Вакцина предназначена для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота. Вакцина содержит в качестве антигена инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100. Вакцина содержит также неполный адьювант Фрейнда и физиологический раствор. Использование новой вакцины в ветеринарной практике позволяет в 1,5 — 2 раза повысить эффективность противобруцеллезных мероприятий за счет повышения иммуногености и снижения агглютиногенности вакцины. 2 табл.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к вакцине для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.
Бруцеллез крупного рогатого скота — хроническое зооантропонозное заболевание, распространенное во многих странах мира, наносящее большой экономический ущерб скотоводству и представляющее серьезную опасность здоровью людей.
Основным средством борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота, особенно в зонах его широкого распространения, является вакцинация всего поголовья и своевременное удаление из стада больных животных.
Известна вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая антиген из штамма Brucella abortus 19 и сахарозо-желатиновый стабилизатор [1].
Недостатками данной вакцины являются высокая агглютиногенность, так как в крови животных, иммунизированных данной вакциной в течение нескольких месяцев, а иногда и нескольких лет обнаруживают антитела в принятых для диагностики бруцеллеза серологических реакциях, что препятствует выявлению больных животных в вакцинированном стаде. Вакцину нельзя применять для иммунизации стельных коров, так как она вызывает аборты у отдельных животных.
Известна также вакцина против бруцеллеза сельскохозяйственных животных, преимущественно крупного рогатого скота, содержащая инактивированный антиген из штамма Brucella melitensis N «Невский-13», неполный адъювант Фрейнда и физиологический раствор [2].
Недостатком данной вакцины является то, что в крови иммунизированных животных до 90-120 дней сохраняются агглютинирующие и комплеменсвязывающие антитела, улавливаемые в принятых для диагностики бруцеллеза серологических реакциях, которые препятствуют своевременному выявлению и удалению из стада больных бруцеллезом коров.
Целью изобретения является разработка высокоиммуногенной вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота с низкой антигенной активностью.
Цель достигается тем, что вакцина в качестве антигена содержит инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300-400х10 9 бактерий в 1 см 3 , при следующем соотношении компонентов вакцины, об.%: инактивированная с гидратом окиси алюминия бактериальная масса штамма B.abortus N КВ 17/100 с концентрацией 300х10 9 -400х10 9 микробных клеток в 1 см 3 40-45,0; неполный адъювант Фрейда 50,0-55,0; физиологический раствор остальное.
Для изготовления вакцины используют штамм Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100.
Штамм B. abortus N КВ 17/100 получен путем целенаправленной селекции по антигенности и иммуногенной активности.
Штамм B. abortus депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов, регистрационный номер КВ 17/100 ДЕП.
Штамм B. abortus N КВ 17/100 характеризуется следующими признаками и свойствами.
Бруцеллы штамма — короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные изолированно, попарно и реже в виде коротких цепочек. Без капсулы, спор не образуют. Размер 1,3-1,5 х 0,6-0,8 мкм.
Культура штамма хорошо растет в аэробных условиях на плотных и жидких питательных средах, предназначенных для культивирования бруцелл. На плотных питательных средах (4-5 сут инкубирования при 37-38 o С) растет в виде круглых, плоских, с нечетко контурированным краем, матовых колоний с диаметром 2,5-3,0 мм. При окрашивании раствором кристаллического фиолетового 1/2000 (по Уайт-Вилсону) 100% колоний окрашиваются как R-форма: фиолетовый центр и светлофиолетовый широкий ободок.
На жидких питательных средах на 2-4 сут инкубирования: легкая опалесценция и узкое пристеночное голубоватое кольцо на границе среды.
Культура штамма растет на средах содержащих фуксин, тионин в концентрации 1: 50000, бис-трифенилангидрокарбинола оксалат в концентрации 1:100000 (маркер), пенициллин 5ЕД/см 3 и не растет на среде, содержащей стрептомицина сульфат 5 мкг/см 3 . Продуцирует Н2S (6-8 мм). Лизируется фагом Тб.
Культура штамма агглютинируется R-антибруцеллезной сывороткой и не агглютинируется S-антибруцеллезной сывороткой. Штамм не обладает типоспецифической агглютинабельностью и не агглютинируется А и М монорецепторными сыворотками.
Штамм безвреден для человека и сельскохозяйственных животных.
Остаточная вирулентность: ИД для мышей линии С57 — Блек/6 — 5500 микробных клеток, что соответствует уровню аттенуированных вакцинных штаммов.
Культура штамма защищает от заражения не менее 50% иммунизированных животных.
Пример 1. Штамм Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 культивируют на плотной питательной среде или в ферментере на жидкой питательной среде при 37-38 o С в течение 72 ч.
Выращенную культуру с плотной питательной среды смывают физиологическим раствором, добавляют 0,3-0,5% формалина и 0,3-0,5% гидрата окиси алюминия, формалин и гидрат окиси алюминия вносят в ферментер сразу после окончания культивирования.
После инактивации бактериальную массу отстаивают, декантируют надосадочную жидкость и устанавливают концентрацию бактериальной массы, равную 300-400х10 9 микробных клеток в 1 см 3 . Инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 в количестве 40-45% от объема смешивают с неполным адъювантом Фрейнда в количестве 45-55% от объема с доведением до 100% физиологическим раствором.
Вакцину расфасовывают во флаконы при включенной мешалке. Флаконы закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют.
Расфасованную вакцину проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность.
Готовая вакцина представляет собой однородную водно-масляную эмульсию белого цвета с коричневым или серым оттенком. При длительном хранении возможно незначительное отслоение адъюванта над эмульсией, что не влияет на качество вакцины.
Получают 3 серии вакцины, приведенные в табл. 1.
Пример 2. Определяют антигенную активность адъювант-вакцины.
Морских свинок (10-14 голов в группе) иммунизируют адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серии N 1, 2, 3), полученной по примеру 1; адъювант-вакциной из штамма B.melitensis N Н-13, экспериментальной адъювант-вакциной из штамма B.abortus N 16/4 (штамм в R-форме) и живой противобруцеллезной вакциной из штамма B.abortus N 19.
Адъювант-вакцины вводят в дозе 0,2 см 3 , живую — 1 млрд. микробных клеток в объеме 1 см 3 под кожу в область паха. Через 15, 30 и 60 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют в РА с единым бруцеллезным антигеном (S-антиген). Результаты исследований приведены в табл. 2.
Из табл. 2 следует, что все серии предложенной адъювантвакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 не индуцируют образования агглютининов в сыворотке крови животных и в отличие от адъювант-вакцин из штаммов B.melitensis N «Невский-13», В. abortus N 16/4 и живой вакцины из штамма В.abortus N 19 являются неагглютиногенными, что дает возможность быстро и своевременно выявлять больных вакцинированных животных в случае их заражения. В то же время среднее количество агглютининов в сыворотке крови морских свинок через 15 дней после иммунизации адъювант-вакцинами из штаммов B.melitensis N «Невский-13» — 83,0, B. abortus N 16/4 — 38,3 МЕ/см 3 , а живой вакциной из штамма B. abortus N 19 — 160,0 ME/cм 3 , и в случае заражения больные бруцеллезом животные не могут быть дифференцированы по крайней мере в течение 60 дней от иммунных — незаразившихся, создавая угрозу перезаражения.
Таким образом установлено, что адъювант-вакцина из штамма В.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 не индуцирует синтез S-антител в количестве, улавливаемом реакцией агглютинации с единым бруцеллезным антигеном.
Пример 3. Иммуногенную активность новой адъювант-вакцины, полученной по примеру 1 из штамма B.abortus ВГНКИ N 17/100, сравнивают с вакцинами из штаммов B.melitensis N «Невский-13», B.abortus N 16/4 и живой вакциной из штамма B. abortus N 19. Опыт проводят на морских свинках, привитых аналогично примеру 2.
