Меню Рубрики

Вакцина бруцеллез штамм 82 крс

Наставление по применению сухой живой вакцины из слабоагглютиногенного штамма №82 бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота

НАСТАВЛЕНИЕ ПО ПРИМЕНЕНИЮ СУХОЙ ЖИВОЙ ВАКЦИНЫ ИЗ СЛАБОАГГЛЮТИНОГЕННОГО ШТАММА № 82 БРУЦЕЛЛА АБОРТУС ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
(Утверждено Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 18 февраля 1977 г.

взамен временного наставления от. 25 января 1974 г.

и указаний от 8 мая 1974 г.)
1. Общие положения
1.1. Сухая живая вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота готовится из слабоагглютиногенного штамма № 82 бруцелла абортус. Выпускается в ампулах или флаконах и представляет собой аморфную массу коричневато-желтого цвета,

При разведении вакцины физиологическим раствором поваренной соли, дистиллированной или кипяченой водой образуется равномерная взвесь бруцелл беловато-желтоватого цвета

1.2. На этикетках коробок с сухой вакциной должны быть указаны название вакцины, товарный знак и наименование биопредприятия, ее изготовившего, номер серии и номер госконтроля, дата изготовления, срок годности, количество доз в ампуле (флаконе) и в коробке, условия хранения вакцины.

На каждой ампуле (флаконе) с вакциной должна быть надпись с указанием названия вакцины, номера серии и срока годности препарата.

Ампулы или флаконы, не имеющие указанной надписи, а также разбитые, с трещинами, содержащие посторонние примеси или плесень, с истекшим сроком годности препарата, упакованные в коробки без этикеток бракуют и обеззараживают кипячением.

1.3. Сухая живая вакцина подлежит хранению в холодильных камерах или в темном сухом помещении при температуре не выше 8°С. При хранении вакцины при температуре выше оказанной активность препарата теряется в силу отмирания микробных клеток. В жаркое время года вакцину доставляют к месту применения в термочемоданах или термосах со льдом.

Срок годности сухой живой вакцины 12 месяцев со дня ее изготовления

1.4. Перед применением сухую живую вакцину разводят физиологическим раствором, дистиллированной или остуженной кипяченой водой из расчета, чтобы одна доза для прививки крупному рогатому скоту составляла 5 мл разведенной вакцины. Для этого шейку ампулы в верхней части протирают смоченной спиртом ватой и обламывают. В ампулу (флакон) стерильным шприцем и иглой вливают стерильный физиологический раствор (3–5 мл), дистиллированную или кипяченую воду. Ампулы (флаконы) осторожно встряхивают до превращения массы в равномерную взвесь

Разведенную в ампуле (флаконе) вакцину шприцем с длинной иглой отсасывают и переносят в стерильный флакон (емкостью 50–200 мл) с предварительно налитым в него физиологическим раствором (дистиллированной или кипяченой водой). С учетом жидкости, использованной для растворения вакцины в ампулах, во флаконе должно быть столько физиологического раствора (дистиллированной или кипяченой воды), сколько необходимо для приготовления количества доз вакцины в разведенном виде для прививки животным.

Разведенная вакцина пригодна для применения в течение четырех часов, позднее она теряет активность и подлежит уничтожению путем кипячения в течение 30 минут. Обезвреживанию кипячением подлежат также ампулы и флаконы из-под вакцины, шприцы и иглы.

1.5. Вакцину животным вводят подкожно в область средней трети шеи в дозе 5 мл.

Для прививки каждого животного используют отдельную иглу.

Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время прививок допускается стерилизация игл путем протирания их спиртом Место введения вакцины предварительно протирают 70%-ным спиртом или 0,5%-ным раствором кристаллической карболовой кислоты.

1.6. Прививки животных сухой живой вакциной разрешается проводить только ветеринарным врачам или ветеринарным фельдшерам со средним специальным образованием под контролем ветврача.

1.7. Привитых животных метят путем одного выщипа треугольной формы у основания верхней части левого уха, а ревакцинированных – двумя такими выщипами.

1.8. На проведение вакцинации животных в каждом хозяйстве составляют акт, в котором записывают данные об эпизоотическом состоянии хозяйства (фермы, стада) по бруцеллезу за последние два года, результаты исследования на бруцеллез животных перед вакцинацией, количество и возраст вакцинированных животных, номер серии вакцины и другие сведения о препарате. Один экземпляр акта направляют главному ветврачу района.

1.9. В случае, если после вакцинации имели место какие либо осложнения, об этом необходимо сообщить Всесоюзному государственному научно-контрольному институту ветпрепаратов (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5), Казанскому ветеринарному институту имени Н. Э. Баумана (Казань, 74, Ветгородок) и биопредприятию, изготовившему вакцину, и одновременно выслать в их адрес по 3–5 невскрытых ампул (флаконов) с вакциной из серии, вызвавшей осложнения.

1.10. В хозяйствах (на фермах) и населенных пунктах, где применяется живая вакцина из штамма № 82 против бруцеллеза крупного рогатого скота, строго проводят весь комплекс ветеринарных, санитарных, дезинфекционных, организационно-хозяйственных и других мероприятий, предусмотренных действующей инструкцией по борьбе с бруцеллезом животных и планом основных мероприятий по оздоровлению животноводства от этой инфекции, утвержденным Министерством сельского хозяйства СССР.
2. Иммунизация (вакцинация) животных
2.1. Сухую живую вакцину из штамма № 82 применяют для прививки крупному рогатому скоту в неблагополучных и угрожаемых по бруцеллезу хозяйствах (фермах, стадах), в том числе племенных. Допускается прививать вакцину животным, принадлежащим населению.

Вакцину вводят животным начиная с 4-месячного возраста.

У вакцинированных животных после прививки может повышаться температура тела, а на месте введения препарата появляется горячая болезненная припухлость, которая постепенно рассасывается без осложнений.

животные плохой упитанности или больные какой-либо болезнью, а также в период вспышки в хозяйстве острого инфекционного заболевания скота (ящур, сибирская язва и др.);

стельные животные, а также животные, находящиеся на откорме;

коровы, привитые в возрасте старше 2 лет противобруцеллезной вакциной из штамма № 19;

молодняк, полученный от реагирующих при исследовании на бруцеллез коров, ц молодняк, привитый вакциной из штамма № 19 против бруцеллеза;

быки-производители в благополучных по бруцеллезу племенных хозяйствах, а также бычки, отобранные к продаже другим хозяйствам.

2.2. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, в том числе в благополучных фермах таких хозяйств, телок прививают двукратно- первый раз в 4–5-месячном возрасте, второй раз – за 2–3 месяца до осеменения.

В благополучных (угрожаемых) по бруцеллезу хозяйствах (фермах) телок вакцинируют однократно начиная с 4-месячного возраста, но не позднее чем за 2 месяца до осеменения.

2.3. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах телок в 4–5-месячном возрасте (при подсосном методе выращивания – после отъема от матерей) исследуют (РА и РСК, РДСК) на бруцеллез, реагирующих (РА в титре 50 ME и выше или положительная РСК, РДСК) удаляют, а остальных иммунизируют вакциной и содержат их на отдельной ферме (участке).

За 2–3 месяца до осеменения привитых вакциной телок исследуют (РА и РСК) на бруцеллез, реагирующих (РА в титре 100 ME и выше или положительная РСК) удаляют из стада, а остальных повторно прививают вакциной из штамма № 82,осеменяют и оставляют под наблюдением до отелов. Исследование на бруцеллез ревакцинированных перед осеменением животных проводят через 1–2 месяца после родов.

Если отелы прошли нормально и при исследовании на бруцеллез не было выявлено положительно реагирующих животных, в дальнейшем это поголовье исследуют на бруцеллез не реже 2 раз в год. При выявлении положительно реагирующих (РА в титре 100 ME и выше или положительно РСК) животных (их удаляют из стада) все поголовье исследуют па бруцеллез ежемесячно до получения двукратного подряд отрицательного результата по стаду.

При наличии в хозяйстве телок в возрасте старше 8 месяцев их исследуют на бруцеллез, реагирующих (РА в титре 50 ME и выше или положительная РСК, РДСК) удаляют, а остальных не позднее, чем за 2 месяца до осеменения вакцинируют, осеменяют и формируют в отдельное стадо. Исследование на бруцеллез привитых животных затем проводят после отелов и далее с ними поступают, как указано выше в настоящем пункте.

2.4. В благополучных (у рожаемых) по бруцеллезу хозяйствах вакцину из штамма № 82 допускается применять для иммунизации животных с профилактической целью только в случае наличия прямой угрозы заноса возбудителя болезни и заражения скота (отгонно-пастбищное содержание животных, расположение благополучных ферм вблизи от неблагополучных хозяйств и т. п.).

У телок с 4-месячного возраста берут кровь и исследуют на бруцеллез (РА и РСК, РДСК, согласно наставлениям по постановке и учету этих реакций), затем животных вакцинируют. После прививки телок исследуют на бруцеллез перед осеменением и затем через 1–2 месяца после отела. Если у вакцинированных животных были аборты, для выяснения их причины все плоды и кровь абортировавших животных направляют в ветеринарную лабораторию для исследования, а животных изолируют. При установлении поствакцинального характера абортов (выделение культуры вакцинного штамма) абортировавших животных оставляют в стаде.

2.5. В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах (фермах), оздоровление которых не достигается длительное время, коров, выращенных из телок, привитых вакциной из штамма № 82 однократно в возрасте 4–8 месяцев или перед осеменением, а также коров, привитых однократно этой вакциной после отела (по мере растела), допускается ревакцинировать вакциной из штамма № 82 однократно, но не ранее чем через 2 года после первой вакцинации. При этом перед прививкой животных исследуют на бруцеллез (РА и РСК), реагирующих (РА в титре 100 ME и выше или положительная РСК) удаляют из стада, остальных ревакцинируют. Коров после ревакцинации исследуют на бруцеллез (РА и РСК) через 6 месяцев и затем через 30 дней, при необходимости исследования продолжают ежемесячно до получения двукратного подряд отрицательного результата по стаду. В дальнейшем поголовье скота проверяют на бруцеллез не реже 1 раза в год. Животных, при исследовании которых получены положительные результаты (РА в титре 100 ME и выше или положительная РСК), во всех случаях удаляют из стада.

Ревакцинацию коров вакциной из штаума № 82 проводят только с разрешения ветеринарного отдела министерства сельского хозяйства автономной республики, областного (краевого) управления сельского хозяйства или главного управления (управления) ветеринарии министерства сельского хозяйства союзной республики, не имеющей областного деления.

Примечание. Если в неблагополучном хозяйстве имеются телки случного возраста или коровы, ранее (до выхода в свет настоящего наставления) привитые однократно против бруцеллеза в возрасте 5–8 месяцев вакциной из штамма № 19, телок допускается ревакцинировать вакциной из штамма № 82 за 2–3 месяца до осеменения, а коров – после их отела (через 15–25 дней).

После ревакцинации животных исследуют на бруцеллез и в дальнейшем с ними поступают в порядке, как указано выше в настоящем пункте и в пункте 2.3 (абзацы второй, третий).

2.6. В отдельных случаях в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах вакциной из штамма № 82 прививают быков-производителей (пробников). Перед прививкой животных исследуют на бруцеллез (РА и РСК, РДСК), реагирующих удаляют и остальных прививают вакциной. После вакцинации их исследуют (РА и РСК) через 4–5 месяцев и затем каждые 30 дней до получения двукратных подряд отрицательных результатов исследований по группе животных.

источник

Автор: Шубина Е. А., технолог, кандидат биологических наук, ФГУП «Щелковский биокомбинат»

Опубликовано: 14 февраля 2011

Бруцеллез (Brucellosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечения, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства.

Сообщение об этом заболевании, по данным Хаджеса (1897), встречается уже у древнегреческого врача Гиппократа. Первое научное описание бруцеллеза было сделано в 1861 году английским военным врачом Мэрстоном. Широкое распространение среди людей отмечалось в 18 и 19 веках в странах, расположенных в бассейне Средиземного моря.

Изучая причины мальтийской лихорадки, английский врач Д. Брюс в 1886 – 1887 гг. установил, что виновником ее является специфический микрококк, названный им Micrococcus melitensis. Дальнейшие исследования показали, что источником возбудителя мальтийской лихорадки являются козы, пораженные инфекцией, а причиной заражения людей — потребление молока от таких коз. Несколько позже Micrococcus melitensis был выделен у овец.

В1897 г. датские ученые Банг и Стриболд установили, что массовые аборты у коров вызывает микроорганизм, названные B. abortus bovis. В 1914 г. Траум обнаружил очень сходный микроорганизм, названный Br. abortus suis, при массовых абортах у свиней.

Для диагностики бруцеллеза в 1897 г. Райтом была предложена серологическая реакция агглютинации, а в 1922 г. Берне разработал внутрикожную аллергическую пробу, облегчающую распознавание болезни.

Долгое время мальтийская лихорадка у людей и массовые аборты у домашних животных считались самостоятельными заболеваниями. В 1918 – 1920 гг. Ивенс, Мейер и Фезье, изучая биологические свойства возбудителя мальтийской лихорадки и массовых абортов у крупного рогатого скота, обнаружили их чрезвычайную близость. Эти исследования явились основанием объединить указанных возбудителей, в том числе и возбудителя массовых абортов у свиней, в одну родовую группу под наименованием Brucella (в честь Брюса), а вызываемые ими заболевания именовать бруцеллезом.

