Вакцина против бруцеллеза мрс

Масса сухая аморфная, серо-белого цвета с коричневатым оттенком, без посторонней примеси и плесени; при регидратации образуется гомогенная взвесь в течение 2-3 мин.

ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ

1 мл

лиофилизированная живая культура вакцинного штамма Brucella melitensis Rev.1

Вспомогательные вещества: сахарозо-желатиновая среда.

Расфасована по 1-5 или 10-20 мл в стеклянные флаконы вместимостью соответственно 10-20 мл или 30-100 мл, укупоренные резиновыми пробками в атмосфере азота или аргона и обкатанные металлическими колпачками или по 1-2 мл в ампулы вместимостью 3-6 мл, запаянные под вакуумом. На флаконы (ампулы) с вакциной наклеивают этикетки с указанием названия организации-производителя, названия вакцины, количества доз вакцины во флаконе (ампуле), номера серии и номера контроля, окончания срока годности (месяц, год) и обозначения СТО. Флаконы (ампулы) упаковывают в картонные коробки с разделительными перегородками, обеспечивающими их неподвижность и целостность.

На каждую коробку с вакциной наклеивают этикетку с указанием названия организации-производителя, ее товарного знака, адреса, номера телефона, полного названия вакцины, количества флаконов (ампул) вакцины в коробке и доз вакцины во флаконе (ампуле), номера серии и номера контроля, даты изготовления (месяц, год), окончания срока годности (месяц, год), условий хранения, надписи «Для животных», обозначения СТО. На этикетку может быть нанесена дополнительная информация. В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению вакцины.

Свидетельство о регистрации № ПВР-1-1.3/01225 от 11.12.06

Вакцина против бруцеллеза овец и коз и инфекционного эпидидимита баранов. Вакцинный штамм Brucella melitensis Rev-1 (Strain Rev-1 vaccine) в S-форме обладает выраженными антигенными и иммуногенными свойствами для овец и коз и не передается от животного к животному.

Иммунитет у животных формируется на 21 сутки после введения вакцины и сохраняется не менее 2 лет. Наличие специфических поствакцинальных антител регистрируется в сыворотке крови молодняка в течение 12 мес, взрослых животных — на протяжении 2 лет.

Показания к применению препарата ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1 ЖИВАЯ СУХАЯ

— иммунизация овец и коз против бруцеллеза и баранов против инфекционного эпидидимита в хозяйствах всех форм собственности в субъектах РФ неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота.

Вакцину вводят животным п/к в бесшерстное место за локтевым суставом в объеме 2 мл.

Вакцину перед применением регидратируют разбавителем для сухих бруцеллезных вакцин или стерильным физиологическим раствором с соблюдением правил асептики. Разбавитель (физиологический раствор) вносят в стерильный флакон в расчетном количестве, исходя из того, что объем одной иммунизирующей дозы вакцины составляет 2 мл. Например, если во флаконе (ампуле) содержится 120 доз вакцины, то требуемое количество разбавителя составит 240 мл (120 доз ×2 мл = 240 мл).

Пробку флакона (шейку ампулы) обрабатывают ватным тампоном, смоченным 70% раствором этилового спирта (спиртовым тампоном). В шприц с иглой набирают отмеренный разбавитель в объеме в 2 раза превышающем объем вакцины, содержащейся во флаконе (ампуле). Разбавитель вносят во флакон проколов иглой резиновую пробку; в ампулу — отломив ее верхнюю часть в области шейки. Флакон (ампулу) осторожно встряхивают до получения гомогенной суспензии. Разведенную вакцину переносят шприцем с иглой во флакон с оставшимся разбавителем. Вакцину защищают от воздействия прямого солнечного света и применяют через 30 мин и в течение не более 4 ч после разведения.

Для вакцинации каждого животного используют стерильную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время вакцинации допускается стерилизация игл путем обработки спиртовым тампоном. Место введения вакцины обрабатывают спиртовым тампоном, или тампоном, смоченным 0.5%-ным раствором фенола.

Вакцинация овец и коз против бруцеллеза

Вакцину применяют в хозяйствах неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота, а также в благополучных хозяйствах в случае угрозы заражения животных бруцеллезом.

Ярок и козочек благополучных (в случае угрозы заражения бруцеллезом) и неблагополучных по бруцеллезу хозяйств вакцинируют в возрасте 3-5 месяцев или за 2 месяца до осеменения без предварительного исследования на бруцеллез.

Овец и коз в благополучных по бруцеллезу хозяйствах вакцинируют в случае угрозы заражения животных бруцеллезом без предварительного исследования на бруцеллез за 2 месяца до осеменения. Ревакцинируют животных не ранее чем через 12 месяцев и далее ежегодно или 1 раз в 2 года до исчезновения угрозы заражения, но не более чем в течение 6 лет.

В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах овец (коз), положительно реагирующих при серологическом исследовании, или с клиническими признаками бруцеллеза, сдают на убой. Оставшееся поголовье, а также овец (коз), ранее иммунизированных вакциной из штамма Вrucella abortus 19, иммунизируют вакциной из штамма Rev-1 в течение 6 лет ежегодно или 1 раз в 2 года. Допускается однократная иммунизация баранчиков.

После принятия решения о прекращении иммунизации, овец и коз исследуют на бруцеллез в РА и РСК (РДСК) по истечении 2 лет с момента последнего введения вакцины. При получении двух подряд отрицательных результатов исследований, проведенных с интервалом не менее 30 дней, отсутствии случаев острого заболевания животных бруцеллезом и проведения комплекса мероприятий, предусмотренных действующими нормативными документами по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных хозяйство считают благополучным по бруцеллезу.

Вакцинация баранов против инфекционного эпидидимита (ИЭБ) и маточного поголовья овец против инфекционной болезни, вызываемой Вrucella ovis.

Вакцину применяют в неблагополучных по ИЭБ хозяйствах.

Вакцинируют баранов , не реагирующих на бруцеллез при серологическом исследовании в РА и РСК (РДСК) или РИГА и на инфекционный эпидидимит баранов — в РДСК, только 1 раз в возрасте 3-8 месяцев. Допускается вакцинация ярок в возрасте 3-5 месяцев или за 2 месяца до осеменения без предварительного исследования на обе болезни.

