Показания. Бактериологическое исследование проводится при подозрении на паратифозное заболевание (наличие лихорадки постоянного, ремиттирующего или неправильно ремиттирующего типа); нарастание симптомов интоксикации параллельно подъему температуры; наличии гипотонии; относительной брадикардии (у детей раннего возраста — тахикардия); дикротии пульса; симптомов поражения органов пищеварения (сухой язык, трещины, утолщения его, отпечатки зубов по его краю, грязно-бурый или коричневый налет); вздутия (метеоризм) живота; урчании и болезненности в правой подвздошной области; положительном симптоме Падалки; задержке стула; гепатолиенальном синдроме на первой неделе заболевания; розеолезной сыпи на 8-10 день болезни; лейкопении с относительным лимфоцитозом или слегка повышенной СОЭ; у всех лихорадящих больных с неустановленным диагнозом, если высокая температура сохраняется более 3 дней.
Посев крови (гемокультура) проводится при наличии подозрения на паратифозное заболевание в любой день болезни; повторно, и особенно в ранние сроки лихорадочного периода до назначения этиотропного лечения.
Розеолокультура (содержимое розеол) берется с 8-10 дня болезни, в периоде реконвалесценции; при стертых формах паратифозных заболеваний, когда возбудители находятся в крови в небольшом количестве.
Посев костного мозга (миелокультура) проводится в атипичных случаях тифопаратифозных заболеваний при отрицательных результатах других лабораторных исследований и посевах крови.
Посев кала (копрокультура) и мочи (уринокультура) проводятся со второй недели болезни.
Посев желчи (биликультура) может проводится в течение всего периода заболевания. Посев желчи противопоказан в лихорадочном периоде.
Для посева крови используют 10% желчный бульон и среду Раппопорта. Можно производить посев в мясопептонный бульон с добавлением 1% глюкозы. Стерильным шприцом из локтевой вены берут кровь на первой неделе заболевания в количестве 10 мл, а в более поздние сроки -15-20 мл крови и засевают во флаконы с теплым бульоном у постели больного в соотношении 1:10 (при меньшем объеме питательной среды кровь может оказать бактерицидное действие на возбудителя). Если посев у постели больного провести нельзя, то в лабораторию посылается цитратная кровь. Во флакончики с 1 мл 40% стерильного раствора вводят 9 мл крови путем прокола пробки предварительно обработанной спиртом.
Для получения содержимого из розеолы кожу над ней обрабатывают этиловым спиртом и скарифицируют. На место скарификации наносят каплю желчного или простого бульона, а затем с помощью пипетки ее переносят во флакон с 50 мл желчного бульона.
Костный мозг получают путем стернальной пункции. Посев проводят во флакон с 50 мл желчного бульона.
Для посева кала стерильной стеклянной палочкой или шпателем берут 2-3 грамма испражнений. Если своевременно провести посев кала нельзя, то можно использовать консервант (глицериновая смесь), составляющий 2/3 общего объема. Посев производят прямым способом на чашку Петри со средами Плоскирева, Левина, с висмут-агаром или на среды обогащения (селенитовая, среда Мюллера) с последующим пересевом на вышеперечисленные среды.
Посев мочи проводят в стерильную посуду (собирают 20-30 мл мочи с соблюдением условий, исключающих ее инфицирование). Затем проводят посев мочи прямым способом на чашки Петри со средой Плоскирева и др.
Посев желчи, полученной при дуоденальном зондировании (не ранее 8-10 дня нормальной температуры) с соблюдением стерильности засевают на чашки Петри по 0,5 мл или на среды обогащения по 1-2 мл или на простой бульон.
Ожидаемые результаты. Предварительные результаты посевов крови — выделение S. Typhi — получают через 2-3 дня, а окончательные — через 5-10 дней. Окончательные результаты бактериологического анализа кала и мочи получают на 4-5 день, а желчи — на 7 день.
Трактовка результатов. Выделение гемокультуры является главным подтверждением диагноза паратифозного заболевания. На ранних стадиях заболевания возбудители выявляются у 40% больных в крови. В некоторых случаях обнаружение паратифозных микроорганизмов в крови не является признаком заболевания. Речь идет о бактерионосителях, у которых любое заболевание может сочетаться с выделением возбудителей брюшного тифа. Выделение возбудителей из мочи обладает повышенной диагностической ценностью в связи с тем, что почечные носители встречаются редко. Копро- урино- биликультуры чаще всего используют для подтверждения бактериологического выздоровления от брюшного тифа и паратифа.
Метод выделения розеолокультуры применяется ограниченно, поскольку экзантема встречается не у всех больных.
Положительные результаты копрокультуры характерны для 2-3 недели болезни, в период вторичной бактериемии, что ограничивает возможности метода.
При отрицательных результатах бактериологического исследования диагноз паратифозного заболевания может основываться на клинико-эпидемиологических данных.
Перед выпиской больных из стационара проводятся трехкратные посевы кала и мочи после отмены антибиотиков с интервалами 1-2 дня и однократным посевом желчи на 10 день нормальной температуры.
источник
Классы МПК: | C12N1/20 бактерии; питательные среды для них C12Q1/04 установление присутствия и(или) вида микроорганизма; использование селективных сред для испытания антибиотиков или бактерицидов; составы, содержащие химический индикатор для этих целей | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Автор(ы): | Султанов З.З. (RU) , Меджидов М.М. (RU) , Степанова Э.Д. (RU) , Кулакова Л.С. (RU) , Горелова В.Г. (RU) , Абдулганиева С.К. (RU) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Патентообладатель(и): | Федеральное государственное унитарное предприятие «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген»», Министерства эдравоохранения Российской Федерации (RU) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Приоритеты: |
Питательный бульон рыбный | 10,0-20,0 |
Панкреатический гидролизат | |
казеина | 10,0-20,0 |
Экстракт кормовых дрожжей | 2,0-4,0 |
Глюкоза | 8,0-12,0 |
Натрия цитрат или | 0,3-0,5 |
Натрия гепаринат | 0,02-0,04 |
Пара-аминобензойная кислота | 0,005-0,015 |
Трис-(оксиметил)-аминометан | 0,5-1,5 |
Агар | 0,5-1,0 |
Введение в среду дополнительно пара-аминобензойной кислоты способствует нейтрализации антимикробного действия лекарственных средств, которые могут содержаться в крови при проведении антибактериальной терапии.
Внесение в предлагаемую среду дополнительно агара, обладающего высокой сорбционной способностью, способствует нейтрализации продуктов метаболизма и предохраняет микробные клетки от их токсического действия.