В России начало изучения бруцеллеза было положено работами Е. И. Марциновского (1911), но детальному изучению заболевание подверглось в различных местностях СССР лишь с 1935 г. Большой вклад в изучение бруцеллеза сельскохозяйственных животных внесли отечественные ученые: С. Н. Вышелесский, П. Ф. Здродовский, П. А. Вершилова, М. К. Юсковец, Е. С. Орлов, Р. А. Цион, А. П. Бессонов и др. Были всесторонне изучены биологические свойства возбудителя, усовершенствованы методы диагностики, показаны значение в борьбе с бруцеллезом вакцинальной профилактики и пути ее совершенствования.

Клинические признаки бруцеллеза у крупного рогатого скота

Длительность инкубационного периода 2 – 3 недели. Первым показателем развившегося инфекционного процесса служит появление в крови инфицированных животных агглютининов в постепенно нарастающих титрах.

У коров основным клиническим признаком бруцеллеза является аборт и реже рождение нежизнеспособного приплода. Коровы, заразившиеся до покрытия, в большинстве случаев приносят нормальный приплод. Аборт чаще всего происходит на 5 – 8-м месяце. За 1 – 2 дня до наступления аборта у коров отмечается припухание наружных половых органов, выделение из влагалища бесцветной или буроватой жидкости и набухание вымени. После аборта происходит задержка последа и развивается эндометрит, сопровождающийся обильными слизисто-гнойными или гнойно-фибринозными выделениями. При тяжело протекающем эндометрите повышается температура тела, снижаются удои, отмечается потеря веса, убыстряется СОЭ; умеренный лейкоцитоз. Эндометритам нередко сопутствуют серозные или серозно-катаральные маститы. В процессе могут вовлекаться яичники и фаллопиевы трубы, что приводит к нарушению полового цикла и временному или стойкому бесплодию.

У отдельных животных в связи с абортом или независимо от него можно наблюдать развитие серозных бурситов или серофибринозных артритов. Последние в большинстве случаев возникают в суставах передних конечностей — запястном, путовом, коленном, локтевом. У быков бруцеллез, хотя и редко, сопровождается развитием орхитов и эпидидимитов.

Лабораторная диагностика бруцеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований. Бактериологическое исследование в основном применяют при первичной постановке диагноза на бруцеллез в ранее благополучных хозяйствах.

В лабораторию направляются пробы крови (сыворотки) для серологического исследования, абортивный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей или желудок плода, кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое животных берут паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пораженные суставы, у самцов — семенники. Объектом исследования могут быть молочные продукты (брынза, сыр, масло), объекты внешней среды.

При массовых диагностических исследованиях ставят пробирочную РА, роз бенгал пробу (РА на стекле), РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком (КР). Диагностикумы для этих исследований, а также бруцеллин ВИЭВ для аллергической диагностики готовятся на Щелковском биокомбинате.

Для специфической профилактики бруцеллеза ФГУП «Щелковский биокомбинат» выпускает живые сухие вакцины из штамма B. abortus 19, 82 и 75/79-АВ; инактивированную адъювант — вакцину из штамма B. abortus КВ 17/100.

По данным К. В. Шумилова до 1952 года борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота в нашей стране сводилась к проведению диагностических исследований и удалению из стад больных животных, без применения противобруцеллезных вакцин. В связи с осложнением эпизоотической ситуации в 1953 году в систему противобруцеллезных мероприятий была включена иммунизация животных вакциной из штамма B. abortus 19.

Вакцину из штамма B. abortus 19 применяли до 1970 года. За 20 лет применения вакцины многие хозяйства, даже области, были оздоровлены от болезни. Однако в регионах с широким распространением бруцеллеза эффективность оздоровительных мероприятий оказалась низкой. В первую очередь, это было обусловлено высокой агглютиногенностью вакцины. Агглютинины и комплементсвязывающие антитела, вырабатывающиеся в ответ на введение вакцины, сохраняются в организме животных до 5 – 8 лет и затрудняют дифференциацию иммунизированных животных от больных бруцеллезом.

С 1971 по 1974 год вакцину из штамма B. abortus 19 использовали только на телках 5 – 8 месячного возраста. С 1974 года и по настоящее время в России в комплексе противобруцеллезных мероприятий применяются вакцины из штаммов B. abortus 82 и 19. Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма № 82 отличается от вакцины из штамма 19 слабым серологическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологических реакций дифференцировать вакцинированных животных.

За 30 лет работы с применением вакцины из штамма B. abortus 82 и смены пяти поколений коров к 2004 году (К. В. Шумилов) количество неблагополучных по бруцеллезу пунктов и заболевших животных значительно сократилось.

Сухая живая вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B. abortus 75/79-АВ разработана сотрудниками ВГНКИ и Алтайской НИВС с использованием культуры штамма 75/79, выделенного от коровы, ранее иммунизированной вакциной из штамма B. abortus 82. После многократных пассажей выделенного штамма через организм морских свинок и телок и целенаправленной селекции на питательных средах, был получен новый вакцинный штамм 75/79-АВ. Вакцины не обладает абортогенными свойствами, что дает возможность проводить иммунизацию маточного поголовья независимо от сроков стельности. Вакцина является слабоагглютиногенной; агглютинины и комплементсвязывающие антитела регистрируются у привитых животных в течение трех месяцев после иммунизации, что делает возможным их исследование по истечении указанного срока. У животных, иммунизированных вакциной, выраженный иммунитет сохраняется в течение года, что позволяет за указанный срок оздоравливать неблагополучные хозяйства от бруцеллеза.

Значительный интерес для практики представляет адъювант-вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, сконструированная во ВГНКИ. Вакцина представляет собой эмульсию типа «вода в масле», состоящую из инактивированной культуры штамма B. abortus КВ 17/100 и масляного адъюванта.

Штамм B. abortus КВ 17/100, находящийся в R-форме, получен путем целенаправленной селекции по культуральным, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам из вакцинного штамма B. abortus 104М, находящегося в S-форме. Адъювант-вакцина не индуцирует синтез S-бруцеллезных антител в диагностических титрах у животных, не сенсибилизированных бруцеллами. Адъювант-вакцина индуцирует синтез S-бруцеллезных антител у крупного рогатого скота с латентной формой бруцеллеза, что позволяет за счет быстрого удаления из стад таких животных, ускорить оздоровление хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу.

Адъювант-вакцина не абортогенна и может быть использована для иммунизации маточного поголовья крупного рогатого скота независимо от сроков стельности.

источник

Вакцина предназначена для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота. В качестве антигена вакцина содержит бактериальную массу нового вакцинного штамма Brucella abortus 75/79АВ — ДЕП ВГНКИ. В состав вакцины входит также желатиновый стабилизатор. Использование новой вакцины в ветеринарной практике расширяет ассортимент средств специфической профилактики бруцеллеза и позволяет в 1,5-2 раза повысить эффективность противобруцеллезных мероприятий. 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к препаратам, применяемым для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.

Эффективность борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота во многом определяется средствами специфической профилактики данной болезни.

В настоящее время для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота применяют в основном живую противобруцеллезную вакцину из штамма B. abortus 82, содержащую антиген (живые микробные клетки) и сахарозо-желатиновый стабилизатор.

К недостаткам вакцины из штамма B.abortus 82 относятся нестабильность, обусловленная нестабильностью свойств вакцинного штамма, абортогенность, исключающая возможность иммунизации стельных животных, и низкая иммуногенность [1].

Для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота был предложен штамм B.abortus 75/79A, отличающийся от штамма 82 меньшей агглютиногенностью и отсутствием абортогенности [2]. Однако при дальнейшем изучении свойств данного штамма было установлено, что по ряду причин, в частности недостаточно высокой иммуногенности для крупного рогатого скота [1], сложности культивирования и относительно невысокой стабильности культуральных свойств, он не может быть рекомендован для изготовления противобруцеллезной вакцины.

Целью изобретения является получение слабоагглютиногенной, неабортогенной, высокоиммуногенной живой вакцины из штамма бруцелл, обладающего стабильными свойствами.

Цель достигается тем, что вакцина в качестве антигена содержит бактериальную массу штамма B.abortus 75/79AB при следующем содержании компонентов, мас./об.%: Бактериальная масса из штамма B.abortus — 10-40 г (12510 11 — 50010 11 микр.клеток) Сахароза — 6,0 — 9,0 г Желатин пищевой — 0,9 — 0,135 г Дистиллированная вода — Остальное до 100 см 3 Штамм B.abortus 75/79 AB, используемый для изготовления вакцины, получен из культуры штамма B.abortus 75/79A посредством пятикратного пассажа через организм крупного рогатого скота с последующей целенаправленной селекцией по культуральным, морфологическим, антигенным и иммуногенным свойствам.

Штамм B.abortus 75/79 AB депонирован в ВГНКИ за номером 75/79 AB-ДЕП.

Штамм характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки. Короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные поодиночке или парами, без спор и капсул. Размер 1,2 — 1,3 мкм, ширина 0,5 — 0,6 мкм.

Культурные свойства. Культура штамма хорошо растет на плотных и жидких питательных средах: мясо-пептонном печеночном глюкозоглицериновом агаре (МППГГА), МППГГА с добавлением перевара Хоттингера, МППГТБ в аэробных условиях (не требует для культивирования повышенного процентного содержания CO2).

На МППГГА (4-5 сутки инкубирования при 37-38 o C) растет в виде круглых, выпуклых, шероховатых, с нечетко контурированным краем, прозрачных с голубовато-зеленоватым оттенком колоний диаметром 2,5 — 3,0 мм. При окрашивании раствором кристаллического фиолетового 1/2000 (по Уайт-Вилсону) 100% колоний окрашивается как RS-форма: по фиолетовому фону желтая исчерченность в виде 8-10 трещин слоя краски, расположенных в центре колонии. Культура дает положительную пробу с акрифлавином и положительную реакцию термоагглютинации.

Культура штамма растет на МППГГА, содержащем фуксин, тионин в концентрации 1:50000, натриевую соль бензилпенициллина в концентрации 5 ЕД/см 3 , эритритол — 1 мг/см 3 , и не растет на среде, содержащей 5 мкг/см 3 стрептомицина сульфат. Продуцирует H2S(8-10 мм). Лизируется фагом Тб.

Агглютинабельные свойства. Культура штамма агглютинируется S- и R-антибруцеллезными сыворотками, А-моноспецифической сывороткой в титре 1:10 и не агглютинируется М-моноспецифической сывороткой.

Антигенные свойства. При введении культуры штамма крупному рогатому скоту (50-200 млрд.клеток) у животных вырабатываются специфические S- и R-бруцеллезные антитела, выявляемые S и R-бруцеллезными антигенами в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РДСК).

Безвредность. Штамм 75/79 АВ безвреден для лабораторных животных и крупного рогатого скота. При введении мышам 250 млн и морским свинкам 2 млрд микробных клеток не вызывает патологоанатомических изменений, характерных для бруцеллезной инфекции. При подкожном введении крупному рогатому скоту до 200 млрд микробных клеток не вызывает аборты и бруцеллезную инфекцию.

Бруцеллы штамма 75/79 АВ не мигрируют от вакцинированных животных к интактным.

Пример 1. Штамм B.abortus 75/79 АВ культивируют на плотной питательной среде или в ферментере на жидкой питательной среде. К 10-40 г бактериальной массы добавляют 90-60 см 3 (до 100 см 3 ) сахарозо-желатинового стабилизатора, содержащего 10.0% сахарозы в дистиллированной воде и 1,5% желатина, устанавливают концентрацию бакмассы, равную 12510 11 — 50010 11 микробных клеток. Готовую вакцину расфасовывают в ампулы (или флаконы) и консервируют, лиофильно высушивая.

Готовая вакцина представляет собой сухую пористую массу светло-коричневого или светло-желтого цвета, укупоренную в ампулу под вакуумом или во флаконы под азотом, хорошо растворяющуюся в физиологическом растворе.

Полученная вакцина имеет следующий компонентный состав (табл.1).

Пример 2. Полученную вакцину серий 1-3 испытывают на антигенную активность в сравнении с экспериментальной вакциной штамма B.abortus 75/79 АВ (прототип) и коммерческой вакциной из штамма B.abortus 82 (аналог). Противобруцеллезные вакцины вводят телкам в возрасте 4-5 месяцев под кожу в область задней трети шеи. Вакцину из штамма B.abortus 75/79 AB в дозах 50, 100 и 200 млрд микробных клеток, из штамма 82 и 75/79 A в дозе 100 млрд микробных клеток в объеме 5 см 3 . Каждым препаратом прививают 10-12 животных. Спустя 30,60,90,180,270 и 350 дней после иммунизации у животных берут кровь и исследуют серологическими методами (РБП, РА, РСК с S-бруцеллезными антигенами).

Результаты испытаний антигенных свойств вакцин приведены в табл.2.