Запрещается вакцинировать баранов старше 8 месяцев и предназначенных для племенного дела.

Вакцинированных баранов и маточное поголовье овец с целью исключения ИЭБ и инфекционной болезни, вызываемой Вrucella ovis, исследуют в РДСК независимо от времени введения вакцины и на бруцеллез — в РА и РСК (РДСК) не ранее, чем через 12 месяцев после вакцинации.

Перед использованием в случной кампании баранов исследуют на бруцеллез и на ИЭБ в обязательном порядке.

С целью оздоровления хозяйств, неблагополучных по ИЭБ, всех баранов исследуют серологически через каждые 30 дней. Животных, положительно реагирующих по результатам каждого исследования, сдают на убой. После получения двух подряд отрицательных результатов животных оставляют под контрольным наблюдением на 6 мес., в течение которого исследуют 3 раза с интервалом в 3 мес.

При получении отрицательных результатов исследования в течение контрольного наблюдения и отсутствии у животных клинических признаков болезни хозяйство признают благополучным по ИЭБ, а баранов используют для воспроизводства.

Противопоказания к применению препарата ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1 ЖИВАЯ СУХАЯ

— животных низкой упитанности, клинически больных, суягных;

— при вспышке у животных в хозяйстве острой инфекционной болезни;

— животных в племенных хозяйствах и предприятиях по искусственному осеменению, предназначенных к продаже для племенных целей.

Вакцинированных (ревакцинированных) животных метят краской или другими средствами.

При проведении вакцинации не применяют в лечебных и профилактических целях следующие антибиотики:

— бензилпенициллин, эритромицин, олеандомицин — за 1 сутки до вакцинации;

— хлортетрациклин, окситетрациклин, тетрациклин, левомицетин, полимиксин — за 3 суток до вакцинации;

— стрептомицин, канамицин, неомицин — за 7 суток до вакцинации;

— бициллин — за 6 суток до вакцинации;

— дитетрациклин — за 25 суток до вакцинации;

— дибиомицин — за 30 суток до вакцинации;

— любые антибиотики — в течение 15 суток после вакцинации.

Продукцию от животных, убитых после вакцинации, используют без ограничений.

Вакцинировать животных разрешается ветеринарным специалистам. При вакцинации следует соблюдать правила личной гигиены, принятые при работе с лекарственными средствами.

Вакцину, попавшую на кожу или слизистые оболочки ветеринарного или технического специалиста, смывают водой с мылом; немедленно обрабатывают: кожу — 70% раствором этилового спирта; слизистые оболочки — раствором тетрациклина или хлортетрациклина (100-200 мг/мл). При отсутствии антибиотиков в глаза вводят несколько капель 1% раствора азотнокислого серебра, в нос — 1% раствор протаргола, рот и горло прополаскивают 70% раствором этилового спирта. В случае аутовакцинации место укола обрабатывают 70% раствором этилового спирта и 1-2% спиртовым раствором бриллиантового зеленого, специалиста направляют в медицинское учреждение для диспансерного наблюдения.

Вакцинацию животных каждого хозяйства, оформляют актом, в котором указывают: название населенного пункта, хозяйства или Ф.И.О. владельца, количество, номера, пол и возраст вакцинированных животных, дату вакцинации, название вакцины и организации-производителя, номера серии, даты изготовления, окончание срока годности и количества израсходованной вакцины. Один экземпляр акта направляют главному ветеринарному врачу района, другой хранится в хозяйстве (у владельца животных) или на ветеринарном участке.

Вакцину с измененным внешним видом, посторонней примесью, плесенью, нарушением целостности или укупорки флаконов (ампул), отсутствием маркировки или по истечении срока годности использовать запрещено.

Неизрасходованную разведенную вакцину, флаконы (ампулы) из-под вакцины, шприцы и иглы, использованные для вакцинации, подвергают кипячению в течение 30 минут.

Условия хранения ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ

Вакцину следует хранить в сухом, темном, недоступном для детей месте при температуре от 2° до 10°С.

Вакцину транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с ОСТ 08064-19-07 и правилами перевозок скоропортящихся грузов и багажа, действующих на данном виде транспорта. Допускается перевозка вакцины при любой минусовой температуре или +20°С не более 7 суток.

источник

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к изготовлению вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота.

В настоящее время для профилактики бруцеллеза овец и коз широко используют вакцину, изготовленную из штамма Brucella melitensis Rev-1.

Выращивание штамма Rev-1 при изготовлении вакцины проводят на триптиказо-соевом агаре, агаре Альбими, сывороточно-декстрозном агаре (см. Дж. Альтон, Л.М. Джонс «Методы лабораторных исследований по бруцеллезу», ВОЗ, Женева, 1968, стр. 77-79). Ингредиенты, входящие в первые две среды, в нашей стране не выпускают, а применение агара-заменителя Альбими в производстве вакцины нерационально из-за недостаточного выхода бакмассы. На других питательных средах (печеночные, мясные, картофельные среды, эритритагар, агар Д и т.д.), применяемых для культивирования бруцелл (см. кн. “Бруцеллез”, под ред. П.А. Вершиловой, М., 1961, стр. 208-210), штамм Rev-1 растет плохо и диссоциирует.

Известен способ получения живой вакцины из штамма В.melitensis Rev-1, заключающийся в выращивании его на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона (см. Производство вакцины Rev-1. G.G. Alton WHO/Bruc. 70.321; Питательная среда для изготовления вакцины из штамма B.melitensis Rev-1. Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротестсистем. Мат. междунар. науч. конф., посвящ. 70-летию НПО «Питательные среды», Махачкала, 1998, с. 116-117). Недостатком данного способа является необходимость добавления в питательную среду перед засевом культуры бруцелл штамма Rev-1 до 10% стерильной сыворотки крови животных, а также то, что основой среды служат мясной бульон и пептон.

Изготовление питательной среды на основе высокоценного пищевого продукта — мяса экономически не оправдано, а добавление дефицитной и дорогостоящей сыворотки крови, помимо экономической нецелесообразности, вызывает дополнительные трудности, связанные со стерильным внесением ее в готовую среду и возможностью загрязнения вакцины посторонней микрофлорой.