Введение в среду натрия цитрата или натрия гепарината, обладающих антикоагулянтными свойствами, вместо натрия ацетата, не обладающего таковыми, препятствует свертыванию крови (образованию сгустка фибрина), что облегчает доступ питательных веществ к микробной клетке, тем самым способствуя активному размножению микроорганизмов в среде.
Учитывая, что у больных с положительной гемокультурой концентрация возбудителей в крови обычно не превышает 10 2 /мл, обеспечение условий для проникновения питательных веществ среды к микробной клетке необходимо для активного накопления микроорганизмов в среде.
Использование в среде в качестве буфера трис-(оксиметил)-аминометана, обладающего большей буферной емкостью по сравнению с фосфатом натрия, способствует тому, что кислота, образующаяся в результате сбраживания микроорганизмами глюкозы, полностью нейтрализуется, в результате чего не происходит сдвига рН среды в кислую сторону, препятствующую росту микроорганизмов.
Высокая питательная ценность азотистых компонентов предлагаемой среды — питательного бульона из рыбы и панкреатического гидролизата казеина полностью обеспечивает питательные потребности микроорганизмов различных таксономических групп, вызывающих бактериемию.
В целом вся совокупность представленных признаков способствует расширению спектра выделяемых микроорганизмов повышает чувствительность среды и обеспечивает высокий накопительный эффект, что позволяет выделить гемокультуры при минимальном исходном количестве их в крови.
Среду получают следующим образом.
Пример 1. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 10 г питательного бульона рыбного, 10 г панкреатического гидролизата казеина, 2 г дрожжевого экстрата, 8 г глюкозы, 0,3 г натрия цитрата или 0,02 г натрия гепарината, 0,005 г пара-аминобензойной кислоты, 0,5 г трис-(оксиметил)-аминометана, 0,5 г агара. Смесь нагревают до полного расправления агара, кипятят в течение 1-2 мин, разливают во флаконы по 100,0 мл и стерилизуют при 120°С в течение 30 мин. Контроль качества среды осуществляют путем посева во флаконы тест-штаммов микроорганизмов — наиболее часто выделяемых при сепсисе и бактериемии: стафилококков, стрептококков, сальмонел, эшерихий, менингококков, клебсиелл, бруцелл, иерсиний, синегнойной палочки, листерий и др. из разведения 10 -6 и 10 -7 (соответственно 10-10 клеток) (6).
После инкубации посевов в термостате при 37°С в течение 18-24 ч отмечают рост как визуально, так и посредством высева ихз флаконов петлей на питательный, кровяной и сывороточный агары. Накопительный эффект определяют по формуле где
п 1 — число колоний на чашках, засеянных из среды после 18-20 ч инкубации;
п 0 — число жизнеспособных клеток в посевной дозе;
Пример 2. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 15 г питательного бульона рыбного, 15 г панкреатического гидролизата казеина, 3 г экстракта кормовых дрожжей, 10 г глюкозы, 0,4 г натрия цитрата или 0,04 натрия гепарината, 0,01 г пара-аминобензойной кислоты, 1,0 г трис-(оксиметил)-аминометана, 0,75 агара. Далее согласно примеру 1.
Пример 3. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 20 г питательного бульона рыбного, 20 г панкреатического гидролизата казеина, 4 г экстракта кормовых дрожжей, 12 г глюкозы, 0,5 г натрия цитрата или 0,04 г натрия гепарината, 0,015 г пара-аминобензойной кислоты, 1,5 г трис-(оксиметил)-аминометана, 1,0 г агара. Далее согласно примеру 1.
Результаты бактериологического контроля предлагаемой и известной сред представлены в табл.1, 2.
Из таблицы 1, 2 видно, что предлагаемая среда обладает высокой чувствительностью и значительным накопительным эффектом по отношению к штаммам микроорганизмов наиболее часто, вызывающих бактериемию и сепсис, и превосходит по этим показателям известную среду, что позволяет выявить микроорганизмы при минимальном исходном содержании их в крови.
1. Современные принципы антибактериальной терапии сепсиса. В.А.Руднов. Антибиотики и химиотерапия, т.45, 7, 2000, с.3-5.
2. З.З.Султанов, Э.Д.Степанова, Е.А.Какулина. Питательная среда для выделения гемокультур при диагностике брюшного тифа и паратифов. Патент №2175671. Зарегист. 10 ноября 2001 г.
3. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под. ред. М.О.Биргера. М., 1982 г, с.73, 255.
4. Р.К.Черкес, Л.Б.Богоявленская, Н.А.Бельская. Микробиология. М., 1986, с.240-241, 249, 261.
5. Справочник по микробиологическим питательным средам и микротестсистемам. Под. ред. М.М.Меджидова. Махачкала, 1999 г, с.41 (прототип).
6. В.Д.Бадиков, Л.Е.Журавлева, В.П.Болехан. Совершенствование методов микробиологического исследования крови у больных с гнойно-септическими инфекциями. Клин. лаб. диагн., 1998, №7, с.17-19.