Из табл. 2 видно, что вакцина из штамма 75/79 AB имеет преимущества перед экспериментальной из штамма 75/79A и вакциной из штамма 82. Спустя три месяца после иммунизации живой вакциной из штамма 75/79 AB можно проводить исследования на бруцеллез в принятых диагностических реакциях и выявлять заразившихся бруцеллезом животных. Телки, иммунизированные вакциной штамма 75/79 A (прототип) и вакциной из штамма 82 (аналог), дольше содержали в крови антитела, улавливаемые S-бруцеллезными антигенами, что затрудняет дифференциацию иммунных животных от заразившихся и оздоровление поголовья.

Пример 3. Вакцину из штамма 75/79 AB серий 1-3 испытывали на иммуногенную активность в сравнении с вакцинами из штаммов 75/79 A и 82.

Телок в возрасте 4-6 мес иммунизируют испытуемой вакциной в дозах 50, 100, 200 млрд микробных клеток. Вакцинами из штамма 75/79 A и из штамма 82 в дозе 100 млрд микробных клеток. Вакцины вводят в объеме 5 см 3 под кожу в область задней трети шеи. Каждым препаратом иммунизируют 7-10 телок. Через 10 мес после вакцинации животных заражают стандартной культурой контрольного вирулентного штамма Б. абортус 54М/ВГНКИ в дозе 15 млн микробных клеток. Культуру вирулентного штамма наносят на конъюнктиву обоих глаз по 7,5 млн микробных клеток в объеме 0.1 см 3 . Спустя 42-45 дней после заражения животных убивают и проводят бактериологическое исследование лимфатических узлов и внутренних органов (30-35 объектов). Критерием оценки заражения животных служит наличие бруцелл вирулентного штамма в лимфатических узлах и внутренних органах вакцинированных животных. Результаты испытания приведены в табл.3.

Из табл. 3 видно, что предложенная вакцина, содержащая антиген из штамма Б. абортус 75/79 AB, обеспечивает защиту 90-100% иммунизированных животных и по этому показателю значительно превосходит вакцинный штамм Б.абортус 75/79 A и вакцину из штамма 82.

Пример 4. Испытания абортогенности (безвредности для стельных животных) проводят на 195 коровах и 64 нетелях со стельностью от 2-х до 6 мес. Испытуемую вакцину из штамма Б абортус 75/79 AB вводят в дозе 100 млрд микробных клеток в объеме 5 см 3 под кожу в область задней трети шеи. За вакцинированными животными наблюдают в течение 7 мес. В результате испытания установлено, что у всех животных отелы прошли нормально. Испытуемая вакцина не вызывает аборты у стельных коров и может быть использована для иммунизации коров независимо от срока стельности.

Использование предложенной вакцины в ветеринарной практике позволит повысить эффективность специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и расширить ассортимент высокоэффективных биопрепаратов против данного заболевания.

Литература: 1. Апробация вакцины из штамма 75/79A Br.abortus на крупном рогатом скоте. Никифоров И.П. и др./Ветеринария, 1995, N 8, c.20-22.

2. Авторское свидетельство SU 1701743 Al.Штамм бактерий Brucella abortus, используемый для приготовления вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота.

Вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота, содержащая антиген бруцелл и водный сахарозо-желатиновый стабилизатор, отличающаяся тем, что она в качестве антигена содержит бактериальную массу штамма Brucella abortus 75/79 AB — ДЕП ВГНКИ при следующем содержании компонентов: Сахороза, г — 6,0 — 9,0 Желатин пищевой, г — 0,9 — 1,35
Бактериальная масса штамма Brucella abortus 75/79 AB — ДЕП ВГНКИ г (микр.клетки) — 10 — 40 (12510 11 — 50010 11 м.к.)
Вода дистиллированная, см 3 — До 1005

NF4A Восстановление действия патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 32-2003

источник

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии. После введения вакцины из штамма 82 Brucella abortus животным дополнительно вводят деполен. Способ способствует формированию иммунного ответа у 100% привитых животных. 1 з.п.ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной иммунологии, а именно к способам усиления иммунного ответа при вакцинации крупного рогатого скота против бруцеллеза.

Известен способ вакцинации крупного рогатого скота против бруцеллеза путем введения вакцины из штамма 82 Brucella abortus подкожно в область средней трети шеи в дозе 5 мл (Наставление по применению сухой живой вакцины из слабоагглютиногенного штамма 82 Бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота// Ветеринарное законодательство. — т.3. — М.: Колос, 1981. — С.166-169).

Однако данный способ недостаточно эффективен, так как иммунитет против бруцеллеза формируется не у всего привитого поголовья.

Известно также применение деполена для нормализации обмена веществ, предупреждения болезней селеновой недостаточности, профилактики родовых и послеродовых осложнений. Деполен — препарат, содержащий селенит бария и вазелиновое масло, является средством антиоксидантной защиты организма животных (Наставление по применению деполена. Одобрено советом по ветеринарным препаратам Департамента Ветеринарии Минсельхозпрода РФ 18.06.1998 г. (протокол 3), регистрационный номер препарата ПВР 203727-98). Однако рекомендуемый изготовителем внутримышечный способ введения деполена крупному рогатому скоту вызывает образование отеков и абсцессов в месте инъекции.

Для усиления иммунного ответа при вакцинации крупного рогатого скота против бруцеллеза, повышения эффективности вакцинации, устранения побочных явлений в предлагаемом способе при введении животным вакцины против бруцеллеза из штамма 82 Brucella abortus в дозе 5 мл подкожно в область средней трети шеи (согласно наставлению по применению вакцины) одновременно вводят деполен подкожно в область грудины в дозе 2 мл на 100 кг живой массы.

Подкожное введение деполена одновременно с вакциной не вызывает нежелательных побочных эффектов, способствует формированию агглютинирующих антител у 100% привитых животных, повышает лизоцимную активность сыворотки крови на 60%, концентрацию циркулирующих иммунных комплексов на 10%, фагоцитарный индекс на 15,6%, не снижает фагоцитарную активность лейкоцитов.

Положительное влияние деполена в предлагаемом изобретении выражается в активации как клеточного, так и гуморального звена иммунной системы, что, в свою очередь, способствует процессу формирования иммунного ответа у всех вакцинированных животных. Деполен при одновременном введении с вакциной проявляет новые качества стимулятора иммуногенеза, а именно, активизирует процессы синтеза специфических антител.

Пример. Сформировано 2 группы (опытная и контрольная) телочек 4-6-месячного возраста, по 8 голов в каждой. Перед иммунизацией у животных были взяты пробы крови для определения основных показателей иммунной системы и чувствительности к бруцеллезному антигену. Реакция иммунной системы животных на введение препаратов тестировалась по следующим показателям: лизоцимная активность сыворотки крови (ЛА), фагоцитарная активность лейкоцитов (ФА), фагоцитарный индекс (ФИ), концентрация циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), титры антител к бруцеллезному антигену в реакции агглютинации (РА). Срок наблюдения за животными — 30 дней.

Телочки контрольной группы вакцинировались вакциной против бруцеллеза из штамма 82 Br. abortus путем введения 5 мл вакцины подкожно в область средней трети шеи. После вакцинации у животных наблюдалось кратковременное недостоверное увеличение ЛА на 30%, ЦИК на 6,5%, снижение фагоцитарной активности на 9,9%, фагоцитарного индекса — на 28% по отношению к фоновым показателям. Количество реагирующих на бруцеллезный антиген животных в РА составило 85,7% (табл. 1, 2).

Телочек опытной группы вакцинировали аналогично животным контрольной группы с той лишь разницей, что одновременно с вакциной телочкам вводили деполен в дозе 2 мл на 100 кг живой массы подкожно в область грудины. Подкожное введение деполена животным опытной группы не вызывало негативных побочных эффектов. У телочек этой группы достоверно увеличилась ЛА на 60% по сравнению с исходными показателями, концентрация ЦИК возросла на 10,2%, фагоцитарный индекс увеличился на 15,6% (табл. 1), число реагирующих на бруцеллезный антиген в РА составило 100% (табл. 2).

В предлагаемом способе деполен проявляет новое, отчетливо выраженное, стимулирующее действие на синтез специфических антител в организме животных, усиливает иммунный ответ, не вызывает нежелательного побочного действия (в виде отеков и абсцессов), способствует формированию иммунного ответа у 100% привитых животных.

Доступность и простота выполнения предлагаемого способа позволяют широко использовать его.

1. Способ усиления иммунного ответа при вакцинации крупного рогатого скота против бруцеллеза путем введения вакцины из штамма 82 Brucella abortus, отличающийся тем, что дополнительно вводят деполен.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что деполен вводят подкожно в дозе 2 мл на 100 кг живой массы.

источник

Бруцеллёз не только крупного, но и мелкого рогато­го скота на протяжении многих лет остается одним из самых распространённых заболеваний в Казахстане. Как предотвратить болезнь с помощью вакцинации – читайте в интервью с доктором ветеринарных наук, про­фессором, академиком НАН РК Николаем Петровичем Ивановым (на снимке).

— Почему одной из самых распространённых болез­ней среди КРС в Казахстане на протяжении многих лет остается бруцеллёз?

– Согласно данным ветери­нарной статистики, около 20% имеющегося поголовья сель­скохозяйственных животных является неблагополучным. Проблема повсеместной лик­видации бруцеллеза среди животных представляет зна­чительные трудности из-за: его широкого распростране­ния, способности возбудите­ля к обитанию в организме са­мых разнообразных видов жи­вых существ, а также, в ряде случаев, латентного (не прояв­ляя себя) течения инфекции и связанные с ним сложности диагностики и специфической профилактики заболевания.

— Первое, что нужно пред­принять с целью недопу­щения заражения скота бруцеллёзом?

-Выполнять полный ком­плекс организационно-хозяй­ственных, ветеринарно-сани­тарных и специальных ветери­нарных мероприятий. Все эти меры должны быть отражены в плане противобруцеллезных мероприятий, который дол­жен быть комплексным (воз­действовать на все три звена эпизоотической цепи), своев­ременным и реально выпол­нимым (согласно имеющим­ся финансовым и материаль­но-техническим средствам). В нем должны быть указаны мероприятия, сроки их испол­нения и ответственные лица.

— А, что нужно предпри­нять уже в случае появле­ния болезни среди крупного рогатого скота?

-При появлении инфекции нужно:

  1. заменить все неблагопо­лучное поголовье здоровыми, то есть не инфицированными животными;
  2. проводить регулярные (че­рез каждые 15-20 дней) диа­гностические исследования с последующим выделением и убоем выявленных больных животных;
  3. применять вакцинные пре­параты с последующими, по­ствакцинальными исследова­ниями, согласно инструкции по применению вакцины.

— Какие, в данном случае, существуют виды и назна­чения вакцин?

– Существующие противо­бруцеллёзные вакцины услов­но подразделяются на следу­ющие группы, которые разли­чаются по антигенности, реак­тогенности, иммуногенности и другим признакам.

1.Агглютиногенные. Эти препараты являются иммуно­генами. Но их применение не рекомендуется для взросло­го поголовья, так как они ин­дуцируют антитела, которые в последующем не позволя­ют проводить диагностические исследования.

2.Слабоагглютиногенные. Они выгодно отличаются от первой группы, так как созда­ют возможность проводить ди­агностические исследования в относительно короткие сро­ки поствакцинального пери­ода. Одной из наиболее рас­пространённых в нашей стра­не вакцин для иммунизации против бруцеллёза крупного рогатого скота является вак­цина из штамма В.abortus 82. Отрицательная сторона этого препарата – чрезмерная реак­тогенность. В организме бере­менных животных эта вакцина вызывает аборты, что сдержи­вает её применение на стель­ном поголовье крупного рога­того скота.

3.Неагглютиногенные. Наз- ванные вакцины обладают вы­раженными провоцирующими свойствами. В организме ла­тентно больных животных они обостряют течение инфекции, то есть позволяют выявить максимальное количество ин­фицированных особей.

4.Инактивированные вак­цины. К н им о тносятся п ре­параты из агглютиногенных и неагглютиногенных штам­мов. Эти вакцины, в том чис­ле Казахского НИВИ находят­ся на стадии производствен­ных испытаний и пока не име­ют широкого практического применения.

— В каких областях Казахстана наиболее рас­пространена болезнь?

– Наибольшее число небла­гополучных пунктов и количе­ство больных животных среди КРС отмечается в северных и центральных регионах страны, а мелкий рогатый скот чаще по­ражён на юге и юго-востоке ре­спублики. В некоторых обла­стях возрастает число случаев заболевания людей.

— Что включают в себя про­тивобруцеллёзные мероприятия?

– Специальные противо­бруцеллёзные мероприятия включают своевременную и качественную диагностику, в особых случаях применение средств специфической про­филактики и антибактериаль­ных препаратов. Для выявле­ния источника инфекции, с це­лью последующей его ликви­дации, используют различные диагностические приёмы. К примеру, серологические ме­тоды и аллергическая проба базируются на иммунологиче­ских реакциях. Следует особо отметить, что иммунологиче­ская реактивность животных тесно связана с видовыми, ин­дивидуальными и возрастными особенностями организма.

Помимо этого,содержать не­вакцинированное поголовье к настоящему времени возмож­но только при отсутствии угро­зы заражения животных. В дру­гих хозяйствующих субъектах должна быть предусмотрена иммунизация молодняка (по­сле предварительного сероал­лергического исследования) и возможна повторная вакцина­ция половозрелых животных за 2-3 месяца до осеменения.