Целью настоящего изобретения является разработка способа изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма Rev-1, состоящей из типичных для данного штамма однородных клеток бруцелл в S-форме и не имеющей диссоциированных микроорганизмов с использованием питательной среды, изготовленной из непищевого сырья и без добавления сыворотки крови животных.

Поставленная цель достигается тем, что для изготовления вакцины с целью увеличения выхода микробной массы и во избежание диссоциации бруцелл, культуру штамма В.melitensis Rev-1 выращивают на питательной среде, основой которой является панкреатический гидролизат казеина с добавлением в качестве источника витаминов и других ростовых факторов экстракта кормовых или хлебных дрожжей.

Питательная среда состоит из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара. При выращивании на такой питательной среде достигается лучший рост бруцелл штамма Rev-1, больший выход бактериальной массы без диссоциированных клеток и обладающий лучшей жизнеспособностью, а также высокими иммуногенными свойствами.

Приготовление гидролизата казеина

Сухой казеин в количестве 1 кг заливают 10 литрами теплой дистиллированной воды, подщелачивают до рН — 8,5-9,0 и оставляют на несколько часов для разбухания. Затем при постоянном перемешивании подогревают до 80-90°C и температуру в этих пределах поддерживают до растворения казеина. В процессе растворения казеина рН смеси снижается, и поэтому периодически добавляют 20% раствор щелочи (NaOH) для поддержания рН на уровне 8,5-9,0 до полного растворения казеина.

Полученный раствор остужают до 45°C и к нему добавляют 50-100 г в зависимости от активности, панкреатина или же фарш поджелудочной железы крупного рогатого скота в количестве 0,5-1 кг.

Гидролиз проводят в течение 3-4 часов при температуре 45°C при постоянном перемешивании, поддерживая рН на уровне 8,5-9,0. Содержание аминного азота в готовом гидролизате должно быть 600-800 мг %.

При медленном гидролизе и содержании аминного азота менее 600 мг % панкреатин добавляют повторно.

По достижении аминного азота до 600-800 мг % гидролиз прекращают добавлением 100-120 мг уксусной кислоты.

Гидролизат кипятят в течение 10 минут, после чего его охлаждают и оставляют до следующего дня для отстаивания.

Отстоявшийся гидролизат декантируют и фильтруют через ватно-марлевой фильтр.

Приготовление экстракта дрожжей

Берут 1 кг светлых сортов кормовых или прессованных пекарских дрожжей и добавляют к ним 10 литров дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят в течение 10-15 минут и в горячем виде фильтруют до прозрачности.

Приготовление питательной среды

Для изготовления среды смешивают панкреатический гидролизат казеина и экстракт дрожжей в равных количествах и разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг %.

Смесь подогревают и после закипания к ней добавляют предварительно вымоченный в воде в течение 12 часов Корсаковский агар-агар высшего или первого сорта из расчета 3-3,5% для четвертей или матровых колб и 2% для пробирок и чашек.

После полного расплавления агар-агара в среду вносят 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы и 2% глицерина, доводят рН до 7,2-7,3 и, периодически перемешивая, ее кипятят еще 10-15 минут. Затем питательную среду фильтруют через ватный или полотняный фильтр, разливают в матровые колбы, четверти или другие необходимые емкости и стерилизуют при температуре 110-112°C в течение 30 минут.

После стерилизации матровые колбы ставятся в горизонтальном положении для застывания агара, а четверти обкатывают для распределения питательной среды по всей их внутренней поверхности.

До засева вакцинной культуры питательную среду в колбах, четвертях, чашках и пробирках выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C для подсушивания поверхности и контроля стерильности.

Выращивание культуры Rev-1 для получения вакцины проводят на вышеуказанной питательной среде в матровых колбах, четвертях, пробирках или других емкостях.

Для засева серии вакцинной культуры проводят предварительную расплодку штамма в пробирках, матровых колбах или четвертях.

Вначале производственный штамм Rev-1 засевают в пробирки на косой агар. Берут одну пробирку 3-4-суточного роста эталонной культуры, разводят стерильным буферным раствором рН 6,6-6,8 так, чтобы получилась концентрация 10 -6 и 10 -7 .

Из каждого разведения 0,1 мл культуры штамма засевают по 3 бактериологические чашки.

Через 5 суток выращивания в термостате при температуре 37°C чашки просматривают на чистоту и типичность роста культуры, проверяют морфологию клеток и на диссоциацию методом окраски колоний по Уайт -Уильсону.

При отсутствии диссоциации из неокрашенных, бактериологических чашек отбирают типичные колонии, которые отсевают на пробирки с косым агаром. После выдерживания посевов в течение 48 часов в термостате при температуре 37°C и проверки на чистоту культуру пересевают на требуемое количество пробирок с той же питательной средой. Пробирки выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C. Из этих пробирок получают рабочие культуры штамма Rev-1, используемые для засева очередных серий вакцины.

Пробирки с рабочей культурой штамма Rev-1 хранят в запаянном виде в холодильнике при температуре +4-8°С и пригодны для использования в течение 30 дней.

Для получения взвеси клеток с целью засева серии вакцины необходимо рабочие культуры размножить в нужном количестве в пробирках, матровых колбах или четвертях, смыть стерильным, забуферным (рН 6,6-6,8) физраствором так, чтобы получилась концентрация 2-3 млрд микробов, тел в 1 мл по оптическому бруцеллезному стандарту мутности. Такой расплодкой в количестве 4-5 мл засевают матровые колбы (матрасы) или четверти данной серии.

Выращивание культуры B. melitensis Rev-1 для получения вакцины на вышеуказанной питательной среде проводят в течение 72 часов при температуре 37°С. Выросшую вакцинную культуру, с поверхности агара, смывают средой высушивания.

Среду высушивания готовят следующим образом: в 1 литре кипящей дистиллированной воды растворяют 15 г желатина, после ее растворения добавляют 100 г сахарозы. Затем кипятят 5-6 минут, доводят рН до 7,2-7,3, фильтруют через полотняный фильтр, стерилизуют при 1 атмосфере 30 минут. После стерилизации среда должна иметь рН 6,8-7,0.

В каждую колбу или четверть вводят такое количество среды высушивания, чтобы концентрация бакмассы была в пределах 80-140 млрд микробных тел в 1 мл.

