети всех случаев, возможно острое начало болезни, с присутствием одновременно нескольких признаков и обязательно, температурой в пределах 38-39 0 С. Если схема течения болезни стандартна, то она будет следовать такому алгоритму:

  • неожиданная слабость, плохой сон, проблемы со стулом;
  • головные боли, усиление общего недомогания, повышение температуры тела;
  • температура в течение 3-5 дней достигает показательных значений до 39 0 и останавливается на этой отметке;
  • появляются сильные боли в животе, газообразование, реакция у человека на внешние раздражители притупляются, его состояние можно назвать «заторможенным». В этот же период возможно появление розеол.

Поскольку начало симптоматики заражения наступает не ранее седьмых суток от попадания тифозной палочки в кишечник, определить происхождение инфекционного возбудителя почти невозможно.

Еще до получения результатов лабораторных исследований, клиническая картина совокупности признаков позволяет врачу диагностировать брюшной тиф и начать лечение больного в условиях изоляции от пациентов других групп заболеваний. Несмотря на то, что в основе диагностики находится всестороннее изучение крови, при подозрении на тиф понадобятся и другие образцы — например, мочи, желчи, кала.

Перед взятием любых биологических проб рекомендовано соблюсти условия подготовки, чтобы полученные данные имели минимальную степень погрешности:

  • нельзя принимать лекарственные средства в течение трех суток до сдачи материала;
  • за 24 часа до взятия проб нельзя употреблять спиртосодержащие напитки;
  • за 2-4 часа до анализов нельзя курить, физически перенапрягаться и воздержаться от переживаний и негативных эмоций;
  • все образцы берут в утреннее время, на голодный желудок пациента;
  • накануне сдачи биологического материала нельзя употреблять в пищу: яйца, молочные и кисломолочные продукты, копчености, свинину, баранину, острые и соленые блюда.

Все виды дополнительных обследований, которые могут доставить чувство дискомфорта или требуют отдельной подготовки, нужно делать после взятия лабораторных анализов.

Клинический анализ крови помогает определить изменение основных показателей состояния организма в целом. Ведущими значениями, которые указывают на деятельность возбудителя тифа в организме, является искажение (по сравнению с показателями нормы) следующих данных:

  • понижение уровня лейкоцитов;
  • отсутствие в крови эозинофилов;
  • лимфоцитоз относительных параметров, что говорит о низкой иммунном ответе;
  • высокая скорость оседания эритроцитов (показатели СОЭ);
  • критически завышенные значения нейтрофилов;
  • низкие критерии присутствия тромбоцитов.

Забор крови для исследования производится из вены больного сразу при поступлении его в инфекционное отделение стационара. Впоследствии, кровь будут брать еще несколько раз на протяжении лечебного процесса и перед выпиской.

Биохимический анализ крови также сдают из вены до начала противобактериального лечения. Полученные в течение 24 часов результаты исследования определяют наличие белков острой фазы, синтезируемые в печени, как ответ на инфекционное поражение.

Для серологических исследований, из крови больного человека выделяется плазма, где определяющее значение имеет наличие характерных антител.

Результативным считается анализ, взятый не ранее пятого дня от момента проникновения в кишечник брюшнотифозной палочки, так как именно этот срок требуется организму для вырабатывания антител к инфекционному возбудителю.

Завышенные значения обнаруженных антител говорят о высоком уровне иммунного ответа на инфекцию, что специфично в двух случаях:

  • в процессе выздоровления;
  • если больной человек является носителем тифозной палочки.

Для получения достоверного ответа, серологические исследования проводят на 7-10 день от проявления начальной симптоматики.

Бактериальный посев биологического материала позволяет обнаружить болезнь на ранней стадии заражения. В качестве обследуемой жидкости чаще всего выступает кровь — это называется посев на гемокультуру. Забор крови предпочтительно делать в момент, когда температура тела больного выше 38 0 С. Для посева используется питательная среда Раппопорта, в которую помещается 15-20 мл крови больного. Затем, в течение десяти дней сотрудники лаборатории ежедневно отмечают рост колоний бактерий в образце и, в случае обнаружения динамического развития таковых, делают следующий посев в чашке Петри. Здесь бактерии анализируются на протяжении 24 часов под постоянным проведением тестов, в том числе и на чувствительность к антибактериальным препаратам.

Посев мочи показателен на любом этапе заболевания, однако лучший период для обнаружения возбудителя — с 21-го дня от момента заражения. Принцип проведения тестовых исследований урокультуры тот же, что и при наблюдении за кровью пациента.

Изучение кала проводят в период между третьей и пятой неделей заболевания, при этом годными для посева считаются только жидкая субстанция каловых масс. Для инфекционных больных этот вид анализа используется редко, но он считается обоснованным для периодических обследований работников, имеющих санкнижки.

РИФ является экстренным методом исследования, проводимом при подозрении на брюшной тиф, когда симптоматика выражена слабо или есть причины считать, что человек мог заразиться. В забранный у пациента биологический образец вводят специальные, окрашенные флуоресцентными элементами антитела, которые, вступая в соединение с антигенами инфекционного возбудителя начинают производить свечение. Этот характерный признак, хорошо заметный при изучении пробы в микроскопе, позволяет сделать вывод о наличии тифозной палочки.

ИФА, в отличие от предыдущего способа определения антигенов и антител, может даже с точностью оценить их количество. На основании полученных данных, врач делает вывод о правильности схемы начатого лечения.

РНГА относится к самым точным видам диагностики при подозрении на брюшной тиф, так как данная реакция чувствительна к 3-ем антигенам брюшнотифозной палочки. При проведении этого вида анализа оцениваются эритроциты, имеющие стойкий иммунитет к антигенам возбудителя. Проводится диагностика РНГА несколько раз, причем в норме положительного ответа считается увеличение титров О-антител. Если обнаруживаются увеличенные титры Н — и Vi-антител, это говорит о скором выздоровлении больного или о его статуса носителя бактериального возбудителя.

Наиболее строгого контроля профилактика брюшного тифа придерживается в отношении работников детских дошкольных и оздоровительных учреждений, сотрудников пунктов питания и учреждений здравоохранения. В случае обнаружения носителя инфекции среди сотрудников названных учреждений, на месте работы больного человека проводят двукратные дезинфицирующие мероприятия.

Индивидуальная профилактика инфекционного заболевания, это соблюдение личной гигиены, к которой относится и обязательная изоляция предметов собственного пользования из мест общего доступа. Для предотвращения заражения через продукты питания, нельзя употреблять немытые фрукты и овощи, не прошедшие термическую обработку молочные продукты, сырые яйца. Большую опасность представляет водопроводная некипяченая или набранная из сомнительных источников, вода.

Так как дети младшего или школьного возраста более чувствительны к брюшнотифозной инфекции, чем взрослое население, родителям следует более внимательно отнестись к тому, чтобы у работников учреждения, которые посещает их ребенок, имелись все необходимые медицинские заключения о состоянии здоровья. Это почти на 100% исключит возможность заражения ребенка опасной тифозной палочкой.

источник

Что такое брюшной тиф? Причины возникновения, диагностику и методы лечения разберем в статье доктора Александров П. А., инфекциониста со стажем в 11 лет.

Брюшной тиф (Typhys abdominalis typhoid fever) — инфекционная патология острого характера, вызываемая бактерией Salmonella typhy, которая поражает эндотелиальную выстилку сосудов и лимфоидные формирования тонкого кишечника. Клинически характеризуется специфическим синдромом общей инфекционной интоксикации, синдромом поражения желудочно-кишечного тракта (энтерит), розеолёзной экзантемой (сыпью), увеличением печени, селезёнки и внутрибрюшных лимфоузлов, а также бронхитом.

Термин «Typhy» (от греч. τῦφος) означает дым, туман.

Данные бактерии являются грамм-отрицательными палочками, не образующими спор. В своей структуре содержат от 8 до 14 жгутиков, мобильны, произрастают на простых питательных средах с примесью желчи.

Их антигенная структура весьма непростая. Она состоит из:

  • О-антигена (лежит на поверхности микроорганизма, представляет липидно-полисахаридный комплекс, термолабильный, кипячение около двух часов не приводит к деструкции; отвечает за видовую специфичность — серогруппы);
  • Н-антигена (жгутиковый, термолабильный);
  • Vi-антигена (включен в О-антиген, термолабилен, является антигеном вирулентности, который способствует к заражению организма);
  • К-антигена (белково-полисахаридные комплексы, отвечающие за способность бактерий к внедрению в макрофаги и дальнейшему размножению в них).

Способны к L-трансформации — частичному или полному исчезновения клеточной стенки, в результате чего бактерия обретает способность переносить неблагоприятные для себя условия.

Устойчивы во внешней среде, на белье сохраняются до 80 суток, в испражнениях — до 30 суток, в туалетах — до 50 суток, в воде водопроводов (без достаточного хлорирования) — до 4 месяцев, в почве — до 9 месяцев, в молоке — до 3 месяцев, в овощах — до 10 суток. В воде при нагревании до 50°С живут 1 час, до 60°С — 30 минут, в кипячённой воде погибают мгновенно. При замораживании живут до 60 суток, в 0,4% хлорной извести и современных дезинфектантах сохраняют жизнеспособность до 10 минут. [1] [2] [5]

Антропоноз. Убиквитарная (повсеместная) инфекция, но преимущественно распространённая в тёплых странах. Ежегодная заболеваемость брюшным тифом составляет более 20 млн человек, из которых погибает до 200 тысяч заболевших.

Первоисточник инфекции — люди (больные и носители). Ненамеренным источником брюшнотифозной бактерии иногда становятся улитки, устрицы, инфицирующиеся в контаминированной (загрязнённой вирусом) воде.

Механизм передачи — фекально-оральный (водный, пищевой, контактно-бытовой пути).

Индекс восприимчивости организма (его способность реагировать на внедрение возбудителя развитием заболевания или носительства) составляет 40-50%.

Сезонность летне-осенняя (в жарких странах круглогодично).

Иммунитет типоспецифичный, продолжительный, однако не исключается вторичное заболевание через длительное время. [2] [4]

Инкубационный период длится от 7 до 25 дней. Заболевание начинается постепенно, при этом лихорадка имеет постоянный характер.

  • специфической общей инфекционной интоксикации;
  • розеолёзной экзантемы — ведущий синдром;
  • синдром поражения желудочно-кишечного тракта (воспаления тонкой кишки (энтерита) или запора — парез кишечника);
  • увеличения печени и селезёнки (гепатолиенальный синдром);
  • воспаления лимфоузлов брыжейки кишечника (мезаденита);
  • брюшнотифозного бронхита.

Преимущественно заболевание начинается с медленно нарастающей квёлости, малоподвижности, головной боли нечёткой локализации, появляется озноб, скачок температуры тела до 39-40°С, снижение аппетита, инверсия сна (бессонница ночью и сонливость днём). Через пару дней присоединяется кашель, метеоризм, урчание в животе, диарея (впоследствии сменяющаяся запором), появляются кошмарные сновидения.

Объективные данные выявляют оглушенность, больные мало двигаются, лежат в прострации с закрытыми глазами, на вопросы дают малоинформативные ответы после некоторого раздумья. Лицо больного бледное, покровные ткани суховатые и горячие на ощупь. На 7-8 день от начала заболевания появляется розеолёзная сыпь в виде единичных элементов, отграниченных от здоровых покровов и несколько выступающих над ней, исчезают при нажатии, после себя оставляет пигментацию, иногда происходит пропитывание кровью, редко возникают новые подсыпания. Локализация сыпи — на животе, внизу груди.

Достаточно редким является окрашивание ладоней и стоп в желтый цвет — эндогенная каротиновая гиперхромия (симптом Филипповича).

Иногда увеличиваются и делаются болезненными заднешейные и подмышечные лимфоузлы.

Со стороны сердечно-сосудистых органов намечается брадикардия, снижение артериального давления, общее аускультативное ослабление сердечных тонов.

При аускультации лёгких выслушиваются суховатые хрипы рассеянной локализации, при переходе в пневмонию хрипы становятся влажными.

Во время осмотра живота отмечается его вздутие, глубокое урчание, и восприимчивость к пальпации слепой кишки, возможно возникновение симптома Падалки — укорочение перкуторного звука в правой подвздошной зоне, обусловленное воспалением внутрибрюшных лимфоузлов. С 3-5 дня отмечается увеличение селезёнки, а к концу первой недели — и печени. Появляется симптом Штернберга — лёгкая болезненность при надавливании живота по оси брыжейки в результате воспаления в брыжеечных лимфоузлах. Наблюдается отсутствие стула (обстипация) или умеренный энтерит.

При фарингоскопии виден язык с трещинами, без влаги, со следами зубов, закрытый толстым бурым или грязно-коричневым налётом (фулигинозный язык), но с чистыми краями и кончиком. Ротоглотка умеренно красная.

В последнее десятилетие приобретают значение достаточно видоизмененные формы заболевания, зачастую включающие лишь значительное повышение температуры тела без явных кишечных расстройств и сыпи, с отсутствием выраженной интоксикации, что нередко ставит в тупик даже опытных докторов.

Необходимо дифференцировать брюшной тиф, отличительным симптомом которого является длительная высокая лихорадка при отсутствии органных поражений, с другими заболеваниями:

  • гнойно-воспалительные заболевания почек (дискомфорт и боли в поясничной области, положительный симптом Пастернацкого, нарушения мочеиспускания, изменения в общих анализах мочи);
  • острые респираторные заболевания (при брюшном тифе нет синдрома поражения верхних дыхательных путей, а при ОРЗ нет мезаденита);
  • пневмония;
  • малярия (пароксизмы (резкое увеличение) температуры, повышенное потоотделение, колебания температуры более 1°С);
  • ку-лихорадка (острое начало, гиперемия лица (приток крови), острая потливость);
  • лептоспироз (внезапное начало, боли в мышцах икр, лицо и шея красные, желтуха, нейтрофильный лейкоцитоз);
  • бруцеллёз (неплохое самочувствие при высокой температуре, резкая потливость, нет вздутия живота, специфические симптомы). [1]

Заражающая доза — от 10 млн до 1 млрд микробов (находится только лишь в 0,001-0,01 г фекалий больного). Входные ворота — рот. Далее микроорганизмы переходят в желудок (часть их гибнет), затем в тонкий кишечник и его слизистую оболочку, где захватываются макрофагами, в которых тифозные бациллы не только не погибают, но живут и даже множатся.

После этого сальмонеллы мигрируют в лимфоидные органы тонкого кишечника (одиночные лимфатические узлы и бляшки Пейера), а оттуда в умеренном количестве попадают в кровь.

Начинается развитие бактерий в брыжеечных и забрюшинных лимфоузлах, а после посредством грудного протока происходит высвобождение их в системный кровоток — начинается бактериемия (часть их гибнет с высвобождением эндотоксина), вызывая интоксикацию: происходит токсинный удар по нервным центрам с преобладжанием процессов торможения (status typhosus).

Угнетение диэнцефальных структур ведёт к инверсии сна, нарушению аппетита, нарушению вегетативной функции. Эндотоксин воздействует и на чувствительные нервные волокна, что ведёт к питательным нарушениям кожи, нарушению кровоснабжения в слизистой оболочке и лимфоидных структур — механизм возникновения язв тонкого кишечника. Наблюдается токсическое поражение миокарда, возможно возникновение инфекционно-токсического шока. Нарушается тонус периферических сосудов, выход части плазмы в экстравазальное пространство, что ведёт к развитию гиповолемии и циркуляторному коллапсу. В процессе заболевания возбудитель повторно попадает в кишечник с желчью. Происходит патологический процесс в красном костном мозге (нарушение кроветворения).

Значительная роль в патогенезе болезни принадлежит и самостоятельной роли микроорганизма: при бактериемии паренхиматозные органы нашпиговываются болезнетворными агентами, где попадают в захват элементами мононуклеарно-фагоцитарной системы и из-за несостоятельности работы последних образуют гнойные очаговые поражения (менингиты, остеомиелиты, пневмонии и другое). Также при жизни бактерии выделяют энтеротоксин, приводящий к диарее.

В дальнейшем при борьбе организма и микроба начинается освобождение человеческого тела от сальмонелл посредством органов выделения (преимущественно в печени): большая часть их погибает, а некоторые поступают с желчью в просвет кишечника и выделяются в окружающую среду, а оставшиеся снова проникают в лимфоидные образования кишечника. Отдача брюшнотифозной бактерии идёт различными путями с различными секретами организма (кал, моча, пот, материнским молоком).

Приблизительно на пятый день заболевания появляются антитела IgM к возбудителю, а к концу второй недели специфические антитела Ig G. Под влиянием иммунных факторов может происходит L-трансформация бактерий, приводящая к длительному неинфекционному процессу (для иммунитета) и возникновению рецидивов.

Периоды патологических изменений в тонком кишечнике:

  • первая неделя — набухание групповых лимфатических фолликулов;
  • вторая неделя — их некроз;
  • третья неделя — отторжение некротических масс и образование язв;
  • третья-четвёртая неделя — период чистых язв;
  • пятая-шестая неделя — заживление язв.

В любой период может развиться кровотечение и перфорация язв. [2] [3] [6]

По клинической форме заболевание делится на:

— атипичная форма — подразделяется на абортивную (быстрое обратное развитие) и стёртую (все признаки выражены слабо);

— первичное (при длительной персистенции возбудителя в гранулёмах);

— вторичное (возникает при проникновении возбудителя в патологически измененные органы — желчный пузырь, костный мозг — на любом этапе инфекционного процесса). [5]

Факторами риска развития осложнений являются:

  • тяжёлое течение при отсутствии улучшения в течении 3-4 суток;
  • поздняя госпитализация;
  • микст-инфекция;
  • комбинированные поражения;
  • появление лейкоцитоза.

К осложнениям заболевания относятся:

  • перфорация кишечника — сопросвождается болями в животе, симптомами раздражения брюшины, например симптом Щёткина-Блюмберга, повышением частоты дыхательных движений, напряжением мышц брюшной стенки и способно привести к перитониту;

Важно: при брюшном тифе исключаются любые явные болевые ощущения в животе, поэтому их появление у больного тифопаратифозными заболеваниями расценивается как риск осложнения и требует внимания и возможного перевода в профильное отделение.