А главное, во всех случа­ях нужно использовать вакци­ны и методы их применения, разрешённые для иммуниза­ции животных на территории Республики Казахстан.

— Кто наиболее чувстви­те лен к бруцеллёзной инфекции?

– Наиболее чувствительными и восприимчивыми к бруцеллез­ной инфекции являются парно­палые, половозрелые, но от­носительно молодые особи на пике их гормональной активно­сти (половозрелые тёлки, ярки, козочки, нетели или первотель­ные и беременные животные). Ведь с возрастом реактивность организма животных снижается. Нередко, когда среди «старого» поголовья много больных, име­ющих отрицательные показа­ния диагностических реакций. Особого внимания в диагности­ческой работе, благодаря высо­кой разрешающей способности, заслуживают тест ELISA (ИФА) и полимеразо-цепная реакция (ПЦР).

— Есть ли какие-то но­вые современные мето­ды вакцинации КРС против бруцеллёза?

Уместно отметить, что в со­временных условиях особо­го внимания заслуживает так называемый «конъюнктиваль­ный» метод иммунизации. Известно, что через слизистую оболочку конъюнктивы глаза в организм могут поступать раз­личные вещества, в том чис­ле и антигены. При конъюн­ктивальном методе иммуни­зации, как показали результа­ты исследований, благодаря проникновению антигена по слёзно-носовому каналу в но­совую полость, площадь его всасывания резко увеличива­ется, что обеспечивает индук­цию иммунитета, не уступа­ющего таковому при подкож­ном методе вакцинации. При этом резко снижается период циркуляции в крови антител, улавливаемых стандартны­ми антигенами, что позволяет своевременно проводить диа­гностические исследования и, безусловно, выгодно отличает этот метод от других.

источник

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему: Получение и испытание живой вакцины против бруцеллеза из штамма 82-ПЧ

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Получение и испытание живой вакцины против бруцеллеза из штамма 82-ПЧ

ЗАНСКИЛ ОРДЕНА ЛЕНИНА ЗЙТЕРИНАРНШ! ИНСТИТУТ имени 11.с. БАУМАНА 11 (!5П1Г ЮО’З

БЕДОЗВРОг1А ГАЛИНА АЛчаСАНдРОЗНА

ПОЛУЧЕНИЕ И ИСПЫТАНИЕ 2ИЗОЗ ВАКчИаН ПРОТЧЗ БРУЦЕЛЛЕЗд ИЗ- ШТАМПА 82-ПЧ

16.00.03. — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Работа вшолнена в лаборатории бактерийных инфекций Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института

Научные консультанты: Заслуженный ветеринарный врач РСФСР, доктор ветеринарных наук, профессор К.М.САЛМАКОВ

Заслуженный деятг науки ТССР, доктор ветеринарных наук, профессор, -чадемик АНТ Г.З.ВДН1СОЗ

Доктор ветеринарных наук, профессор Р.Г.ГОСМАНОВ

Доктор, ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент Россельхозакадемии, заслуженный ветврач РСЗСР В.В.ООЧНЕВ

Доктор, ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент Казахской АСХН Н.П.ИВАНОВ

Ведущее учреяздение — Всероссийский научно-исслед’овг^’ельский институт бруцеллеза и туберкулеза животных ( ВНИИБТ2 )

Защита состоится » » МЮК ^ ^ 1993 г j.eimi0HUx: средств специфической профилактики в комплексе с организациокно-хозяйственнши и ветершгарио-санитарнши мероприч ятиями ( Орлов Е.С. и др.,1971; Уласевт П.С.,1971; Сашаксл K.M., 1975; Студенцов К,П., 1975; Нгяицкнй A.A., 1Э’/8; Юсупов О.Ю. ц др., IS84; Забродин В.Л. и. др., ISS0; Джупина С,If., 1985; Кос адов Я.А., 1985; Сочнев В.В., 1988; Алиев Э.А.,1987; Иванов Н.П. ,1988; (им В.И,, 1989 и др.>.

В настоящее время для этих целей широко используются дивна ваздшш аз пгеашов 82 и 19. Однако они шею* сущест -¡шные недостатки. После илиуяизацяя вакциной из юташа 13 животные телгое врегя остаются серопозитивнш:; ( Гринько В.К. и др. ,1289; СЗъад-ков Г.А,, 1909), 470 затрудняет проведение взтеринаг’^-санятарных мероприятий, дифференциацию вакцинированных животных от большее и определен;:- эпизоотического статусу поголовья скота ас лезу.

При комиссионной проверке ( I969-I97C, I9?I-Iv? та Казань, 1979), совецанин bgïq-ринарних специалистов страны на ЭДК ( Москва, 1982), ..сесотиой научнойко:Ц;еранциа но проблемам эпизоотологии ( Казань, 1983), республиканской ^учно-пропзводственпой конференций Казань, I986-T992), совеиашш-семичс-ре аракткчсских и научных ветспециэ-листов (Новосибирск, ISS7), семинарах i’-.гср’.шарннх специалистов Оренбургской обллсти (1983), ДгерооПцшна (1088), Арглшин (1389/, .:шой Осетии (1990).

2. ;.’атер;пл а чзтодн нсилодовэшй

Работа выполнена в соответствии о плановой иг, :■■ о л

ти — тлло;; г, ¿¿’,г-19. го«ах п даборэторип бакт-. ¿¡Дюгс лкекф.» «сот л;гп;;ло ааучис-пссхолскдсльского ветеринарного института (г.Казань), а такие непосредственно в хоз, ствах Оренбургской, Саратовской областей Российской Федерации, Азербайджана, Армении и Южной Осетии.

В экспериментах .юпользовтля 115 голов крупного рогатого скота, 280 кроликов и 3000 морских сванок. .Производоздвенныв испытания птеведены на 120 тысячах коров и нетелей.

В исследованиях использовали шташы бруцелл: В. abortus 82 (серия 1232 , 0528 , 0379), 19 (серия 7Э), 54,. 544 , 99, R-82 и Е-1096, в, maliteneis 25 и В. euia е, а также полевые культуры, полученные из абортированных плоцов, органов и лимфоузлов больных животных.

В работа использовали питательные среды: печеночно-пептонный глютзо-глицериновый агар и бульон (ШИТА и ППГТБ), пептонно -■мартеновский агар с переваром Хоттингера ( ШАХУ, Дгар «Д», агар и бульон на основе плацантарно-эмбрионально-маточного гицролизата (1ПЭМ’, картофельный, гриппозный и эритрит- агар и триптозный бульон.

На первом этапе изучали возможность снижения абортогенного воздействия бруцелл птамма 82 и отрабатывали оптимальные схемы вакцинации беременных коров. При этом испытывали малые дозы вакцины из штамма 82 и использовали штамм В-62 для грунтвакцинации с последущей прививкой вакцины из штамма 82.

На втором этапе исследований изучали возможность получения антибиотико-устойчивых и чувствительных, а также ауксо’хуофных мутантов бруцелл. Целенаправленная селекция клонов с пониженной реактогенностью из шташа 82. проведена с использованием методики длительного культивирования на искусственных питательных средах.

В результате направленного.клонирования и селекции новых 1 вакцинных штаммов бруцегл было установлено, что наибольший интерес в этом отношении представляет штамм 82-ПЧ (пешщилино-чувствитель-ный вариант’ птамма 82).

В этой связи , в шс-ед;пде.\ у бруцелл этого штамма более углубленно изучали стаба; ыюезь, .лулх гурадьно-мор^ологические, агглютикабелькые, биохкшг> ас к ¡е, ант; тонные, вирулентные, иммуно-генные, икмувошорфологичеезие и рэак.’огенше свойства, п также исплтывали вакцину из этого шташа в производственных условиях.

Культуралько-морфологические и дифозренциальные с ойстса бруцелл и полученных из них мутантов изучали методами, рекомендованными Подкомитетом по таксономии бруцелл Международного Комитета по номенклатуре бактерий и Объединенного комитета экоцертов , ФА0/В03 по бруцеллезу (1978).

Стабильность штамма 82-ПЧ изучали путем проверки его свойств после длительного:: культивирования на агаровых и бг*ьонных питательных средах, а также после ,5-кпатного пассирования через

организм морских свинок и 6-кратного — крупного рогатого ско.а, в том числе беременных коров. Определяли так:ке стабильность сиойсть культур бруцелл этого штамма, полученных из отдельных колошй и после лиофшшзацда. Стабильность изучали на традиционной печеноч-11о;: среде и среде на основе ГПЭМ совместно с сотрудниками лабо -ратории питател! »х сред ИИ — с.н.с,к.м.н. Машеевол Н.К.^ м.н.п. Торбино?» . 1.

Ос’ггчнц.ш маркерами ¡яташа 82-ПЧ г.вялятся чувствптелыость к пенициллину и эритритолу, агглютинабельность с бруцеллезными ^ — и Й-сыворотками.

Ультрастр;уч;т;/ру бруцелл ыхамм» Ь^.-ПЧ изучат методами гт5— гативнего контрастирования и ультратонких срезов совместно с-с.н.с. лаборатории патоморфологии ВНИВИ, к.б.п. Шошокиним В.А.

Аминокислотных анализ бруцелл штамма 82-ПЧ проводили на автоматическом анализаторе аминокислот Н 1200

В качестве тестов, определяющих иммунологлческуи реактивность животных и агглютиногенность культур бруцелл вакцинного штата, применяли реакцию агглютинации (РА), связывания комплемента (ВСЮ и Роэ-Бенгал пробу (РЕП), которые ставили по общепринятым методи-

Сроки при:Аиваемости и степень обсеменения бруцелл ва.’.циипого атеша в зависимости от дозы у морских свинок устанавливали печез ?, 15, 21, 30, 60, .80 п 120 суток, у крупного рогатого скота через 15, 30, 60, 90 и 180 суток после Ангцппащш.

Морфологические свойства бруцелл изучали на препаратах, окрашенных по методам Козловского и Грамя. Изменчивость бруцелл устанавливали путем постановки трнпафлавиновой пробы, термоагглютинации и окраски колоний по методу Уайта и Вилсона. Хул:,тураль-тше свойства определяли по характеру роста микробот ло Ш

.7 95$ ш уровнем значимосги ч=0,05 на ЭШ «Электроника Ж-56» по разработанным npoipai.*u/-«‘.i ( Тукшаитов Р.К., Нигматуллин II.X., 1984).

2.2. Изыскание способа прививки вакциной из што’ила 82 беременных коров и нетелей против бруцеллеза

В литературе имеются сообщения о различных методах снижения абортогешшстк вакцины из штамма 82: коныожтивальтй метод введения препарата ( Муминов А., 1983), использование антибиотиков после прививки ( Ростов А.П., 1987), двухзтапная вакцинация с

иопользованием вначале [лалта доз этого препарата, инактивированную вакцину или другие шташм, а затем — прививка штаммом 82 ( Киршин Б.А., 1977; Салмаков K.M., 1978; Стопин И.С. и др., 1981; Сочнев В.В. и др., 1983).

Работу проводили ‘в хозяйствах Оренбургской области. При этом нами апробирован двухэтапный опособ вакцинации с использованием малых «оз щташа 82 и вакцины из шташа Д-82.

Первоначально беременных коров иммунизировали малыми дозами (1-2 млрд м.к.), а через 1-2-3 месяца — полной дозы (100 млрд м.к.) ‘ вакцины из штамма 82. После вг декия малой дозы штамма 82 в одном из хозяйств у коров в течение месяца абортов не отмечалось. Животные реагировали в РА с биофабричным антигеном в титрах, нике диагностических, а в РСК — негативно. После введения щташа 82 в полной дозе через 1; 5-2 месяца среди привитых коров отмечались аборты в двух гуртах в пределах 4,1-5,3$, в третьем — 125?. При выборочном исследовании привитых кивотных через 4 месяца выявили положительно реагиругадие в РА й РСК, при исследовании через 7 месяцев псе животные реагировали отрицательно.

В другом хозяйство при использовании этого способа получены негативные результаты. Через 1,5-2 месяца после прививки малыми дозами вакцины из штамма 82 коровы абортировали и поэтому бьшо решено прививатт их после отела.

При использовании в качестве грунтвакцины штамма Р-43^ на беременных коровах были получены также неравнозначные результаты. Установлено, что вакцинация беременных коров этим способом в благополучных по бруцеллезу хозяГствлх аборты не вызывала или они были • единичными. Черва 15-30 суток котле введения-вакцины из штамма ■Р-82 у животных результаты Р*. и РСК с бисфабричнш антигеном были отрицательными. Аналогичные ае результаты были после введения штамма 62, через 6-7 месяцев все поголовье привитых животных реагировало негативно. В стадах, угрожаемых по бруцедяьзу или в которых эта инфекция только начинала развиваться и где животных своевременно прививали по этой схеме, сравнительно быстро удавалось предупредит^ возникновение острой вспышки и распространение бруцеллеза.

Вакцинация условно-благополучного поголовья коров позволяла снизить количество положительно реагирующих на бруцеллез животных н сократить срока оздоровления стада.