Табл.1. Сравнительная характеристика роста тест-штаммов микроорганизмов на предлагаемой и известной средах | ||||
Наименование тест-штаммов | На предлагаемой среде | На известной среде | ||
Посевная доза | Посевная доза | |||
100 клеток | 10 клеток | 100 клеток | 10 клеток | |
S.pyogenes Dick 1 | ++ | + | + | — |
S.pyogenes 1512 | ++ | + | + | — |
S.epidermidis ATCC 14990 | +++ | ++ | ++ | — |
S.aureus 46 | +++ | ++ | ++ | + |
S.aureus 209 «Р». | +++ | ++ | ++ | + |
P.aerogenes 27/99 | +++ | ++ | +++ | ++ |
S.marcescens 1 | +++ | ++ | +++ | ++ |
E.coli 055 | +++ | ++ | +++ | ++ |
P.mirabilis 71(2) | +++ | ++ | +++ | ++ |
P.vulgaris H19 | +++ | ++ | +++ | ++ |
K.pneumoniae 51 | +++ | ++ | +++ | ++ |
S.typhi H 901 | +++ | ++ | +++ | ++ |
S.pneumoniae ЛД | ++ | + | + | — |
B.abortus 19BA | ++ | + | + | — |
L.monocytogenes 56 | +++ | ++ | ++ | + |
J.enterocolitica 335 | +++ | ++ | +++ | ++ |
J.pseudotuberculosis 111 | +++ | ++ | +++ | ++ |
N.meningitidis 637 | ++ | — | — | — |
Обозначения: +++ — интенсивный рост | ||||
++ — средний рост | ||||
+ — слабый рост | ||||
— отсутствие роста |
Табл.2. Сравнительная характеристика накопительного эффекта предлагаемой и известной сред | ||
Наименование штаммов | Накопительный эффект | |
На предлагаемой среде | На известной среде | |
S.pyogenes Dick 1 | 740±15 | 360±12 |
S.pyogenes 1512 | 750±20 | 250±9 |
S.epidermidis ATCC 14990 | 845±18 | 470±15 |
S.aureus 46 | 780±16 | 540±12 |
S.aureus 209 «P» | 874±20 | 560±18 |
P.aerogenes 27/99 | 1284±24 | 900±22 |
S.marcescens 1 | 933±22 | 850±16 |
E.coli 055 | 3346±50 | 1900±22 |
P.mirabilis 71(2) | 3076±45 | 1500±21 |
P.vulgaris H·19 | 2448±35 | 1400±26 |
K.pneumoniae 51 | 1000±25 | 860±12 |
S.typhi H 901 | 3140±42 | 1800±26 |
S.pneumoniae ЛД | 766±10 | 420±16 |
B.abortus 19BA | 950±21 | 130±14 |
L.monocytogenes 56 | 1330±32 | 900±24 |
J.enterocolitica 335 | 866±26 | 420±11 |
J.pseudotuberculosis 111 | 960±30 | 560±13 |
N.meningitidis 637 | 540±12 | — |
Питательная среда для выделения гемокультур, содержащая источники азотистого питания, экстракт кормовых дрожжей, глюкозу, буфер, органическую соль, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит парааминобензойную кислоту и агар, в качестве органической соли содержит натрия цитрат или натрия гепаринат, в качестве буфера — трис-(оксиметил)-аминометан, в качестве источников азотистого питания — питательный бульон рыбный и панкреатический гидролизат казеина при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
источник
7. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифом. Фаготипирование их возбудителей и его значение. Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.
Лабораторная диагностика. Самым ранним и основным методом диагностики брюшного тифа и паратифов является бактериологический — получение гемокультуры или миелокультуры. С этой целью исследуют кровь или пунктат костного мозга. Кровь лучше засевать на среду Рапопорт (желчный бульон с добавлением глюкозы, индикатора и стеклянного поплавка) в соотношении 1: 10 (на 10 мл среды 1 мл крови). Посев следует инкубировать при температуре 37 С С не менее 8 дней, а с учетом возможного наличия L-форм — до 3—4 нед.
Для идентификации выделенной культуры сальмонелл используют (с учетом их биохимических свойств) диагностические адсорбированные сыворотки, содержащие антитела к антигенам 02 (S. paratyphi А), 04 (S. paratyphi В) и 09 (S. typhi). Если выделенная культура S. typhi не агглютинируется 09-сывороткой, ее необходимо проверить с Vi-сывороткой.
Бактериологическое исследование испражнений, мочи и желчи проводят для подтверждения диагностики, контроля бактериологического выздоровления при выписке реконвалесцентов и для диагностики бактерионосительства. В этом случае материал предварительно засевают на среды обогащения (среды, содержащие химические вещества, например селенит, которые угнетают рост Е. coli и других представителей микрофлоры кишечника, но не угнетают роста сальмонелл), а затем со среды обогащения — на дифференциально-диагностические среды (Эндо, висмут-сульфит-агар) с целью выделения изолированных колоний и получения из них чистых культур, идентифицируемых по указанной выше схеме. Для обнаружения О- и Vi- антигенов в сыворотке крови и испражнениях больных могут быть использованы РСК, РПГА с антительным диагностикумом, реакции коагглютинации, агрегат-гем- агглютинации, ИФМ. Для ускоренной идентификации S. typhi перспективно применение в качестве зонда фрагмента ДНК, несущего ген Vi-антигена (3—4 ч).
Наиболее надежной и специфической является последняя реакция (Vi-гемагглютинации).
Обнаружены 3 необычных мутанта S. typhi: Vi-I — R-форма, клетки лишены Н- и О-антигенов. но стойко сохраняют Vi-антиген; 0-901 — лишен Н- и Vi-антигенов; Н-901 — содержит О- и Н-антигены, но лишен Vi-антигена, Все три антигена: О-, Н- и Vi— имеют выраженные иммуногенные свойства. Наличие Vi-антигенов позволяет подвергать культуры S. typhi фаготипированию. Чувствительность их к соответствующим фагам является стабильным признаком, поэтому фаготипирование имеет важное эпидемиологическое значение.
Разработаны также схемы фаготипирования S. paratyphi А и S. paratyphi В, по которым они разделяются на десятки фаготипов. Существенно, что фаготипы сальмонелл могут ни по каким другим признакам не отличаться друг от друга.
Серологический метод обнаружения 0- и Н- антител в РПГА.
8. Бактерионосительство при брюшном тифе и методы ого выявлении. Особенности антигенного строении возбудители брюшного тифа и его фаготипирование.
Примерно 5 % переболевших становятся хроническими носителями сальмонелл тифа или паратифов. Известное значение в формировании носительства играют местные воспалительные процессы в желчевыводящих (иногда в мочевыводящих) путях, которые часто возникают в связи с тифо-паратифозными инфекциями или обостряются в результате этих инфекций. Однако не менее важную роль в формировании длительного носительства сальмонелл брюшного тифа и паратифов А и В играет L-трансформация их. L-формы сальмонелл утрачивают Н-, частично 0- и Vi-антигены, располагаются, как правило, внутриклеточно (внутри макрофагов костного мозга), поэтому становятся не доступными ни для химиопрепаратов, ни для антител и могут длительно персистировать в организме переболевшего человека. Возвращаясь в исходные формы и полностью восстанавливая свою антигенную структуру, сальмонеллы вновь становятся вирулентными, вновь проникают в желчные ходы, вызывают обострение процесса бактерионосительства, выделяются с испражнениями, а такой носитель становится источником заражения для окружающих. Не исключено также, что формирование бактерионосительства зависит от какого-то дефицита иммунной системы.
Антигенное строение. Сальмонеллы имеют О- и Н-антигены, По О-антигенам они разделяются на большое количество серогрупп, а по Н-антигенам — на серотипы. S. typhi, S. paratyphi А и S. paratyphi В отличаются друг от друга как по О-антигенам (относятся к разным серогруппам), так и по Н-антигенам..
S. typhi помимо О- и Н-антигенов имеет еще один поверхностный антиген, который они назвали антигеном вирулентности (Vi-антигеном). По химической природе Vi-антиген отличается от О- и Н-антигенов, он состоит из трех различных фракций, но его основу составляет сложный полимер N-ацетилгалактозаминоуроновая кислота с м, м. 10 МД.