Суспензию бруцелл, полученную из колб или четвертей сливают в общую бутыль. После проверки на чистоту и диссоциацию расфасовывают в ампулы по 2 или 4 мл и подвергают лиофильной сушке.

Предлагаемый способ изготовления вакцины обеспечивает, по сравнению с существующим, увеличение выхода препарата в 1,2-1,3 раза. Полученная при этом вакцина состоит из однородных клеток в S-форме, типичной для штамма Rev-1 морфологии, и не имеющих признаков диссоциации.

Предлагаемая питательная среда, изготовленная на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта дрожжей, разлитая по 250,0 мл в 10 матровых колб, была испытана для изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма B. melitensis Rev-1.

Для сравнения результатов культуру штамма B. melitensis Rev-1 для изготовления вакцины выращивали и на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона с добавлением 10% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота. Данную питательную среду разливали в матровые колбы также по 250,0 мл в каждую колбу. Засевали культурой B. melitensis Rev-1 10 матровых колб со средой.

Культуру B. melitensis Rev-1 на обеих питательных средах выращивали при температуре 36-37°С в течение 72 часов. Основные данные, характеризующие результаты использования обеих питательных сред для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 и изготовления из этого штамма вакцины против бруцеллеза овец и коз, представлены в следующей таблице.

Таблица. Основные результаты выращивания культуры штамма Brucella melitensis Rev-1 для получения бакмассы и изготовления вакцины против бруцеллеза овец и коз при использовании испытуемой питательной среды (новый вариант) и ранее применявшейся питательной среды (старый вариант).

Таким образом, в результате проведенных исследований по испытанию предлагаемой нами питательной среды, изготовленной на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта хлебных дрожжей, установлены пригодность данной среды и целесообразность ее применения для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 при изготовлении из этого штамма живой вакцины против бруцеллеза овец и коз. При этом показано, что применение указанной питательной среды позволяет получить бакмассу бруцелл штамма Rev-1 типичной для данного штамма морфологии в S-форме, не содержащую диссоциированных микробных клеток и 1,2 раза больше, чем при применении сывороточно-декстрозного агара, изготовленного на основе мясопептонного бульона с добавлением 10% сыворотки крови крупного рогатого скота.

Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающий посев и выращивание бруцелл штамма B. melitensis Rev-1 на питательной среде, состоящей из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара, их смыв, разбавление средой высушивания до содержания 80-140 млрд микробных клеток в 1 мл, расфасовку в ампулы и лиофильную сушку.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Бруцеллез — зоонозная инфекционная болезнь человека при контакте с больным животным или его выделениями, а также при употреблении инфицированного не пастеризованного молока или молочных продуктов. Вакцина против бруцеллеза необходима для профессиональных групп (лица старше 18 лет). Цель вакцинации — профилактика бруцеллеза козье-овечьего типа.

Вакцина бруцеллезная живая сухая — лиофилизированная культура живых микробов вакцинного штамма бруцеллы Brucella abortus 19 ВА, имеет вид однородной массы белого или желтоватого цвета. Форма выпуска: по 1 мл (4-10 накожных доз) в ампуле. Упаковка — 5 ампул. Срок годности 3 года. Хранят и транспортируют при температуре до 8°.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8]

Реакции на введение вакцины против бруцеллеза обычно незначительны. Местная реакция при накожной вакцинации может появиться через 24-48 ч в виде гиперемии, инфильтрата или розово-красных узелков по ходу насечек. При подкожном введении через 12-24 ч на месте инъекции могут появиться гиперемия, инфильтрат диаметром до 25 мм, слабая болезненность. Общая реакция возникает в первые сутки у 1-2 % привитых и выражается недомоганием, головной болью, повышением температуры тела до 37,5-38°.

Помимо общих для всех прививок, противопоказаниями являются:

• Бруцеллез и бруцеллез у детей в анамнезе, положительная серологическая или кожно-аллергическая реакция на бруцеллез.
• Системные заболевания соединительной ткани.
• Распространенные рецидивирующие заболевания кожи.
• Аллергические заболевания (бронхиальная астма, анафилактический шок, отек Квинке) в анамнезе.

Вакцина против бруцеллеза проводится не позднее, чем за 3-4 недели до начала работы, связанной с риском заражения (время развития иммунитета), максимум напряженности длится 5-6 месяцев, продолжительность — 10-12 мес. Перед прививкой определяют специфический иммунитет одной из серологических или кожно-аллергических реакций. Прививкам подлежат только лица с отрицательной реакцией.

Вакцинацию проводят в область наружной поверхности плеча на границе между верхней и средней третью однократно накожно или подкожно. Одна доза при накожном введении составляет 2 капли и содержит 1-10 10 микробных клеток, при подкожном ведении — 0,5 мл и содержит 4-10 8 микробных клеток. Ревакцинацию проводят через 10-12 мес. накожно, используя половинную дозу (5-10 9 ). Разведенная вакцина, сохраняемая с соблюдением правил асептики, может быть использована в течение 2 ч.

Допускается одновременная накожная вакцинация против бруцеллеза с прививками против одной из следующих инфекций: Ку-риккетсиоза, туляремии и чумы.

Накожную вакцинацию проводят через 2 капли вакцины, нанесенных на расстоянии 30-40 мм друг от друга; вакцину разводят из расчета 0,1 мл физраствора на 1 прививочную дозу. Делают 6 насечек (3 продольных и 3 поперечных) по 10 мм каждая с расстоянием в 3 мм между ними, вакцину втирают в течение 30 сек и дают подсохнуть 5 мин. При ревакцинации через 1 каплю делают 6 насечек.

Подкожная вакцинация: прививочная доза в 25 раз меньше; вакцину разводят из расчета 12,5 мл физраствора на 1 дозу вакцины для накожного применения. Вакцина против бруцеллеза вводится в объеме 0,5 мл.

источник

Вакцина бруцеллезная живая сухая
Инструкция по медицинскому применению — РУ № Р N003612/01

Дата последнего изменения: 28.04.2017

Лиофилизат для приготовления суспензии для подкожного введения и накожного скарификационного нанесения.