  • кишечное кровотечение — происходит снижение температуры тела, прояснение сознания, временное улучшение самочувствия, затем больной бледнеет, заостряются черты лица, он покрывается холодным липким потом, снижается артериальное давление, увеличивается пульс;
  • инфекционно-токсический шок — снижается температура тела и артериальное давление, возникает состояние прострации, бледность с сероватым оттенком;
  • пневмония, миокардит, холецистохолангит, тромбофлебит, менингит, паротит, артриты, пиелонефрит;
  • инфекционный психоз. [3][5]
  • общеклинический анализ крови с лейкоцитарной формулой (лейкопения, так как поражается красный костный мозг, анэозинофилия, нейтропения, относительная лимфопения, тромбоцитопения, анемия, СОЭ в норме);
  • общеклинический анализ мочи (показатели острой токсической почки);
  • биохимический анализ крови (повышение АЛТ, АСТ, нарушения электролитного баланса);
  • копрограмма (нарушение переваривания, жир, крахмал);
  • серологическая диагностика (РНГА, в том числе с Унитиолом, РПГА, ИФА различных классов);
  • бактериологический метод (посев крови, кала на среды с желчью — желчный бульон или среда Раппопорта, на стерильную дистиллированную воду — метод Клодницкого, на стерильную водопроводную воду — метод Самсонова: предварительные результаты через 4-5 суток, окончательный — через 10 дней). [1][4]

Место лечения — инфекционное отделение больницы.

Режим — бокс, строго постельный до 10 дня нормальной температуры тела. В этот период недопустимо натуживание.

Показана диета № 4 по Певзнеру (калорийная, с повышенным содержанием белка, механически и химически щадящая).

Этиотропная терапия проводится до 10 дня нормальной температуры тела при любой степени тяжести (перекрывается естественный цикл возбудителя). Назначаются препараты выбора — фторхинолоны, цефалоспорины.

Патогенетически осуществляется комплекс мероприятий по восполнению ОЦК, энтеросорбции, повышения регенеративных процессов в кишечнике, а также показана антиоксидантная терапия, насыщение витаминами, восстановление нормальной микрофлоры кишечника.

Проводится постоянный мониторинг больных для исключения осложнений, появление которых требует перевода пациентов в реанимационное отделение.

Выписка осуществляется при нормализации клинического состояния и лабораторных показателей, трёхкратного отрицательного посева кала и мочи, но не ранее 21 дня нормальной температуры тела.

За переболевшими устанавливается диспансерное наблюдение сроком на три месяца с обязательным посевом крови и мочи в конце периода наблюдения. [1] [2]

К методам неспецифической профилактики относятся:

  • поддержание на достаточном уровне санитарного состояния источников водоснабжения, очистных сооружений;
  • борьба с источниками загрязнения окружающей среды, очистка и обеззараживание сточных вод, выгребных ям;
  • соблюдение санитарных норм и правил при сборе, обработке, хранении и приготовлении пищевых продуктов;
  • соблюдение людьми правил санитарно-гигиенической культуры;
  • своевременное выявление бактерионосителей (особенно среди лиц декретированного контингента, в частности работников сферы питания и обслуживания населения).

В течение трёх месяцев переболевшие из лиц декретированного контингента не допускаются на объекты общепита и водоснабжения.

Специфической профилактикой является вакцинация (полисахаридные вакцины, основанные на очищенном Vi-антигене для лиц с двухлетнего возраста — инъекционно и живая аттенуированная вакцина с 5 лет — орально). [6]

источник

Возбудителями брюшного тифа и паратифов (А, В) являются бактерии рода Salmonella, в состав которого входят два вида: Salmonella enterica с 6 подвидами (включая возбудители брюшного тифа, паратифов, сальмонеллезов – всего более 2400 сероваров) и Salmonellabongori(редко встречающиеся сальмонеллы).Возбудитель брюшного тифа обозначается как Salmonellaсеровара Typhi (Salmonella entericaspp. enterica ser. typhi, прежнее назва­ние Salmonella typhi), паратифа А — Salmonellaсеровара ParatyphiA, паратифа В Salmonellaсеровара Paratyphi В.

Методы микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов представлены в схеме 9.

Выбор материала и метода микробиологической диагностики этих заболеваний зависит от стадии патогенеза. На первой неделе заболевания и в течение всего лихорадочного периода возбудитель можно выделить из крови (гемокультура), с конца второй и на третьей неделе — из мочи (уринокультура) и испражнений (копрокультура). Высокий процент высеваемости возбудителя отмечается при исследовании костного мозга (выделение миелокультуры). Удается обнаружить сальмонеллы в скарификате розеол (розеоло-культура), ликворе, содержимом две­надцатиперстной кишки, секционном материале. У реконвалесцентов исследуют испражнения и желчь (выделение биликультуры). Начиная со второй недели заболевания проводят серологи­ческое исследование. Микроскопическое исследование материала от больного не проводится, т.к. все энтеробактерии (как патогенные, так и непатогенные, например, E.coli) по морфологическим свойствам идентичны (рис. 14).

Бактериологическое исследованиеявляется основным лабораторным методом диагностики брюшного тифа и паратифов.

Ранним и надежным методом бактериологической диагностики является выделение возбудителей из крови (гемокультура).Взятую в асептических условиях кровь (15-20 мл) засевают на 10% желчный бульон или среду Рапопорт (10% желчный бульон, 1 % маннита или 2 % глюкозы, 1 % индикатора Андреде; в среду помещен поплавок для улавливания газа) в соотношении крови и среды 1:10 для накопления сальмонелл. Посевы инкубируют при 37 0 С 18 —24 ч. При наличии сальмонелл маннит или глюкоза расщепляется с образованием кислоты и среда приобрета­ет красный цвет; появление в поплавке газа свидетельствует о газообразовании — характерном признаке паратифозных бактерий.

Схема 9.Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

Рис. 14. а — кишечная палочка(E.coli ув. Х1350), б— возбудитель брюшного тифа(S.typhi, ув. Х630) в мазках из чистой культуры. Окраска по Граму. Грамотрицательные беспорядочно расположенные палочки средних размеров.

Копрокультуру выделяют путем посева фекалий на среду Плоскирева, Эндо, висмут-сульфит агар и среды накоп­ления (селенитовую, магниевую, тетратионатную, Кауфмана, Мюллера) с последующей 18 —24-часовой инкубацией при 37 °С.

На 2-й день на средах Плоскирева, МакКонки или Эндо вырастают бесцветные (лактозоотрицательные) колонии, а на висмут-сульфит-агаре – черные. Колонии сальмонелл па­ратифа А окрашены взеленый цвет, так как не образуют сероводород. Из типичных колоний готовят мазок, окрашивают по Граму и после микроскопии остаток колонии пересевают на среду Ресселя или Олькеницкого. При отсутствии типичных колоний на те же среды засевают материал со среды обогащения.

На 3-й день исследования учитывают характер роста на среде Ресселя или Олькеницкого (окрашивание столбика среды Ресселя в синий цвет, среды Олькеницкого в желтый в результате ферментации глюкозы в анаэробных условиях; скошенная часть среды не изменена – отсутствие ферментации лактозы), готовят мазок для проверки чистоты выделенной культуры, выполняют пересев в среды «пестрого» ряда для изучения биохимических свойств (см. табл. 10), после чего

ставят ориентировочную, а потом развернутую РА. Ориентировочную РА ставят со смесью О-сывороток, включающей агглютинины к О-антигенам 2, 4, 7, 8, 9, 3-10. При отсутствии РА с этой смесью используют смесь монорецепторных О-сывороток к редким группам сальмонелл (антитела к антигенам 11, 13, 15, 19, 23 и т.д.) При получении положительных результатов культуру испытывают отдельно с каждой из О-сывороток, входящих в состав смеси. После этого культуру агглютинируют с Н-сыворотками 1 фазы (a, b, i, c, d, g, m) а потом 2 фазы (1,2; 1,5), устанавливая антигенную формулу выделенной сальмонеллы в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта (таблица 9). Эта схема разработана на основании изучения у сальмонелл О и Н антигенов и применяется с целью антигенной идентификации патогенных сальмонелл.

Таблица 9. Антигенная структура сальмонелл (сокращенная схема Кауфмана-Уайта)

Группа Серовар О-антиген Н-антиген
Фаза 1 Фаза 2
А Paratyphi A 1, 2, 12 a
B Paratyphi B Typhi murium 1, 4, 5, 12 1, 4, 5, 12 b i 1, 2 1, 2
C Paratyphi C Cholerae suis 6, 7, Vi 6, 7 c c 1, 5 1, 5
D Typhi Enteritidis 9, 12, Vi 1, 9, 12. d g, m — —

На 4-й день от начала исследования учитывают изменения сред «пестрого» ряда (см. табл. 10), результаты развернутой РА и выдают ответ. Выделенные культуры подвергают фаготипированию, что позволяет установить источник и пути заражения.

Мочу, дуоденальное содержимое, соскоб розеол, сек­ционный материал с целью выделения тифо-паратифозных бактерий засевают на плот­ные среды (Эндо, Мак-Конки и т.п. в чашке Петри), а также в среды накоп­ления. При наличии характерного роста идентификация прово­дится по вышеописанной схеме.

Таблица 10. Биохимические свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов

Биовар S.enterica Ферментация Продукция
Лакто- Зы Глю- козы Маль- тозы Саха- розы Ман- нита Н2S NH3 индо- ла
Typhi К К К +
Paratyphi A КГ КГ КГ
Paratyphi В КГ КГ КГ + +

Обозначения: (+) — наличие свойства, (-) — отсутствие свойства, К – образование кислоты, КГ – образование кислоты и газа.

Аналогично проводится исследование испражнений уперебо­левших брюшным тифом и паратифом лиц, а также у работников детс­ких учреждений, питания и водоснабжения с целью выявления бактерионосителей.

Серологическое исследование.Для серологической диагности­ки брюшного тифа и паратифов ставят ре­акцию Видаля (развернутая РА) с целью определения соответствующих антител в крови больного. Антитела к возбудителям брюшного тифа, парати­фов А и В обнаруживаются в сыворотке крови больных с 8— 10-го дня заболевания. Исследуемую сыворотку крови разводят двукратно в 6 параллельных рядах пробирок от 1:100 до 1: 1600 в объеме 1 мл, куда вносят по 2 капли ОН и О- брюшнотифозного, паратифозного Аи паратифозного В диагностикумов. О-диагностикумы получают кипячением или обработкой спиртом взвеси соот­ветствующих культур, ОНдиагностикумы — обработкой формалином. Для контроля антигена диагностикумы вносятся в той же дозе в 1 мл физиологического раствора, а для контроля сыворотки ис­пользуют сыворотку в разведении 1:100 без добавления диагностикумов.

О-антитела имеют диагностическое значение, они появляются в крови на второй неделе заболева­ния и исчезают к его концу, а Н-агглютинины нараста­ют к концу заболевания. и диагностической ценности не имеют. Н-антитела могут обнаруживаться также у переболевших и вакцинированных. Ряд брюшнотифозных вакцин вызывает также выработку Vi – и О антител. Диагностический титр О-антител в реакции Видаля у неиммунизированных лиц 1 :100, а при отсутствии типичной клинической картины — 1 :200. Однако титр антител у больных может быть ниже диагностического в связи с ранним назначением антибиотиков или наличием у больного вторичного иммунодефицита. Таким образом, отрицательная реакция Видаля не исключает тифопаратифозное заболевание. С другой стороны, повышенные титры О-антител могут быть обусловлены прививками. Поэтому при подозрении на брюшной тиф или паратифы целесообразно исследовать сыворотку крови как можно раньше (до появления антител), а затем в динамике (с интервалом 7-12 дней) для выявления нарастания титра антител более чем в 4 раза. Если сыворотка крови больного агглютинирует одновре­менно два или три вида диагностикумов, учитывают титр агглютинации: специфическая агглютинация происходит обычно с более высокими, а групповая — с более низкими разведениями сыворотки.

Более чувствительны РНГА с эритроцитарными групповыми (А, В, С, Д, Е)и монорецепторными диагностикумами, а также ИФА, которые ставят с парными сыворотками в динамике заболевания.

Vi-антитела чаще обнаруживаются у бактерионосителей сальмонелл брюш­ного тифа, т.к. Vi-антиген способствует длительной персистенции возбудителя в организме. При обследовании лиц, подозрительных на носительство брюшнотифозных палочек, применяется РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом для определения соответствующих антител и их принадлеж­ности к классу IgG.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

источник

С 8-го дня заболевания в крови у больных брюшным тифом можно обнаружить агглютинины. Для постановки реакции агглютинации необходимо иметь сыворотку больного и диагностикумы – взвеси убитых бактерий брюшного тифа, паратифы А и В (реакция Видаля). У больного из вены берут в пробирку 1-2 мл крови. Для ускорения свертывания крови пробирку ставят на 30 минут в термостат. Затем свернувшуюся кровь некоторое время дают отстояться на холоде, далее осторожно отделяют сгусток обожженной петлей от стенок пробирки, после чего сыворотку отсасывают. Кровь для» получения сыворотки можно взять и посредством укола мякоти безымянного пальца. Из сыворотки с помощью физиологического раствора готовят три ряда разведений: 1:100, 1:200, 1:400, 1:600 каждое в объеме 1 мл. Затем в пробирки с разведенной сывороткой добавляют по 1-2 капле диагностикумов тифа и паратифа А и В. Для контроля реакции в конце каждого ряда помещают пробирку, в которой смешивают по 1 мл физиологического раствора и по 1-2 капле соответствующих диагностикумов. Пробирки ставят на 2 часа в термостат, после чего учитывают предварительный результат реакции. Окончательный результат отмечают на второй день после стояния пробирок в условиях комнатной температуры. Реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки не менее чем 1:200.

Читайте также:  Анализ на брюшной тиф как его проходить

Реакция Видаля может дать положительный результат не только у больных, но и у лиц, до того перенесших брюшной тиф («анамнестический Видаль»). Кроме того, положительная реакция иногда является результатом проведенных ранее прививок («прививочный Видаль»). «Анамнестический» и «прививочный Видаль» отличают от инфекционного следующим образом. Реакцию Видаля ставят повторно на протяжении болезни. В случае заболевания брюшным тифом с каждым днем происходит нарастание титра антител, то есть положительная реакция отмечается все в больших разведениях сыворотки. Этого не наблюдается при «анамнестическом» или «прививочном Видале».

Для этиотропного лечения используют антибиотики или другие химиотерапевтические препараты.

Специфическая профилактика тифо-паратифозного заболевания проводится убитыми и химическими вакцинами по эпидемическим показаниям, контактным лицам — экстренная фагопрофилактика сальмонеллезными поливалентными бактериофагами.

Вопросы для обсуждения

1. Классификация и общая характеристика семейства энтеробактерий.

2. Патогенез брюшного тифа и паратифа А и В.

3. Методы лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифа А и В в

различные сроки заболевания.

4. Бактериологический метод исследования брюшного тифа и

паратифа А и В в разные стадии патогенеза заболевания.

5. Выявление бактерионосительства при брюшном тифе.

6. Серологический метод диагностики брюшного тифа и паратифа А и В.

7. Лечение и профилактика брюшного тифа и паратифа А и В.

Самостоятельная работа

Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного на гемокультуру:

1. Произвести посев исследуемого материала на среду Рапопорт.

2. Изучить изменение цвета среды (помутнение; наличие пузырьков газа в поплавке).

3. Пересеять на среду Эндо.

4. Занести полученные данные в протокол.

5. Изучить различия колоний на среде Эндо. Отобрать подозрительные колонии и произвести посев для накопления чистой культуры. Описать культуральные свойства.

6. Исследовать чистую культуру по морфологическим, тинкториальным, биохимическим, антигенным свойствам. Полученные данные занести в протокол.

7. Идентифицировать чистую культуру возбудителя.

Серологическая диагностика брюшного тифа

1. Учесть результаты реакции Видаля.

2. Полученные данные занести в протокол.

Протокол бактериологического исследования

Материал для исследования:

Этапы исследования Ход исследования Результаты исследования с предварительными выводами

Дата добавления: 2015-10-19 ; просмотров: 4358 . Нарушение авторских прав

источник

Брюшной тиф диагностируют на основании длительной лихорадки, головной боли, нарастающей интоксикации с развитием тифозного статуса, типичных изменений языка, появления метеоризма, розеолёзной сыпи, гепатоспленомегалии и изменений периферической крови.

Лабораторная диагностика брюшного тифа основана на обнаружении возбудителя в биоматериале и специфических антител в крови больного. Решающее значение имеет обнаружение возбудителя в крови (гемокультура), моче (уринокультура), испражнениях (копрокультура), жёлчи (биликультура), а также в костном мозге, спинномозговой жидкости, розеолах, гное или экссудате.

В практической работе для ранней диагностики брюшного тифа наибольшее значение имеет гемокультура, которую следует проводить на протяжении всего лихорадочного периода. Кровь из вены в количестве 5-10 мл засевают во флакон с 50-100 мл 10-20% жёлчного бульона (лучшие результаты даёт посев в трипсин-соевый бульон). Положительные результаты гемокультуры чаще получают при посевах крови на первой неделе заболевания, когда бактериемия наиболее выражена. Со второй недели болезни брюшнотифозные палочки можно обнаружить в посевах кала, мочи и дуоденального содержимого. Наиболее высокий процент выделения палочек брюшного тифа получают при посевах костного мозга. В целом бактериологическое подтверждение диагноза брюшного тифа удаётся получить у 80-90% больных.

Серологические методы позволяют обнаружить специфические антитела в крови или антигены в биосубстрате. В практической работе чаще всего применяют реакцию Видаля и РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с использованием эритроцитарных О-, Н- и Vi-антигенов. Реакция Видаля основана на обнаружении специфических О- и Н-антител-агглютининов в крови больного с помощью соответствующих антигенов. Положительные результаты можно получить с 8-9 сут болезни. Реакция Видаля может быть положительной у привитых и перенёсших брюшной тиф, поэтому решающее значение имеет нарастание титра антител в динамике заболевания. Для более точного выявления специфических иммунных сдвигов в крови больного реакцию Видаля следует повторять с О- (IX и XII) и Н-монодиагностикумами для исключения перекрёстных реакций с сальмонеллами других групп.

