Меню Рубрики

Реакция рпга при брюшном тифе

Серологический тест, использующийся для диагностики брюшного тифа.

Брюшной тиф – тяжёлое системное инфекционное заболевание, характеризующееся длительной нарастающей лихорадкой, болезненностью живота, потерей аппетита, явлениями общей интоксикации, устойчивой бактериемией. Возбудитель — Salmonella typhi, принадлежит к роду Salmonella, серологической группе D, семейству кишечных бактерий Enterobacteriaceae. S. typhi имеет форму палочки с закруглёнными концами, спор и капсул не образует, при её разрушении происходит освобождение эндотоксина.Антигенная структура S. typhi представлена О-, Н- и Vi-антигенами, определяющими выработку соответствующих агглютининов.S. typhi относительно хорошо сохраняется при низких температурах, чувствительна к нагреванию: при 56 °С погибает в течение 45–60 минут, при 60 °С — через 30 минут, при кипячении — за несколько секунд (при 100 °С почти мгновенно). Благоприятная среда для бактерий — пищевые продукты (молоко, сметана, творог, мясной фарш), в которых они не только сохраняются, но и способны к размножению.

Источник инфекции при брюшном тифе — только человек — больной или бактериовыделитель, из организма которого возбудители брюшного тифа выделяются во внешнюю среду, в основном с испражнениями, реже — с мочой. С испражнениями возбудитель выделяется с первых дней болезни, но массивное выделение начинается после седьмого дня, достигает максимума в разгар болезни и уменьшается в период реконвалесценции. Бактериовыделение в большинстве случаев продолжается не более 3 месяцев (острое бактериовыделение), но у 3–5% формируется хроническое кишечное или реже — мочевое бактериовыделение. Наиболее опасны в эпидемиологическом отношении мочевые носители в связи с массивностью бактериовыделения.

Для брюшного тифа характерен фекально-оральный механизм передачи возбудителя, который может осуществляться водным, пищевым и контактно-бытовым путём. Инкубационный период заболевания – от 3 дней до 4 недель и более (в среднем – 2 недели). Возбудитель, поступая через слизистую кишечника, посредством фагоцитоза проникает в мононуклеарные фагоциты печени, селезёнки, лимфатических узлов и пейеровых бляшек. В результате фагоцитоза S. typhi, большей частью, не погибают, а остаются в мононуклеарных фагоцитах ретикулоэндотелиальной системы в течение инкубационного периода и размножаются, попадая затем в систему циркуляции крови. Выраженность клинических проявлений инфекции варьирует. Начальный период брюшного тифа характеризуется постепенным или острым развитием интоксикационного синдрома. При постепенном нарастании симптомов в первые дни больные отмечают повышенную утомляемость, нарастающую слабость, познабливание, усиливающуюся головную боль, ухудшение или отсутствие аппетита. Температура тела ступенеобразно повышается и к 5–7-му дню болезни достигает 39–40 °С. При остром начале уже в первые 2–3 дня все симптомы интоксикации достигают полного развития. Изменения со стороны сердечно-сосудистой системы в начальном периоде характеризуются относительной брадикардией, артериальной гипотензией. У части больных отмечают кашель или заложенность носа. Все симптомы заболевания достигают максимального развития к концу первой — началу второй недели, когда наступает период разгара болезни. Этот период продолжается от нескольких дней до 2–3 недель и является самым тяжёлым для больного.

Период разрешения болезни не превышает одной недели и характеризуется снижением температуры;исчезает головная боль, нормализуется сон, улучшается аппетит.

При отсутствии лечения заболевание потенциально опасно для жизни в связи с возможностью развития ряда осложнений, включая кишечное кровотечение или перфорацию кишки вследствие некроза пейеровой бляшки. У детей до 2 лет болезнь обычно протекает легче. Рецидивы брюшного тифа с возобновлением симптоматики после улучшения состояния возможны (8 — 12%). От 2 до 5% переболевших становятся хроническими носителями.

Клиническая диагностика брюшного тифа может быть затруднена. Безусловным лабораторным подтверждением диагноза служит выделение брюшнотифозных бацилл при серийных посевах крови (начиная с первой недели болезни) или кала – на второй неделе заболевания. Выявляемость возбудителя микробиологическими методами зависит от концентрации возбудителя в материале и влияния терапии антибиотиками. Ко второй неделе становятся положительными результаты серологических агглютинационных тестов, к числу которых относится и РПГА-тест на антитела к S. typhi. Серологические тесты уступают по специфичности бактериологическим методам, поскольку положительная реакция в них может быть обусловлена перенесённой ранее инфекцией и в некоторых случаях – перекрёстными реакциями с другими видами сальмонелл. Информативным является повторное исследование с интервалом 5 дней для наблюдения роста титров, которым характеризуется острая инфекция.

Для профилактики появления брюшного тифа и соблюдения стандартных санитарных норм анализ крови на тиф сдает рабочий персонал медицинских учреждений, детских дошкольных заведений, а также работники пищевой промышленности, предприятий торговли различными продовольственными товарами с периодичностью один раз в год.

Кровь рекомендуется сдавать не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи (воду пить можно).

Материал для исследования: сыворотка крови.

  • В комплексе с микробиологическими тестами в целях диагностики брюшного тифа.
  • Дифференциальная диагностика гастроэнтеритов у детей; лихорадка неясной этиологии с относительной брадикардией, болезненность живота, потеря аппетита, общее недомогание у взрослых.
  • Диспансерное наблюдение пациентов, перенесших брюшной тиф.
  • Выявление носителей инфекции, санитарно-эпидемиологические исследования.

Интерпретация результатов содержит аналитическую информацию для лечащего врача. Лабораторные данные входят в комплекс всестороннего обследования пациента, проводимого врачом и не могут быть использованы для самодиагностики и самолечения.

Тест является полуколичественным, результат выдается в терминах «положительно», «отрицательно». При отсутствии антител выдаётся ответ «отрицательно», при их обнаружении – «положительно», при этом уровень антител выдается в титре.

§ серонегативный период заражения (первые недели после инфицирования);

§ отдалённые сроки после выздоровления.

§ текущая или имевшая место в прошлом инфекция;

§ ложноположительные результаты вследствие перекрёстных реакций (в т. ч. другие виды сальмонелл).

источник

Несмотря на то что РПГА анализ крови применяется уже более 10 лет, это тестирование до сих пор не утрачивает актуальности. При помощи процедуры можно выявить разные патологические процессы, но чаще направление на анализ выдается при подозрении на сифилис и инфекционные заболевания органов желудочно-кишечного тракта. При выдаче направления на исследование нужно разобраться в том, как сдавать кровь и насколько точным является тестирование.

Из 10 человек расшифровку анализа крови РПГА знают не более половины. Под этой аббревиатурой подразумевается реакция пассивной гемагглютинации. Методика применяется для выявления внутренних патологических процессов, но особенно она эффективна при подозрении на сифилис.

Это обусловлено тем, что тест точно определяет антитела бледной трепонемы – микроорганизма, провоцирующего развитие сифилиса. При попадании в здоровый организм этого возбудителя иммунная система начинает активно вырабатывать антитела против него. Если тестирование показало присутствие возбудителя, пациенту нужно незамедлительно сдать дополнительные анализы на сифилис.