Через 3 мес после прививки морских свинок заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма В.abortus N 54М/ВГНКИ в дозе 80 микробных клеток (15 ИД50). Спустя 32-35 дней животных убивают и проводят бактериологическое исследование селезенки, печени, костного мозга и лимфатических узлов (всего 10 объектов). Определяют наличие бруцелл вирулентного штамма в лимфатических узлах и внутренних органах животных. Рассчитывают процент защиты (количество незаразившихся животных в процентах от общего их количества в группе) и индекс инфицированности (процентное отношение количества объектов, из которых выделена культура вирулентного штамма, к общему количеству исследованных объектов по группе животных). Результаты исследований приведены в табл. 3.
Таким образом установлено, что адъювант-вакцина из штамма B.abortus ВГНКИ N RD 17/100 всех серий превосходит по иммуногенной активности адъювант-вакцины из штаммов B. melitensis N «Невский-13», B.abortus N 16/4 и не уступает живой вакцине из штамма B.abortus N 19.
Пример 4. Определяют реактогенность адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия N 1) в опыте на телках трех-четырех месячного возраста в сравнении с адъювант-вакциной из штамма B.meliitensis N «Невский-13». Каждую вакцину вводят 10 телкам под кожу в область подгрудка в дозе 3 см 3 . У вакцинированных животных ежедневно в течение 10 дней измеряют температуру тела и площадь припухлости в месте введения вакцины.
У животных, иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100, температура тела повышается на 0,8-1,0 o С и нормализуется к 5-6 дню после вакцинации, отек в месте введения вакцины не превышает 80 см 2 и начинает уменьшаться с 8-10 дня. В группе животных, иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.melitensis N «Невский-13», температура тела повышалась в среднем на 1,2-1,5 o С и приходила в норму к 7-9 дню. Отек тканей в месте введения вакцины в среднем 100-120 см 3 . Заметное уменьшение величины отека отмечают через 15-20 дней после иммунизации.
Таким образом, испытанную вакцину из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 можно отнести к слабореактогенным масляным адъювантвакцинам.
Пример 5. Определяют антигенные свойства адъювант-вакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия 2) в опыте на телках трех-четырех месячного возраста. Вакцину вводят под кожу в область подгрудка в дозе 3 см 3 42 телкам. Через 15 и 30 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном (S-антиген).
Все животные иммунизированные адъювант-вакциной не реагируют на бруцеллез. Пример 6. Определяют антигенные свойства адъювант-вакцины из штамма B. abortus ВГНКИ N КВ 17/100 (серия 3) в опыте на телках 14-17-месячного возраста, ранее иммунизированных живой слабоагглютиногенной вакциной из штамма B.abortus N 82. Адъювант-вакцину в дозе 3 см 3 вводят под кожу в область подгрудка 70 телкам. Через 15 и 30 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют на бруцеллез в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.
Все животные ревакцинированные адъювант-вакциной не реагируют на бруцеллез.
Пример 7. Определяют эффективность адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 для профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота в условиях контролируемого эпизоотологического опыта.
Телок трех-четырех месячного возраста (пример 5) и 14-17-месячного возраста (пример 6), иммунизированных адъювант-вакциной из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100, содержат в условиях хозяйства неблагополучного по бруцеллезу рогатого скота, обеспечивающих контакт с 21 коровой больной бруцеллезом.
Иммунизированные адъювант-вакциной животные не заболевают бруцеллезом в течение шести месяцев, что указывает на высокую эффективность препарата.
Пример 8. Определяют возможность использования адъювант-вакцины из штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/100 для провокации синтеза специфических антител у больных бруцеллезом коров, не реагирующих в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза. Коров, ранее реагировавших на бруцеллез (в РА и РСК) и утративших титры в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза, иммунизируют адъювант-вакциной из штамма B.abortus КВ 17/100 в дозе 3 см 3 . Вакцину вводят под кожу в область подгрудка. Через 15 и 3 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследую сыворотку в РА и РСК.
После иммунизации животные с хронической формой бруцеллеза положительно реагируют в серологических реакциях в диагностических титрах и идентифицируются как больные.
Таким образом, адъювант-вакцина из штамма B.abortus КВ 17/100 провоцирует появление положительных серологических реакций у нереагирующих на бруцеллез больных животных, что способствует скорейшему выздоровлению больных бруцеллезом животных.
Использование адъювант-вакцины на основе нового штамма B.abortus ВГНКИ N КВ 17/00 в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота.
Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая инактивированный антиген бруцелл, неполный адъювант Фрейнда и физиологический раствор, отличающаяся тем, что она в качестве инактивированного антигена бруцелл содержит инактивированную с гидратом окиси алюминия бактериальную массу штамма Brucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300 — 400 
10 9 микробных клеток в 1 см 3 при следующем соотношении компонентов, об.%: Инактивированная с гидратом окиси алюминия бактериальная масса штамма Вrucella abortus ВГНКИ N КВ 17/100 с концентрацией 300 — 400 10 9 микробных клеток в 1 см 3 — 40 — 50 Неполный адъювант Фрейнда — 45 — 55 Физиологический раствор — Остальноел
источник
Бруцеллёз не только крупного, но и мелкого рогатого скота на протяжении многих лет остается одним из самых распространённых заболеваний в Казахстане. Как предотвратить болезнь с помощью вакцинации – читайте в интервью с доктором ветеринарных наук, профессором, академиком НАН РК Николаем Петровичем Ивановым (на снимке).
— Почему одной из самых распространённых болезней среди КРС в Казахстане на протяжении многих лет остается бруцеллёз?
– Согласно данным ветеринарной статистики, около 20% имеющегося поголовья сельскохозяйственных животных является неблагополучным. Проблема повсеместной ликвидации бруцеллеза среди животных представляет значительные трудности из-за: его широкого распространения, способности возбудителя к обитанию в организме самых разнообразных видов живых существ, а также, в ряде случаев, латентного (не проявляя себя) течения инфекции и связанные с ним сложности диагностики и специфической профилактики заболевания.
— Первое, что нужно предпринять с целью недопущения заражения скота бруцеллёзом?
-Выполнять полный комплекс организационно-хозяйственных, ветеринарно-санитарных и специальных ветеринарных мероприятий. Все эти меры должны быть отражены в плане противобруцеллезных мероприятий, который должен быть комплексным (воздействовать на все три звена эпизоотической цепи), своевременным и реально выполнимым (согласно имеющимся финансовым и материально-техническим средствам). В нем должны быть указаны мероприятия, сроки их исполнения и ответственные лица.
— А, что нужно предпринять уже в случае появления болезни среди крупного рогатого скота?
-При появлении инфекции нужно:
- заменить все неблагополучное поголовье здоровыми, то есть не инфицированными животными;
- проводить регулярные (через каждые 15-20 дней) диагностические исследования с последующим выделением и убоем выявленных больных животных;
- применять вакцинные препараты с последующими, поствакцинальными исследованиями, согласно инструкции по применению вакцины.
— Какие, в данном случае, существуют виды и назначения вакцин?
– Существующие противобруцеллёзные вакцины условно подразделяются на следующие группы, которые различаются по антигенности, реактогенности, иммуногенности и другим признакам.
1.Агглютиногенные. Эти препараты являются иммуногенами. Но их применение не рекомендуется для взрослого поголовья, так как они индуцируют антитела, которые в последующем не позволяют проводить диагностические исследования.
2.Слабоагглютиногенные. Они выгодно отличаются от первой группы, так как создают возможность проводить диагностические исследования в относительно короткие сроки поствакцинального периода. Одной из наиболее распространённых в нашей стране вакцин для иммунизации против бруцеллёза крупного рогатого скота является вакцина из штамма В.abortus 82. Отрицательная сторона этого препарата – чрезмерная реактогенность. В организме беременных животных эта вакцина вызывает аборты, что сдерживает её применение на стельном поголовье крупного рогатого скота.