Одна доза вакцины для подкожного введения взрослым содержит от 3,4 х 108 до 4,6 х 108 живых микробных клеток (м.к.) в 0,5 мл, для накожного скарификационного нанесения — от 4 х 109 до 1,6 х Ю10 живых м.к. в 0,1 мл растворителя. В зависимости от количества живых микробных клеток в ампуле должно содержаться от 4 до 10 накожных доз.

В одной дозе вакцины для накожного скарификационного нанесения, содержатся стабилизаторы: сахароза — 0,015 г, натрия глутамата моногидрат — 0,00225 г, тиомочевина -0,00075 г, желатин — 0,00225 г.

Имеет вид пористой массы белого или белого с желтоватым оттенком цвета.

Препарат представляет собой лиофилизированную культуру живых микробов вакцинного штамма Brucella abortus 19 BA.

Вакцина через 20-30 дней после прививки обеспечивает развитие иммунитета продолжительностью 10-12 месяцев, максимальная напряженность иммунитета сохраняется 5-6 месяцев.

Профилактика бруцеллеза козье-овечьего типа у взрослых.

Прививкам подлежат лица, выполняющие следующие работы:

• по заготовке, хранению, обработке сырья и продуктов животноводства, полученных из хозяйств, где регистрируются заболевания скота бруцеллезом;
• по убою скота, больного бруцеллезом, по заготовке и переработке полученных от него мяса и мясопродуктов.

Животноводы, ветеринарные работники, зоотехники в хозяйствах энзоотичных по бруцеллезу.

Лица, работающие с живыми культурами возбудителя бруцеллеза.

• Перенесенный бруцеллез в анамнезе. Положительная серологическая или кожноаллергическая реакция на бруцеллез.
• Острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения — прививки проводят не ранее, чем через 1 мес. после выздоровления (ремиссии).
• Первичные и вторичные иммунодефициты. При лечении стероидами, антиметаболитами, химио- и рентгенотерапии прививки проводят не ранее, чем через 6 мес. после окончания лечения.
• Системные заболевания соединительной ткани.
• Злокачественные новообразования и злокачественные болезни крови.
• Распространенные рецидивирующие заболевания кожи.
• Аллергические заболевания (бронхиальная астма, анафилактический шок, отек Квинке в анамнезе).
• Беременность и период лактации.

Применение препарата противопоказано.

Вакцинацию проводят однократно накожно или подкожно. Одна доза при накожном введении составляет 2 капли (0,1 мл) и содержит 1х10 10 м.к., при подкожном введении составляет 0,5 мл и содержит 4х10 8 м.к. Ревакцинацию проводят по показаниям через 10-12 мес. накожно, используя половинную дозу, которая составляет 1 каплю (0,05 мл) и содержит 5 х 10 9 м.к.

С целью выявления противопоказаний врач (фельдшер) в день прививки проводит опрос и осмотр прививаемого с обязательной термометрией. При температуре выше 37°С прививка откладывается. В случае необходимости проводят необходимое лабораторное обследование.

Перед каждой прививкой у вакцинируемого в обязательном порядке определяют наличие специфического иммунитета с помощью одной из серологических или кожно-аллергических реакций. Прививкам подлежат лица с отрицательной реакцией.

Прививки следует проводить не позднее, чем за 3-4 недели до начала работы, связанной с риском заражения.

Проведенную прививку регистрируют в установленных учетных формах с указанием наименования препарата, даты прививки, дозы, названия предприятия- изготовителя препарата, номера серии, реакции на прививку.

Вакцинация накожным способом

Препарат растворяют натрия хлорида раствором для инъекций 0,9%, который вносят в ампулу стерильным шприцем с иглой из расчета 0,1 мл на одну прививочную дозу. Ампулу встряхивают до образования равномерной суспензии. Время растворения вакцины не должно превышать 1 мин. Растворимый препарат не должен содержать осадков или хлопьев. Место прививки — наружную поверхность средней трети плеча — обрабатывают спиртом или смесью спирта с эфиром; применение других дезинфицирующих средств не допускается. После испарения спирта и эфира, не прикасаясь к коже, наносят две капли вакцины на расстоянии 30-40 мм друг от друга, кожу натягивают и стерильным скарификатором проводят через каждую нанесенную каплю вакцины 6 насечек (3 продольные и 3 поперечные) длиной 10 мм каждая с расстоянием между насечками 3 мм. Насечки не должны кровоточить, кровь должна выступать только росинками.

Плоской стороной скарификатора втирают вакцину в насечки в течение 30 сек и дают подсохнуть 5 мин.

При ревакцинации применяют половинную дозу, т.е. 1 каплю вакцины, через которую делают 6 насечек.

Вакцинация подкожным способом

Прививочная доза препарата при этом способе в 25 раз меньше, чем при накожной вакцинации; разведение вакцины производят из расчета 12,5 мл натрия хлорида раствора для инъекций 0,9% на одну дозу вакцины для накожного скарификационного нанесения (подкожная доза — 0,5 мл х 25 = 12,5 мл).

Препарат растворяют так же, как для накожной вакцинации, после чего полученную суспензию переносят в стерильный флакон для инъектора, в который вносят необходимый объем растворителя (например, если в ампуле содержится 7 накожных доз вакцины, то содержимое должно быть суспендированным в 12,5 мл х 7, т.е. в 87,5 мл).

Вакцину вводят инъектором, рассчитанном на подкожное введение (БИ-ЗМ или противоинфекционным протектором ППИ-2), согласно Инструкции по применению инъектора в объеме 0,5 мл.

Прививки проводят в область наружной поверхности плеча на границе между верхней и средней третью. Место введения обрабатывают так же, как и при накожной прививке.

Местная и общая реакция на вакцинацию незначительны. Местная реакция при накожной прививке может появиться через 24-48 ч в виде гиперемии, инфильтрата кожи или в виде розово-красных узелков по ходу насечек, иногда сливающихся в валик или образующихся небольшую припухлость. При безыгольном методе введения через 12-24 ч на месте инъекции могут появиться гиперемия, инфильтрат диаметром до 25 мм, слабая болезненность. Общая реакция возникает в первые сутки у 1-2% привитых и выражается недомоганием, головной болью, повышением температуры тела до 37,5 — 38°С.

Прививки против бруцеллеза проводят не ранее, чем через 1 мес. после других профилактических прививок или за 1 мес. до них.

