Меню Рубрики

Вакцины против бруцеллеза штамм rev

ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ инструкция по применению

Масса сухая аморфная, серо-белого цвета с коричневатым оттенком, без посторонней примеси и плесени; при регидратации образуется гомогенная взвесь в течение 2-3 мин.

ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ
1 мл
лиофилизированная живая культура вакцинного штамма Brucella melitensis Rev.1

Вспомогательные вещества: сахарозо-желатиновая среда.

Расфасована по 1-5 или 10-20 мл в стеклянные флаконы вместимостью соответственно 10-20 мл или 30-100 мл, укупоренные резиновыми пробками в атмосфере азота или аргона и обкатанные металлическими колпачками или по 1-2 мл в ампулы вместимостью 3-6 мл, запаянные под вакуумом. На флаконы (ампулы) с вакциной наклеивают этикетки с указанием названия организации-производителя, названия вакцины, количества доз вакцины во флаконе (ампуле), номера серии и номера контроля, окончания срока годности (месяц, год) и обозначения СТО. Флаконы (ампулы) упаковывают в картонные коробки с разделительными перегородками, обеспечивающими их неподвижность и целостность.

На каждую коробку с вакциной наклеивают этикетку с указанием названия организации-производителя, ее товарного знака, адреса, номера телефона, полного названия вакцины, количества флаконов (ампул) вакцины в коробке и доз вакцины во флаконе (ампуле), номера серии и номера контроля, даты изготовления (месяц, год), окончания срока годности (месяц, год), условий хранения, надписи «Для животных», обозначения СТО. На этикетку может быть нанесена дополнительная информация. В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению вакцины.

Свидетельство о регистрации № ПВР-1-1.3/01225 от 11.12.06

Вакцина против бруцеллеза овец и коз и инфекционного эпидидимита баранов. Вакцинный штамм Brucella melitensis Rev-1 (Strain Rev-1 vaccine) в S-форме обладает выраженными антигенными и иммуногенными свойствами для овец и коз и не передается от животного к животному.

Иммунитет у животных формируется на 21 сутки после введения вакцины и сохраняется не менее 2 лет. Наличие специфических поствакцинальных антител регистрируется в сыворотке крови молодняка в течение 12 мес, взрослых животных — на протяжении 2 лет.

Показания к применению препарата ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1 ЖИВАЯ СУХАЯ

— иммунизация овец и коз против бруцеллеза и баранов против инфекционного эпидидимита в хозяйствах всех форм собственности в субъектах РФ неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота.

Вакцину вводят животным п/к в бесшерстное место за локтевым суставом в объеме 2 мл.

Вакцину перед применением регидратируют разбавителем для сухих бруцеллезных вакцин или стерильным физиологическим раствором с соблюдением правил асептики. Разбавитель (физиологический раствор) вносят в стерильный флакон в расчетном количестве, исходя из того, что объем одной иммунизирующей дозы вакцины составляет 2 мл. Например, если во флаконе (ампуле) содержится 120 доз вакцины, то требуемое количество разбавителя составит 240 мл (120 доз ×2 мл = 240 мл).

Пробку флакона (шейку ампулы) обрабатывают ватным тампоном, смоченным 70% раствором этилового спирта (спиртовым тампоном). В шприц с иглой набирают отмеренный разбавитель в объеме в 2 раза превышающем объем вакцины, содержащейся во флаконе (ампуле). Разбавитель вносят во флакон проколов иглой резиновую пробку; в ампулу — отломив ее верхнюю часть в области шейки. Флакон (ампулу) осторожно встряхивают до получения гомогенной суспензии. Разведенную вакцину переносят шприцем с иглой во флакон с оставшимся разбавителем. Вакцину защищают от воздействия прямого солнечного света и применяют через 30 мин и в течение не более 4 ч после разведения.

Для вакцинации каждого животного используют стерильную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время вакцинации допускается стерилизация игл путем обработки спиртовым тампоном. Место введения вакцины обрабатывают спиртовым тампоном, или тампоном, смоченным 0.5%-ным раствором фенола.

Вакцинация овец и коз против бруцеллеза

Вакцину применяют в хозяйствах неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота, а также в благополучных хозяйствах в случае угрозы заражения животных бруцеллезом.

Ярок и козочек благополучных (в случае угрозы заражения бруцеллезом) и неблагополучных по бруцеллезу хозяйств вакцинируют в возрасте 3-5 месяцев или за 2 месяца до осеменения без предварительного исследования на бруцеллез.

Овец и коз в благополучных по бруцеллезу хозяйствах вакцинируют в случае угрозы заражения животных бруцеллезом без предварительного исследования на бруцеллез за 2 месяца до осеменения. Ревакцинируют животных не ранее чем через 12 месяцев и далее ежегодно или 1 раз в 2 года до исчезновения угрозы заражения, но не более чем в течение 6 лет.

В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах овец (коз), положительно реагирующих при серологическом исследовании, или с клиническими признаками бруцеллеза, сдают на убой. Оставшееся поголовье, а также овец (коз), ранее иммунизированных вакциной из штамма Вrucella abortus 19, иммунизируют вакциной из штамма Rev-1 в течение 6 лет ежегодно или 1 раз в 2 года. Допускается однократная иммунизация баранчиков.

После принятия решения о прекращении иммунизации, овец и коз исследуют на бруцеллез в РА и РСК (РДСК) по истечении 2 лет с момента последнего введения вакцины. При получении двух подряд отрицательных результатов исследований, проведенных с интервалом не менее 30 дней, отсутствии случаев острого заболевания животных бруцеллезом и проведения комплекса мероприятий, предусмотренных действующими нормативными документами по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных хозяйство считают благополучным по бруцеллезу.

Вакцинация баранов против инфекционного эпидидимита (ИЭБ) и маточного поголовья овец против инфекционной болезни, вызываемой Вrucella ovis.

Вакцину применяют в неблагополучных по ИЭБ хозяйствах.

Вакцинируют баранов , не реагирующих на бруцеллез при серологическом исследовании в РА и РСК (РДСК) или РИГА и на инфекционный эпидидимит баранов — в РДСК, только 1 раз в возрасте 3-8 месяцев. Допускается вакцинация ярок в возрасте 3-5 месяцев или за 2 месяца до осеменения без предварительного исследования на обе болезни.

Запрещается вакцинировать баранов старше 8 месяцев и предназначенных для племенного дела.

Вакцинированных баранов и маточное поголовье овец с целью исключения ИЭБ и инфекционной болезни, вызываемой Вrucella ovis, исследуют в РДСК независимо от времени введения вакцины и на бруцеллез — в РА и РСК (РДСК) не ранее, чем через 12 месяцев после вакцинации.

Перед использованием в случной кампании баранов исследуют на бруцеллез и на ИЭБ в обязательном порядке.

С целью оздоровления хозяйств, неблагополучных по ИЭБ, всех баранов исследуют серологически через каждые 30 дней. Животных, положительно реагирующих по результатам каждого исследования, сдают на убой. После получения двух подряд отрицательных результатов животных оставляют под контрольным наблюдением на 6 мес., в течение которого исследуют 3 раза с интервалом в 3 мес.

При получении отрицательных результатов исследования в течение контрольного наблюдения и отсутствии у животных клинических признаков болезни хозяйство признают благополучным по ИЭБ, а баранов используют для воспроизводства.

Противопоказания к применению препарата ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1 ЖИВАЯ СУХАЯ

— животных низкой упитанности, клинически больных, суягных;

— при вспышке у животных в хозяйстве острой инфекционной болезни;

— животных в племенных хозяйствах и предприятиях по искусственному осеменению, предназначенных к продаже для племенных целей.