Обнаружены 3 необычных мутанта S. typhi: Vi-I — R-форма, клетки лишены Н- и О-антигенов. но стойко сохраняют Vi-антиген; 0-901 — лишен Н- и Vi-антигенов; Н-901 — содержит О- и Н-антигены, но лишен Vi-антигена, Все три антигена: О-, Н- и Vi— имеют выраженные иммуногенные свойства. Наличие Vi-антигенов позволяет подвергать культуры S. typhi фаготипированию. Чувствительность их к соответствующим фагам является стабильным признаком, поэтому фаготипирование имеет важное эпидемиологическое значение.
Разработаны также схемы фаготипирования S. paratyphi А и S. paratyphi В, по которым они разделяются на десятки фаготипов. Существенно, что фаготипы сальмонелл могут ни по каким другим признакам не отличаться друг от друга.
9. Микроорганизмы — возбудители пищевых отравлений. Пищевые отравлении, обусловленные стафилококками. Типы энтеротоксинов, их свойства, способы выявления.
Пища нередко является причиной отравлений, природа которых может быть самой различной.
Наиболее простая классификация пищевых отравлений такова: различают пищевые отравления немикробного и микробного происхождения.
Пищевые отравления микробного происхождения подразделяют на 2 группы: пищевые интоксикации и пищевые токсикоинфекции.
Пищевые интоксикации — отравления, обусловленные исключительно токсинами микроорганизмов. Они могут возникать и в тех случаях, когда живые возбудители в пищевом продукте, подвергнутом термической обработке, отсутствуют.
Пищевые токсикоинфекции возникают только в связи с употреблением в пищу продуктов, обильно зараженных бактериями.
Токсикоинфекции являются следствием массивного обсеменения пищевого продукта живыми возбудителями. Для пищевых токсикоинфекций существует только один путь передачи — через пищу.
Пищевые токсикоинфекции могут вызывать представители по крайней мере пяти семейств бактерий:
Enterobacteriaceae (роды — Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus, Serratia, Hafnia, Enterobacter, Citrobacter и др.),
Vibrionaceae (V. parahaemolyti- cus),
Streptococcaceae (протеолитические варианты стрептококков серогруппы D),
Bacillaceae — роды Bacillus (В. cereus),
Clostridium (С. perfringens, cepo- типы A, D, F; C. botulinum, серотипы А, В, С, E, F).
Инфицирование стафилококками пищевых продуктов — частая причина пищевых отравлений.
Основным методом диагностики пищевых токсикоинфекций является бактериологический. Он применяется с учетом биологии возможного возбудителя (грамотрицательные и грамположительные палочки, стрептококки, бациллы, клостридии). Материалом для исследований служат испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь, продукты, послужившие причиной отравления. Обращают внимание на обнаружение большого количества бактерий в продукте, таких же бактерий в выделениях из кишечника и желудка, в том числе от нескольких человек при групповом отравлении.
Подтверждением диагноза является обнаружение в сыворотке крови переболевших людей (через 1—2 нед.) антител к возбудителю.
10. Сальмонеллы — возбудители острых гастроэнтеритов. Классификация сальмонелл. Методы лабораторной диагностики сальмомеллезов.
Сальмонеллы являются не только основными возбудителями пищевых токсикоинфекций, но и часто причиной своеобразных диарей — сальмонеллезов.
Ключевые признаки рода Salmonella следующие: короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, длиной 1,5—4,0 мкм, в большинстве случаев подвижные (перитрихи), спор и капсул не имеют, образуют при ферментации глюкозы кислоту и газ (за исключением S. typhi и некоторых других серотипов), имеют лизин- и орнитиндекарбоксилазы, не имеют фенилаланиндезаминазы, образуют H2S.
Классификация. Род Salmonella включает единственный вид S. enteritica с семью основными подвидами: S. choleraesuis, S. salamae, S. arizonae, S. diarizonae, S. houtenae, S. bongori, S. indica, которые различаются по ряду биохимических признаков
Серологическая классификация сальмонелл по Уайту и Кауффманну.
У сальмонелл имеются О-, Н- и К-антигены. Обнаружено 65 различных О-антигенов. Они обозначаются арабскими цифрами от 1 до 67. По О-антигену сальмонеллы разделены на 50 серологических групп (A—Z, 51—65).
У сальмонелл различают два типа Н-антигенов: I фаза и II фаза. Обнаружено более 80 вариантов Н-антигенов I фазы. По Н-антигенам серогруппы разделяют на серотины.
Основной метод диагностики сальмонеллезной инфекции — бактериологический. Материалом для исследования служат испражнения, рвотные массы, кровь, промывные воды желудка, моча, послужившие причиной отравления продукты. Особенности бактериологической диагностики сальмонеллезов:
использование сред обогащения (селенитовой, магниевой), в особенности при исследовании испражнений;
для обнаружения сальмонелл пробы следует брать из последней, более жидкой, части испражнений (верхнего отдела тонкого кишечника);
соблюдать соотношение 1: 5 (одна часть испражнений на 5 частей среды);
в связи с тем, что S. arizonae и S. diarizonae ферментируют лактозу, использовать в качестве дифференциально-диагностической не только среду Эндо, но и висмут-сульфит-агар, на котором колонии сальмонелл приобретают черный (некоторые — зеленоватый) цвет;
для посева крови использовать среду Рапопорт;
использование для предварительной идентификации колоний 01-сальмонеллезного фага.
для окончательной идентификации выделенных культур вначале используют поливалентные адсорбированные О- и Н-сыворотки, а затем — соответствующие моновалентные О- и Н-сыворотки.
Для быстрого обнаружения сальмонелл могут быть использованы поливалентные иммунофлуоресцентные сыворотки. Для выявления антител в сыворотке крови больных и переболевших используется РПГА с применением поливалентных эритроцитар- ных диагностикумов, содержащих полисахаридные антигены серогрупп А, В, С, D и Е.
источник
Цель. Провести бактериологический и серологический методы диагностики дизентерии. Оценить их диагностическую ценность. Ознакомиться с ИБМП для лабораторной диагностики дизентерии.
Задача. В инфекционной больнице в течение 6 дней лечиться больной с диагнозом: «Острая дизентерия». Жалобы при поступлении на высокую температуру, частый жидкий стул со слизью и кровью, боли в животе. Для подтверждения диагноза проведено бактериологическое исследование парными сыворотками на 3-й и 6-й дни болезни. Учтите результаты бактериологического и серологические исследования.
Бактериологический метод диагностики: выделение и идентификация чистой культуры.