Условно тестирование можно разделить на 2 типа:

Классификация варьируется от типа антител, которые были выявлены в сыворотке крови. Главное преимущество анализа крови на РПГА заключается в том, что при помощи него можно выявить заболевание, вне зависимости от того, на каком этапе оно находится.

Тест РПГА проводят во всем мире не только из-за высокой точности и достоверности, но и из-за следующих достоинств:

  • процедура отличается простотой. Все, что необходимо сделать пациенту, – сдать кровь;
  • отсутствие необходимости использования специального дорогостоящего оборудования;
  • быстрая расшифровка. Обычно результат оглашается уже через сутки после сдачи биоматериала.

В целях профилактики медики рекомендуют сдавать кровь на РПГА каждый год. Абсолютными показаниями к проведению такого тестирования являются:

  • проявление симптомов сифилиса. Основные признаки этого заболевания – возникновение эрозий и язв на кожном покрове (в особенности в области половых органов), увеличение лимфоузлов, частичное поредение волосяного покрова;
  • появление симптомов алопеции разных видов (патологическое облысение);
  • незащищенный половой контакт с предполагаемым носителем болезни.

Также тестирование в обязательном порядке назначается людям, которые хотят сдавать кровь как доноры. Кроме вышеперечисленных ситуаций, подобный анализ назначается при оформлении медкнижки и при определении человека в стационар. Также медик может выписать направление на РПГА анализ при подозрении на дифтерию, дизентерию или сальмонеллу.

В большинстве случаев положительный результат РПГА указывает на сифилис врожденной или приобретенной формы. Также при помощи тестирования можно обнаружить следующие патологии:

  • вирус иммунодефицита человека;
  • гепатит;
  • возвратный брюшной тиф;
  • туберкулез легких;
  • дифтерия;
  • коклюш;
  • воспалительные поражения слизистых оболочек ротовой полости и гениталий;
  • формирование новообразований злокачественного происхождения;
  • мононуклеоз инфекционной природы;
  • диффузные поражения соединительных тканей;
  • венерические заболевания.

Многих интересует вопрос, почему при подозрении на сифилис назначается именно анализ РПГА. Популярность такого тестирования в диагностике этой опасной болезни обусловлена его достоверностью. Медики уверяют, что анализ показывает правильный результат в 99% случаев.

При отсутствии антител бледной трепонемы реакция агглютинации не произойдет, что говорит о том, что человек здоров.

Стоит учитывать, что чувствительность такого теста очень высока, поэтому обнаружить возбудитель сифилиса удастся даже на скрытых стадиях заболевания.

Сдачу образца на такое тестирование назначают и при подозрении на другие болезни, например, коклюш или иерсиниоз. Востребованность анализа обусловлена тем, что по сравнению с другими серологическими тестированиями он более чувствителен, что увеличивает вероятность получения достоверного результата.

Для осуществления анализа подходит только венозная кровь. Чтобы тестирование показало точный результат, пациенту требуется подготовиться к нему и придерживаться следующих рекомендаций:

  • кровь сдают исключительно на голодный желудок, поэтому есть можно не позднее, чем за 10 часов до процедуры. Единственное, что допускается – выпить утром стакан воды;
  • за 3 часа до забора крови нельзя курить;
  • если пациенту назначен прием лекарственных средств на постоянной основе, об этом нужно оповестить врача, который будет проводить расшифровку анализа.

В большинстве случаев расшифровка результата занимает не более суток, но иногда длится до 4 дней. Срок может незначительно меняться в зависимости от лаборатории и типа используемого оборудования.

Анализ проводится путем добавления к образцу специального реактива. При наличии в крови бледной трепонемы происходит реакция агглютинации, и эритроциты выпадают в осадок. По числу склеенных эритроцитов можно делать выводы о том, сколько антител присутствует в образце.

Результаты тестирования оцениваются по 4-балльной системе, по размеру сформировавшейся пленки. При появлении реакции агглютинации эритроциты остаются на поверхности лунки, образуя собой «зонтик». При отрицательном результате они опускаются вниз и скапливаются на дне в центре лунки.

Результат тестирования расшифровывается таким образом:

  • «-» – отрицательный результат. При нем красные кровяные тельца опускаются на дно, образуя компактный осадок;
  • «1+» – неоднозначная реакция. Эритроциты формируют неплотный осадок с нечеткими краями и просветом в середине;
  • «2+» – слабоположительная реакция. Внизу лунки появляется пленочка, образуя плотное кольцо с выраженным просветлением в центре;
  • «3+» – положительная реакция. Красные кровяные тельца почти целиком застилают лунку, при этом вокруг осадка образуется четкое кольцо;
  • «4+» – положительная реакция. При РПГА 4+ эритроциты формируют зонтик и равномерно застилают лунку.

Если тестирование дало положительную ответную реакцию, это говорит о присутствии в организме возбудителя болезни. В этом случае пациенту назначают дополнительные лабораторные и инструментальные анализы, отталкиваясь от которых можно будет подтвердить или опровергнуть наличие заболевания.

При положительном результате сдать анализ РПГА необходимо провести человеку, с которым инфицированный вступал в половой контакт. Стоит учитывать, что примерно в 5% случаев анализ РПГА дает ложноположительный результат. Чаще всего это связано с игнорированием правил подготовки.

Также ложноположительная реакция может проявиться в следующих случаях:

  • формирование онкологических новообразований;
  • гепатит разных форм;
  • ВИЧ.

В редких случаях ложноположительная реакция является признаком беременности. Отличительная особенность ложноположительного ответа – он сопровождается низким титром. Также стоит учитывать, что анализ может быть положительным, если пациент уже был болен сифилисом, но прошел успешное лечение.

Отрицательная реакция РПГА говорит о том, что:

  • возбудитель сифилиса отсутствует в организме;
  • с момента инфицирования прошло менее 3-х недель. На столь раннем этапе иммунная система не начинает выработку антител;
  • неправильное проведение забора крови.

Если врач подозревал сифилис у пациента, но тестирование показало отрицательный результат. Через некоторое время рекомендуется сдать анализ повторно, чтобы убедиться в отсутствии патогенных микроорганизмов в сыворотке крови.

В ходе клинических исследований было выявлено, если забор крови осуществлялся должным образом и пациент соблюдал все правила по подготовке к процедуре, анализ не покажет ложный результат.

Если РПГА показало положительную реакцию, вероятность того, что человек является носителем сифилиса, составляет более 97%. Что касается ложноположительного ответа, то он может проявиться, если тестирование осуществлялось во время инфекционного заболевания или другого патологического состояния.

Сегодня реакция пассивной агглютинации является преимущественной и по результативности превосходит все остальные тестирования. Несмотря на то что методика чаще всего применяется для обнаружения антител бледной трепонемы, при помощи нее можно выявить и другие заболевания инфекционного происхождения. Важно помнить, что результат тестирования зависит не только от методики проведения теста, но и от того, насколько правильно пациент подготовится к процедуре.

источник

Брюшной тиф развивается при попадании в организм бактерии сальмонеллы. Ею можно занести в кишечник через немытые продукты питания, загрязненную воду, пренебрегая правилами гигиены (например, при одновременном использовании полотенец с лицом, которое является носителем бактерии).