Анализ резул .татов пршенеипя этого метода в хозяйствах с ¡-¡злЛчноН эпизоотической обстановкой показал,-что вакцина из

не пизюз&ег абортов у фгрвдемшх коров, а у здот-оит лль-отяил не пызктс».’ оорвзошшт с.пешфйче’пгих анхатед, улаьли-васмых оиофабричным антигеном ь РА и КЖ. Применение двухэтажной вякнкивш*!* «ото.’тле йнкмцииро^етт, чес

«котя ж зр.т>:п»:з от схиль.исги. При атом благополучное по бруцеллезу поголовье ;:швоткых через 6-7 месяцев не реагирует на бруцеллезный антиген, а абортогенность вакцины из шташа 82 в этом случае с чихается в 2-3 раза. В хронически неблагополучных сходах по бруцеллезу после применения зтого метода количество абортов и выделение положительно реагирующих животных в РА и РСК сокращается. В острых бруцеллезтос очагах при развитии инфекции этот метод не дает эшшекта.

Т/п:;г,; оор-чзо. :;ст;тап’;чр наг-ли способ;; р/.-пи^.ч»— »г.»1″»:;’:

получен;. чу гейтов н изучение

В соответствии с поставленной задачей, на птопа.» втяпд

сстпкг;. ^¡хотро^гтых, йнтцо^отшсо^’С^ст^«-тельных л резистентных к ши мутантов бы’целл. йзыекглие новых неабортогенных штаммов бруцелл вызвано необходимостью вакцинации беремешых коров.

Б результате кровсясягас рябог били получены тнчшшугь»‘»- , стрелтоешцпно-, оксагашшо-уотоЯчявыс , нне я некоторые ауксот$о£пие мутанта.

После длительного культивирования штамма 82 на триптозных средах были отобраны стабильные пенициллино-чувствгтельные мутанты бруцелл. Культуры 5-7 — суточного роста рассовали на указанный агар для получения изолированных колоний, которые отсевали на косячки ШИТА. Культуры 2-3,- суточного роста проверяли по культурально-морфологическим свойствам. После четырех-летнсго изучения их, многократных рассевов и пересевов на искусственных •питательных средах и жесткой селекции,-для работы были оставлены 13 культур бруцелл. Все они хорошо росли на печеночных средах, давали выраженную положител. .1ую реакцию о бруцеллезными $ — и Р -сыворотками и отрицательную термоагглютинацию, слабо реагировали с трипафяавином, не росли в присутствии 2,5-5 ед/wi пенициллина и давали слабый рост на среде при 0,5-1,0 ед/мл препарата, были чувствительны к эритритолу и тионину и репродуцировали в присутствии фуксина. При проведении полного комплекса исследований в дальнейшем была оставлена одна культура — вариант 6, которая и явилась основой шташа В. abortus 82-ПЧ и используется ч настоящее время для изготовления вакцины.

После»трех пассажей через организм морских свинок, культура сохранила исходные свойства :t высокую чувствительность к пенициллину и .эритритолу, агглютинабельность в S — и сыворотках, характерную окраску колоний, минимальную остаточную вирулентность на морских свинках. В дальнейших исследованиях эти свойства явились основными маркерами для штамма 82-ПЧ.

В проблеме применения вакцин одним из актуальных является вопрос их стандартизации. Дж обеспе-эния этого фактора при изготовлении вакцинных препарате: яреЗуеазя с ‘одной стороны использование достаточно стабильнь t гк> бп ;ло треской характеристике штаммов, с другой. — необходимо пролод гаь постоянный контроль за состоянием их свойств, так как важно выявить начальные признаки изменения и своевременно предотвратить их последствия.

По данным Салтыкова P.A. (1976), любая популяция бактерийных штаммов венетически неоднородна вследствии возникновения в ней спонтанных мутаций. В связи с этим езтор поднимает вопрос о совершенствовании способов сохранен я лвойств вакцинных штаммов. Основными из них он считает лйофклизащш, пассажи через лабораторных животных и изучение отдельное особзй из популяции этих

Стабильность свойств штамма 82-1ТЧ изучали в течение 14-летнего культивирования на искусственных питательных средах. Культура этого штамма прошла 15-кратное пассирование через организм морских свинок и о-кратное — через организм крупного рогатого скота, в том числе беременных коров.

Для контроля биологических свойств популяция штамма 82-ПЧ проводилось из.ъч’чше свойств исходных культур и отдельных колоний из них, культур после целенаправленных последовательных пересевов на питательных средах

lie ‘ледованш показали, что культурально-морфологлческие свойства разных культур исходного штамма 82-ПЧ идентичны — он сохрг-няет свою генетическую характеристику.

При электронномикроскопичеслом исследовании ультраструктуры бруцелл штамма 82-ПЧ в сравнении со штаммами U2,I9,5^ и 5-1096 отмечено, что он относится к морфологическому типу 4. Овальные клетки’имеют размеры 400-600 нм по короткой оси и 900-1200 — по длинной осц. Трехслойная стенка почти не-имеет складок, 70ла1::на ее составляет 8,е

2 нгл. Цитоплазматичеокая мембрана у.зы-ласта, всделстгле чего периплазматическоо пространство . ;п .» раз-лкчнуа лирису от т4 до 25 нм. Электронная плотность eic относительно высока. Пижркбосояы сконцентрироваян преимущественно ‘¡о перемеряй клетки ;; шоюфакг.о высокую электронную плот иосп,. Нунлеощ располагается ¡;о.\:яаитно в центре клетки л, наоборот, дмбег низкую электронную плотность. 3 пего вкраплены многочисленные гршгули включения. Ыезооош встречаются повсеместно в виде иетлевшных и концентрических мембран.

В отличие от штамма 82-ПЧ, у бруцелл других ггмг.пв rvrerc—нал стенка аяг.иистпя и складчатая. Кроме того, г .-.гакроотк ток штамма С2 цитоплазма -ллг -равномерно мелкогранулярный и дирфузгай нуклеоид, расположенный по всей ‘поверхноетт клетки, чередуясь с полирибосомами, которые тлеют высокую злектроннуп плотность и также располонаяа по р.сей клетке.

Таким образом, результаты исследований ультратонкого строения бруцелл штамма 62-Щ позволяют констатировать, что структурные эламенты его организации хорошо выражены, но по некоторым морфологическим признакам они отличаются от других штаммов бруцелл.

2.4, Изыскание питательных сред для культивирования бруцелл

Известно, чю для выращивания бруцелл в настоящее время широ-ко.использупгся дорогоегоя1ДИ8 среды о использованием пищевых белков (мяса, печени, рабы и др.). Интересы пракиши требуют изыскания дешевых полноценных сред.

. На протяжении ряда лег.в ВЬЛБИ ведутся испеания в направлении поиска эффективных питательных сред для микробиологических целей, ва основе гидролизата из непищевого белка — тканей плаценты, эмбрионов, матки (П1Ш), являющихся отходами производства мясокомбината. Работами Хаертыноаа СЛ., Никитиной В.А,, Мамлеевой Н.К. (1975, 1981, 1986,1987) показана эффективность этих сред для микроорганизмов различных систематических групп.

По данным Корунова В.П. (1973), бруиеллы являются аминогетеро-грофными микроорганизмами, которые, в процессе эволюции, приобрели высокую сяздань паразигировашщ в организме животных и человека, удовлетворяя своп питательные потребности за счет готового субстрата (аминокислот); имеющегося в организме. В связн с этим, ПШЛ представляет интерес в том отношении, чго, будучи продуктом ферментативного (трилтического) расщепления белков, он содержи!; широкий спектр аминокислот, играющих важную роль в метаболизме бруцелл. Кроме того, в плацентарной ткани содержатся гормоны, витамины, стимулирующие репродукцию бактерий. При этом необходимо отметить, что исходное сырьв для изготовления ЛШ в 10-15 раз дешевле по «.равнению со стойкостью пищгшх продамся, используемых а традиционных средах.

Свойства исходной культуры игамча Я2-1Щ и продуцируемой попу-этого штамма при длительном пассировании и культивировании на агаровых и бульонных средах ГПЯД и ШПТа в сравнительном аспекте со штаммами 82 и 19 изучали по следующим показателям! выживаемости бруцелл на агаровых средах, оптической Плотности роста в жидких-срадах, морфодогии колоний, ишкгориалънил свойствам, диссоциации, росту в присутствии пенициллина, тионш а и фуксина, серонодородо-образовашш, уреазной. и каталазной активности» Исследования культур проводил через кагдые 10 пассажей.

Изучение эффективности агаровых оред для вакцинных щга. лов бруцелл при длительном их пассировании показало, что эксперкген-» таяыше среды яа основе ГПсМ яэ ус -упали, а иаогдь и превосходили традиционные печеночные орады, Колонии бруцелл на них были более крупными и рост их начинался в более рашше сроки, чем на печеночной среде. Причем морфология их оставалась типичной. Пассирование бруцзлл на средах ШШ не отражалось на их биологический характеристике.

После длительного пассирования на бульонных средах о последующим высевом на соогвегогвумдий агар установлено, чго яа среда ЛЗЛ колонии появляются на сутки раньше, чем яа ПЩТл. Тенденция к лучше^ росту ш г.82-ПЧ на среде ШШ нос. л а отагиотическ:. достоверный характер. Величина оптической плотности после дозированиаго посева бруцелл также свидетельствовала о высокой э;*фвк$изяооти среда П1Ш. Однако длительное пассирование бруцелл в жидка*, средах может1 привео-ги к фвнотптвокт изменения?» при ояраоке колоний, гогорые снижаются пересевами на агаровых средах.

Исследованиями установлено, что длительное последовательное . пассирование бруцелл штамма 82-ПЧ яа агаровых средах ИЗ.! и ПШТА не изменяло их биологической характеристики, кулыурально-морфологи-ческие свойства были аналогичными исходной культуре; Ш3.1 л^ляется хорошей росгостимулирующзй основой питательных оред для вирыцира-ния бруцедл. По материалам исследований получено пологительнс

решение яа выдачу патента.

Вакцинный штамм 82-ПЧ не отличается от других штаммов бруцелл по к-Гйлазной и уреазной активности.

Проведенный качественный и количественный аминокислотный анализ бактериальной маооы бруцелл 82-ПЧ в сравнении с штаммами 82,I9#i-I09B показал, что существенных различий межу г.имп яе отмечается, Однако по относительно*»^ содержанию ашнонксдо! ‘iui несколько отличались. Наибольший удельный вес в суммарном, содержании амино-киолот у шт.82-ПЧ составляют глугаминов-дя кислота. и серия^

которого было больше яа 4D%, чем у других штаммов, «в.наименьшем количестве содержится фенилаланин, лейцин, изолейция. У бруцелл штамма 82 наибольший удельный вес занимали» алаяин, лейцин, лизия, глугакиновая кислота.

2.5. Изучении биологических свойств штамма 82-ПЧ

Одним из основных требований, предъявляемых к живым бруцеллезным вакцинам, является хорошая приживаемость, интенсивное обсеменение бактериями внутренних органов и лимфатических узлов, быстрое освобождение от них организма животных и выраженная иммунологическая перестройка.

Приживаемость культуры- ата-лма 82-ПЧ изучали в 4 опытах на морских свинках и в 2 — на крупном рогатом скоте. Свинок иммунизировали в дозе 2-3 млрд м.к. и убивали через 3, 7, ТО, 15, 2Т, 30, 45, 60, ЭО и 120 оуток после вакцинации. Инфицированность морских овинок составила через 3 недели через месяц -23Я, 2 месяца — Ю%, 3 месяца — 0%. Процесс очищения привитых морских свинок начинает отмечаться через месяц-после вакцинации и заканчивается к 2-2,5 меся дам. Через 1,5-2 месяца у отдельных свинок могут высеваться единичные культуры вакцинного-штамма. Наибольшая внсеваемость микробов отмечается из регионарных лимфоузлов и селезенки. Максимальная инфицированное гь достигала до, 70%, средний индекс инфицированное та составлял БОЙ.

В опытах на крупном рогатом скоте использовали 18 голов чивог-ных, в том чиоле 12 телок 16-18 месячного возраста и 6 коров, тлеющих 3-С месячную беременность. Животных прививали вакциной из штамма 82-ПЧ в дозах 50, 100, 150, 200 и 400 млрд м.к. и убивали через I, 2, 3 и 6 месяцев после вакцинации. Культуры вакцинного штамма высевались у животных только в течение месяца после вакцинации, об-садекяемость у них ооставила в пределах 5-20%. Культур бруцелл из плодов не было получено.

Шташ 82-ПЧ обладает о патотной ви гулентностьи, обеспечивающей приживаемость бруцелл и вреь гнк; з ci хранение их в организме животных. Исследования вирулентных свойств этого штамме Проведены в 4-х опытах на 300 иорских свинках. Кавотнкх иадниэировали в дозах 10, 100, 1000 10000, I млн, I млрд и 3 млрд м.к. в I мл. С этой целью использовали юмизнне и сухие культуры, пассированные и полученные из отельных серяй нвткеноЯ.вакцины. Зевотных убивали чер*э 20-25 суток после вакцинации*

Саытачи 7С1»но»леяо, ■что вторит з культуры бруцелл высевались от мороквх евино», привитых в дозе Ю000 м.к. и выше. Индекс

инфицированное« у свинок на введение такой дозы составил 23-Й5/’, а введение на 100 тис м.к, -50-70На дозу 1000 м,к, получена I культура вакцинного штампа, на введение таътж дез культур не выявлено.