Вакцинированных (ревакцинированных) животных метят краской или другими средствами.

При проведении вакцинации не применяют в лечебных и профилактических целях следующие антибиотики:

— бензилпенициллин, эритромицин, олеандомицин — за 1 сутки до вакцинации;

— хлортетрациклин, окситетрациклин, тетрациклин, левомицетин, полимиксин — за 3 суток до вакцинации;

— стрептомицин, канамицин, неомицин — за 7 суток до вакцинации;

— бициллин — за 6 суток до вакцинации;

— дитетрациклин — за 25 суток до вакцинации;

— дибиомицин — за 30 суток до вакцинации;

— любые антибиотики — в течение 15 суток после вакцинации.

Продукцию от животных, убитых после вакцинации, используют без ограничений.

Вакцинировать животных разрешается ветеринарным специалистам. При вакцинации следует соблюдать правила личной гигиены, принятые при работе с лекарственными средствами.

Вакцину, попавшую на кожу или слизистые оболочки ветеринарного или технического специалиста, смывают водой с мылом; немедленно обрабатывают: кожу — 70% раствором этилового спирта; слизистые оболочки — раствором тетрациклина или хлортетрациклина (100-200 мг/мл). При отсутствии антибиотиков в глаза вводят несколько капель 1% раствора азотнокислого серебра, в нос — 1% раствор протаргола, рот и горло прополаскивают 70% раствором этилового спирта. В случае аутовакцинации место укола обрабатывают 70% раствором этилового спирта и 1-2% спиртовым раствором бриллиантового зеленого, специалиста направляют в медицинское учреждение для диспансерного наблюдения.

Вакцинацию животных каждого хозяйства, оформляют актом, в котором указывают: название населенного пункта, хозяйства или Ф.И.О. владельца, количество, номера, пол и возраст вакцинированных животных, дату вакцинации, название вакцины и организации-производителя, номера серии, даты изготовления, окончание срока годности и количества израсходованной вакцины. Один экземпляр акта направляют главному ветеринарному врачу района, другой хранится в хозяйстве (у владельца животных) или на ветеринарном участке.

Вакцину с измененным внешним видом, посторонней примесью, плесенью, нарушением целостности или укупорки флаконов (ампул), отсутствием маркировки или по истечении срока годности использовать запрещено.

Неизрасходованную разведенную вакцину, флаконы (ампулы) из-под вакцины, шприцы и иглы, использованные для вакцинации, подвергают кипячению в течение 30 минут.

Условия хранения ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ

Вакцину следует хранить в сухом, темном, недоступном для детей месте при температуре от 2° до 10°С.

Вакцину транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с ОСТ 08064-19-07 и правилами перевозок скоропортящихся грузов и багажа, действующих на данном виде транспорта. Допускается перевозка вакцины при любой минусовой температуре или +20°С не более 7 суток.

источник

Вакцинный итгамм Rev-1 получен в Калифорнии Эльбергом и Фаунце (Elberg a. Faunce, 1957) путем отбора стрептомициноустойчивых вариантов из культуры Br. melitensis.

Аттенуированный штамм был ими использован в качестве живой вакцины против бруцеллеза коз. Затем Альтон и Джонс (Alton a. Jones, 1967) описали лабораторные методы дифференциации вакцинного штамма Rev-1 от эпизоотических штаммов бруцелл вида melitensis и другие его свойства.

По данным Альтона (1967), вакцинный штамм Rev-1 на твердых средах растет в виде более мелких колоний в сравнении с полевыми штаммами Br. melitensis. Он более чувствителен к тионину, основному фуксину, а также к пенициллину, но значительно резистентнее к стрептомицину.

Вакцина из штамма Rev-1 широко испытывается в производственных и лабораторных условиях в разных странах мира. Обобщение первых опытов по изучению этой вакцины было представлено в 4-м объединенном докладе Комитета экспертов ФАО/ВОЗ в 1969 г.

В опытах, проведенных в Иране, на о. Мальта и других районах, установлено, что иммуногенные свойства живой вакцины из штамма Rev-1 довольно высоки против бруцеллеза овец и коз.

В некоторых опытах проводилось сравнение иммуногенности живой вакцины из штамма Rev-1 с убитой (адъювант-вакциной) и с вакциной из штамма № 19. В этих опытах вакцина из штамма № 19 вызывала образование лишь слабого иммунитета или оказывалась вовсе неиммуногенной. Адъювант-вакцина вызывала сильные местные реакции, но была иммуногенной.

Альтон (1967) указывает, что, вне всяких сомнений, вакцину из штамма Rev-1 обладает высокой иммунизирующей способностью против бруцеллеза овец и коз, вызванного Br. melitensis. Но прежде чем начать ее применение в полевых условиях в какой-либо определенной стране, нужно учитывать следующее. Вакцина из штамма Rev-1 вызывает у прививаемых животных образование положительных серологических реакций РА и РСК, что может затруднить дифференциацию привитых вакциной животных от больных бруцеллезом.

При введении вакцины из штамма Rev-1 беременным животным даже в начальный период беременности у них возникают аборты. Кроме того, были зарегистрированы случаи, когда козы, привитые в период лактации, выделяли вакцинный штамм с молоком.

Патогенность штамма Rev-1 была проверена на обезьянах. Обезьяны типа cynomolqus в опытах Эльберга (1964) заражались после скармливания им молока, содержащего в общей сложности 10 10 микробных клеток штамма Rev-1.

Паппаджианис, Эльберг, Гроуч (Pappagianis, Elberg, Grouch, 1966) изучали безвредность вакцины из штамма Rev-1 для людей на волонтерах. Ввиду того, что вакцинный штамм вызывал у людей заболевание бруцеллезом, вакцина из штамма Rev-1 не была рекомендована авторами для практических целей.

Альтон (1970) считает, что указанные выше нежелательные свойства вакцины могут быть устранены, если вакцинацию животных проводить в период их небеременного состояния. Однако, по его же данным, козлята, родившиеся в неблагополучных по бруцеллезу отарах, являются скрытыми бруцеллоносителями в близких и отдаленных сроках после рождения. Так, например, у 11 коз из этой группы в первые 2 мес после рождения не были обнаружены противобруцеллезные антитела, однако у 8 из них после убоя были выделены культуры Br. melitensis. У коз более старшего возраста из неблагополучных по бруцеллезу отар (естественно инфицированные) бруцеллезную инфекцию устанавливали либо серологически, либо путем выделения культуры Br. melitensis. У одной из 6 коз в 8-месячном возрасте была выделена культура Br. melitensis.

Появление в организме антител на 3-м месяце и в последующие месяцы жизни коз автор объясняет инфицированием их Br. melitensis. Из 5 коз, которых исследовали 4 раза в месяц по РА, РСК и меркаптоэтанолметоду в течение 12 мес после рождения, не было ни одной козы, у которой бы в возрасте старше 2 мес не проявилась в каком-либо титре одна или несколько из названных реакций.

В связи с тем, что живая вакцина из штамма Rev-1 часто вызывает аборты при вакцинации ею беременных коз и может обусловить выделение микробных клеток вакцинного штамма Rev-1 с молоком в случае вакцинации лактирующих коз, Альтон провел опыты с применением уменьшенных доз живой вакцины для прививок беременным

и небеременным козам. Оказалось, что при использовании прогрессивно уменьшающегося числа микробных клеток в прививаемой дозе вакцины у беременных коз соответственно уменьшалось число абортов, а у лактирующих — количество микробных клеток штамма Rev-1 в молоке.

Автор считает, что вакцина в дозе 5 * 10 4 микробных клеток штамма Rev-1 не вызывает абортов у беременных и выделения микробных клеток штамма Rev-1 с молоком у лактирующих коз. Однако степень защиты привитых животных вакциной в этой дозе оказалась более низкой, чем при вакцинации коз полной дозой, составляющей 10 9 микробных клеток штамма Rev-1.