Путь передачи инфекции фекально-оральный. Поскольку клиническая картина заболевания не имеет специфических симптомов, то для подтверждения диагноза необходимо провести анализ на брюшной тиф, который поможет определить присутствие в организме возбудителя.

Читайте также:  Неспецифическая профилактика при брюшном тифе

Анализ крови на брюшной тиф может сдаваться в двух случаях:

  • при проявлении клиники характерной для кишечной инфекции;
  • для предотвращения эпидемий (является обязательным анализом при продлении санитарной книжки).

Если пациент обратился к доктору с жалобой на проблемы с пищеварением и гипертермией, то врач, основываясь на проявлениях болезни, сделает предположение о развитии кишечной инфекции. На присутствие брюшного тифа указывают следующие жалобы пациента:

  • боль в животе;
  • признаки отравления (тошнота, рвота, слабость, потеря аппетита, гипертермия);
  • проблемы со стулом (запор, несколько реже диарея);
  • обезвоживание (сильная жажда, язык покрыт белым налетом, шелушение кожи);
  • возможно образование розеол (сыпь на коже появляется через неделю после инфицирования. При нажатии на нее исчезает, а затем вновь появляется. Количество высыпаний от 4 до 25 элементов).

Брюшной тиф, как правило, протекает следующим образом. Острое начало течения болезни в 30% случаев. Симптомы отравления, ухудшение сна, боль в голове, слабость усиливаются постепенно. Температура тела увеличивается на протяжении нескольких дней и достигает фебрильных значений. Появляется заторможенность реакций, живот вздут, появляется метеоризм, урчание.

Возбудитель тифа в пресном водоеме может оставаться жизнеспособным до месяца, а в сельскохозяйственной продукции до 10 дней, в молочных продуктах он размножается и накапливается. Комнатная муха также способна перенести бактерию на продукты питания.

Первые признаки заболевания проявляются на 7–23 сутки после заражения, поэтому установить точно источник крайне сложно. Брюшной тиф нужно дифференцировать от туберкулёза, бруцеллеза, сыпного тифа, холеры, чумы и прочих болезней, при которых у пациента возникает лихорадка и интоксикация.

Для подтверждения брюшного тифа назначаются лабораторные исследования, которые нужно провести еще до начала антибиотикотерапии (прием антибактериальных лекарств может сказаться на правильности диагностики).

Для обследования могут брать кровь, кал, мочу, желчь, спинномозговую жидкость (при подозрении на осложнение). В зависимости от стадии болезни и симптоматики могут назначать следующие анализы на брюшной тиф.

При нем изучается плазма крови. Необходимо для обнаружения специфических антител, вырабатываемых иммунитетом человека. Анализ может проводиться только спустя 4–5 суток после заражения брюшным тифом, поскольку ранее организм не синтезирует антитела.

Назначается для определения количественной характеристики всех клеток крови. При заражении брюшным тифом изменяются нормальные показатели крови.

Возникает лейкопения (количество лейкоцитов понижается), анэозинофилия (отсутствуют эозинофилы), повышается количество лимфоцитов, что указывает на присутствие в крови инфекции.

Также во время брюшного тифа увеличивается уровень нейтрофилов, лейкоцитов, синтезируемых организмом во время воспаления, понижается количество тромбоцитов, которые ответственны за свертываемость крови.

Развернутый анализ крови проводится обязательно при поступлении на стационарное лечение и во время терапии, чтоб проследить динамику. Для исследования берут анализ крови из вены или из пальца.

Обнаруживает белки острой фазы, проводить ее нужно еще до приема антибиотика. Для теста требуется 5–10 мл крови из вены, результаты исследования можно узнать в течение суток.

Во взятом образце крови мало бактерий, поэтому ее переносят в питательную среду (мясопептонный бульон) и ставят в термостатический аппарат. Микроорганизм в благоприятных условиях начнет образовывать многочисленную колонию, которая будет пригодна для исследования.

После используют химические реагенты и устанавливают вид бактерии. Подобный тест проводится всем пациентом с гипертермией, а также при проверке на брюшной тиф. Результаты можно получить на 4-5 день после проведения анализа, предварительный ответ будет дан через 2 суток. Бак посев наиболее точная лабораторная диагностика брюшного тифа.

Для обнаружения человека, который является переносчиком тифозной палочки, а также для контроля действия вакцинации против брюшного тифа применяется РНГА (реакции непрямой гемагглютинации) или пассивной гемагглютинации (РПГА). Этот метод помогает обнаружить антигены и антитела при помощи красных кровяных клеток, которые выпадают в осадок при контакте с антигеном.

Эритроциты, на которых адсорбированы антигены, склеиваются при контакте с антителом. При иммунологическом исследовании определяется уровень этих антител. У человека, болеющего брюшным тифом, он может быть на уровне 1:40, а у победившего инфекцию 1:2000, поэтому диагностика проводится с интервалом в 5 дней, чтоб следить за динамикой.

Данный анализ назначается редко, так как тифозная палочка выходит из организма только через 8–10 дней после заражения. Этот способ применяется для выявления людей, которые являются носителями инфекции, но сами не болеют.

Тифозная бактерия обнаруживается в урине только спустя 1–1,5 неделю после инфицирования. Анализ мочи может указать на такие косвенные доказательства брюшного тифа, как лейкоцитоз (на начальном этапе болезни количество белых кровяных клеток повышается, а в течение 7 дней резко падает), лейкопению, повышенное СОЭ, анэозинофилию, относительный лимфоцитоз.

Перед сбором мочи пациент должен провести гигиену наружных половых органов, затем собрать материал для анализа в стерильную баночку. Для диагностики будет достаточно 40–50 мл мочи. Для обследования на инфекцию используют осадок, который переносят на плотную питательную среду.

Возможность обнаружения возбудителя брюшного тифа микробиологическими методами напрямую связана с количеством бактерий в биологической жидкости и применением антибактериальной терапии. Через неделю после заражения сальмонеллой S. Typhi серологические агглютинационные тесты (РПГА на брюшной тиф) дают положительный ответ.

Серологические тесты менее специфичны, чем бактериологические методы, так как положительный ответ может свидетельствовать о перенесенной инфекции, вызванной другим видом сальмонелл. Дополнительное исследование через пять дней помогает следить за ростом титр, который характерен для острой инфекции.

Анализ крови на брюшной тиф должны сдавать не только пациенты с характерными признаками заболевания, но и те, кто при работе сталкивается с большим количеством людей или продуктами питания. Делается это с целью профилактики распространения брюшного тифа, поскольку заразившийся человек способен длительное время быть разносчиком инфекции.

Наибольшее количество бактерий больной выделяет с фекалиями в период с первой до пятой недели заболевания, а с мочой в течение 2–4 недель. Каждый десятый перенесший инфекцию выделяет тифозную палочку во внешнюю среду на протяжении 3 месяцев, а 3–5% от всего количества больных тифом являются хроническими носителями инфекции, распространяя палочку в течение нескольких лет.

При прохождении и продлении санкнижки анализ на брюшной тиф является обязательным. Многие не знают, откуда кровь берут для проверки. Для проведения диагностики у пациента осуществляется забор венозной крови из области сгиба локтя.

Исследование проводится инвитро, что в дословном переводе означает «в пробирке». Сколько времени делается тест зависит от загруженности лаборатории, как минимум результат будет готов через два дня. Как правильно сдавать анализ на брюшной тиф уточнит доктор, выписывающий направление.