Более специфичны и чувствительны РНГА с эритроцитарными О- и Vi-антигенами и реакция Vi-гемагглютинации. Эти реакции используют для ранней диагностики брюшного тифа. В РНГА концентрация О-антител нарастает в динамике заболевания, а титры Vi-антител существенно не меняются. Реакция Vi-гемагглютинации имеет наибольшее значение при обследовании лиц, подозрительных на брюшнотифозное носительство.

Серологические реакции на обнаружение специфических антител в крови больного следует ставить с 4-5-го дня болезни, а затем на 2-3-й нед и позднее. Диагноз брюшного тифа считают серологически подтверждённым при титре антител 1:200 и выше или при нарастании титра антител в 2-3 раза в динамике заболевания. При оценке серологических реакций важно учитывать, что нарастание титров специфических О-антител свидетельствует об остром инфекционном процессе, а наличие только Н- или Vi-антител — о перенесённом ранее брюшном тифе или бактерионосительстве.

Для серологической диагностики бактерионосительства и вакцинальных реакций предложено раздельное определение специфических антител, относящихся к IgM и IgG в ИФА. Выявление специфических брюшнотифозных IgM указывает на текущий инфекционный процесс, а изолированное обнаружение специфических антител, относящихся к классу IgG, — о вакцинальной природе антител или перенесённом ранее брюшном тифе.

Дифференциальная диагностика брюшного тифа

В практической работе брюшной тиф у детей чаще приходится дифференцировать с тифоподобной формой сальмонеллёза, паратифами, инфекционным мононуклеозом, лимфогранулематозом, иерсиниозом, малярией, а в начальном периоде — с гриппом, энтеровирусной инфекцией и острой кишечной инфекцией другой этиологии.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19]

источник

Тема: Серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и В. Сальмонеллы – возбудители острых гастроэнтеритов.

Цель: Освоение методов микробиологической диагностики сальмонеллезов и серологической диагностики брюшного тифа и паратифов А и В.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема занятия 25. Серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и В. Сальмонеллы – возбудители острых гастроэнтеритов.

Сальмонеллез – острая кишечная инфекция. характеризующаяся преимущественным поражением желедочно-кишечного тракта, возбудителями которой являются многочисленные бактерии рода Salmonella (кроме S. typhi, S, paratyphi A, S. schottmuelleri).

Таксономическое положение и свойства. см. в методичке 26.

Морфология и тинкториальные свойства.

Эпидемиология. Основной источник заболевания – животные, преимущественно домашние и птицы. Реже источниками заболевания являются люди – больные и носители. Механизм заражения – фекально-оральный. Основной путь передачи инфекции – пищевой. Факторами передачи могут быть не только мясо животных и птиц, инфицированное при жизни животного либо при его обработке, но и яйца. Наиболее восприимчивы к заболеванию люди со сниженным иммунным статусом (в том числе грудные дети) и больные, получающие антибиотики. Подъем заболеваемости наблюдается летом.

Патогенез. Сальмонеллы проникают в организм через рот, достигают тонкого кишечника, где и развертывается патологический процесс. Бактерии благодаря факторам адгезии прикрепляются к слизистой оболочке, проникают в ее глубокие слои, где захватываются макрофагами. Сальмонеллы размножаются и погибают с освобождением эндотоксина, который, помимо общей интоксикации, вызывает диарею и нарушение вводно-солевого обмена. Находящаяся в нормальном состоянии микрофлора кишечника в значительной мере препятствует накоплению сальмонелл. В некоторых случаях (при снижении иммунного статуса и высокой вирулентности возбудителя) возможно развитие бактериемии и поражение костей, суставов, мозговых оболочек и других органов.

Клиническая картина. Инкубационный период равен в среднем 12-24 часа. Заболевание характеризуется повышением температуры, тошнотой, рвотой, поносом, болью в животе. Как правило, продолжительность болезни составляет 7 дней. но в некоторых случаях наблюдается молниеносная токсическая форма, приводящая к смерти больного.

Иммунитет после перенесенного заболевания сохраняется менее года.

Микробиологическая диагностика. Основной материал для исследования — рвотные массы, испражнения, промывные воды желудка. Применяют бактериологический и серологический (РА, РПГА) методы диагностики.

Лечение сальмонеллеза заключается в промывании желудка, диете, введении жидкостей для нормализации вводно-солевого обмена. Антибиотики при формах средней тяжести и легких не назначают, т.к. их применение приводит к дисбактериозу и в результате более длительному течению болезни; кроме того, очень велико число антибиотикорезистентных сальмонелл.

Профилактика неспецифическая — санитарно-гигиенические мероприятия, заключающиеся, в частности, в правильной кулинарной обработке мяса и яиц.

Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов А и В.

Для постановки диагноза применяется реакция агглютинации Видаля, основанная на обнаружении в сыворотке крови людей агглютининов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Особенности реакции заключаются в том, что реакция ставится одновременно с 4 разными диагностикумами (антигенами): ОН-диагностикум брюшного тифа, О-диагностикум брюшного тифа, ОН-диагностикум паратифа А и ОН-диагностикум паратифа В. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни, т.к. содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела накапливаются в разгвр заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени.

Это помогает дифференцировать острую стадию заболевания и «прививочную» или анамнестическую реакции.

У больных брюшным тифом в сыворотке крови определяются О- и Н-антитела, а в сыворотке крови людей, перенесших брюшной тиф или вакцинированных против него, сохраняются только Н-антитела.

Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации (РПГА), с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотке крови людей, появляющиеся только к концу заболевания, но постоянно обнаруживающиеся у носителей брюшного тифа.

Ознакомиться с биологическими свойствами и классификацией представителей семейства Salmonella.

Описывать патогенез сальмонеллезов.

Изучить методы микробиологической диагностики сальмонеллезов.

Ознакомиться с методами серологической реакции брюшного тифа, паратифов А и В.

Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии брюшного тифа, паратифов А и В.

Трактовать результаты бактериологического и серологического исследования.

Проводить дифференциацию сальмонелл – возбудителей сальмонеллезов.

Забирать материал для исследования от больных сальмонеллезами.

Выделять чистые культуры сальмонелл.

Трактовать результаты бактериологического и серологического исследования.

Сальмонеллы – возбудители пищевых токсикоинфекций.

Антигенная структура, факторы патогенности.

Патогенез и иммуногенез заболеваний. Бактерионосительство.

Методы микробиологической диагностики сальмонеллезов.

Специфическая профилактика и лечение сальмонеллезов.

Практические задания, выполняемые на занятии:

Выделение чистой культуры S. typhi :

Изучение посевов «фекалий» больного брюшным тифом на среде Ресселя.

Проверка чистоты культур: приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопия и зарисовывание.

Пересев чистой культуры на среду Гиса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации выделенной чистой культуры.

Микроскопия демонстрационных микропрепаратов чистых культур S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis.

Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения методов микробиологической диагностики сальмонеллезов и серологической диагностики брюшного тифа, паратифов А и В. Далее студенты знакомятся с правилами забора материала от больных сальмонеллезами для бактериологического и серологического исследования. Потом продолжают выделение чистой культуры S. typhi :

Изучение посевов «фекалий» больного брюшным тифом на среде Ресселя.

Проверка чистоты культур: приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопия и зарисовывание.

Пересев чистой культуры на среду Гиса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации выделенной чистой культуры.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных микропрепаратов чистых культур S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis и зарисовывают их в протокол.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

источник

Брюшной тиф – это острое инфекционное заболевание, которое вызывается брюшнотифозной палочкой . Путь передачи – алиментарный, механизм – фекально-оральный. Возбудитель вызывает бактериемию (большое количество брюшнотифозной палочки в крови), высокую интоксикацию, поражает лимфатический аппарат тонкого кишечника, печень и селезенку (органы увеличены в размерах). Диагностический анализ на брюшной тиф первые дни болезни затруднен. Это связано с тем, что инфекционный процесс может протекать в атипичной или скрытой форме. Поэтому при любом виде лихорадки, независимо от ее интенсивности, диагностику на брюшной тиф делают 5 дней подряд.

Инфекцию вызывает возбудитель из рода сальмонелл – Salmonella typhi . Это подвижная грамотрицательная палочка, которая живет в условиях доступа кислорода. Она не способна образовывать споры, но очень устойчива в условиях внешней среды. Находясь в воде, тифозная палочка сохраняет жизнеспособность от 1 до 5 месяцев. В испражнениях она активна на протяжении 25 дней.

При умеренном охлаждении, например, в холодильнике, микроорганизм в молочных продуктах не только сохраняется, но и способен к размножению в течение месяца. Высокие температуры губительно воздействуют на возбудителя. При кипячении тифозная палочка погибает моментально. Если нагреть воду до 60°C, то микроорганизм погибнет через 4-5 минут. Под действием прямых солнечных лучей он также теряет жизнеспособность.

Тифозная палочка очень чувствительна к химическим дезинфицирующим веществам. При воздействии хлорамина, сулемы, лизола она обеззараживается за несколько минут .

Тифозная палочка имеет сложную антигенную структуру. Но для диагностических целей используют только два антигенных комплекса: О-антиген (термостабильный соматический) и Vi-антиген (термолабильный жгутиковый). Патогенный микроорганизм способен образовывать L-формы, которые способствуют развитию бактериального носительства и рецидивов брюшного тифа.

По клинической картине брюшной тиф схож с другими инфекционными заболеваниями. Поэтому важно отличить его по проявляющимся симптомам от таких болезней, как сыпной тиф, бруцеллез, грипп, менингококковая инфекция, лихорадка КУ (коксиеллез) .

Отличительные признаки брюшного тифа:

  • острое начало болезни только в 1/3 случаев;
  • нарушение сна, слабость и головная боль нарастают постепенно;
  • кожа становится бледной и сухой;
  • заторможенность реакций;
  • интоксикация организма прогрессирует постепенно ;
  • температура тела поднимается медленно, но переносится больными тяжело, при этом пациенты не потеют, кожа остается сухой;
  • сердцебиение замедляется, незначительно снижается артериальное давление, при аускультации тоны сердца приглушены;
  • появляется мягкий влажный кашель, который переходит в ранний бронхит;
  • живот вздут, слышны урчания, которые локализуются в правом подреберье (область печени).

Для выявления брюшного тифа на ранних этапах болезни используют посев крови – анализ на гемокультуру . Это обусловлено тем, что инфекционная болезнь сопровождается интенсивной бактериемией именно первые дни заболевания, в поздний период болезни количество тифозной палочки в крови становится значительно меньше.

Для выделения возбудителя взятую у пациента кровь засеивают на специальную питательную среду – мясопептонный бульон.

Для исследования сдают венозную кровь из локтевой вены в количестве 10-15 мл все пациенты с высокой температурой. В некоторых случаях при подозрении на брюшной тиф посев крови могут проводить при нормальной температуре у больного. Кровь засевается сразу же после взятия и отправляется в лабораторию.

Сколько делается анализ? Предварительные данные можно получить через двое суток . Окончательный результат известен на 4-5 сутки. Чтобы подтвердить диагноз, исследование на гемокультуру проводят 2-3 раза.

Чтобы повысить качество посева и роста микроорганизма, за 20 минут до забора крови пациенту вводят адреналин. Посев крови должен проводиться до начала антибактериальной терапии, в противном случае результаты анализа будут недостоверными.

Серологические исследования – это специфические методы диагностики для выявления возбудителя. Их цель – обнаружение антител в сыворотке крови . При брюшном тифе антитела вырабатываются на 6-8 день заболевания.

Это метод определения антигенов и антител с помощью эритроцитов, которые способны выпадать в осадок в присутствие антигенов . Предварительно антитела и антигены адсорбируются и сохраняются в таком виде на поверхности эритроцитов.

РНГА на брюшной тиф проводится в комплексной диагностике с другими тестами, при поиске источников заражения в случае вспышки заболевания. Подготовка к исследованию:

  • крови берут из локтевой вены;
  • взятие материала должно производиться натощак;
  • интервал между последним приемом пищи и сдачей крови не менее 8 часов.

РНГА брюшнотифозной диагностики обнаруживает Vi- и О-антитела. Для положительного результата минимальные диагностические титры должны составлять для Vi-антител – 1:80, для О-антител – 1:200 .

Это метод исследования, который выявляет в сыворотке крови специфические антитела к возбудителю заболевания.

РПГА-тест на антитела при брюшном тифе становится положительным к концу второй недели болезни . Для достоверности результатов анализ крови на брюшной тиф повторяют через 5 дней. Если инфекция носит острый характер, то титры растут.

Кровь для РПГА на брюшной тиф берут утром натощак из локтевой вены. Положительные диагностические значения титров для Vi-антител – 1:40, для О-антител – 1:200 .

В диагностических целях могут быть использованы другие серологические методы:

  • ИФМ – иммунофлюоресцентная микроскопия;
  • ИФА – иммуноферментный анализ;
  • реакция коагглютинации.

При брюшном тифе в обязательном порядке делают общий анализ крови . Его основные показатели:

  • лейкопения – лейкоциты в крови ниже нормы;
  • анэозинофилия – отсутствие одного из вида лейкоцитов – эозинофилов;
  • относительный лимфоцитоз – свидетельствует о снижении сопротивляемости организма;
  • повышенное или умеренное СОЭ (скорость оседания эритроцитов);
  • нейтрофильный лейкоцитоз – аномально высокое количество нейтрофилов – лейкоциты, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на острый воспалительный процесс, при брюшном тифе – это бактериемия;
  • тромбоцитопения – снижение количества тромбоцитов, отвечающих за свертываемость крови.

Общий анализ крови берут при поступлении больного в стационар, а также несколько раз во время лечения .

Этот метод диагностики используют не часто, так как тифозная палочка появляется в кале не ранее конца 2-й недели или начала 3-й недели болезни. В основном такой способ используют для обследования людей на носительство . Также бактериологический анализ кала на брюшной тиф делают для санкнижки работникам детских учреждений, общественного питания, водоснабжения.

  1. За 3-4 часа до взятия кала нужно принять 30 г магнезиальной соли, чтобы каловые массы сделать более мягкими.
  2. Материал для исследования нужно брать только из жидкой части.
  3. Если в кале обнаруживаются примеси крови, гноя, слизи, их обязательно собрать для анализа.
  4. Количество кала – 10-15 г, набирают деревянным или пластиковым стерильным шпателем и помещают в банку с широким горлом.

Лучше посев производить сразу же у постели больного . Если нет возможности немедленно доставить его в лабораторию, то кал вносят в специальный консервант.

В пробах мочи тифозная палочка обнаруживается на 3-4 неделе заболевания . Правила сбора мочи для обследования:

  • провести тщательный туалет наружных половых органов;
  • у тяжелобольных мочу собирают с помощью катетера;
  • необходимое количество мочи – 40-50 мл.

Мочу доставляют в лабораторию. Для посева используют осадок . Чтобы его получить, материал центрифугируют, а затем засевают на плотные питательные среды.

Чтобы получить порцию желчи для анализа, больному делают дуоденальное зондирование . Для лучшего отхождения желчи пациенту в двенадцатиперстную кишку через зонд вводят раствор магнезии объемом 40-50 мл. В пробирки собирают три порции – А, В, С, каждая объемом 5-10 мл.

Желчь засеивают во флаконы с питательным бульоном. Если желчь содержит хлопья или другие включения, то для исследования она не пригодна. Посевы помещают в термостаты с постоянной температурой 37°C и выращивают культуру в течение 20 часов.

Анализ на брюшной тиф с положительным результатом подтверждает наличие инфекции в организме. Отрицательные показатели говорят об отсутствии болезни или ее раннем периоде . Если результаты анализов ложноположительные, это может свидетельствовать о перекрестной реакции с другими инфекциями. Недостоверный ответ также может быть при приеме антибактериальных препаратов.

Иммунологическая диагностика инфекционных заболеваний основана на выявлении антител в организме пациента к возбудителю инфекции методами серологических исследований. В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела с образованием иммунных комплексов, которые можно обнаружить в тестах in vitro.

Серологические реакции применяются в двух направлениях.

1. Обнаружение с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого. В этом случае из двух компонентов реакции (антитела, антиген) неизвестным является сыворотка крови. Постановка реакции проводится с заведомо известными антигенами (диагностикумами). Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в крови антител, гомологичных применяемому антигену; отрицательный результат указывает на отсутствие таковых. Достоверные результаты получают при исследовании “парных” сывороток крови больного, взятой в первые дни болезни и через разные промежутки времени от начала заболевания. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител. При вирусных инфекциях лишь четырехкратное и большее повышение титра антител во второй сыворотке имеет диагностическое значение.

2. Установление родовой, видовой и типовой принадлежности микроба или вируса. В этом случае неизвестным компонентом реакции является антиген. Для этой цели используются диагностические иммунные сыворотки, полученные от животных после вакцинации соответствующими антигенами. Это серологическая идентификация микроорганизмов.

При инфекционных заболеваниях серологические исследования для обнаружения специфических антител являются более доступным методом лабораторной диагностики, чем бактериологическое выявление возбудителя. В ряде случаев серологические исследования являются единственным методом диагностики инфекционных заболеваний.

Серологические реакции протекают in vitro в две фазы:

специфическая — фаза взаимодействия, в которой происходит комплементарное соединение активных центров антител и эпитопов антигена. Обычно эта фаза длится несколько секунд или минут;

неспецифическая — фаза проявления, характеризуется внешними признаками образования иммунных комплексов. Эта фаза может развиваться от нескольких минут до нескольких часов.

Реакции антиген-антитело в системе in vitro могут сопровождаться возникновением нескольких феноменов — агглютинации, преципитации, лизиса. Внешние проявления реакции зависят от физико-химических свойств антигена (размеры частиц, физическое состояние), класса и вида антител (полные и неполные), а также условий опыта (консистенция среды, концентрация солей, рН, температура).