Таким образом, минимальной инфицирующей дозой штамма 82-114 является 10000 м.к., при введении которого бруцеллн обнаруживается у большинства морских свинок.

Возможность миграции кулмуры итамм-а 82-ОТ от вакцинированных к невакцииированяым проверяли в двух опытах на морских свинках и в опыте на крупном рогатом скота,.

В каждуо из 5 клеток помещали по 5 голов привитых вакциной из штамма 82-ПЧ в дозе 3 млрд м.к» и 5 непривитых морских свинок» Животных убивали через 10,15,21,¿0, морских свинок. Через 3 месяца после вакцияапли число реагирующих животных уменьшилось в 3,5 разы. Через месяц после двухкратной вакцинации процент реагирующих тавотных па бруцеллин составил 10,на аллерген — 42,

При изучении аллергического состояния крупного рогатого скота на введение вакцины установлено, что через 2 месяца после зрвичной вакцинации из 12 нетелей, в т.ч. 5 голов имеющих 2-4 месячную беременность, 80^ животных реагировало на аллерген. Привитые животные на бруцеллин давали отрицательную реакцию.

Нммуногениые свойства штамма 82-ПЧ’изучали в 7 опыта* на 938 морских свинках и в трех опытах на 85 головах крупного уог^ого скота,

В опытах на морских свинках напряженность иммунитета испытывалась в зависимости от взятой в опыт к^лыгры (исходные дативная и су^ая, Пассированные и др.), дозы в .кциш (0,5-«-1,5-2-3-4-5 млрд м.к.), срока (2-2,5-3-4-4,5-5.месяце ‘ ш. ;яе вакиг. нации) и дозы заримаця (25-50^-100 м.к. в зависимости от лщацЕи),

Ис»ледованшши установлено, чю наиболее и^муногенной для морских свинок оказалась культура штамма 82-ПЧ (вариант6), оптимальная доьа вакцины .составила 3 млрд м.к,. Оптимальный срок для заражения привитых морских свинок — через 3-3,5 месяца’после вакцинации, & оптимальная дозь аирулентного штамма (10 минимальных инфицирующих доз) 50 м.к.

Исследования показали, чю у морских свинок, привитых вакциной из Ш1.82-ПЧ в дозе 2-3 млрд м.к. и зараженных вирулентной культурой в дозе 50 м.к. через 3-4,5 месяца иоолч вакцинации« напряженность

имму.штета составила 75-9СЙ при Ю0;£ контрольной заражении штатных ЯИВ01НЫХ..ШИ — 60-Э0Д).- — — ———— ——

В первом опыте п- определению иммуногеиноеги вакцины аз штамма 82-ПЧ на крупном эогатом скоте использовали 1елок 14-Г-> месячного возраста в кол!честве 28 голов» из них 6 голов привили вакциной из шГамма 82-ПЧ в дозе 100 млрд м.к., 1С голов

вакциной из шгв82 и 3 головы были интактныв, Через 3 месяца после ванцннацш: сыворотки крови опытных яивогних реагировали в Рл а биофабрачнш антигеном в пира.’, ниде диагностических, в РСК — они давали отрицаге.зную реакцию, с гомологичным антигеном-в обеих реакциях» Животння заражали через ? месяцев посла-в«ки«н«»ции вируле. гно2 ..ультуроз в дозе I млрд м.к. Напряженность иммунитета в эуом опыте составила 50&,

Во втором опыте использовали нетелей в возраста 16-19 месяцев в количестве 21 головы, из них 6’имели 2-4 месячнув стельность» Необходимо было определить аб^ргогенносуь вакцины аз штамма 62-114 и ее иммуногенность на стельных животных. Для этой цели вакциной иь штамма 82-ПЧ в доза 100 ;лрд м.к. привили 6 голов (всех беременных),. шг.82 — 3 головы и 3 головы были ипГантными, Через 5 месяцев посла Вакцинации опытных и контрольных нивогных з.^олалд вирулентной куль-•гурой в дозе 100 млн м.к.

Рвзуль а ты опытов показали, что в течение 5 месяцев после вакцинации и 33 суток после заражения абортов у привитых животных не отмечено, получен один здоровый теленок. При убое у 5 нетелей, привитых вакциной шт.82-ПЧ, обнаружены хорошо сформированные плоды в возрасте 6-9 месяцев, устойчивость я заражению опытных аивот-;шх были в пределах б?*.

В третьем опига использовали 36 голов нетелей, из них имели беременность от 2 до 5 месяцев. В о. ле предполагалось определит!, реакгогенность вакцины из шгамма 82-ПЧ в дозах 50-400 млрд м.к. для беременных нетелей и установить для ш»х оптимальную иммунизирующую дозу препарата. С этой целью хивотных ионизировали в дозах 50,100, 150,200 и 400 млрд м.к..

Результаты исследований показали, что агглютинины в сывпроткз крови у 90/2 опытных хивотных обнаруживались максимально да 10-^0 сутки, затем шло их сапнла. и угасание реакций через 45-60 оуюк, причем титры были низкие (40-80 МВ). В РСК на 20 сутки реагировало в разных группах 68-100$ животных.

Заражение иштпааровшших и контрольных животных проводили чврвз 4 месяца посла едаунизации вирулентной культурой шт.54 в дозе 100 млн м.к. Результаты исследований показали, что вакцина из штач-•ма 08-4И в дозах 50-400 млрд м.к. не была реакгогенной для беременных нетелей, Ыаксшальнув устойчивость (80£) к заражению вирулентной культурой имели животные, вакцинированные в дозе 150-200 млрд м. (ИИ у них составил 1,4#), 60£ животных защищала доза вакцины в 100 млрд бруцелл (HU-U/I) ирк интенсивном инфицировании

Результаты п^югисгслегических исследований органов и тканей нетелей, иммунизированных вакциной из штамма 82-ПЧ в разных дозах, аоказилн, что более выраженные лим$оидно

гиперпластичбские, макро-фатальные, нлизмоклеточные реакции в лимфоузлах и селезенке и активизацию элементов рап^уло-гиетлоцигарной системы во внутренних органах вызывала вакцина в дозах ICO и 200 млрд u.R. У телок, вакцинированных в дозе 50 млрд М.&., иммуноморфологические изменения проявлялось слабее. У животных, привитых в дозе 400 млрд м,к.у в лимфатических у злых в селезенке отмечались .явления делимфстизации и фибротвзации тканой. Крсмо toro, продолжительность и интенсивность прллаферации антктелоббразувщих клеток в процессы их диффереялиа-Сях гагасв находилась в прямой завысямооти от дозы введенной вакцины.

Заражение вируленгаой лулыуроЗ бруцелл у вакцинированных хйаьхяых вызывало усиление иммуномор^ологических изменанй в лямфо-тщяцт органах* Изучение локализации в клетках цитоплазмагических ¿атиондах белков флюореоцвнтно-оимхимическимп реакциями показало, 4X6 наибольшее количество tu отмечалось в лимфоузлах и селезенке . животных, иммунизированных вакциной из штамма 82-ПЧ и зараженных pispes 4 месяца вирулентное культурой бруцелл. Показатель как колтес ква гранулоцитов о катиоНдыми белками, ras г интенсивность их флуорс цекцни лязосомаых кагнояяы* белков у этих гелок превышал показатель Жн«ак«яых животных в 2-3 раза.

Таким образом, вакцина из щгаыма 82-IN в дозах 100-200 млрд м.1 являегоя иммуногенной, вызывает в органах и тканях иммунизированных Жйво1яых доброкачественные изменения, свойственные вакцинному процессу и может создавать достаточно напряженный иммунит против вирулентной культуры бруцелл. Обнаружение большого числа зрелых ,

□лазмоциюв в ликвидных органах телок, а ТаКЖб ЗпаЧЛОЛЬНОв число гранулоци^ов о содержанием большого количества лизссоиных катаошшх балков также свидетельствует об иклуногеннооти эакцшш.

Основное качественное отличие вакцины иь ытамь.а 82-ПЧ от других противобруцвллезных препаратов является его слабая рвактогенлосгь» Результаты исследования показали, ЧТО ЭТОТ ИГа.^/^ хорошо приживается в организма беременных галок, пе айорюгзнвн, вызывает выравненную им^.уног/ор^ологпческую перестройку орг-.и.зма г. создает при згом достаточно напряженный иммунитет против окопе резательного заражения. У воех вакцинированных в разных дозах не га лей, в ток числе и поо.ча заражения их вирулентной культурой оруцелл, плоды Развивались нормально» В ма!ке и плаценте животных, а также в органах плодов (печени, селезенка,лимфоузлах) патологически изменений не отмечали.

Таким образом, анализ имууиомор^ологических, ульграотрукгурннх, гистохимических, имхунофлюоресцентных, иммунологических и серологически исследований ПОЗВОЛЯВ Г СЧИТАТЬ НОЬЫЙ вакцинный ШТаММ 82-ИЧ высокоиммуногенным препаратом, вызывающим внражьндыз иммуноморфологи-

ческие изменения в органах прилитых животных. Кроме того, результаты исследований ПОКаЗаЛ!’, Ч1’0 ИММуНКЗаЦЕП животных против бруцеллеза необходимо проводить в дозах 100-200 млрд м.к., а повторную вакцинацию — в период полного затухания аллергических и специфических процессов, обусловленных первичной иммунизацией, через 10-12 месяцев после введения антигена,

2.6, Иммуноморрологнчвская оценка вакцины из шгамш Й2-ПЧ

Об эффективное«! вакцинных препаратов можно судись лишь на’ основании результатов комплексных исследований иммунобиологической перестройки организма привит* животных. Иммунитет, приобретаемый, в результате вакцинации, является результатом сложных реакций организма и создается двумя системами— клепочной и гумерад&ной» (Пвгроз Р.В,, 1976),

Исследования показала, что новый г ишинный штамм бруцалл 82-114 достаточно хорошо пукашвавтоя в организме.щ>гви1цх живо«адх и бызы-ваег в нем выраженные им’/.уноморфояогичеокив изменения. При п чецвд динамики изменений улыраотрукгуры клзгок лимфсидных органов морских

свинок наблюдалаоь нарастающая фуякциоь-аьная активизация лимфоцитов и макрофагов селезенки и лимфоузлов уже в первые сутки после иммунизации. Наличие бруцелл в цитоплазме этих клеток на 3-й оугки указывает на активный фагоцитоз, который в последующие сроки исследований отмечался и в конгррегионалышх лимфоузлах. На 5-7-е сутки в цитоплазме иммуяокомпегентных клеток обнаруживали бруцеллоподобные частиш о деогруктивной клеточной стенкой, что является результатом частичного переваривания бруцелл. Об этом факте говорит наличие в макрофашв. множества лизосом и остаточных телей. На 10-е сутки в макрофагах лимфоузлов выявлялись фагосомы с полупереваренными бактериями, а через 14 Суток — в них отмечались как клеточные фрагменты, ■ гак и оотатки бруцелл. Видимо, в этой случае имел место фагоцитоз клеток нагруженных бруцеллами. На 14-2х сутки в лимфоузлах огмеча-лооь множество делящихся стромальных клеток, которые, вероятно, замещали иммунокомпетентные клетки.

Наивысшая выраженность специфических и аллергических изменений в органах и ткангх наступала на 14-е сугкк после иммунизации и оставлялась на этом уровне до 28 суток. К специфическим изменениям относятся гиперпластическо-макрофагальная и плаьмоклеточная реакции, а также повышенный синтез РНК, глобулинов- в лимфоидных органах и цитоглазмагических катионных белков — в гранулоцитах. Аллергические изменения характеризовались мукоидным набуханием стенок мелких кровеносных оосудов, эозинофилией, гомогенизацией ретикулярной стромы, отеком и разрыхлением периваокудярной ткани грабекул и очаговым скоплением лимфоидяо-гиогаоцитарн»Х клеток в трабекулах и парентима-юзных органах.

Следует отметить, что через 45,60 и 120 суток после вакцинации иммуноморфологические изменения затухали и подвергались обратному развитие.

Следовательно, фагоцитоз бруцелл вакцинного штамма лимфоцитами г макрофагами иммунокомпетентных органов сопровождается перестройкой структурных элементов этих клеток, лизисом микроорганизмов В фаГО-лизосомах и переводом их в иммуногенную форму. Вакцина из штамма бруцелл 82-ПЧ вызывает не толыЛ выраженные, но и обратимые иммуноморфологические изменений в органах и тканях.

•В лимфоузлах и селезенке опытных животных в разгар иммуногенеза отмечались высокая активность кислой фосфа-тозы в Т-зависимых зонах

и щелочной’ фос$атяз!г в В-залиоп-ппсзонахт- что-указывает- на- активи— —

зацию Т- и В- клеточной реакции. Изучение динашки Т- а В- лимфоцитов в периферической «роди подтверждает это уже на 7-е сутки увеличением процентного содержания клеток. На 14-е сутки по .азатель Т- и В- клеток вакцишц.оьашшх животных превышал таковой у интактных ди-Естшк в 2 раза, °пта:.т отмечалось постеганное их снижение.