Если уточнений нет, то следует придерживаться следующих рекомендаций:

  • сдавать нужно кровь натощак;
  • за день до проведения нельзя есть слишком острую, соленую, жирную или копченую пищу;
  • необходимо исключить прием слабых и крепких алкогольных напитков, медикаментов как минимум за три дня до сдачи крови;
  • питьевой режим менять не требуется, но от кофе все же лучше отказаться;
  • за час до анализа не разрешается курить.

Если антитела к брюшному тифу не обнаружены, то это подтверждение того, что человек не является разносчиком инфекции. Если же присутствуют симптомы заболевания, а тест не показал наличие специфического белка, то, возможно, что иммунный ответ еще не сформирован, так как патология на ранней стадии.

Ложноположительный результат анализа возможен если в организме присутствует бактерия из рода сальмонелл, но вызывает другое заболевание, то есть микроорганизм есть и иммунитет реагирует выработкой антител. Какие анализы сдать при предполагаемом брюшном тифе или при проверке на бактерионосительство, а также где лучше сдать биологический материал, укажет врач.

Если брюшной тиф протекает в острой форме, то больной будет госпитализирован в инфекционную больницу. Пациенту назначаются антибиотики, диета и постельный режим. Избегать рекомендуется любого перенапряжения, даже при посещении уборной. Брюшной тиф, при отсутствии адекватного лечения, может привести к токсическому шоку, перфорации слизистой кишечника. Терапия длится от 2 до 4 недель.

источник

Брюшной тиф – это острое инфекционное заболевание, которое вызывается брюшнотифозной палочкой. Путь передачи – алиментарный, механизм – фекально-оральный. Возбудитель вызывает бактериемию (большое количество брюшнотифозной палочки в крови), высокую интоксикацию, поражает лимфатический аппарат тонкого кишечника, печень и селезенку (органы увеличены в размерах). Диагностический анализ на брюшной тиф первые дни болезни затруднен. Это связано с тем, что инфекционный процесс может протекать в атипичной или скрытой форме. Поэтому при любом виде лихорадки, независимо от ее интенсивности, диагностику на брюшной тиф делают 5 дней подряд.

Инфекцию вызывает возбудитель из рода сальмонелл – Salmonella typhi. Это подвижная грамотрицательная палочка, которая живет в условиях доступа кислорода. Она не способна образовывать споры, но очень устойчива в условиях внешней среды. Находясь в воде, тифозная палочка сохраняет жизнеспособность от 1 до 5 месяцев. В испражнениях она активна на протяжении 25 дней.

При умеренном охлаждении, например, в холодильнике, микроорганизм в молочных продуктах не только сохраняется, но и способен к размножению в течение месяца. Высокие температуры губительно воздействуют на возбудителя. При кипячении тифозная палочка погибает моментально. Если нагреть воду до 60°C, то микроорганизм погибнет через 4-5 минут. Под действием прямых солнечных лучей он также теряет жизнеспособность.

Тифозная палочка очень чувствительна к химическим дезинфицирующим веществам. При воздействии хлорамина, сулемы, лизола она обеззараживается за несколько минут.

Тифозная палочка имеет сложную антигенную структуру. Но для диагностических целей используют только два антигенных комплекса: О-антиген (термостабильный соматический) и Vi-антиген (термолабильный жгутиковый). Патогенный микроорганизм способен образовывать L-формы, которые способствуют развитию бактериального носительства и рецидивов брюшного тифа.

По клинической картине брюшной тиф схож с другими инфекционными заболеваниями. Поэтому важно отличить его по проявляющимся симптомам от таких болезней, как сыпной тиф, бруцеллез, грипп, менингококковая инфекция, лихорадка КУ (коксиеллез).

Отличительные признаки брюшного тифа:

  • острое начало болезни только в 1/3 случаев;
  • нарушение сна, слабость и головная боль нарастают постепенно;
  • кожа становится бледной и сухой;
  • заторможенность реакций;
  • интоксикация организма прогрессирует постепенно;
  • температура тела поднимается медленно, но переносится больными тяжело, при этом пациенты не потеют, кожа остается сухой;
  • сердцебиение замедляется, незначительно снижается артериальное давление, при аускультации тоны сердца приглушены;
  • появляется мягкий влажный кашель, который переходит в ранний бронхит;
  • живот вздут, слышны урчания, которые локализуются в правом подреберье (область печени).

Для выявления брюшного тифа на ранних этапах болезни используют посев крови – анализ на гемокультуру. Это обусловлено тем, что инфекционная болезнь сопровождается интенсивной бактериемией именно первые дни заболевания, в поздний период болезни количество тифозной палочки в крови становится значительно меньше.

Для выделения возбудителя взятую у пациента кровь засеивают на специальную питательную среду – мясопептонный бульон.

Для исследования сдают венозную кровь из локтевой вены в количестве 10-15 мл все пациенты с высокой температурой. В некоторых случаях при подозрении на брюшной тиф посев крови могут проводить при нормальной температуре у больного. Кровь засевается сразу же после взятия и отправляется в лабораторию.

Сколько делается анализ? Предварительные данные можно получить через двое суток. Окончательный результат известен на 4-5 сутки. Чтобы подтвердить диагноз, исследование на гемокультуру проводят 2-3 раза.

Чтобы повысить качество посева и роста микроорганизма, за 20 минут до забора крови пациенту вводят адреналин. Посев крови должен проводиться до начала антибактериальной терапии, в противном случае результаты анализа будут недостоверными.

Серологические исследования – это специфические методы диагностики для выявления возбудителя. Их цель – обнаружение антител в сыворотке крови. При брюшном тифе антитела вырабатываются на 6-8 день заболевания.

Это метод определения антигенов и антител с помощью эритроцитов, которые способны выпадать в осадок в присутствие антигенов. Предварительно антитела и антигены адсорбируются и сохраняются в таком виде на поверхности эритроцитов.

РНГА проводится в комплексной диагностике с другими тестами, при поиске источников заражения брюшным тифом в случае вспышки заболевания. Подготовка к исследованию:

  • крови берут из локтевой вены;
  • взятие материала должно производиться натощак;
  • интервал между последним приемом пищи и сдачей крови не менее 8 часов.

РНГА брюшнотифозной диагностики обнаруживает Vi- и О-антитела. Для положительного результата минимальные диагностические титры должны составлять для Vi-антител – 1:80, для О-антител – 1:200.

Это метод исследования, который выявляет в сыворотке крови специфические антитела к возбудителю заболевания.

РПГА-тест на антитела при брюшном тифе становится положительным к концу второй недели болезни. Для достоверности результатов анализ крови на брюшной тиф повторяют через 5 дней. Если инфекция носит острый характер, то титры растут.

Кровь для РПГА на брюшной тиф берут утром натощак из локтевой вены. Положительные диагностические значения титров для Vi-антител – 1:40, для О-антител – 1:200.