3.Неагглютиногенные. Наз- ванные вакцины обладают выраженными провоцирующими свойствами. В организме латентно больных животных они обостряют течение инфекции, то есть позволяют выявить максимальное количество инфицированных особей.
4.Инактивированные вакцины. К н им о тносятся п репараты из агглютиногенных и неагглютиногенных штаммов. Эти вакцины, в том числе Казахского НИВИ находятся на стадии производственных испытаний и пока не имеют широкого практического применения.
— В каких областях Казахстана наиболее распространена болезнь?
– Наибольшее число неблагополучных пунктов и количество больных животных среди КРС отмечается в северных и центральных регионах страны, а мелкий рогатый скот чаще поражён на юге и юго-востоке республики. В некоторых областях возрастает число случаев заболевания людей.
— Что включают в себя противобруцеллёзные мероприятия?
– Специальные противобруцеллёзные мероприятия включают своевременную и качественную диагностику, в особых случаях применение средств специфической профилактики и антибактериальных препаратов. Для выявления источника инфекции, с целью последующей его ликвидации, используют различные диагностические приёмы. К примеру, серологические методы и аллергическая проба базируются на иммунологических реакциях. Следует особо отметить, что иммунологическая реактивность животных тесно связана с видовыми, индивидуальными и возрастными особенностями организма.
Помимо этого,содержать невакцинированное поголовье к настоящему времени возможно только при отсутствии угрозы заражения животных. В других хозяйствующих субъектах должна быть предусмотрена иммунизация молодняка (после предварительного сероаллергического исследования) и возможна повторная вакцинация половозрелых животных за 2-3 месяца до осеменения.
А главное, во всех случаях нужно использовать вакцины и методы их применения, разрешённые для иммунизации животных на территории Республики Казахстан.
— Кто наиболее чувствите лен к бруцеллёзной инфекции?
– Наиболее чувствительными и восприимчивыми к бруцеллезной инфекции являются парнопалые, половозрелые, но относительно молодые особи на пике их гормональной активности (половозрелые тёлки, ярки, козочки, нетели или первотельные и беременные животные). Ведь с возрастом реактивность организма животных снижается. Нередко, когда среди «старого» поголовья много больных, имеющих отрицательные показания диагностических реакций. Особого внимания в диагностической работе, благодаря высокой разрешающей способности, заслуживают тест ELISA (ИФА) и полимеразо-цепная реакция (ПЦР).
— Есть ли какие-то новые современные методы вакцинации КРС против бруцеллёза?
Уместно отметить, что в современных условиях особого внимания заслуживает так называемый «конъюнктивальный» метод иммунизации. Известно, что через слизистую оболочку конъюнктивы глаза в организм могут поступать различные вещества, в том числе и антигены. При конъюнктивальном методе иммунизации, как показали результаты исследований, благодаря проникновению антигена по слёзно-носовому каналу в носовую полость, площадь его всасывания резко увеличивается, что обеспечивает индукцию иммунитета, не уступающего таковому при подкожном методе вакцинации. При этом резко снижается период циркуляции в крови антител, улавливаемых стандартными антигенами, что позволяет своевременно проводить диагностические исследования и, безусловно, выгодно отличает этот метод от других.
источник
Бруцеллезная вакцина лечебная основана на растительных компонентах и используется для борьбы с бруцеллезом. Бруцеллезом называют инфекционное заражение, которое более свойственно животным, но передается и человеку.
Мальтийская лихорадка или бруцеллез, когда начинает развиваться у человека, то поражает его жизненно важные системы: половую, нервную, опорно-двигательную и сердечно-сосудистую. Главный возбудитель этого недуга — бактерия бруцеллеза.
Основным источником заражения для человека являются животные: свиньи, козы, овцы, коровы. Свое распространение бактерия получает у животных нескольких видов:
- Паразитирует в органах мелкого рогатого скота.
- Поражает большой рогатый скот.
- Заражает инфекцией зайцев, кроликов, оленей, свиней.
Недуг наиболее распространен в районах, где разводят много домашнего скота. В основном болезнь приобретается тремя путями заражения:
- В быту из-за непосредственного контакта — через раны на коже, ссадины, царапины, соприкосновение слизистых.
- Орально-фекальным путем — из-за употребления зараженных продуктов, таких как молоко, мясо, сыр.
- Аэрогенным образом — при вдыхании болезненных бактерий.
Заражение бруцеллезом может проходить довольно медленно и перетекать в хронический процесс. Профилактическими мерами против бруцеллеза являются вакцинация людей, которые постоянно имеют контакт с животными, и хорошая термическая обработка всех продуктов животного и растительного происхождения. Так как бруцеллез может долгое время протекать незаметно, то после выздоровления заболевший находится под постоянным контролем у врачей в течение двух лет.
Вакцина бруцеллезная в странах СНГ основана на применении живого штамма бруцелл. Но культуру маточного штамма бруцеллы содержат и выращивают таким образом, чтобы она смогла пройти контроль на безвредность и определенную жизненную активность. Когда создают вакцину, то контролируют концентрацию жизнеспособных бруцелл, чтобы при введении такого препарата можно было рассчитать допустимую дозировку для организма, тем самым обезопасив его от возможного заражения.
Сухая форма бруцеллы, перед ее разведением и созданием вакцины, хранится в специальных условиях при температуре не выше двух-четырех градусов. Живая форма, уже как вакцина, обычно находится в специальном сухом темном месте с соблюдением температурного режима (не выше восьми градусов тепла).
Перевозка вакцины зимой допустима любым видом транспорта с условиями хранения при температуре не ниже нуля, а летом транспортировка возможна только благодаря авиаперелетам. Если соблюдать все нормы перевозки и температурные режимы хранения, то вакцина, находящаяся в герметичном контейнере, может действовать в течение года.
Естественно, что существуют отдельные методы вакцинации для человека и для животного. Вакцина против бруцеллеза для животных и человека одна и та же, разнятся лишь нормы дозировки и графики вакцинации.
Есть несколько способов введения вакцины бруцеллеза:
Подкожный метод вакцинации не очень эффективен в качестве лечения, но вполне допустим при обычной профилактике. При этом методе прививка является комплексной. В первый раз делают два прокола — на предплечье и бедре. В каждый прокол вводят по половине положенной первой нормы вакцины. Таким образом прививки делают несколько раз. Второй раз вакцинируют через два дня, увеличивая дозировку. Для этого на теле делают шестнадцать новых проколов.
Метод подкожного введения вакцины практически не используют, так как он длительный и довольно неприятный, а его эффективность не очень высока. Наиболее удобным является внутривенный метод вакцинации. Его проводят с помощью специальной капельницы. Такая вакцинация — лечебная и профилактическая одновременно.
Перед применением внутривенной прививки пациента готовят, делают несколько предварительных проб, проверяя тем самым переносимость препарата. Общий курс вакцинации состоит из восьми доз. Первой вводят самую маленькую, после нее пациент может испытывать чувство легкого дискомфорта, недомогания в виде головокружения, тошноты.
При нормально перенесенной вакцинации прививка действует на протяжении года, но иммунитет начинает снижать свои защитные реакции уже спустя пять-шесть месяцев после ее применения. Поэтому ревакцинацию повторяют через год, но за три-четыре недели до истечения срока действия вакцины.
Для животных вакцинация проходит по другой схеме. Им делают прививку только подкожно, два раза в год с промежутком в один месяц. Обычно животное получает такую прививку в полугодовалом возрасте. Ревакцинацию делают ровно через год.
Проводить вакцинацию против бруцеллеза необходимо тем людям, которые довольно много контактируют с животными. В эту категорию попадают работники ферм, сельскохозяйственных предприятий, зоотехники, ветеринары, работающие с крупным и мелким рогатым скотом. К лицам, которые нуждаются в защите от бруцеллеза, относят и специалистов, занимающихся созданием вакцины и разведением бактерии.