1-й этап. Посев нативного материала. Или взятого с помощью петли из прямой кишки. Материал засевают на среду Плокирева или Левина или висмут-сульфит агар и помещается в термостат при температуре 37°С и инкубируется в течение 24-48 часов, петлю заливаем средой накопления ( селенитовый или желчный бульоны).
2-й этап. Выделение чистой культуры. Через 24 часа инкубации в термостате с помощью петли отвить типичную для дизентерийных бактерий бесцветную колонию на скошенный МПА или среду Олькеницкого для выделения чистой культуры и поместить в термостат на сутки. Из сред накопления произвести высев на среды Плоскирева, Левина или висмут-сульфит агар.
3-й этап. Идентификация выделенной культуры: а) морфология; б) биохимические свойства; в) антигенная структура;
4-й этап: учесть чувствительность выделенной культуры к антибиотикам и бактериофагу.
Серологический метод диагностики.
Для серологического исследования при постановке РПГА берется: а) сыворотка больного; б) эритроцитарный диагностикум; в) физиологический раствор.
Исследуемый материал | Среда для посева | Характеристика колоний по цвету | Идентификация цистой культуры | |
Морфология | Биохимические свойства | агглютинации | Чувствительность к антибиотикам и бактериофагу | |
лактоза | глюкоза | маннит | С сывороткой Флекснера | С сывороткой зонне и ньюкастл |
Срок исследования | Разведение сыворотки больного | ||
1/100 | 1/200 | 1/400 | Контроль |
3-й день 6-й день |
Цель. Изучить специфические препараты для диагностики дизентерии.
Используя аннотации к диагностическим препаратам по теме «микробиология дизентерии», изучите препараты, применяемые при диагностике этой инфекции.
Название препарата | Состав | К какой группе диагностических препаратов относится | Практическое использование (метод диагностики) |
Аннотация лечебно-профилактических и диагностическим препаратов по теме «Микробиология дизентерии»
Бактериофаг дизентерийный поливалентный жидкий или в таблетках – стерильный фильтрат фаголизатов возбудителей бактериальной дизентерии: шигелл Флекснера 1,2,3,4,6- типов и шигелл Зонне
Интести-бактериофаг жидки – смесь стерильных фильтратов фаголизатов шигелл Флекснера 1,2,3,4,6-го серовариантов, шигелл Зоне; сальмонелл паратифа А, паратифа В, тифимуриум, инфантис, холерасуис, ораниенбург, энтеритидис; наиболее распространенных серовариантов кишечной палочки, протеус вульгарис и мирабилис, энтерококков, стафилококков, псевдомонас аеругиноза. Применяется для лечения кишечных инфекций.
Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл. Получены из крови животных, иммунизированных определенными видами шигелл. Используются в бактериологическом методе для идентификации чистых культур.
Дизентерийный диагностикум. Состоит из взвеси убитых бактерий Флекснера и Зоне. Используется в серологическом методе.
Дизентерийный эритроцитарный диагностикум состоит из взвеси эритроцитов, нагруженных антигенами Флекснера, Зоне и др. используются для постановки РПГА в серологическом методе.
Цель. Изучить этиологию, эпидемиологию и патогенез брюшного тифа, паратифов и ПТИ. Овладеть основными методами лабораторной диагностики брюшного тифа, паратифов, и оценки результатов исследований. Научиться практически решать вопросы по специфической профилактике брюшного тифа.
По последней классификации отмечают два вида сальмонелл: 1)Salmonella bogori содержит 10 очень редких сероваров; 2)Salmonella choleraesuis включает 2500 сероваров. Диагностическим лабораториям рекомендовано внутри рода Salmonella использовать названия сероваров, например: Salmonella typhi или Salmonella typhimurium. Природный резервуар сальмонелл – человек, животные и птицы. Основной путь передачи – водный и пищевой. Сальмонеллы высокоустойчивы в окружающей среде: в питьевой воде – до 120 суток, в комнатной пыли – до 560 суток, в замороженном мясе – до 13 месяцев. Сальмонеллы имеют сложную антигеннюую структуру: в соответствии с содержанием тех или иных О-АГ сальмонеллы разделяют на серологические группы, обозначаемые арабскими цифрами. По Н-АГ микроорганизмы делят на серовары, Vi-АГ – фактор вирулентности. При идентификации сальмонелл принимают во внимание 3 антигена: О, Н и Vi. Этот принцип положен в основу диагностической антигенной схемы Кауфмана-Уайта. Типичную клиническую картину брюшного тифа и характерные патологоанатомические изменения вызывают как брюшнотифозные бактерии, так и бактерии паратифа А и В. Остальные сальмонеллы вызывают заболевания с синдромом гастроэнтероколита.
Для лабораторной диагностики сальмонеллезов используют оба принципа:
1) обнаружение возбудителя – метод бактериологический;
2) обнаружение специфических изменений – метод серологический;
Самостоятельная практическая работа
Цель. Провести бактериологический и серологический методы диагностики брюшного тифа, паратифов.
Задача. В инфекционную больницу поступила женщина на 6-й день болезни. для подтверждения диагноза был сделан посев крови, мочи, испражнений больной для выделения чистой культуры. Поставлена серологическая реакция с сывороткой больной. Учтите результаты исследований, оформите протокол.
Бактериологический метод диагностики
Выделение и идентификация чистой культуры.
1-й этап. Посев материала. Материал для исследования в зависимости от условий задачи может быть различным: кровь, испражнения, моча. Кровь больного берется на первой неделе болезни в количестве 5-10 мл стерильно из локтевой вены и засевается у постели больного во флаконы с 50-100 мл 10-20% желчного бульона. Испражнения и мочу засевают на среду Плоскирева, висмут-сульфит агар и залить средами обогащения: магниевую среду и селенитовый бульон.
2-й этап. Выделение чистой культуры. Через сутки делается посев петлей с желчного бульона на среды Плоскирева и висмут-сульфит агар для выделения чистой культуры. Из чашки со средой Плоскирева петлей откалывают типичную для сальмонеллезных палочек бесцветную колонию на трехсахарный (Олькеницкого, Клиглера) агар. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С на сутки.
3-й этап идентификация чистой культуры:
а) морфологические свойства;
Положительная реакция агглютинации с одной из О-сывороток позволит определить групповую принадлежность выделенной культуры сальмонелл по таблице Кауфмана, после чего с соответствующими данной группе Н-монорецепторными сыворотками определяется серовар культуры.
Исследование выделенной культуры заканчивается определением фаготипа микроорганизмов. С этой целью выделенную культуру сеют на питательную среду и наносят петлей на засеянную поверхность брюшнотифозные фаги различных типов. Лизис культуры вызывается определенным фагом, что соответствует фаготипу культуры.