В диагностических целях могут быть использованы другие серологические методы:

  • ИФМ – иммунофлюоресцентная микроскопия;
  • ИФА – иммуноферментный анализ;
  • реакция коагглютинации.
Читайте также:  Фагирование при брюшном тифе

При брюшном тифе в обязательном порядке делают общий анализ крови. Его основные показатели:

  • лейкопения – лейкоциты в крови ниже нормы;
  • анэозинофилия – отсутствие одного из вида лейкоцитов – эозинофилов;
  • относительный лимфоцитоз – свидетельствует о снижении сопротивляемости организма;
  • повышенное или умеренное СОЭ (скорость оседания эритроцитов);
  • нейтрофильный лейкоцитоз – аномально высокое количество нейтрофилов – лейкоциты, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на острый воспалительный процесс, при брюшном тифе – это бактериемия;
  • тромбоцитопения – снижение количества тромбоцитов, отвечающих за свертываемость крови.

Общий анализ крови берут при поступлении больного в стационар, а также несколько раз во время лечения.

Этот метод диагностики используют не часто, так как тифозная палочка появляется в кале не ранее конца 2-й недели или начала 3-й недели болезни. В основном такой способ используют для обследования людей на носительство. Также бактериологический анализ кала на брюшной тиф делают для санкнижки работникам детских учреждений, общественного питания, водоснабжения.

  1. За 3-4 часа до взятия кала нужно принять 30 г магнезиальной соли, чтобы каловые массы сделать более мягкими.
  2. Материал для исследования нужно брать только из жидкой части.
  3. Если в кале обнаруживаются примеси крови, гноя, слизи, их обязательно собрать для анализа.
  4. Количество кала – 10-15 г, набирают деревянным или пластиковым стерильным шпателем и помещают в банку с широким горлом.

Лучше посев производить сразу же у постели больного. Если нет возможности немедленно доставить его в лабораторию, то кал вносят в специальный консервант.

В пробах мочи тифозная палочка обнаруживается на 3-4 неделе заболевания. Правила сбора мочи для обследования:

  • провести тщательный туалет наружных половых органов;
  • у тяжелобольных мочу собирают с помощью катетера;
  • необходимое количество мочи – 40-50 мл.

Мочу доставляют в лабораторию. Для посева используют осадок. Чтобы его получить, материал центрифугируют, а затем засевают на плотные питательные среды.

Чтобы получить порцию желчи для анализа, больному делают дуоденальное зондирование. Для лучшего отхождения желчи пациенту в двенадцатиперстную кишку через зонд вводят раствор магнезии объемом 40-50 мл. В пробирки собирают три порции – А, В, С, каждая объемом 5-10 мл.

Желчь засеивают во флаконы с питательным бульоном. Если желчь содержит хлопья или другие включения, то для исследования она не пригодна. Посевы помещают в термостаты с постоянной температурой 37°C и выращивают культуру в течение 20 часов.

Анализ на брюшной тиф с положительным результатом подтверждает наличие инфекции в организме. Отрицательные показатели говорят об отсутствии болезни или ее раннем периоде. Если результаты анализов ложноположительные, это может свидетельствовать о перекрестной реакции с другими инфекциями. Недостоверный ответ также может быть при приеме антибактериальных препаратов.

источник

Реакция Вассермана

Цель: Определить наличие антител в крови исследуемого человека к бледной трепонеме.

1. Сыворотки: исследуемого человека, больного сифилисом (+ контроль), здорового (- контроль).

2. Диагностические антигены: а)специфический антиген из инактивированной культуры бледной трепонемы, б) неспецифический антиген из кардиомицитов бычьего сердца.

3. Физ.раствор

4. Комплимент

5.Гемолитическая (индикаторная) система а) эритроциты барана б) гемолитическая сыворотка кролика против эритроцитов барана

Техника постановки:

1. Физ.раствор вносят по 1 мл в 2 ряда пробирок (по 3 пробирки в каждом ряду)

2. Сыворотку по 0,5 мл вносят в пробирки: в 1 ряд – исследуемого человека, 2 – здорового человека, 3 – больного сифилисом.

3. Внесение диагностических антигенов: в 1-ую пробирку каждого ряда специфический антиген, во 2-ую – неспецифический антиген

4. В каждую пробирку вносят по 0,1 мл комплимента

5. Инкубация в термостате 2 часа

6. Внесение гемолитической системы в каждую пробиркупо 1 мл взвеси эритроцитов барана и по 1 мл гемолитической сыворотки кролика

8. Учет результатов: если раствор прозрачный, эритроциты на дне- реакция +, если раствор окрашен в красный цвет «лаковая кровь»- реакция -.

Заключение: в сыворотке исследуемого человека обнаружены антитела к бледной трепонемы. RW у исследуемого человека положительная.

РСК по определению антител к риккетсиям Музера и Провачека.

Цель реакции: определить этиологию риккетсиоза у исследуемого человека: эпидемический (R.prowazekii) либо эндемический (R.typhi) сыпной тиф.

Компоненты реакции:

1. Сыворотка исследуемого человека

2. Диагностические антигены: антиген Провачека (R.prowazekii) и антиген Музера (R.typhi)

5. Гемолитическая (индикаторная) система а) эритроциты барана б) гемолитическая сыворотка кролика против эритроцитов барана

Техника постановки:

1. Физ.раствор вносят по 1 мл в 2 ряда пробирок (по 9 пробирок в каждом ряду: 7 для разведений, 2 — контрольные)

2. Сыворотку по 0,5 мл вносят в 1-ые пробирки каждого ряда и титруют:

3. Внесение диагностических антигенов: в пробирки 1-го ряда: антиген Музера, во 2=ой- антиген Провачека

4. В каждую пробирку вносят по 0,1 мл комплимента

5. Инкубация в термостате 2 часа

6. Внесение гемолитической системы в каждую пробиркупо 1 мл взвеси эритроцитов барана и по 1 мл гемолитической сыворотки кролика

7. Инкубация в термостате 1 час

8. Учет результатов: если раствор прозрачный, эритроциты на дне- реакция +, если раствор окрашен в красный цвет «лаковая кровь»- реакция -. Диагностический титр 1:40

Заключение: в сыворотке исследуемого человека обнаружены антитела к R.prowazekii в титре 1:80. Ds –эпидемический сыпной тиф.

Реакция Видаля

Механизм антителообразования:O-антитела (Ig M) появляются на первой неделе, накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н- антитела (Ig G)являются в разгар заболевания и сохраняются у переболевших в течение 1-1,5 лет.

Цель реакции:определить антитела к сальмонеллам брюшного тифа, паратифа А или паратифа В в сыворотке исследуемого человека.

Компоненты реакции:

1. Сыворотка исследуемого человека

2. Диагностические антигены: а) О –антигенный диагностикум брюшного тифа, б) Н — антигенный диагностикум брюшного тифа, в) ОН — антигенный диагностикум паратифа А, г) ОН — антигенный диагностикум паратифа В.

Техника постановки:

1. Физ.раствор вносят по 1 мл в 4 ряда пробирок по 8 пробирок: 6 – для разведений, 2 – контрольные

2. Сыворотку исследуемого человека по 0,1 мл вносят в первые пробирки каждого ряда, затем титруют (100,200,400,600,800,1600)

4. Внесение диагностикумов: в 1 — О –антигенный диагностикум брюшного тифа, во 2 — Н — антигенный диагностикум брюшного тифа, в 3 — ОН — антигенный диагностикум паратифа А, в 4 — ОН — антигенный диагностикум паратифа В.