Также в зоне риска находятся дети, проживающие на территории фермерских, сельских угодий, где выращивают скот. Довольно целесообразным является вакцинация сельских жителей, которые занимаются частным разведением скота. Если за иммунизацией животных следят, делают все прививки вовремя, то риск заболеть у людей, ухаживающих за ними, довольно мал. Но всегда остается небольшой шанс заразиться от диких животных.
Такая бактерия, как бруцеллез, вакцина которой основана на живых формах инфекции, как и все ей подобные, заражает организм в ослабленном состоянии. Поэтому к применению вакцины есть свои противопоказания. Ее нельзя использовать в таких случаях:
- При наличии иммунодефицита.
- При обнаружении опухолей, заболеваний крови и в процессе лечения таких недугов. При этих обстоятельствах вакцинация возможна только тогда, когда прошло полгода с последнего курса лечебной терапии.
- При повышенной температуре.
- При беременности и в период кормления грудью.
- При наличии хронических болезней.
- При серьезных заболеваниях кожных покровов.
- При повышенном аллергическом фоне, склонности к бронхиальной астме.
- При положительной реакции на пробную вакцинацию.
- При существовании побочных реакций.
У каждого организма своя реакция на прививку. Вакцина бруцеллезная имеет практически такие же побочные эффекты, как и другие прививки. Основными реакциями на вакцину могут быть:
- Припухлость, воспаление тканей в области прививки, возможны образования красноватых узелков.
- При внутривенном введении инъекции может появляться гиперемия, сильная припухлость ткани, инфильтрация размером до двадцати пяти миллиметров.
- Слабость, общая болезненность.
- Появление головной боли.
- Проявление высокой температуры.
- Отек Квинке, шок анафилактического характера.
Бруцеллезная вакцинация необходима при современном ведении животноводства и ветеринарных лечебниц. Поэтому тенденции профилактики и развития новых методов вакцинации довольно высокие.
Сейчас идет активная разработка вакцины на основе антител бруцелл протективного характера, которые помогут заменить методы применения живых форм бактерии.
Сначала ее планируют использовать, как способ ревакцинации, а уже позже включить в полноценный процесс вакцинации. Это сделает вакцину более безопасной для человека и животного. К тому же, ее применение должно быть значительно проще и менее болезненно.
источник
ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ инструкция по применению
 | ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ |
| 1 мл |
| лиофилизированная живая культура вакцинного штамма Brucella melitensis Rev.1 |
Вспомогательные вещества: сахарозо-желатиновая среда.
Расфасована по 1-5 или 10-20 мл в стеклянные флаконы вместимостью соответственно 10-20 мл или 30-100 мл, укупоренные резиновыми пробками в атмосфере азота или аргона и обкатанные металлическими колпачками или по 1-2 мл в ампулы вместимостью 3-6 мл, запаянные под вакуумом. На флаконы (ампулы) с вакциной наклеивают этикетки с указанием названия организации-производителя, названия вакцины, количества доз вакцины во флаконе (ампуле), номера серии и номера контроля, окончания срока годности (месяц, год) и обозначения СТО. Флаконы (ампулы) упаковывают в картонные коробки с разделительными перегородками, обеспечивающими их неподвижность и целостность.
На каждую коробку с вакциной наклеивают этикетку с указанием названия организации-производителя, ее товарного знака, адреса, номера телефона, полного названия вакцины, количества флаконов (ампул) вакцины в коробке и доз вакцины во флаконе (ампуле), номера серии и номера контроля, даты изготовления (месяц, год), окончания срока годности (месяц, год), условий хранения, надписи «Для животных», обозначения СТО. На этикетку может быть нанесена дополнительная информация. В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению вакцины.
Свидетельство о регистрации № ПВР-1-1.3/01225 от 11.12.06
Вакцина против бруцеллеза овец и коз и инфекционного эпидидимита баранов. Вакцинный штамм Brucella melitensis Rev-1 (Strain Rev-1 vaccine) в S-форме обладает выраженными антигенными и иммуногенными свойствами для овец и коз и не передается от животного к животному.
Иммунитет у животных формируется на 21 сутки после введения вакцины и сохраняется не менее 2 лет. Наличие специфических поствакцинальных антител регистрируется в сыворотке крови молодняка в течение 12 мес, взрослых животных — на протяжении 2 лет.
Показания к применению препарата ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1 ЖИВАЯ СУХАЯ
— иммунизация овец и коз против бруцеллеза и баранов против инфекционного эпидидимита в хозяйствах всех форм собственности в субъектах РФ неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота.
Вакцину вводят животным п/к в бесшерстное место за локтевым суставом в объеме 2 мл.
Вакцину перед применением регидратируют разбавителем для сухих бруцеллезных вакцин или стерильным физиологическим раствором с соблюдением правил асептики. Разбавитель (физиологический раствор) вносят в стерильный флакон в расчетном количестве, исходя из того, что объем одной иммунизирующей дозы вакцины составляет 2 мл. Например, если во флаконе (ампуле) содержится 120 доз вакцины, то требуемое количество разбавителя составит 240 мл (120 доз ×2 мл = 240 мл).
Пробку флакона (шейку ампулы) обрабатывают ватным тампоном, смоченным 70% раствором этилового спирта (спиртовым тампоном). В шприц с иглой набирают отмеренный разбавитель в объеме в 2 раза превышающем объем вакцины, содержащейся во флаконе (ампуле). Разбавитель вносят во флакон проколов иглой резиновую пробку; в ампулу — отломив ее верхнюю часть в области шейки. Флакон (ампулу) осторожно встряхивают до получения гомогенной суспензии. Разведенную вакцину переносят шприцем с иглой во флакон с оставшимся разбавителем. Вакцину защищают от воздействия прямого солнечного света и применяют через 30 мин и в течение не более 4 ч после разведения.
Для вакцинации каждого животного используют стерильную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время вакцинации допускается стерилизация игл путем обработки спиртовым тампоном. Место введения вакцины обрабатывают спиртовым тампоном, или тампоном, смоченным 0.5%-ным раствором фенола.
Вакцинация овец и коз против бруцеллеза
Вакцину применяют в хозяйствах неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота, а также в благополучных хозяйствах в случае угрозы заражения животных бруцеллезом.
Ярок и козочек благополучных (в случае угрозы заражения бруцеллезом) и неблагополучных по бруцеллезу хозяйств вакцинируют в возрасте 3-5 месяцев или за 2 месяца до осеменения без предварительного исследования на бруцеллез.
Овец и коз в благополучных по бруцеллезу хозяйствах вакцинируют в случае угрозы заражения животных бруцеллезом без предварительного исследования на бруцеллез за 2 месяца до осеменения. Ревакцинируют животных не ранее чем через 12 месяцев и далее ежегодно или 1 раз в 2 года до исчезновения угрозы заражения, но не более чем в течение 6 лет.
В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах овец (коз), положительно реагирующих при серологическом исследовании, или с клиническими признаками бруцеллеза, сдают на убой. Оставшееся поголовье, а также овец (коз), ранее иммунизированных вакциной из штамма Вrucella abortus 19, иммунизируют вакциной из штамма Rev-1 в течение 6 лет ежегодно или 1 раз в 2 года. Допускается однократная иммунизация баранчиков.
После принятия решения о прекращении иммунизации, овец и коз исследуют на бруцеллез в РА и РСК (РДСК) по истечении 2 лет с момента последнего введения вакцины. При получении двух подряд отрицательных результатов исследований, проведенных с интервалом не менее 30 дней, отсутствии случаев острого заболевания животных бруцеллезом и проведения комплекса мероприятий, предусмотренных действующими нормативными документами по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных хозяйство считают благополучным по бруцеллезу.
Вакцинация баранов против инфекционного эпидидимита (ИЭБ) и маточного поголовья овец против инфекционной болезни, вызываемой Вrucella ovis.