Поливалентность антигенов и антител обеспечивает возникновение видимых невооруженным глазом агрегатов. Это происходит в соответствии с теорией образования сетей, согласно которой к образовавшемуся комплексу антиген-антитело последовательно присоединяются другие молекулы антител и антигена, реагируя со свободными детерминантами и антидетерминантами. В результате формируются сетевые структуры, которые превращаются в агрегаты, выпадающие в осадок. Характер и выраженность реакции зависят от количественного соотношения антигенов и антител. Наиболее интенсивно реакции проявляются в том случае, если реагенты находятся в эквивалентном соотношении. Агрегаты, способные выпадать в осадок, образуются при соединении антигенов с полными антителами. Неполные антитела (моновалентные) не вызывают образования сетевых структур и крупных агрегатов. Для выявления таких антител используются специальные методы, основанные на использовании антииммуноглобулинов. Серологические реакции, благодаря высокой специфичности и чувствительности, применяют для выявления и количественного определения антигенов и антител. Количество иммунореагентов в реакциях выражают титром — максимальным разведением сыворотки или антигена, при котором еще наблюдается реакция. Чувствительность используемых серологических методов приведена в таблице.

Чувствительность методов серологических реакций.

Реакция связывания комплемента

Краткая характеристика серологических методов исследования.

Реакция агглютинации (РА). В этой реакции принимают участие антигены в виде частиц (микробные клетки, эритроциты и другие корпускулярные антигены), которые склеиваются антителами и выпадают в осадок. В зависимости от вида используемого иммунодиагностикума различают реакцию микробной агглютинации, гемагглютинации, латексагглютинации, коаглютинации и т.д. Для диагностики инфекционных заболеваний реакцию агглютинации проводят в двух направлениях: определяют вид выделенного от больного микроба-возбудителя с помощью диагностической агглютинирующей сыворотки (серологическая идентификация микроба) и обнаруживают специфические антитела в сыворотке больного, используя стандартный микробный диагностикум (серодиагностика заболевания, постановка серологического диагноза). Различают прямую и непрямую реакции агглютинации.

Реакция прямой агглютинации микробов. В этой реакции антитела (агглютинины) непосредственно агглютинируют корпускулярные антигены (агглютиногены). Обычно используется взвесь инактивированных микроорганизмов. Для определения вида микроорганизмов используют специальные диагностические агглютинирующие сыворотки, полученные путем гипериммунизации лабораторных животных взвесью бактерий. Титром такой сыворотки является ее наибольшее разведение, при котором наблюдается отчетливая агглютинация соответствующего антигена. Развернутую РА проводят в пробирках или лунках пластин. Диагностическую сыворотку разводят до титра и вносят одинаковые количества антигена. При положительной реакции на дне пробирки (лунки) образуется рыхлый осадок в виде «зонтика», при отрицательном — осадок в виде «пуговицы». Для определения антител в сыворотке больного (серологический диагноз) используют стандартный микробный диагностикум, содержащий взвесь известных микробов или их антигенов.

Реакция прямой агглютинации клеток. Используется для определения групп крови. Применяются стандартные сыворотки крови доноров, содержащие известные анти-А или анти-В антитела. Реакцию ставят на стекле или пластинах. При наличии на эритроцитах А (2-ая группа крови), В (3-я группа крови) антигенов или обоих антигенов А и В (4-ая группа крови) соответствующие сыворотки агглютинируют эритроциты (сыворотка анти-А агглютирует эритроциты 2-ой и 4-ой групп).

Реакция непрямой (пассивной) агглютинации . Для получения феномена агглютинации антиген предварительно адсорбируют на корпускулярном носителе, которым служат инертные частицы (латекс, целлюлоза, полистирол и др.) или клетки (эритроциты барана, 1(0)-группы крови человека). В реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) в качестве носителя используют эритроциты. Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Если нагрузить эритроциты антителами, то их можно применять для выявления антигенов. Реакция непрямой гемагглютинации используется для определения в сыворотке больного антител к сальмонеллам, шигеллам,Yersinia pseudotuberculosis, Aspergillus fumigatus, Candida albicans. РНГА применяется для выявления антител к Tr. pallidum при лабораторной диагностике сифилиса.

Прямая и непрямая антииммуноглобулиновые реакции Кумбса . Используются для выявления «неполных» (неагглютинирующих) антител, которые образуются при различных заболеваниях: резус конфликте, аутоиммунных заболеваниях. Для постановки этих реакций необходима антиглобулиновая сыворотка, которую получают путем иммунизации кролика глобулинами человека. Такая сыворотка содержит полные (бивалентные) антитела-антииммуноглобулины. Прямая реакция: к отмытым эритроцитам крови больного добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку. Если на эритроцитах есть неполные антитела (гемолитическая анемия, резус конфликт), то они агрегируются. Непрямая реакция выявляет свободные антиэритроцитарные антитела в сыворотке крови больного. К сыворотке крови больного добавляют отмытые эритроциты донора 0(1) группы крови. Смесь инкубируют при 37 градусах Цельсия в течение 30 минут и отмывают эритроциты. Затем к ним добавляют антииммуноглобулиновую сыворотку. Если в сыворотке больного были неполные антиэритроцитарные антитела, то наступает агглютинация.

Реакция связывания комплемента (РСК) . В РСК помимо антигена и антител принимает участие третий компонент — комплемент, который способен связываться с комплексом антиген-антитело. Образование комплексов антиген-антитело и фиксация комплемента не сопровождаются видимыми изменениями. Для обнаружения связывания комплемента используют дополнительную индикаторную гемолитичесчкую систему (эритроциты барана, обработанные гемолитической антисывороткой). В присутствии комплемента (сыворотки морской свинки) происходит лизис эритроцитов. Если в опытной системе образовались комплексы антиген-антитело, которые связывают комплемент, то лизис эритроцитов в индикаторной системе не произойдет (реакция положительная). РСК используется при определении антител к вирусу Коксаки, при лабораторной диагностике сифилиса — реакция Вассермана.

Реакция лизиса. Сущность реакции состоит в том, что при взаимодействии специфических антител с антигенами клеток (эритроцитов, бактерий), на их поверхности образуется комплекс, который активирует комплемент по классическому пути, вследствие этого происходит лизис этих клеток. Эта реакция используется при типировании антигенов системы HLA на лимфоцитах. К типируемым лимфоцитам добавляют антисыворотки против различных HLA-антигенов, затем их отмывают и добавляют комплемент. Присутствие соответствующего антигена приводит к лизису лимфоцитов.

Реакция иммунофлюоресценции. Прямой метод иммунофлуоресценции (по Кунсу) основан на взаимодействии антител, меченных флуорохромом с антигеном, который нахо-дится на клетке, в клетке или тканях. В качестве флуорохрома часто используют флуоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ). Этот краситель дает зеленое свечение в ультрафеолетовых лучах, а тетраметилродаминизотиоцианат (ТРИТЦ) — оранжево-красное свечение. Прямой метод одноэтапный: на фиксированный мазок клеток с антигеном наносят диагностическую сыворотку с мечеными антителами, инкубируют, отмывают и учитывают свечение в люминесцентном микроскопе. Непрямой метод иммунофлуоресценции заключается в том, что антиген обрабатывают обычной диагностической сывороткой, а для обнаружения образовавшегося комплекса антиген-антитело используют антисыворотку, меченную флуорохромом. Непрямой метод позволяет обнаруживать различные комплексы антиген-антитело с помощью одной меченной антиглобулиновой сыворотки. Метод иммунной флуоресценции применяют для идентификации бактерий, вирусов, клеточных рецепторов и антигенов.

Иммуноферментный анализ (ИФА). В методах иммуноферментного анализа используют иммунореагенты, меченные ферментами. Наиболее широко используется твердофазный ИФА. В качестве твердой фазы используют полистироловые или поливиниловые планшеты или шарики, на которых адсорбированы антигены или антитела. Для выявления антител известный антиген адсорбируют в лунках полистироловой пластины. Затем вносят исследуемую сыворотку, в которой хотят обнаружить антитела к данному антигену. После инкубации лунки промывают для удаления несвязавшихся белков и вносят в них антииммуноглобулиновые антитела, меченые ферментом. После инкубации и отмывания в лунки добавляют специфичный для фермента субстрат и хромоген для регистрации конечных продуктов расщепления субстрата. О наличии и количестве антител судят по изменению цвета и интенсивности окраски раствора. Методы ИФА обладают высокой чувствительностью и специфичностью и получили наиболее широкое распространение среди иммунологических методов клинико-лабораторной диагностики.

Радиоиммунологический анализ. Принцип радиоиммунологического анализа (РИА) основан на выявлении комплекса антиген-антитело, в котором один из иммунореагентов был мечен радиоактивным изотопом. Обычно используют изотопы йода (I-125 и I-131). Учет реакции проводят по убыванию или по возрастанию радиоактивности (в зависимости от методики РИА) с помощью специальных счетчиков ионизирующего излучения. Метод высокочувствителен, но постепенно вытесняется иммуноферментным анализом, учитывая не безопасность работы с радиоактивными изотопами и необходимость в сложном регистрирующем оборудовании.

Иммуноблотинг. Вариант ИФА, повышающий чувствительность метода при изучении гетерогенной смеси антигенов. Смесь антигенов подвергают дискэлектрофорезу в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Полученные таким образом индивидуальные полосы антигенов переносят на нитроцеллюлозные полоски с помощью специального аппарата для переноса. В дальнейшем ход реакции сводится к гетерогенному не конкретному ИФА. Нитроцеллюлозные полоски с перенесенными на них антигенами обрабатывают испытуемой сывороткой. Имеющиеся в ней антитела связываются с индивидуальными антигенами, представленными в виде отдельных полос. Связавшиеся антитела проявляют при обработке конъюгатом фермента с антителами к иммуноглобулинам человека. На последнем этапе определяют активность фермента. Таким образом, можно определить против каких антигенов смеси направлены антитела сыворотки больного. На основе реакции иммуноблотинга созданы диагностические наборы для определения в сыворотке больного антител к вирусу гепатита С и ВИЧ-1-2.

Гибридизационный анализ (ГА). Проводится определение нуклеиновых кислот по связыванию с ДНК- и РНК- зондами. Метод ГА основан на отжиге одноцепочечного фрагмента нуклеиновой кислоты на комплиментарный ему участок другой молекулы анализируемой нуклеиновой кислоты с образованием двух цепочечной гибридной молекулы. Зонд может быть получен либо химическим синтезом олигонуклеотидов. Либо с помощью синтеза ДНК на одной из нитей детектируемой ДНК с помощью фермента ДНК-поли-меразы (для РНК с помощью РНК-зависимой ДНК-полимеразы). Полученная копия может быть встроена в плазмиду и затем размножена в составе каких-либо бактерий. Зонд должен иметь репортерную группу, выявляемую ферментативно или физическим методом. В настоящее время в медицинской практике успешно применяются ДНК-зонды, в которых в качестве репортерных групп используют биотин, дегоксигенин, комплексы платины и др. Введение меток может производиться с помощью химических, физических, фотохимических и ферментативных реакций. В частности при амплификации. Также разнообразны методы детекции образовавшегося гибрида нуклеиновых кислот: с помощью хромогенных и хемилюминесцентных субстратов высокоактивных ферментов (пероксидаза, щелочная фосфатаза), люминесценции и др. На основе нерадиоизотопного ГА созданы диагностикумы для выделения вируса папилломы, герпеса, хламидий и уреаплазмы.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР). ПЦР — это метод умножения числа копий нуклеиновых кислот (амплификация) in vitro. Перед проведением реакции из биологического материала выделяют ДНК или РНК возбудителя инфекционного заболевания или ДНК генома клеток человека. Полимеразная цепная реакция проводится с использованием двух или более олигонуклеотидных праймеров («затравки»), фланкирующих участок ДНК (РНК), специфический для определяемого участка генома. Процесс амплификации заключается в повторяющихся циклах температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующей достройки полинуклеотидных цепей с этих праймеров ДНК-полимеразой. Праймеры ориентированы таким образом, что синтез с помощью полимеразы протекает только между ними, удваивая количество копий этого участка ДНК в каждом последующем цикле. Как правило, проводится не менее 30 последовательных циклов реакции. Амплифицированный учасок именуют «ампликоном». В результате реакции происходит экспоненциальное увеличение количества копий специфического фрагмента. При амплификации используется термостабильная ДНК-полимераза, выделенная из бактерий Thermus aquaticus (Taq), живущих в горячих источниках.

Иммуноферментный метод диагностики сифилиса . Из всех серологических методов диагностики сифилиса ИФА метод является наиболее чувствительным (свыше 95%) и специфичным (100%). При использовании метода ИФА выявляются антитела класса IgM и IgG. Антитела класса IgM имеют важное значение для диагностики первичного, вторичного и врожденного сифилиса. Выявление антител к иммуноглобулинам класса М говорит о наличии у больного первичного, вторичного или врожденного сифилиса. В процессе лечения уровень антител класса IgM у больного снижается. По его уровню можно следить за эффективностью проводимого лечения. После успешного лечения уровень антител класса IgM снижается до отрицательных результатов. Антитела класса IgG появляются в острый период заболевания и могут сохранять у вылечившихся пациентов до 20 лет и более. При использовании ИФА метода сифилис диагносцируется в более ранние сроки, чем при использовании РВ. Согласно приказа Минздравмедпрома РФ №286 от 7 декабря 1993 года “О совершенствовании контроля за заболеваниями, передаваемыми половым путем” в качестве специфического теста для подтверждения сифилиса, вместо реакции иммобилизации бледных трепонем и РИФ рекомендуется использовать иммуноферментный анализ.

Серологическая диагностика вирусных инфекций .

Диагностика цитомегаловирусной инфекции . Возбудитель цитомегаловирусной инфекции принадлежит к семейству Herpes-viridae (герпесвирус человека 5), подсемейству бета, роду Cytomegalovirus (CMV — ЦМВ). Как и другие вирусы этого семейства ЦМВ способен вызывать персистентную и латентную инфекцию и реактивироваться в условиях ослабления иммунитета. ЦМВ распространен повсеместно. От 0,5% до 2,5% новорожденных детей инфицируются им в период внутриутробного развития, 10% из них погибают в течение года. Инфицирование плода может вызвать нарушение функциональных механизмов дифференцировки клеток и тканей органов. 10-60% детей заражаются при прохождении через родовые пути и в первые 6 месяцев жизни через грудное молоко.

В серологической диагностике ЦМВ инфекции используется много реакций, однако по-настоящему полезны те из них, которые могут выявить антитела, относящиеся к классам иммуноглобулинов М и G. Наличие антител IgM свидетельствует о свежем инфицировании или реактивации латентной и персистентной инфекции. Однако, повышение антител класса IgM может не выявляться в течение первых 4 недель после начала заболевания. В то же время до 2 лет после выздоровления титры могут оставаться высокими. В связи с этим однократное определение уровня антител IgM бесполезно при оценке остроты инфекции. Важно наблюдать за динамикой изменения уровня антител IgM (нарастание их уровня или снижение). Наличие антител IgM у беременных является показанием для кордоцентеза и исследования крови плода на наличие антител IgM. При наличии антител IgM он считается инфицированным.

Читайте также:  Брюшной тиф у собак симптомы

Известно, что 15-20% вирусных гепатитов обусловлено поражением печени ЦМВ. Кроме того, продукты IE-генов ЦМВ способны трансактивировать экспрессию Hbs- и Cor-антигенов вирусного гепатита В. Поэтому, возможно, ЦМВ играет этиологическую роль в возникновении карцином печени. Установлена связь ЦМВ-инфекции с развитием сахарного диабета. ЦМВ поражает многие типы клеток крови и может персистировать в моноцитах, макрофагах, мегакариоцитах, что в ряде случаев приводит к тромбоцитопении.

Группой наибольшего риска для ЦМВ-инфекции являются лица с искусственной или естественной иммуносупрессией — ВИЧ-инфицированные, реципиенты органов, тканей, клеток, онкологические больные. При оценке результатов выявления антител IgM следует учитывать, что наличие циркулирующих ревма-тоидных факторов может привести к ложноположительным результатам исследования. Антитела IgG появляются в период реконвалесценции и у переболевших сохраняются до 10 лет. Частота выявления антител класса IgG может достигать 100% среди различных групп населения.

Диагностика герпетической инфекции. Герпесвирусы человека типа 1 (HSV-1) и типа 2 (HSV-2) характеризуются эффективным разрушением зараженных клеток, относительно коротким репродуктивным циклом и способностью пребывать в латентной форме в ганглиях нервной системы. Ранее считалось, что HSV-1 вызывает преимущественно назолабильный герпес, а HSV-2 — генитальный. В настоящее время установлено, что оба возбудителя вызывают герпетические поражения и той, и другой локализации. Генерализованный герпес чаще вызывает HSV-2. Основным методом диагностики герпетической инфекции в настоящее время является серологический метод — выявление антител к вирусу герпеса простого типа 1 и 2 в сыворотке.

Антитела к вирусу простого герпеса обнаруживают у 80-90% взрослых людей. В развитых странах западной Европы генитальный герпес встречается в 7 раз чаще, чем сифилис и занимает второе место среди инфекций, передающихся половым путем после трихомониаза. Однократное определение уровня антител к вирусу герпеса простого типа 1 и 2 в сыворотке бесполезно при оценке остроты инфекции. Важно наблюдать за динамикой изменения уровня антител (нарастание их уровня или снижение). При острой инфекции или реактивации вируса выявляется нарастание уровня антител к вирусу герпеса простого типа 1 и 2. Пик титров антител к вирусу герпеса простого типа 1 и 2 в крови отмечается через 4-6 недель после развития клинической картины заболевания. Реинфекция у лиц с существующими до этого антителами не вызывает существенного изменения в титре антител даже при выраженной клинической картине.

Диагностика кори . Возбудитель кори — Рolinosa morbillarum относится к классу РНК-вирусов. Заболевают корью чаще дети дошкольного возрастта. Однако лица, не болевшие корью, остаются высоко восприимчивыми к ней в течение всей жизни и могут заболеть в любом возрасте. Заболеваемость корью выше в холодные периоды года (с ноября по март); через каждые 2-4 года наблюдаются подъемы заболеваемости. Для лабораторной диагностики кори используются РНГА, РСК и метод иммуноферментного анализа, определение антител IgМ и IgG к вирусу кори в сыворотке. Серологические методы исследования применяются для подтверждения диагноза, особенно стертых, атипичных форм. Наиболее часто используется РТГА и РСК. Поскольку в этих реакциях учитывается нарастание титра антител в парных сыворотках, то специфическая диагностика является ретроспективной. Первую пробу крови берут не позже 3-го дня периода высыпаний, вторую спустя 10-14 дней. Диагноз считается верифицированным только при нарастании титра антител в 4 раза и более. При применении метода иммуноферментного анализа выявляются антитела классов IgM и IgG. Антитела IgM появляются в острый период инфекции (пик к 10-му дню) и могут сохраняться до 2 лет (обычно исчезают к 90-му дню). Наибольшая вероятность выявления антител IgM отмечается в период высыпаний. Определение антител IgM применяется для диагностики острого периода коревой инфекции. Ложноположительные реакции можно получить при хроническом активном гепатите, СКВ, инфекционном мононуклеозе. Антитела IgG появляются в период реконвалесценции и у переболевших сохраняются до 10 лет. Появление антител IgG в конце острого периода заболевания является прогностически благоприятным признаком. Определение антител IgG применяется для диагностики кори и оценки напряженности противокоревого иммунитета.