Гпстслог/ческке л им.гу¡юфлюоресцентные исследования показали, что количество аахителообраэующих клеток ь лиыфоуалах л оелв&Ьпке возрастало с первых суток после иммунизации морских свинок и к 1014 —u i;v Т nui: j lit ¡uiu MriKGIL».icLJibilGi’o л nci ч u .i àiH., itpcBcimcifi УРОВЕНЬ iiit—

тактных животных в лимХоузле в 4,8 раз , а в селезенке — 6,7 раза. Lotît отмечалось постеленное сп.гасние уровга глобулннсодеряащих клеток к I2C- суткам (срок наблюдения).

Одновременно с увеличением количества антителообразупщих клеток происходило изменение и п качественном составе плазматичь . » ‘ ‘ ; ‘ a ï Т Л Л» ЛЛ»‘ [‘ с 7ИС ‘ ‘ ‘ ООТЛ а;арел!’:льп;о-. ‘гчние грануле’.’.г, -гго связано с остаточной вирулентностью вакцинных штаммов ( Куцдрюкова Л.И., 1984).

ничние или очаговые скопления эпителиоидных клеток, что связано, по-видимому, с низкой остаточной вирулег-чюотью этого штамма, а также быстрш фагоцитированием и переработкой его макрофагами.

■’ ‘ 1′!’ «‘j-iL l’a Г Г) я HCC T’J ¿10 li’f НИИ ПО’ЙаШЗаПТ , [ТО ЮКЦПЧШЧ’ Л^ПЛ

i ,гр. етоя слабо pjrunv»вшшм и тянвает обратите аовтгокшишп ные изменения в органах и тканях. не выходящие за рамки вакпииаль-

ЛОГГ, ;:,;r>ÎTSCC(. привитых чивотннх.

Таким образом, вакцинный штамм бруцалл 82-ПЧ является достаточно им!.-уногвнным и способен индуцировать образование в лимЬоидяых органах большого количества ангителообразующих клегок, их созревание и переход в более зрелые формы.

2.7« Производственное испытание Еивой.нативной Вакцины из штамма 82-ПЧ на крупном рогатом скоте

В 1980 году проведено Производственное испытание вакшшы из штамма 82-ПЧ на крупном рогатом скоте в производственных условиях. Согласно распорлжеяйю 1УВ ЫСХ РСФСР, вакцина из штамма 82-ПЧ иммунизировали независимо от стельности 149 коров в совхозе «Волжская коммуна» (огд.5) Оренбургской области. Результаты опыта показали, что в течение года после вакцинации среди привитых животных абортов поствакшшадьного и бруцеллезного характера «а зарегистрировано. При контрольном исследовании сыворотсх крови через 2 месяца после г.-шщ:-нации были выявлегл единичные положительно .реагирующие животные в РА и РСК. При исследовании всего поголовья через 6 месяцев выявлено 5 голов, реагирующих в Рл (1:100) и РСК. При повторных исследованиях все гизогные не реагировали на биофабричный антиган. Аналогичные результаты были получены и при вакцинации коров в колхозе им.Калинина,

После детального анализа применения вакцины с участием представителей Г/В и ветотдела было принято решение о дальнейшем испытании вакцины из шт.82-ПЧ в хозяйствах области. В период о 1932 по 1956 год было привито отой вакциной в 27 хрзяйствох области более 20 тысяч коров и нетелей. Работа проводилась в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу. Молодняк прививали вакциной из штамма 82, а все маточное поголовье- одновременно, независимо от стельности- вакциной из штамма 82-ПЧ. Прививка проводилась только по е.рпцательноыу серологическому фону после удаления из гуртов всех подчжигельно реагирующих на бруцеллез животных.

В благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах у привитых животных отмечались .Нормальные отели, аборты не регистрировали.отрицательные результат В .РА и РСК с бнофибричным антигеном

отмечались уже чароз 4-6 сесядав.

-27В уоловно-благополучных и неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, в которых перед вакцинацией, среди коров выявлялись_положигель——- -но реагирующие-на брунеллез, ч в некоторых- имели место аборты, привитый скот реагировал негативно или коли’.зсгво реаг:.руищаго скота резко сникадось.

В этих хозяйствах регистрировались единичные аборты, но при исследовании аборТИрОЪаВШИХ КОрОВ И абОрТИрОВаННЫХ ПЛОДОВ, К8К правило, получали отрицательные результаты. Необходимо отманить, что ни в одном слечае яри этом нв была полупака культура вакцинного штамма 82-ПЧ. При исследовании всего привитого поголовья коров через 6 месяцев количество ргагируищаго скота резко сделалось и после 2-3 доследований получади негативные результаты (совхозы •’Мирный труд», «Уранбаш» Октябрьского района и др„).

Согласно наставлению по применению препарата привитых коров рекомендуется ревакцшшровать через 2 года» После ревакцинации ^оров вакциной из шГамма 82-ПЧ п благополучных хозяйствах (колхозы «Путь к коммунизму», «Заветы Ильича» Саракгашского района) у животных отмечались нормальные отелы, аборт;г отсутствовали. При исследовании через 6 месяцев в Рл и РСК животные на бруцртлезнкй антиген не реагировали.

В эгог же срок в неблагополучных хозяйствах до бруцеллезу ревакцинацию проводили ш*ышок 82* При зсом в отдельных хозяйствах отмечались единичные абортировавшие животные.

Проанализировав полученные результаты производственных испытаний, а Такие ДаНКЬЗ им^уномореологических исследований привитых коров, ми рекомендовали проводить ревакцинацию через год после первичной прививки.

В 1387-1988 родах, согласно разрешению 1УВ МСХ СССР, вакцин;’ из штамма 82-ПЧ применяли в хозяйствах Азербайджана, лркении и йеной Осетии, и тикне в отдельных хозяйствах Саратовской, Курганской, Иркутской£ Шшшской, Челябинской, Волгоградской и др» областей Российской федерации.

В ходе производственного испытания отрабатывались следующие методы применения вакцины: «

— одномоментная и без учета стельности вакцинация всего мят очного поголовья окота в хозяйствах о различной эпизоойтпоскоЯ обетаиопкоИ по бруцеллезу.

— Одномоментная и баз учета сроков стельности вакцинация беременных коров вакциной из штамма 82-ПЧ, а остальных — вакциной из штау,:/л 82.

— Ревакцинация коров по фону штамма 82-И этой яе вакцино;; или вакциной из штамуа 82.

Параметрами контроля эффективности иммунизации служили: сохранение благополучия хозяйств в течение трех лег, отсутствие абортов у привитых коров, серологические показатели до и после прививки, выход молодняка ;; пр.

Основанием для испытания ВаКЦПНЫ в Азербайджане явилась сложная эпизоотическая ебсгановка по бруцеллезу. !Ь I.0I.87 года в 31 районе республики имелось 77 неблагополучных пунктов по бруцеллезу крупного рогатого скота, а больной оког выявлялся и частично оставался на передержке в 29 районах, т.е. 55,1 районов были неблагополучными по этой инфекции.

В республике вакцина из штимча 82-ПЧ использовалась в 16 хозяйствах Геокчайскогг района, в 25- Исмаилинского, в 21-лгДашского, а 25-Швыахинского, а затем евдз в 26 районах в более чем ¿30 хозмаг г-вах привили 46 тысяч коров и нетелей.

Первоначально вакцина была применена б Геокчайском районе, в котором до вакцинации имелось 3 неблагополучных по бруцеллезу хозяйства. Вакцинировали в 16 хозяйствах 3613 коров и петеле;!. После прививки за животными велось систематическое наблюдение. При псс.т’нс-ващш привитого окота через 6-I2-I8-24 месяца количество реагирующего скота Н-. бруцеллез снизилось с 210 до 2 голов — после вакцинации Вакцинированное поголовьо сохраняло благополучие в течение 4 лег (срок наблюдения) лбортов поствакцинаяьного характера но отмечалось;

Агдашокий район относятся к неблагополучным pa£oaa.v по бруцеллезу. При исследования коров пе^ед вакцинацией из 10 хозяйств района было выявлено 65 коров, положительно реагирующих на бруцеллии. Через 6-месяцев после вакцинаиил число положительно реагирующих сре; привитых животных сократилось до 26 голов, которые выявлены в основном из ранее оздоровленных и неблагополучных хозяйств. При исследовании через 12 месяцев пгсле вакцинации выявлено всего 6 голов. За период наблюдения абортов пос-гвакцкпальаогс характера не отмечалось.

¡киболее слоааоя обстаноька по бпуцаллезу била в Шемаханском ЗаЙОНв. ÍÍ3 34 хозяйств^ района, в когоргх имелся крупный рогатий жот, 4- были официально неблагополучные по бруцеллезу, и aya в !9 — выявлялось большой количество положительно раагируо..даго окота, 1 в некоторых ИЗ НИХ отмечались аборты.

По просьбе руководства шемахинокого РлПО вакциной из шгамма 32-114 привили 8217 коров и нетелей в 25 хозяйствах, п т.ч. в 8 — в с!гавщиЯся крупный рогатый окот был ообран я размещен в 20 районах республики. Кроме того, было завезено из разных регионов ограны Юльиое количество нетелей,

Соглаоно указанию 1УВ МИ СССР через 1,5 месяца после трагедии нашим участием начата планомерная работа по вакцинации всего маточного поголовья вначале в районах, расположенных вокруг гг. Спитак и Леняяак-н, а затем и в дчугих. В период с января по мац’ 1339 года былр привито 36 тионч коров и не гелей в То? хозяйствах 18 районов республик!.

Согласно информации начальника 1УВ Армении Степанлна л.Н., ьакдана из шп’«•:/,а 82-ПЧ показала высокую эффективность при применении в хозяйствах республик*:, отмечаются ее неабортогенные и слабо-■лтлюгиногенные свойства. При ежемесячном исследовании 3245 привитых коров-, через месяц после вакцинации выявлялось максимальное количество реагирующего скота 5,5Я, в т.ч. ь тигре 1:50-67%, 1:100-¿4«, 1:200-7?! коров, на 90 сутки выявлено всего II проб в титре 1:50, В дальнейшем при ежемесячных исследованиях (до года) долуче/ш отрицательные показатели,

Б связи со сложной обстановкой по бруцеллезу, вакцина из штамма 82-ПЧ была применена в 30 хозяйствах на 9000 коровах и нетелях в ЩяоО Осетии. До применения вакцинг в хозяйствах было выявлено больного скота в Цхиявальском районе 150 голов, в Знауроком -64, Цгавсквм -52, Лениногорском- 55 гслов. После применения вакцины количество реагирующим скота снизилось в 6-10 раз, в т.ч. по Цхинвальског/у району в 10 раз (совхоз им.1етагурова и колхоз «Ередви» Абортов поствакпинального характера после вакцинации не выявлено. Через год после вакцщздйл во всех хозяйствах проведена ревакцинация. Но истечении трех месяцев среди ревакцшшроваяяого скота оелгаенэяий не выявлено.

По итогом производственных испытаний наш разработана система мероприятий по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота о применением вакцины из штамма 82-Ш, на которую составлена и утвер-гцена ГУБ .»ОХ СССР соответствующая научно-техническая документация.

По просьба I7B UCX РФ на Щелковском биокомбинате было изготовлено 32 опытно-промишланяые серии сухой живой вакцины из стажа 82-ПЧ. По своим свойствам выпущенные сьрии вакцшш соответствовали всем параметрам, излоденяым внормативвд-гв*’1Ичас*:°Я документации на этот препарат. С разрешения ГУВ MCI В» сухую живую вакцину применяют в ряда регионов страны для спацифическрй профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота (Сараювскад,Челябинская,Волгоградская, Читинская, Иркутска? и др. области).

ТаК, В Иркутской области КУ.!/уНИЭИрОХ.аНО В 1990-ISX ГОДаХ Вакциной из штамма 62-ПЧ в 5-ги районах, 19 хозяйогвах-17538 голов Маточного поголовья. При постоянном охо,.’.еслчкоц контроле аринигих короь и нетелей по кольцэзой реа:шгп с молоком и при плановых серологических исследованиях по Рл и РСК реагирую^ животных на бруцеллея’не выявлялось. Случаев абортов оради привитого поголовья на наблюдалось.

Таким образом, применен: з вакцины из штамма 82-ПЧ дав! возможность стабилизировать осогааовку по бруцеллезу, сохранить благополучие хозяйств от инфекции, в короткие ороки оздоровить неблагополучные пункты по бруцеллезу, уменьшить количество реагирующаго скота, создать единый иммуный фон среди матичного поголовья и возможность одномоментной ревакцинации скота.

1. Предварительная (за 30-60 суток) прививка с;алгным коровам культуры В.abortus i-82 или v./IOO дозы вакцины из штамма 82 позволяет снизить абортогенносгь полной дозы згой вакцины до 20-30%.

2. Методой клонирования из различных штаммов бруцелл получены г.утанты, устойчиьле и чувствительные к пенициллину, стрептомицину и оксациллину.