В дальнейшем Джонс, Гарсиа Карилло, Френчи, Альтон (Jones, Garcia Carillo, Frenchi, Alton, 1972) провели изучение живой, но ослабленной вакцины из штамма Rev-1 Br. melitensis и убитой адъювант-вакцины из штамма 45/20 Br. abortus.

Авторами изучалась способность указанных вакцин в малых дозах предохранять суягных взрослых коз от заражения Br. melitensis.

Оказалось, что вакцина из штамма Rev-1 в малых и больших дозах вызывает сходный защитный эффект, тогда как адъювант-вакцина из штамма 45/20 оказалась менее эффективной.

Вакцинный иммунитет характеризовался следующими послеубойными результатами бактериологических исследований. В группе № 1 от 5 коз, вакцинированкых большой дозой вакцины из штамма Rev-1 (10 8 микробных тел в дозе), выделено в среднем на животное 4,5 колонии. В группе № 2 от 6 коз, привитых вакциной в дозе 10 6 микробных тел штамма Rev-1, получено 14 колоний. В группе № 3 от 6 коз, вакцинированных вакциной из штамма 45/20, выделено 105 колоний. От невакцинированных 8 коз получено в среднем 270 колоний. Следовательно, из приведенных выше данных видно, что абсолютный иммунитет ни в одном из указанных случаев не был получен, хотя вакцина из штамма Rev-1 применялась в разных дозах.

В СССР высокая иммуногенность вакцины из штамма Rev-1 была установлена в опытах, проведенных Е. С. Орловым и другими при сравнении иммуногенности 7 вакцин, а также в опытах П. С. Уласевича и других авторов.

П. С. Уласевич (1966) сообщает, что у овец, привитых вакциной из штамма Rev-1, после заражения чаще устанавливалась регионарная инфекция и реже выделялась культура заражающего штамма из внутренних органов. Автор, ссылаясь на собственные эксперименты, считает, что регионарная бруцеллезная инфекция, наблюдаемая у части зараженных животных после их вакцинации, является следствием временной задержки развития инфекции.

Комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (1971 г.) вакцина из штамма Rev-1 рекомендуется для применения в производственных условиях. По их данным, прививка ягнят в 4—6-месячном возрасте создает иммунитет, который продолжается в течение 2 беременностей. После 6 пассажей через организм беременных овец вакцина Rev-1 сохраняет свои исходные свойства.

Комитет экспертов ФАО/ВОЗ считает, что оздоровление крупных отар от бруцеллеза методом исследования овец на данное заболевание и убоя реагирующих животных достигнуто быть не может. Для мелких групп, находящихся в хороших условиях содержания, такой метод оздоровления может быть применен. Он указывает также на возможность получения здоровых ягнят от больных, но вакцинированных матерей. Комитетом предлагается следующая схема борьбы с бруцеллезом овец.

1. Применение аллергической диагностики для установления (подтверждения) бруцеллезной инфекции в отаре.

2. Замена в отарах всех инфицированных овец здоровыми животными.

3. Получение (при необходимости) здоровых ягнят от инфицированных, но привитых вакциной матерей.

4. Вакцинация овец в сильно пораженных зонах вакциной из штамма Rev-1 в следующие сроки: взрослых животных — один раз; ягнят — первый раз в 4—6-месячном возрасте, а затем ежегодно.

5. Внедрение в практику борьбы с бруцеллезом всех имеющихся способов дифференциации больных животных от здоровых, так как после применения вакцины из штамма Rev-1 в отарах остаются реагирующие на бруцеллез животные.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

источник

агропромышленного комитета СССР

ПО ПРИМЕНЕНИЮ ВАКЦИНЫ ЖИВОЙ СУХОЙ ИЗ ШТАММА РЕВ-1

БРУЦЕЛЛА МЕЛИТЕНЗИС ДЛЯ ИММУНИЗАЦИИ ОВЕЦ И КОЗ ПРОТИВ

БРУЦЕЛЛЕЗА И БАРАНОВ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА,

ВЫЗЫВАЕМОГО ВОЗБУДИТЕЛЕМ БРУЦЕЛЛА ОВИС

1.1. Вакцину из штамма Рев-1 бруцелла мелитензис применяют для профилактической иммунизации против бруцеллеза маточного поголовья овец и коз в колхозах, совхозах, других сельскохозяйственных предприятиях, занятых разведением мелкого рогатого скота, и в личных подсобных хозяйствах граждан, а также против инфекционного эпидидимита баранов, вызываемого возбудителем бруцелла овис, в комплексе мер, предусмотренных действующей инструкцией по борьбе с бруцеллезом животных.

1.1.1. Перечень автономных республик, краев, областей и районов, в которых допускается применение указанной вакцины для иммунизации животных, устанавливают главные управления (управления) ветеринарии госагропромов союзных республик.

1.1.2. Прививки животных вакциной из штамма Рев-1 разрешается проводить ветеринарным врачам и ветеринарным фельдшерам под контролем ветврача.

Главные ветеринарные врачи районов обязаны проводить обучение ветеринарных специалистов хозяйств и учреждений государственной ветеринарной сети правилам проведения прививок вакциной животных.

1.2. Сухая живая вакцина готовится из слабовирулентного штамма Рев-1 бруцелла мелитензис.

Вакцина представляет собой мелкозернистую массу светло-коричневого или серовато-желтого цвета. Выпускается в ампулах, запаянных под вакуумом и уложенных в коробки.

1.3. На каждой ампуле с вакциной должна быть надпись с указанием наименования вакцины, номера серии, срока годности и количества доз препарата. Ампулы с вакциной, не имеющие указанной надписи, а также разбитые, с трещинами, содержащие посторонние примеси или плесень, утратившие вакуум, с истекшим сроком годности препарата, упакованные в коробки без этикеток, бракуют, вскрывают и обеззараживают кипячением в течение 30 мин.

1.4. На этикетках коробок с вакциной должны быть указаны: наименование вакцины, наименование и товарный знак биопредприятия, изготовившего вакцину, номер серии и номер госконтроля, дата изготовления, срок годности, количество ампул в коробке и количество доз в ампуле, условия хранения вакцины и обозначение ТУ.

В каждую коробку должно быть вложено наставление по применению вакцины.

1.5. Вакцина в ампулах под вакуумом пригодна для применения в течение 12 мес. со дня ее изготовления при условии хранения в холодильных камерах или в темном сухом помещении при температуре 2 — 10 °С. При хранении сухой вакцины при температуре выше 10 °С качество (активность) ее не гарантируется и применение не разрешается. В жаркое время года вакцину доставляют к месту применения в термочемоданах или термосах со льдом.

1.6. Перед применением сухую вакцину разводят специальным растворителем для сухих живых вакцин против бруцеллеза. При отсутствии такого растворителя допускается использование физиологического раствора. Разведение готовят из расчета, чтобы одна прививочная доза для животных составляла 2 мл разведенной вакцины. Для этого шейку ампулы в верхней части протирают смоченной спиртом ватой и обламывают стекло. В ампулу шприцем с иглой вносят 4 мл растворителя, осторожно встряхивают до превращения массы в равномерную взвесь.

Разведенную в ампуле вакцину шприцем с длинной иглой отсасывают и переносят во флакон емкостью 500 — 1000 мл с предварительно налитым в него растворителем. С учетом жидкости, использованной для растворения вакцины, во флаконе должно быть столько растворителя, сколько требуется для приготовления необходимого количества доз вакцины в разведенном виде для прививки животных.