Серологический метод диагностики брюшного тифа. РНГА.
Ставиться по стандартной схеме в плашках или пробирках.
Выделение чистой культуры и её идентификация
Исследуемый материал | Среда для посева | Характеристика колоний по цвету | Идентификация чистой культуры | |
Морфология | Подвижность | Биохимические свойства | Антигенные свойства | Вид культуры и фаготип |
Лактоза | Глюкоза | Сероводород | О-сыворотки | Н-сыворотки |
Диагностикум | Разведение сыворотки | |||
1/100 | 1/200 | 1/400 | 1/800 | К |
Брюшнотифозный Паратифозный А S.typhimirium |
Цель. Провести исследования для диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.
Задача. Больной перенес брюшной тиф. Перед выпиской из стационара он был обследован для выявления бактерионосительства: возбудитель обнаружен в испражнениях, из мочи и желчи микроорганизмы не выделены. Проведен серологический метод диагностики: поставлена реакция Vi-гемагглютинации. Учтите результат. Оформите протокол.
Для серологического метода использованы ингредиенты: сыворотка больного, эритроцитарный Vi-диагностикум, физиологический раствор.
Диагностикум | Разведение сыворотки | ||
1/20 | 1/40 | 1/80 | К |
Vi-эритроци тарный |
Цель. Изучить специфические препараты для диагностики сальмонеллезных инфекций.
Из аннотации по теме «Микробиология брюшного тифа » внести в протокол перечень специфических диагностических препаратов.
Название препарата | Состав | К какой группе диагностических препаратов относится | Практическое использование | Максимальное и минимальное разведение сывороток |
Аннотация К лечебно-профилактическим и диагностическим препаратам по теме «Микробиология брюшного тифа».
Вакцина брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном.
Вакцина брюшнотифозная Vi-полисахаридная.
Интести бактериофаг жидкий.
Люминисцирующаю брюшнотифозная сыворотка.
Адсорбированные агглютинирующие сыворотки.
Эритроцитарный сальмонеллезный диагностикум
Тема:Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций.
Цель. Изучить этиологию, эпидемиологию и патогенез пищевых токсикоинфекций (далее ПТИ). Овладеть основными методами лабораторной диагностики ПТИ и оценки результатов исследований.
Теоретическая справка. К пищевым отравлениям микробной природы относятся острые системные заболевания, возникающие в результате употребления пищевых продуктов, массивно обсемененных некоторыми микроорганизмами или зараженных микробными экзотоксинами. Это определение позволило подразделить все пищевые отравления, связанные с микроорганизмами, на пищевые токсикоинфекции и интоксикации. Первые вызывают преимущественно грамотрицательные бактерии, среди которых энтеробактерии занимают первое место. При этом название токсикоинфекции определяется поступлением в кровь бактериального эндотоксина (ЛПС), освобождающегося в большом количестве после массивного разрушения бактерий. Пищевые продукты, содержащие экзотоксины бактерий, вызывают пищевые интоксикации, а токсины грибов микотоксикозы.
Наиболее распространенными возбудителями пищевых токсикоинфекций являются сальмонеллы, реже E.coli, P.vulgaris, P.morganii, Bacillus cereus.
Патогенез и клиническая картина ПТИ определяются проникновением в желудочно-кишечный тракт большого количества соответствующих бактерий с зараженными пищевыми продуктами (мясо, рыба), подвергшимися недостаточной термической обработке. При этом сохранившие жизнеспособность бактериальные клетки быстро размножаются в благоприятных условиях. Одновременное проникновение в кишечник человека массивной дозы возбудителя, его последующее размножение и разрушение бактериальных клеток приводит к освобождению большого количества эндотоксина, оказывающего воздействие на интрамуральный нейрорецепторный аппарат тонкой кишки, периферические сосуды брюшной полости. Это сопровождается нейродистрофическими изменениями в стенке тонкой кишки и поражением клеток других органов. При ПТИ освобождение желудочно-кишечного тракта от возбудителей во многих случаях происходит достаточно быстро, иногда через несколько часов после начала заболевания. Бактериемия при этих заболеваниях как правило не наступает..
Лабораторная диагностика проводится бактериологическим методом, Материалом для исследования являются испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка больных людей и остатки пищи и продуктов, из которых лона была приготовлена.
Пищевые интоксикации бактериальной природы возникают также при попадании с пищей в желудочно-кишечный тракт бактериальных токсинов, из которых наибольшую опасность представляют энтеротоксины Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens и особенно ботулонейротоксин C. Botulinum. Для возникновения пищевой интоксикации не обязательно присутствие в продукте живых возбудителей.
Микробиологическая диагностика пищевых отравлений проводится методом выявления токсинов, а также выделения чистых культур возбудителя – продуцентов токсинов в остатках пищи и в материале, взятом от больного.
Бактериологическая диагностика токсикоинфекций, вызванных сальмонеллами, эшерихиями и протеем.
Материалом для исследования являются испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, остатки пищевых продуктов – возможные факторы передачи инфекции.
1этап Производится посев материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфит агар) для выделения чистой культуры сальмонелл или эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным агаром.
2 этап. После инкубации посевов при температуре 37°С в течение 20 – 24 ч. отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие «ползучего» роста, характерного для протея, в пробирке со скошенным агаром. Подозрительные колонии пересевают на трехсахарный агар для получения чистой культуры и одновременно ставят с ними реакцию агглютинации на стекле, используя смесь диагностических сывороток к разным сероварам сальмонелл.
3 этап. С выросшей культуры на трехсахарном агаре делают мазок и определяют чистоту выделенной культуры, ставят реакции агглютинации с групповыми О сыворотками и монорецепторными Н- сыворотками и делают посев на среды «пестрого» ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл из организма больного и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой токсикоинфекции- факторе передачи инфекции.
На условно-патогенную микрофлоруфлору
2этап При наличии «ползучего» роста на скошенном питательном агаре из конденсационной воды петлей берут материал для приготовления препарата «висячая» капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по Граму и микроскопируют.
3 этап Производят пересев на трехсахарный агар (Клиглера, Олькеницкого) и выделяют чистую культуру протея,
4 этап определяют биохимические и другие признаки и устанавливают вид: P. vulgaris, P. mirabilis.
Оценка роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций должна быть строго аргументирована:
а) бактериологическим, серологическим, эпидемиологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры;
б) выделением идентичных штаммов условно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов;
в) нарастанием титров реакции агглютинации с аутоштаммами возбудителей в динамике заболевания.