Допускается одновременная накожная вакцинация живыми вакцинами против бруцеллеза с прививками против одной из следующих инфекций: ку-риккетсиоза, туляремии и чумы.

Ампулы с неиспользованной вакциной инактивируют кипячением в течение 30 мин, после чего утилизируют в соответствии с СанПиНом 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений».

Сведения о возможном влиянии лекарственного препарата на способность управлять транспортными средствами, механизмами

Лиофилизат для приготовления суспензии для подкожного введения и накожного скарификационного нанесения. По 4-10 накожных доз в ампуле. По 5 ампул в пачке вместе с инструкцией по применению и ножом ампульным или скарификатором ампульным.

При упаковке ампул с кольцом или точкой для вскрытия нож ампульный или скарификатор ампульный не вкладывают.

В соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8°С.

В соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8°С в недоступном для детей месте.

3 года. Препарат с истекшим сроком годности применению не подлежит.

источник

Бруцеллез – зоонозная инфекция, которая вызывается бактерией из рода Brucella. Человек заражается инфекцией через контаминированные продукты питания, посредством контакта с больным животным. Возбудитель заболевания – внутриклеточная бактерия, которая размножается в репродуктивных органах, часто вызывая стерильность. За один год инфекцией заражается около полмиллиона человек. Особый интерес бруцеллез вызывает в связи со стремительным развитием туризма и миграции. Для иммунопрофилактики этой опасной инфекции исследователями разработана вакцина бруцеллезная живая сухая для профилактики бруцеллеза.

Вакцина для иммунопрофилактики бруцеллеза содержит в себе культуру живых бактерий специального штамма. Она представлена в виде лиофилизата. Внешне содержимое имеет белый или желтоватый оттенок. Кроме действующего компонента, в состав также входят дополнительные вещества. Это сахароза, желатин, тиомочевина. Они используются в качестве консерванта для хранения вакцины.

Прививка от бруцеллеза выпускается в ампулах. Одна ампула содержит от четырех до шести доз для иммунизации. Препарат выпускают в картонных упаковках по пять ампул в каждой.

Вакцина создает в теле человека условия, подобные тем, которые возникают при настоящем заболевании. Главная задача иммунопрофилактики – создание эффективного иммунитета против инфекции. Это реализуется через выработку антител – веществ биологического происхождения, которые связывают патологические антигены бактерий и выводят их из организма. Процесс выработки антител называют иммунным ответом. Он состоит из нескольких этапов:

• Первый — распознавание антигенов бактерий, которые ввели в тело при вакцинации. В месте укола возникает незначительный воспалительный процесс, который вызывает реакцию иммунной системы. В очаг воспаления мигрируют иммунные клетки. Они поглощают бактерии, затем происходтт процесс их ферментации. В результате антигены в чистом виде выносятся на поверхность данных клеток для распознавания их лимфоцитами.
• На втором этапе происходит активация гуморального звена иммунной системы. В результате этого В-лимфоциты превращаются в плазматические клетки. Последние способны вырабатывать антитела против бактерий бруцеллеза.
• Третий этап – иммунологической памяти. Сведения об антигенах бактерий сохраняют специальные клетки памяти. Феномен иммунологической памяти позволяет при последующей встрече с настоящим возбудителем быстро отреагировать, распознать его и выработать необходимое количество защитных антител.

После прививания в теле человека создается приобретенный стойкий иммунитет против бруцеллеза. Первые антитела начинают вырабатываться после двух недель с момента вакцинации. Их пик припадает на четвертый – пятый месяц. Иммунопрофилактика обеспечивает защиту организма приблизительно на один год.

Иммунопрофилактика бруцеллеза показана отдельным категориям населения, профессия которых подвергает их риску возникновения заболевания. К ним относят:

• Работники предприятий по обработке сырья животноводства, на которых регистрируются вспышки бруцеллеза среди скота.
• Зоотехники.
• Ветеринарные врачи.
• Лица, которые работают с живыми культурами бактерий бруцеллеза.

Вакцинация от бруцеллеза не требует особой подготовки пациента, однако специалисты рекомендуют придерживаться нескольких советов. Во-первых, вакцинацию проводят при отсутствии заболеваний в острой фазе или при достижении стойкой ремиссии. Во-вторых, накануне вакцинации не употреблять аллергенную пищу: цитрусовые, орехи, мед, шоколад. В-третьих, перед иммунопрофилактикой необходимо ограничить количество контактов с людьми.

Проведение термометрии – обязательное условие перед проведением любой вакцинации. Доктор проводит опрос и осмотр пациента с целью диагностики и выявления противопоказаний. Процедура прививания от бруцеллеза имеет один специфический момент. Это проведение теста на наличие иммунитета от данной болезни. Для этого используют серологические или кожно-аллергические реакции. Иммунопрофилактику проводят только при отрицательном результате. Существует два способа вакцинации от бруцеллеза:

• Накожный. Прививочная доза составляет 0,1 миллилитра. Кожу в месте инъекции обрабатывают раствором антисептика. После высыхания на нее наносят две капли вакцины на расстоянии 3-4 сантиметра. Затем стерильным скарификатором сквозь капли делают шесть накожных насечек (по три продольных и поперечных). Препарат впитывается в эти участки.
• При внутрикожном способе концентрация действующего вещества в двадцать пять раз меньше, чем при накожном. Вакцину вводят внутрикожно в область внешней поверхности средней трети плеча.

При ревакцинации используют половинные дозы, применяемые при первичной вакцинации.

Важно! При проведении накожной вакцинации из насечек должны проявляться капли крови в виде росы, но не более

Существуют состояния, при которых вакцинация от бруцеллеза противопоказана. К ним относят:

• Перенесенный бруцеллез в прошлом.
• Положительная одна из проб на бруцеллез, проведенная перед прививанием.
• Наличие заболевания в острой форме.
• Состояния с выраженным иммунодефицитом.
• Прием иммуносупрессивных препаратов: гормонов, цитостатиков, химиопрепаратов.
• Заболевания соединительной ткани.
• Онкологические процессы, болезни крови.

Иммунопрофилактика бруцеллеза противопоказана в период беременности и лактации.