Растворитель (физраствор), флаконы, шприцы, иглы, используемые для приготовления вакцины к применению, должны быть стерильными.

1.7. Приготовленную для применения вакцину защищают от прямого солнечного света и используют через 30 мин. после разведения в течение не более 4 ч. Остатки разведенной вакцины уничтожают путем кипячения в течение 30 мин. Обеззараживанию кипячением подлежат также ампулы и флаконы из-под использованной вакцины, шприцы и иглы.

1.8. Вакцину животным вводят подкожно в бесшерстное место за локтевым суставом. Для прививки каждого животного используют отдельную, предварительно простерилизованную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время прививок допускается стерилизация игл путем протирания их спиртом. Место введения вакцины протирают 70-процентным этиловым спиртом или 0,5-процентным раствором фенола.

1.9. Иммунитет против бруцеллеза и инфекционного эпидидимита у животных наступает через 3 нед. и сохраняется в течение не менее 2 лет после первичной прививки их вакциной.

1.10. Запрещается проводить прививки вакциной мелкого рогатого скота в период вспышки в хозяйстве (на ферме) острой инфекционной болезни (сибирская язва, ящур, пастереллез и др.), а также племенных животных, отобранных в благополучных по бруцеллезу хозяйствах к продаже на племенные цели хозяйствам других областей, краев и республик.

1.11. При проведении прививок животных вакциной прекращают применение антибиотиков (в лечебных и профилактических целях) в сроки:

непролонгированных препаратов: бензилпенициллина, эритромицина, олеамдомицина — за сутки; хлортетрациклина, окситетрациклина, тетрациклина, левомицетина, полимиксина — за 3 сут.; стрептомицина, канамицина, неомицина, мономицина — за 7 сут. до вакцинации;

пролонгированных антибиотиков: бициллина — за 6 сут.; дитетрациклина — за 25 и дибиомицина — за 30 сут. до вакцинации;

любые антибиотики — в течение 15 сут. после вакцинации животных.

1.12. Каждое вакцинированное животное метят путем выщипа круглого отверстия в основании правого уха. Их берут на учет и за ними устанавливают наблюдение в течение 10 дней, имея в виду, что у привитых животных может повыситься температура тела, иногда отмечается кратковременная хромота.

1.13. Проведение вакцинации животных по каждой отаре оформляют актом, в котором указывают наименование хозяйства, фермы, номер отары, ее эпизоотическое состояние в отношении бруцеллеза или инфекционного эпидидимита, количество, пол и возраст вакцинированных животных, наименование предприятия, изготовившего вакцину, номер серии, дату изготовления и срок годности препарата. Один экземпляр акта направляют главному ветеринарному врачу района, другой хранят в хозяйстве.

1.14. В случае осложнений у животных применение вакцины данной серии прекращают и в соответствии с указанием Главного управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР от 3 сентября 1982 г. N 116-6а направляют с нарочным, соблюдая режим хранения, 2 — 3 невскрытых ампулы с вакциной из серии, вызвавшей осложнения, во Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5). В сопроводительном документе указывают количество вакцинированных животных, дату прививки, характер осложнений.

2.1. Вакцину из штамма Рев-1 применяют для прививки овец и коз против бруцеллеза в хозяйствах областей, краев, республик (без областного деления), неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота. В особых случаях с разрешения главных управлений (управлений) ветеринарии госагропромов союзных республик допускается проводить прививку этой вакциной овец и коз в благополучных хозяйствах районов, непосредственно граничащих с неблагополучными территориями.

2.2. Ярок и козочек во всех хозяйствах (неблагополучных или благополучных по бруцеллезу) прививают вакциной первый раз в возрасте 3 — 5 мес. без исследования их на бруцеллез. Животных, не привитых в указанном возрасте по каким-либо причинам, иммунизируют этой же вакциной, но не позднее чем за 2 мес. до осеменения.

2.2.1. Вакцинированный молодняк формируют в отдельные отары и содержат обособленно от взрослого поголовья. Пополнение привитыми ярками (козочками) отар взрослых овец (коз), неблагополучных по бруцеллезу, запрещается.

2.2.2. В дальнейшем животных реиммунизируют вакциной из штамма Рев-1 1 раз в 2 года за 2 мес. (не позднее) до осеменения.

В благополучных по бруцеллезу хозяйствах реиммунизацию овец (коз) проводят без исследования животных на эту болезнь.

2.3. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, где вакцина из штамма Рев-1 применялась только для иммунизации молодняка, всех овцематок (козоматок) отар с острым течением болезни (аборты, массовое выделение реагирующих) сдают на убой. Поголовье овец, коз (если животные не были привиты вакциной из штамма 19) других отар данного хозяйства однократно исследуют на бруцеллез (аллергически или серологически РА и РДСК). Реагирующих удаляют, нереагирующих овец (коз) прививают вакциной из штамма Рев-1 (проводят первую реиммунизацию этой вакциной, но не ранее чем через год после первичной прививки животных).

Через 2 года после реиммунизации овец (коз) исследуют на бруцеллез однократно серологически (РБП или РСК). При отсутствии клинических проявлений бруцеллеза у животных и получении отрицательных результатов исследования отару считают оздоровленной от бруцеллеза. В случае выделения реагирующих их удаляют из отары. Всех животных с отрицательными реакциями вновь реиммунизируют вакциной из штамма Рев-1 и далее с ними поступают, как указано в настоящем абзаце выше.

2.4. Овец (коз), привитых вакциной из штамма Рев-1, можно исследовать на бруцеллез в следующие сроки:

животных, привитых однократно в возрасте 3 — 5 мес., — не ранее чем через год после вакцинации;

животных, привитых однократно переярками, и овец (коз), подвергавшихся реиммунизации (см. подпункты 2.2, 2.2.2 и 2.3), — не ранее чем через 2 года после последней вакцинации.

Для исследования животных на бруцеллез применяют серологические реакции: РБП или РСК.

На инфекционную болезнь, вызываемую возбудителем бруцелла овис, овец можно исследовать (РДСК) в любые сроки после прививки вакциной из штамма Рев-1.

В порядке контроля за состоянием поголовья овец (коз) по бруцеллезу в благополучных и оздоравливаемых хозяйствах ежегодно исследуют на бруцеллез баранов-производителей (аллергическим и серологическим методами) и маток, оставшихся без приплода, а также абортировавших. Абортированные плоды и другой материал от животных направляют в ветеринарную лабораторию для бактериологического и биологического (биопроба) исследований. По результатам этих исследований судят о состоянии по бруцеллезу каждой отары хозяйства.

2.5. В личных подсобных хозяйствах граждан прививкам против бруцеллеза вакциной из штамма Рев-1 подвергают только ярок (козочек). При проведении иммунизации соблюдают требования и условия, указанные в настоящем Наставлении (см. подпункты 1.12 — 1.14, 2.1, 2.2, 2.4).

2.6. Перед снятием ограничений с неблагополучной по бруцеллезу мелкого рогатого скота фермы (отделения, хозяйства) исследуют серологическим методом (РБП или РСК) на бруцеллез всех овец и коз (в том числе подвергавшихся иммунизации вакциной из штамма Рев-1), находящихся на их территории. Ограничения снимают только после получения отрицательных результатов исследований и выполнения мероприятий, предусмотренных инструкцией по борьбе с бруцеллезом животных.

В хозяйствах, в которых проводили иммунизацию и реиммунизацию овец (коз) вакциной из штамма 19, перед снятием ограничений все такое поголовье должно быть сдано на убой.

2.7. При оздоровлении всех хозяйств в районе вакцинацию взрослых овец (коз) прекращают, а иммунизацию ярок (козочек) проводят до устранения угрозы заражения животных бруцеллезом.