Вакцину применяют в неблагополучных по ИЭБ хозяйствах.
Вакцинируют баранов , не реагирующих на бруцеллез при серологическом исследовании в РА и РСК (РДСК) или РИГА и на инфекционный эпидидимит баранов — в РДСК, только 1 раз в возрасте 3-8 месяцев. Допускается вакцинация ярок в возрасте 3-5 месяцев или за 2 месяца до осеменения без предварительного исследования на обе болезни.
Запрещается вакцинировать баранов старше 8 месяцев и предназначенных для племенного дела.
Вакцинированных баранов и маточное поголовье овец с целью исключения ИЭБ и инфекционной болезни, вызываемой Вrucella ovis, исследуют в РДСК независимо от времени введения вакцины и на бруцеллез — в РА и РСК (РДСК) не ранее, чем через 12 месяцев после вакцинации.
Перед использованием в случной кампании баранов исследуют на бруцеллез и на ИЭБ в обязательном порядке.
С целью оздоровления хозяйств, неблагополучных по ИЭБ, всех баранов исследуют серологически через каждые 30 дней. Животных, положительно реагирующих по результатам каждого исследования, сдают на убой. После получения двух подряд отрицательных результатов животных оставляют под контрольным наблюдением на 6 мес., в течение которого исследуют 3 раза с интервалом в 3 мес.
При получении отрицательных результатов исследования в течение контрольного наблюдения и отсутствии у животных клинических признаков болезни хозяйство признают благополучным по ИЭБ, а баранов используют для воспроизводства.
Противопоказания к применению препарата ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1 ЖИВАЯ СУХАЯ
— животных низкой упитанности, клинически больных, суягных;
— при вспышке у животных в хозяйстве острой инфекционной болезни;
— животных в племенных хозяйствах и предприятиях по искусственному осеменению, предназначенных к продаже для племенных целей.
Вакцинированных (ревакцинированных) животных метят краской или другими средствами.
При проведении вакцинации не применяют в лечебных и профилактических целях следующие антибиотики:
— бензилпенициллин, эритромицин, олеандомицин — за 1 сутки до вакцинации;
— хлортетрациклин, окситетрациклин, тетрациклин, левомицетин, полимиксин — за 3 суток до вакцинации;
— стрептомицин, канамицин, неомицин — за 7 суток до вакцинации;
— бициллин — за 6 суток до вакцинации;
— дитетрациклин — за 25 суток до вакцинации;
— дибиомицин — за 30 суток до вакцинации;
— любые антибиотики — в течение 15 суток после вакцинации.
Продукцию от животных, убитых после вакцинации, используют без ограничений.
Вакцинировать животных разрешается ветеринарным специалистам. При вакцинации следует соблюдать правила личной гигиены, принятые при работе с лекарственными средствами.
Вакцину, попавшую на кожу или слизистые оболочки ветеринарного или технического специалиста, смывают водой с мылом; немедленно обрабатывают: кожу — 70% раствором этилового спирта; слизистые оболочки — раствором тетрациклина или хлортетрациклина (100-200 мг/мл). При отсутствии антибиотиков в глаза вводят несколько капель 1% раствора азотнокислого серебра, в нос — 1% раствор протаргола, рот и горло прополаскивают 70% раствором этилового спирта. В случае аутовакцинации место укола обрабатывают 70% раствором этилового спирта и 1-2% спиртовым раствором бриллиантового зеленого, специалиста направляют в медицинское учреждение для диспансерного наблюдения.
Вакцинацию животных каждого хозяйства, оформляют актом, в котором указывают: название населенного пункта, хозяйства или Ф.И.О. владельца, количество, номера, пол и возраст вакцинированных животных, дату вакцинации, название вакцины и организации-производителя, номера серии, даты изготовления, окончание срока годности и количества израсходованной вакцины. Один экземпляр акта направляют главному ветеринарному врачу района, другой хранится в хозяйстве (у владельца животных) или на ветеринарном участке.
Вакцину с измененным внешним видом, посторонней примесью, плесенью, нарушением целостности или укупорки флаконов (ампул), отсутствием маркировки или по истечении срока годности использовать запрещено.
Неизрасходованную разведенную вакцину, флаконы (ампулы) из-под вакцины, шприцы и иглы, использованные для вакцинации, подвергают кипячению в течение 30 минут.
Условия хранения ВАКЦИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И КОЗ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММА BRUCELLA MELITENSIS REV-1ЖИВАЯ СУХАЯ
Вакцину следует хранить в сухом, темном, недоступном для детей месте при температуре от 2° до 10°С.
Вакцину транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с ОСТ 08064-19-07 и правилами перевозок скоропортящихся грузов и багажа, действующих на данном виде транспорта. Допускается перевозка вакцины при любой минусовой температуре или +20°С не более 7 суток.
источник
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к изготовлению вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота.
В настоящее время для профилактики бруцеллеза овец и коз широко используют вакцину, изготовленную из штамма Brucella melitensis Rev-1.
Выращивание штамма Rev-1 при изготовлении вакцины проводят на триптиказо-соевом агаре, агаре Альбими, сывороточно-декстрозном агаре (см. Дж. Альтон, Л.М. Джонс «Методы лабораторных исследований по бруцеллезу», ВОЗ, Женева, 1968, стр. 77-79). Ингредиенты, входящие в первые две среды, в нашей стране не выпускают, а применение агара-заменителя Альбими в производстве вакцины нерационально из-за недостаточного выхода бакмассы. На других питательных средах (печеночные, мясные, картофельные среды, эритритагар, агар Д и т.д.), применяемых для культивирования бруцелл (см. кн. “Бруцеллез”, под ред. П.А. Вершиловой, М., 1961, стр. 208-210), штамм Rev-1 растет плохо и диссоциирует.
Известен способ получения живой вакцины из штамма В.melitensis Rev-1, заключающийся в выращивании его на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона (см. Производство вакцины Rev-1. G.G. Alton WHO/Bruc. 70.321; Питательная среда для изготовления вакцины из штамма B.melitensis Rev-1. Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротестсистем. Мат. междунар. науч. конф., посвящ. 70-летию НПО «Питательные среды», Махачкала, 1998, с. 116-117). Недостатком данного способа является необходимость добавления в питательную среду перед засевом культуры бруцелл штамма Rev-1 до 10% стерильной сыворотки крови животных, а также то, что основой среды служат мясной бульон и пептон.
Изготовление питательной среды на основе высокоценного пищевого продукта — мяса экономически не оправдано, а добавление дефицитной и дорогостоящей сыворотки крови, помимо экономической нецелесообразности, вызывает дополнительные трудности, связанные со стерильным внесением ее в готовую среду и возможностью загрязнения вакцины посторонней микрофлорой.
Целью настоящего изобретения является разработка способа изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма Rev-1, состоящей из типичных для данного штамма однородных клеток бруцелл в S-форме и не имеющей диссоциированных микроорганизмов с использованием питательной среды, изготовленной из непищевого сырья и без добавления сыворотки крови животных.
Поставленная цель достигается тем, что для изготовления вакцины с целью увеличения выхода микробной массы и во избежание диссоциации бруцелл, культуру штамма В.melitensis Rev-1 выращивают на питательной среде, основой которой является панкреатический гидролизат казеина с добавлением в качестве источника витаминов и других ростовых факторов экстракта кормовых или хлебных дрожжей.
Питательная среда состоит из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара. При выращивании на такой питательной среде достигается лучший рост бруцелл штамма Rev-1, больший выход бактериальной массы без диссоциированных клеток и обладающий лучшей жизнеспособностью, а также высокими иммуногенными свойствами.