Селекцией на трипгозных средах г цучая новый вакцинный штамм В, abortus 82-ПЧ — пелицллляяо-чувогвигелышй вар-ант вакцинного штагла 82,

3. Основными маркера?«: штамма JT-ПЧ являются:

— чувствительность к пенициллину (не растет на агаре в присутствии 5 ВД/мл натриевой соли пенициллина) и эритритолу (отсутствует ргот на агаре, содержащем I мг/мл препарата),

— -игглитинабельность в бруцеллезных и 5-сыасчогках,

— низкая вирулентность (минимальная инфицирующая доза для морских овинок составляет IOOOO м.к.);

-слабая агглагиноганнооть (через месяц после прививки морские свинки не реагируют в Рл о бпофабричннм антигеном),

— »реактогенносгь для беременных коров (не вызывает аборты при первичное викц-нашк. беременных коров).

4. Штамм 82-ПЧ сохраняет стабильность кулыуральнон/.орфологичес-ких, агглвтинабеяьных и вирулентных свойств, что подтверждено 14-лэтним культивированием его и* искусогве.пшх ппт^тзльлих срецах, 50-кратными по с л а д is а г ль ными пзреоевами на агаровых и оО-крагнк.-.ж

— на бульонных средах, 15-КраГНЫМ пассг.рованием На морских СВННКал п б-крагныу — на крупном рогатом скота, в т.ч. беременных коровах, а такго при изучении агаровых культур, получен.-шх из отдельных колоний, при Изготовлении 55 серий нагивной вакш:.чы во fl.-IjBil и 32 серий сухо,! вакцшш — на Щелкове..ом блокомбийагв.

-6. Разрабог-.’.ная новая питательная cpcia на основе плаценгар-Ни—эмбрионально—v

Длительное культивирование бруиелл Щ гамма 82-ПЧ К а аГар^ВО.! среда ГП3.1 не изменяло их мор$ологит,?скшс, тинкюопальных, биохи ческшс, серологических- свойств.

6.При алекхрошю-микроскоппч^ском исследовании бруцеллы штау./а. 82-ПЧ однородны, основные структурные элементы их организации хорошо выражены. В отличие от штамма 82 клеточная стенка у них наибольшей юлщины, четко очерченная и,почти не имеет складок, в цитоплазме их • содержится концентрированные элзктроняо-плоЕшэ агрегаты полирибосом

7. Минимальной инфицирующей доз о Л для морских свинок является ЮС 0 м.к. штамма 82-ПЧ. Бруцаллы хорошо рассеется и прибиваются в лимфатических узлах и органах в течение месяца (:;,i-50a), к 1,5-2 месяцам они элиминируют из организма и могут высеваться лишь единичные культуры.

———В арганизме^крушшго рогатого сноп», в т.ч. бер ешшх коров,

бруцеллы штамма 62-ПЧ приживаются в течение 1-1,5 месяцев.

Индекс шьццированности у ш.х через месяц посдз прививки находится в пределах 5-20.

3. У морских СВИНОК, Ир«ВИ1ЫХ ВаКЦИНО,; ИЗ ЦЦаь^а (¿¿-ПЧ В Д036 2-3 МЛр I, М.К. , агглютинины ВЫЯВЛЯЮТСЯ На ?

е сугки, достигая МаКСИ-МаЛЫЮГО значения Ни 15-е сутки И утрачиваются Б концу месяца. ЛИШЬ единичные реагируют в Рл в титре до ‘¿и „:В.

9. Штамм 02-ПЧ не обладает коягагиозносгыо. В опытах на морских свинках л Круццо:/. рсгагок скоте не уог«но>->1э«»а щц’р-Ааш Сруцлдд

ЭТОГО ШТаММа ОТ ВаКЦ’.ШфОВаННЫХ На КЭПриВЩ’ЫХ ЬИоОГНЫХ.

10. Вакцинный штамм.82-ПЧ обладав/ хорошо выраженной иммунологической активностью. Введенный в дозе 2-3 млрд м.к. визыаал образование хорошо выраженного иммунитета у 75-86% морских свинок. У крупного рогатого скота, прибитого в дозе 100 млрд м.к. — чег ‘ Ь-7 месяцев иммунитет вираб. гцБ—\ч в пределах 30-67;?, а у вакциииро-ванного в ‘.озе 150-200 млрд м.к. — у 80#.

11. Вакцина из дгамма 82—ПЧ сцзивкят и»«муноиор’;ологцческую перестройку организма животных, аушшллоцу.зса лнл^ойдно-гапералас-тачеокой, ЧаКро^аГаЛЬНОЙ И ялазмоклеючао^ ¿..мКШШШ в лимфоузлах и селезенке, а также активацией клеток ре¿щ^ло-гасыощн^лой системы во пнугренних органах. У морских, свинок эти процессы затухают через 4 месяца после иммунизации.

Фагоцитоз бруиелл вакцинного ШГаМ.’.а ЛП|\’40ЦП1а’/,И И Макр0.раГа.МИ им-лунокомпетеигных органов сопровождай гея перзогпо: ;ой структурах ¿даиеихоа этих клеток и лизис,- : микроорганизмов. При этом отмечав год повыше»из уровня 1- и В-лимфоцитов в крови максимально на 14-е сутки, нормализация их происходит через месяц посла инокуляции препарат».

12. Разрабо. ла система протизибруиеллозных мероприятий с использованием вакцины из штамма 82-ПЧ, составлена и утверждена соответствующая нормативно-технически — документация,

13. Вакцина из штамма 82-ПЧ эффективна при п’\шенешщ на крупном рога-том скоте в общем комплексе органмз,-ационно

хозяйпгвен-ннх я ветеринарно-санитарн!’.; прогиво’руцедлезкых мероприятий» Использование вакцины дс.ет возможность одновременно чакцинир^вать все поголовье скота, в том числе норов я нетелей независимо от стельности,

itii а благополучии* (угрозивтх), гак -и неблагопг луч/шх по Оруиел-лвзу хоз -:’сгвах.

14. Ревакцинация крупного рогагого скога вакииной из штампа ¿2-ПЧ повышает его устойчивость к заболеванию бруивл’.езом. Оптимальным сроком ревакцинации является 10-12 месяцев. После ревакцинации серологические исследования животных на бруцеллез допускается начинать в благополучных хозя!.огвах через 6 месяцев, в неблагополучных — через 3-4 месяца.

15. Изго-овле.чнце на мэлковском ококомбинате 32 серии оухой айвой вакцины из шта,\:мй 82-ПЧ По современной гехноло. и, в том числе на £вердых п жидких»питательных средах, при контроле соответствовали требования;,’ ¿ахничесяих условий.

Предложен новый вакцинный шг^та В. abortus 82-ПЧ для профилактики бруцеллеза кругного рогатого скота, в тс ; числа берег-‘.енннх короз л нетелей U.C. й Ï04490 от 10.04.83 г.> положительное решение ВШИГПЭ на’выдачу патента от 26.Л.91 г. по ^лвке 4Я7341/13 (090465)

В связи о этим разработанн:

1. Технические условия на нивую н-..-;:внуч вакцину из ш1а;,:;,;а 82-ПЧ против бруцеллеза крупного рогатого скота (Утверждены Г/В .МСл ССОР 15. октября IB86 года).

2. Технические условия яы «жилую сухую в..кц; НОЭППНОСТЬ «ПЧ»), ЙОПоЛЬлуе»а. . ДЯ.t

л- ou-gifi. « Н1.ог.1ьос..уцбллезаой Л^;. »рунного i.oraturo ..•

2. Нив ал ВаКШГШ ДЛЯ ПрОфНЛаКШКИ ..jynHOiu рОГаТОГО eliûi’U.

(Салу.аков К.’,’. Белозерова //Положительное решение ВНИНГПЗ fia зпдачу патента от 26 ноября X99I года по Заявке Л 437341/13 ЙЬ0465).

3. Питательная сред-» № щагностики ‘бруцзллиза. см^.’леези il.К.. Белозерова Г..»., Торбин« .’.11.// Положительное решение ВШа!ГПЗ н« BHÏÏH4V Патента ОТ 24 января 1Уз2 ГОДа ПО ЗаЯВКВ И 4C.734I/I3 (0384bo).

I. il’.-^.m;»- -. >: :it;uL4; шТаМ\а O^y^cJb’i -¿-Î14 lu-* лх 1 ! M ‘. >• ÎV.’11’J» Т.п.// Te;J.Л 1.11/i;!! r:. de «.•■: .. .

. .. • i ,, ,¡. 1.// ¡кмшыл xic ; о cn.5 jiiJiî v/i:1.’ ■

.. . -чикл? сьеза t’J т: .Xr.-i.V пгября Xiwd г.), Тез.г чл. ,т.Х»ХЭй.

1.Л., -Хплива Г, К.// ДоСз ilictili.’ï l\ajatiOKuil Ijciôjmnaprtùi1 ШПОлЫ — h maнн-пяптнпиплптва: Тй.ч.локя. на v4Hft-nnnH.4H. капа).-Казань-I99T.

7. Аминокислотный состав оруцелл штамма аг-йн сьелозерова Ц.д. Вахигоза Г.Н.// Достижения Казанской . .ïepuHctpHO’i науки — в практику диаотаоводсгЕн; Тез.докл.научно-произа.конф. — .азань, Х99Х, 19).

Разработать я вяедрг ть у ccjî е п аено явовашш s ч новые opfeiotbn, го-ai и оаособи диагностики и олсци^чиокой профилактики бруцеллез« крупного рогатого ci’.oï. (Белозерова Г.«,,ВаХиговг Г.П.,Мамлеева d.K. .Муллокаев О.Т. ,Торбина „»¡.П. .Шошокин В,л.//Заключительный отчет, задание 02.0Х.05 ДМ.-X990-й госрегистрации 0X860093071, Я инвентарнн ■ Л 029I0028I29.

9. Изыскать и испытать в производственном опыте новые проти-вобруцаллезные вакцины, /¿алмаков K.M. »Белозерогза Г.л.,Крашенинникова Л.л.// Заключительный отчет, 8адаяие 01.05.113.-71979,. № инвентарный Б-860166.

10. Разботать новые и усовершенствовать существуйте вакцины против бруцеллеза крупного рогатого окота,.овец и северных оленей; выдан Шшоельхозу ССОР исходные требования на разработку опытно-промышленного производства указанных Чакцин./ллимов A.«i.,Белозерова Г. -.i4,»’ •»•А.чсига О,Т.. №шокш1 В.л.,Бадозерова Г.а.//Псвы-шениа адакт-шносы л« ;2o.

21.Лйвгаостг’чесиая аррзкпщность аллерген» КяИ./Лутфуллиа U.Z,, Взлозеро^з г. // Республиканская научис-1ехяич„кон.р.мсл.уче»шх: Тез.докл.- Казань, 1-84, 14.

22, Ультраструктурные изменения в иммунокимпагзагшх органах г^вогнах, привитых ьикниной >ь бруцелл L2-II4./ МудлОкавв.О.Т., ¿’еиокг. В,й.»Белозеровс. Г.л.// Peonyбл.кау-i »о-произв, кояф.? Тез. докл.-чйктуалыше ^опросы вегерннари а зоохахаии.- К«аань,1992, .

23, Содержание «».зосошшх кагионных белков у телок, привитых вакппной г:з ягамма бруцелл 62-ПЧ./ Иултокаев О,Т.,Белозерова Г.я,// Экологические основы совершенствования ветеринарнгч и гзсогсх.чиччоких мероприятий в кявотноводст^е» Сб, й«учя.1рудов.

24, Пагоморфологическло- я где Юл. :мич е с кие изменения в орг max

и тканях коров, рспммун.:зг.рпвашшх вакциной из шгамка öpj- лл 82-114/ Муллакаев 0.Т.,Белозерова Г.л.// Физиологические основы развития, резистентности и продуктивности животных. Сб.научн.трудов,,Казань, 102-104,

25. Материалы изучения живой ватины против бруцеллеза круп-аого рогатого окота из штамма 82./Салмаков К.;*. .Алехин P.M..Плотникое Э,С,,Абузаров Ю.Щ,, Киршян Б,л.,Белозорова Г.л. и r..j,/ Соотояяие

и перспективы научных исследований по диаг-ке, пробке туберкулеза и меры борьбы.: Тез. докл.каучн.£ояф. — Омок, 1980, 84-84.

26. Результаты проварки свойств отдельных серий сухой живой противобруцеллвзяой вакцины из шташа 82/ Михайлов Н.л.,Салмаков К.М, Белозерова Г.Л. и др.//Шуч№Э груды КГШ» Казань, 1980, т.135, 48-60.

• 27. Выживазмобть бруцелл в отдельных сериях оухой живой вакцины из штамма 82 при различных условиях хранения./ Белозерова Г.д.,Кра-шеЕиня’-‘чова й.л,// Научные труды КГШ1., Казань, ISoO, т.135, 95-S8.

28. Стабильность биологических свойств культур бруцалл вакцинного штамма 82.//Салмаков К.М.,Кнршин Б.л,.Бзлозорова Г.л. и др.// Разработка средств и. методов борьбы о бруцеллезом. Сб.ниучн. трудов -Казань, IÜ84, 3-24,

источник

Классы МПК: A61K39/10 Brucella; Bordetella, например коклюша
A61K33/04 сера; селен или теллур; их соединения
Автор(ы): Макаров Ю.А. , Горковенко Н.Е.
Патентообладатель(и): Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт
Приоритеты:
Читайте также:  Крупный рогатый скот бруцеллез