2.8. В хозяйствах, где имеются взрослые овцы (козы), ранее привитые вакциной из штамма 19 (до выхода настоящего Наставления ), овцематок (козоматок) на бруцеллез не исследуют, их ежегодно ревакцинируют вакциной из штамма 19, содержат обособленными отарами и по мере хозяйственной выбраковки сдают на убой. Вводить в такие отары животных, привитых или не привитых вакциной из штамма Рев-1, категорически запрещается. Полученный в хозяйствах молодняк прививают вакциной из штамма Рев-1 в порядке, как указано в подпунктах 2.2 — 2.2.3.

С 1 января 1987 г. прививка вакциной из штамма 19 овец (коз), ранее не подвергавшихся иммунизации этой вакциной, категорически запрещается.

3.1. Вакцину из штамма Рев-1 применяют в хозяйствах, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов, расположенных в областях (краях) и районах, где применяют эту вакцину для иммунизации овец (коз) против бруцеллеза.

3.2. Вакциной иммунизируют только баранчиков, отобранных в благополучных по ИЭ маточных отарах и оставленных в данном хозяйстве для ремонтных целей. Вакциной прививают животных только 1 раз в возрасте 3 — 8 мес.

Не подлежат прививкам вакциной бараны:

отобранные в благополучных по бруцеллезу и ИЭ маточных отарах для продажи на племенные цели другим хозяйствам или племпредприятиям;

вновь поступившие в данное хозяйство в возрасте старше 8 мес.;

на станциях (пунктах) по искусственному осеменению животных и других племпредприятиях.

3.3. Перед иммунизацией баранчиков исследуют на инфекционный эпидидимит серологически (РДСК) и на бруцеллез серологически (РБП или РА и РДСК) и аллергически. Реагирующих животных и баранчиков с клиническими признаками эпидидимита выбраковывают для откорма. Остальных животных иммунизируют.

3.4. Вакцинированных баранов можно исследовать на инфекционный эпидидимит (РДСК) в любые сроки, а на бруцеллез серологически (РБП или РА и РСК) не ранее чем через 12 мес. после вакцинации, но обязательно проверяют на эти болезни перед использованием животных в случной кампании.

3.4.1. При выделении реагирующих баранов при исследовании их на ИЭ всех животных данной группы проверяют (РДСК) на эту болезнь через каждые 30 дней до получения 2-кратных подряд отрицательных результатов по группе и затем оставляют под контрольным наблюдением на 6 мес., в течение которых их исследуют 2 раза.

При получении отрицательных результатов исследования и отсутствии клинических признаков болезни у животных группу признают оздоровленной, баранов допускают к использованию в воспроизводстве.

3.4.2. Если при исследовании выделены животные с положительными реакциями на бруцеллез, группу продолжают исследовать каждые 30 дней серологическими (РБП или РСК) и аллергическим методами и далее с животными поступают в порядке, как указано в подпункте 3.4.1.

3.4.3. Реагирующих животных при исследовании на бруцеллез или ИЭ выбраковывают для откорма.

3.5. В хозяйствах, где применяют вакцину из штамма Рев-1 для иммунизации баранчиков против инфекционного эпидидимита, проводят весь комплекс ветеринарных, санитарных, организационно-хозяйственных и других мероприятий по борьбе с этой болезнью, предусмотренных действующей «Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных».

С утверждением настоящего Наставления утрачивает силу «Наставление по применению вакцины живой сухой из штамма Рев-1 бруцелла мелитензис против бруцеллеза мелкого рогатого скота», утвержденное Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 29 марта 1983 г.

Ассоциация содействует в оказании услуги в продаже лесоматериалов: доска обрезная по выгодным ценам на постоянной основе. Лесопродукция отличного качества.

источник

Владельцы патента RU 2642316:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота из штамма Brucella melitensis Rev-1. Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота предусматривает посев и выращивание штамма Brucella melitensis Rev-1 на питательной среде, содержащей панкреатический гидролизат казеина глубокой степени расщепления, экстракта дрожжей, натрий хлористый, глюкозу, глицерин и агар-агар в заданном соотношении компонентов в течение 72 часов при 37°C. Выросшую вакцинную культуру смывают с поверхности агара средой высушивания и доводят до концентрации 80-140 млрд м.к. в 1 мл. Проверяют на чистоту и диссоциацию, расфасовывают в ампулы и подвергают лиофильной сушке. Изобретение позволяет увеличить выход штамма Brucella melitensis Rev-1 в S-форме. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к изготовлению вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота.

В настоящее время для профилактики бруцеллеза овец и коз широко используют вакцину, изготовленную из штамма Brucella melitensis Rev-1.

Выращивание штамма Rev-1 при изготовлении вакцины проводят на триптиказо-соевом агаре, агаре Альбими, сывороточно-декстрозном агаре (см. Дж. Альтон, Л.М. Джонс «Методы лабораторных исследований по бруцеллезу», ВОЗ, Женева, 1968, стр. 77-79). Ингредиенты, входящие в первые две среды, в нашей стране не выпускают, а применение агара-заменителя Альбими в производстве вакцины нерационально из-за недостаточного выхода бакмассы. На других питательных средах (печеночные, мясные, картофельные среды, эритритагар, агар Д и т.д.), применяемых для культивирования бруцелл (см. кн. “Бруцеллез”, под ред. П.А. Вершиловой, М., 1961, стр. 208-210), штамм Rev-1 растет плохо и диссоциирует.

Известен способ получения живой вакцины из штамма В.melitensis Rev-1, заключающийся в выращивании его на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона (см. Производство вакцины Rev-1. G.G. Alton WHO/Bruc. 70.321; Питательная среда для изготовления вакцины из штамма B.melitensis Rev-1. Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротестсистем. Мат. междунар. науч. конф., посвящ. 70-летию НПО «Питательные среды», Махачкала, 1998, с. 116-117). Недостатком данного способа является необходимость добавления в питательную среду перед засевом культуры бруцелл штамма Rev-1 до 10% стерильной сыворотки крови животных, а также то, что основой среды служат мясной бульон и пептон.

Изготовление питательной среды на основе высокоценного пищевого продукта — мяса экономически не оправдано, а добавление дефицитной и дорогостоящей сыворотки крови, помимо экономической нецелесообразности, вызывает дополнительные трудности, связанные со стерильным внесением ее в готовую среду и возможностью загрязнения вакцины посторонней микрофлорой.

Целью настоящего изобретения является разработка способа изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма Rev-1, состоящей из типичных для данного штамма однородных клеток бруцелл в S-форме и не имеющей диссоциированных микроорганизмов с использованием питательной среды, изготовленной из непищевого сырья и без добавления сыворотки крови животных.

Поставленная цель достигается тем, что для изготовления вакцины с целью увеличения выхода микробной массы и во избежание диссоциации бруцелл, культуру штамма В.melitensis Rev-1 выращивают на питательной среде, основой которой является панкреатический гидролизат казеина с добавлением в качестве источника витаминов и других ростовых факторов экстракта кормовых или хлебных дрожжей.

Питательная среда состоит из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара. При выращивании на такой питательной среде достигается лучший рост бруцелл штамма Rev-1, больший выход бактериальной массы без диссоциированных клеток и обладающий лучшей жизнеспособностью, а также высокими иммуногенными свойствами.

Приготовление гидролизата казеина

Сухой казеин в количестве 1 кг заливают 10 литрами теплой дистиллированной воды, подщелачивают до рН — 8,5-9,0 и оставляют на несколько часов для разбухания. Затем при постоянном перемешивании подогревают до 80-90°C и температуру в этих пределах поддерживают до растворения казеина. В процессе растворения казеина рН смеси снижается, и поэтому периодически добавляют 20% раствор щелочи (NaOH) для поддержания рН на уровне 8,5-9,0 до полного растворения казеина.