3. Инкубация в термостате 2 часа

4. Учет результатов: если выпадает осадок в виде хлопьев (агглютинация), то реакция +, если раствор прозрачный – реакция –.

Диагностический титр 1:200

А) если агглютинация в 1 ряду, то у исследуемого человека брюшной тиф (инфекционный иммунитет)

Б) если во 2 ряду, то человек переболел брюшным тифом или привит против брюшного тифа (постинфекционный или поствакцинальный иммунитет). Отличить их можно только по нарастанию титра при инфекционном Видале.

В) в 3 ряду – паратиф А (инфекционный иммунитет)

Г) в 4 ряду – паратиф В (инфекционный иммунитет)

Д) если агглютинация произошла во всех первых пробирках каждого ряда, то это групповой иммунитет за счет наличия одинаковых антигенов у S.typhi и S.paratyphi, но учитывается тот ряд, где в последующих разведениях произошла агглютинация.

РПГА при брюшном тифе с 1 и 2 сыворотками.

Цель реакции:определить антитела к сальмонеллам брюшного тифа и определить стадию заболевания по нарастанию титра антител.

Компоненты реакции:

1. Парные сыворотки исследуемого человека (взятые на 7 и 14 день заболевания).

2. Эритроцитарный антигенный диагностикум брюшного тифа,

Техника постановки:

1. В 2 ряда лунок вносят по 1 мл ф/р.

2. Титруют сыворотки: в 1 ряду первую сыворотку, во 2 – вторую.(10,20,40,80,160,320)

3. Внесение эритроцитарного антигенного диагностикума по 3 капли в каждую лунку.

4. Инкубация в термостате 2 часа

5. Учет результатов: если осадок в виде хлопьев геммаглютинации («зонтики»), то реакция +, если в виде осадка эритроцитов («пуговки»), то реакция -.

6. Диагностический титр:1:20

Заключение:Предварительный диагноз – брюшной тиф, т.к. титр антител увеличился в 4 раза с 1:20 с 1 сывороткой, а со 2 – 1:80.

источник

«Методические рекомендации по постановке реакции пассивной гемагглютинации с цистеиновой пробой с целью диагностики брюшного тифа, паратифов, других сальмонеллезов и выявления бактерионосителей»

Документ по состоянию на август 2014 г.

Утверждаю
Начальник Главного управления
карантинных инфекций
Министерства здравоохранения СССР
В.П.СЕРГИЕВ
29 февраля 1980 года

Методические рекомендации разработаны в лаборатории брюшного тифа и прочих сальмонеллезов Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии Министерства здравоохранения СССР (Ю.Я. Тендетник). Рекомендованы к утверждению Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Министерства здравоохранения СССР.

С целью улучшения диагностики брюшного тифа, паратифов и других сальмонеллезов, а также при проведении эпидемиологического анализа и выявлении источников инфекции наряду с бактериологическим методом (который является основным) следует применять серологические исследования и, в частности, выявлять в сыворотке крови антитела к соответствующим возбудителям.

В настоящее время недостаточно ограничиваться определением общего титра антител, поскольку последние неоднородны по своим свойствам и относятся к 5 классам иммуноглобулинов — IgM, IgG, IgA, IgD и IgE. Наибольшее диагностическое значение имеют IgM-антитела (с константой седиментации 19S) и IgG-антитела (с константой седиментации 7S). Нормальные (так называемые неспецифические), анамнестические и прививочные антитела к O-антигенам тифозных, паратифозных и др. сальмонеллезных бактерий принадлежат в основном к IgM-антителам. Эти же антитела появляются первыми на самой ранней стадии заболевания, но к концу первой недели болезни начинают заметно нарастать IgG-антитела. Такая же закономерность отмечается и в отношении образования H-антител, однако их титр достигает максимума позже, чем титр O-антител. При брюшном тифе, кроме O- и H-антител, образуются еще Ви-антитела, основная масса которых в разгар болезни относится к IgG и IgA. У переболевших, не ставших бактерионосителями, уровень как IgG, так и IgM-антител постепенно снижается, но сохраняются в относительно высоком титре в течение нескольких недель, а иногда и больше. При формировании острого и хронического бактерионосительства, как правило, в сыворотках преобладают IgG-антитела, тогда как у транзиторных бактерионосителей определяются практически только IgM-антитела.

Лабораторное оснащение методики. Аппаратура, диагностические препараты, стекло, химические реактивы и др.

1. Термостат любого типа (жидкостный или воздушный) для поддержания температуры 37 +/- 1,0 °C.

2. Баня водяная лабораторная любого типа для поддержания температуры 56 +/- 1 °C.

3. pH — метр любой системы со стеклянными или каломельными электродами для измерения pH раствора в пределах 1 — 10 +/- 0,1 pH.

4. Весы лабораторные с погрешностью взвешивания не более 0,001 г по ГОСТ 19491-74. Удобны весы торзионные типа ВТ-500.

5. Шприц типа «Рекорд» (объем 1 мл) непрерывного действия Ш-19, ТУ-64-1-884-72.

6. Иглы трубчатые инъекционные к шприцу типа «Рекорд» с коротким срезом N 1060, размер 1,0 x 60 мм, или N 1090, размер 1,0 x 90 мм. Допустимо использование игл с отверстием не менее 0,8 мм.

7. Диагностикумы сальмонеллезные «О» эритроцитарные жидкие и сухие, ТУ-42 КВС 14 119-77, Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии МЗ РСФСР. Допустимо использование аналогичных диагностикумов других институтов.

8. Эритроцитарный Ви-диагностикум, МРТУ 42 N 15-64, Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии МЗ РСФСР.

9. Н-диагностикумы сальмонеллезные эритроцитарные формализированные, ТУ 42 КВС 89-76, Московского научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. Мечникова МЗ СССР или Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии МЗ РСФСР. В случае отсутствия эритроцитарных Н-диагностикумов допустимо использование сальмонеллезных Н-монодиагностикумов корпускулярных бактериальных, МРТУ 42 N 24-64, Ташкентского научно-исследовательского института вакцин и сывороток или других предприятий.

10. Сыворотки иммунные стандартные с известным титром антител. Приложены к каждой упаковке соответствующего диагностикума.

11. Сыворотка крови нормальная сухая от различных видов лабораторных животных (кролики, крысы, мыши и др.), ТУ 42 КВС 144-78, Московского научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. Мечникова МЗ СССР. Допустимо использование любой нормальной сыворотки иного происхождения при условии отсутствия в ней антител к сальмонеллезным О-, Ви- и Н-антигенам в титре 1:100.

12. Планшеты пластмассовые с лунками (для иммунологических реакций) из метаметилкрилата Ленинградского завода «Медполимер», ТУ 64-2-278-79. Допустимо использование других планшетов подобного типа.

13. Пипетки стеклянные мерные на 1, 2, 5 и 10 мл по ГОСТ 20292-74.

14. Пробирки стеклянные биологические 15 x 150 мм по ГОСТ 10515-75. Допустимо использование других пробирок из водостойкого стекла подходящего размера.

15. Пробирки стеклянные, для лекарственных средств 9,5 x 30 мм и 9,5 x 40 мм, ТУ 64-2-182-77. Допустимо использование любых других пробирок или флаконов из водостойкого стекла на 2, 3, 4 и 5 мл.