Побочные и поствакцинальные реакции при прививании от бруцеллеза регистрируются очень редко. К ним относят недомогание, повышение температуры до субфебрильных цифр. Иногда возникает головная боль, аллергические реакции в виде крапивницы, зуда.

Совет врача. Покраснение, незначительное уплотнение и отек в месте введения препарата – это нормальная реакция, которая свидетельствует, что образовался локальный воспалительный процесс, который помогает иммунной системе быстрее распознать антигены

Препарат нельзя использовать на фоне применения средств, которые обладают выраженными иммуносупрессивными свойствами: цитостатиками, глюкокортикоидами. Прививку делают за месяц до или после использования иной вакцины. Разрешается параллельная иммунизация от бруцеллеза, ку-риккетсиоза, чумы и туляремии.

Вакцину хранят согласно условиям транспортировки и хранения иммунобиологических препаратов. Они предусматривают хранение при температуре от плюс двух до восьми градусов по Цельсию. Не допускается попадание на препарат прямых солнечных или ультрафиолетовых лучей. Максимальный срок хранения – три года.

источник

Владельцы патента RU 2642316:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота из штамма Brucella melitensis Rev-1. Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота предусматривает посев и выращивание штамма Brucella melitensis Rev-1 на питательной среде, содержащей панкреатический гидролизат казеина глубокой степени расщепления, экстракта дрожжей, натрий хлористый, глюкозу, глицерин и агар-агар в заданном соотношении компонентов в течение 72 часов при 37°C. Выросшую вакцинную культуру смывают с поверхности агара средой высушивания и доводят до концентрации 80-140 млрд м.к. в 1 мл. Проверяют на чистоту и диссоциацию, расфасовывают в ампулы и подвергают лиофильной сушке. Изобретение позволяет увеличить выход штамма Brucella melitensis Rev-1 в S-форме. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к изготовлению вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота.

В настоящее время для профилактики бруцеллеза овец и коз широко используют вакцину, изготовленную из штамма Brucella melitensis Rev-1.

Выращивание штамма Rev-1 при изготовлении вакцины проводят на триптиказо-соевом агаре, агаре Альбими, сывороточно-декстрозном агаре (см. Дж. Альтон, Л.М. Джонс «Методы лабораторных исследований по бруцеллезу», ВОЗ, Женева, 1968, стр. 77-79). Ингредиенты, входящие в первые две среды, в нашей стране не выпускают, а применение агара-заменителя Альбими в производстве вакцины нерационально из-за недостаточного выхода бакмассы. На других питательных средах (печеночные, мясные, картофельные среды, эритритагар, агар Д и т.д.), применяемых для культивирования бруцелл (см. кн. “Бруцеллез”, под ред. П.А. Вершиловой, М., 1961, стр. 208-210), штамм Rev-1 растет плохо и диссоциирует.

Известен способ получения живой вакцины из штамма В.melitensis Rev-1, заключающийся в выращивании его на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона (см. Производство вакцины Rev-1. G.G. Alton WHO/Bruc. 70.321; Питательная среда для изготовления вакцины из штамма B.melitensis Rev-1. Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротестсистем. Мат. междунар. науч. конф., посвящ. 70-летию НПО «Питательные среды», Махачкала, 1998, с. 116-117). Недостатком данного способа является необходимость добавления в питательную среду перед засевом культуры бруцелл штамма Rev-1 до 10% стерильной сыворотки крови животных, а также то, что основой среды служат мясной бульон и пептон.

Изготовление питательной среды на основе высокоценного пищевого продукта — мяса экономически не оправдано, а добавление дефицитной и дорогостоящей сыворотки крови, помимо экономической нецелесообразности, вызывает дополнительные трудности, связанные со стерильным внесением ее в готовую среду и возможностью загрязнения вакцины посторонней микрофлорой.

Целью настоящего изобретения является разработка способа изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма Rev-1, состоящей из типичных для данного штамма однородных клеток бруцелл в S-форме и не имеющей диссоциированных микроорганизмов с использованием питательной среды, изготовленной из непищевого сырья и без добавления сыворотки крови животных.

Поставленная цель достигается тем, что для изготовления вакцины с целью увеличения выхода микробной массы и во избежание диссоциации бруцелл, культуру штамма В.melitensis Rev-1 выращивают на питательной среде, основой которой является панкреатический гидролизат казеина с добавлением в качестве источника витаминов и других ростовых факторов экстракта кормовых или хлебных дрожжей.

Питательная среда состоит из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара. При выращивании на такой питательной среде достигается лучший рост бруцелл штамма Rev-1, больший выход бактериальной массы без диссоциированных клеток и обладающий лучшей жизнеспособностью, а также высокими иммуногенными свойствами.

Приготовление гидролизата казеина

Сухой казеин в количестве 1 кг заливают 10 литрами теплой дистиллированной воды, подщелачивают до рН — 8,5-9,0 и оставляют на несколько часов для разбухания. Затем при постоянном перемешивании подогревают до 80-90°C и температуру в этих пределах поддерживают до растворения казеина. В процессе растворения казеина рН смеси снижается, и поэтому периодически добавляют 20% раствор щелочи (NaOH) для поддержания рН на уровне 8,5-9,0 до полного растворения казеина.

Полученный раствор остужают до 45°C и к нему добавляют 50-100 г в зависимости от активности, панкреатина или же фарш поджелудочной железы крупного рогатого скота в количестве 0,5-1 кг.

Гидролиз проводят в течение 3-4 часов при температуре 45°C при постоянном перемешивании, поддерживая рН на уровне 8,5-9,0. Содержание аминного азота в готовом гидролизате должно быть 600-800 мг %.

При медленном гидролизе и содержании аминного азота менее 600 мг % панкреатин добавляют повторно.

По достижении аминного азота до 600-800 мг % гидролиз прекращают добавлением 100-120 мг уксусной кислоты.

Гидролизат кипятят в течение 10 минут, после чего его охлаждают и оставляют до следующего дня для отстаивания.

Отстоявшийся гидролизат декантируют и фильтруют через ватно-марлевой фильтр.

Приготовление экстракта дрожжей

Берут 1 кг светлых сортов кормовых или прессованных пекарских дрожжей и добавляют к ним 10 литров дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят в течение 10-15 минут и в горячем виде фильтруют до прозрачности.