Полученный раствор остужают до 45°C и к нему добавляют 50-100 г в зависимости от активности, панкреатина или же фарш поджелудочной железы крупного рогатого скота в количестве 0,5-1 кг.

Гидролиз проводят в течение 3-4 часов при температуре 45°C при постоянном перемешивании, поддерживая рН на уровне 8,5-9,0. Содержание аминного азота в готовом гидролизате должно быть 600-800 мг %.

При медленном гидролизе и содержании аминного азота менее 600 мг % панкреатин добавляют повторно.

По достижении аминного азота до 600-800 мг % гидролиз прекращают добавлением 100-120 мг уксусной кислоты.

Гидролизат кипятят в течение 10 минут, после чего его охлаждают и оставляют до следующего дня для отстаивания.

Отстоявшийся гидролизат декантируют и фильтруют через ватно-марлевой фильтр.

Приготовление экстракта дрожжей

Берут 1 кг светлых сортов кормовых или прессованных пекарских дрожжей и добавляют к ним 10 литров дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят в течение 10-15 минут и в горячем виде фильтруют до прозрачности.

Приготовление питательной среды

Для изготовления среды смешивают панкреатический гидролизат казеина и экстракт дрожжей в равных количествах и разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг %.

Смесь подогревают и после закипания к ней добавляют предварительно вымоченный в воде в течение 12 часов Корсаковский агар-агар высшего или первого сорта из расчета 3-3,5% для четвертей или матровых колб и 2% для пробирок и чашек.

После полного расплавления агар-агара в среду вносят 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы и 2% глицерина, доводят рН до 7,2-7,3 и, периодически перемешивая, ее кипятят еще 10-15 минут. Затем питательную среду фильтруют через ватный или полотняный фильтр, разливают в матровые колбы, четверти или другие необходимые емкости и стерилизуют при температуре 110-112°C в течение 30 минут.

После стерилизации матровые колбы ставятся в горизонтальном положении для застывания агара, а четверти обкатывают для распределения питательной среды по всей их внутренней поверхности.

До засева вакцинной культуры питательную среду в колбах, четвертях, чашках и пробирках выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C для подсушивания поверхности и контроля стерильности.

Выращивание культуры Rev-1 для получения вакцины проводят на вышеуказанной питательной среде в матровых колбах, четвертях, пробирках или других емкостях.

Для засева серии вакцинной культуры проводят предварительную расплодку штамма в пробирках, матровых колбах или четвертях.

Вначале производственный штамм Rev-1 засевают в пробирки на косой агар. Берут одну пробирку 3-4-суточного роста эталонной культуры, разводят стерильным буферным раствором рН 6,6-6,8 так, чтобы получилась концентрация 10 -6 и 10 -7 .

Из каждого разведения 0,1 мл культуры штамма засевают по 3 бактериологические чашки.

Через 5 суток выращивания в термостате при температуре 37°C чашки просматривают на чистоту и типичность роста культуры, проверяют морфологию клеток и на диссоциацию методом окраски колоний по Уайт -Уильсону.

При отсутствии диссоциации из неокрашенных, бактериологических чашек отбирают типичные колонии, которые отсевают на пробирки с косым агаром. После выдерживания посевов в течение 48 часов в термостате при температуре 37°C и проверки на чистоту культуру пересевают на требуемое количество пробирок с той же питательной средой. Пробирки выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C. Из этих пробирок получают рабочие культуры штамма Rev-1, используемые для засева очередных серий вакцины.

Пробирки с рабочей культурой штамма Rev-1 хранят в запаянном виде в холодильнике при температуре +4-8°С и пригодны для использования в течение 30 дней.

Для получения взвеси клеток с целью засева серии вакцины необходимо рабочие культуры размножить в нужном количестве в пробирках, матровых колбах или четвертях, смыть стерильным, забуферным (рН 6,6-6,8) физраствором так, чтобы получилась концентрация 2-3 млрд микробов, тел в 1 мл по оптическому бруцеллезному стандарту мутности. Такой расплодкой в количестве 4-5 мл засевают матровые колбы (матрасы) или четверти данной серии.

Выращивание культуры B. melitensis Rev-1 для получения вакцины на вышеуказанной питательной среде проводят в течение 72 часов при температуре 37°С. Выросшую вакцинную культуру, с поверхности агара, смывают средой высушивания.

Среду высушивания готовят следующим образом: в 1 литре кипящей дистиллированной воды растворяют 15 г желатина, после ее растворения добавляют 100 г сахарозы. Затем кипятят 5-6 минут, доводят рН до 7,2-7,3, фильтруют через полотняный фильтр, стерилизуют при 1 атмосфере 30 минут. После стерилизации среда должна иметь рН 6,8-7,0.

В каждую колбу или четверть вводят такое количество среды высушивания, чтобы концентрация бакмассы была в пределах 80-140 млрд микробных тел в 1 мл.

Суспензию бруцелл, полученную из колб или четвертей сливают в общую бутыль. После проверки на чистоту и диссоциацию расфасовывают в ампулы по 2 или 4 мл и подвергают лиофильной сушке.

Предлагаемый способ изготовления вакцины обеспечивает, по сравнению с существующим, увеличение выхода препарата в 1,2-1,3 раза. Полученная при этом вакцина состоит из однородных клеток в S-форме, типичной для штамма Rev-1 морфологии, и не имеющих признаков диссоциации.

Предлагаемая питательная среда, изготовленная на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта дрожжей, разлитая по 250,0 мл в 10 матровых колб, была испытана для изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма B. melitensis Rev-1.

Для сравнения результатов культуру штамма B. melitensis Rev-1 для изготовления вакцины выращивали и на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона с добавлением 10% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота. Данную питательную среду разливали в матровые колбы также по 250,0 мл в каждую колбу. Засевали культурой B. melitensis Rev-1 10 матровых колб со средой.

Культуру B. melitensis Rev-1 на обеих питательных средах выращивали при температуре 36-37°С в течение 72 часов. Основные данные, характеризующие результаты использования обеих питательных сред для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 и изготовления из этого штамма вакцины против бруцеллеза овец и коз, представлены в следующей таблице.

Таблица. Основные результаты выращивания культуры штамма Brucella melitensis Rev-1 для получения бакмассы и изготовления вакцины против бруцеллеза овец и коз при использовании испытуемой питательной среды (новый вариант) и ранее применявшейся питательной среды (старый вариант).

Таким образом, в результате проведенных исследований по испытанию предлагаемой нами питательной среды, изготовленной на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта хлебных дрожжей, установлены пригодность данной среды и целесообразность ее применения для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 при изготовлении из этого штамма живой вакцины против бруцеллеза овец и коз. При этом показано, что применение указанной питательной среды позволяет получить бакмассу бруцелл штамма Rev-1 типичной для данного штамма морфологии в S-форме, не содержащую диссоциированных микробных клеток и 1,2 раза больше, чем при применении сывороточно-декстрозного агара, изготовленного на основе мясопептонного бульона с добавлением 10% сыворотки крови крупного рогатого скота.

Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающий посев и выращивание бруцелл штамма B. melitensis Rev-1 на питательной среде, состоящей из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара, их смыв, разбавление средой высушивания до содержания 80-140 млрд микробных клеток в 1 мл, расфасовку в ампулы и лиофильную сушку.

источник

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к изготовлению вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота.

В настоящее время для профилактики бруцеллеза овец и коз широко используют вакцину, изготовленную из штамма Brucella melitensis Rev-1.