Диагностика вирусного паротита . Возбудитель эпидемического паротита относится к миксовирусам. Эпидемическим паротитом чаще болеют дети 3-10 лет. В распространении инфекции большое значение имеют бессимптомные формы эпидемического паротита. Частота этих форм составляет 21,8-88% по отношению к общему числу инфицированных. Основным методом лабораторной диагностики эпидемического паротита является определение антител классов IgМ к вирусу паротита в сыворотке. Дети до 2 лет болеют эпидемическим паротитом редко, но затем заболеваемость возрастает и достигает пика к 5-9 годам. Диагностика эпидемического паротита основывается на клинической картине заболевания. Серологическое подтверждение острой инфекции может быть получено с помощью иммуноферментного метода, позволяющего определять антитела класса IgM. Антитела IgM появляются в острый период инфекции (в первые дни заболевания) и сохраняются до 2 лет (Казанцев А.П., 1988).

Диагностика ветряной оспы . Ветряная оспа и опоясывающий герпес — инфекционные болезни, вызываемые одним и тем же вирусом. Восприимчивость к ветряной оспе является всеобщей, но главным образом поражаются дети от 6 месяцев до 7 лет. В типичных случаях заболевания, т.е. у большинства больных, диагностика заболевания основана на клинических данных. Для лабораторного подтвержедения диагноза используется иммунноферментный метод определения антител IgМ к вирусу ветряной оспы в сыворотке. Верифицировать диагноз можно, используя метод иммуноферментного анализа, с помощью которого выявляются антитела класса IgM. Антитела IgM появляются в острый период инфекции и сохраняются до 2 лет.

Диагностика Т-клеточного лейкоза . HTLV I и HTLV II (human T-lymphotropic virus) относятся к группе ретровирусов. Вирус HTLV I обнаруживается у больных Т-клеточным лейкозом, а вирус HTLV II у больных так называемым волосатоклеточным лейкозом. Обе формы лейкоза характеризуются злокачественной трансформацией Т-лимфоцитов. Т-клеточный лейкоз встречается спорадически в Европе и Северной Америке, эндемическая форма обнаружена в южной части Японии и странах Карибского моря. Инфекция HTLV протекает как лихорадочное заболевание с обратимым процессом Т-клеточной пролиферации, лишь дополнительные транслокации приводят к злокачественной пролиферации. Вирус HTLV I повышает риск появления транслокаций. Выявление антител к вирусу Т-клеточного лейкоза помогает клиницисту в установлении этиологических причин лихорадки неясного генеза. У больных антитела появляются в конце острого периода заболевания, но выявляются не у всех больных. Различают две основные формы клеток при Т-клеточном лейкозе: клетки хелперы/индукторы (маркер CD4) или супрессоры/цитотоксические клетки (маркер CD8). Хелперный тип протекает как агрессивный лейкоз с высоким лейкоцитозом и относительно короткой продолжительностью жизни. Если клетки, в основном, несут маркер CD8, прогноз заболевания несколько более благоприятный (Лысенко А.Я., 1995). Современные эпидемиологические исследования показали смешанное присуствие обоих вирусов (HTLV I и HTLVII) среди различных групп населения, относящихся к группам высокого риска (использующие частые внутривенные введения лекарств и пациенты после трансфузий). Для выявления антител к вирусам HTLV I и HTLV II используются иммуноферментные наборы, которые имеют высокую чувствительность и специфичность. Исследование является скрининговым, и для подтверждения первично выявленных положительных результатов необходимо подтверждение — проведение иммуноблотинга. НTLV вирус может быть возбудителем следующих заболеваний: — острые и хронические лейкозы, острый и хронический лимфолейкозы, Т-клеточная лимфома, синдром Сезари, волосатоклеточный лейкоз, лимфоаденопатии, лимфопролиферативные заболевания.

Диагностика краснухи. Возбудитель краснухи относится к РНК-вирусам. Заболевание широко распространено во всех странах. Для серологической диагностики используется РТГА и ИФА. Точный диагноз краснухи можно установить только посредством выделения и идентификации вируса, либо на основании изменений титров специфических антител. Специфические антитела в реакции торможения гемаглютинации можно обнаружить на 2-й день после появления высыпаний, причем количество их увеличивается в течение последующих 10-21 дней. Для диагностики краснухи используются также иммуноферментный метод на выявление специфических антител классов IgM и IgG. Динамика выявления антител при использовании иммуноферментного метода соответствует результатам реакции торможения гемаглютинации. Антитела IgM появляются в острый период инфекции. Наличие специфических антител класса IgM свидетельствует о недавно произошедшем заражении краснухой (в пределах 2 месяцев), однако в некоторых случаях они могут сохраняться до 1 года. На первом году жизни у детей с врожденной краснухой часто обнаруживают специфические антитела класса IgM, они могут исчезнуть на 3-м или 4-м году жизни. Однократные титры, даже > 256, не могут считаться показателем свежей инфекции, поэтому титр антител класса IgM следует смотреть в динамике. Определение антител класса IgM используется для диагностики острого периода заболевания. Антитела IgG появляются в период реконвалесценции и у переболевших сохраняются до 10 лет и более. Определение антител класса IgG используется для оценки напряженности поствакцинального иммунитета и определения инфекции в анамнезе.

Диагностика гриппа . Возбудители гриппа относятся к семейству ортомиксовирусов, включающих 3 рода вирусов гриппа: А, В, С. Вирусы гриппа содержат РНК, наружную оболочку, в которой размещены 2 антигена — гемагглютинин и нейрамидиназа, способные менять свои свойства, особенно у вируса типа А. Точная идентификация возбудителя заболевания проводится посредством РСК или методом иммуноферментного анализа. При РСК исследование проводят в начале заболевания и через 5-7 дней, диагностическим считается нарастание титра антител не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток. По сравнению с РСК метод иммуноферментного анализа отличается большей чувствительностью. Как и при РСК, для использования в диагностических целях иммуноферментного анализа требуется сравнение уровня антител в пробах сыворотки, полученных от больных в начале и в конце заболевания.

Диагностика парагриппа . Известно 4 типа вирусов парагриппа: 1, 2, 3, 4, все они относятся к РНК-вирусам. Выделение вируса во внешнюю среду происходит в течение первой недели заболевания. В межэпидемическое по гриппу время парагриппозные заболевания составляют до 15-30% всех острых респираторных инфекций у взрослых. Точная идентификация возбудителя заболевания проводится посредством РСК или методом иммуноферментного анализа. При РСК исследование проводят в начале заболевания и через 5-7 дней, диагностическим считается нарастание титра антител не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток. По сравнению с РСК метод иммуноферментного анализа отличается большей чувствительностью. Как и при РСК, для использования в диагностических целях иммуноферментного анализа требуется сравнение уровня антител в пробах сыворотки, полученных от больных в начале и в конце заболевания.

Диагностика аденовирусной инфекции . В настоящее время у человека выделено более 40 серотипов аденовирусов. Аденовирусные заболевания широко распространены как в виде спорадических случаев, так и в виде вспышек. Аденовирусными инфекциями чаще всего болеют младенцы и дети. Среди острых респираторных заболеваний в меж-эпидемическое время удельный вес аденовирусных инфекций колеблется от 3 до 20%, во время вспышек — может доходить до 80-90% (Матков-ский В.С., Казанцев А.П., 1970).

Точная идентификация возбудителя заболевания проводится посредством РСК или методом иммуноферментного анализа. При РСК исследование проводят в начале заболевания и через 5-7 дней, диагностическим считается нарастание титра антител не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток. По сравнению с РСК метод иммуноферментного анализа отличается большей чувствительностью. Как и при РСК, для использования в диагностических целях иммуноферментного анализа требуется сравнение уровня антител в пробах сыворотки, полученных от больных в начале и в конце заболевания.

Диагностика респираторно-синтициальной инфекции . Респираторно-синтициальный вирус относится к парамиксовирусам. Заболевание характеризуется преимущест-венным поражением органов дыхания (бронхиты, пневмонии). Респираторно-синтициальный вирус является важнейшим возбудителем респираторных заболеваний у детей младшего возраста и частой причиной патологии нижних отделов дыхательных путей у младенцев. Точная идентификация возбудителя заболевания проводится посредством РСК или методом иммуноферментного анализа. При РСК исследование проводят в начале заболевания и через 5-7 дней, диагностическим считается нарастание титра антител не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток, но этот метод исследования менее чувствителен у детей в возрасте до 4 месяцев. По сравнению с РСК метод иммуноферментного анализа отличается большей чувствительностью при выявлении уровня подъема антител у новорожденных. Как и при РСК, для использования в диагностических целях иммуноферментного анализа требуется сравнение уровня антител в пробах сыворотки, полученных от больных в начале и в конце заболевания. Повышенные значения уровня антител при однократном исследовании могут указывать на ранее перенесенную инфекцию. Повторная инфекция сопровождается повышением уровня антител при исследовании в динамике.

Диагностика инфекционного мононуклеоза . Вирус Эпштейн-Барра — вирус из группы герпеса, обладает тропизмом к В-лимфоцитам, длительно персистирует в клетках хозяина в виде латентной инфекции. Вирус Эпштейн-Барра вызывает заболевание — инфекионный мононуклеоз. Он широко распространен во всем мире. С вирусом Эпштейн-Барра связывают этиологию и лимфомы Беркитта. Лабораторные исследования, в зависимости от применяемых методов, позволяют выявить антитела различного класса.

Из серологических методов диагностики заболевания наиболее распространена реакция Пауля-Буннеля, направленная на выявление гетерофильных антител в сыворотке. Диагностический титр — 1:32 и выше. Антитела к эритроцитам барана называются геторофильными антителами, которые можно обнаружить у 50% детей и 90-95% подростков и взрослых с мононуклеозом. Если исследование проводится в первую неделю заболевания, то у 10-15% пациентов с мононуклеозом результаты исследования могут быть отрицательными. Поэтому, если клиническая картина заболевания сходна с таковой при инфекционном мононуклеозе, то исследование на наличие гетерофильных антител следует повторить на 2-й или 3-й неделе заболевания. Уровень гетерофильных антител снижается по окончании острого периода инфекционного процесса, однако их титр можно определить в течение 9 месяцев после появления клинических симптомов. На смену методу определения антител к эритроцитам барана с титрованием в пробирке пришел метод “одного пятна”, который является более чувствительным и специфичным. Если гетерофильные антитела не выявляются, а клиническая картина заболевания соответствует инфек-ционному мононуклеозу, необходимо исследовать сыворотку крови на специфические антитела классов IgM и IgG в ИФА. Диагностическим критерием первичной инфекции является обнаружение антител класса IgM, представляющих собой антитела к антигену вирусного капсида. Антитела класса IgM появляются в острой стадии заболевания и исчезают через 1-3 месяца. Практически у всех пациентов с клиническими проявлениями заболевания имеются антитела, относящиеся к IgG (также антитела к капсидному антигену вируса), которые сохраняются пожизненно. Вследствие этого антитела класса IgG целесообразно использовать главным образом в качестве критерия подверженности инфицированию вирусом Эпштейн-Барра, но нельзя применять для диагностики первичной инфекции.

Диагностика инфекций, вызываемых стрептококками A,B,C,D,F,G. Стрептококки относятся к самым распространенным возбудителям бактериальных инфекций у человека. На основании антигенных различий большая часть стрептококков, выделенных от человека, относятся к группам A,B,C,D,F,G. Стрептококки группы А имеют исключительно важное значение, поскольку часто вызывают инфекционные заболевания у человека и играют существенную роль в развитии ревматизма и гломерулонефрита. Стрептококки группы В часто гнездятся в женских половых путях и на слизистых оболочках глотки и прямой кишки. Стрептококки групп С и G представляют собой комменсалы, но они способны вызывать фарингиты. Стрептококки группы D часто служат причиной инфекции мочевых путей у больных с их структурными аномалиями и более чем в 10% случаев относятся к этиологическим факторам при бактериальном эндокардите.

Ведущее место в диагностике заболеваний, вызываемых стрептококком, отводится бактериологическим методам. Серологическая диагностика направлена на выявление титра антител в сыворотке больного. Диагностическим считается нарастание титра антител через 10-14 суток не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток. Однократное исследование диагностического значения не имеет, так как практически у 100% взрослых в сыворотке определяются антитела к стрептококкам. Маркер острой стрептококковой инфекции — антитела против стрептококкового гемолизина-О (АСЛО). Уровень повышается в острый период инфекции (7-14 день) и снижается в период реконвалесценции и вы-здоровления. В клинической практике используется для наблюдения за динамикой ревматического процесса. Титр АСЛО повышается у 80-85% больных с ревматической лихорадкой. Диагностическое значение имеет стойкое значительное повышение активности АСЛО. К 3-й неделе заболевания ревматизмом титр значительно повышается, достигая максимума к 6-7 неделе. При благоприятном течении процесса к 4-8 месяцу активность АСЛО снижается до нормы. Под влиянием проводимой терапии эти сроки могут сократиться. Отсутствие снижения активности антистрептолизина-О к 6 месяцу заболевания позволяет предположить возможность рецидива. Стойкое и длительное повышение активности после ангины может быть предвестником ревматического процесса. В 10-15% случаев ревматизма повышения активности АСЛО не определяется.

Повышение АСЛО находят у некоторых больных с ревматоидным артритом, однако уровень повышения АСЛО при этом заболевании ниже, чем при ревматизме. При выделении b -гемолитических стрептококков группы А повышенные титры АСЛО выявляются у 40-50% бактерионосителей. Повышение уровня АСЛО характерно для: ревматизма, острой стрептококковой инфекции: ангины, скарлатины, пиодер-мии, гнойных воспалительных процессов, хронического тонзиллита, острого нефрита, гломерулонефрита.

Диагностика инфекций, вызываемых стафилококками . Стафилококк является одним из наиболее часто встречающихся микробов. У человека стафилококк чаще всего вызывает гнойные заболевания и осложнения при соматических и хирургических заболеваниях. Ведущее место в диагностике заболеваний, вызываемых стафилококком отводится бактериологическим методам. Серологическая диагностика направлена на выявление титра антител в сыворотке больного. Диагностическим считается нарастание титра антител через 7-10 суток при исследовании парных сывороток. Однократное исследование диагностического значения не имеет, так как практически у 100% взрослых в сыворотке определяются антитела к стафилококкам.

Диагностика инфекций, вызываемых пневмококками . Пневмококк (Streptococcus pneumoniae) чаще всего встречается как возбудитель пневмонии, у маленьких детей он может вызывать менингит, а у взрослых изредка вызывает сепсис. Лабораторная диагнос-тика пневмококковых инфекций складывается, в основном, из бактериоскопического и бактериологического исследований, серологическая диагностика играет вспомогательную роль. Серологическая диагностика направлена на выявление титра антикапсулярных антител в сыворотке больного. Диагностическим считается нарастание титра антител через 7-10 суток при исследовании парных сывороток.

Диагностика инфекций, вызываемых гемофильной палочкой . Палочка инфлюэнцы инфицирует только людей и локализуется, прежде всего, в верхних дыхательных путях. За последние 30-45 лет заболеваемость системными формами инфекции, вызываемой палочкой инфлюэнцы типа b, увеличилась в 4 раза, причем чаще стали распознаваться случаи поражения у взрослых. Выделение палочки инфлюэнцы при бактериологических посевах из носоглотки диагностического значения не имеет ввиду широкого распространения носительства палочки среди здоровых людей (у 90%). Для диагностики исследуются кровь, моча, жидкость из плевры, суставов, спинномозговая жидкость и др. Определение антител к гемофильной палочке в сыворотке является ретроспективным методом диагностики заболевания, так как необходимо исследовать сыворотку в первую неделю заболевания и через 10-14 суток. Диагностическим считается нарастание титра антител через 10-14 суток не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток.

Диагностика менингококковой инфекции . Возбудителем менингококковой инфекции является грамотрицательный диплококк Neisseria meningitis. Выделяют 5 серологических типов менингококка — A,B,C,D,E. В период эпидемий преобладает тип А, во внеэпидемический период — тип В. В диагностике менингококковой инфекции главное место отводится бактериологическому методу исследования. Однако, культивирование менигококков и выделение их в чистой культуре удается лишь у 30-40% больных. В связи с этим для диагностики используются серологические методы, наиболее чувствительны и информативны из них — РНГА и иммуноферментный методы. Исследуется сыворотка крови больного на 1-3 день от начала заболевания и на 7-10 день. Диагностическим считается нарастание титра антител через 7-10 суток не менее чем в 4 раза.

Диагностика бруцеллеза . Возбудитель бруцеллеза — бруцеллы — мелкие неподвижные грамотрицательные бактерии. При постановке диагноза бруцеллеза полученные клинико-эпидемиологические данные должны быть подтверждены лабораторно. С этой целью используются бактериологический, биологический и серологический методы исследования.

Реакция Хеддельсона на стекле используется для полуколичественного определения антител к возбудителю бруцеллеза и является ориентировочным тестом. Самым надежным серологическим тестом определения антител к возбудителю бруцеллеза в сыворотке является реакция агглютинации Райта, посредством которой определяют уровень антител, реагирующих, главным образом, с липополисахаридными антигенами бруцелл. Увеличение титров антител в 4 и более раз в пробах сыворотки крови, полученных с интервалом 1-4 недели, позволяет идентифицировать этиологический фактор заболевания. У большинства больных повышение титров специфических антител отмечается на 3-5-й день от начала заболевания, а на 3-й неделе фактически у всех происходит сероконверсия. Достоверным считается титр антител не менее 1:200 с последующим его нарастанием. Причиной ложноположительных результатов может служить проведение кожной пробы на бруцеллез, вакцинация против холеры, а также инфекции, вызванные холерным вибрионом, иерсиниями.