16. Пробки резиновые конусные N 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14 по ГОСТ 7852-76.

17. L-цистеин солянокислый или свободный (ч) ФС-42.1048-76 химико-фармацевтического объединения «Дарница», Киев, Мин. мед. пром. Допустимо использование венгерского L-цистеина. Требования к препарату: содержание золы в виде сульфатов не более 0,2%, аммиака — не более 0,05%.

Читайте также:  Смертельные болезни брюшной тиф

18. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

19. Натрий хлористый (хч) по ГОСТ 4233-77.

20. Натр едкий очищенный по ГОСТ 11078-78

21. Натрий фосфорнокислый двузамещенный (хч) по ГОСТ 11773-76.

22. Калий фосфорнокислый однозамещенный (хч) по ГОСТ 4198-75.

23. Методы приготовления буферных растворов по ГОСТ 4919.2-77.

24. Бумага индикаторная универсальная для определения pH в пределах 1 — 10, ТУ 61-09 1181-71. Допустимо использование индикаторной бумаги иного типа или измерение pH раствора цистеина с помощью потенциометра.

сывороток некоторыми редуцирующими веществами, и в частности цистеином, тогда как IgM и IgA-антитела инактивируются этими реагентами. Это позволяет с помощью цистеина определить удельное содержание в сыворотке IgG-антител. Рекомендуется использовать L-цистеин как солянокислый, так и «свободный» (ч). Для обработки сывороток готовят ex tempore раствор солянокислого или «свободного» цистеина (15 мг на 1 мл растворителя). При этом солянокислый цистеин растворяют в 0,1 N растворе едкого натра с таким расчетом, чтобы pH готового раствора был равен 7,0 — 7,2. «Свободный» цистеин сначала растворяют в половинном количестве 0,85% раствора хлористого натрия, затем доводят pH до 7,0 — 7,2 0,1 N раствором едкого натра и вновь доливают до нужного объема 0,85% раствором хлористого натрия, так как «свободный» цистеин значительно слабее, чем солянокислый сдвигает pH раствора в кислую сторону. Раствор цистеина может храниться не более 30 — 60 мин., поэтому сначала следует приготовить необходимые разведения сывороток.

Исследуемую сыворотку в разведении 1:5 смешивают с равным объемом раствора цистеина. Объем исследуемой сыворотки и раствора цистеина рассчитывают исходя из числа диагностикумов. Для титрования сыворотки могут использоваться коммерческие эритроцитарные сальмонеллезные О-диагностикумы основных серологических групп (A, B, C1, C2, D и E), комплексный (поливалентный) О-диагностикум, включающий рецепторы антигенов указанных групп (1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 3, 10), эритроцитарный Ви-диагностикум и сальмонеллезные эритроцитарные Н-диагностикумы. Применяются также бактериальные Н-диагностикумы в реакции агглютинации. При постановке реакции с одним диагностикумом требуется 0,2 мл цельной сыворотки (0,1 мл для обработки цистеином и еще 0,1 мл для титрования без цистеина). Если нужно протитровать IgG и суммарные антитела к 5 — 6 диагностикумам, достаточно 0,6 мл цельной сыворотки.

Смесь сыворотки с раствором цистеина помещают в пробирки объемом на 2 и 3 мл или такого же объема флакончики и плотно закрывают их резиновыми пробками (лейкопластырем). Объем пробирок (флаконов) должен быть таким, чтобы между содержимым и пробиркой оставалось минимальное (не более 0,2 мл) свободное пространство во избежание инактивации цистеина кислородом воздуха. Пробирки с сыворотками, обработанными цистеином, выдерживают в течение 18 — 20 часов в термостате при 37 °C. В таких же условиях выдерживается вторая часть исследуемой сыворотки без цистеина, разведенная 1:10 0,85% раствором хлористого натрия. На следующий день обе части сыворотки титруют, начиная с разведения 1:20, одними и теми же диагностикумами.

При титровании большого числа сывороток целесообразно использовать пластмассовые планшеты с лунками и шприц непрерывного действия типа «Рекорд», марки Ш-19, в комплект которого входит тройник с клапанами, резиновый шланг с оливой и пружина. Шприц типа «Рекорд» на 1 мл снабжают самодельным ограничителем (отрезок металлической или твердой пластмассовой трубки), надетым на стержень между поршнем и крышкой шприца. Длина ограничителя подбирается с таким расчетом, чтобы в шприц набирался нужный объем жидкости (0,5 мл или 0,25 мл и т.п.). Приложенную к комплекту Ш-19 пружину делят на 2 половины и одну часть надевают на стержень между крышкой шприца и головкой стержня. Один конец шланга с оливой помещается в сосуд с раствором для титрования, а другой подсоединяется к тройнику (марка А), надетому на шприц.

Каждое нажатие пальцем на головку поршня до упора позволяет внести 0,5 мл раствора в лунку, после чего пружина отводит поршень в исходное положение и шприц вновь заполняется 0,5 мл раствора. В первые лунки каждого ряда вносят по 0,5 мл исследуемых сывороток, обработанных и не обработанных цистеином (в разведении 1:10), и тем же шприцем (с ограничителем на 0,5 мл), на головку которого вместо тройника надета изогнутая игла с отверстием диаметром примерно 0,8 — 1,0 мм, перемешивают 3 раза содержимое первой лунки и переносят 0,5 мл во вторую лунку, а из второй после трехкратного перемешивания — в третью и т.д. Из последней лунки 0,5 мл содержимого выливают и тщательно (не менее 4 — 5 раз) промывают шприц чистым 0,85% раствором хлористого натрия. Таким образом последовательно разводят до предполагаемого титра исследуемые сыворотки и во все лунки вносят необходимое количество диагностикума (согласно соответствующему наставлению). При отсутствии указанного шприца и пластмассовых планшетов с лунками можно пользоваться мерными пипетками и биологическими пробирками.

В качестве основы для титрования сывороток, обработанных цистеином, необходимо использовать забуференный 0,85% раствор хлористого натрия (фосфатный буфер, pH 7,0 — 7,2), однако предпочтительнее готовить 0,85% раствор хлористого натрия на нормальной, прогретой при 56 °C в течение 30 минут сыворотке (кроличьей, лошадиной, крупного рогатого скота). Нормальную сыворотку добавляют из расчета 1 мл на 100 мл 0,85% раствора хлористого натрия (pH 7,0 — 7,2) при условии: в принятом разведении нормальной сыворотки отсутствуют антитела к применяемым диагостикумам, что проверяют предварительно для каждой новой серии нормальной сыворотки. Стабильность используемых диагностикумов периодически (1 раз в 2 — 3 месяца) проверяют титрованием одной серии иммунной сыворотки с известным титром. Такая сыворотка в лиофилизированном состоянии прилагается к диагностикуму и служит рабочим стандартом. Каждый опыт должен сопровождаться контролем диагностикума в растворе для титрования.

После внесения диагностикума пластинки или пробирки осторожно встряхивают для равномерного перемешивания содержимого и помещают либо в термостат при 37 °C на 3 часа, либо оставляют на 18 — 20 часов при комнатной температуре.