Выращивание штамма Rev-1 при изготовлении вакцины проводят на триптиказо-соевом агаре, агаре Альбими, сывороточно-декстрозном агаре (см. Дж. Альтон, Л.М. Джонс «Методы лабораторных исследований по бруцеллезу», ВОЗ, Женева, 1968, стр. 77-79). Ингредиенты, входящие в первые две среды, в нашей стране не выпускают, а применение агара-заменителя Альбими в производстве вакцины нерационально из-за недостаточного выхода бакмассы. На других питательных средах (печеночные, мясные, картофельные среды, эритритагар, агар Д и т.д.), применяемых для культивирования бруцелл (см. кн. “Бруцеллез”, под ред. П.А. Вершиловой, М., 1961, стр. 208-210), штамм Rev-1 растет плохо и диссоциирует.

Известен способ получения живой вакцины из штамма В.melitensis Rev-1, заключающийся в выращивании его на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона (см. Производство вакцины Rev-1. G.G. Alton WHO/Bruc. 70.321; Питательная среда для изготовления вакцины из штамма B.melitensis Rev-1. Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротестсистем. Мат. междунар. науч. конф., посвящ. 70-летию НПО «Питательные среды», Махачкала, 1998, с. 116-117). Недостатком данного способа является необходимость добавления в питательную среду перед засевом культуры бруцелл штамма Rev-1 до 10% стерильной сыворотки крови животных, а также то, что основой среды служат мясной бульон и пептон.

Изготовление питательной среды на основе высокоценного пищевого продукта — мяса экономически не оправдано, а добавление дефицитной и дорогостоящей сыворотки крови, помимо экономической нецелесообразности, вызывает дополнительные трудности, связанные со стерильным внесением ее в готовую среду и возможностью загрязнения вакцины посторонней микрофлорой.

Целью настоящего изобретения является разработка способа изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма Rev-1, состоящей из типичных для данного штамма однородных клеток бруцелл в S-форме и не имеющей диссоциированных микроорганизмов с использованием питательной среды, изготовленной из непищевого сырья и без добавления сыворотки крови животных.

Поставленная цель достигается тем, что для изготовления вакцины с целью увеличения выхода микробной массы и во избежание диссоциации бруцелл, культуру штамма В.melitensis Rev-1 выращивают на питательной среде, основой которой является панкреатический гидролизат казеина с добавлением в качестве источника витаминов и других ростовых факторов экстракта кормовых или хлебных дрожжей.

Питательная среда состоит из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара. При выращивании на такой питательной среде достигается лучший рост бруцелл штамма Rev-1, больший выход бактериальной массы без диссоциированных клеток и обладающий лучшей жизнеспособностью, а также высокими иммуногенными свойствами.

Приготовление гидролизата казеина

Сухой казеин в количестве 1 кг заливают 10 литрами теплой дистиллированной воды, подщелачивают до рН — 8,5-9,0 и оставляют на несколько часов для разбухания. Затем при постоянном перемешивании подогревают до 80-90°C и температуру в этих пределах поддерживают до растворения казеина. В процессе растворения казеина рН смеси снижается, и поэтому периодически добавляют 20% раствор щелочи (NaOH) для поддержания рН на уровне 8,5-9,0 до полного растворения казеина.

Полученный раствор остужают до 45°C и к нему добавляют 50-100 г в зависимости от активности, панкреатина или же фарш поджелудочной железы крупного рогатого скота в количестве 0,5-1 кг.

Гидролиз проводят в течение 3-4 часов при температуре 45°C при постоянном перемешивании, поддерживая рН на уровне 8,5-9,0. Содержание аминного азота в готовом гидролизате должно быть 600-800 мг %.

При медленном гидролизе и содержании аминного азота менее 600 мг % панкреатин добавляют повторно.

По достижении аминного азота до 600-800 мг % гидролиз прекращают добавлением 100-120 мг уксусной кислоты.

Гидролизат кипятят в течение 10 минут, после чего его охлаждают и оставляют до следующего дня для отстаивания.

Отстоявшийся гидролизат декантируют и фильтруют через ватно-марлевой фильтр.

Приготовление экстракта дрожжей

Берут 1 кг светлых сортов кормовых или прессованных пекарских дрожжей и добавляют к ним 10 литров дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят в течение 10-15 минут и в горячем виде фильтруют до прозрачности.

Приготовление питательной среды

Для изготовления среды смешивают панкреатический гидролизат казеина и экстракт дрожжей в равных количествах и разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг %.

Смесь подогревают и после закипания к ней добавляют предварительно вымоченный в воде в течение 12 часов Корсаковский агар-агар высшего или первого сорта из расчета 3-3,5% для четвертей или матровых колб и 2% для пробирок и чашек.

После полного расплавления агар-агара в среду вносят 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы и 2% глицерина, доводят рН до 7,2-7,3 и, периодически перемешивая, ее кипятят еще 10-15 минут. Затем питательную среду фильтруют через ватный или полотняный фильтр, разливают в матровые колбы, четверти или другие необходимые емкости и стерилизуют при температуре 110-112°C в течение 30 минут.

После стерилизации матровые колбы ставятся в горизонтальном положении для застывания агара, а четверти обкатывают для распределения питательной среды по всей их внутренней поверхности.

До засева вакцинной культуры питательную среду в колбах, четвертях, чашках и пробирках выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C для подсушивания поверхности и контроля стерильности.

Выращивание культуры Rev-1 для получения вакцины проводят на вышеуказанной питательной среде в матровых колбах, четвертях, пробирках или других емкостях.

Для засева серии вакцинной культуры проводят предварительную расплодку штамма в пробирках, матровых колбах или четвертях.

Вначале производственный штамм Rev-1 засевают в пробирки на косой агар. Берут одну пробирку 3-4-суточного роста эталонной культуры, разводят стерильным буферным раствором рН 6,6-6,8 так, чтобы получилась концентрация 10 -6 и 10 -7 .

Из каждого разведения 0,1 мл культуры штамма засевают по 3 бактериологические чашки.

Через 5 суток выращивания в термостате при температуре 37°C чашки просматривают на чистоту и типичность роста культуры, проверяют морфологию клеток и на диссоциацию методом окраски колоний по Уайт -Уильсону.

При отсутствии диссоциации из неокрашенных, бактериологических чашек отбирают типичные колонии, которые отсевают на пробирки с косым агаром. После выдерживания посевов в течение 48 часов в термостате при температуре 37°C и проверки на чистоту культуру пересевают на требуемое количество пробирок с той же питательной средой. Пробирки выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C. Из этих пробирок получают рабочие культуры штамма Rev-1, используемые для засева очередных серий вакцины.

Пробирки с рабочей культурой штамма Rev-1 хранят в запаянном виде в холодильнике при температуре +4-8°С и пригодны для использования в течение 30 дней.

Для получения взвеси клеток с целью засева серии вакцины необходимо рабочие культуры размножить в нужном количестве в пробирках, матровых колбах или четвертях, смыть стерильным, забуферным (рН 6,6-6,8) физраствором так, чтобы получилась концентрация 2-3 млрд микробов, тел в 1 мл по оптическому бруцеллезному стандарту мутности. Такой расплодкой в количестве 4-5 мл засевают матровые колбы (матрасы) или четверти данной серии.

Выращивание культуры B. melitensis Rev-1 для получения вакцины на вышеуказанной питательной среде проводят в течение 72 часов при температуре 37°С. Выросшую вакцинную культуру, с поверхности агара, смывают средой высушивания.

Среду высушивания готовят следующим образом: в 1 литре кипящей дистиллированной воды растворяют 15 г желатина, после ее растворения добавляют 100 г сахарозы. Затем кипятят 5-6 минут, доводят рН до 7,2-7,3, фильтруют через полотняный фильтр, стерилизуют при 1 атмосфере 30 минут. После стерилизации среда должна иметь рН 6,8-7,0.