Агглютинирующие антитела IgG можно определить в реакции агглютинации путем экстрагирования с 2-меркаптоэтанолом. Антитела IgG появляются на 2-3-й неделе от начала заболевания, титры их достигают максимума примерно через 8 недель и сохраняются весь период активной инфекции, благодаря чему они свидетельствуют о продолжающемся активном инфекционном процессе. На фоне проводимого лечения титры антител IgG быстро снижаются и в течение года приближаются к нулю. В случае рецидивов уровень антител IgG снова повышается. Наличие однократного повышения титра антител IgG > 1: 160 является надежным объективным указанием на текущую или недавно имевшую место инфекцию и необходимость проведения лечения. После проведенного лечения и выписки больного из стационара рекомендуется проведение серологических исследований в течение первого года через 1,2,3,6,9,12 месяцев, а в течение второго года — ежеквартально.

Диагностика сальмонелезной инфекции . Описано более 2200 серологических вариантов сальмонелл, из них у человека более 700. Наиболее часто встречаются следующие сальмонеллы: S.typhimurium, S.heidelberg, S.enteritidis, S.anatum, S.derby, S.london, S.panama, S.newport. Ежегодно 20-35% изолятов приходится на S.typhimurium (Пак С.Г. с соавт., 1988).

Антигенная структура сальмонелл сложна. Она содержит О- и Н-антигены. О-антиген связан с соматической субстанцией клетки, термостабилен, одним из его компонентов является Vi-антиген; Н-антиген обладает жгутиковым аппаратом, термолабилен. Различия в строении О-антигенов позволили выделить серологические группы сальмонелл: А,В,С,D,Е и др. На основании различий в строении Н-антигенов внутри каждой группы установлены серологические варианты. В лабораторной диагностике сальмонеллезной инфекции испольуются бактериологические и серологические методы диагностики. Среди серологических методов диагностики до последнего времени широко применялась реакция Видаля, которая в последние годы постепенно утрачивает свое значение.

В настоящее время для выявления антител к сальмонеллам наиболее широко используются РПГА и иммуноферментный метод, которые более чувствительны и дают положительные результаты с 5-го дня заболевания (реакция Видаля на 7-8 день). Антитела у больных брюшным тифом, паратифом или другими серологическими типами сальмонелл появляются в крови уже к 4-му дню болезни и резко нарастают к 8-10-му дню. Количество их еще более увеличивается на 2-3-й неделе заболевания (Пак С.Г. с соавт., 1988). В первые месяцы после выздоровления исследование на антитела к сальмонеллам может служить и для целей ретроспективного диагноза. Необходимо, однако, учитывать индивидуальные отклонения от нормального цикла иммуногенеза и изложенной динамики изменения титра антител. В ослабленном организме со сниженной реактивностью слабо и медленно вырабатываются антитела. Интеркурентные заболевания также могут задержать их формирование. Таким образом, титр антител менее 1:200 не позволяет исключить заболевание, поэтому чрезвычайно важно исследовать титр антител в динамике в начале заболевания и через 10-14 суток. Нарастание титра антител через 10-14 суток не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток свидетельствует об инфекционном процессе.

На основании антигенной структуры, присущей различным видам сальмонелл, разработаны О- и Н-монодиагностикумы, которые позволяют установить серологический вариант сальмонелл. Первоначально исследуется сыворотка в РПГА с комплексным препаратом диагностикума эритроцитарного сальмонелезного-О. Далее, при наличии агглютинации с комплексным диагностикумом, РПГА ставят с препаратами групп А (1,2,12), В (1,4,12), С1 (6,7), С2 (6,8), Д (1,9,12) и Е (3,10). В таблице представлена антигенная характеристика сальмонелл, на основании которой и осуществляется диагностика серологических вариантов сальмонелл.

Антигенная характеристика сальмонел.

Vi-антителам в инфекционном процессе не придают диагностического и прогностического значения. Иначе обстоит дело с выявлением Vi-антител у бактерионосителей. Большая резистентность содержащих Vi-антиген носителей к защитным механизмам человека обуславливает более длительное носительство этих форм (Vi-форм) тифозных палочек, вследствие чего в крови носителей обнаруживаются Vi-антитела. Vi-антитела являются прямым доказательством носительства брюшнотифозных бактерий.

Диагностика туберкулеза . Возбудитель туберкулеза — Mycobacterium tuberculosis. Туберкулез широко распространенная инфекция. Основным методом ее диагностики является бактериологическое исследование. Однако, микобактерии очень медленно растут на питальных средах, и для получения даже предварительного ответа при бактериологическом исследовании требутся 3 недели, что очень не устраивает клиницистов. В таких случаях до получения ответа результатов бактериологического исследования используют серологические методы диагностики и метод цепной полимеразной реакции.

Определение антител к возбудителю туберкулеза в сыворотке является новым и очень перспективным методом серологической диагностики туберкулеза. Применяемый в настоящее время бактериологический метод выделения микобактерий туберкулеза, требует значительных временных затрат (от 4 до 8 недель) и весьма эффективен, в основном, при легочных формах туберкулеза. Использование серологических методов диагностики, в частности иммуноферментного метода, позволяет значительно сократить время лабораторного подтверждения клинического диагноза, активно применять его для диагностики внелегочных форм туберкулеза, и особенно ценен он для диагностики туберкулеза у детей (трудности со сбором мокроты, множественные рентгенологические исследования). Диагностическим считается нарастание титра антител через 10-14 суток не менее чем в 4 раза.

Диагностика дифтерии. Возбудитель дифтерии Corynebacterium diphtheriae, был выделен в чистом виде Леффлером в 1884 году. Corynebacterium diphtheriae отличается полиморфизмом. В последние годы отмечается резкий рост заболеваемости дифтерией. Диагностика дифтерии основывается на клинических и эпидемиологических данных. Для подтверждения диагноза используют бактериологический метод исследования, направленный на выявление этиологического фактора — палочки Леффлера. Возбудители дифтерии могут быть выделены через 8-12 часов, в том случае, если больной не принимал противобактериальных препаратов. Однако, следует учитывать, что при лечении антибиотиками, особенно пенициллином или эритромицином, до взятия материала на бактериологическое исследование, роста бактерий можно не получить в течении 5 дней, либо роста не бывает совсем. В этих случаях используются серологические методы диагностики, которые играют все более важную роль.

Из серологических методов используют реакцию непрямой гемагглютинации и иммуноферментного анализа. Определяют уровень антител в начале заболевания (1-3 день) и через 7-10 суток, диагностическим считается нарастание титра антител не менее чем в 4 раза. РНГА отличается высокой чувствительностью и специфичностью. В последние годы на смену РНГА приходит метод ИФА, обладающий еще большей чувствительностью и специфичностью. При выявлении контингента для проведения вакцинации определяют уровень антител до вакцинации, и если уровень антител отсутствует или низок, этим пациентам показано проведение вакцинации, об ее эффективности судят по нарастанию уровня антител после вакцинации. Главной целью активной иммунизации является выработка специфического иммунитета. Анатоксин служит непреодолимым барьером для дифтерийного токсина и защищает организм от интоксикации. При подборе контингента для вакцинации необходимо учитывать, что в большинстве случаев дифтерия развивается только у лиц, не имеющих антитоксина или с низкими его концентрациями — менее 0,03 АЕ/мл.

Диагностика коклюша . Возбудитель коклюша Bordetella pertussis — короткая палочка с закругленными концами, грамотрицательна, неподвижна. Чаще болеют дети до 5 лет, у взрослых болезнь нередко протекает атипично. Основной метод лабораторной диагностики — бактериологический, серологические методы диагностики непригодны для ранней диагностики коклюша. Для обнаружения антител к Bordetella pertussis в сыворотке используется реакция прямой гемагглютинации (РПГА). При исследовании в парных сыворотках для подтверждения диагноза необходимо получить нарастание титра антител в 4 раза и более (кровь на исследование берут с интервалом в 10-14 дней). Поэтому этот метод пригоден только для нужд ретроспективной диагностики.

Диагностика легионеллезной пневмонии . Legionella pneumophila — бактерии палочковидной формы, грамотрицательные. Легионелез — острая инфекционная болезнь, обусловленная различными видами легионелл, характеризуется лихорадкой, интоксикацией, пневмонией, и в ряде случаев поражением ЦНС, почек. Нередко развивается у больных СПИДом. Для подтверждения диагноза ис-пользуются серологические методы диагностики.

Антитела в сыворотке крови к легионелле пневмонии появляются с 6-7 дня болезни, титр их нарастает ко 2-3 неделе заболевания. Диагностическим считается нарастание титра антител в 4 раза и более, а при однократном исследовании — высокий уровень содержания специфических антител (титры не менее 1:128).

Диагностика иерсиниоза. Возбудитель иерсиниоза — грамотрицательный микроорганизм Yersinia enterocolitica. По антигенной структуре различают более 50 сероваров иерсиний. Наибольшее значение в патологии человека имеют серовары 03, 05, 07, 08, 09 (Сомов Г.П. с соавт., 1990). Yersinia enterocolitica — возбудитель кишечного иерсиниоза, которому свойственны преимущественное поражение желудочно-кишечного тракта. Поскольку бактериологическая диагностика иерсиниозов трудоемкая, длительная и не всегда завершается выделением возбудителя, главная роль в лабораторной диагностике принадлежит серологическим методам. Серологическая диагностика имеет большое значение для подтверждения не только клинического диагноза, но и определения этиологической роли выделенных иерсиний. Исследуются сыворотки, взятые в начале (1-3 день от начала заболевания) и повторно на 7-10 день. Диагностическим считается нарастание титра антител через 7-10 суток не менее чем в 4 раза при исследовании парных сывороток. Характерно значительное нарастание титра антител на 3-4-й неделе и снижение их уровня после 5-й недели заболевания. Наиболее часто выявляются антитела к иерсинии энтероколитика 03 и 09.

Диагностика псевдотуберкулеза . Возбудитель псевдотуберкулеза — Yersinia pseudotuberculosis, грамотрицательная палочка, относится к семейству энтеробактерий. Заболевание характеризуется общей интоксикацией, скарлатиноподобной сыпью, поражением желудочно-кишечного тракта и суставов. Серологический метод является основным методом лабораторной диагностики псевдотуберкулеза. Определение антител к возбудителю псевдотуберкулеза в сыворотке является ретроспективным методом диагностики псевдотуберкулеза. Исследуются парные сыворотки больного. Для выявления специфических антител кровь на исследование берут в начале заболевания и через 7-10 суток после первичного исследования. Диагностическим признаком псевдотуберкулеза является нарастание титра антител через 7-10 суток не менее чем в 4 раза. РНГА является высокоспецифичным методом и дает положительные результаты более чем у 80% больных (Сомов Г.П. с соавт., 1990). Антитела с помощью РНГА выявляются уже в первую неделю заболевания.

Диагностика хеликобактериоза . Возбудитель хеликобактериоза Helicobacter pylori — грамотрицательная палочка, чаще всего имеющий S-образную форму. Helicobacter pylori встречается в среднем у 87% больных язвенной болезнью и 75% больных острыми гастритами (Браунвальд Е., 1993). После проникновения бактерий в желудок происходит его адгезия к клеткам желудочного эпителия в области межклеточных промежутков. Последнее обусловлено хемотаксисом бактерий к местам выхода мочевины и гемина, которые используются для жизнедеятельности микробов. Расщепляемая уреазой бактерий мочевина превращается в аммиак и углекислый газ, которые создают вокруг колоний микробов защитный слой, предохраняющий их от неблагоприятного рН желудочного сока. В настоящее время предложен ряд механизмов, объясняющих действие Helicobacter pylori на слизистую оболочку. Во-первых, аммиак, получаемый в результате разложения мочевины уреазой, вырабатываемой бактериями, обладает способностью прямо или косвенно разрушать эпителиальный барьер. Во-вторых, бактерии Helicobacter pylori обладают способностью продуцировать цитопатические токсины. В третьих, бактерии способны продуцировать протеиназу и ферменты, разрушающие слизистуют оболочку желудка. В четвертых, бактерии снижают гидрофобную емкость эпителиального слоя, что связано с действием липаз продуцируемых бактериями.

Жизнедеятельность хеликобактеров связана исключительно лишь с эпителием желудочного типа. Поэтому патология двенадцатиперстной кишки (или других отделов кишечника и пищевода), обусловленная Helicobacter pylori возможна лишь при наличии желудочной дисплазии в двенадцатиперстной кишке (или других отделах желудочно-кишечного тракта).

Для диагностики Helicobacter pylori используются следующие методы диагностики.

а) обнаружение бактерий в мазках отпечатках;

б) выделение культуры Helicobacter pylori.

2. Серологические: РСК, РНГА, иммуноферментный анализ.

3. Морфологические: выявление хеликобактеров в биоптате при окраске по Рома-новскому-Гимзе, по Граму и др.

а) уреазный тест с биоптатами;

б) анализ выдыхаемого воздуха (аэротест, при котором в выдыхаемом воздухе определяется содержание аммиака, или проводится более сложный анализ содержания в выдыхаемом воздухе количества С 13 и С 14 после принятия пациентом внутрь мочевины, предварительно меченой указанными изотопами).

5. Полимеразная цепная реакция

Уреазный тест основан на способности бактерий Helicobacter pylori выделять большое количество уреазы. Полученный при фиброгастроскопии биоптат погружают в полужидкую среду желтого цвета, где содержится мочевина и вещество-индикатор рН, которой в щелочной среде, возникающей при расщеплении мочевины уреазой бактерий (при их наличии в биоптате), дает красное окрашивание.

Из серологических методов определения антител в крови к Helicobacter pylori наибольшей чувствительностью обладает иммуноферментный метод. Он обладает высокой чувствительностью и специфичностью, в отличие от уреазного, при котором велика вероятность получения ложноположительных результатов вследствие возможности обсеменения биопта другими видами бактерий, обладающих уреазной активностью. Определение антител к Helicobacter pylori является хорошим методов контроля за эффективностью проведенного лечения. Уровень антител определяется перед началом курса лечения и через 1-1,5 месяца после его окончания. Исчезновение антител в крови больного говорит об успешном лечении заболевания.

Заболевания вызываемые Chlamidia trachomatis.

Трахома. Хронический кератоконьюктивит, который начинается с острых воспалительных изменений коньюнктивы и роговицы и приводит к образованию рубцов и слепоте.

В соскобах с конъюнктивы методом флюоресценции определяют хламидийные антигены в эпителиальных клетках. Чаще их обнаруживают на ранних стадиях заболевания в верхней части конъюнктивы.

Генитальные хламидии и конъюнктивит. Частота обнаружения хламидий у мужчин с негонококковым уретритом составляет 30-50%. Инфицированность женщин, имеющих первую беременность достигает 5-20%, делающих аборт — 3-18%. Среди больных, имеющих признаки цервицита, хламидийная инфекция выявляется в 20-40%; сальпингит — в 20-70%; инфекцию мочевых путей — в 5-10%. У больных со смешанной урогенитальной инфекцией хламидиоз в сочетании с гонореей наблюдается в 23,5%, с трихомониазом — в 39,5%, с го-нореей и трихомониазом в 36,8% (Делекторский В.В. с соавт., 1996). В последние годы ин-фекция нередко ассоциирована с микоплазменной и уреаплазменной инфекцией, гарднереллезом. По данным различных авторов 6-7% детей уже при рождении оказываются инфицированными хламидиями. Иммунологические типы Chlamidia trachomatis D-К являются возбудителями заболеваний, передаваемых половым путем, при которых могут развиваться и инфекционные поражения глаз (коньюнктивиты). У мужчин Chlamidia trachomatis явля-ются возбудителями негонококковых уретритов, эпидидимитов, простатитов, проктитов, болезни Рейтера. У женщин Chlamidia trachomatis вызывает цервициты, сальпингиты, воспалительные заболевания органов малого таза, перигепатит, уретрит. В результате у мужчин и у женщин может развиваться бесплодие. Считается, что около 80% трубного бесплодия вызвано хламидиями. При любой локализации инфекции может развиваться соответствующая симптоматика заболевания. В то же время болезнь может протекать бессимптомно (примерно 50% случаев у женщин), но передаваться половым путем партнерам (Козлова В.И., Пухнер А.Ф., 1995).

Поражения дыхательных путей, вызываемых Chlamidia trachomatis . У взрослых, больных хламидийным конъюнктивитом, нередко появляются симптомы поражения верхних дыхательных путей (фарингит, ринит, отит и др.), которые развиваются, по-видимому, в результате распространения хламидийной инфекции через слезноносовой канал. Развития пневмонии у взрослых обычно не наблюдается. У новорожденных, заразившихся от матерей, через 2-12 недель после родов могут развиваться поражения респираторной системы вплоть до пневмонии.

Венерическая лимфогранулема . Эта форма хламидиоза распространена в тропических и умеренных зонах. Для нее характерно развитие гнойного пахового лимфаденита. Возбудителями являются Chlamidia trachomatis иммунологических типов L1-L3.

Синдром Рейтера . Для синдрома Рейтера характерна классическая триада: уретрит, коньюнктивит и артрит. При данном синдроме хламидии могут быть обнаружены в синовиальной жидкости. Наблюдается возрастание титра антител классов IgА, IgМ, IgG в ходе развития активной инфекции суставов.

Эндокардиты. Клинически протекают молниеносно со значительным поражением клапанов аорты.

Первым и самым ответственным этапом при диагностике инфекционного процесса, является забор материала у пациента.

1. Методика забора материала из уретры у мужчин:

Пациент не должен мочиться за 1 час до забора материала;

Ввести маленький капроновый тампон в уретру на 2-4 см, повернуть тампон на

Сразу же после забора материала поместить тампон на предметное стекло и вращая

Читайте также:  Варианты течения брюшного тифа

тампон по кругу, равномерно распределить материал по поверхности предметного

2. Методика забора материала из цервикального канала с использованием цитощеточки:

Удалить ватой или тампоном слизь;

Ввести щеточку в цервикальный канал и повернуть ее на 360 0 вынуть, не касаясь

Поместить щеточку на предметное стекло и вращая по кругу, равномерно распре-

делить материал по поверхности предметного стекла;

Высушить мазок на воздухе и доставить в лабораторию.