Реакция гемагглютинации считается положительной в том случае, если эритроциты полностью агглютинировались и расположены равномерно по дну лунки либо при почти полной агглютинации небольшая часть эритроцитов оседает в центре лунки в виде ровного колечка или пуговки. Иногда при положительной реакции края агглютината в лунках могут слегка сползать и он принимает вид «зонтика». При отрицательном результате агглютинанта нет, все эритроциты оседают на дне в центре в виде пуговки или ровного колечка.

В современных условиях при относительно частом контакте организма человека с сальмонеллами и некоторыми другими бактериями семейства кишечных, а также с их антигенами нарастание IgM и IgG-антител у многих заболевших происходит быстро — по типу вторичного иммунного ответа. Это особенно характерно для взрослых. Поэтому первое взятие сыворотки с целью диагностики заболевания необходимо проводить немедленно после поступления больного в стационар, а второй раз сыворотку можно брать в конце первой — начале второй недели болезни при подозрении на сальмонеллез и в конце второй недели — при подозрении на брюшной тиф и паратифы. Целесообразно исследовать сыворотку и в периоде реконвалесценции, если результаты бактериологического обследования больного оказались отрицательными. При таком подходе к серологическому исследованию, как правило, удается выявить достоверное нарастание титра суммарных антител, т.е. цистеиночувствительные + цистеиноустойчивые, и установить характерную для заболеваний путем обработки сывороток цистеином. Именно эти показатели должны быть основными при постановке серологического диагноза заболевания. Понимание «диагностического» титра антител (особенно суммарных) является весьма условным. Так называемый «диагностический» титр может быть обусловлен профилактической вакцинацией, перенесенным в прошлом (от нескольких месяцев до 3-х лет) заболеванием в стертой или субклинической форме или встречей с антигенами (которые могут попадать в организм с загрязненной пищей или водой), даже подвергшимися термической обработке, поскольку некоторые соматические антигены термоустойчивы. Следует учитывать также и то, что для разных районов страны (в связи с особенностями эпидемической ситуации и др.) величина «диагностического» титра будет различной. Она устанавливается эмпирически в результате титрования сывороток от 100 — 200 здоровых лиц. Большое значение имеет условно-диагностический титр IgG-антител, т.к. их наличие свидетельствует о значительном специфическом антигенном стимуле.

При подозрении на тиф и паратифы сыворотки следует титровать с помощью О-диагностикумов серогрупп А, В и Д, а также Н-диагностикумов 1 фазы a, b, d и Ви-диагностикума. Если выявляется четкое нарастание (в 4 раза и более) титра суммарных антител к определенным антигенам и особенно увеличение уровня IgG-антител, устойчивых к цистеину, то это дает веские основания для подтверждения клинического диагноза. Необходимо при этом учитывать, что при паратифе А титры О-антител на протяжении заболевания бывают более низкими, чем при брюшном тифе и паратифе В. В случае позднего поступления больного в стационар (в разгаре болезни) условно-диагностическим титром суммарных О-антител следует считать положительный результат в разведении не ниже 1:640. Минимальным условно-диагностическим титром IgG О- и Н-антител считается разведение 1:80, а для Ви-антител — 1:40 (при паратифе А «диагностические» титры могут быть в 2 раза ниже).

В такой ситуации при отсутствии бактериологического подтверждения рекомендуется исследовать сыворотку в периоде поздней реконвалесценции, чтобы уловить снижение общего титра антител и уменьшение удельного содержания цистеиноустойчивых IgG-антител, что также может служить определенным основанием для постановки диагноза.

При подозрении на сальмонеллез сыворотки вначале титруют с комплексным диагностикумом без цистеина. Если будет выявлено нарастание уровня антител или титр окажется достаточно высоким (не ниже 1:320), то следует перетитровать сыворотки в РПГА с цистеином со всеми групповыми О-диагностикумами (при отрицательном результате бактериологического обследования). Это необходимо не только для уточнения этиологии заболевания, но и потому что РПГА с комплексным диагностикумом недостаточно специфична. При сальмонеллезах и особенно пищевых токсикоинфекциях сальмонеллезной этиологии уже в конце первой недели в сыворотке обычно определяется довольно высокоудельное содержание IgG-антител. Поэтому при обработке такой сыворотки цистеином титр может снижаться не очень резко.

Реакция пассивной гемагглютинации с цистеином может оказаться полезной для постановки правильного диагноза в случаях смешанной инфекции или при выделении двух или нескольких видов возбудителей, этиологическая роль каждого из которых не ясна. При истинной микст-инфекции антитела и особенно цистеиноустойчивые будут нарастать к каждому возбудителю. Если же к какому-то микробу нарастание антител, и в том числе IgG, не будет выявлено, то можно предполагать, что выделение этого микроба носит случайный, транзиторный характер. Транзиторное носительство сальмонелл нередко имеет место у взрослых, т.к. они значительно более устойчивы к заражению, чем дети.

РПГА с цистеином можно использовать с целью установления ретроспективного диагноза, т.к. у переболевших даже субклинической формой заболевания в течение 1 — 2 месяцев в большинстве случаев сохраняется повышенный титр суммарных IgG-антител к соответствующему антигену.

В случае формирования острого и особенно хронического бактерионосительства происходит выраженное нарастание IgG-антител и при этом основное значение имеет не абсолютный титр антител, а удельное содержание в сыворотке цистеиноустойчивых антител. Если обработка цистеином не снижает титр либо снижает его только на одно, максимум два разведения, то это говорит о значительном содержании в сыворотке IgG-антител и у такого человека следует заподозрить острое или хроническое бактерионосительство. Необходимо отметить, что при длительном бактерионосительстве титр О-антител может быть низким (иногда 1:20 — 1:40), но эти антитела практически целиком определяются IgG-антителами. В то же время у хронических носителей тифозных бактерий определяется также сравнительно высокий уровень (в большинстве случаев выше 1:80) Ви-антител, который при обработке цистеином.

Отмеченная закономерность может нарушаться у хронических носителей тифозных бактерий, инвазированных онисторхами. В сыворотках у значительного процента таких лиц относительно невелико удельное содержание IgG О-антител, однако выявляются высокие титры IgG Ви-антител. Это необходимо принимать во внимание при обследовании на бактерионосительство различных контингентов населения, главным образом, на некоторых территориях Обь-Иртышского бассейна, где описторхоз встречается в качестве краевой патологии.

У транзиторных бактерионосителей при относительно невысоком титре антител все они, как правило, принадлежат к IgM и полностью инактивируются цистеином. Если этого не наблюдается и в сыворотке остаются антитела (выше 1:20) после обработки ее цистеином, то у такого лица можно предполагать наличие либо субклинической формы инфекции, либо продолжающееся бактерионосительство. Некоторое повышение уровня IgG-антител может происходить в результате многократной специфической вакцинации, поэтому при анализе результатов реакции следует учитывать прививочный анамнез.

Постановка РПГА с цистеиновой пробой может быть использована с целью контроля возможного прекращения бактерионосительства. Известно, что у бактерионосителей выделение возбудителей может происходить не постоянно, а с более или менее длительными перерывами. У такого лица серологические показатели будут характерными для длительного бактерионосителя. Если же на фоне прекратившегося бактериовыделения значительно снизится титр антител и особенно цистеиноустойчивых IgG, то можно предположить об освобождении организма от возбудителя. Освобождение от бактерионосительства чаще наблюдается при сальмонеллезах, реже — при брюшном тифе.

источник