Приготовление гидролизата казеина
Сухой казеин в количестве 1 кг заливают 10 литрами теплой дистиллированной воды, подщелачивают до рН — 8,5-9,0 и оставляют на несколько часов для разбухания. Затем при постоянном перемешивании подогревают до 80-90°C и температуру в этих пределах поддерживают до растворения казеина. В процессе растворения казеина рН смеси снижается, и поэтому периодически добавляют 20% раствор щелочи (NaOH) для поддержания рН на уровне 8,5-9,0 до полного растворения казеина.
Полученный раствор остужают до 45°C и к нему добавляют 50-100 г в зависимости от активности, панкреатина или же фарш поджелудочной железы крупного рогатого скота в количестве 0,5-1 кг.
Гидролиз проводят в течение 3-4 часов при температуре 45°C при постоянном перемешивании, поддерживая рН на уровне 8,5-9,0. Содержание аминного азота в готовом гидролизате должно быть 600-800 мг %.
При медленном гидролизе и содержании аминного азота менее 600 мг % панкреатин добавляют повторно.
По достижении аминного азота до 600-800 мг % гидролиз прекращают добавлением 100-120 мг уксусной кислоты.
Гидролизат кипятят в течение 10 минут, после чего его охлаждают и оставляют до следующего дня для отстаивания.
Отстоявшийся гидролизат декантируют и фильтруют через ватно-марлевой фильтр.
Приготовление экстракта дрожжей
Берут 1 кг светлых сортов кормовых или прессованных пекарских дрожжей и добавляют к ним 10 литров дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят в течение 10-15 минут и в горячем виде фильтруют до прозрачности.
Приготовление питательной среды
Для изготовления среды смешивают панкреатический гидролизат казеина и экстракт дрожжей в равных количествах и разводят дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг %.
Смесь подогревают и после закипания к ней добавляют предварительно вымоченный в воде в течение 12 часов Корсаковский агар-агар высшего или первого сорта из расчета 3-3,5% для четвертей или матровых колб и 2% для пробирок и чашек.
После полного расплавления агар-агара в среду вносят 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы и 2% глицерина, доводят рН до 7,2-7,3 и, периодически перемешивая, ее кипятят еще 10-15 минут. Затем питательную среду фильтруют через ватный или полотняный фильтр, разливают в матровые колбы, четверти или другие необходимые емкости и стерилизуют при температуре 110-112°C в течение 30 минут.
После стерилизации матровые колбы ставятся в горизонтальном положении для застывания агара, а четверти обкатывают для распределения питательной среды по всей их внутренней поверхности.
До засева вакцинной культуры питательную среду в колбах, четвертях, чашках и пробирках выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C для подсушивания поверхности и контроля стерильности.
Выращивание культуры Rev-1 для получения вакцины проводят на вышеуказанной питательной среде в матровых колбах, четвертях, пробирках или других емкостях.
Для засева серии вакцинной культуры проводят предварительную расплодку штамма в пробирках, матровых колбах или четвертях.
Вначале производственный штамм Rev-1 засевают в пробирки на косой агар. Берут одну пробирку 3-4-суточного роста эталонной культуры, разводят стерильным буферным раствором рН 6,6-6,8 так, чтобы получилась концентрация 10 -6 и 10 -7 .
Из каждого разведения 0,1 мл культуры штамма засевают по 3 бактериологические чашки.
Через 5 суток выращивания в термостате при температуре 37°C чашки просматривают на чистоту и типичность роста культуры, проверяют морфологию клеток и на диссоциацию методом окраски колоний по Уайт -Уильсону.
При отсутствии диссоциации из неокрашенных, бактериологических чашек отбирают типичные колонии, которые отсевают на пробирки с косым агаром. После выдерживания посевов в течение 48 часов в термостате при температуре 37°C и проверки на чистоту культуру пересевают на требуемое количество пробирок с той же питательной средой. Пробирки выдерживают в течение 48 часов при температуре 37°C. Из этих пробирок получают рабочие культуры штамма Rev-1, используемые для засева очередных серий вакцины.
Пробирки с рабочей культурой штамма Rev-1 хранят в запаянном виде в холодильнике при температуре +4-8°С и пригодны для использования в течение 30 дней.
Для получения взвеси клеток с целью засева серии вакцины необходимо рабочие культуры размножить в нужном количестве в пробирках, матровых колбах или четвертях, смыть стерильным, забуферным (рН 6,6-6,8) физраствором так, чтобы получилась концентрация 2-3 млрд микробов, тел в 1 мл по оптическому бруцеллезному стандарту мутности. Такой расплодкой в количестве 4-5 мл засевают матровые колбы (матрасы) или четверти данной серии.
Выращивание культуры B. melitensis Rev-1 для получения вакцины на вышеуказанной питательной среде проводят в течение 72 часов при температуре 37°С. Выросшую вакцинную культуру, с поверхности агара, смывают средой высушивания.
Среду высушивания готовят следующим образом: в 1 литре кипящей дистиллированной воды растворяют 15 г желатина, после ее растворения добавляют 100 г сахарозы. Затем кипятят 5-6 минут, доводят рН до 7,2-7,3, фильтруют через полотняный фильтр, стерилизуют при 1 атмосфере 30 минут. После стерилизации среда должна иметь рН 6,8-7,0.
В каждую колбу или четверть вводят такое количество среды высушивания, чтобы концентрация бакмассы была в пределах 80-140 млрд микробных тел в 1 мл.
Суспензию бруцелл, полученную из колб или четвертей сливают в общую бутыль. После проверки на чистоту и диссоциацию расфасовывают в ампулы по 2 или 4 мл и подвергают лиофильной сушке.
Предлагаемый способ изготовления вакцины обеспечивает, по сравнению с существующим, увеличение выхода препарата в 1,2-1,3 раза. Полученная при этом вакцина состоит из однородных клеток в S-форме, типичной для штамма Rev-1 морфологии, и не имеющих признаков диссоциации.
Предлагаемая питательная среда, изготовленная на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта дрожжей, разлитая по 250,0 мл в 10 матровых колб, была испытана для изготовления живой вакцины против бруцеллеза овец и коз из штамма B. melitensis Rev-1.
Для сравнения результатов культуру штамма B. melitensis Rev-1 для изготовления вакцины выращивали и на сывороточно-декстрозном агаре на основе мясо-пептонного бульона с добавлением 10% стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота. Данную питательную среду разливали в матровые колбы также по 250,0 мл в каждую колбу. Засевали культурой B. melitensis Rev-1 10 матровых колб со средой.
Культуру B. melitensis Rev-1 на обеих питательных средах выращивали при температуре 36-37°С в течение 72 часов. Основные данные, характеризующие результаты использования обеих питательных сред для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 и изготовления из этого штамма вакцины против бруцеллеза овец и коз, представлены в следующей таблице.
Таблица. Основные результаты выращивания культуры штамма Brucella melitensis Rev-1 для получения бакмассы и изготовления вакцины против бруцеллеза овец и коз при использовании испытуемой питательной среды (новый вариант) и ранее применявшейся питательной среды (старый вариант).
Таким образом, в результате проведенных исследований по испытанию предлагаемой нами питательной среды, изготовленной на основе панкреатического гидролизата казеина и экстракта хлебных дрожжей, установлены пригодность данной среды и целесообразность ее применения для выращивания штамма B. melitensis Rev-1 при изготовлении из этого штамма живой вакцины против бруцеллеза овец и коз. При этом показано, что применение указанной питательной среды позволяет получить бакмассу бруцелл штамма Rev-1 типичной для данного штамма морфологии в S-форме, не содержащую диссоциированных микробных клеток и 1,2 раза больше, чем при применении сывороточно-декстрозного агара, изготовленного на основе мясопептонного бульона с добавлением 10% сыворотки крови крупного рогатого скота.