3.Методика приготовления мазков с конъюнктивы:

Нанести местный анестетик на один или оба глаза;

Используя малый тампон, осторожно протереть им внутреннюю поверхность ниж-

него, а затем верхнего века, при заборе материала с обоих глаз вначале протирают

Во время острой хламидийной инфекции и вскоре после нее наблюдается повышение титра антител IgА, IgМ и IgG к хламидия трахоматис в крови. Инфици-рованный Chlamidia trachomatis организм обычно продуцирует антитела, однако эти антитела имеют слабое защитное действие: обычно возбудители персистируют даже при наличии высоких титров антител. Раннее интенсивное лечение может угнетать синтез антител. Вследствие относительно большой “антигенной массы” хламидий при генитальных инфекциях сывороточные антитела IgG обнаруживаются довольно часто и в высоких титрах. Так, у детей с хламидийной пневмонией они могут очень высокими — 1:2000 — 1:4000. Антитела класса IgМ выявляются в острый период инфекции, наличие антител IgМ свидетельствует об активности хламидиоза. Немного позже появляются антитела класса IgG. Выявление антител класса IgА свидетельствует о выраженном аутоаллергическом процессе у больного и наиболее часто определяется у больных с синдромом Рейтера. Наличие антител класса IgА говорит о тяжелом течении заболевания у пациента. Определение уровня антител к хламидиям в крови необходимо проводить в динамике, оценка результатов исследований, основанная на однократном исследовании, ненадежна.

Новорожденные и их матери обследуются в 1-3 сутки после родов и в случае отрицательного результата при наличии клинической картины заболевания — повторно на 5-7 и 10-14 сутки. Отсутствие у новорожденных антихламидийных антител не означает отсутствие хламидийной инфекции.

Определение антител к хламидия трахоматис в крови является вспомогательным тестом диагностики хламидиоза, так как из-за низкой иммуногенности у 50% больных хламидиозом антитела не обнаруживаются.

Экспресс-диагностика урогенитального хламидиоза.

Метод основан на выявлении антигенов хламидия трахоматис в соскобах из уретры, цервикального канала и конъюнктивы методом иммуноферментного анализа с визуальной оценкой результата. Данный метод основан на наличии у хламидий родоспецифического липополисахаридного антигена. Этот метод позволяет проводить быстрый скрининг возбу-дителя, однако окончательный диагноз устанавливается при помощи метода флюоресцирующих антител или ПЦР. Результаты исследования выражаются в виде положительного или отрицательного ответа. Чтобы получить удовлетворительные результаты исследования, необходимо соблюдать определенные правила: материал должен быть правильно взят (соскоб) и своевременно доставлен в лабораторию (в течение 2-х часов).

Определение хламидия трахоматис в материале методом флюоресцирующих антител.

Принцип метода заключается в использовании моноклональных антител, меченных флюоресци-рующим изотиоцианатом против главного белка внешней мембраны хламидий, имеющегося во всех сероварах Chlamidia trachomatis, а также у элементарных и ретикулярных телец. Чувствительность данного метода достигает 95%, а применение моноклональных антител обуславливает высокую специфичность.

Количественное определение антигена хламидия трахоматис в материале иммуноферментным методом.

Данный метод исследования дополняет спектр других методов диагностики хламидиоза и позволяет диагностировать до 15 серотипов хламидий. ИФА метод используется для количественного определения антигена хламидий в эндоцервикальном, уретральном и ректальном отделяемом, а также в моче, в глазном отделяемом больных с целью диагностики заболевания. Специфичность данного метода составляет 97%, чувствительность — 92%, что является сравнимым с методом полимеразной цепной реакции (99,8% и 94,6% соответственно). Вместе с тем, этот метод является менее трудоемким. Метод основан на прямом определении образовавшегося иммунокомплекса антитело-липосахаридный антиген хламидии. В качестве антител используются кроличьи антихламидия антитела.

Диагностика микоплазменной инфекции . В настоящее время описано несколько штаммов микоплазм. Микоплазмы — группа весьма разнообразных и характерных по морфологии бактерий размером 150-200 нм. Они не имеют плотной клеточной стенки и покрыты трехслойной цитоплазматической мембраной. Микоплазмы грамотрицательны и обладают крайне низкой чувствительностью к большинству красителей. Микоплазмы можно подразделить в зависимости от вызываемых ими патологических процессов у человека на 6 групп:

1. Микоплазмы — возбудители респираторный заболеваний, основной возбудитель Mycoplasma pneumoniaе.

2. Микоплазмы, связанные с заболеваниями мочеполового тракта, основные возбудители Mycoplasma hominis тип I, реже Mycoplasma hominis тип II и Ureaplasma urealitica.

3. Микоплазмы — возбудители ревматоидных процессов.

4. Микоплазмы — возбудители сложных воспалительных синдромов.

5. Микоплазмы, связанные с разнообразными по их локализации воспалительными процессами.

6. Микоплазмы — условные сапрофиты, встречающиеся в выделениях практически здоровых людей.

Диагностика микоплазменной пневмонии .

Mycoplasma pneumoniae является возбудителем заболеваний респираторного тракта человека, паразатируя на клеточных мембранах. Удельный вес респираторных микоплазмозов, в общей группе респираторных заболеваний, колеблется для разных групп населения от 35 до 40%. Микоплазменные пневмонии составляют 10-17% случаев от общего числа пневмоний. С интервалами в несколько лет могут развиваться эпидемии пневмонии, вызываемой М. pneumonia, и при этом частота случаев развития заболевания может вдвое превышать ее обычный уровень. Лабораторная диагностика заболевания осуществляется бактериологическими и серологическими методами.

Правила забора материала для исследования.

Клинический материал (лаважная жидкость, мазки из носоглотки и пр.) получают с помощью ватных тампонов, полученный материал наносят тонким слоем на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла, подсушивают на воздухе и фиксируют.

Выявление антигенов Mycoplasma pneumoniae в материале методом прямой иммунофлюоресценции.

Полученный мазок с материалом от больного обрабатывают поликлональными антителами к цитоплазматической мембране Mycoplasma pneumoniae, меченных ФИТЦ. При просмотре препарата в люминисцентном микроскопе в результате произошедшей реакции антиген-антител определяется зеленая флюоресценция микоплазм. Положительная оценка результатов исследования предполагает выявление в препарате не менее 10 ярко-зеленых гранул, четко выявляющихся на красноватом фоне препарата. При получении меньшего количества светящихся гранул в препарате и отсуствие в препарате эпителиальных клеток исследование рекомендуется повторить. Если количество эпителиальных клеток в препарате достаточно, а количество светящихся гранул менее 10, выдается отрицательный результат. Серологическая диагностика основана на выявлении титра антител к микоплазме пневмонии в сыворотке. Кровь на исследования берут в первые дни болезни — до 6-го дня и спустя 10-14 дней, диагностическим считается нарастание титра антител в 4 раза и более. Максимальное увеличение титра антител достигается через 4 недели заболевания. Однако, интерпретация результатов серологического исследования требует определенной осторожности, так как вследствие активации поликлональных В-клеток могут появиться “неспецифические антитела”; другие возбудители инфекционных заболеваний, включая цитомегаловирус, вирусы Эпштейн-Барра и кори, могут вызывать развитие сходных эффектов, что затрудняет оценку результатов исследования.

Диагностика микоплазменной инфекции урогениталий .

Микоплазменные инфекции урогениталий в настоящее время занимают ведущее место среди инфекций, передающихся половым путем. Она часто сочетается с гонококками, трихомонадами и условно патогенными микроорганизмами. Проведенные бактериологические исследования показали, что микоплазмоз выделяется в виде моноинфекции у 12,8% больных, в сочетании с одним микроорганизмом у 76,5% и в сочетании с 2-3 видами уретральной микрофлоры — у 10,7% больных (Козлова В.И., Пухнер А.Ф., 1995). Факторами, обуславливающими патогенность микоплазм, являются способность их прикрепляться к различным клеткам (эпителию, лейкоцитам, сперматозоидам) и оказывать токсическое и деструктивное действие. Обследование на микоплазмоз должно проводиться у всех мужчин, женщин и детей, обратившихся к врачу по поводу воспалительных заболеваний мочеполовых органов, а также у всех половых контактеров или предпологаемых источников заражения микоплазмозом и у лиц с клиническими подозрениями на наличие заболевания. Необходимо учитывать, что характерной особенностью микоплазменной инфекции является существование латентной формы и микоплазмоносительство в мочеполовых органах у мужчин и женщин.

Диагноз урогенитального микоплазмоза основывается на данных анамнеза, клинического обследования и результатах лабораторных исследований. Диагноз во всех случаях должен быть подтвержден выделением микоплазм в культуре (бактериологический метод). В последние годы наибольшее распространение в лабораторной диагностике микоплазмоза урогениталий нашли серологические методы — РСК и РНГА, позволяющие выявить нарастание титров антител в крови в процессе болезни при исследовании парных сывороток; метод иммунофлюоресценции, позволяющий идентифицировать микоплазмы в различном материале, взятом от больных, а также метод ПЦР, который обладает наиболее высокой чувствительностью и специфичностью.

Правила забора материала для исследования.

Клинический материал берется с доступных исследованию слизистых оболочек (уретра, цервикс, влагалище) с помощью ватных тампонов, ложки Фолькмана и других инструментов, полученный материал наносят тонким слоем на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла, подсушивают на воздухе и фиксируют.

Выявление антигенов Mycoplasma hominis в материале методом прямой иммунофлюоресценции.

Mycoplasma hominis вызывает острые и хронические воспалительные заболевания урогенитального тракта, послеродовую лихорадку и сепсис, септические и спонтанные аборты. Mycoplasma hominis обнаруживается методом прямой иммунофлюоресценции при воспалительных заболеваниях урогениталий по данным разных авторов в 15-90% случаев.

Полученный мазок с материалом от больного обрабатывают поликлональными антителами к цитоплазматической мембране Mycoplasma hominis, меченных ФИТЦ. При просмотре препарата в люминисцентном микроскопе, в результате произошедшей реакции антиген-антитело, определяется зеленая флюоресценция микоплазм. Положительная оценка результатов исследования предполагает выявление в препарате не менее 10 ярко-зеленых гранул, четко выявляющихся на красноватом фоне препарата. При получении меньшего количества светящихся гранул в препарате и отсуствие в препарате эпителиальных клеток, исследование рекомендуется повторить. Если количество эпителиальных клеток в препарате достаточно, а количество светящихся гранул менее 10, выдается отрицательный результат.

Выявление антигенов Ureaplasma urealitica в материале методом прямой иммунофлюоресценции.

Ureaplasma urealitica относится к виду микоплазм. Название “уреаплазмы” происходит от способ-ности этого вида микоплазм продуцировать фермент уреазу, расщепляющий мочевину с образованием углекислого газа и аммиака. Ureaplasma urealitica вызывает воспалительные заболевания урогенитального тракта и может являться причиной развития бесплодия как у мужчин, так и женщин. У мужчин Ureaplasma urealitica вызывает простатит и оказывает влияние на сперматогенез, что приводит к снижению фертильности. Бесплодие женщин обусловлено воспалительными процессами гениталий. Забор материала на исследование, его проведение и оценка результатов аналогична диагностике Mycoplasma hominis.

Диагностика гонореи. Гонококки вызывают гнойное воспаление половых путей — гонорею. Трудность их обнаружения заключается в их слабой жизнеспособности, которая не позволяет широко пользоваться бактериологическим методом. В последние годы наибольшее распространение нашли серологические методы диагностики. Они дают положительные результаты исследования не только при острых формах заболевания, но, что наиболее важно, в случаях затяжных и хронических процессов, а также при осложнененной гонорее и при отдаленных метастазах.

Экспресс-диагностика гонореи в отделяемом материале из уретры .

Метод основан на выявлении антигенов нейсерий в соскобах из уретры, цервикального канала и конъюнктивы методом иммуноферментного анализа с визуальной оценкой результата. Данный метод основан на наличии у нейсерий родоспецифического липополисахаридного антигена. Этот метод позволяет проводить быстрый скрининг возбудителя. Результаты исследования выдаются в виде положительного или отрицательного ответа. Чтобы получить удовлетворительные результаты исследования, необходимо соблюдать определенные правила: материал должен быть правильно взят (соскоб) и своевременно доставлен в лабораторию (в течение 2-х часов).

Тест используется для диагностики гонококковой инфекции при заболеваниях: уретрит, простатит, вагинит, цервицит, аднексит.

Серологическая диагностика инфекций, вызываемых простейшими .

Диагностика амебиаза . Возбудитель амебиаза — Entamoeba hystolitica, существует в трех формах: тканевой (forma magna), просветной (forma minuta) и цистной (forma cystica). Заболевание встречается повсеместно. Во многих районах здоровые носители составляют 14-20% всего населения. Диагноз кишечного амебиаза устанавливается на основании обнаружения возбудителя в фекалиях или тканях. Диагностика внекишечного амебиаза затруднена. В таких случаях ведущее место в диагностике заболевания занимают серологические методы исследования. Самым чувствительным из имеющихся методов является РНГА и иммуноферментный метод. Антитела к амебе хистолитика в сыворотке выявляются почти у всех больных с амебным абсцессом печени и у значительного большинства лиц с острой амебной дизентерией. Диагностическим считается нарастание титра антител через 10-14 суток не менее чем в 4 раза. Антитела обычно не определяются у бессимптомных цистовыделителей, что свидетельствует о том, что для продукции антител требуется внедрение возбудителя в ткани. Повышенный титр антител может сохраняться в течение нескольких месяцев или лет после полного выздоровления.

Диагностика эхинококкоза . Эхинококкоз — это тканевой гельминтоз, вызываемый личиночными стадиями Echinococcus granulosus или E.multilocularis, различающихся морфологически и биологически. У человека Е.granulosus вызывает образование кист, главным образом в печени и легких, в то время как E.multilocularis вызывает образование многокамерных (альвеолярных) очагов поражения, обладающих способностью к инвазивному росту в прилегающих тканях. Диагностика заболевания представляет определенные трудности. Если при разрыве эхинококковой кисты или истечении из нее жидкости развивается анафилактическая реакция с эозинофилией и повышением содержания IgE, это позволяет заподозрить эхинококкоз. Однако, эозинофилия отмечается менее чем в 25% случаев. Для диагностики эхинококкоза разработаны серологические методы диагностики: РНГА, РСК, реакция латекс-агглютинации с антигеном из жидкости эхинококковых пузырей. Однако использование этих методов ограничено тем, что у многих носителей эхинококковых кист иммунный ответ не развивается и антитела в крови не образуются. РНГА дает положительные результаты у 90% больных с кистами в печени и только у 50-60% больных с поражением легких. После хирургического удаления кист определение антител к эхинококку в сыворотке используется для контроля за радикальностью проведенной операции. Исчезновение антител через 2-3 месяца после операции говорит о радикальности удаления кисты, снижение уровня антител и последующий рост их уровня в послеоперационном периоде свидетельствует о рецидиве кисты.

Серологическая диагностика грибковых инфекций.

Диагностика аспергиллеза . Возбудителем аспергиллеза являются условно-патогенные плесневые грибы рода Aspergillus. Заболевание характеризуется преобладанием поражения органов бронхо-легочной системы. При серологическом исследовании антитела класса IgG к антигенам Aspergillus выявляются в сыворотке крови большинства инфицированных и практически у всех больных, в легких которых при рентгенологическом исследовании обнаружен грибковый “шар” (около 90% случаев). Тест имеет 100% специфичность. Важно исследовать уровень антител в динамике. Для заболевания характерно нарастание титра антител.

Диагностика кандидоза . Чаще всего кандидоз вызывается Candida albicans. Candida albicans — овальные, размножающиеся почкованием и спорообразованием дрожжеподобные грибы. В норме кандида — представители резидентной микрофлоры слизистых оболочек, пищеварительного канала и женских мочеполовых органов. Кандидоз чаще всего регистрируется у больных с ослабленным иммунитетом. Диагностика поверхностного кадидоза основана на обнаружении элементов гриба в окрашенном мазке. При висцеральных формах кандидомикоза большое диагностическое значение имеют серологические иссле-дования. Используется РСК и иммуноферментный метод. Антитела обнаруживаются иммуноферментным методом более чем у 90% больных уже в первые 2 недели заболевания и у переболевших сохраняются до 5 лет. Для подтверждения диагноза важно следить за динамикой уровня антител, 4-х кратный подьем между титрами антител в острой и реконвалесцентной стадиии позволяет предпологать этиологию заболевания, 4-х кратное снижение их уровня в процессе лечения является показателем успешной терапии заболевания. Серологическая диагностика при поверхностном кандидомикозе неэффективна, только тяжелые формы поражения кожи и слизистых оболочек сопровождаются повышением уровня антител. Определение антигена Candida albicans в сыворотке применяется для непосредственного выявления кандидозного антигена в крови больных с инвазивным кандидозом. Этот тест более специфичен, чем выявление антител. Величина > 2 нг сывороточного кандидозного антигена при ИФА предпологает инвазивный кандидоз. Чувствительность метода у онкологических больных составляет 65-70% при специфичности 100% (Тиц У., 1997). Для выявления антигена кандидоза в сыворотке исследование рекомендуется проводить не реже 2-х раз в неделю.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА)

1) для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий и других высокодисперстных веществ, риккетсий и вирусов, комплексы которых с агглютининами в обычных РА увидеть не удается,

2) для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперстным веществам и мельчайшим микроорганизмам.

Под непрямой, или пассивной, агглютинацией понимают реакцию, в которой антитела взаимодействуют с антигенами, предварительно адсорбированными на инертных частицах (латекс, целлюлоза, полистерол, оксид бария и др. или эритроциты барана, I(0)-группы крови человека)

В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) в качестве носителя используют эритроциты . Нагруженные антигеном эритроциты склеиваются в присутствии специфических антител к данному антигену и выпадают в осадок. Сенсибилизированные антигеном эритроциты используют в РПГА как эритроцитарный диагностикум для обнаружения антител (серодиагностика). Если нагрузить эритроциты антителами (эритроцитарный антительный диагностикум), то можно применять для выявления антигенов.

Рис. 3. Схема РПГА: эритроциты (1), нагруженные антигеном (3), связываются специфическими антителами (4).