Лабораторная диагностика пищевых интоксикаций бактериальной природы
1. Материалом для определения стафилококкового энтеротоксина являются рвотные массы, промывные воды желудка больных, остатки пищи (чаще кремы, сметана, мороженое, а также мясные продукты, в которых хорошо размножаются стафилококки).
С целью выделения чистой культуры стафилококка исследуемые материалы, которые могут содержать жизнеспособные бактерии, засевают в чашки с ЖСА.
Для эпидемиологического анализа массовых стафилококковых интоксикаций проводят фаготипирование выделенных культур с помощью набора стафилококковых фагов.
2. Материалом для выявления энтеротоксина клостридий С. perfringens являются мясные, рыбные консервы и другие продукты, из которых экстрагируют токсин изотоническим раствором хлорида натрия. Экстракт центрифугируют и надосадочную жидкость вводят внутрибрюшинно белым мышам или внутрикожном морским свинкам. Гибель животных в течение первых 3-4 дней появление некроза на месте внутрикожных инъекций свидетельствует о наличии токсина. Для его идентификации ставят реакцию нейтрализации с антитоксическими сыворотками С. perfringens.
Выделение чистой культуры С. perfringens и С. botulinum производят, используя методы выделения анаэробных бактерий.
3. Материалом для выявления ботулотоксина служат сыворотка крови, моча, испражнения, промывные воды желудка больного, остатки пищи или подозреваемые продукты (колбасы, мясные, рыбные, фруктовые, овощные консервы и др.). Для обнаружения ботулотоксина в сыворотке крови больного ставят реакцию нейтрализации таксина антитоскической сывороткой в биопробе на белых мышах. (с , моновалентными антитоксическими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е. F,C В качестве контроля берут нормальную сыворотку крови. При нейтрализации токсина гомологичной антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.
Дата добавления: 2013-12-13 ; Просмотров: 2647 ; Нарушение авторских прав? ;
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
источник
• Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: исходя из особенностей патогенеза брюшного тифа, на 1-й неделе заболевания, в период бактериемии, возбудителей выделяют из крови (получение гемокультуры), со 2-й недели заболевания — из испражнений (получение копрокультуры), мочи или желчи.
Бактериологическое исследование(схема 13.2.1).
Получение гемокультуры. В 1-й день из локтевой вены больного берут 5—10 мл крови и засевают в колбу с 50—100 мл селективной среды Раппопорт, содержащей желчный бульон (для подавления роста других бактерий), глюкозу, индикатор Андреде и поплавок для обнаружения газа. Указанные соотношения крови и среды необходимы для подавления бактерицидного действия белков крови. Посевы инкубируют при 37 «С в течение 18—20 ч. На 2-й день при росте сальмонелл наблюдается помутнение и изменение цвета среды. При росте паратифозных бактерий (биовары paratyphi А, Си schottmuelleri) наряду с указанными изменениями появляются пузырьки газа в поплавке. Для ускорения ответа из среды Раппопорт делают мазки и препараты «висячая» капля. При наличии чистой культуры грамотрицательных подвижных палочек и изменении цвета среды (или наличии газа) дают первый предварительный ответ. Затем культуру из среды Раппопорт пересевают в пробирку со средой Ресселя, полагая при этом, что из крови выделена чистая культура и можно сразу приступить к ее идентификации. Одновременно со среды Раппопорт делают посевы на среду Эндо для получения изолированных колоний с целью проверки чистоты выделенной культуры.
На 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Ресселя и ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. На основании полученных данных дают второй предварительный ответ. Для дальнейшего исследования отбирают несколько бесцветных колоний со среды Эндо и пересевают их в среду Ресселя или скошенный питательный агар (для контроля полученных результатов). Чистую культуру пересевают на среды «пестрого» ряда и серотипируют в реакции агглютинации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с
адсорбированными монорецепторными О- и Н-сальмонеллез-ными сыворотками. Окончательный диагноз устанавливают на основании биохимических (табл. 13.2.1) и антигенных свойств.
Таблица 13.2.1. Биохимические свойства сальмонелл — возбудителей брюшного тифа и паратифов
Биовар S.enterica | Ферментация | Образование | |||||
лактозы | глюкозы | мальтозы | сахарозы | ман-нита | H2S | NH3 | индола |
Paratyphi А — КГ КГ — КГ — —
Schottmuelleri — КГ КГ — КГ + +
Условные обозначения: К — образование кислоты; КГ — образование кислоты и газа; (+) — обнаружение признака; (—) — отсутствие признака.
Биохимические признаки (развернутый «пестрый» ряд) позволяют дифференцировать сальмонеллы от схожих сними энтеробактерий: Citrobacter, Hafnia (табл. 13.2.2).
Таблица 13.2.2. Дифференциация сальмонелл и других энтеробакте рий по биохимическим признакам
Род | Лизин- декар- бокси- лаза | Ферментация углеводов | р- Галак-този-даза | ||
дуль-цита | сорбита | ксилозы | рам-нозы | салицина | 4% лактозы |
Citrobacter — К(-) К К К К(±) К(±) К
Hafnia + — — К К К(+) — К
Условные обозначения: (+) — положительная реакция; (—) — отрицательная реакция; ± — вариабельная реакция; К — образование кислоты; К(—) — образование кислоты (редко); К(±) — образование кислоты (вариабельно).
Выделенную чистую культуру бактерий используют для определения чувствительности к антимикробным препаратам.
Фаготипирование. С помощью набора стандартных Vi-фагов определяют до 78 фаготипов S.enterica биовара typhi. При этом необходимым условием является наличие в культуре FZ-антигена. Культуры S.enterica биовара paratyphi В (schottmuelleri) дифференцируются на11 фаготипов и подтипов.
Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо или Левина) или элективные среды обогащения (Мюллера, селени-
товая или висмут-сульфит агар). Для посева петлю фекалий вносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия и готовят суспензию. После оседания крупных комочков суспензию петлей наносят на поверхность агаровой среды — на одну половину чашки. Материал тщательно растирают шпателем по одной, а затем по другой половине чашки для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18—20 ч. На 2-й день изучают характер колоний, выросших на чашках (рис. 13.2.1; на вклейке), пересевают 2—3 бесцветные колонии (со среды Эндо или Левина) или колонии черного цвета (висмут-сульфит агар) на среду Ресселя и в пробирки со скошенным питательным агаром. При отсутствии подозрительных колоний на чашках делают высевы из среды Мюллера или селенитовой среды на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Для ускорения ответа ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с материалом, взятым из бесцветной колонии. Далее поступают так же, как и при идентификации гемокультуры.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика. Влабораторной практике широко применяют развернутую реакцию агглютинации Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей антител — агглютининов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Реакцию ставят одновременно с четырьмя антигенами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяют для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела появляются на 1-й неделе, накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются в разгар заболевания, накапливаются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. У людей, вакцинированных против брюшного тифа и парати-фов, также наблюдается положительная реакция Видаля, причем в довольно высоком титре, поэтому «инфекционный Ви-даль» удается отличить от «прививочного» только по нарастанию титра агглютининов у больных в процессе заболевания. Реакцию Видаля ставят в четырех рядах пробирок по 7 пробирок в каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные. Для контроля каждого диагностикума в пробирки вносят по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в который добавляют 2 капли диагностикума. В контрольной пробирке с
1 мл сыворотки (без диагностикума) не должно быть хлопьев. При спонтанной агглютинации реакция не учитывается. Диагностический титр реакции Видаля равен 1:200. Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию непрямой И-гемаг-глютинации, с помощью которой в сыворотке крови людей определяют присутствие антител к К/-антигену. В качестве антигена используют эритроцитарный Р?-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека 1(0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Fz’-антиге-ном S.enterica биовара typhi. Готовят разведения испытуемой сыворотки от 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубренными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательной реакции, так же как и в контроле, эритроциты осаждаются на дно пробирки и имеют виддиска с ровными краями («пуговки»). Диагностическое значение имеет титр пассивной Й-гемагглютинации, начиная с 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови у которых дает положительный результат в РНГА с эритроцитарным F/f-диагностикумом, рассматривают как подозрительных на носительство S.enterica биовара typhi и подвергают многократному бактериологическому обследованию.
• Микробиологическая диагностика сальмонеллезов
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ: микробиологическая диагностика сальмонеллезов принципиально не отличается от диагностики брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика не применяется по причине большого числа сероваров возбудителей.
• Микробиологическая диагностика кишечного иерсиниоза
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, при генерализованной форме — кровь, моча, спинномозговая жидкость.
МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:
Бактериологическое исследование.Посев материала на дифференциально-диагностические (среда Эндо, Мак-Конки, СБТС-агар с желчью и бромтимоловым синим) и селективные (CIN-arap с антибиотиками цефсулодином и новобиоцином) плотные среды или жидкие среды обогащения (буферно-казе-иново-дрожжевой бульон, 1 %, пептонная вода с рН 7,6—7,8). Посевы инкубируют при 25 «С в течение 24—48 ч. Идентификация чистой культуры осуществляется на основании морфологии, подвижности, тинкториальных свойств (грамотрица-
тельные палочки с закругленными концами и характерным биполярным окрашиванием, неспорообразующие, перитрихи), культуральных, биохимических признаков.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика.Диагностическое значение имеет обнаружение антител к поверхностным антигенам возбудителей наиболее распространенных серотипов (03, 04, 05, 06, 08, 09) в РА. Положительной считается РА в титре не менее 1:160. Разработаны также ИФА-тесты.
• Микробиологическая диагностика кишечного дисбактериоза
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование.Имеет ориентировочное значение. При резко выраженном дисбактериозе в мазках преобладают микроорганизмы определенных видов (например, дрожжеподобные грибы, стафилококки и др.) на фоне существенного уменьшения грамотрицательной микрофлоры.
Бактериологическое исследование.Проводится количественное исследование состава микрофлоры кишечника. Для этого из исследуемого материала готовят разведения Ю -2 , 10 -4 , Ю -6 и т.д. Первичные посевы по 0,1 мл каждого разведения производят параллельно на несколько питательных сред (Эндо, кровяной агар, ЖСА, агар Сабуро и др.) и инкубируют при 37 °С. Подсчитывают число выросших колоний и определяют число КОЕ в 1 г материала. Проводят отсев 2—3 колоний каждого вида для выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов.
Дляобнаружения анаэробных Bifidobacterium spp. делают мерные посевы материала в разведениях 10″ 7 и выше в пробирки с 13—15 мл модифицированной среды Блаурокка, в состав которой входит печеночный бульон, пептон — 1 %, лактоза — 1 %, хлорид натрия — 0,5 %, цистин — 0,01 %, агар-агар — 0,75%, твин-80 — 0,1 %. При росте Bifidobacterium spp. через 24—48 ч происходит помутнение всей среды с образованием тяжей или отдельных колоний. Готовят мазки и окрашивают по методу Грама. Выделение чистых культур Bifidobacterium spp. является весьма трудоемким и практически необязательным. При необходимости идентификацию представителей рода осуществляют по биохимическим свойствам.
Для оценки результатов бактериологического исследования
сопоставляют полученные данные с количественным содержанием микроорганизмов в норме. Ориентировочные критерии нормальной микрофлоры толстой кишки представлены в табл. 13.2.3.
Таблица 13.2.3. Критерии нормы кишечной флоры
Патогенные микробы сем. Enterobacteriaceae О
Общее количество E.coli, млн/г 300—400
E.coli со слабовыраженными ферментативными
свойствами, % До 10
E.coli с гемолитическими свойствами, % Нет
Энтеробактерии (лактозоотрицательные и лактозополо
жительные): Hafnia, Aerobacter, Citrobacter, Klebsiella,
Serratia, % До 5
Гемолитический стафилококк по отношению ко
всем кокковым формам, % Нет
Bifidobacterium spp. (рост при посеве разведения) 10 и выше
Бактерии рода Proteus Нет
При кишечном дисбактериозе происходит значительное снижение облигатной анаэробной микрофлоры, и в первую очередь Bifidobacterium spp., а также увеличение аэробных видов, в частности E.coli, содержание которых может превышать 10 11 микробных клеток в 1 г испражнений. Увеличивается частота обнаружения штаммов E.coli со слабой ферментацией лактозы и имеющих гемолитические свойства (до 30—40 %), гемолитических и негемолитических стафилококков, бактерий рода Proteus, грибов рода Candida (до 15—16 %). У лиц с дис-бактериозами более часто обнаруживают лактозоотрицательные и лактозоположительные энтеробактерии, относящиеся к родам Hafnia, Aerobacter, Citrobacter. Для микроорганизмов, в норме отсутствующих в испражнениях или имеющихся в небольшом количестве, показателем дисбактериоза будет содержание их 10 5 —10 6 и выше КОЕ в 1 г материала (Proteus spp., Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida spp.). Для окончательного заключения о кишечном дисбактериозе важное значение имеет повторное его выявление в динамике обследования больного.
• Диагностические, профилактические и лечебные препараты
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Лучшие изречения: Для студентов недели бывают четные, нечетные и зачетные. 9181 — | 7343 — или читать все.
193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.
Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно
источник