В каждую колбу или четверть вводят такое количество среды высушивания, чтобы концентрация бакмассы была в пределах 80-140 млрд микробных тел в 1 мл.

Суспензию бруцелл, полученную из колб или четвертей сливают в общую бутыль. После проверки на чистоту и диссоциацию расфасовывают в ампулы по 2 или 4 мл и подвергают лиофильной сушке.

Предлагаемый способ изготовления вакцины обеспечивает, по сравнению с существующим, увеличение выхода препарата в 1,2-1,3 раза. Полученная при этом вакцина состоит из однородных клеток в S-форме, типичной для штамма Rev-1 морфологии, и не имеющих признаков диссоциации.

Предлагаемая питательная среда, изготовленная на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта дрожжей, разлитая по 250,0 мл в 10 матровых колб, была испытана для изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма B. melitensis Rev-1.

Для сравнения результатов культуру штамма B. melitensis Rev-1 для изготовления вакцины выращивали и на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона с добавлением 10% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота. Данную питательную среду разливали в матровые колбы также по 250,0 мл в каждую колбу. Засевали культурой B. melitensis Rev-1 10 матровых колб со средой.

Культуру B. melitensis Rev-1 на обеих питательных средах выращивали при температуре 36-37°С в течение 72 часов. Основные данные, характеризующие результаты использования обеих питательных сред для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 и изготовления из этого штамма вакцины против бруцеллеза овец и коз, представлены в следующей таблице.

Таблица. Основные результаты выращивания культуры штамма Brucella melitensis Rev-1 для получения бакмассы и изготовления вакцины против бруцеллеза овец и коз при использовании испытуемой питательной среды (новый вариант) и ранее применявшейся питательной среды (старый вариант).

Таким образом, в результате проведенных исследований по испытанию предлагаемой нами питательной среды, изготовленной на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта хлебных дрожжей, установлены пригодность данной среды и целесообразность ее применения для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 при изготовлении из этого штамма живой вакцины против бруцеллеза овец и коз. При этом показано, что применение указанной питательной среды позволяет получить бакмассу бруцелл штамма Rev-1 типичной для данного штамма морфологии в S-форме, не содержащую диссоциированных микробных клеток и 1,2 раза больше, чем при применении сывороточно-декстрозного агара, изготовленного на основе мясопептонного бульона с добавлением 10% сыворотки крови крупного рогатого скота.

Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающий посев и выращивание бруцелл штамма B. melitensis Rev-1 на питательной среде, состоящей из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара, их смыв, разбавление средой высушивания до содержания 80-140 млрд микробных клеток в 1 мл, расфасовку в ампулы и лиофильную сушку.

источник

2.1. Вакцину из штамма Рев-1 применяют для иммунизации ярок (козочек) как на

благополучных, так и неблагополучных по бруцеллезу (фермах в хозяйствах, расположенных в

районах со значительным распространением бруцеллеза мелкого рогатого скота, а также в хозяйствах

при отгонном ведении овцеводства.

Допускается вакцинация ярок (козочек), принадлежащих гражданам, в населенных пунктах,

неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

2.2. Вакцинируют ярок и козочек однократно начиная с трех-четырехмесячного возраста, но не

позднее чем за два месяца до первого осеменения.

2.2.1. В неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота хозяйствах вакциной из штамма

Рев-1 иммунизируют ярок (козочек) ежегодно до снятия ограничений по бруцеллезу с хозяйства и

продолжают в течение трех лет после оздоровления поголовья.

2.2.2. Ярок (козочек), полученных от маток благополучных по бруцеллезу отар (стад),

иммунизируют без предварительного исследования.

2.2.3. Перед вакцинацией ярок и козочек, полученных от маток неблагополучных по бруцеллезу

отар (стад), исследуют на бруцеллез серологическими методами. Реагирующих животных удаляют из

отары, остальных прививают вакциной. Из вакцинированного молодняка формируют отдельные

2.3. Для исследования на бруцеллез животных, привитых вакциной из штамма Рев-1,

применяют серологические методы (РБП — роз бенгал проба или РА и РСК (РДСК)). Плановое

исследование проводят перед осеменением маток или через 1 — 2 месяца после окота, но не ранее чем

через 12 месяцев после вакцинации.

2.4. За привитыми вакциной из штамма Рев-1 животными ведут ветеринарное наблюдение:

исследуют на бруцеллез овец (коз), оставшихся без приплода, а также абортировавших и имеющих

другие признаки, подозрительные на заболевание животных бруцеллезом. Абортированные плоды и

другой материал от таких животных направляют в ветеринарную лабораторию для

бактериологического и биологического исследований, одновременно от них направляют кровь для

серологического исследования на бруцеллез.

2.5. В неблагополучном по бруцеллезу хозяйстве:

2.5.1. Если при лабораторных исследованиях материала от животных, привитых вакциной из

штамма Рев-1, и при проверке на бруцеллез овец (коз) по окончании окота получены отрицательные

результаты исследований по группе (отаре), все поголовье группы (отары) признают благополучным

2.5.2. В случае если при исследовании вакцинированных овец (коз) выделяются животные с

положительной реакцией, всех животных данной отары сдают на убой или удаляют из отары и сдают

на убой реагирующих, а остальных исследуют 2 — 3 раза через каждые 30 дней, осеменяют и

оставляют под наблюдением до окончания следующего окота.

2.5.3. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах овец (коз) отар, где произошла острая

вспышка бруцеллеза (аборты, массовое выделение реагирующих), сдают на убой, а животных других

неблагополучных отар данного хозяйства реиммунизируют вакциной из штамма 19 за 2 месяца до

осеменения, но не ранее чем через 2 года после иммунизации их вакциной из штамма Рев-1. Овец

(коз) в дальнейшем прививают вакциной из штамма 19 ежегодно, перед прививкой и после нее на

бруцеллез не исследуют, содержат обособленно и по мере хозяйственной выбраковки сдают на убой.

Ярок в данном хозяйстве иммунизируют вакциной из штамма Рев-1 против бруцеллеза.

2.6. Перед снятием ограничений с фермы (бригады, отделения хозяйства), населенного пункта

исследуют на бруцеллез все поголовье овец и коз (в том числе иммунизированных вакциной из

штамма Рев-1 против бруцеллеза, за исключением животных, привитых этой вакциной менее чем за

12 месяцев до снятия ограничений), находящихся на территории данного хозяйства, населенного

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

2.7. При иммунизации вакциной из штамма Рев-1 овец, принадлежащих населению, соблюдают

требования и условия, указанные в настоящем Наставлении и предусмотренные Инструкцией о

мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных.

2.8. В случае если после прививок у животных возникли какие-либо осложнения (абсцессы и

т.п.), об этом необходимо немедленно сообщить Всесоюзному государственному научно-

контрольному институту ветпрепаратов (123022, г. Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5) и

биопредприятию, изготовившему вакцину. Одновременно высылают в их адрес по 3 — 5 невскрытых

ампул с вакциной из использованной серии.

С утверждением настоящего Наставления утрачивают силу:

«Временное наставление по применению сухой живой вакцины из штамма Рев-1 бруцелл вида

мелитензис против бруцеллеза мелкого рогатого скота», утвержденное Главным управлением

ветеринарии Минсельхоза СССР 20 июня 1974 года;

«Указания по борьбе с бруцеллезом мелкого рогатого скота с использованием в общем комплексе

противобруцеллезных мероприятий вакцины из штамма Рев-1 бруцелл вида мелитензис»,

утвержденные Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 20 июня 1974 года.

источник

Читайте также:  Забор материала при бруцеллезе