Способ изготовления вакцины против бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающий посев и выращивание бруцелл штамма B. melitensis Rev-1 на питательной среде, состоящей из равных объемов панкреатического гидролизата казеина глубокой степени расщепления и экстракта дрожжей, разведенных после смешивания дистиллированной водой до содержания аминного азота 110-130 мг % с добавлением 0,5% хлористого натрия, 1% глюкозы, 2% глицерина и 2-3,5% агар-агара, их смыв, разбавление средой высушивания до содержания 80-140 млрд микробных клеток в 1 мл, расфасовку в ампулы и лиофильную сушку.
источник
агропромышленного комитета СССР
ПО ПРИМЕНЕНИЮ ВАКЦИНЫ ЖИВОЙ СУХОЙ ИЗ ШТАММА РЕВ-1
БРУЦЕЛЛА МЕЛИТЕНЗИС ДЛЯ ИММУНИЗАЦИИ ОВЕЦ И КОЗ ПРОТИВ
БРУЦЕЛЛЕЗА И БАРАНОВ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА,
ВЫЗЫВАЕМОГО ВОЗБУДИТЕЛЕМ БРУЦЕЛЛА ОВИС
1.1. Вакцину из штамма Рев-1 бруцелла мелитензис применяют для профилактической иммунизации против бруцеллеза маточного поголовья овец и коз в колхозах, совхозах, других сельскохозяйственных предприятиях, занятых разведением мелкого рогатого скота, и в личных подсобных хозяйствах граждан, а также против инфекционного эпидидимита баранов, вызываемого возбудителем бруцелла овис, в комплексе мер, предусмотренных действующей инструкцией по борьбе с бруцеллезом животных.
1.1.1. Перечень автономных республик, краев, областей и районов, в которых допускается применение указанной вакцины для иммунизации животных, устанавливают главные управления (управления) ветеринарии госагропромов союзных республик.
1.1.2. Прививки животных вакциной из штамма Рев-1 разрешается проводить ветеринарным врачам и ветеринарным фельдшерам под контролем ветврача.
Главные ветеринарные врачи районов обязаны проводить обучение ветеринарных специалистов хозяйств и учреждений государственной ветеринарной сети правилам проведения прививок вакциной животных.
1.2. Сухая живая вакцина готовится из слабовирулентного штамма Рев-1 бруцелла мелитензис.
Вакцина представляет собой мелкозернистую массу светло-коричневого или серовато-желтого цвета. Выпускается в ампулах, запаянных под вакуумом и уложенных в коробки.
1.3. На каждой ампуле с вакциной должна быть надпись с указанием наименования вакцины, номера серии, срока годности и количества доз препарата. Ампулы с вакциной, не имеющие указанной надписи, а также разбитые, с трещинами, содержащие посторонние примеси или плесень, утратившие вакуум, с истекшим сроком годности препарата, упакованные в коробки без этикеток, бракуют, вскрывают и обеззараживают кипячением в течение 30 мин.
1.4. На этикетках коробок с вакциной должны быть указаны: наименование вакцины, наименование и товарный знак биопредприятия, изготовившего вакцину, номер серии и номер госконтроля, дата изготовления, срок годности, количество ампул в коробке и количество доз в ампуле, условия хранения вакцины и обозначение ТУ.
В каждую коробку должно быть вложено наставление по применению вакцины.
1.5. Вакцина в ампулах под вакуумом пригодна для применения в течение 12 мес. со дня ее изготовления при условии хранения в холодильных камерах или в темном сухом помещении при температуре 2 — 10 °С. При хранении сухой вакцины при температуре выше 10 °С качество (активность) ее не гарантируется и применение не разрешается. В жаркое время года вакцину доставляют к месту применения в термочемоданах или термосах со льдом.
1.6. Перед применением сухую вакцину разводят специальным растворителем для сухих живых вакцин против бруцеллеза. При отсутствии такого растворителя допускается использование физиологического раствора. Разведение готовят из расчета, чтобы одна прививочная доза для животных составляла 2 мл разведенной вакцины. Для этого шейку ампулы в верхней части протирают смоченной спиртом ватой и обламывают стекло. В ампулу шприцем с иглой вносят 4 мл растворителя, осторожно встряхивают до превращения массы в равномерную взвесь.
Разведенную в ампуле вакцину шприцем с длинной иглой отсасывают и переносят во флакон емкостью 500 — 1000 мл с предварительно налитым в него растворителем. С учетом жидкости, использованной для растворения вакцины, во флаконе должно быть столько растворителя, сколько требуется для приготовления необходимого количества доз вакцины в разведенном виде для прививки животных.
Растворитель (физраствор), флаконы, шприцы, иглы, используемые для приготовления вакцины к применению, должны быть стерильными.
1.7. Приготовленную для применения вакцину защищают от прямого солнечного света и используют через 30 мин. после разведения в течение не более 4 ч. Остатки разведенной вакцины уничтожают путем кипячения в течение 30 мин. Обеззараживанию кипячением подлежат также ампулы и флаконы из-под использованной вакцины, шприцы и иглы.
1.8. Вакцину животным вводят подкожно в бесшерстное место за локтевым суставом. Для прививки каждого животного используют отдельную, предварительно простерилизованную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время прививок допускается стерилизация игл путем протирания их спиртом. Место введения вакцины протирают 70-процентным этиловым спиртом или 0,5-процентным раствором фенола.
1.9. Иммунитет против бруцеллеза и инфекционного эпидидимита у животных наступает через 3 нед. и сохраняется в течение не менее 2 лет после первичной прививки их вакциной.
1.10. Запрещается проводить прививки вакциной мелкого рогатого скота в период вспышки в хозяйстве (на ферме) острой инфекционной болезни (сибирская язва, ящур, пастереллез и др.), а также племенных животных, отобранных в благополучных по бруцеллезу хозяйствах к продаже на племенные цели хозяйствам других областей, краев и республик.
1.11. При проведении прививок животных вакциной прекращают применение антибиотиков (в лечебных и профилактических целях) в сроки:
непролонгированных препаратов: бензилпенициллина, эритромицина, олеамдомицина — за сутки; хлортетрациклина, окситетрациклина, тетрациклина, левомицетина, полимиксина — за 3 сут.; стрептомицина, канамицина, неомицина, мономицина — за 7 сут. до вакцинации;
пролонгированных антибиотиков: бициллина — за 6 сут.; дитетрациклина — за 25 и дибиомицина — за 30 сут. до вакцинации;
любые антибиотики — в течение 15 сут. после вакцинации животных.
1.12. Каждое вакцинированное животное метят путем выщипа круглого отверстия в основании правого уха. Их берут на учет и за ними устанавливают наблюдение в течение 10 дней, имея в виду, что у привитых животных может повыситься температура тела, иногда отмечается кратковременная хромота.
1.13. Проведение вакцинации животных по каждой отаре оформляют актом, в котором указывают наименование хозяйства, фермы, номер отары, ее эпизоотическое состояние в отношении бруцеллеза или инфекционного эпидидимита, количество, пол и возраст вакцинированных животных, наименование предприятия, изготовившего вакцину, номер серии, дату изготовления и срок годности препарата. Один экземпляр акта направляют главному ветеринарному врачу района, другой хранят в хозяйстве.
1.14. В случае осложнений у животных применение вакцины данной серии прекращают и в соответствии с указанием Главного управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР от 3 сентября 1982 г. N 116-6а направляют с нарочным, соблюдая режим хранения, 2 — 3 невскрытых ампулы с вакциной из серии, вызвавшей осложнения, во Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5). В сопроводительном документе указывают количество вакцинированных животных, дату прививки, характер осложнений.
2.1. Вакцину из штамма Рев-1 применяют для прививки овец и коз против бруцеллеза в хозяйствах областей, краев, республик (без областного деления), неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота. В особых случаях с разрешения главных управлений (управлений) ветеринарии госагропромов союзных республик допускается проводить прививку этой вакциной овец и коз в благополучных хозяйствах районов, непосредственно граничащих с неблагополучными территориями.