Приготовление питательной среды

Для изготовления среды смешивают панкреатический гидролизат казеина и экстракт дрожжей в равных количествах и разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг %.

Смесь подогревают и после закипания к ней добавляют предварительно вымоченный в воде в течение 12 часов Корсаковский агар-агар высшего или первого сорта из расчета 3-3,5% для четвертей или матровых колб и 2% для пробирок и чашек.

После полного расплавления агар-агара в среду вносят 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы и 2% глицерина, доводят рН до 7,2-7,3 и, периодически перемешивая, ее кипятят еще 10-15 минут. Затем питательную среду фильтруют через ватный или полотняный фильтр, разливают в матровые колбы, четверти или другие необходимые емкости и стерилизуют при температуре 110-112°C в течение 30 минут.

После стерилизации матровые колбы ставятся в горизонтальном положении для застывания агара, а четверти обкатывают для распределения питательной среды по всей их внутренней поверхности.

До засева вакцинной культуры питательную среду в колбах, четвертях, чашках и пробирках выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C для подсушивания поверхности и контроля стерильности.

Выращивание культуры Rev-1 для получения вакцины проводят на вышеуказанной питательной среде в матровых колбах, четвертях, пробирках или других емкостях.

Для засева серии вакцинной культуры проводят предварительную расплодку штамма в пробирках, матровых колбах или четвертях.

Вначале производственный штамм Rev-1 засевают в пробирки на косой агар. Берут одну пробирку 3-4-суточного роста эталонной культуры, разводят стерильным буферным раствором рН 6,6-6,8 так, чтобы получилась концентрация 10 -6 и 10 -7 .

Из каждого разведения 0,1 мл культуры штамма засевают по 3 бактериологические чашки.

Через 5 суток выращивания в термостате при температуре 37°C чашки просматривают на чистоту и типичность роста культуры, проверяют морфологию клеток и на диссоциацию методом окраски колоний по Уайт -Уильсону.

При отсутствии диссоциации из неокрашенных, бактериологических чашек отбирают типичные колонии, которые отсевают на пробирки с косым агаром. После выдерживания посевов в течение 48 часов в термостате при температуре 37°C и проверки на чистоту культуру пересевают на требуемое количество пробирок с той же питательной средой. Пробирки выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C. Из этих пробирок получают рабочие культуры штамма Rev-1, используемые для засева очередных серий вакцины.

Пробирки с рабочей культурой штамма Rev-1 хранят в запаянном виде в холодильнике при температуре +4-8°С и пригодны для использования в течение 30 дней.

Для получения взвеси клеток с целью засева серии вакцины необходимо рабочие культуры размножить в нужном количестве в пробирках, матровых колбах или четвертях, смыть стерильным, забуферным (рН 6,6-6,8) физраствором так, чтобы получилась концентрация 2-3 млрд микробов, тел в 1 мл по оптическому бруцеллезному стандарту мутности. Такой расплодкой в количестве 4-5 мл засевают матровые колбы (матрасы) или четверти данной серии.

Выращивание культуры B. melitensis Rev-1 для получения вакцины на вышеуказанной питательной среде проводят в течение 72 часов при температуре 37°С. Выросшую вакцинную культуру, с поверхности агара, смывают средой высушивания.

Среду высушивания готовят следующим образом: в 1 литре кипящей дистиллированной воды растворяют 15 г желатина, после ее растворения добавляют 100 г сахарозы. Затем кипятят 5-6 минут, доводят рН до 7,2-7,3, фильтруют через полотняный фильтр, стерилизуют при 1 атмосфере 30 минут. После стерилизации среда должна иметь рН 6,8-7,0.

В каждую колбу или четверть вводят такое количество среды высушивания, чтобы концентрация бакмассы была в пределах 80-140 млрд микробных тел в 1 мл.

Суспензию бруцелл, полученную из колб или четвертей сливают в общую бутыль. После проверки на чистоту и диссоциацию расфасовывают в ампулы по 2 или 4 мл и подвергают лиофильной сушке.

Предлагаемый способ изготовления вакцины обеспечивает, по сравнению с существующим, увеличение выхода препарата в 1,2-1,3 раза. Полученная при этом вакцина состоит из однородных клеток в S-форме, типичной для штамма Rev-1 морфологии, и не имеющих признаков диссоциации.

Предлагаемая питательная среда, изготовленная на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта дрожжей, разлитая по 250,0 мл в 10 матровых колб, была испытана для изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма B. melitensis Rev-1.

Для сравнения результатов культуру штамма B. melitensis Rev-1 для изготовления вакцины выращивали и на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона с добавлением 10% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота. Данную питательную среду разливали в матровые колбы также по 250,0 мл в каждую колбу. Засевали культурой B. melitensis Rev-1 10 матровых колб со средой.

Культуру B. melitensis Rev-1 на обеих питательных средах выращивали при температуре 36-37°С в течение 72 часов. Основные данные, характеризующие результаты использования обеих питательных сред для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 и изготовления из этого штамма вакцины против бруцеллеза овец и коз, представлены в следующей таблице.

Таблица. Основные результаты выращивания культуры штамма Brucella melitensis Rev-1 для получения бакмассы и изготовления вакцины против бруцеллеза овец и коз при использовании испытуемой питательной среды (новый вариант) и ранее применявшейся питательной среды (старый вариант).

Таким образом, в результате проведенных исследований по испытанию предлагаемой нами питательной среды, изготовленной на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта хлебных дрожжей, установлены пригодность данной среды и целесообразность ее применения для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 при изготовлении из этого штамма живой вакцины против бруцеллеза овец и коз. При этом показано, что применение указанной питательной среды позволяет получить бакмассу бруцелл штамма Rev-1 типичной для данного штамма морфологии в S-форме, не содержащую диссоциированных микробных клеток и 1,2 раза больше, чем при применении сывороточно-декстрозного агара, изготовленного на основе мясопептонного бульона с добавлением 10% сыворотки крови крупного рогатого скота.

Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающий посев и выращивание бруцелл штамма B. melitensis Rev-1 на питательной среде, состоящей из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара, их смыв, разбавление средой высушивания до содержания 80-140 млрд микробных клеток в 1 мл, расфасовку в ампулы и лиофильную сушку.

источник