Постановка . В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных разведений сыворотки. В предпоследнюю лунку вносят — 0,5 мл заведомо положительной сыворотки и в последнюю 0,5 мл физиологического раствора (контроли). Затем во все лунки добавляют по 0,1 мл разведенного эритроцитарного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 2 ч.

Учет . В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном — оседают в виде пуговки или колечка.

Учет результатов РНГА, поставленной с целью обнаружения ботулотоксина.

Возбудитель ботулизма — Clostridium botulinum вырабатывает токсины семи сероваров (А, B, C, D, E, F, G), однако чаще других встречаются серовары А, В, Е. Все токсины отличаются по антигенным свойствам и могут быть дифференцированы в реакциях типоспецифическими сыворотками. Для этой цели можно поставить реакцию пассивной (непрямой) гемагглютинации с сывороткой больного, в которой предполагается наличие токсина, и эритроцитами, нагруженными антителами антитоксических противоботулинических сывороток типов А, В, Е. Контролем служит нормальная сыворотка.

Рис. 3. Постановка и результат РНГА.

Учет. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя клеток со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном — оседают в виде пуговки или колечка.

Вывод: В сыворотке больного обнаружен ботулотоксин тип Е.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА).

Рис. 8. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) (схема).

Принцип реакции основан на способности АТ связывать различные вирусы и нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты. Визуально этот эффект и проявляется в «торможении» гемагглютинации. РТГА применяют при диагностике вирусных инфекций для выявления специфических антигемагглютининов и идентификации различных вирусов по их гемагглютининам, проявляющим свойства Аг.

Типирование вируса проводят в реакции РТГА с набором типоспецифических сывороток. Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы вируса типа А с антигенами H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 и другие могут быть дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток

Рис. 9. Результаты РТГА при типировании вируса гриппа

Условные обозначения: — торможение гемагглютинации (пуговка) ; — гемагглютинация (зонтик).

Выводы: Исследуемый материал содержит вирус гриппа тип А с антигеном H3N2

Реакции преципитации (РП) основаны на фенoмене образования видимого осадка (преципитата) или общего помутнения среды после взаимодействия растворимых либо находящихся в коллоидном дисперсном состоянии Аг с АТ. РП ставят в специальных узких пробирках. В качестве реагентов используют гипериммунные преципитирующие сыворотки с высокими титрами АТ к гомологичным Аг. РП позволяет быстро (в течение нескольких секунд) выявлять незначительные количества Аг (можно выявить антиген в таких малых количествах, которые не обнаруживаются химическим путем). Они очень чувствительны, и их применяют для тонкого иммунохимического анализа, выявляющего отдельные компоненты в смеси антигена.

Рис. 5. Схемы реакций преципитации в пробирке (А) и агаре (Б).

Реакция кольцепреципитации Асколи

Постановка . В узкую пробирку диаметром 0,5 см с неразведенной преципитирующей сывороткой в количестве 0,3-0,5 мл, держа ее в наклонном положении, пастеровской пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем антигена. Пробирку осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально. При правильном наслоении преципитиногена на сыворотку четко обозначается граница между двумя слоями жидкости. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.

Учет . Результаты реакции учитывают в зависимости от вида антигена и антител через 5-10 мин, 1-2 ч или через 20-24 ч. В случае положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.

Рис. 4. Реакция кольцепреципитации.

Определение токсигенности коринебактерий дифтерии в реакции преципитации в агаре.

Эта издавна используемая реакция преципитации, предложенная для определения токсичности коринебактерий дифтерии, ставится на фосфатно-пептонном агаре в чашке Петри. Вдоль ее посередине помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, смоченной антитоксической сывороткой. После подсушивания на расстоянии 1 см от края полоски бляшками диаметром 10 мм подсевают выделенные культуры. В одной чашке можно сеять от 3 до 10 культур, одна из которых, контрольная, должна быть заведомо токсигенной. Посевы помещают в термостат.

Учет реакций проводят через 24-48-72 ч. Если культура токсигенная, на некотором расстоянии от полоски бумаги возникают линии преципитата, совпадающие с линиями преципитата контрольной культуры. Они имеют вид «стрел-усиков», которые хорошо видны в проходящем свете.

Рис. 5. Реакция преципитации в агаре.

Реакции нейтрализации (РН) основаны на способности АТ связывать различные возбудители или их метаболиты, лишая тем самым их возможности реализовать свои биологические свойства (иными словами, АТ нейтрализуют возбудителей). На практике РН применяют для выявления вирусов и различных токсинов. В определенной степени к ним же относят реакции торможения вирусиндуцированной гемагглютинации и иммобилизации.

Реакция нейтрализации вирусов

В сыворотки крови переболевших лиц циркулируют антитела, нейтрализующие вирусы. Их наличие выявляют смешиванием культуры возбудителей с сывороткой с последующим введение лабораторному животному или заражением культуры клеток. На эффективность нейтрализации указывает выживание животного либо отсутствие гибели клеток в культурах.

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК)

РСК широко используют для лабораторной диагностики венерических болезней, риккетсиозов, вирусных инфекций. Реакция протекает в две фазы. Первая фаза — взаимодействие антигена и антител при обязательном участии комплемента.

Вторая — выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если же комплемент адсорбировался ранее на комплексе антиген-антитело, то гемолиз эритроцитов не наступает.

При наличии в исследуемой сыворотке антител, комплементарных антигену, образующийся комплекс антиген-антитело связывает (адсорбирует) на себе комплемент. При добавлении гемолитической системы гемолиза не происходит (задержка гемолиза), т.к. весь комплемент израсходован на специфическую связь комплекса антиген-антитело, а эритроциты остались неизменными.

При отсутствии в сыворотке антител, комплементарных антигену, специфический комплекс антиген-антитело не образуется и комплемент остается не связанным. Поэтому при добавлении гемолитической системы комплемент присоединяется к ней. Результатом реакции в данном случае будет гемолиз эритроцитов — в пробирках образуется так называемая «лаковая» кровь.

Рис. 6. Схема РСК: а — индикаторная система (эритроциты барана и антитела к ним) в присутствии комплемента определяется в виде гемолиза; б — с сывороткой больного диагностикум (Аг) образует иммунные комплексы и активирует комплемент, результат — задержка гемолиза; в — в сыворотке здорового человека антител нет, комплемент активируется индикаторной системой, результат — гемолиз.

Рис. 1. Схема реакции связывания комплемента.

Рис. 2. Постановка и результат РСК.

Выводы: В исследуемой сыворотке выявлены антитела.

РСК позволяет выявить антитела к любому штамму одного и того же серотипа вируса. Диагностическое значение имеет четырехкратное увеличение титра антител в парных сыворотках (в период эпидемии гриппа) и двукратное нарастание в сыворотках крови больных при характерной клинической картине.

РЕАКЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕЧЕННЫХ АТ И Аг

Реакции с использованием меченных антител и антигенов составляют основу методов экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, так как выявляют минимальное содержание Аг и АТ в исследуемых образцах. В качестве меток могут быть использованы различные ферменты, красители флюорохромы и изотопы.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Данный метод является экспрессным и высокочувствительным. Существуют две его разновидности.

При прямом методе к исследуемой взвеси микробов, фиксированной на стекле, добавляют сыворотку, меченную флуорохромом. Образующийся комплекс антиген-антитело при освещении ультрафиолетовыми (сине-фиолетовыми) лучами дает ярко-зеленое свечение.

При непрямом РИФ используют обычные диагностические сыворотки против какого-либо вида микробов. Добавление этой сыворотки к испытуемой взвеси микробов вызывает образование комплекса антиген-антитело. Этот комплекс выявляется с помощью универсальной флюоресцирующей сыворотки, содержащей антитела к гаммаглобулиновой фракции крови того вида животного, от которого была получена диагностическая сыворотка.

Светящийся комплекс выявляют при люминесцентной микроскопии.

Рис. 7. Реакция иммунофлюоресценции (схема).

Рис. 4. Пневмококки, выявленные РИФ (люминесцентная микроскопия).

Иммуноферментный анализ (ИФА)

В основе иммуноферментного анализа лежит известная иммунная реакция антигена и антитела. Один из этих реагентов является определяемым веществом, а другой — узнающим, обладающим известной стандартной специфичностью (избирательностью) по отношению к определяемому веществу.

Для выявления образовавшихся иммунных комплексов (антиген-антитело) используется фермен т, которым предварительно метится узнающий компонент (антиген или антитело). Сам фермент, естественно, не виден, поэтому визуализация присутствия вещества, определяемого методом ИФА, достигается применением посредника —хромогена . Это особое химическое соединение, которое хорошо растворимо в воде, и раствор которого бесцветен. Превращение бесцветного хромогена в цветное вещество хромофор происходит под действием фермента, для которого хромоген является субстратом.

Рис. 8. Иммуноферментный анализ (схема).

Рис. 5. Иммуноферментный анализ (ИФА) (схема).

Рис. 6. Результат ИФА. Желтый цвет раствора в лунке является положительным результатом.

Диагностический серологический анализ по выявлению в сыворотке крови антител к Vi-антигенам возбудителя брюшного тифа предназначен для подтверждения либо отрицания факта носительства.

Сроки выполнения 7-8 дней
Синонимы (rus) Серологический анализ на Vi-антитела возбудителя брюшного тифа в сыворотке крови
Cинонимы (eng) Indirect hemagglutination assay for Salmonella typhi Vi antibodies
Метод анализа
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
Подготовка к исследованию Анализ проводится утром, натощак.
С последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов.
Исключить прием алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия биоматериала.
Не рекомендуется сдавать кровь на серологию после флюорографии, рентгена, физиотерапевтических процедур.
Биоматериал и способы его взятия Венозная кровь

Брюшной тиф относится к острым инфекционным кишечным заболеваниям. Для него характерны циклическое течение с системным поражением органов кишечника, ЦНС, печени, лимфатической системы; общая интоксикация организма, устойчивая бактериемия, при которой в крови обнаруживается присутствие бактерий. Источником инфекции являются больные, переболевшие бактерионосители.

Возбудитель брюшного тифасальмонелла Salmonella typhi , относится к кишечным бактериям.

Антигенная система возбудителя представлена антигенами O, H, Vi.

Антиген Vi является антигеном вирулентности
, формирующим устойчивость возбудителя брюшнотифозной сальмонеллы к защитным реакциям организма. Наличие антител к Vi-антигенам Salmonella typhi при проведении серологического исследования образцов крови служит маркером бактерионосительства.

Выявление антител к эритроцитарным Vi-антигенам осуществляют с помощью серологической реакции непрямой гемагглютинации, РНГА , с применением специальных диагностикумов.

  • основан на способности взаимодействия антител сыворотки крови и антигенов, которые фиксированы на эритроцитах (эритроцитарный диагностикум); результатом реакции является агрегация эритроцитов с последующим осаждением, агглютинация;
  • по характеру осадка эритроцитов судят о наличии антител (характерный «зонтик»), либо об их отсутствии (осадок в виде «точки»);
  • является полуколичественным; для проведения реакции используют разведения сыворотки крови для выявления диагностического титра;
  • минимальным диагностическим титром при проведении реакции является показатель 1:40;
  • повышение диагностической ценности реакции наблюдается при использовании повторного анализа (метод парных сывороток);
  • реакция высокочувствительна и специфична, может быть использована на пятый-седьмой дни заболевания.

Основное предназначение исследования — выявление бактерионосительства брюшнотифозной сальмонеллы.

Результаты анализа могут быть положительными или отрицательными.

  • выявление в крови антител к Vi-антигенам брюшнотифозного возбудителя (минимальное значение диагностического титра 1:40) рассматривается как указание на факт бактерионосительства и на необходимость повторного тестирования;
  • в ответе фиксируется значение титра;
  • может свидетельствовать о протекании острой инфекции, о перенесенном в прошлом заболевании, о проведенной вакцинации;
  • в редких случаях может быть ложноположительным вследствие перекрестной реакции.

Отрицательный ответ выдается в случае, если антитела не выявлены. Подобная ситуация возможна как при отсутствии инфицирования брюшнотифозным возбудителем, так и на ранних сроках заболевания.

Проведение данного исследования имеет особую важность для предотвращения случаев распространения брюшного тифа бактерионосителями.

Срок проведения анализа: 7-8 дней

посев мокроты Вопрос: Здравствуйте!Мне необходимо сдать посев мокроты расширенный с антибиотикограммой!Но,я принимаю эриспириус-Средство с бронхолитическим и противовоспалительным действием. Не повлияет это на результаты анализа? Спасибо.

Непосредственно по вашему вопросу на счет принимаемого препарата Эриспирус:

Данный препарат обладает противовосполительным и бронхорасширяющим действием. В нем отсутствуют антибактериальные вещества. По этому на микробное содержание в мокроте данный препарат окажет минимальное воздействие. При этом принятие данного препарата может помочь в сборе мокроты если затруднено её отхождение.

Туалет ротовой полости обязателен. Это уменьшит контаминацию (заражение) мокроты микрофлорой полости рта.

Правила забора биоматериала мокроты на микробиологическое исследование прилагаю ниже:

Если мокрота отделяется плохо, накануне пациенту рекомендуют принять отхаркивающее средство. Допускается предварительная ингаляция теплым физиологическим или содовым раствором (улучшит отхождение мокроты).

Сроки доставки мокроты в лабораторию не должны превышать 1,5 — 2 часов от момента ее получения В крайнем случае допускается хранение образца мокроты в холодильнике, но не более 6 часов.

Сбор вместо мокроты слюны и(или) носоглоточного отделяемого

Анализ на посев мокроты Вопрос: Здравствуйте! Я хочу сдать посев мокроты, откашляться получается только раз в день и вечером, а утром приехать в лабораторию не успеваю, могу только после обеда! Сколько модно хранить мокроту в банке и до скольких могу приехать в лабораторию, чтобы результаты были верными? Спасибо!

  1. Исследуют свободно откашливаемую мокроту (лучше во время приступа кашля), полученную утром и натощак. Пациент предварительно должен почистить зубы, десны, язык, слизистую оболочку щек зубной щеткой и хорошо прополоскать рот кипяченой водой.
  2. Если мокрота отделяется плохо, накануне пациенту рекомендуют принять отхаркивающее средство. Допускается предварительная ингаляция теплым физиологическим или содовым раствором.
  3. Пробу мокроты, полученную в результате глубокого кашля, собирают в специальный стерильный (лучше одноразовый) контейнер с завинчивающейся крышкой.
  4. Сроки доставки мокроты в лабораторию не должны превышать 1,5 — 2 часов от момента ее получения. В крайнем случае допускается хранение образца мокроты в холодильнике, но не более 6 часов.
  1. Сбор вместо мокроты слюны и(или) носоглоточного отделяемого.
  2. Позднюю доставку пробы в лабораторию, так как это ведет к гибели основных возбудителей, а также изменению истинного соотношения микрофлоры бронхиального секрета за счет размножения бактерий-контаминантов

Оптимальным является забор отделяемого зева (методом мазка) сразу после гигиенического туалета полости рта и непосредственно перед сбором мокроты.

Вы можете прийти к нам в лабораторию по адресу: Адлер, ул. Старонасыпная 22, 2-й этаж, здание Офис ПЛАЗА. Здесь Вы получите специальный контейнер с транспортной средой, в которой мокрота может храниться до 24 ч. при комнатной температуре. Прошу заранее согласовать ваш приход за специальной транспортной средой!

По вашему вопросу Вы можете позвонить по номеру указанном ниже.

С уважением зав. бактериологическим отделом «Медицинской Лаборатории «ОПТИМУМ» Махмудова Мадина Ахмедовна тел. 8-965-481-21-42.

Серологический анализ крови представляет собой способ лабораторного исследования определенных антигенов или антител (специфических белков ) в сыворотке крови пациента, основанный на иммунных реакциях организма. Данный метод применяется при инфекционных заболеваний для выявления наличия антител в крови больного к определенному виду или бактерий , а также для определения групповой принадлежности крови.

Исследуемый материал:
В первую очередь для проведения серологического анализа используют биологический материал, собранный от пациента:

  • сыворотка крови
  • слюна
  • фекальные массы

В некоторых случаях исследуется материал, выделенный из определённых объектов окружающей среды:

  • почва

Методика проведения анализа или забора крови:
Данный анализ не требует специальной подготовки пациента. Забор крови проводится утром натощак и, производится в процедурных кабинетах лечебных учреждений, согласно общепринятым гематологическим методикам. Для серологического исследования забор крови производится двумя методами: венозную кровь забирают из локтевой вены пациента, а капиллярную кровь – из безымянного пальца. Кровь помещают в стерильные герметичные пробирки.

Особенности транспортировки крови и хранения сыворотки:
Сразу же после забора крови её транспортируют в специальную лабораторию, где в тот же день производится подготовка сыворотки. Хранение сыворотки допускается не более 4 – 6 дней в холодильной камере при температуре 2 – 4 градусов. При необходимости более длительного хранения, сыворотка замораживается. Во избежание нарушения качества сыворотки допускается однократное её замораживание и, соответственно, размораживание. При длительном хранении антитела теряют свои свойства и становятся частично неактивными, наиболее чувствительными к замораживанию являются иммуноглобулины класса М . После размораживания сыворотки необходимо тщательное перемешивание её до однородной массы, что способствует восстановлению концентрации антител, содержащихся в данной сыворотке.

Для чего используют серологические исследования?
Серологические методы лабораторной диагностики используются для выявления таких заболеваний как эхинококкоз, трихинеллёз, токсокароз, описторхоз, цистицеркоз, токсоплазмоз , амебиаз, лямблиоз , для определения эффективности проведённого курса лечения и, наконец, для обнаружения повторного заболевания после полного выздоровления пациента.

Основные методы серологической диагностики:
1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген – антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов.

Иммунофлюоресцентная реакция – очень трудоёмкий процесс, требующий от специалиста немало времени и ответственности. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента ). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.

Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:
+ очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии
++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком
+++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки
Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++ . Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок:
отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»
+ слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки
++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов
+++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами
++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок.
Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++ , то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

Достоверность и качество методов серологической диагностики зависят от организации проведённого внутреннего и внешнего лабораторного контроля, состоящих из нескольких независимых процедур, предназначенных для оценки качества результатов проведённого анализа.

источник