2.2. Ярок и козочек во всех хозяйствах (неблагополучных или благополучных по бруцеллезу) прививают вакциной первый раз в возрасте 3 — 5 мес. без исследования их на бруцеллез. Животных, не привитых в указанном возрасте по каким-либо причинам, иммунизируют этой же вакциной, но не позднее чем за 2 мес. до осеменения.
2.2.1. Вакцинированный молодняк формируют в отдельные отары и содержат обособленно от взрослого поголовья. Пополнение привитыми ярками (козочками) отар взрослых овец (коз), неблагополучных по бруцеллезу, запрещается.
2.2.2. В дальнейшем животных реиммунизируют вакциной из штамма Рев-1 1 раз в 2 года за 2 мес. (не позднее) до осеменения.
В благополучных по бруцеллезу хозяйствах реиммунизацию овец (коз) проводят без исследования животных на эту болезнь.
2.3. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, где вакцина из штамма Рев-1 применялась только для иммунизации молодняка, всех овцематок (козоматок) отар с острым течением болезни (аборты, массовое выделение реагирующих) сдают на убой. Поголовье овец, коз (если животные не были привиты вакциной из штамма 19) других отар данного хозяйства однократно исследуют на бруцеллез (аллергически или серологически РА и РДСК). Реагирующих удаляют, нереагирующих овец (коз) прививают вакциной из штамма Рев-1 (проводят первую реиммунизацию этой вакциной, но не ранее чем через год после первичной прививки животных).
Через 2 года после реиммунизации овец (коз) исследуют на бруцеллез однократно серологически (РБП или РСК). При отсутствии клинических проявлений бруцеллеза у животных и получении отрицательных результатов исследования отару считают оздоровленной от бруцеллеза. В случае выделения реагирующих их удаляют из отары. Всех животных с отрицательными реакциями вновь реиммунизируют вакциной из штамма Рев-1 и далее с ними поступают, как указано в настоящем абзаце выше.
2.4. Овец (коз), привитых вакциной из штамма Рев-1, можно исследовать на бруцеллез в следующие сроки:
животных, привитых однократно в возрасте 3 — 5 мес., — не ранее чем через год после вакцинации;
животных, привитых однократно переярками, и овец (коз), подвергавшихся реиммунизации (см. подпункты 2.2, 2.2.2 и 2.3), — не ранее чем через 2 года после последней вакцинации.
Для исследования животных на бруцеллез применяют серологические реакции: РБП или РСК.
На инфекционную болезнь, вызываемую возбудителем бруцелла овис, овец можно исследовать (РДСК) в любые сроки после прививки вакциной из штамма Рев-1.
В порядке контроля за состоянием поголовья овец (коз) по бруцеллезу в благополучных и оздоравливаемых хозяйствах ежегодно исследуют на бруцеллез баранов-производителей (аллергическим и серологическим методами) и маток, оставшихся без приплода, а также абортировавших. Абортированные плоды и другой материал от животных направляют в ветеринарную лабораторию для бактериологического и биологического (биопроба) исследований. По результатам этих исследований судят о состоянии по бруцеллезу каждой отары хозяйства.
2.5. В личных подсобных хозяйствах граждан прививкам против бруцеллеза вакциной из штамма Рев-1 подвергают только ярок (козочек). При проведении иммунизации соблюдают требования и условия, указанные в настоящем Наставлении (см. подпункты 1.12 — 1.14, 2.1, 2.2, 2.4).
2.6. Перед снятием ограничений с неблагополучной по бруцеллезу мелкого рогатого скота фермы (отделения, хозяйства) исследуют серологическим методом (РБП или РСК) на бруцеллез всех овец и коз (в том числе подвергавшихся иммунизации вакциной из штамма Рев-1), находящихся на их территории. Ограничения снимают только после получения отрицательных результатов исследований и выполнения мероприятий, предусмотренных инструкцией по борьбе с бруцеллезом животных.
В хозяйствах, в которых проводили иммунизацию и реиммунизацию овец (коз) вакциной из штамма 19, перед снятием ограничений все такое поголовье должно быть сдано на убой.
2.7. При оздоровлении всех хозяйств в районе вакцинацию взрослых овец (коз) прекращают, а иммунизацию ярок (козочек) проводят до устранения угрозы заражения животных бруцеллезом.
2.8. В хозяйствах, где имеются взрослые овцы (козы), ранее привитые вакциной из штамма 19 (до выхода настоящего Наставления ), овцематок (козоматок) на бруцеллез не исследуют, их ежегодно ревакцинируют вакциной из штамма 19, содержат обособленными отарами и по мере хозяйственной выбраковки сдают на убой. Вводить в такие отары животных, привитых или не привитых вакциной из штамма Рев-1, категорически запрещается. Полученный в хозяйствах молодняк прививают вакциной из штамма Рев-1 в порядке, как указано в подпунктах 2.2 — 2.2.3.
С 1 января 1987 г. прививка вакциной из штамма 19 овец (коз), ранее не подвергавшихся иммунизации этой вакциной, категорически запрещается.
3.1. Вакцину из штамма Рев-1 применяют в хозяйствах, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов, расположенных в областях (краях) и районах, где применяют эту вакцину для иммунизации овец (коз) против бруцеллеза.
3.2. Вакциной иммунизируют только баранчиков, отобранных в благополучных по ИЭ маточных отарах и оставленных в данном хозяйстве для ремонтных целей. Вакциной прививают животных только 1 раз в возрасте 3 — 8 мес.
Не подлежат прививкам вакциной бараны:
отобранные в благополучных по бруцеллезу и ИЭ маточных отарах для продажи на племенные цели другим хозяйствам или племпредприятиям;
вновь поступившие в данное хозяйство в возрасте старше 8 мес.;
на станциях (пунктах) по искусственному осеменению животных и других племпредприятиях.
3.3. Перед иммунизацией баранчиков исследуют на инфекционный эпидидимит серологически (РДСК) и на бруцеллез серологически (РБП или РА и РДСК) и аллергически. Реагирующих животных и баранчиков с клиническими признаками эпидидимита выбраковывают для откорма. Остальных животных иммунизируют.
3.4. Вакцинированных баранов можно исследовать на инфекционный эпидидимит (РДСК) в любые сроки, а на бруцеллез серологически (РБП или РА и РСК) не ранее чем через 12 мес. после вакцинации, но обязательно проверяют на эти болезни перед использованием животных в случной кампании.
3.4.1. При выделении реагирующих баранов при исследовании их на ИЭ всех животных данной группы проверяют (РДСК) на эту болезнь через каждые 30 дней до получения 2-кратных подряд отрицательных результатов по группе и затем оставляют под контрольным наблюдением на 6 мес., в течение которых их исследуют 2 раза.
При получении отрицательных результатов исследования и отсутствии клинических признаков болезни у животных группу признают оздоровленной, баранов допускают к использованию в воспроизводстве.
3.4.2. Если при исследовании выделены животные с положительными реакциями на бруцеллез, группу продолжают исследовать каждые 30 дней серологическими (РБП или РСК) и аллергическим методами и далее с животными поступают в порядке, как указано в подпункте 3.4.1.
3.4.3. Реагирующих животных при исследовании на бруцеллез или ИЭ выбраковывают для откорма.
3.5. В хозяйствах, где применяют вакцину из штамма Рев-1 для иммунизации баранчиков против инфекционного эпидидимита, проводят весь комплекс ветеринарных, санитарных, организационно-хозяйственных и других мероприятий по борьбе с этой болезнью, предусмотренных действующей «Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных».
С утверждением настоящего Наставления утрачивает силу «Наставление по применению вакцины живой сухой из штамма Рев-1 бруцелла мелитензис против бруцеллеза мелкого рогатого скота», утвержденное Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 29 марта 1983 г.
Ассоциация содействует в оказании услуги в продаже лесоматериалов: доска обрезная по выгодным ценам на постоянной основе. Лесопродукция отличного качества.
источник